CZ289209B6

CZ289209B6 - Monomerní deriváty ľlučových kyselin a léčivo tyto deriváty obsahující

Info

Publication number: CZ289209B6
Application number: CZ19941137A
Authority: CZ
Inventors: Alfons Dr. Enhsen; Werner Dr. Dr. Kramer; Günther Dr. Wess; Heiner Dr. Glombik
Original assignee: Hoechst Aktiengesellschaft
Priority date: 1993-05-08
Filing date: 1994-05-06
Publication date: 2001-12-12
Also published as: EP0624594A3; IL109580A; EP0624594A2; DK0624594T3; NZ260471A; FI942077A7; ES2136677T3; CZ113794A3; HUT67574A; CA2123052C; EP0624594B1; KR100333151B1; AU6194994A; TW289021B; CA2123052A1; JP3424978B2; US5610151A; FI942077A0; JPH072891A; IL109580A0

Abstract

Monomern deriv ty lu ov²ch kyselin obecn ho vzorce I, ve kter m R znamen atom vod ku, methylovou skupinu nebo anion farmaceuticky p°ijateln soli, X znamen skupinu -(CH.sub.2.n.).sub.n.n.-, kde n znamen 1 a 10, p°i em tento alkylenov² °et zec m e zahrnovat 1 a 3 kysl kov atomy, 1 a 3 skupiny -NH- nebo 1 a 3 skupiny -NHC(=O)-, a Z znamen specificky vymezen skupiny. Je rovn pops no i l ivo, zejm na hypolipidemikum, obsahuj c jako · innou l tku uveden monomern deriv ty lu ov²ch kyselin.\

Description

Monomerní deriváty žlučových kyselin a léčivo tyto deriváty obsahující

Oblast techniky

Vynález se týká monomemích derivátů žlučových kyselin a léčiv, které tyto deriváty obsahují jako účinnou látku.

Dosavadní stav techniky

Žlučové kyseliny jsou syntetizovány v játrech v několika enzymatických stupních. Takto syntetizované žlučové kyseliny se potom shromažďují ve žlučníku, odkud jsou vylučovány do tenkého střeva. Zde tyto kyseliny plní v průběhu trávícího procesu důležité fyziologické funkce, přičemž zde například vystupují jako kofaktory nebo pankreatické lipázy a jako přirozené detergenty při resorpci tuků a vitamínů rozpustných v tucích. Aktivními a pasivními transportními procesy dospěje největší část žlučových kyselin z tenkého střeva vrátnicí zpět do jater.

Polymery vázající žlučové kyseliny jsou již dlouhou dobu používány jako léčiva. Tyto polymery se používají při léčení nemocí, u kterých je žádoucí inhibice zpětné resorpce kyseliny žlučové. Tak může být při zvýšené hladině cholesterolu v krvi v důsledku redukce žlučových kyselin nacházejících se v enterohepatickém krevním oběhu indukována v játrech zvýšená produkce žlučových kyselin z cholesterolu. To vede ke zvýšené spotřebě LDL-cholesterolu v krvi v játrech a k urychlenému LDL-katabolismu. Docílený účinek spočívá ve snížení aterogenního cholesterolu v krvi.

Polymery, které se k tomuto účelu používají jako léčiva, například Cholestyramin nebo Colestipol, však musí být podávány ve velkých denních dávkách pohybujících se od 12 do 30 g. Přijatelnost těchto polymerů pro pacienta a lékaře kromě uvedeného vysokého dávkování zhoršují také chuť a nepříjemná vůně těchto polymerů.

Uvedené polymery mají vzhledem kjejich velmi malé selektivitě vedlejší účinky. Ve vysoké míře se slučují i s vitamíny a současně podávanými léčivy a navíc mění kvalitativní složení žlučových kyselin ve žluči. Tyto vlastnosti se potom projevují v různých gastrointestinálních poruchách (například zácpa, steatorrhoea), avitaminóze a zvýšeném riziku tvorby žlučových kamenů (cholelitiáza).

Některé deriváty žlučových kyselin jsou popsané v patentovém dokumentu EP 0 489423.

Nyní byly s překvapením nalezeny deriváty kyseliny žlučové, které nemají výše uvedené nedostatky.

Podstata vynálezu

Vynález se týká monomemích derivátů žlučových kyselin obecného vzorce I

(i),

-1 CZ 289209 B6 ve kterém

R znamená methylovou skupinu, atom vodíku nebo anion farmaceuticky přijatelné soli,

X znamená skupinu -(CH₂)_n- kde n znamená 1 až 10, přičemž tento alkylenový řetězec může zahrnovat 1 až 3 kyslíkové atomy, 1 až 3 skupiny -NH- nebo 1 až 3 skupiny -NHC(=O)-, a

Z znamená HO-, CH₃-O-, skupinu HO-CH2-CH=CH-CH2-, skupinu (CeHsjr-CH-O-, skupinu

OO

1111 (alkalický kov)-O-S-O-, skupinu HO-P-O-,

III

OOH oo

IIII skupinu (H₅C₆)O-P-O-, skupinu CH2=CH-C-NH-,

I

O(C₆H₅)

O O NH

II II II skupinu H₂N-C-NH-, skupinu HN-C-NH-, skupinu H₂N-C-NHI c₆h₅ skupinu -N(R)₂ nebo skupinu -N⁺(R)₃, přičemž R vždy znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 7 uhlíkových atomů, nebo skupinu H₂-N-(CH₂)₆-,

O

II (Ci-Cio)-alkyl-C-NH, přičemž alkylový zbytek je případně substituován skupinou COOH, nebo skupinu

-2CZ 289209 B6

nebo

-3CZ 289209 B6 přičemž A vždy znamená skupinu OH nebo NH-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 10 uhlíkových atomů.

Vynález se rovněž týká léčiva, jehož podstata spočívá vtom, že obsahuje výše uvedený monomemí derivát žlučové kyseliny obecného vzorce I.

Vynález se konečně týká hypolipidemika, jehož podstata spočívá vtom, že obsahuje výše uvedený monomemí derivát žlučové kyseliny obecného vzorce I.

Alkylové zbytky jsou přímé nebo rozvětvené.

Sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce I mají vysokou afinitu ke specifickému transportnímu systému žlučových kyselin v tenkém střevu a koncentračně-závisle a kompetitivně inhibují zpětnou resorpci žlučových kyselin.

Kompetitivní inhibici může být do enterohepatického oběhu zasaženo podstatně selektivněji. Nedochází k avitaminóze ani ke kvalitativní změně složení žlučových kyselin ve žluči. Pomocí sloučenin podle vynálezu může být dosaženo cíleného snížení hladiny cholesterolu v krevním séru, aniž by přitom docházelo ke známým vedlejším účinkům. Vzhledem k vysoké afinitě sloučenin podle vynálezu k transportnímu systému žlučových kyselin je možné tyto sloučeniny podávat v mnohem menších denních dávkách, než jaké se používají v případě podání komerčně dostupných polymerů. To má za následek, že sloučeniny podle vynálezu jsou jak pro pacienta, tak i pro lékaře mnohem více akceptovatelné.

Uvedené sloučeniny podle vynálezu mají tedy cenné farmakologické vlastnosti a mohou být proto použity zejména jako hypolipidemika.

Ověření biologických účinků sloučenin podle vynálezu se provádí stanovením inhibice absorpce /³H/-taurocholátu v buněčné membráně s kartáčkovým lemem králičího kyčelníku. Inhibiční test se provádí následujícím způsobem:

1. Příprava buněčné membrány s kartáčkovým lemem z králičího kyčelníku

Příprava buněčné membrány s kartáčkovým lemem z buněk tenkého střeva se provádí tzv. Mg²⁺precipitační metodou. Králičí samečkové (Neuseeland, tělesná hmotnost 2 až 2,5 kg) se usmrtí intravenózní injekcí 0,5 ml vodného roztoku 2,5 mg Tetracain-HCl, 100T61* a 25 mg Mebezoniumjodidu. Vyjme se tenké střevo, načež se promyje ledově chladným fyziologickým roztokem. K přípravě buněčné membrány s kartáčkovým lemem se použije koncových sedm desetin tenkého střeva (měřeno v orálně-rektálním směru, tzn. koncový kyčelník, který obsahuje Na⁺-závislý transportní systém žlučových kyselin). Vyjmutá střeva se v sáčcích z umělé hmoty zmrazí pod atmosférou dusíku na teplotu -80 °C. Za účelem přípravy membránových vesikul se zmražená střeva nechají roztát ve vodní lázni o teplotě 30 °C. Seškrábe se sliznice a takto oddělená sliznice se suspenduje v 60 ml ledově chladného 12 mM Tris-HCl-pufru (pH 7,1), obsahujícího 300 mM manitu, 5 mM EGTA, 10mg/l fenylmethylsulfonylfluoridu, 1 mg/1 trypsinového inhibitoru ze sójových bobů (32 U/mg), 0,5 mg/1 trypsinového inhibitoru z hovězích plic (193 U/mg) a 5 mg/1 Bacitracinu. Po zředění ledově chladnou destilovanou vodou na objem 300 ml se směs homogenizuje za chlazení ledem v zařízení Ultraturrax (18-Stab, IKA Werk Stuafen, SRN) po dobu 3 minut při 75 % z maximálního výkonu zařízení. Po přidání 3 ml 1M roztoku chloridu hořečnatého (finální koncentrace 10 mM) se homogenizovaná směs ponechá stát při teplotě 0 °C přesně po dobu jedné minuty. Přídavek iontů Mg ⁺ má za následek agregaci a precipitaci buněčných membrán s výjimkou buněčných membrán s kartáčkovým lemem. Po 15 minutovém odstřeďování při 3000 x g (5000 otáček za minutu, rotor SS-34) se usazená peleta zavede do odpadu a supematant, který obsahuje buněčné membrány s kartáčkovým lemem, se odstřeďuje po dobu 30 minut při 267 000 x g (15 000 otáček za minutu, rotor SS-34). Supematant se odstraní a usazená peleta se opětovně homogenizuje vPotter

-4CZ 289209 B6

Elvejhemově homogenizátoru (Braun, Melsungen, 900 otáček za minutu, 10 zdvihů) v 60 ml 12 mM Tris-HCI-pufru (pH 7,1) obsahujícího 60 mM manitu a 5 mM EGTA. Po přidání 0,1 ml 1M roztoku chloridu hořečnatého a 15 minutové inkubační době při teplotě 0 °C se směs znovu odstřeďuje při 3000 x g. Supematant se potom ještě odstřeďuje po dobu 30 minut při 46000 x g (15000 otáček za minutu, rotor SS-34). Usazená peleta se vyjme 30 ml 10 mM Tris/Hepes-pufru (pH 7,4) obsahujícího 300 mM manitu a resuspenduje 20 zdvihy v Potter Elvejhemově homogenizátoru při 1000 otáčkách za minutu. Po 30 minutovém odstřeďování při 48 000xg (20 000 otáček za minutu, rotor SS-34) se usazená peleta vyjme 0,5 až 2 ml Tris/Hepes-pufru (pH 7,4) obsahujícího 280 mM manitu (finální koncentrace 20 mg/ml) a resuspenduje pomocí tuberkulínové stříkačky sjehlou kalibru 27. Získané vesikuly membrán s kartáčkovým lemem se buď bezprostředně po jejich získání použijí k inhibičnímu testu, anebo se přechovávají při teplotě -196 °C pod kapalným dusíkem ve 4mg porcích.

2. Inhibice na Na⁺-závislé absorpce /³H/-taurocholátu ve vesikulách membrány s kartáčkovým lemem kyčelníku

Absorpce substrátů ve výše popsaných vesikulách membrán s kartáčkovým lemem se stanoví tzv. membránofiltrační technikou. 10 μΐ vesikulámí suspenze (100 pg proteinu) se odpipetuje ve formě kapky na stěnu polystyrénové inkubační trubičky (11 x 70 mm), která obsahuje inkubační prostředí (90 μΐ) s odpovídajícími ligandy. Toto inkubační prostředí obsahuje 0,75 μΐ (=0,75 pCi /³H(G)/-taurocholátu (specifická aktivita 2,1 Ci/mMol), 0,5 μΐ lOmM taurocholátu, 8,75 μΐ Natrium-transport-pufru (10 mM Tris/Hepes (pH 7,4), 100 mM manitu, 100 mM NaCl) (Na-TP), popřípadě 8,75 μΐ Kalium-transport-pufru (10 mM Tris/Hepes (pH 7,4), lOOmM manitu, 100 mM KC1) (K-T-P) a 80 μ příslušného inhibičního roztoku, ve kterém je inhibitor rozpuštěn podle charakteru experimentu v Na-T-pufru, popřípadě K-T-pufru. Toto inkubační prostředí se zfiltruje přes polyvinylidenfluoridový membránový filtr (SYHV LO 4NS, 0,45 pm, 4 mm 0, Millipore, Eschbom, SRN). Smíšením vesikul s inkubačním prostředím je zahájeno měření transportu. Koncentrace taurocholátu na počátku inkubace činí 50 μΜ. Po uplynutí požadované inkubační doby (obvykle 1 minuta) se transport zastaví přidáním 1 ml ledově chladného přerušovacího roztoku (10 mM Tris/Hepes (pH 7,4), 150 mM KC1). Vzniklá směs se rychle odsaje za vakua 2,5 až 3,5 kPa přes membránový filtr z nitrátu celulózy (ME 25, 0,45 pm, 25 mm průměr, Schleicher u. Schuell, Dassell, SRN). Filtr se potom promyje 5 ml ledově chladného přerušovacího roztoku.

Za účelem změření absorpce radioaktivně značeného taurocholátu se membránový filtr rozpustí ve 4 ml scintilátoru Quickszint 361 (Zinsser Analytik GmbH, Frankfurt, SRN) a radioaktivita se změří kapalinově-scintilačním měřením v měřicím přístroji TriCarb 2500 (Canberra Packard GmbH, Frankfurt, SRN). Naměřené hodnoty se po kalibraci přístroje pomocí standardních vzorků a po korekci na případnou chemiluminiscenci získají jako rpm (rozpady za minutu).

Kontrolní hodnoty se stanoví jak v Na-T-P, tak i v K-T-P. Rozdíl mezi absorpcí v Na-T-P a KT-P odpovídá Na⁺-závislému podílu transportu. Jako hodnota ICsoNa⁺ se označuje taková koncentrace inhibitoru, která má za následek snížení Na⁺-závislosti transportního podílu o 50 %, vztaženo na kontrolní hodnoty.

V následující tabulce jsou uvedeny naměřené hodnoty inhibice absorpce /³H/-taurocholátu ve vesikulách membrán s kartáčkovým lemem králičího kyčelníku. V tabulce jsou uvedeny podíly hodnot IC₅₀, popřípadě IC₅o_Na získané pro taurochenodesoxycholát (TCDC), který zde byl použit jako standardní inhibitor, a pro jednotlivé testované sloučeniny podle vynálezu.

-5CZ 289209 B6

Sloučenina z příkladu	IC₅₀ (TCDC)	ICíONa (TCDC)
IC50 (sloučenina)	ICsoNa (sloučenina)
3	0,4	0,35
4	0,77	0,69
18	0,47	0,42
21	0,34	0,33
33	0,33	0,35
35	1,0	1,02
36	0,19	0,20
38	0,49	0,41
40	0,52	0,50
43	0,78	0,73

Vynález se dále týká použití sloučenin podle vynálezu pro výrobu léčiva. Za tímto účelem se sloučeniny obecného vzorce I rozpustí nebo suspendují ve farmakologicky přijatelných rozpouštědlech, jakými jsou jedno- nebo vícesytné alkoholy, jako například ethanol nebo glycerol, vtriacetinu, olejích, jakými jsou například slunečnicový olej, rybí tuk, etherech, například v diethylenglykoldimethyletheru, nebo také v polyetherech, například v polyethylenglykolu, nebo také v přítomnosti dalších farmakologicky přijatelných polymemích nosičů, například polyvinylopyrrolidonu, nebo dalších farmaceuticky přijatelných přísad, jakými jsou škroby, cyklodextrin nebo polysacharidy. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také podávány v kombinaci s jinými léčivy.

Sloučeniny obecného vzorce I se podávají v různých dávkovačích formách, výhodně perorálně ve formě tablet, kapslí nebo kapalin. Denní dávka se v závislosti na tělesné hmotnosti a konstituci pacienta pohybuje v rozmezí od 3 mg do 5000 mg, výhodně však v rozmezí od 10 do 1000 mg.

V následujících příkladech jsou vždy uvedeny monoizotopní molekulové hmotnosti.

Pokud není výslovně uvedeno jinak, jsou hmotová spektra stanovena technikou ionizace rychlými atomy za přídavku chloridu lithného a 3-nitrobenzaldehydu (3-NBA).

Výchozí sloučeniny, které mají strukturu žlučových kyselin, jsou již v literatuře částečně popsané (EP-A-0 417 725, EP-A-0 489 423 a EP-A-0 548 793).

R¹ je definován v příkladu 6.

V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí příkladů jeho konkrétního provedení, které mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen formulací patentových nároků.

-6CZ 289209 B6

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

o n · 5 g (1,96 mmol) methylesteru a se rozpustí v 15 ml tetrahydrofuranu nebo 1,4-dioxanu a získaný roztok se intenzivně míchá přes noc při teplotě okolí s 10 ml 2N NaOH. Potom se reakční roztok zředí velkým objemem vody a okyselí za chlazení ledem polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Vysrážení se dokončí dodatečným jednohodinovým mícháním za chlazení ledem, načež se vyloučená sraženina odsaje a promyje studenou vodou. Po rekrystalizaci z ethanolu a vody a vysušení za vakua se získá 940 mg (96 %) sloučeniny z příkladu 1.

C₂₉H_J0O₆ (494) hmotové spektrum: 501 (M+Li⁺).

Sloučeniny z následujících příkladů 2 až 7 se připraví z odpovídajících zbytků žlučových kyselin postupem, který je analogický s postupem podle příkladu 1.

Příklad č.	jako v příkladu 1, přičemž n =	Sumární vzorec	Molekulová hmotnost	Hmotové spektrum (MS)
2	6	C3oH₅₂Oé	508	515(M + Li⁺)
3	8	C32H56O6	536	543(M + Li⁺)
4	9	CjsHjgOfi	550	557(M + Li⁺)
5	10	C34H60O6	564	571 (M + Li⁺)

Příklad 6

C₂₈H4₈O₇ (496)

MS: 503 (M+Li⁺)

-7CZ 289209 B6

Příklad 7

Příklad 8

100 mg (0,2 mmol) methylesteru se rozpustí v 10 ml dioxanu a získaný roztok se potom intenzivně míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě s polokoncentrovaným louhem sodným. Reakční roztok se zředí vodou, okyselí polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, načež se po odsátí a promytí získá kyselina z příkladu 8.

Výtěžek: 50 mg (51%),

C₂₉H4₇NO₅ (489) hmotové spektrum: 496 (M+Li⁺).

Příklad 9

C₂₉H4₇NOj (505) MS: 512 (M + Li*)

Příklad 10

H₂C. 8 /(CHJ^R¹ ^XNH

C₃₂H₅₃NO6 (547) MS: 554 (M + Li*)

-8CZ 289209 B6

Příklad 11

C₃₃H₃₃NO₆ (561)

MS: 568 (M + Li⁺)

Příklad 12
0	0	R¹
^H2^C II

C₃₂H₃₂N₂O₇ (576)	MS: 583 (M + Li⁺)

Příklad 13

HjC-0

NH-(CH₂)„-R'

C₃₄H₃₉NO7 (593)

MS: 600 (M + Li⁺)

Příklad 14

C₃₃H₅₇NO₇ (579)

MS: 586 (M + Li⁺)

Příklad 15

nh-(ch₂)„-r

C₃₀H₃₁NO₇ (537)

MS: 544 (M + Li⁺)

-9CZ 289209 B6

Příklad 16

K 3,14 g (6 mmol) primárního alkoholu a (n = 6) ve 100 ml vysušeného dichlormethanu se přidá 0,84 ml triethylaminu a směs se ochladí na teplotu -10 °C. Při této teplotě se k roztoku přidá 0,4 ml (6 mmol) kyseliny chlorsulfonové ve 20 ml bezvodého dichlormethanu. Po jedné hodině při teplotě 0 °C a jedné hodině při okolí teplotě se přidá voda, načež se organická fáze oddělí a vodná fáze se vícekrát extrahuje ethylacetátem. Sloučené organické fáze se vysuší a zahustí. Zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 3:1. Získá se 1,45 g (40%) sloučeniny z příkladu 16.

C₃₁H₅₄O₉S (602) hmotové spektrum: 631 (M-H⁺ +Li⁺ + Na⁺)

615 (M-Pf + 2Li⁺).

Příklad 17

O

II

Sloučenina z příkladu 16 -> NaO-S-O-ÍCfDó-R¹

II o

0,5 g (0,83 mmol) sloučeniny z příkladu 16 ve 20 ml dioxanu se míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě se 7 ml polokoncentrovaného louhu sodného. Potom se roztok okyselí za chlazení polokoncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou, načež se zahustí za vakua. Zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 3:1. Získá se 254 mg (52 %) sloučeniny z příkladu 17.

C₃₀H₅iNaO₉S (610) hmotové spektrum: 617 (M+Li⁺)

601 (M-Na⁺+ 2Li⁺).

Příklad 18

-10CZ 289209 B6

K roztoku 2,6 g (5,12 mmol) sloučeniny z příkladu 2 ve 20 ml pyridinu se po kapkách přidá při teplotě 0 až 5 °C 15 ml chloridu difenylesteru kyseliny fosforečné a získaná směs se míchá po dobu dvou hodin při okolní teplotě. Směs se nalije na 200 ml ledové vody, načež se za míchání a chlazení přidá asi 15 ml koncentrované kyseliny sírové a směs se vícekrát extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se vysuší a zahustí a zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 1,78 g (47 %) sloučeniny z příkladu 18.

C₄₂H_6IO₉P (740) hmotové spektrum: 747 (M+Li⁺).

Příklad 19

O

II

HO-P-O-(CH₂)₆-R

I

OH g (1,35 mmol) sloučeniny z příkladu 18 se hydrogenuje v 50 ml ledové kyseliny octové za použití malého množství (na špičce špachtle) platiny na uhlí. Hydrogenace se provádí v třepané aparatuře. Po ukončení reakce (asi 4 hodiny) se hydrogenační katalyzátor odsaje a filtrát se zahustí. Zbytek se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené ethylacetátem a methanolem v objemovém poměru 2:1. Získá se 270 mg (34%) sloučeniny z příkladu 19.

C30H53O9P (588) hmotové spektrum: 601 (M-H* + 2Li*)

595 (M+Li*).

Příklad 20

2,24 g (4 mmol) aminu b a 324 mg (4 mmol) kyanatanu draselného se suspenduje v 60 ml vody a získaná suspenze se zahřeje k varu. Získá se roztok, ze kterého se po krátké době vyloučí pevná látka. Směs se míchá po dobu 30 minut na teplotu varu, načež se k ní po ochlazení přidá asi 40 ml vody a rezultující směs se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Směs se potom vícekrát extrahuje ethylacetátem a organická fáze se vysuší, zahustí za vakua a získaný zbytek se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 520 g (23 %) sloučeniny z příkladu 20.

C₃2H₅₆N₂O₆ (564) hmotové spektrum: 571 (M+Li⁺).

-11CZ 289209 B6

Příklad 21

450 mg (0,8 mmol) sloučeniny z příkladu 20 v 10 ml dioxanu se míchá s 5 ml polokoncentrovaného louhu sodného po dobu šesti hodin při okolní teplotě. Po ukončení reakce se směs zředí vodou, okyselí kyselinou chlorovodíkovou a míchá ještě po dobu jedné hodiny na ledu. Pevný podíl se odsaje a promyje vodou, načež se po vysušení za vakua získá 430 mg (97 %) sloučeniny z příkladu 21.

C₃₁H₅₄N₂O₆ (550) hmotové spektrum: 557 (M+Li⁺).

Příklad 22

K 1,04 g (2 mmol) aminu b (příklad 20) v 50 ml bezvodého dichlormethanu a 28 ml triethylaminu se při teplotě 0 °C přidají 2 mmoly fenylizokyanátu v 5 ml dichlormethanu. Získaná směs se míchá po dobu 6 hodin při okolní teplotě, načež se po okyselení vodné fáze zpracuje postupem popsaným v příkladu 16. Po chromatografií zbytku na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá 6540 mg (51 %) sloučeniny z příkladu 22.

C₃₈H₆₀N₂O₆ (640) hmotové spektrum: 647 (M+Li⁺).

Příklad 23

C₃₇H₅₈N₂O₆ (626) MS: 633 (M + Li⁺)

-12CZ 289209 B6

Příklad 24

2,08 g (4 mmol) aminu b, 10 ml triizobutylaminu a 5 ml jodmethanu se zahřívá k varu s 50 ml acetonu po dobu 2 hodin. Všechny těkavé složky se potom odeženou za vakua a zbytek se přečistí chromatograficky na sloupci silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 1,2 g (43%) sloučeniny z příkladu 24.

C₃₄H₆₂JNO₅ (691) hmotové spektrum (ionizace iychlými atomy, 3-NBA): 564 (Μ-Γ).

Příklad 25 (HjO^-íCHzVR¹

Cl⁹

Sloučenina z příkladu 25 se připraví ze sloučeniny z příkladu 24 postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21. Čištění surového produktu se provádí středotlakou chromatografií na silikagelu RP-8 za použití eluční soustavy tvořené směsí methanolu a vody v objemovém poměru 7:3.

C₃₃H₆₀ClNO₅ (585) hmotové spektrum (ionizace rychlými atomy, 3-NBA): 550 (M-Cf).

Příklad 26

1,04 g (2 mmol) aminu b a 276 mg (2 mmol) pyrazolu c se zahřívá ve 40 ml bezvodého acetonitrilu na teplotu varu po dobu 10 hodin. Po ochlazení a přidání etheru se vyloučí sraženina, která se odsaje a promyje bezvodým etherem. Po vysušení se získá 450 g sloučeniny z příkladu 26.

C₃₂H₅₈BrN₃O₅ (643) hmotové spektrum: 570 (M-HBr + Li⁺)

564 (M-Br~).

-13CZ 289209 B6

Příklad 27

XHC I

Sloučenina z příkladu 27 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

C₃iH₅₆C1N₃O5 (585) hmotové spektrum: 556 (M-HCl-Li⁺)

550 (M-Cf).

Příklad 28

1,0 g (1,9 mmol) aminu b, 265 mg NaBH₃CN a 610 mg heptanalu se míchá v 10 ml bezvodého methanolu po dobu 48 hodin při okolní teplotě. Reakční směs se zahustí za vakua a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a nasycený roztok hydrogenuhličitanu, načež se zbytek po zahuštění organické fáze chromatografuje. Vedle malého množství monoheptylaminoderivátu se získá 650 mg (49 %) sloučeniny z příkladu 28.

C₄₅H₈₃NO₅ (718) hmotové spektrum: 725 (M+Li⁺).

Příklad 29 n“C^H!5

N-(CH₂)₆-R’

Z ^n_C7^Ht5 _XHCI

Sloučenina z příkladu 29 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21. Vodná fáze se po okyselení dekantuje od olejovitého surového produktu, načež se zbytek rozmíchá v ethylacetátu, odsaje a vysuší.

C44H₈₂C1NO₅ (740) hmotové spektrum: 711 (M-HCI+Li⁺)

705 (M-Cf).

-14CZ 289209 B6

Příklad 30

Sloučenina z příkladu 30 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 28 a 29. Tato sloučenina se získá redukční aminací anthracen-9-karbaldehydu působením methylesteru kyseliny 3alfa-(aminoethyl)-7alfa,12alfa-dihydroxy-24-cholanové (d) a následným alkalickým zmýdelněním.

C41H55NO4 (625) hmotové spektrum: 632 (M+Li⁺).

Příklad 31

Sloučenina z příkladu 31 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 30, za použití cyklododekanolu ve funkci karbonylační složky.

C_3gH_g7NO₄ (602) hmotové spektrum: 609 (M+Li⁺).

Příklad 32

-15CZ 289209 B6

K 0,9 g (2 mmol) aminu d a 0,6 ml triethylamin ve 20 ml bezvodého methylenchloridu se za chlazení ledem přidá 0,38 g (2 mmol) naftoylchloridu v 5 ml methylenchloridu. Získaná směs se míchá ještě po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C, načež se ponechá přes noc stát v klidu. Přidá se voda, směs se okyselí a vícekrát extrahuje methylenchloridem. Zbytek po zahuštění organické fáze se přečistí chromatograficky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a cyklohexanu v objemovém poměru 3:1. Získá se lg (83%) sloučeniny z příkladu 32.

C₃₈H₅₃NO₅ (603) hmotové spektrum: 610 (M+Lf).

Příklad 33

Sloučenina z příkladu 33 se připraví postupem, v příkladu 21.

C₃₇H₅iNO₅ (589) hmotové spektrum: 596 (M+Li⁺).

který je analogický s postupem popsaným

Příklad 34

Sloučenina z příkladu 34 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 32 a 33 za použití chloridu kyseliny anthracen-9-karboxylové.

C₄iH₅₃NO₅ (639) hmotové spektrum: 646 (M+Li⁺).

-16CZ 289209 B6

Příklad 35 ^H3^C-O^^S°^2-NH_(CH2)6 ^R'

Sloučenina z příkladu 35 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 34, za použití chloridu kyseliny p-toluensulfonové a aminu b.

C37H59NO7S (661) hmotové spektrum: 668 (M+Li⁺).

Příklad 36

ch₃

Sloučenina z příkladu 36 se připraví postupem, který je analogický s postupem, připraveným v příkladu 35. Methylester získaný jako meziprodukt se po deprotonaci hydridem sodným methyluje v dimethylformamidu při okolní teplotě působením jodmethanu. Potom se analogicky jako v příkladu 35 provede alkalické zmýdelnění.

C₃₈H₆iNO₇S (675) hmotové spektrum: 688 (M-H⁺ + 2Li⁺).

Příklad 37

Sloučenina z příkladu 37 se získá postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 34, za použití anhydridu kyseliny o-ftalové a aminu b.

C₃₈H₅₇NO₈ (655) hmotové spektrum: 668 (M-tT + 2Li⁺)

662 (M + Li⁺).

Příklad 38

Sloučenina z příkladu 38 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 32 a 33, za použití aminu b.

C41H59NO6 (661) hmotové spektrum: 668 (M+Li⁺).

-17CZ 289209 B6

Příklad 39

426 mg (1 mmol) urethanu a 782 mg (15 mmol) aminu b se zahřívá v 50 ml dioxanu na teplotu varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin. Reakční směs se potom zahustí a zbytek se přečistí chromatografícky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1. Získá se 540 g (59%) sloučeniny z příkladu 39.

C₄₈H₇₀ClN₃O₁₀S (915) hmotové spektrum: 922 (M+L⁺).

Příklad 40

Sloučenina z příkladu 40 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

C₄₇H6₈C1N₃Oi₀S (901) hmotové spektrum (elektr. nástřik): 902 (M+H*).

Příklad 41

-18CZ 289209 B6

K roztoku 1,56 g (3 mmol) aminu b, 576 mg (3 mmol) kyseliny chinové a 490 mg (83,6 mmol) hydroxybenzotriazolu ve 100 ml tetrahydrofuranu se přidá 750 mg (3,6mmolu) dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se potom míchá po dobu 40 hodin při okolní teplotě, načež se vytvořená močovina odfiltruje, filtrát se zahustí a zbytek se vyjme ethylacetátem. Získaný roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2N kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Zbytek po odpaření organické fáze se přečistí chromatografícky na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 5:1. Získá se 1,2 g (58 %) sloučeniny z příkladu 41.

¢38^0^(695) hmotové spektrum: 702 (M+Li⁺).

Příklad 42

nh-(ch₂)₆-r

Sloučenina z příkladu 42 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

C37H63NO10 (681) hmotové spektrum (ionizace rychlými atomy, 3-NBA): 682 (M+H⁺).

Příklad 43 c

I

H —C—OH

I

HO —C—H

I H —C—OH

I

H — C— OH

I

CH₂OH

Sloučenina z příkladu 43 se připraví postupy, které jsou analogické s postupy popsanými v příkladech 41 a 42, za použití kyseliny glukonové.

CaóHíjNOii (685) hmotové spektrum: 714 (M-fT + Li⁺ + Na⁺).

-19CZ 289209 B6

Příklad 44

1,04 g (4 mmol) chloridu kyseliny e, 2,1 g (4 mmol) aminu b a malé množství (na špičku špachtle) 4-dimethylaminopyridinu se míchá ve 40 ml bezvodého pyridinu po dobu 6 hodin při okolní teplotě. Po stání přes noc při okolní teplotě se směs zahustí za vakua. Po chromatografickém přečištění na silikagelu se izoluje sloučenina z příkladu 44. Při uvedené chromatografií se jako eluční soustava použije směs methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20:1.

¢43^0,(743) hmotové spektrum: 750 (M+Li⁺).

Sloučenina z příkladu 45 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

C4₂H6₇NO₉ (729) hmotové spektrum: 742 (M-H⁺ + 2Li⁺)

736 (M+Li⁺).

-20CZ 289209 B6

K 1,3 g (5 mmol) chloridu kyseliny e a 0,8 ml triethylaminu v 50 ml bezvodého methylenchloridu se za chlazení ledem přidá 2,6 g (5 mmol) aminu b v methylenchloridu, načež se tato směs míchá po dobu jedné hodiny při teplotě 0 °C. Potom se přidá přebytek methanolu, teplota směsi se ponechá vystoupit na okolní teplotu, přidá se voda a směs se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Vodná fáze se vícekrát vytřepe do methylenchloridu. Po chromatografickém přečištění zbytku po zahuštění organické fáze na silikagelu za použití chromatografícké soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá sloučenina z příkladu 46.

C44H₇₃NO₁₀ (775) hmotové spektrum: 783 (M+Li⁺).

Sloučenina z příkladu 47 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

C₄₂H₆₉NO₁₀ (747) hmotové spektrum: 760 (M-lT + 2Li⁺)

754 (M + Li⁺).

Příklad 48

3,14 g (6 mmol) alkoholu a (n= 6) se společně se 3 ml ethyldiizopropylaminu a 1,5 g difenylmethylbromidu zahřívá v 50 ml dimethylformamidu po dobu 8 hodin na teplotu 100 °C. Po vodném zpracování a chromatografickém přečištění na silikagelu za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá sloučenina z příkladu 48.

C44H64O6 (688) hmotové spektrum: 695 (M+Li⁺)·

-21CZ 289209 B6

Příklad 49

Sloučenina z příkladu 49 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 21.

043^06(674) hmotové spektrum: 681 (M+Li⁺).

Postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 1, se zodpovídajících esterů žlučových kyselin připraví alkalickým zmýdelněním esterů následující sloučeniny 50 až 52.

Příklad 50

0₂8Η₄6θ₆(478) MS: 485 (M + Li⁺)

Příklad 51

C₂₈H46O₅ (462) MS: 469 (M + Li⁺)

-22CZ 289209 B6

Příklad 52

Příklad 53

Sloučenina z příkladu 53 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 41, ze sloučeniny z příkladu 44 a n-hexylaminu, přičemž reakční doba v tomto případě činí 25 hodin.

C49H82N2O8 (827)

Příklad 54

170 mg sloučeniny z příkladu 53 se rozpustí v 5 ml dioxanu, načež se k získanému roztoku přidá 1,5 ml polokoncentrovaného louhu sodného a 25 ml vody a směs se míchá po dobu 12 hodin při okolní teplotě. Suspendovaný podíl se odfiltruje a filtrát se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou. Směs se potom ještě míchá po dobu jedné hodiny, načež se vyloučená sraženina odsaje. Po vysušení se získá 154 mg sloučeniny z příkladu 54.

C48H₈2N₂O9(831) hmotové spektrum: 838 (M+Li⁺).

-23CZ 289209 B6

Příklad 55

Sloučenina z příkladu 55 se získá postupy, které jsou analogické v příkladech 53 a 54, z fluoresceinu a aminu b,

C₅₀H₆₃NO₉(821) hmotové spektrum: 828 (M+Li⁺).

s postupy popsanými

Příklad 56

Sloučenina z příkladu 56 se získá postupem, který je analogický v příkladu 55, z kyseliny pivalové a aminu b.

C₃₅H₆₁NO₆ (591) hmotové spektrum: 598 (M+Li⁺).

s postupem popsaným

Příklad 57

nh-(ch₂)_s-r

Sloučenina z příkladu 57 se získá postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z kyseliny 2-ethylhexanové a aminu b.

C₃₈He₇NO₆(633) hmotové spektrum: 640 (M+Li⁺).

Příklad 58

NH-(CH₂)₆-R

-24CZ 289209 B6

Sloučenina z příkladu 58 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z kyseliny klofibrinové a aminu b.

C₄₀H₆₂ClNO₇ (703) hmotové spektrum: 710 (+Li⁺)

Příklad 59

Sloučenina z příkladu 59 se připraví postupem, který je analogický s postupem popsaným v příkladu 55, z gemfibrocilu a aminu b.

C₄₅H₇₃NO₇ (740) hmotové spektrum: 747 (M+Li⁺).

Příklad 60

Sloučenina z příkladu 60 se připraví z 522 mg aminu b a 94,1 mg kyseliny di-n-propylmalonové v tetrahydrofuranu v přítomnosti systému DCC/HOBT. Izolace produktu se provede po 54 hodinách.

Výtěžek činí 69 %.

C^NOg (690) hmotové spektrum: 697 (M+Li⁺).

Příklad 61

-25CZ 289209 B6

250 mg sloučeniny z příkladu 60 se zmýdelní v dioxanu působením 2N hydroxidu sodného. Po vodném zpracování a přečištění sloupcovou chromatografií za použití eluční soustavy tvořené směsí ethylacetátu a methanolu v objemovém poměru 10:1 se získá 160 mg sloučeniny z příkladu 61.

C₃₉H₆₇NO₈ (676) hmotové spektrum: 677 (M+l).

Claims

1. Monomemí deriváty žlučových kyselin obecného vzorce I ve kterém

X znamená skupinu -(CH2)_n-, kde n znamená 1 až 10, přičemž tento alkylenový řetězec může zahrnovat 1 až 3 kyslíkové atomy, 1 až 3 skupiny -NH- nebo 1 až 3 skupiny -NHC(=O)-, a

Z znamená HO-, CH₃-O-, skupinu HO-CH₂-CH=CH-CH2-, skupinu (C₆H₅)2-CH-O-, skupinu

OO

IIII (alkalický kov)-0-S-0-, skupinu HO-P-O-,

III

OOH

OO

IIII skupinu (H₅C6)O-P-O-, skupinu CH₂=CH-C-NHI

O(C₆H₅)

O O NH

II II II skupinu H₂N-C-NH- skupinu HN-C-NH-, skupinu H₂N-C-NH-,

I c₆h₅

-26CZ 289209 B6 skupinu -N(R)₂ nebo skupinu -bT (R)₃, přičemž R vždy znamená alkylovou skupinu obsahující

1 až 7 uhlíkových atomů, nebo skupinu Hr-N-(CH₂)6-,

O

II (Ci-Cio)-alkyl-C-NH, přičemž alkylový zbytek je případně substituován skupinou

10 COOH, nebo skupinu

II

C-NHCOOH

-27CZ 289209 B6 přičemž A vždy znamená skupinu OH nebo NH-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 10 uhlíkových atomů.

2. Léčivo, vyznačené tím, že obsahuje monomemí derivát žlučové kyseliny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R, X a Z mají význam, uvedený v nároku 1.

10 3. Hypolipidemikum, vyznačené tím, že obsahuje monomemí derivát žlučové kyseliny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R, X a Z mají význam, uvedený v nároku 1.