CZ113794A3

CZ113794A3 - Monomeric derivatives of bile acids process of their preparation and their use as medicaments

Info

Publication number: CZ113794A3
Application number: CZ941137A
Authority: CZ
Inventors: Heiner Dr Glombik; Alfons Dr Enhsen; Werner Dr Dr Kramer; Gunther Dr Wess
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1993-05-08
Filing date: 1994-05-06
Publication date: 1994-11-16
Also published as: HU9401408D0; NO941680D0; EP0624594B1; FI942077A; IL109580A; GR3031541T3; AU673419B2; IL109580A0; FI942077A0; CZ289209B6; NZ260471A; EP0624594A2; US5610151A; NO304794B1; TW289021B; CA2123052C; DK0624594T3; EP0624594A3; DE59408602D1; NO941680L

Description

Oblast techniky

Vynález se týká monomerních derivátů žlučových kyselin, způsobu jejich přípravy a použití těchto sloučenin jako léčiv.

Dosavadní stav techniky

Kyseliny žlučově jsou syntetizovány v játrech v několika enzymatických stupních. Takto syntetizované kyseliny žlučové se potom shromažďují ve žlučníku, odkud jsou vylučovány do tenkého střeva. Zde tyto kyseliny plní v průběhu trávícího procesu důležité fyziologické funkce, přičemž zde například vystupují jako kofaktory nebo pankreatické lipázy a jako přirozené detergenty při resorpci tuků a vitamínů rozpustných v tucích. Aktivními a pasivními transportními procesy dospěje největší část žlučových kyselin z tenkého střeva vrátnicí zpět do jater.

Polymery vázající žlučové kyseliny jsou již dlouhou dobu používány jako léčiva. Tyto polymery se používají při léčení nemocí, u kterých je žádoucí inhibice zpětné resorpce kyseliny žlučové Tak může být při zvýšené hladině cholesterolu v krvi v důsledku redukce žlučových kyselin nacházejících se v enterohepatickém krevním oběhu indukována v játrech zvýšená produkce žlučových kyselin z cholesterolu. To vede ke zvýšené spotřebě LDLcholesterolu v krvi v játrech a k urychlenému LDL-katabolismu. Docílený účinek spočívá ve snížení aterogenního cholesterolu v krvi.

Polymery, které se k tomuto účelu používají jako'léčiva, například Cholesty.ramin' nebo Colestipol, však musí být podávány ve velkvch denních dávkách pohybujících se od 12 do 30 g. Přijatelnost těchto polymerů pro pacienta a lékaře kromě uvedeného vysokého dávkování zhoršují také chut a nepříjemná vůně těchto polymerů.

c.«

Uvedené polymery mají vzhledem k jejich velmi malé selektivitě vedlejší účinky. Ve vysoké míře se slučují i s vitamíny a současně podávanými léčivy a navíc mění kvalitativní složení žlučových kyselin ve žluči. Tyto vlastnosti se potom projevují v různých gastrointestinálních poruchách (například zácpa, steatorrhoea), avítaminóze a zvýšenémriziku tvorby žlučových kamenů (cholelitiáza).

Nyní byly s překvapením nalezeny deriváty kyseliny žlučově, které nemají výše uvedené nedostatky.

Podstata vynálezu

Vynález se týká monomerních derivátů žlučových kyselin obecného vzorce I

Z-X-GS (I) ve kterém

GS znamená zbytek žlučové kyseliny s kyselou funkcí v bočním řetězci nebo její sůl,

X znamená kovalentní vazbu nebo mústkovou skupinu vzorce (C^) , kde n znamená 1 až 10, přičemž alkylenový řetězec může obsahovat 1 až 3 kyslíkové atomy nebo NH- nebo

NHC-skupiny a GS je vázán libovolně přes X, a II O

Z znamená HO-, CH^-O-, skupinu HO-CH2~CH=CH-CH2-, skupinu (ΟθΗ^)2~CH-O-, skupinu

O (alkalický kov)-0-£>-0-, skupinu ΗΟ-ί’-Ο-, i!

OH

O

JI skupinu (iH^Cg ) O-P-O-, skupinu CH2=CH —Č-NH-,

O(C_gH₅)

NH skupinu H2N-C-NH-, skupinu HN-C-NH-, skupinu H2N-C-NH-,

C_rH. 6 3

skupinu -N(R)₂ nebo skupinu -N⁺(R)₃, přičemž R vždy znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 7 uhlíkových atomů, nebo skupinu H₂~N-(CH₂)g-,

(C₁-C₁₀)-Alkyl-C-NH, přičemž alkylový zbytek substituován skupinou COOH, nebo skupinu je případně

COOH

C I o

Ob c-nh-ch₂-ch₂0 C H ,

SO₂-NH ,NH'C'

I I o

nebo přičemž A vždy znamená skupinu OH nebo NH-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 10 uhlíkových atomů.

Výhodné jsou sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém je zbytek GS vázán s X v poloze 3, přičemž tato vazba je uskutečněna v poloze alfa nebo beta.

Pod kyselou funkcí se rozumí zejména skupina COOH nebo skupina sulfonové kyseliny.

Alkylové zbytky jsou přímé nebo rozvětvené.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I mají vysokou afinitu ke specifickému transportnímu systému žlučových kyselin v tenkém střevu a koncentračně-závislě a kompetitivně

inhibují zpětnou resorpci žlučových kyselin.

Kompetitivní inhibicí muže být do enterohepatického oběhu zasaženo podstatně selektivněji. Nedochází k avitaminoze ani ke kvalitativní změně složení žlučových kyselin ve žluči. Pomocí sloučenin podle vynálezu může být dosaženo cíleného snížení hladiny cholesterolu v krevním séru, aniž by přitom docházelo ke známým vedlejším účinkům. Vzhledem k vysoké afinitě sloučenin podle vynálezu k transportnímu systému žlučových kyselin je možné tyto sloučeniny podávat v mnohem menších denních dávkách, než jaké se používají v případě podání komerčně dostupných polymerů. To má za následek, že sloučeniny podle vynálezu jsou jak pro pacienta, tak i pro lékaře mnohem více akceptovatelné.

Uvedené sloučeniny podle vynálezu mají tedy cenné farmakologické vlastnosti a mohou být proto použity zejména jako hypolipidemika .

Vynález se proto také týká léčiva na bázi sloučenin obecného vzorce I, jakož i použití těchto sloučenin jako léčiv , zejména ke snížení hladiny cholesterolu.

Ověření biologických účinků sloučenin podle vynálezu se provádí stanovením inhibice absorpce taurocholátu v buněčné membráně s kartáčkovým lemem králičího kyčelníku. Inhibiční test se provádí následujícím způsobem:

1. Příprava buněčné membrány s kartáčkovým lemenz králičího kyčeníku

Příprava buněčné membrány s kartáčkovým lemem z buněk tenkého střeva se provádí tzv. Mg²⁺-precipitační metodou. Králičí samečkové (Neuseeland, tělesná hmotnost 2 až 2,5 kg) se usmrtí intravenózní injekcí 0,5 ml, vodného roztoku 2,5 mg Tetracain-KCl, 100 T 61 a 25 mg Mebezoniumjodidu. Vyjme se tenké střevo, načež se promyje'ledově chladným fyziologickým roztokem. K přípravě buněčné membrány s kartáčkovým lemem se použije koncových sedm desetin tenkého střeva (měřeno v orálně-rek tál.ním směru, tzn. koncový kyčelník, který obsahuje Na -závislý transportní systém žlučových kyselin). Vyjmutá střeva se v sáčcích z umělé hmoty zmrazí pod atmosférou dusíku na teplotu -30 °C. Za účelem přípravy membránových vesikul se zmražená střeva nechají roztát ve vodní lázni o teplotě 30 °C. Seškrábe se sliz.nice a takto oddělená sliznice se suspenduje v 60 ml ledově chladného 12 mM Tris-KCl-pufru (pH 7,1), obsahujícího 300 mM manitu, 5 mM. EGTA, 10 mg/1 fenylmethylsulfonylfluoridu, mg/1 trypsinového inhibitoru ze sójových bo bú (32 U/mg),

0,5 mg/1 trypsinového inhibitoru z hovězích plic (193 U/mg) a 5 mg/1 Bacitracinu. Po zředění ledově chladnou destilovanou vodou na objem 300 ml se směs homogenizuje za chlazení ledem v zařízení Ultraturrax (18-Stab, IKA Werk Stuafen,SRN) po dobu 3 minut při 75 % z maximálního výkonu zařízení. Po přidání 3 ml 1M roztoku chloridu horečnatého (finální koncentrace 10 mM) se i homcgenizovaná směs ponechá stát při teplotě 0 °C přesně po dobu jedné minuty. Přídavek iontů Mg ^T má za následek agregaci a : precipitaci buněčných membrán s výjimkou buněčných membrán s kartáčkovým lemem. Po 15 minutovém odstřeďování při 3000 x g (5000 otáček za minutu, rotor SS-34) se usazená peleta zavede do odpadu a supernatant, který obsahuje buněčné membrány s kartáčkovým lemem, se odstřeďuje po dobu 30 minut při 267000 x g (15000 otáček za minutu, rotor SS-34). Supernatant se odstraní a usazená peleta se opětovně homogenizuje v Potter Elvejhemově homoge.nizátoru (Braun, Melsungen, 900 otáček za minutu, 10 zdvihů) v 60 ml 12 mM Tris-HCl-pufru ( pH 7,1) obsahujícího 60 mM manitu a 5 mM EGTA. Po přidání 0,1 ml 1M roztoku chloridu hořečnatého a 15 minutové inkubační době při teplotě 0 °C se směs znovu cdstředuje při 3000 x g. Supernatant se potom ještě odstřeďuje po dobu 30 minut při 46000 x g (15000 otáček za minutu, rotor SS34). Usazená peleta se vyjme 30 ml 10 mM Tris/Hepes-pufru ( pH 7,4) obsahujícího 300 mM manitu a resuspenduje 20 zdvihy v Potter Elvejhemově hcmogenizátoru při 1000 otáčkách za minutu.

Po 30 minutovém odstřeďování při .48000 x g (20000 otáček za minutu, rotor SS-34) se usazená peleta vyjme 0-,5 až 2 ml Triš/Hepes-pufru ( pH 7,4) obsahujícího 280 mM manitu (finální koncentrace 20 mg/ml) a resuspenduje pomocí tuberkulínové stříkačky němou .tailoru ískané vesikuly membrán s kartáčkovvm lemem se buď bezprostředně po nímu testu anebo se přechovává ným dusíkem ve 4 mg porcích.

jejich jí při získání teplotě použijí k inhibič-196 °C pod kapalInhibice na Na⁺—závislé absorpce /^H/-taurocholátu ve vesikulách membrány s kartáčkovým lemem kyčelníku

Absorpce substrátů ve výše popsaných vesikulách membrán s kartáčkovým lemem se stanoví tzv. membránofiltrační technikou. 10/Ul vesikulární suspenze (100/Ug proteinu) se odpipetuje ve formě kapky na stěnu polystyrénové inkubační trubičky (11 x 70 mm), která obsahuje inkubační prostředí (90/Ul) s odpovídajícími ligandy. Toto inkubační prostředí obsahuje 0,75,ul (=0,75,uCi . ' ' / K(G)/-taurocholátu (specifická aktivita 2,1 Ci/mMol), 0,5/Ul 1OmM taurocholátu, 8,75/Ul Natrium-transport-pufru (10 mM Tris/Hepes (pH 7,4), 100 mM manitu, 100 mM NaCl) (Na-T-P), popřípadě 8,75yUl Kalium-transport -pufru (10 mM Tris/Hepes (pH 7,4),

100 mM manitu, 100 mM KC1) (K-T-P) a 80/U příslušného inhibičního roztoku, ve kterém je inhibitor rozpuštěn podle charakteru experimentu v Na-T-pufru, popřípadě K-T-pufru. Toto inkubační prostředí se zfiltruje přes polyvinylidenfluoridový membránový filtr (SYHV LO 4NS, 0,45/Um, 4 mm 0, Millipore, Eschborn SRN). Smíšením vesikul s inkubačním prostředím je zahájeno měření transportu. Koncentrace taurocholátu na počátku inkubace činí 50/UM. Po uplynutí požadované inkubační doby (obvykle 1 minuta) se transport zastaví přidáním 1 ml ledově chladného přerušovacího roztoku (10 mM Tris/Hepes (pH 7, 4) , 150 mM KC1). Vzniklá směs se rychle odsaje za vakua 2,5 až 3,5 kPa přes membránový filtr z nitrátu celulózy (ME 25, 0,45/Um, 25 mm průměr, Schleicher u. Schuell, Dassell, SRN). Filtr se potom promyje 5 ml ledově chladného přerušovacího roztoku.

Za účelem změření absorpce radioaktivně značeného taurocholátu se membránový filtr rozpustí ve 4 ml scintilátoru Quickszint 361 (Zinsser Analytik GmbH, Frankfurt, SRN) a radioakti vita se změří kapalinově-scintilačním měřením v měřícím přístroji TriCarb 2500 (Canberra Packard GmbH, Frankfurt, SRN). Naměřené hodnoty se po kalibraci přístroje pomocí standardních vzorků a po korekci na případnou chemiluminiscenci získají jako rpm (rozpady za minutu).

Kontrolní hodnoty se stanoví jak v Na-T-P, tak i v

-u ,

K-T-P. Rozdíl mezi absorpcí v Na-T-P a K-T-P odpovídá Na -závislému podílu transportu. Jako hodnota IC^gNa se označuje taková koncentrace inhibitoru, která má za následek sníženi Na -závislého transportního podílu o 50 %, vztaženo na kontrolní hodnoty.

V následující tabulce jsou uvedeny naměřené hodnoty inhibice absorpce /^H/-taurocholátu ve vesi.kulách membrán s kartáčkovým lemem králičího kyčelníku. V tabulce jsou uvedeny podíly hodnot XC_5Q, popřípadě IC_50Na získané pro taurochenodespxy cholát (TCDC), který zde byl použit jako standardní inhibitor, : a pro jednotlivé testované sloučeniny podle vynálezu.

Sloučenina z příkladu	IC₅₀ (TCDC)	IC_50Na (TCDC)
IC₅₀ (sloučenina)	IC_50Na (sloučenina)
3	0,4	0,35
4	0,77	0,69
18	0,47	0,42
21	0,34	0,33
33	0,33	0,35
35	1,0	1,02
36	0,19	0,20
38	0,49	0,41
40	0,52	0,50
43	0,78	0,73

Vynález se dále týká použití sloučenin podle vynálezu pro výrobu léčiva. Za tímto účelem se sloučeniny obecného vzorce I rozpustí nebo suspendují ve farmakologicky přijatelných _{z z z} \ ' rozpouštědlech, jakými jsou jedno- nebo vicesytne alkoholy, jakc například ethanol nebo glycerol, v triacetinu, olejích, jakými jsou například slunečnicový olej, rybí tuk, etherech, například v diethylenglykoldimethyletheru, nebo také v polyetherech, například v polyethylenglykolu, nebo také v přítomnosti dalších farmakologicky přijatelných polymerních nosičů, například polyvinylpyrrolidonu, nebo dalších farmaceuticky přijatelných přísad, jakými jsou škroby, cyklodextrin nebo polysacharidy. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány v kombinaci s jinými léčivy.

Sloučeniny obecného vzorce I se podávají v různých dávkovačích formách, výhodně perorálně ve formě tablet, kapslí nebo kapalin. Denní dávka se v závislosti na tělesné hmotnosti a konstituci pacienta pohybuje v rozmezí od 3 mg do 5000 mg, výhodně však v rozmezí od 10 do 1000 mg.

V následujících příkladech jsou vždy uvedeny monoizotopní molekulové hmotnosti.

Pokud není výslovně uvedenou jinak, jsou hmotová spektra stanovena technikou ionizace rychlými atomy za přídavku chloridu lithného a 3-nitrobenzaldehydu (3-NBA).

Výchozí sloučeniny, které mají strukturu žlučových kyselin, jsou již v literatuře částečně popsané (EP-A-0 417 725,

EP-A-0 489 423 a EP-A-0 548 793).

R¹ je definován v příkladu 6.

V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí příkladů jeho konkrétního provedení, které mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen formulací patentových nároků.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

a

g (1,96 mmolu) methylesteru a se rozpustí v 15 ml tetrahydrofuranu nebo 1,4-dioxanu a získaný roztok se intenziv ně míchá přes noc při teplotě okolí s 10 ml 2N NaOH. Potom se reakční roztok zředí velkým objemem vody a okyselí za chlaze ní ledem polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Vysrážě ní se dokončí dodatečným jednohodinovým mícháním za chlazení ledem, načež se vyloučená sraženina odsaje a promyje studenou_;vodou. Po rekrystalizací z ethanolu a vody a vysušení za vakua se získá 940 mg (96 %) sloučeniny z příkladu 1.

^C29^H50°6 ^{( 494 )} ₊ hmotové spektrum: 501 (M+Li ).

Sloučeniny z následujících příkladů 2 až 7 se připraví z odpovídajících zbytků žlučových kyselin postupem, který je analogický s postupem podle příkladu 1.

Příklad č.	jako v příkladu 1,přičemž n =	Sumární vzorec	Molekulo\á hmotnost	Knotové spektrum (MS)
2	6	^30^H52^6	508	515 (M-t-Li ⁺ )
3	8	^32^56θ6	536	543 (M + Li ⁺ )
4	9	^33^Η53θ6	550	557 (M + Lr )
5	10	^34^60^6	564	571 (M + Li ⁺ )

Příklad 6

'^C28^H48°7 (⁴⁹⁶>

MS: 503 (M + Li⁺)

Příklad 7

MS: 547 (M + Li ⁺ )

C_3OH₅₂O₈ (540)

Příklad 8

2

100 mg (0,2 mmolu) methylesteru se rozpustí v 10 ml dip xanu a získaný roztok se potom intezivně míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě s polokoncentrovaným louhem sodným. Reakční roztok se zředí vodou, okyselí polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, načež se po odsátí a promytí získá kyselina z příkladu 8.

Výtěžek: 50 mg (51 %),

C₂₉H₄₇NO₅ (489) hmotové spektrum: 496 (M+Li ).

Příklad 9

C₂₉H₄₇NO₆ (505) MS: 512 (M + Li'

Příklad 10 h₂c

(CH₂)_n~R

NH ^C32^H53^NO6 ⁽⁵⁴⁷⁾ MS: 554 (M + Li'

Příklad 11 h₂c

(CH₂)_n-R

NH ^C33^H55N°₆ (561) MS: 568 (M + Li'

Příklad 12

^32^52^2^7 (576)

MS: 583 (M + Li

Příklad 13

HjC-0

NH-(CH₂)„-R' n ^C34^H59^NO7 (593) ^{MS: 600} (M + Ll·

Příklad 14

H₃C-0

Ν H - ( C Η ₂ ) _n - R ¹ n = 5

C₃₃H₅₇NO₇ (579) MS: 586 (M4-Li'

Příklad 15 h₃c-o

NH-(CH₂)-_n-R¹ n = 2 ^C30^H51^NO7 (537) ^{MS: 544} (^M+Li ⁺

4

Příklad 16 ho-(ch₃)„

K 3,14 g (6 mmolu) primárního alkoholu a (n = 6) ve 100 ml vysušeného dichlormethanu se přidá 0,84 ml triethylamínu a směs se ochladí na teplotu -10 °C. Při této teplotě se k roztoku přidá 0,4 ml (6 mmolu) kyseliny chlorsulfonové ve 20 ml bezvodého dichlormethanu. Po jedné hodině při teplotě 0 °C a jedné hodině při okolní teplotě se přidá voda, načež se organická fáze oddělí a vodná fáze se vícekrát extrahuje ethylacetátem. Sloučené organické fáze se vysuší a zahustí. Zbytek sé přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 3:1. Získá se 1,45 g (40 %) sloučeniny z příkladu 16.

^C31^H54°9^S (602) _{+ +} hmotové spektrum: 631 (M-H +Li + Na )

615 (M-H⁺ + 2Li⁺).

Příklad 17

Sloučenina z příkladu 16

NaO-S-O-(CH₂)₆-R

II o

0,5 g (0,83 mmolu) sloučeniny z příkladu 16 ve 20 ml dioxanu se míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě se 7 ml polokoncentrovaného louhu sodného. Potom se roztok okyselí za chlazení polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, načež se zahustí za vakua. Zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 3:1. Získá se 254 mg (52 %) sloučeniny z příkladu 17.

C₃₀H₅₁NaO_gS (610) hmotové spektrum: 617 (M+Li⁺)

601(M-Na⁺ + 2Li⁺).

Příklad 18

K roztoku 2,6 g (5,12 mmolu) sloučeniny z příkladu 2 ve 20 ml pyridinu se po kapkách přidá při teplotě 0 až 5 °C 15 ml chloridu difenylesteru kyseliny fosforečné a získaná směs se míchá po dobu dvou hodin při okolní teplotě. Směs se nalije na 200 ml ledové vody, načež se za míchání a chlazení přidá asi 15 ml koncentrované kyseliny sírové a směs se vícekrát extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se vysuší a zahustí a zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 1,78 g (47 %) sloučeniny z příkladu 18.

c₄₂h₆,o₉p (740) hmotové spektrum: 747 (M+Li ).

Příklad 19

HO-P-O-(CH₂)₆-R¹

OH g (1,35 mmolu) sloučeniny z příkladu 18 se hydrogenpje v 50 ml ledové kyseliny octové za použití malého množstvíl (na špičce špachtle) platiny na uhlí. Hydrogenace se provádí v třepané aparatuře. Po ukončení reakce (asi 4 hodiny) se hydrogenační katalyzátor odsaje a filtrát se zahustí. Zbytek se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené ethylacetátem a methanolem v objemovém poměru 2:1. Získá se 270 mg (34 %) sloučeniny z příkladu 19.

^C30^H53°9^{P (5θθ)}hmotové spektrum: 601

595 (M-H⁺ + 2LÍ⁺) (M+Li⁺).

Příklad 20

draselného se suspenduje v 60 ml vody a získaná suspenze se zahřeje k varu. Získá se roztok, ze kterého se po krátké době vyloučí pevná látka. Směs se míchá po dobu 30 minut na teplotu varu, načež se k ní po ochlazení přidá asi 40 ml vody a rezultující směs se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou Směs se potom vícekrát extrahuje ethylacetátem a organická fáze se vysuší, zahustí za vakua a získaný zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 520 g (23 %) sloučeniny z příkladu 20.

^C32^H56^N2°6 ₊ hmotové spektrum: 571 (M+Li ).

Příklad 21

450 mg (0,8 mmolu) sloučeniny z příkladu 20 v 10 ml dio xanu se míchá s 5 ml polokoncentrovaného louhu sodného po dobu šesti hodin při okolní teplotě. Po ukončení reakce se směs zře dí vodou, okyselí kyselinou chlorovodíkovou a míchá ještě po dobu jedné hodiny na ledu. Pevný podíl se odsaje a promyje. vodou, načež se po vysušení za vakua získá 430 mg (97 %) sloučeniny z příkladu 21.

^C31^H54^N2°6 ⁽⁵⁵⁰⁾hmotové spektrum:

557 (M+Li⁺).

Příklad 22

C.;·

8

K 1,04 g (2 mmoly) aminu b (příklad 20) v 50 ml bezvodého dichlormethanu a 28 ml triethylaminu se při teplotě 0 °Č přidají 2 mmoly fenylisokyanátu v 5 ml dichlormethanu. Získaná směs se míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě, načež se pó okyselení vodné fáze zpracuje postupem popsaným v příkladu 16. Po chromatografií zbytku na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemo vém poměru 10:1 se získá 6540 mg (51 %) sloučeniny z příkladg 22.

^C38^H60^N2°6 ⁽⁶⁴⁰⁾ hmotové spektrum: 647 (M+Li ).

Příklad 23 o

NH Yh-(CH₂)₆-R

C₃₇H₅₃N₂O₆ (626)

MS: 633 (M + Li

Příklad 24

2,08 g (4 mmoly) aminu b, 10 ml triisobutylaminu a 5 ml jodmethanu se zahřívá k varu s 50 ml acetonu po dobu 2 hodin. Všechny těkavé složky se potom odeženou za vakua a zbytek se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluč ní soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 1,2 g (43 %) sloučeniny z příkladu 24.

^C34^H62™°5 ^(S9,) hmotové spektrum (ionizace rychlými atomy,3-NBA): 564 (M-J ).

Příklad 25 (H₃C)₃N®-(CH₂)₆-R¹

Cl®

Sloučenina z příkladu 25 se připraví ze sloučeniny z příkladu 24 postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21. Čištění surového produktu se provádí středotlakou chromatografií na silikagelu RP-8 za použití eluční soustavy tvořené směsí methanolu a vody v objemovém poměru 7:3.

C_o„H,_nClN0_c (585)

JJ DU 0 _ hmotové spektrum (ionizace rychlými atomy,3-NBA): 550 (M-Cl )

Příklad 26

1,04 g (2 mmoly) aminu b a 276 mg (2 mmoly) pyrazolu c se zahřívá ve 40 ml bezvodého acetonitrilu na teplotu varu po dobu 10 hodin. Po ochlazení a přidání etheru se vyloučí sraze nina, která se odsaje a promyje bezvodým etherem. Po vysušeni se získá 450 g sloučeniny z příkladu 26.

^C32^H58^BrN3°5 ⁽⁶⁴³> hmotové spektrum: 570

564 (M-HBr + Li⁺) (M-Br).

Příklad 27

Sloučenina z příkladu 27 se připraví postupem, který je analo

gický s postupem popsaným v příkladu 21.

C₃i^h56C1_N3°₅ (585) hmotové spektrum: 556 (M-HCl-Li )

550 (M~C1^_).

Příklad 28

N-(CH₂)

1,0 g (1,9 mmolu) aminu b, 265 mg NaBH^CN a 610 mg hepta nalu se míchá v 10 ml bezvodého methanolu po dobu 48 hodin při okolní teplotě. Reakční směs se zahustí za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a nasycený roztok hydrogenuhličitanu, načež se zbytek po zahuštění organické fáze chromatografuje. Vedle malého množství monoheptylaminoderivátu se získá 650 mg (49 %) sloučeniny z příkladu 28.

C₄₅H₈₃NO₅ (718) hmotové spektrum: 725 (M+Li ).

Příklad 29 n-C^H_l5

N-(CH₂)₆-R’

X n - C 7 Η , ₅ xHC I (

Sloučenina z příkladu 29 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21. Vodná fáze se po okyselení dekantuje od olejovitého surového produktu, načež se zbytek rozmíchá v ethylacetátu, odsaje a vysuší.

^C44^H82^C1NO5 ⁽⁷⁴⁰⁾ hmotové spektrum. 711 (M-HCl+Li )

705 (M-C1~).

Příklad 30

Sloučenina z příkladu 30 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 28 a 29. Tato sloučenina se získá redukční aminací anthracen-9-karbaldehydú působením methylesteru kyseliny 3alfa-(aminoethyl)-7alfa,12alfa dihydroxy-24-cholanové (d) a následným alkalickým zmýdelněním.

C_4]H₅₅NO₄ (625) hmotové spektrum: 632 (M+Li ).

Příklad 31

Sloučenina z příkladu 31 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 30, za použití cyklododekanolu ve funkci karbonylační složky.

^C38^H87^KO4 ⁽⁶⁰²⁾ hmotové spektrum: 609 (M+Li ).

Příklad 32

K 0,9 g (2 mmoly) aminu d a 0,6 ml triethylaminu ve 20 ml bezvodého methylenchloridu se za chlazení ledem přidá 0,38 g (2 mmoly) naftoylchloridu v 5 ml methylenchloridu. Získaná směs se míchá ještě po dobu jedné hodiny pří teplotě 0 °C, načež se ponechá přes noc stát v klidu. Přidá se voda, směs se okyselí a vícekrát extrahuje methylenchloridem. Zbytek po zahuštění organické fáze se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a cyklohexanu v objemovém poměru 3:1. Získá se 1 g (83 %) sloučeniny z příkladu 32.

^C38^H53^NO5 (603 hmotové spektrum: 610 (M+Li )

Příklad 33

H

Sloučenina z příklad 33 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

^C37^E5,^NO5 ⁽⁵⁸⁹⁾ hmotové spektrum: 596 (M+Li ).

Příklad 34

II

C-NH-CH.-CH

c..··

Sloučenina z příkladu 34 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 32 a 33 za použití chloridu kyseliny anthracen-9-karboxylové.

C₄₁H₅₃NO₅ (639) hmotové spektrum: 646 (M+Li⁺).

Příklad 35

H_}C

Sloučenina z příkladu 35 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 34, za použití chloridu kyseliny p-toluensulfonové a aminu b.

C₃₇H₅₉NO_?S (661) hmotové spektrum: 668 (M+Li⁺).

Příklad 36

Sloučenina z příkladu 36 se připraví postupem, který je analogický s postupem, připraveným v příkladu 35. Methylester získaný jako meziprodukt se po deprotonaci hydridem sodným methyluje v dimethylformamidu při okolní teplotě působením jodmethanu. Potom se analogicky jako v příkladu 35 provede alkalické zmý26 delnění.

^C38^H61^NO7^{S (675)} hmotové spektrum: 688 (M-H⁺ + 2Li⁺).

Příklad 37 'N H- ( CH₂ ) ₅-R COOH

Sloučenina z příkladu 37 se získá postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 34,za použití anhydridu kyseliny o-ftalové a aminu b.

C₃₈H₅₇N°8 (655) ₊ hmotové spektrum: 668 (M-H + 2Li )

662 (M + Li⁺).

Příklad 38

CH₂)₆

Sloučenina z příkladu 38 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 32 a 33, za použití ; aminu b.

^C41^H59^NO6 ^(66,) , + hmotové spektrum: 668 (M+Li ).

Příklad 39

426 mg (1 mmol) urethanu a 782 mg (15 mmolu) aminu b se zahřívá v 50 ml dioxanu na teplotu varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Reakční směs se potom zahustí a zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 540 g (59 %) sloučeniny z příkladu

39.

^C48^H70^ClN3°10^{S (915)} hmotové spektrum: 922 (M+L ).

Příklad 40

Sloučenina z příkladu 40 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

^C47^H68^ClN3°10^{S (90,)} hmotové spektrum (elektr.nástřik): 902 (M+H ).

Příklad 41

K roztoku 1,56 g (3 mmoly) aminu b, 576 mg (3 mmoly) kyseliny chinové a 490 mg (83,6 mmolu) hydroxybenzotriazolu vé 100 ml tetrahydrofuranu se přidá 750 mg (3,6 mmolu) dicyklohexyl karbodiimidu. Směs se potom míchá po dobu 40 hodin při okolní teplotě, načež se vytvořená močovina odfiltruje, filtrát se zahustí a zbytek se vyjme ethylacetátem. Získaný roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2N kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Zbytek po odpaření organické fáze se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsi ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 5:1. Získá se 1,2 g (58 %) sloučeniny z příkladu 41.

^C38^H65^NO,0 ⁽⁶⁹⁵⁾ ' ₊ hmotové spektrum: 70 2 (M+Li ) .

Příklad 42

Sloučenina z příkladu 42 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

^C37^H63^NO10 (^6θ1) ₊ hmotové spektrum (ionizace rychlými atomy,3-NBA): 682(M+H ).

Příklad 43 % _/N H - ( C H₂ ) j-R ¹c i

H—C—-OH I

HO —C—H I

H —C—OH I

H—C—OH I

CH₂0H

Sloučenina z příkladu 43 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 41 a 42, za použití kyseliny glukonové.

^C36^H63^NO11 ⁽⁶⁸⁵⁾ hmotové spektrum: 714 (M-H + Li + Na ).

Příklad 44

1,04 g (4 mmoly) chloridu kyseliny e, 2,1 g (4 mmoly) aminu h a malé množství (na špičku špachtle) 4-dimethylaminopyridinu se míchá ve 40 ml bezvodého pyridinu po dobu 6 hodin při okolní teplotě. Po stání přes noc při okolní teplotě se směs zahus tí za vakua. Po chromatografickém přečištění na silikagelu se izoluje sloučenina z příkladu 44. Při uvedené chromatografií se jako eluční soustava použije směs methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20:1.

^C43^H69^NO9 ^{743) hmotové spektrum: 750 (M+Li

Příklad 45

COOH

Sloučenina z přikladu 45 se gický s postupem popsaným v ^C42^H67^NO9 ⁽⁷²⁹⁾ hmotové spektrum: 742 (M-H 736 (M+Li připraví postupem, který je analopříkladu 21.

V + 2Li⁺)

Příklad 46

K 1,3 g (5 mmolú) chloridu kyseliny e a 0,8 ml triethylaminu v 50 ml bezvodého methylenchloridu se za chlazení ledem přidá 2,6 g (5 mmolu) aminu b v methylenchloridu, načež se tato směs míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C. Potom se přidá přebytek methanolu, teplota směsi se ponechá vystoupit na okolní teplotu, přidá se voda a směs se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáze se vícekrát vytřepe do methylenchloridu. Po chromatografickém přečištění zbytku po zahuštění organické fáze na silikagelu za použití chromatografické soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá sloučenina z příkladu 46.

^C44^H73^NO,0 ⁽⁷⁷⁵⁾ hmotové spektrum: 783 (M+Li ).

Příklad 47

Sloučenina z příkladu 47 se gický s postupem popsaným v připraví postupem, který je analopříkladu 21.

^C42^H69^NO10 ⁽⁷⁴⁷⁾hmotové spektrum

760 (M-H⁺ + 2Li⁺) 754 (M + Li ⁺ ).

Příklad 48

CH,)

3,14 g (6 mmolu) alkoholu a (n = 6) se společně se 3 ml ethyldiisopropylaminu a 1,5 g difenylmethylbromidu zahřívá v 50 ml dimethylformamidu po dobu 8 hodin na teplotu 100 °C.

Po vodném zpracování a chromatografickém přečištění na silikage lu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá sloučenina z příkladu 48.

^C44^H64°6 ^(θθθ) hmotové spektrum: 695 (M+Li ) .

Příklad 49

o-(ch₂)₆-r

Sloučenina z příkladu 49 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

^C43^H62°6 ^(S74) hmotové spektrum: 681 (M+Li ).

Postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 1, se z odpovídajících esterů žlučových kyselin připraví alkalickým zmýdelněním esterů následující sloučeniny 50 až 52.

Příklad 50

^28^46^5

(478)

MS: 485 (M + Li ⁺ )

Příklad 51

C₂₈H_4SO₅ (462) MS: 469 (M + Li ⁺ )

Příklad 52

C₃o^H53^N°4 t⁴⁹¹) ^{MS: 498} <^{M+H + )}

Příklad 53

NH-(CH₂)₅-CH₃

Sloučenina z příkladu 53 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 41, ze sloučeniny z pří kladu 44 a n-hexylaminu, přičemž reakční doba v tomtp případě činí 25 hodin.

^C49^H82^N2°8 ₊ hmotové spektrum: 834 (M+Li ).

Příklad 54

170 mg sloučeniny z příkladu 53 se rozpustí v 5 ml dioxanu, načež se k získanému roztoku přidá 1,5 ml polokoncentro váného louhu sodného a 25 ml vody a směs se míchá po dobu 12 hodin při okolní teplotě. Suspendovaný podíl se odfiltruje a filtrát se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Směs se potom ještě míchá po dobu jedné hodiny, načež se vyloučená sraženina odsaje. Po vysušení se získá 154 mg sloučeniny z příkladu 54.

^C48^H82^N2°9 ⁽⁸³¹⁾ ₊ hmotové spektrum: 838 (M+Li ).

Příklad 55

i

Sloučenina z příkladu 55 se získá postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 53 a 54, z fluoresceinu a aminu b, ^C50^H63^NO9 ^<82,) hmotové spektrum: 828 (M+Li ).

Příklad 56

C H j

Sloučenina z příkladu 56 se získá postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z kyseliny pivalové a aminu b.

^C35^H61^NO6 ⁽⁵⁹¹⁾ hmotové spektrum: 598 (M+Li ).

Příklad 57

Sloučenina z příkladu 57 se získá postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z kyseliny 2-ethylhexanové a aminu b.

(633)

67 6 ₊ hmotové spektrum: 640 (M+Li ).

Příklad 58

nh-(ch₂)₆-r’

Sloučenina z příkladu 58 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z kyseliny klofibrinové a aminu b.

^C40^H62^C1NO7 ⁽⁷⁰³⁾ hmotové spektrum: 710 (+Li )

Příklad 59

Sloučenina z příkladu 59 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z gemfibrocilu a aminu b.

C45H73NO7 (740) ₊ .

hmotové spektrum: 747 (M+Li ).

(7

Příklad 60

Sloučenina z příkladu 60 se připraví z 522 mg aminu b a 94,1 mg kyseliny di-n-propylmalonové v tetrahydrofuranu v přítomnosti systému DCC/HOBT. Izolace produktu se provede po 54 hodinách. Výtěžek činí 69 %.

^C40^HS9^NO8 ⁽⁶⁹⁰⁾ hmotové spektrum: 697 (M+Li ).

Příklad 61

250 mg sloučeniny z příkladu 60 se zmýdelní v dioxanu působením 2N hydroxidu sodného. Po vodném zpracování a přečištění sloupcovou chromatografií za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá 160 mg sloučeniny z příkladu 61.

Claims

1. Monomerní deriváty žlučových kyselin obecného vzorce I

Z -X-GS (I) ve kterem

GS znamená zbytek žlučové kyseliny s kyselou funkcí v bočním řetězci nebo její súl,

X znamená kovalentní vazbu nebo můstkovou skupinu vzorce (CH~) , kde n znamená 1 až 10, přičemž alkylenový řetě2 n zec může obsahovat 1 až 3 kyslíkové atomy nebo NH- nebo

NHC-skuoinv a GS je vázán libovolně přes X, a II ' ^xO

Z znamená HO-, CH^-O-, skupinu HO-CH₂-CH=CH-CH₂-, skupinu (CgH₅)2^-CH-O-, skupinu

O O

II . II (alkalický kov)-0-S-0-, skupinu HO-P-O-,

OH

O

JI skuoinu (ιΗ,-C,-) O-P-O-, o o i skupinu CH₂=CH— C-NH-, o(c₆h₅)

NH

II skupinu H-N-C-NH-, skupinu HN-C-NH-, skupinu H-N-C-NK-, “Z 1 Z v W w Z skupinu -N(R)₂ nebo skupinu -N (R)^, pricemz R vždy znamena alkylovou skupinu obsahující 1 až 7 uhlíkových atomů, nebo skupinu H₂~N-(CH₂)θ-, (C-j-C-io) -Alkyl-C-NH, přičemž substituován skupinou COOH, alkylový zbytek je případně nebo skupinu

C h₃ ll

C-NH-,

COOH o

c-nh-ch₂-ch₂~\Q

I 1 o

v^nhI ( H - C 0 Η ) ₄ , i

CH₂OH nebo přičemž A vždy znamená skupinu OH nebo NH-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 10 uhlíkových atomů.

2. Deriváty žlučových kyselin obecného vzorce I podle nároku 1 , ve kterých zbytek GS je v poloze 3 vázán s X, přičemž toto navázání je provedeno v konfiguraci alfa nebo beta.

3. Léčivo, vyznačené tím, že obsahuje derivát kyseliny žlučové . podle nároku 1,.

4 .

Hypolipidemikum, vyznačené tím, že obsahuje «ti te derivát kyseliny žlučové podle nároku 1.

5. Použití derivátu kyseliny žlučové podle nároků 1 jako léčiva.