CS264752B1 - Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 - Google Patents
Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 Download PDFInfo
- Publication number
- CS264752B1 CS264752B1 CS846689A CS668984A CS264752B1 CS 264752 B1 CS264752 B1 CS 264752B1 CS 846689 A CS846689 A CS 846689A CS 668984 A CS668984 A CS 668984A CS 264752 B1 CS264752 B1 CS 264752B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- cells
- mem
- cytotoxic
- mouse
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Myší lymfocytární hybridom, produkující
protilátku proti membránovému antigenu
lidských supresorových a cytotoxických
T buněk, uložený ve sbírce hybridomů Ostavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
MEM-31. Samotná monoklonální protilátka
hybridomů MEM-31 je vhodná pro použití
v enzymoimunologické a imunofluorescenční
analýze lidských supresorových a cytotoxických
T buněk.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, t j. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší myelomové linie Sp2/0-Agl4 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti membránovému antigenu přítomnému na lidských supresorových a cytotoxických T buňkách. Funkční studie ukázaly, že supresorové a cytotoxlcké T buňky mají společný membránový antigen a tvoři podtřídu lymfocytú s důležitými regulačními funkcemi, jejichž zastoupeni v periferní krvi a lymfoidnich tkáních se při imunodeficiencíchlliší od fysiologické normy.
Doposud se protilátky proti membránovým antigenům vyrábějí tak, že buněčné suspenze nebo membránové frakce jsou opakovaně injikovány produkčním zvířatům, nejčastěji králíkům.
Sérum takto imunisovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek. Takto jsou například připravovány protilátky proti thymocytům, které jsou používány k imunosupresi při transplantaci orgánů v klinické medicíně. Tento postup, nazývaný konvenční imunisací, má neodstranitelnou nevýhodu v tom, že séra obsahují protilátky proti mnoha membránovým antigenům, z nichž některé jsou přítomny na více typech buněk; séra proto nelze použit k jemnému rozlišení buněčných typů a tříd.
Nevýhody konvenčních sér proti membránovým antigenům v principu odstraňuje použiti hybridomové technologie. Produkt hybridomu - monoklonální protilátka - je zaměřena vždy proti jediné antigenní determinantě. Je-li konstruován dostatečně velký soubor hybridomů, je pravděpodobné, že se z něho podaří vyhledat hybridom syntetizující protilátku, která rozeznává antigenní determinantu charakterizující určitý typ nebo třídu či podtřídu lymfocytú.
Podle publikovaného výsledku (Thomas, Y., Sosman, J., Irigoyen, O., Friedman, S. M.,
Kung, P, C., Goldstein, G., Chess, L.: Functional analysis of human T cell subsets defined by monoclonal antibodies. I. Collaborative T-T int.eractions in the immunoregulation of B cell differentiation. J. Immunol., 125:2 401 až 2 408, 1980) se dá soudit, že lze‘ připravit monoklonální protilátku specificky detegujicí podtřídu supresorových/cytotoxických lidských T buněk vhodnou pro diganostické použiti.
Podstatného pokroku v diagnostice lidských lymfocytú, projevujícího se vyšší spolehlivostí analytického výsledku, se dosáhne, je-li k disposici hybridom, produkující monoklonální protilátku proti antigenu přítomnému na lidských supresorových/cytotoxických T buňkách, uložený ve Sbírce hybridomů Ostavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňská č. 1 083, pod označením IMG CZAS MEM-31.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St. Groth,
S., Scheidegger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics, J. Immunol. Meth.., 35:1 až 21, 1980; Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard,
J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře, 266:550, 1977) klonováním souboru hybridních buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c imunizovaných membránovou frakcí buněk lidských thymů.
Výhodou hybridomů je, že produkuje homogenní protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidskými supresorovými/cytotoxickými T buňkami. Hybridom MEM-31 je raožnékultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem MEM-31, reaguje specificky s populacemi lidských supresorových/cytotoxických T buněk a není třeba se zbavovat protilátek balastních.
Přiklad
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 4xl05 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 14 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem (0,5 ml intraperitoneálně). Po 9 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zahubena a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána.
Celkem bylo získáno 3,5 ml ascítické tekutiny, která obsahovala 5 mg/ml imunoglobulinu.
Monoklonální protilátkareagovala specificky v nepřímém Imunofluorescenčním nebo enzymoimunologickém testu se supresorovými/cytotoxickými T buňkami periferní krve. Oběma metodami bylo zjištěno 25 až 35 i positivních buněk v enzymoimunologickém testu až do ředění ascitické 4 3 plasmy 1:10 a v testu nepřímé imunofluorescence až do ředění 1:10 . Specificita MEM-31 je identická s komerční monoklonální protilátkou OKT-8, jak bylo prokázáno opakovanými paralelními stanoveními včetně použití směsí dvou protilátek (viz tabulka).
Tabulka
Reaktivita protilátek produkovaných hybridomem MEM-31 a ΟΚΤβ' s buňkami periferní krve
Buňky periferní % positivních buněk reagujících s monoklonální
3 lidské krve protilátkou v imunofluorescenčním testu'
| MEM-31 | OKT8 | MEM-31 + 0KT8 | |
| lymfocyty | 23 až 33 | 25 až 34 | 25 až 35 |
| monocyty | 4 1 | 4 1 | 4 1 |
| granulocyty | 4 1 | 4 1 | 41 |
| erytrocyty | < 1 | 41 | <1 |
1Komerční monoklonální protilátka od firmy Ortho Pharmaceutical Corporation-Raritan,
New Jersey USA.
Buňky lidské periferní krve byly isolovány popsanou metodou (Boyum, A.: Isolation of lymphocytes, granulocytes nad macrophages. Scand. J. Immunol. 5, Suppl. 5:9, 1976) na Verografin-Ficoll gradientu.
Byla použita nepřímá imunofluoresoenční technika s využitím prasečí antimyší protilátky značené fluoresceinisothiokyanatem.
Buňky hybridomu MEM-31 mají ultrastrukturní obraz typických rayelomových buněk. Cytoplasma obsahuje velké množství polyribosomů, mitochondrie a slabě vyvinuté endoplasmatické retikulum. In vitro rostou jako polosuspensní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3 mM), pyruvát sodný (1 mM). Toto médium (označované jako H-MEMd) je pro kultivaci hybridomu MEM-31 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem (0,05 mM), pufrem HEPES (10 mM) a inaktivovaným bovinním sérem (10%). Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 18,4 h a 5 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 89. Produkovaná protilátka je monoklonální. imunoglobulin podtřídy IgG2a s lehkými řetězci typu kapa, její isoelektrický bod je pl 7,4 až 7,6.
Monoklonální. protilátka produkovaná hybridomem MEM-31 reaguje specificky s lidskými supresorovými/cytotoxickými T buňkami. Hybridom MEM-31 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti supresorovým/cytotoxickým T buňkám v analytických metodách. Monoklonální protilátka hybridomu MEM-31 může být využita pro stanovení supresorových/cytotoxických T buněk v periferní krvi a lymfatickýoh orgánech při klinické diagnostice v zdravotnických zařízeních, zvláště při sledování odhojovacíoh krizí po transplantaci orgánů, při různých imunologických nedostatečnostech a autoimunních onemocněních a pro klasifikaci leukémii T buněčného původu.
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MEM-31 produkující monoklonální protilátku imunoglobulin podtřídy IgG2a proti membránovému antigenu lidských supresorových a cytotoxických T buněk.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS846689A CS264752B1 (cs) | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS846689A CS264752B1 (cs) | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS668984A1 CS668984A1 (en) | 1988-12-15 |
| CS264752B1 true CS264752B1 (cs) | 1989-09-12 |
Family
ID=5414511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS846689A CS264752B1 (cs) | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS264752B1 (cs) |
-
1984
- 1984-09-06 CS CS846689A patent/CS264752B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS668984A1 (en) | 1988-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Berman et al. | B-lymphocytes activation by the Fc region of IgG. | |
| DK154091B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof samt fremgangsmaade til diagnose hermed og diagnostisk praeparat indeholdende antistoffet | |
| Landreth et al. | Regulation of human B lymphopoiesis: effect of a urinary activity associated with cyclic neutropenia. | |
| CN109112113B (zh) | 抗人IgG的单克隆抗体、杂交瘤细胞株、试剂盒及其应用 | |
| EP0203089A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| EP0216854A1 (en) | MONOCLONAL ANTIBODIES AND TEST PROCEDURE. | |
| US4707442A (en) | Hybrid cell line producing monoclonal antibody cytolytic to Trichomonas vaginalis | |
| RU2395576C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНОГО Mus musculus L.1B2 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) (ВАРИАНТЫ), МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО, ПРОДУЦИРУЕМОЕ ШТАММОМ (ВАРИАНТЫ), НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ФОРМАТА "СЭНДВИЧ" ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ НУКЛЕОПРОТЕИНА ВИРУСА ЭБОЛА, СУБТИП ЗАИР (ШТАММ Mainga) | |
| CS264752B1 (cs) | Myií lymfocytémf hybridem IMG CZASMEM-31 | |
| WO1986002359A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| CS253687B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZA3 MEM-57 | |
| EP0198001A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| CS243879B1 (cs) | Myší lymfocytárni hybridem IMG-CZAS HL-38 | |
| CS244396B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG + CZAS + MEM - 32 | |
| PT690071E (pt) | Anticorpos monoclonais inibidores e anti-inibidores especificos para a peroxidase de rabano | |
| RU2070926C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к с-концевой части белка р 24 вируса иммунодефицита человека типа i | |
| CS252450B1 (cs) | Myěí lymfocytární hybrldom IMG SZAS HL-40 | |
| CS255235B1 (cs) | Myší lymfocytómí hybridem produkující protilátku proti lidskému transferinovému receptoru | |
| CS244200B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MEM-12 | |
| CS248382B1 (cs) | Myší lymfocytární hybrtdom IMG CZAS MEM-18 | |
| EP0201520A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| CS255234B1 (cs) | Myší lymfocytárnl hybridem produkující protilátku proti společnému antigenu lidských akutních lymfoblastických leukémií | |
| EP0201519A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| EP0229811A1 (en) | Monoclonal antibodies and their use | |
| RU2093574C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к igg свиньи |