CZ115596A3

CZ115596A3 - Pseudopeptide product with imidazole group and the use thereof

Info

Publication number: CZ115596A3
Application number: CZ961155A
Authority: CZ
Inventors: Marie Christine Sequin; Marc Babizhayev
Original assignee: Exsymol Sa; Marc Babizhayev
Priority date: 1993-11-05
Filing date: 1994-11-03
Publication date: 1996-12-11
Also published as: BR9407971A; FR2711990A1; JPH09504540A; DE69425153T2; UA56123C2; CN1136808A; CN1056608C; EP0726895B1; US6046340A; DE69425153D1; FR2711990B1; WO1995012581A1; CZ292108B6; CA2174526A1; HU9600989D0; KR960705785A; PT726895E; JP3503899B2; CA2174526C; EP0726895A1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká pseudodipeptidových produktů, a zvláště nového pseudidipetidového produktu s imidazolovou skupinou nebo s N-substituovaným imidazolem, a použití takovéhoto produktu v oblasti léčení, kosmetiky a potravinářství.

Úkolem vynálezu je produkt s obecným vzorcem:

vytvořit nový pseudodipetidový ' llbd

H ιι I

A—C—N—CH —CH —Im 2 2 i s w avy c kde A je:

a) buďto ve formě

R

I

B - C I

R'

A ! 'L Z ' ί o ' n 'f'3 kde

- B představuje amin, přičemž atom dusíku je přímo navázán na atom uhlíku a je vybrán ze skupiny, kterou tvoří:

1) primární amin

2) sekundární amin se vzorcem -NH-X, kde X je uhlovodíkový, fluoralkylový nebo acylový radikál, nebo amin,

3) terciární cyklický amin typu cykloalkylu nebo laktam,

4) terciární amin o vzorci -N-Y

I

Y' kde Y nebo Y' je uhlovodíkový, acylový nebo acyloxy radikál,

5) imin o vzorci -N=C-Y

I

Y' kde Y je uhlovodíkový radikál a Y' je atom vodíku nebo uhlovodíkový- radikál, a

6) amonium o vzorci Y'

I

-N‘-Y, W“

I

Y' ' kde Y, Y', Y'' je uhlovodíkový radikál a ion W je halogenid, sulfát, fosfát, hydrogenuhličitan, paratoluensulfonát, nebo sloučenina nesoucí skupinu karboxylové kyseliny,

-> R je atom fluoru, fluoralkylový radikál, funkční skupina, například sulfát, fosfát, nebo karboxylová kyselina, acylový radikál, lineární alkylový řetězec, který může být substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami, alkenylová nebo arylové radikály, které mohou být substituované jednou nebo více funkčními skupinami,

-> R' je atom vodíku, atom fluoru, alkylový radikál, nebo fluoralkylový radikál,

-> Im je imidazolová skupina nebo N-substituovaný imidazol, například

- C = CH

I I

N NH

C = CH

Ν N /

CH ch₃

- ch₃

1-methyl-imidazol

- c = CH

Ν N \ //

CH

- C = CH

3-methyl-imidazol

N NH’2^{+ w}‘ /

CH přičemž w bylo definováno výše,

b) nebo ve formě hn _ _c \ / R kde

R je atom vodíku nebo fluoru, nebo flouralkylový nebo acylový radikál, nebo uhlovodíkový radikál, který může být substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami,

R''je acylový radikál nebo uhlovodíkový radikál, který může být substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami.

V případě, že obecný vzorec pseudodipeptidového produktu je ve formě a), přičemž B je laktam, zvláště δ-laktam nebo r-laktam, nebo cyklický terciární amin, kterým může být s výhodou

- aziridin

CH₂ ' /^Nch₂

- pyrrolidin ch₂ - ch₂

NCH₂ - CK₂

- piperidm

CK₂ - CH₂X \

CH₂ / ^ch₂ - ch₂

NV případě, že obecný vzorec pseudodipeptidového produktu je ve formě a), přičemž B je amonium, nebo když imidazolový kruh obsahuje další atom vodíku na atomu dusíku, ion W může být halogenid, sulfát, fosfát, hydrogenuhličitan, paratoluensulfonátová skupina, sloučenina nesoucí skupinu karboxylové kyseliny, například acetát, trifluoracetát, citrát, glukonat, pikrat nebo aminokyselinu, například aspartat nebo glutamat.

V případě, že obecný vzorec pseudodipeptidového produktu je ve formě a) nebo b), přičemž R, R'nebo R'' je uhlovodíkový radikál, může být tento substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami, jako jsou například alkohol, amin, karboxylová kyselina, alkoxy, thiolether, thiol, fosfát nebo sulfát.

Některé prvky této skupiny sloučenin jsou schopny vytvořit stabilní komplexy s atomy patřícími do skupiny přechodných kovů, cheláty, které sestávají ze spojení atomu kovu, například zinku, mědi, železa, kobaltu, manganu nebo niklu, přičemž zinek je nejvýhodnější, s jednou nebo více molekulami pseudodipeptidu, a to v závislosti na způsobu přípravy a druhu pseudodipeptidu.

Příklady pseudodipeptidových produktů, které jsou obzvláště charakteristické pro vynález, jsou uvedeny níže:

Produkty odpovídající obecnému vzorci ve formě a) jsou: L-glutamyl-histamin

R' = H

R = CH -CH -COOH 2 2

B = NH

D-glutamyl-histamin, který je eniantomer předcházejícího produktu

R'= CH -CH -COOH 2 2

R = H

B = NH

N-methyl-2-amino-L-butyryl-hi s tamin

R'= H

R = CH -CH 2 a

X = CH₃

2-aminoisobutyryl-histamin R = R'= CH_aB = NH

L-norleucyl-histamin

R' =	= H
R =	= ch₂- ch₂- ch₂- ch₃
B =	: NH 2

L-2-aminooktyl-histamin

R' =	= H
R =	-- CH,- CH - CH,- CH - CH - CH 2 2 2 2 2 3
B =	-- NH 2

Boc-2-amino-L-pentyl-histamin

R' =	H
R --	ch₂- ch₂- ch₃
B --	= terc-butyl-O-C=O

L-fenylglycyl-histamin

R' --	= H
R =	= fenyl
B =	= NH 2

L-ornithyl-histamin

R' = H

R « CH_a- CH₂- CH₂- NH₂

B = NH

L-2,6-diaminopimelyl-histamin

R' = H

R = CH - CH - CH - CH-COOH

2 2 | nh₂

Β = NH

N-acetyl-2-aminobutyryl-histamin

R' = Η

R = CH - CH

3

X = CH -C=0 >

N-fenacetyl-2aminobutyryl-histamin

R’= H

R = CH - CH

3

X = Ph-C=O

L-arginyl-histamin

R' = H

R = CH - CH - CH - NH - CH = NH 2 2 2 |

NH

Prodkuty, které odpovídají obecnému vzorci ve formě b) jsou L-prolyl-histamin

R = H

R * ’= CH - CH - CH 2 2 2

Dáno A = - CH — NH

I I ch₂ ch₂ \ /

CH₂

4-hydroxy-L-prolyl-histamin

R = H

R''= CH - C - CH

I

OH

Dáno A = - CH — NH ch₂ ch₂ \ /

CH i

OH

L-pyroglutamyl-histamin

R = H

I

R¹'= CH - CH -C=O 2 2

Dáno A = _ _CH __

I !

ch₂ c = o \ /

CH2

Pseudodipeptidový produkt podle vynálezu může být považován za produkt kondenzace mezi alfa aminokyselinou a histaminem nebo methylem substituovaným histaminem, jako je například 1-methyl-histamin nebo 3-methyl-histamin. Kromě toho lze nahradit atom kyslíku výsledné amidové vazby atomem síry.

Z toho důvodu pak může být pseudodipeptidový produkt získán různými způsoby syntézy jak chemické tak i enzymatické .

Adekvátní proces chemické přípravy pro přípravu pseudodipeptidového produktu podle uvedeného vynálezu, je pomocí symbolů (AA je aminokyselina, Hist označuje histamin) naznačen pro AA-Hist následujícím schématem:

(1)

AA + X + Y --> X-AA-Y (2)

X-AA-Y + Hist (.2HC1) X-AA-Hist

První krok procesu zahrnuje přivedení aminokyseliny (AA) do stavu, kdy je N-chráněná skupinou X a O-aktivovaná skupinou Y.

N-ochrana je s výhodou uskutečňována nahrazením atomu vodíku v aminu aminokyseliny, což může být acyl- nebo acyloxy radikál. Mezi nejzajímavější chránící skupiny můžeme zařadit benzyloxykarbonyl (Z) , 9-fluorenyl-methyloxykarbonyl (Fmoc), a radikály benzylu, ftaloylu, 2-nitrofenylsulfenylu a trifluoracetylu.

Ačkoli je možné se bez toho obejít, 0 aktivace se s výhodou uskutečňuje esterifikací karboxylové funkce aminokyseliny sloučeninou vybranou ze skupiny, kterou tvoří: kyanomethyl alkohol, o-nitrofenol, 2,4,5-trichlorfenol, p-nitrofenol, 2,4-dinitrofenol, pentachlorfenol, pentaflourfenol, N-hydroxyftalamid, N-hydroxysukeinimid, 1-hydroxypiperidin a 5-chlor-8-hydroxychinolin.

Ze způsobů O-aktivace můžeme zase uvést procesy zahrnující transformaci karboxylové kyseliny na acylchlorid, hydrazid nebo smíšený nebo symetrický anhydrid.

Konkrétní způsob aktivace sestává z přivedení aninokyseliny AA do reakce s fosgenem, která vede k vytvoření N-karboxyanhydridu této aminokyseliny.

Druhým krokem procesu přípravy je spojení s histaminem, což může být uskutečněno se spojovacím prostředkem nebo bez něj tak, že se nechá reagovat N-chráněná a O-aktivovaná (nebo ne) aminokyselina s histaminem s výhodou ve formě dihydrochloridu. Je nutno uvést, že spojovací prostředek není zásadně nutný při použití O-aktivované aminokyseliny.

Spojování bez spojovacího prostředku je uskutečňováno v organickém rozpouštědle (kterým může být například chloroform, 1,2-dimethoxy-ethan, dimethylformamid...) v přítomnosti kyseliny (například kyseliny octové) nebo v zásadě (například triethylaminu) v hydroorganickém rozpouštědle (například voda-pyridin, nebo voda-l,2-dimethoxyethan...) se zásadou (například soda nebo hydrogenuhličitan sodný...) a pak kyselinou (například kyselina chlorovodíková), v katalytických podmínkách (například imidazol, N-ethylmorfolin...)

Pokud se použije spojovací prostředek, může být tímto prostředkem například dicyklohexyl-karbodiimid, N-hydroxybenzotriazol a jeho deriváty, například hexaflourfosfát benzotriazolyloxy(trisdimethyl-amino)fosfonia (BOP), 1-izobutyloxykarbonyl-2-izobutyloxy-l,2-dihydrochinolin, karbonyldiimidazol, Woodwardovo činidlo K, alfa-chlorvinylethylether, alfa,alfa-dichlordiethylether, dichlormethylmethylether, DCC a aditiva, DCC-pentachlorfenol, DCC-pentafluorfenol, kyanamid, ceteniminy a ceteny, soli oxazolinia, EEDQ ('l-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolin), ynaminy acylfosfonia, trifenylfosfit a imidazol, mědhaté komplexní sloučeniny, SiCl₄.

Pokud je to nutné, skupina X nebo N-chránící skupina, je eliminována ve třetím kroku:

(3)

X-AA-Hist --> AA-Hist

Tato eliminace je uskutečňována podle chránicí skupiny hydrogenolýzou, redukcí sodíkem v kapalném amoniu, hydrazinolýzou, acidolýzou, hydrolýzou nebo enzymaticky. Vhodné řešení zahrnuje provedení tohoto kroku sejmutí chránicí skupiny acidolýzou trifluoroctovou kyselinou. V takovém případě se pseudodipeptidový produkt získá v jeho základní formě po ošetření amoniakem. Dále, když je tohoto dosaženo, daná sloučenina v její základní formě může být sloučena se solí přechodných kovů, aby se vytvořil chelát.

Například proces přípravy L-glutamylhistaminu může být uskutečněn následovně:

Do suspenze 2.0 g (6,59 mmol) Boc-Glu-(OtBu)-OH obsahující 1,456 g (7,91 mmol) pentafluorfenolu v roztoku 8 ml ethylacetátu ochlazeném na 0°C se po kapkách přidají 4 ml 1,631 g (7,91 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu rozpuštěného v ethylacetátu. Toto se protřepává při 0°C po dobu 30 minut a pak hodinu při pokojové teplotě.

Reakční směs se přefiltruje, aby se eliminovala dicyk1ohexylmočovina. Tato dicyklohexylmočovina se promyje ethylacetátem a filtrát se nechá odpařit. Olejovité reziduum se vysuší pomocí lopatkové vývěvy během dvou hodin.

3,1 g Boc-Glu(OtBu)-Opfp se získá ve formě bílé tuhé látky.

Do suspenze 1,213 g (6,59 mmol) histaminhydrochloridu v 15 ml dimethylformamidu obsahující 1,331 g (13,18 mmol)

N-methylmorfolinu se přidá při 0°C po kapkách 5 ml roztoku, který obsahuje Boc-Glu(OtBu)Opfp rozpuštěného v dimethylformamidu .

Reakční směs se míchá po dobu dvou hodin při 0°C, a pak jeden a půl hodiny při pokojové teplotě. Reakční směs se filtruje a precipitát se promyje dimethylformamidem.

Směs se filtruje, aby se eliminoval precipitát N-methylmorfolinchlorhydrátu a daný precipitát se promyje ethylacetátem, dimethylformamid se nechá odpařit ve vakuu pomocí lopatkové vývěvy při tepolotě t s 40°C. 25 ml ethyl-: acetátu se přidá do získaného rezidua a výsledná nerozpustná frakce se eliminuje filtrací.

Produkt se promyje nasyceným roztokem 20 ml natrium-hydrogenkarbonátu 0,5 molů, 10 ml natrium-hydrogenkarbonátu 0,5 molů, 20 ml vody a 20 ml chloridu sodného.

Po 1 hodině sušení organické fáze na natrium-sulfát se odpařením získá bílý prášek.

3,234 g (výtěžek > 100%) produktu se regeneruje, ale chromatografie na tenké vrstvě (TLC) ukazuje, že část fenolu a histaminu zůstává, tyto budou eliminovány během dalšího kroku.

Do 1,12 g tuhého Boc-Glu(OtBu)-Hist se přidá 25 ml trifluoroctové kyseliny. Protřepává se po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Rozpouštědlo se odpaří za pomoci lopatkové vývěvy při teplotě t s 40°C.

ml ethyletheru se přidá k danému produktu, který se pak mísí po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Bílý produkt se vytvoří při míchání. Ether se dekantuje, reziduum se promyje 10 ml ethyletheru, a pak se suší za pomoci lopatkové vývěvy.

Reziduum se pak rozpustí v 7 ml ethanolu, pak se přidává amoniak (5% koncentrace) až do pH 7,5. Pak se přidá 25 ml ethylacetátu a to celé se nechá stát několik hodin při teplotě 0°C.

Vytvoří se dvě fáze a tyta se . separuj i. dekantací. a nažloutlá olejovatá spodní fáze se nechá odpařit. Objeví s.e velmi hydroskopický bílý prášek. Produkt se nechá rekrystalizovat v ethylethanolu/ethylacetátu. Po filtraci se tuhá látka promyje ethylethanolem/ethylacetátem (1/1).

Získá se 510 mg produktu .(výtěžek. = 65%) .

Feptoidove produkty mohou byt s výhodou - s ohledem na výtěžek a náklady - připraveny syntézou zcela nebo castecne enzymatickou.

Podle tonoto procesu lze syntézy:

Slucovaci reakce muže být navrhnout nasleoujici schéma popsána následující rovnicí:

XAA-Y + n i s t v i a-----> X - AA - h ί S t τ Y kde X-AA-Y je N-chráněná aminokyselina, jejíž příprava již byla popsána, a kde chránící skupina X může být acylový radikál , acyloxyradikál a podobně.

V daném případě skupina X umožňuje také zvýšení rozpustnosti AA v reakčním médiu. To může vést k volbě X za účelem zvýšení rozpustnosti AA v organickém médiu, například

X = Ph-CH₂-O-C-benzylcxykarbonylový radikál ί i

X-AA-Y je O-aktivovane s esterifikací karboxylové funk14 ce alkoholem vybraným ze skupiny, kterou tvoří: alifatické alkoholy, a zvláště ethanol, halogenalkylalkoholy, jako například 2,2,2-trichlorethanol, aromatické alkoholy, například fenol, a všechny alkoholy uvedené výše pro aktivaci v chemické syntéza... Avšak : z tohoto seznamu jsou vyloučeny.

všechny terciární alkoholy. Slučcvací reakce s histaminem (nebo methylovanými deriváty) v základní formě nebo se solí histaminu (nebo jednoho z jeho methylovaných derivátů), například s dihydrochloridem histaminu, múze být uskutečněna v rozsahu organických rozpouštědel, například alifatických hydrouhličitanových rozpouštědel (cyklohexan, heptan,...) nebo aromatických (toluen) , terciárních alkonolu (t-butanol, terc-amylalkohol), alKylhalogenidy (dichlormethan), ethery (isopropylstner), acetonítril, dimethylcormamid nebo dimethylsulfoxid.

Rozpouštědla mohou být použita samotná nebo v přítomnosti jiných látek, bez vody nebo v přítomnosti malého množReakce může být uskutečněna v přítomnosti nebo nepřítomnosti zásady, například triethylaminu.

Enzymatický katalyzátor patří do skupiny hydrolázových enzymů (lipáza, proteáza), které mohou být mikrobiálního, živočišného nebo rostlinného původu. Mohou se používat v čisté nebo nevyčištené formě.

Je možno uvést levné, na trhu dostupné typy, například lipázy extrahované z mikroorganismů: Pseudomas sp., Candida. rugosa, Mucor, nebo živočišného původu: pankreatická lipáza z vepřů (PLP), proteázy, trypsin, chymotrypsin, substilizin, papain, a podobně.

Tento katalyzátor, který není rozpustný v reakčním médiu, je rozptýlen v samotném rozpouštědle nebo je imobilizovaný na externím inertním nosiči, aby se usnadnilo jeho. recyklování. .

- Reakce je uskutečňována, v -širokém, rozsahu..teplot mezi .4°C a 70°C, ale s. výhodou od 35°C do.45°C, při míchání. ' -.:

- Produkt slučování je shromážděn při filtraci nebo po extrakci s vhodným rozpouštědlem.

- Tedy kroky sejmutí chránící skupiny a čištění mohou být uskutečněny podle procesu popsaného pro chemickou syntézu.

Avšak, krok sejmutí chránící skupiny může být uskutečněn enzymatickou reakcí podle reakce:

X-AA-hist + enzym

R- OH

-----> AA-hist + X-OR kde R = H nebo alkylový radikal.

Postup je stejný jako postup popsaný pro krok spojování, avšak lze zaznamenat, že ve speciálním případě, kdy R = H, probíhá reakce ve vodě.

Pro krok spojování lze předpokládat situace méně výhodné,. avšak umožňující zásadně, snížit náklady na použití:

- aminokyseliny nikoli N-chráněné (kde X = Η), O-aktvivované jako dříve,

- N-chráněné aminokyseliny,, ale., nikoli . O-aktivované (kde. Y = H) nebo dokonce původní aminokyseliny (X - Y = H). Podmínky procesu jsou stejné jako u procesu popsaného výše pro N-chráněné, O-aktivované deriváty.

Strukturní charakteristiky pseudodipeptidového produktu podle vynálezu umožňují získat aktivní základní látky, které nejsou citlivé na enzymatickou deaktivaci.

Základní strukturní charakteristikou je nepřítomnost skupiny karboxylových .kyselin., na atomu.uhlíku,. umístěném v poloze alfa.dusíku peptidové vazby, a pro některé produkty podle vynálezu je další strukturní charakteristikou nepřítomnost vodíku na atomu uhlíku navázaném na B (tedy R a R’ různé od Η) , atom vodíku může být nahrazen atomem fluoru., fluoralkylovým radikálem (R nebo R'= CF_a) nebo uhlovodíkovými radikálem.

Obecně je odolnost vůči enzymatické deaktivaci podporována stericky brzdicími substituenty, které jsou přítomny na koncovém uhlíku (napojeném na Β), jako je například izopropylový, sek-butylový, terc-butylový nebo neopentylový radikál .

Odolnost vůči enzymatické deaktivaci se rovněž zvýší, když je koncový amin začleněn do cyklické struktury, jako je například typ získaný b) u výše uvedeného obecného vzorce nebo typ získaný a) u výše uvedeného vzorce, kde B je terciární cyklický amin (například piperidin).

Ještě obecněji, odolnost vůči enzymům, zvláště proteázám, když alfa-aminokyselina pseudodipeptidového produktu představuje strukturu, která je rozdílná od struktury přirozených alfa-aminokyselin (tedy můžeme mluvit o neproteinogenních nebo nepřirozených aminokyselinách), to může být re-, alizováno rozvážnou volbou stereochemie uhlíku navázaného na B v obecném vzorci. Ve skutečnosti přítomnost koncového asymetrického uhlíku umožňuje získat absolutní konfiguraci od17 lišnou od konfigurace přirozených aminokyselin.

Farmakologické vlastnosti

Fakmakologické vlastnosti pseudodipeptidového produktu podle tohoto .vynálezu vyplývají z uvedené, necitlivosti, vůči enzymatické deaktivaci..

Za prvé · mají ‘ antioxidační vlastnost. Ve skutečnosti jsou schopny vzdorovat oxidačnímu tlaku, tedy takzvané bojovat vůči radikálům na biologických strukturách. Tyto produkty jsou schopny působit v různých úrovních: jsou schopny reagovat přímo na různé typy volných radikálů (F.R.), ale také na toxické vedlejší produkty oxidačního tlaku. Také je zjištěno, že tyto aktivní produkty mohou rovněž opravně působit na změny způsobené volnými radikály na biologických strukturách .

Reaktivita jednoho ze členů této skupiny sloučenin takovýchto typů radikálů závisí na přesných strukturních prvcích, a není možno podat pravidla strukturní aktivity. Například se zdá, že menší strukturní rozdíl může vést k významné modifikaci pseudodipeptidového oxidačně-redukčního potenciálu, fyzikálně-chemické vlastnosti, která je přímo svázána s antioxidačním potenciálem. Tato konkrétní.vlastnost - vysvětluje rozdílnost vlastností pozorovaných u této skupiny sloučenin. Jako příklad jsou uvedeny výsledky pokusů in-vitro uskutečněných se dvěma pseudodipeptidovými produkty.

1”) Byla zjištěna inhibiční schopnost na volném radikálu OH*:

Postup experimentu popsán J.M.C.Gutteridgem v Biochemistry

Journal, svazek 224 (1984), strany 761-767:

- oxidační substrát: deoxyribóza

- systém produkce hydroxylového radikálu OH*: .

EDTA (ethylendiamintetraoctová kyselina)/železo, H_z0,

- Zjištění; thiobarbřturová kyselina/malondialdehyd .(MDA) . .

- Antioxidant: beta-alanyl-L-histidin dipeptidu (citlivý vůči enzymatické.deaktivaci).

% inhibice regulace (bez. antioxidantu) 0 beta-alanyl-L-histidin (10 mM) 38 L-prolyl-histamin 62 L-glutamil-histamin (lOmM) 0

2°) Byla zjištěna inhibiční schopnost na hyperoxidovém anionu O ’ :

- Systém produkce hyperoxidového anionu: xanthinoxydáza / hypoxanthin (nepřítomnost železa)

- Hyperoxidový anion je redukční látkou. Zvláště je schopen redukovat substrát, cytochrom c.

Po jeho redukci následuje ultrafialová spektrofotometrie na

550 nm.

Procentuální množství inhibice je popsáno následovně:

Rychlost redukce cytochromu c bez inhibitoru - rychlost s inhibitorem x 100

Rychlost redukce cytochromu c bez inhibitoru

L-glutamyl-histamin (mM) % inhibice

3,5

14

24

35

V enzymatickém systému, který produkuje hyperoxidový anion, L-glutamyl-histamin je schopen silně inhibovat redukci cytochromu c. Tato inhibice se různí podle koncentrace. L-prolyl hystamin nebo příslušný antioxidant, beta-alanyl-histamin nemají schopnost inhibovat hyperoxidový anion.

V některých případech, když B je sekundární amin, radikál X byl schopen zesílit některé antioxidační vlastnosti pseudodipeptidového produktu podle vynálezu. A to zvláště v případě, kdy substituentem je terc-butoxykarbonyl nebo benzyloxykarbonyl.

Další důležitou vlastností těchto produktů je jejich schopnost chránit vůči oxidačnímu tlaku jak biologické lipofilní struktury (buněčné membrány), tak hydrofilni struktury (biopolymery, například proteiny, DNA).

V důsledku přítomnost imidazolového kruhu a nukleofilního aminu, některé prvky této skupiny mohou mít anti-glykační účinek a tak bránit neenzymatické reakci cukrů na proteinech a tedy bránit jejich rozkladu.

Přítomnost části strukturně podobné histaminu umožňuje, některým prvkům této skupiny získání inhibiční aktivity odpovídající biologickým účinkům histaminu.

Naopak, v některých speciálních případech je možné zís20 kat sloučeninu s části biologických vlastnosti histaminu.

A konečně tyto produkty mají také cytostimulační vlastnosti a v běžných podmínkách výhodu množení určitého . typu buněk. Tato vlastnost může také vysvětlovat imunostimulační a imunomodulační chování, některých, členů. této.'skupiny sloučenin.

Tímto způsobem by pseudodipeptidové produkty podle vynálezu podporovali léčivé působení na imunitní systém buněk implikovaný v pokročilém stadiu léčby (lymfocyty, mastocyty, monocyty) a jejichž hlavním úkolem je vylučování růstových faktorů.

Tato imunostimulační schopnost je prokázána pomocí testu in vitro na myších splenocytěch. Postup experimentu je získán z-. J.Kunert-Radek, H.Stepien, K.Lyson a M.Pawlikowski - Effects of calcium channel modulators on the proliferation of spleen lymphocytes in vitro - Agents and Actions, svazek 29, č. 3-4 (1990), strany 254-258.

Po proliferaci buněk následuje měření rychlosti včleňování tritiovaného thymidinu v buňkách, vyjádřený počtem rozpojení za minutu, odvozeno z šumového pozadí.

Výsledky získané uváděným irnunostimulátorem, konkanavalinem A, jsou podány pro srovnání.

Imunostimulační účinek je vyjádřen indexem stimulace (IS) .

Počet rozpojení za minutu u buněčné suspenze s přidáním mitogenu IS -___

Počet rozpojení za minutu u referenční buněčné suspenze bez mitogenu

Hodnoty odpovídají průměru tří měření.

Je možno pozorovat maximální imunostimulační účinek pro koncentraci 5 gg/ml L-glutamyl-histaminu. Na závěr lze pozorovat střední imunostimulační účinek (buněčná proliferace) s tímto pseudodipeptidem pro koncentrace v rozmezí 5 až 10 gg/ml.

Koncentrace v imunomodulátoru (gg/ml)

	2,5	5,0	10,0	25,0
IS (L-glutamylhistamin)	7,8	42,7	42,1	5,6
IS (konkanavalin A)	8,3	33,4	61,5	4,3

Tato účinnost je srovnatelná s účinností referenčního mitogenu: konkanavalinu A. Avšak buněčná preparace použitá pro tento test je heterogenní, a ve skutečnosti obsahuje několik typů mononukleovaných buněk.

Za účelem specifikace režimu působení pseudodipeptidů byl proveden druhý experiment na homogenním souboru lidských monocytů.

Buněčná proliferace byla vyhodnocena stejným způsobem jako výše:

Koncentrace v imunomodulátoru (gg/ml)

	2,5	5,0	10,0	25,0
IS (L-glutamylhistamin)	8,23	39,80	23,50	2,50
IS (konkanavalin A)	4,82	29,60	21,0

Tak je demonstrována optimální stimulace monocytů pro stejné koncentrace jako výše. Můžeme rovněž pozorovat, že pseudodipeptid je mírně aktivnější než konkanavalin A, s průměrným faktorem 1,34.

Výsledky podporují hypotézu o nepřímém režimu působení na lymfocyty přes aktivaci monocytů.

Ve většině případů je v in vivo pokusech zachování aktivity pseudodipeptidových produktů podle vynálezu svázáno se zachováním molekulární integrity ve styku s hydrolytickými enzymatickými systémy, a vzláště peptidázami.

Avšak bylo rovněž usilováno o určitou citllivost pseudodipeptidových produktů podle vynálezu vůči enzymatickým systémům, a to pro spečiální použití. To je v případě, že B je sekundární amin a radikál X je

II íí

CH3 - c - ^nebo ?h - c -

Aktivní produkt získaný například v prvním případě je možno hydrolyzovat in vivo enzymatickým způsobem, za účelem přetvoření nového pseudodipeptidu, který je rovněž aktivní:

H R 0 Η H

III Hll I

CH3-C-N-C-C-N-CH2-CH2-Im------> H-NR'

Proto pouze získáme dočasnou ochranu peptoidní sloučeniny, ale je to rovněž způsob, jak přetvořit in-situ primární aminovou funkci peptoidu, a tak znovu ustavit vlastnosti související s přítomností nukleofilního aminu v molekule, který je ionizovatelný při fyziologické hodnotě pH. Je možno zaznamenat antiglykační účinek, který částečné souvisí se schopností aminosloučeniny vázat se na redukující cukr kovalentní vazbou. Tento postup může být užitečný v případě, kdy je požadována modifikace polarity původního peptoidu (například za účelem jeho přizpůsobení speciální sloučenině) , zamezení přítomnosti skupiny, ionizovatelné při fyziologické hodnotě pH, na molekule, nebo konečně za účelem snížení reaktivity peptoidu v souvislosti s dalšími chemickými typy přítomnými ve vzorci (neslučitelnost s přítomností elektrofilní sloučeniny).

V některých případech umožňuje tento postup rovněž zlepšit biologickou dostupnost a farmakokinetiku této kategorie aktivních produktů, což má za následek potencializaci farmakologického účinku.

Terapeutické a kosmetické aplikace

Všechny výše uvedené vlastnosti vedou ke kosmetickým a terapeutickým využitím pseudodipeptidových produktů podle vynálezu.

Antioxidační vlastnosti pseudodipeptidů podle vynálezu umožňují navrhování těchto produktů pro ošetřování patologických jevů spojených s oxidačním tlakem.

Mezi těmito charakteristikami má velký terapeutický význam léčba katarakty. Příčiny různých katarakt se různí. Mechanismy těchto patologických jevů, které jsou typu senilní katarakty nebo diabetické katarakty jsou rozděleny do dvou skupin: oxidační mechanismus (M.A.Babizhayev, A.I.Deyev, L.F.Lindberg, Lipid peroxidation as a possible cause of cataract, Mechanisms of Aging Dev., svazek 44 (1988), strana 69-89), a mechanismy retikulace glykačního typu, (T.J.Lyons, G.Silvestři, J.A.Dunn, D.G.Dyer, J.W.Baynes Role of glacation of lens crystallins in diabe24 tic and non-diabetic senile cataracts, Diabetes, svazek 40, č.8, (1991), strana 1010-1015).

Již dříve bylo pozorováno, že antioxidační vlatnosti pseudodipeptidů, vyplývající zvláště z jejich působení proti volným radikálům a aktivity typu peroxidázy a rovněž z jejich antiglykační aktivity, způsobují, že pseudodipeptidy podle vynálezu jsou účinnými produkty pro ošetřování katarakty. Schopnost těchto sloučenin, působit nápravně na změny způsobené volnými radikály v biologických strukturách, je zvláště významná v léčbě katarakty, protože má za následek regresi zákalu čočky.

Pseudodipeptidové produkty podle vynálezu mohou bránit oxidačnímu jevu způsobujícímu aterosklerózu. U tohoto patologického jevu oxidace částic proteinu nízké hustoty (LDL) cirkulujících v krvi má za následek fragmentaci proteinové části (apoprotein B), a rovněž lipidově frakce těchto částic. Vytvořené fragmenty by dodávaly vzhled abnormálních tvarů buněk (monocyty a makrofágy naplněně cholesterolem), které jsou schopny se shlukovat na stěnách krevních cév a vytvářet ateromatózní pláty.

Kromě toho pseudodipeptidové produkty podle vynálezu by byly zvláště vhodné pro léčbu této nemoci, když bylo prokázáno, že glykační jevy patří rovněž mezi původce ateromatózních plátů (viz T.J.Lyons - Glycation and oxidation - A role in the pathogenesis of Atherosclerosis - Amreican Journal of Cardiology, svazek 71, č.6 (1993), strana 1326-1331).

Pseudodipeptidové produkty podle vynálezu mohou rovněž působit proti procesu kancerogeneze, když bylo prokázáno, že typy radikálů odvozené od kyslíku způsobují přerušení nebo modifikaci řetězců DNA, přičemž tyto transformace mohou způsobit přeměnu zdravých buněk na nádorové buňky.

Stejným způsobem antioxidační vlastnosti pseudodipeptidových produktů podle vynálezu umožňují indikovat tyto produkty pro léčbu patologických zánětových stavů, a zvláště pro léčbu revmatické artritidy. Ve skutečnosti zhoršení sinoviální kapaliny je charakteristickým symptomem artritidy zánětového typu a bylo prokázáno, že rozklad jedné z jejích základních složek, hyaluronové kyseliny, byl důsledkem oxidačního tlaku. Některé nedávné studie (viz B.Halliwell a J.M.C.Gutteridge - Chronic inflammation and the auto immune deseases - Free Radicals in Biology and Medecine - B.Halliwell a J.M.C.Gutteridge Eds - Clarenton Press (1989) , Oxford, strana 422-438) sem rovněž zahrnuly peroxidace lipidů související s tímto procesem, což vysvětluje prospěšné působení produktů podle vynálezu.

Antioxidačních vlastností pseudodipeptidových produktů podle vynálezu může být rovněž využito v léčbě ozařováním jakožto přídavná léčba. Tento ochranný účinek před zářením, který je již znám pro beta-alanyl-histidin spočívá v citostimulačních vlastnostech tohoto typu sloučenin, zvláště s ohledem na buňky kostní dřeně, které jsou velmi citlivé na záření používané pro léčbu ozařováním.

Podle posledních údajů by mohly mít některé epileptické symptomy původ v lezích, které se vytvářejí okysličenými volnými radikály v některých částech mozku (viz G.R.Jackson, K.Werrbach-Perer, J.R.Perez-Polo - Role of nerve growth factor in oxidant-antioxidant balance and neuronal injury - II - A conditioning lesion paradigon Jour26 nal of Neuroscience Research, sv. 25, č.3 (1990), strana 369-374). Schopnost produktů podle vynálezu regenerovat tkáň (v tomto případe nervovou) je důležitým prvkem pro tento patologický jev spojený s degenerací nervové tkáně. Tyto produkty by bylo možné indikovat i pro léčbu Parkinsonovy choroby, v níž by byl zaznamenán oxidační tlak týkající se mozkové tkáně.

Některá cévní onemocnění, a zvláště endotoxemie, jsou spojeny s nadměrnou produkcí radikálového typu, kterým je radikál oxidu dusíku NO*. Působení tohoto radikálu produkovaného buňkami endotelu a buňkami hladkého svalstva krevních cév má za následek chronickou vazodilataci. Tento stav může být velmi škodlivý při léčbě vazokonstrikčními látkami. V buňkách enzym NO-syntáza katalyzuje transformaci aminokyseliny, L-argininu, na NO*. Antioxidační pseudodipeptid podle vynálezu obsahující radikál L-arginyl (nebo derivát N^-methyl-L-arginyl) ve své struktuře, by mohl působit přímo na NO*, ale rovněž na enzym způsobující NO* syntézu, pomocí inhibičního působení na enzymatickou katalýzu.

Pro pokožku mohou být antioxidační vlastnosti pseudodipeptidových produktů podle vynálezu využity pro neutralizaci okysličených volných radikálů vyvolávaných slunečním zářením. Tímto způsobem budou účinně blokovat fotoalergické reakce (volné radikály vyvolávají na úrovni pokožky tvorbu molekul citlivých na světlo). Ve spojení s aktivním základem citlivým na oxidaci (například s chlorpromazinem) budou zabraňovat jejich přeměně na toxickou sloučeninu.

Tento základ se nejlépe využije při fotochemické léčbě určitých kožních chorob. Ve skutečnosti tato léčba spočívá v použití fotosenzibilizátoru (například psoralenu), které má při ozařování prospěšné účinky (interakce s DNA), ale které je bohužel doprovázeno tvorbou volných radikálů, způsobujících nežádoucí vedlejší účinky.

Produkty podle vynálezu mohou být rovněž indikovány pro zamezení toho, aby se u osob trpících porfyrií objevovaly kožní symptomy, protože porfyriny dávají možnost vzniku poškození způsobených volnými radikály.

Mohou se rovněž nasadit proti tvorbě kožních lézí spojených s oxidačním tlakem u osob trpících autoimunitními chorobami, jako je například soustavný lupus erythematodes (SLE).

Rovněž účinně působí proti důsledkům opalování na slunci: erytémy, eděmy a tvorba charakteristických buněk v kůži.

Antioxidační vlasntosti sloučenin podle vynálezu mohou být samozřejmě využity pro prevenci stárnutí kůže. Ve skutečnosti četné experimentální důvody, analytické a epidemiologické, podporují teorii, podle které má nahromadění biochemických poškození způsobovaných volnými radikály konstituovat základní proces stárnutí. Je zcela jasné, že vystavování slunečnímu záření, které způsobuje tvorbu volných radikálů typů odvozených od kyslíku, je důvodem předčasného stárnutí pokožky.

A konečně, bylo experimentálně prokázáno, že tyto sloučeniny mohou potírat další charakteristické jevy stárnoucí kožní tkáně:

- Neenzymatické síťování proteinů, jako například kolagenu nebo elastinu cukrem (V.M.Monnier - Nonenzymatic glyco28 sylation, the Mailard reaction and the aging process - Journal of Gerontology, sv. 45, č.4 (1990), strana B105-111),

- Tvorba lipoproteinových komplexů: lipofiscinů (zesilováni s vedlejšími produkty oxidačního tlaku)

Bylo prokázáno, že L-arginin má schopnost odolávat neenzymatickému síťování (tato aminokyselina může kondenzovat na cukrech, ale také na některých dikarbonylovaných vedlejších produktech oxidačního tlaku). Pak pseudodipeptidové produkty podle vynálezu obsahující ve své struktuře L-arginylový radikál budou tedy zvláště indikovány za účelem zabraňování mechanismu stárnutí tkáně.

Další řada aplikací vyplývá z cytostimulačních schopností pseudodipeptidových produktů podle vynálezu a, jak bylo prokázáno, jejich imunostimulačních schopností. Tyto schopnosti umožňují podporu regenerace a ozdravování tkáně, a obecně umožňují regulovat funkce, které zahrnují zprostředkující látky imunitní reakce.

Tak mohou být použity pro podporu regenerace narušených kožních pojivových tkání. Podporují nápravu mukózy po spálení nebo po chemoterapii nebo radioterapii.

V souladu s tímto principem mohou být tyto produkty indikovány pro prevenci a při ošetřování vrásek.

Cytostimulační a regenerační schopnosti pseudodipeptidů působí zvláště na svalové tkáně, kde můžeme najít vysoké koncentrace příbuzných přirozených dipeptidů: beta-alanyl-histidin. I když není fyziologická úloha této sloučeniny v současnosti dokonale stanovena, je tato úzce svázána se svalovým metabolismem. Tak by produkty podle vy29 nálezu mohly participovat na zlepšení svalové kontraktility, a regulovat srdeční kontrakce. Můžeme rovněž využít tento typ schopností pro léčbu některých svalových degenerací, například Dushenovy myodistrofie.

Léčivé vlastnosti pseudodipeptidových produktů podle vynálezu nacházejí své uplatnění v četných oblastech. Můžeme uvést léčbu žaludečních vředů, u kterých měl dobré výsledky dipeptidový produkt příbuzný karnozinu. (M.Ito, T. Tanaka a Y.Susuki - Effekt of N-(3-aminoproprionyl-L-histidinatozinc (Z-103) on healing and hydrocortisone-induced release of acetic acid ulcers in rats with limited food-intake-time - Japanese Journal of Pharmacology, svazek 54, (1990), strana 513-521). Kromě toho antioxidační a protizánštové vlastnosti produktů podle vynálezu jsou využitelné pro léčbu těchto patologických jevů. Chelát zinku podle tohoto vynálezu je zvláště indikován pro toto využití, jak bylo výše popsáno.

Léčivé vlastnosti pseudodipeptidových produktů podle vynálezu jsou také zvláště indikovány pro léčbu poškození rohovky. Mohou být podávány v rámci pooperačního ošetření, například po chirurgickém zákroku na rohovce za účelem korekce myopie.

Mohou být rovněž s velkou výhodou využity pro léčbu suchého oka, kdy je podporováno léčení epitelu rohovky, ale také díky funkci umělé slzy: ochrana poškozených tkání před oxidačním tlakem (zdravotní stav, zánět, UV záření), začlenění do formulí podporujících obnovu slzového filmu.

Kompozice obsahující pseudodipeptidové produkty podle vynálezu budou rovněž schopny, díky svému imunostimulačnímu a regeneračnímu působení na tkáně zabraňovat degeneraci sítnice. Jejich účinky budou posíleny v důsledku toho, že u těchto patologických jevů dochází rovněž k oxidačním reakcím (viz. R.E.Anderson, L.M.Rapp, R.D.Wiegand - Current Eye Research, svazek 3 (1984), strana 223-227).

Imunostimulační vlastnosti těchto pseudidipeptidových produktů podle vynálezu mohou rovněž znamenat obrat k potencializaci vakcín náhradou za adjuvanty, kterých se obvykle používá pro zesílení imunitní odpovědi člověka (soli hliníku, výtažky bakterielního původu, monofosforyl A, ...), u kterých nejsou bezvýznamné vedlejší účinky (RK Gupta, EH Relyveld, EB Lindblad, B Bizzini, S Ben-Efraim a CK Gupta Adjuvants - a balance between toxicity and adjuvancity, Vaccine, svazek ll, č. 3 (1993), strana 293-306).

Jak již bylo uvedeno, některé pseudodipeptidy odpovídající výše uvedenému obecnému vzorci se mohou chovat jako histaminové inhibitory. Mezi terapeutické aplikace využívající této vlastnosti lze uvést:

- Antagonista histaminu by se mohl postavit proti shlukování destiček pro léčbu chorob periferního cévního systému. Ve skutečnosti bylo prokázáno, že histamin je nitrobuněčný mediátor podporující shlukování destiček. (S.P.Saxena, L.J.Brandes, A.B.Beckerk, J.Simons, F.S.LaBella a J.M.Gerrard, Science, svazek 243, č.24, (1989), strana 1596-1599). Histamin je rovněž nitrobuněčný mediátor účastnící se buněčného vývoje a množení (JR.Chanda, A.K.Ganguly Cancer Letters, svazek 34 (1987), strana 207). Proto antagonistický pseudodipeptid podle vynálezu by mohl být použit pro regulaci buněčného množení, zvláště u hypertofních jizevnatých tkání (keloidy).

- Histamin je rovněž mimobuněčný mediátor zapojující se do četných biologických procesů. Tak může být antagonista podle vynálezu využit u alergií, pro léčbu zánětů u některých srdečních dysfunkcí a pro všechny patologické jevy, u kterých dochází k nadměrnému uvolňování histaminu.

Tak by mohlo být obzvláště výhodné zahrnout pseudodipeptidové produkty podle vynálezu do vůní a dezodorantů pro potlačení alergických reakcí, a zvláště anafylaktického šoku, způsobovaného některými silnými vonnými směsmi.

Naopak, některé prvky této rodiny sloučenin mohou mít některé vlastnosti histaminu (pro-histaminové chování). Antagonistické chování receptorů H2 histaminu umožňuje inhibovat aktivaci neutrofilů a tedy nadměrnou produkci volných radikálů u těchto buněk (R.Burde, R.Seifert, A.Buschaeur, G.Schultz, Histamine inhibits activation of human neutrophiles a and HL-60 leukemic cells via H2-receptors, Naunyn Schmiedebergs Arch. of Pharmacology, svazek 340, č.6 (1989), strana 671-678) . Toto umožňuje zvážit použití takovýchto pseudodipeptidů pro léčbu některých patologických zánětových stavů.

Histamin rovněž podporuje buněčné množení a vývoj (G.Kahlson, E.Rosengren, C.Steinhardt Journal of Physiology, svazek 151, (1960), strana 131). Pro-histaminová sloučenina by pak mohla podporovat regeneraci buněk.

Řada aplikací je spojena se schopností některých pseudodipeptidových produktů podle vynálezu, zahrnujících ve své struktuře L-propylový radikál (a jeho deriváty), působit proti abnormální syntéze kolagenu a jeho shlukování ve tká32 nich. Tato zvláštní schopnost by mohla být spojena se strukturní analogií s přirozeným dipeptidem, kterým je L-glycyl-L-prolin, který podporuje odbourávání kolagenu, ale také s jejich antioxidačními vlastnostmi, protože se nedávno zjistilo, že oxidační tlak se účastní nadprodukce kolagenu (J.C.Geesin, L.J.Hendricks, P.A.Falkenstein, J.S.Gordon, R.A.Berg Regulation of collagen synthesis by ascorbic acid: characterization of the role of ascorbate-stimulated lipid peroxidation” Archives of Biochemistry and Biophysics, svazek 290, č.l (1991), strana 127-132).

Akumulace kolagenu v srdeční tkáni je jednou z hlavních komplikací u cukrovky.

Tento typ sloučenin je indikován za účelem redukce keloidů spolu s nadprodukcí kolagenu v době léčebného procesu. Jelikož pseudodipeptidy podle vynálezu se mohou rovněž chovat jako anti-histaminové látky, a protože bylo nedávno prokázáno, že histamin stimuluje produkci kolagenu (A.Hitamochi, H.Ueki, C.Mauch, T.Krieg Effekt of histamine on collagen m-RNA production in human skin fibroplast, Journal of Dermatologic Sciences, sv.2 (1991), strana 407-412), peptoidy podle vynálezu jsou zvláště vhodné pro tuto aplikaci.

Aplikace jako stabilizační a konzervační prostředek

Vynikající snášenlivost vůči pseudodipeptidům podle vynálezu a jejich mírné antioxidační a cytostimulační vlastnosti umožňují navrhnout tyto produkty pro konzervaci a ochranu látek citlivých na oxidaci, potravin nebo orgánů a tkání uchovávaných ex-vivo.

Lze uvést zamezení oxidace lipozomů pro zvýšení jejich stability a zabránění tvorbě toxických vedlejších produktů, ochranu hyaluronové kyseliny rozmíchané v kosmetických přípravcích proti depolymerizačním účinkům volných radikálů, a ochranu olejů a potravinářských výrobků citlivých na oxidaci, dietetických výrobků.

Produkty podle vynálezu umožňují zlepšení konzervace krve a vakcinačního séra, ochranu orgánů určených pro transplantaci (zvláště pro srdeční transplantáty).

ΐ7&Γ-*ϊζ

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Pseudodipetidový produkt s obecným vzorcem:

0 H

II I

A—C—N—CH₂—CH₂—Im kde A je:

а) buďto ve formě

R

I

B - C I

R' kde

- B představuje amin, přičemž atom dusíku je přímo navázán na atom uhlíku a je vybrán ze skupiny, kterou tvoří:

1) primární amin
2) sekundární amin se vzorcem -NH-X, kde X je uhlovodíkový, fluoralkylový nebo acylový radikál, nebo amin,
3) terciární cyklický amin typu cykloalkylu nebo laktamu,
4) terciární amin o vzorci -N-Y

I

Y' kde Y nebo Y' je uhlovodíkový, acylový nebo acyloxy radikál,
5) imin o vzorci -N=C-Y

I

Y' kde Y je uhlovodíkový radikál a Y' je atom· vodíku nebo uhlovodíkový radikál, a

б) amonium o vzorci Y'

I

-N*-Y, W

I

Y' ' vac •r-o kde Y, Y', Υ’» je uhlovodíkový radikál a ion W je halogenid, sulfát, fosfát, hydrogenuhličitan, paratoluensulfonát, nebo sloučenina nesoucí skupinu karboxylové kyseliny,

- R je atom fluoru, fluoralkylový radikál, funkční skupina, například sulfát, fosfát, nebo karboxylová kyselina, acylový radikál, lineární alkylový řetězec, který může být substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami, alkenylové nebo arylové radikály, které mohou být substituované jednou nebo více funkčními skupinami,

- R' je atom vodíku, atom fluoru, alkylový radikál, nebo fluoralkylový radikál,

- Im je imidazolová skupina nebo N-substituovaný imidazol,

b) nebo ve formě

R

I

HN - C \ /

R kde

R je atom vodíku nebo fluoru, nebo flouralkylový nebo acylový radikál, nebo uhlovodíkový radikál, který může být substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami,

R''je acylový radikál nebo uhlovodíkový radikál, případně substituovaný jednou nebo více funkčními skupinami.

2. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1, kde atom uhlíku v A v obecném vzorci je asymetrický uhlík s absolutní konfi gurací odlišnou od uhlíku alfa přirozené alfa aminokyseliny, navázaný peptidickou vazbou na histamin.

3. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1 nebo 2, kde radikál R' není atom vodíku.

4. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 3, kde alespoň jeden z radikálů R a R' je atom fluoru.

5. Pseudodipeptidový produkt podle jednoho z nároků 1 až 3, kde alespoň jeden z radikálů R a R' je radikál CF₃.

6. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1 nebo 2, kde obecný vzorec je ve formě a) , přičemž B je az-^rx&din, pyrolidin nebo piperidin nebo laktam, zvláště δ-laktam nebo T-laktam.

7. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1 nebo 2, kde obecný vzorec je ve formě a), přičemž B je amonium, a W je sloučenina nesoucí skupinu vybranou z řady zahrnující acetát, trifluoracetát, citrát, glukonat, pikrat, aspartat a glutamat, halogenidový ion, sulfát, fosfát, hydrogenuhličitan, a paratoluentsulfonátová skupina.

8. Pseudodipeptidový produkt podle jednoho z nároků 1 až 7, kde radikál R nebo R'' je radikál substituovaný funkční skupinou, například skupinou zahrnující alkohol, amin, karboxylovou kyselinu, alkoxy, thiolether, thiol, fosfát a sulfát.

9. Pseudodipeptidový produkt podle jednoho z nároků 1 až 7, kde radikál R' je vybraný ze skupiny, zahrnující izopropylo37 vý, izobutylový, sek.butylový, terč.butylový a neopentylový radikál.

10. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1 nebo 2, tvořící chelát s atomem kovu vybraným ze skupiny, zahrnující zinek, měď, železo, kobalt, mangan a nikl.

11. Pseudodipeptidový produkt podle nároku 1 nebo 2, kde obecný vzorec je ve formě b), přičemž R'' je radikál CH2-CH2-CH2, tedy A je

A = - CH — NH

I I CH2 j:h₂ pseudodipetidový produkt je L-prolyl-histamin.

12. Pseudodipeptidový produkt podle jednoho z přecházejících nároků, kde atom kyslíku karbonylové skupiny amidové vazby, která je výsledkem spojení histaminu s alfa aminokyselinou, je nahrazen atomem síry.

13. Chemický způsob přípravy produktu podle jednoho z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že zahrnuje následujícími kroky:

- vytvoření uvedené alfa aminokyseliny N-chráněné skupinou X,

- vytvoření uvedené alfa aminokyseliny O-aktivované skupinou Y,

- sloučení uvedené N-chráněné a O-aktivované alfa aminokyseliny s histaminem nebo methylem substituovaným histaminem, a

- eliminace X nebo neeliminace X podle požadovaného pseudodipeptidového produktu.

14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že alfa aminokyselina je O-aktivována esterifikací funkční karboxylové skupiny uvedené aminokyseliny.

15. Způsob podle nároku 14, vyznačující se tím, že krok esterifikace při tvorbě O-aktivované alfa aminokyseliny je uskutečňován reakcí se sloučeninou vybranou ze skupiny zahrnující: kyanomethylalkohol, o-nitrofenol, 2,4,5-trichlorfenol, p-nitrofenol, 2,4-dinitrofenol, pentachlorfenol, pentafluorfenol, N-hydroxyftalamid, N-hydroxysukcinimid, 1-hydroxypiperidin a 5-chlor-8-hydroxychinolin.

16. Enzymatický způsob přípravy produktu podle jednoho z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že zahrnuje spojení alfa aminokyseliny s histaminem nebo methylem substituovaným histaminem v přítomnosti enzymatického katalyzátoru typu hydrolázy.

17. Způsob podle nároku 16, vyznačující se tím, že uvedeným enzymatickým katalyzátorem- je hydroláza vybraná ze skupiny zahrnující lipázy extrahované z mikroorganismů nebo lipázy živočišného původu, a proteázy.

18. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12, pro přípravu léku pro léčbu katarakty.

19. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12, pro přípravu léku pro léčbu aterosklerózy.

20. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 al 12, pro přípravu léku pro léčbu zánětových stavů.

21. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12, pro přípravu léku pro léčbu kožních chorob spojených s oxidačním tlakem, jako je například fotoalergie, porfyrie a Lupus Erythematosus.

22. Použití produktů podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku na endotoxemii a další cévní choroby spojené s nadprodukcí volných radikálů NO*.

23. Použití produktu podle jednoho přípravu léku pro léčení tkání, jako deční sliznice a oční tkáň.

z nároků 1 až 12 pro jsou kožní tkáň, žalu24. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku pro léčbu žaludečních lézí, kde uvedený pseudodipeptidový produkt je ve formě chelátu s atomem zinku.

25. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku účinkujícího jako prostředek chránící před zářením.

26. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku užitečného jako inhibitor syntézy kolagenu.

27. Lék připravený použitím podle nároku 26, pro léčbu některých komplikací diabetes a pro redukci keloidů při léčení pokožky.

28. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu terapeutické nebo kosmetické kompozice pro regeneraci a omlazení tkání, jako jsou mukózní a kožní tkáně.

29. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku účinkujícího jako imunostimulátor pro potencializaci vakcín.

30. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku účinného proti agregaci destiček.

31. Použití produktu podle jednoho z nároků 1 až 12 pro přípravu léku na alergie.

32. Použití produktu podle jednoho z nároků l až 12 pro konzervaci a stabilizaci látek citlivých na oxidaci, potravinářských výrobků nebo orgánů a tkání uchovávaných ex vivo.