CS248382B1 - Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 - Google Patents
Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 Download PDFInfo
- Publication number
- CS248382B1 CS248382B1 CS406485A CS406485A CS248382B1 CS 248382 B1 CS248382 B1 CS 248382B1 CS 406485 A CS406485 A CS 406485A CS 406485 A CS406485 A CS 406485A CS 248382 B1 CS248382 B1 CS 248382B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- mem
- hybridoma
- antibody
- monocytes
- cells
- Prior art date
Links
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 abstract description 24
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytárního
hybridomu, produkujícího protilátku proti
membránovému antigénu lidských monocytů,
uloženého ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární
genetiky ČSAV pod označením
MEM-18. Monoklonální protilátka hybridomu
MEM-18 je vhodná pro použití v nepřímé imunofluorescenční
a enzymoimunologické analý
ze lidských monocytů.
Description
(54) Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18
Řešení se týká myšího lymfocytárního hybridomu, produkujícího protilátku proti membránovému antigénu lidských monocytů, uloženého ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením MEM-18. Monoklonální protilátka hybridomu MEM-18 je vhodná pro použití v nepřímé imunofluorescenční a enzymoimunologické analýze lidských monocytů.
Vynález se týká nového hybridamu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp2/O-Agl4 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti membránovému antigenu přítomnému na lidských monocytech.
Monocyty mají základní důležitost v imunitním systému. Počet monocytů se při imunodeficiencích a jiných patologických stavech liší od fyziologické normy.
Doposud se protilátky proti membránovým antigenům vyrábějí tak, že buněčné suspenze nebo membránové frakce jsou opakovaně injikovány produkčním zvířatům, nejčastěji králíkům.
Sérum takto imunisovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek.
Takto jsou například připravovány protilátky proti thymocytům, které jsou používány k imunosupresi při transplantaci orgánů v klinické medicíně. Tento postup, nazývaný konvenční imunisací, má neodstranitelnou nevýhodu v tom, že séra obsahují protilátky proti mnoha membránovým antigenům, z nichž některé jsou přítomny na více typech buněk; séra proto nelze použít k jemnému rozlišení buněčných typů a tříd.
Nevýhody konvenčních sér proti membránovým antigenům v principu odstraňuje použití hybridomové technologie. Produkt hybridomu - monoklonální protilátka - je zaměřena vždy proti jediné antigenní determinantě.
Je-li konstruován dostatečně velký soubor hybridomů, je pravděpodobné, že se z něho podaří vyhledat hybridom syntetizující protilátku, která rozeznává antigenní determinantu charakterizující určitý typ leukocytů.
Dosud se obvykle počet monocytů zjištoval histologicky a histochemicky. Většina monocytů je morfologicky odlišitelná od ostatních jaderných buněk v krvi, přesto je přednostně používáno histochemických testů.
Podle publikovaných výsledků /Kung, P. C., Talie, M. A., DeMaria, Μ. E., Butler, M. S., Lifter, J., Goldstein, G.s Strategies for generating monoclonal antibodies defining human T-lymphocyte differentiation antigens. Transplant. Proč. 12, Suppl. 1:141-146, 1980/ se dá soudit, že lze připravit monoklonální protilátka specificky detegující monocyty, která by mohla nahradit dosud používané histochemické techniky.
Podstatného pokroku v diagnostice lidských monocytů projevujícího se vyšší spolehlivostí analytického výsledku, se dosáhne, je-li k dispozici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti antigenu přítomnému na lidských monocytech, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č, 1083, pod označením IMG CZAS MEM-18.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Pazekas de St. Groth,
S., Scheidegger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth., 35:1-21, 1980, Galfré, G., Howe S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře, 266:550, 1977/ klonováními souboru hybridních buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c imunizovaných směsí proteinů z moče pacientů s poškozenou ledvinou. Proteinová frakce obsahovala komponentu, která je přítomná na lidských monocytech.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidskými monocyty. Hybridom MEM-18 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez další potřeby antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem MEM-18 reaguje specificky s lidskými monocyty a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
P ř ί k 1 a d
Za účelem pomnožení hybridcmových buněk in vivo bylo aplikováno 4 x 106 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem /0,5 ml intraperitoneálně/. Po 10 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš uhubena a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána.
Celkem bylo získáno 2,5 ml ascltické tekutiny, která obsahovala 3 mg/ml imunoglobulinu. Monoklonální protilátka reagovala specificky s monocyty periferní krve v nepřímém imunofluorescenčním a enzymoimunologickém testu. Lymfocyty, granulocyty a erythrocyty s protilátkou nereagovaly.
Specifita protilátky je identická s komerční monoklonální protilátkou MY-4, jak bylo prokázáno opakovanými paralelními stanoveními včetně použití směsí obou protilátek, a to jak v případě směsi periferních lymfocytů, tak u izolovaných monocytů z periferní krve /viz tab./. Reaguje s proteinovou frakcí moče některých pacientů s poškozenou ledvinou.
Tabulka
Reaktivita protilátek produkovaných hybrldamem MEM-18 a MY-41 s buňkami periferní krve
| Buňky periferní 2 lidské krve | % pozitivních buněk reagujících s monoklonální protilátkou v nepřímém enzymoimunologickém3 a imunofluorescenčním testu4 | ||
| Směs | + MY-4 | ||
| MEM-18 | MY-4 MEM-18 | ||
| lymfocyty | 1 | 1 | 1 |
| monocyty | 95 | 95 | 95 |
| granulocyty | 1 | 1 | 1 |
| erythrocyty | 1 | 1 | 1 |
1^ Komerční monoklonální protilátka od firmy Coulter Immunology, Hialeah, Floria, USA.
2/ Buňky lidské periferní krve byly izolovány popsanou metodou /Boyum, A.: Isolation of lymphocytes, granulocytes and macrophages. Scand. J. Immunol. 5, Suppl. 5:9, 1976/ na Verografln-Ficoll gradientu.
3/ Byl použit postup podle práce Lansdorp, Ρ. Μ., Astaldi, G. C. B., Oosterhof, F., Janssen, M. C., Zeijlemaker, W. P.: Immunoperoxidase procedures to detect monoclonal antibodies against cell surface antigen. Quantitation of binding and staining of individual cells. J. Immunol. Meth. 39:393-405, 1980.
4/ Byla použita nepřímá imunofluorescenční technika s využitím-prasečího antimyšího imunoglobulinu značeného fluoresceuinisothiakyanátem /ÚSOL, Praha/.
/ ' Monocyty lidské perferní krve byly izolovány popsanou metodou Recale, H. R.: A simple method of obtaining monocytes in suspenslon. J. Immunol. Meth., 69:71 až 77, 1984.
Granulocyty lidské periferní krve byly izolovány na diskontinuálním hustotním Percollovém gradientu /Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, švédsko/. Granulocyty byly získány na vrstvě Percollu o hustotě 1.09.
Identita antigenů rozeznávaných protilátkami MEM-18 a MY-4 byla prokázána izolací příslušného antigenů Imunoafinitní chromatografií na Imobillzované protilátce MEM-18 a demonstrací silné reaktivity tohoto antigenů s protilátkou MY-4.
Tento průkaz byl proveden následovně: částečně vyčištěná protilátka MEM-18 byla navázána na CNBr-Sepharosu 4B /Pharmacia, Uppsala, švédsko/ /5 mg/ml/. Směs proteinů z moče pacientů trpících proteinurií byla získána srážením síranem amonným do 75% nasycení, odsolenim dialysou proti vodě a lyofilizací.
Byly vybrány vzorky močí, které obsahovaly co nejvyšší koncentraci rozpustné formy antigenů reagujícího s protilátkou MEM-18 /testovaného i inhibičním enzymolmunologickém testu/. Takto získaná směs proteinů byla rozpuštěna v PBS /0,14 M roztok NaCl pufrovaný 10 mM fosfátem pH 7,2/ a nanesena na kolonku Sepharosy 4B s kovalentně navázanou protilátkou MEM-18.
Po důkladném promytí byl specificky adsorbovaný antigen vymyt roztokem 2% dodecylsulfátu sodného /SOS/ a. získaný vzorek analyzován elektroforézou v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti SDS.
Po skončení elektroforézy byly separované proteiny elektroforeticky převedeny na nitrocelulózovou membránu /Towbin, H., Stachelin, T., Gordon, J.: Electrophoretic transfer of proteine fran polyaorylamide gels to nitrocellulose sheets: Proceduře and some applications.
Proč. Nati. Acad. Sci. U. S. 76:4350-4354, 1979/ a detegovány nepřímým enzymoimunologickým testem s využitím, příslušné monoklonální protilátky a prasečí antimyší protilátky konjugované s peroxidázou /OSOL, Praha/.
Jak protilátka MEM-18, tak MY-4 reagovaly silně s izolovaným antigenem /m. h. 55 000/.
Stejný výsledek byl získán i v případě, že jako výchozí materiál pro izolaci antigenů byl 7 použit lyzát monocytů roztokem obsahujícím 1 % detergent NP-40 /10 buněk lýzováno 1 ml roztoku a nerozpustné zbytky odstraněny centrifugaci/.
Identita antigenů rozeznávaných protilátkami MEM-18 a MY-4 byla prokázána také tak, že antigen reagující s protilátkou MEM-18 byl nejprve odstraněn s povrchu monocytů /capping“ následovaný internalizací/ a pak byla testována reaktivita takto pozměněných buněk s protilátkou MY-4.
Bylo zjištěno, že po odstranění antigenů MEM-18 vymizí také schopnost monocytů vázat protilátku MY-4, zatímco reaktivita s protilátkou B2M-01 /Hilgert, I., Hořejší, V., Krištofová, H.: The use of murine monoclonal antibody B2M-01 for detection and purification of human j-microglobulin. Folia biol. /Praha/ 30:369-376, 1984/ se nezmění.
Tento test byl prováděn tak, že roztok protilátky MEM-18 byl inkubován 30 min. při 20 °C s monocyty a poté 30 min. při 37 °C s protilátkou proti myšímu imunoglobulinu. S takto připravenými buňkami byl proveden běžný nepřímý imunofluorescenční test, tj. inkubace s protilátkami MEM-18, MY-4, B2M-01 a ve druhém Kroku s prasečím antimyším imunoglobulinem značeným fluoresceinisothiokyanatem.
Buňky hybridami MEM-18 mají ultrastrukturní obraz typických myelomových buněk. Cytoplasma obsahuje velké množství polyribosomů, mitochondrie a slabě vyvinuté endoplasmatické retikulum. In vitro rostou jako polosuspensní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin /3 mM/, pyruvát sodný /1 mM/.
Toto médium /označované jako H-MEMd, Ostav molekulární genetiky ČSAV/ je pro kultivaci hybridomu MEM-18 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /0,05 mM/, pufrem HEPES /10 mM/ a inaktivovaným bovinním sérem /Bloveta, Ivanovice na Hané,
10%/. Hybridem je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 14,6 hod. a 6 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 95. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobu lin podtřídy IgG s lehkými řetězci typu kappa, její isoelektrický bod je pH 5,9 až 6,1.
Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem MEM-18 reaguje specificky s lidskými monocyty. Hybridom MEM-18 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti monocytům v analytických metodách.
Monoklonální protilátka hybridomu MEM-18 může být využita pro stanovení monocytů v periferní krvi při klinické diagnostice v zdravotnických zařízeních, zvláště při různých imunologických nedostatečnostech a autoimunních onemocněních a při detekci některých typů myeloidních leukémií.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZDMyší lymfocytární hybridem IMG CZAS MEM-18 produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti membránovému antigenu lidských monocytů.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS406485A CS248382B1 (cs) | 1985-06-06 | 1985-06-06 | Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS406485A CS248382B1 (cs) | 1985-06-06 | 1985-06-06 | Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS248382B1 true CS248382B1 (cs) | 1987-02-12 |
Family
ID=5382546
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS406485A CS248382B1 (cs) | 1985-06-06 | 1985-06-06 | Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS248382B1 (cs) |
-
1985
- 1985-06-06 CS CS406485A patent/CS248382B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2540179B2 (ja) | 非還元・非酵素的糖鎖形成蛋白に対するモノクロ―ナル抗体 | |
| Cullen et al. | The distribution of alloantigenic specificities of native H-2 products | |
| US5413910A (en) | Measuring non-dystrophin proteins and diagnosing muscular dystrophy | |
| EP0216854A1 (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES AND TEST PROCEDURE. | |
| FI83669B (fi) | Foerfarande foer specifik bestaemning av pankreas -amylas. | |
| EP0274198B1 (en) | Immunoassay kit | |
| RU2395576C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L.1B2 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) | |
| CS248382B1 (cs) | Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 | |
| US5430129A (en) | Purified, native dystrophin | |
| Margni et al. | The proportion of symmetric and asymmetric IgG antibody molecules synthesized by a cellular clone (hybridoma) can be regulated by placental culture supernatants | |
| CS244396B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG + CZAS + MEM - 32 | |
| CS253687B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZA3 MEM-57 | |
| CS255234B1 (cs) | Myší lymfocytárnl hybridem produkující protilátku proti společnému antigenu lidských akutních lymfoblastických leukémií | |
| RU2070926C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к с-концевой части белка р 24 вируса иммунодефицита человека типа i | |
| CS243879B1 (cs) | Myší lymfocytárni hybridem IMG-CZAS HL-38 | |
| CS252450B1 (cs) | Myěí lymfocytární hybrldom IMG SZAS HL-40 | |
| US5238824A (en) | Hybridomas and monoclonal antibodies therefrom reactive toward antigens from edwardsiella ictaluri | |
| CS255235B1 (cs) | Myší lymfocytómí hybridem produkující protilátku proti lidskému transferinovému receptoru | |
| CS244200B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MEM-12 | |
| RU2377299C1 (ru) | ШТАММ 5А10 ПОСТОЯННОЙ ГИБРИДОМНОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК МЫШИ Mus. musculus - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К IgG КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
| CS264752B1 (cs) | Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 | |
| RU2377298C1 (ru) | ШТАММ 1Н8 ПОСТОЯННОЙ ГИБРИДОМНОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК МЫШИ Mus. Musculus - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К IgG ОВЦЫ | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| SU1442545A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.,используемый дл получени моноклональных антител к @ -цеп м иммуноглобулинов человека и обезь н | |
| SU1726511A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к общим антигенным детерминантам инсулина человека и свиньи |