CS267392B1 - Myší lymfocytámy hybridóm VÚ IFN ALó - Google Patents

Description

(57) Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho protilátku voči l’udskému leukocytárnemu acidolabilnému interferónu alfa, uloženého v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ IFN AL6. Monoklonálna protilátka hybridómu VÚ IFN AL6 je vhodná na stanovenie přítomnosti acidolabilného interferónu alfa na základe inhibície jeho biologickej aktivity v interferón-neutralizačných testoch. Monoklonálna protilátka je vhodná aj na přípravu sér Specifických k myšiemu imunoglobuÍínu podtriedy IgG2a. CS 267392 B1 CS267 392B1 1

Vynález sa týká nového hybridómu, t. j. hybridného jednobunkového organizmu, zostrojcného buňkovou fúziou myšej myclómovcj linie NSO a myšej slczinovej lymfoidnej buňky, prodtikiijúcei protilátku proti 1’udskému acido(ahilnému intvifviómi alia.

Doposial’ sa protilátky voči interferónu vyrábajú tak, že je interíerón opakované injikovaný ako antigén pokusným zvieratám, najčastejšie králikom alebo ovciam. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po určitej době pósobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátok, používaných predovšetkým pre kvantitatívnu alebo kvalitatívnu analýzu antigénu — molekuly interferónu — vo výskume a v imunodiagnostickej praxi. Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekofko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátok, ktorých spektrum je v každom jednotlivou) organizme rózne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potřebné zo sér odstraňovat vysycovaním. Výrobně šarže konvenčných sér sa preto dajú ťažko Standardizovat a bývajú v širokom rozmedzí kvality. Pre výrobu každej šarže třeba připravit čistý imunizačný antigén a ďalšie antigény na vysýtenie balastných protilátok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a doposial' používaného postupu odpadnú, ak je k dispozícii hybridóm, produkujúci monoklonálnu protilátku proti 1’udskému acidolabilnému interferónu alfa uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VÚ IFN AL6.

Uvedený hybridóm bol získaný spósobom známým z odbornej literatúry (Kóhler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nátuře, 256, /1975), 495; Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biologicai Analyses. R. H. Kennet, T. J. McKearn, Κ. B. Bechtol, eds., New York, Plenům Press, /1980/, 370) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovej linie NSO a buniek, získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných preparátom 1’udského leukocytárneho acidolabilného interferónu alfa. Výhodou hybridómu je, že produkuje homo-

Claims (1)

1. PREDMET VY Myší lyinfocytárny hybridóm VÚ IFN AL6, produkujúci monoklonálnu protilátku podtrie- 2 génnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná specificky reagovať s příslušným interferónom. Hybridóm VÚ IFN AL6 možno kultivovat’ in vitro v médiách vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnrj dutině myší kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnoin dusíku, možno zahájit’ produkciu protilátky bez ďalej imunizácic antigénom. Příklad Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5 χ 106 buniek do peritomeálnej dutiny myší. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dní před prenosom buniek hybridómu premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Celkom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny, ktorá obsahovala 8 mg/ml imunoglobulínu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VÚ IFN AL6 Specificky inhibovala antivírusovú a antiproliferatívnu aktivitu 1’udského acidolabilného interferónu alfa. In vitro rastů hybridómy ako polosuspenzná kultúra. Majú tvar (gufatý) a vefkosť charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploidné. Buňky hybridómu VÚ IFN AL6 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou sú vofné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eaglovho miniinálneho esenciálneho média (Dulbecco, R. a Freeman, C., Virology 8 /1959/, 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktívovaným koňským sérotn (10%), Elán Cloně, Bratislava. Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C — jeho středná generačná doba je přibližné 24 hod. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgG2a. Hybridóm VÚ IFN AL6 móže byť priemyslovo využívaný ako zdroj protilátky proti 1’udskému leukocytárnemu acidolabilnému interferónu alfa pri kvantitatívnom alebo kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti acidolabilného interferónu alfa vo vyšetrovanom materiáli alebo ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (lgG2a) pre přípravu sér Specifických pre uvedenú podtriedu, NÁLEZU dy IgG2a proti 1’udskému acidolabilnému interferónu alfa.