CS267391B1 - Myší lymfocytámy hybridóm VÚIFN G8 - Google Patents

Description

(57) Riešenie sa týká myšieho lymfocytárneho hybridómu produkujúceho protilátku voči l’udskému leukocytárnemu interferónu gama, uloženého v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VÚ IFN G8. Monoklonálna protilátka hybridómu VÚ IFN G8 je vhodná na stanovenie přítomnosti interferónu gama na základe inhibície jeho biologíckej aktivity v interferón-neutralizačných testoch. Monoklonálna protilátka je vhodná aj na přípravu sér Specifických k myšiemu imonoglobulínu podtriedy IgGl. CS 267391 B1 CS 267 391 Bl 1

Vynález sa týká nového hybridómu, t. j. hybridného jednobunkového organizmu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelómovej linie NSO a myšej slezinovej lymfoidncj buňky, produkujůcej protilátku proti Fudskému interíerónti gama.

Doposial’ sa protilátky voči interferónu gama vyrábajú tak, že je interferón opakované indikovaný ako antigén pokusným zvieratám, najčastejšie králikom alebo ovcíam. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrané po určitej době pósobenia antigénu, slúži ako zdroj protilátok, používaných predovšetkým pre kvantitatívnu alebo kvalitatívnu analýzu antigénu — interferónu gama — vo výskume a v imunodiagnostickej praxi. Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, má niekoíko nevýhod. V sére imunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protilátok, ktorých spektrum je v každom jednotlivom organizme rózne a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám antigénového preparátu, ktoré je potřebné zo sér odstraňovať vysycovaním. Výrobně šarže konvenčných sér sa preto dajú ťažko štandardizovať a bývajú v širokom rozmedzí kvality. Pre výrobu každej šarže třeba pripraviť čistý imunizačný antigén a ďalšie antigény na vysýtenie balastných protilátok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a doposial’ používaného postupu odpadnú, ak je k dispozícii hybridóm, produkujúci monoklonálnu protilátku voči Fudskému interferónu gama uložený v zbierke hybridómov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VÚ 1FN G8.

Uvedený hybridóm bol získaný spósobom známým z odbornej literatúry (Kóhler, G., Milstein, C.: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nátuře, 256, /1975/, 495; Gerhard, W.: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In: Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses. R. H. Kennet, T. J., McKearn, Κ. B. Bechtol, eds., New York, Plenům Press, /1980/, 370) klonováním súboru hybridných buniek po fúzii myšej myelómovej linie NSO a buniek, získaných zo sleziny myší kmeňa BALB/c, imunizovaných preparátom íudského leukocytárneho interferónu gama. Výhodou hybridómu je, že produkuje homogénnu protilátku, tzv. monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná špecificky reagovať s interferónom gama. Hybridóm VÚ IFN G8 možno kultivovať in vitro v médiách vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myší kmeňa BALB/c. Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájiť produkciu protilátky bez ďalšej imunizácie antigénom. 2 neálnej dutiny myší. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bola myš 15 dní před prenosom buniek hybridómu premedikovaná parafínovým olejom ÍO,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dňoch rastu hybridómu v peritoneálnej dutině bola myš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá. Celkom sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny, ktorá obsahovala 8 mg/ml itnunoglobulínu. Ascitická tekutina, obsahujúca produkt hybridómu VÚ IFN G8 špecificky inhibovala antivírusovú a antiproliferatívnu aktivitu íudského interferónu gama.

In vitro rastů hybridómy ako polosuspenzná kultúra. Majú tvar (guíatý) a veíkosť charakteristické pre myelómové buňky, obsahujú fúzované buňkové jadrá, sú aneuploidné. Buňky hybridómu VÚ IFN G8 majú ultraštruktúrny obraz typických myelómových buniek, kde prevažujúcou organelou sú volné a na membrány viazané polyribozómy. Základným kultivačným médiom je Dulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálneho média (Dulbecco, R. a Freeeman, G., Virology 8 /1959/, 396). Toto médium, označované ako DMEM, je pre kultiváciu hybridómu doplněné gentamycínom a inaktivovaným koňským sérom (10%, Elán cloně, Bratislava). Hybridóm je kultivovaný pri 37 °C — jeho středná generačná doba je přibližné 24 hod. Produkovaná protilátka je monoklonálny imunoglobulín podtriedy IgGl.

Hybridóm VÚ IFN G8 móže byť priemyslovo využívaný ako zdroj protilátky proti fudskému leukocytárnemu interferónu gama pri kvantitatívnom alebo kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti interferónu gama vo vyšetrovanom materiáli, alebo ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgGl) pre přípravu sér specifických pre uvedenú podtriedu.

Claims (1)

1. PREDMET VYNÁLEZU Myší lymfocytárny hybridóm VÚ IFN G8, produkujúci monoklonálnu protilátku podtriedy IgGl proti Fudskému interferónu gama. Příklad Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5 x 106 buniek do perito-