CS241123B2 - Method of s-adenosylmethionine derivatives production - Google Patents

Method of s-adenosylmethionine derivatives production Download PDF

Info

Publication number
CS241123B2
CS241123B2 CS826560A CS656082A CS241123B2 CS 241123 B2 CS241123 B2 CS 241123B2 CS 826560 A CS826560 A CS 826560A CS 656082 A CS656082 A CS 656082A CS 241123 B2 CS241123 B2 CS 241123B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
adenosylmethionine
acid
found
formula
carbon atoms
Prior art date
Application number
CS826560A
Other languages
English (en)
Other versions
CS656082A2 (en
Inventor
Federico Gennari
Original Assignee
Bioresearch Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioresearch Spa filed Critical Bioresearch Spa
Publication of CS656082A2 publication Critical patent/CS656082A2/cs
Publication of CS241123B2 publication Critical patent/CS241123B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby nových derivátů S-adenosylmetioninu /SAM/ obecného vzorce I
/I/ kde
R znamená vodík nebo alifatický zbytek s 1 až 6 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci,
R^ znamená vodík nebo alifatický nebo aromatický acylový zbytek se 2 až 12 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci,
R2 znamená vodík nebo alifatický nebo aromatický acylový zbytek o 2 až 12 atomech uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, m znamená 0 nebo 1, n zněměná 0 až 5, a
A znamená ekvivalent aniontu anorganické nebo organické kyseliny o pK menším než 2,5, přičemž symbol R^ má stejný nebo odlišný význam než symbol R2 a přičemž Rg než vodík v případě, že R znamená vodík.
má jiný význam
Je známo, že S-adenosylmetionin je -látka přítomná ve všech živých organismech, která se účastní velkého počtu biologických dějů základní důležitosti tím, že představuje hlavního dárce metylových skupin v organismu.
Rovněž je známo, že až do roku 1975 bránila jakékoliv praktické aplikaci S-adenosylmetioninu jeho krajní nestálost. Pro výrobu S-adenosylmetioninu a jeho solí je známo mnoho postupů, například postupy, jež jsou posány v patentových spisech US č. 3 707 536, 4 109 079, německém patentovém - spisu č. 3 045 786, francouzských patentových spisech č. 2 252 405 a 2 275 220, japonských patentových spisech č. 53 20 998, 53-20 999 a 53 21 000 aj.
Počínaje rokem 1975 byla udělena řada patentu /US č. 3 893 999, 3 954 726, 4 057 686/, týkajících se jednotlivých solí S-adenosylmetioninu, které se zcela neočekávaně vyznačují takovou stálostí, že umožňuje jejich použití pro výrobu farmaceutických prostředků, jež lze aplikovat v četných oblastech humánního lékařství.
Ačkoliv se tím vyřešila jedna z nepříznivých vlastností S-adenosylmetioninu, nebyl však těmito solemi ještě vyřešen jiný problém související s touto sloučeninou, totiž její malá schopnost procházet buněčnými přepážkami, a s tím související obtížná absorpce organismem, zejména při orální aplikaci.
Nyní byla objevena nová skupina sloučenin, tj. sloučeniny obecného vzorce I, jejichž způsob výroby je předmětem tohoto vynálezu a které zcela neočekávaně mají veškerou farmakologickou účinnost, již projevují solí S-adenosylmetioninu, a nadto mají stejnou nebo větší stálosti i při vyšších teplotách a větší biologickou využitelnost.
Zejména tato posledně uvedená vlastnost umožňuje připravit farmaceutické prostředky pro orální aplikaci, které jsou velmi vhodné pro humánní lékařství.
Sloučeniny obecného vzorce I, které jsou obzvláště výhodné v tomto směru, zahrnují estery obecného vzorce II
A .nHA
COOR nh2 kde
R znamená alifatický zbytek s 1 až 6 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, a” znamená ekvivalent druhového aniontu silné anorganické nebo organická kyseliny o pK menším než 2,5, m znamená 1 a n se může měnit od 0 do 4, výhodně však znamená 3, a acylované deriváty obecného vzorce III
/III/ kde symbol R^, který je stejný nebo odlišný ' od R.,, znamená alifatický nebo aromatický acylový zbytek se 2 až 12 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, právě tak jako symbol r 2,
A znamená ekvivalent anorganické nebo organické kyseliny o pK menším než 2,5, m znamená 0, a 4 n může se měnit od 1 do 5, avšak s výhodou znamená 4.
Rovněž bylo zjištěno, že stálost nových sloučenin /I/, vyrobených způsobem podle vy- 3 nálezu, je podstatně ovlivněna počtem ekvivalentů kyseliny vázaných na každou molekulu U sloučenin obecného vzorce II se max. stálosti dosáhne, je-li n r 3, zatímco u sloučenin obecného vzorce III se max. stálosti dosáhne, je-li n « 4.
Údaje o stálosti některých z nových sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu jsou uvedeny v následujících tabulkách. V tabulce I jsou uvedeny údaje o stálosti některých esterů obecného vzorce Ы, kde n je vždy rovno 3, ve vodném roztoku při teplote 100 °C a při různých hodnotách pH, v porovnání se stálostí S-adenosylmetioninu.
I
Tabulka I
R pH roztoku Teplota °c 15 min. Rozklad /v %/ po 240 min.
30 min. 60 min.
H 2 100 80 100 100 100
H 3 100 90 100 100 100
H 4 100 100 100 100 100
CH3 2 100 5 10 21 75
CH3 3 100 6 13 25 100
CH3 4 100 8 18 40 100
C2H5 2 100 2 4 8 35
C2«5 3 100 3 6 13 55
c2h5 4 100 5 9 19 80
C4“9 2 100 2 4 8 30
C4*9 3 100 3 6 12 52
c4h9 4 100 4 9 17 75
Acylové deriváty obecného vzorce III vykazují v roztoku nevalnou stálost, takže za těchto podmínek je nutno pokládat estery za lepší.
V tabulce II je uvedena stálost některých acylových derivátů S-adenošýlmetionu obecného vzorce III v suchém stavu při tep!otě 45 °C v porovnání se stabilitou S-adenosylmetioninu.
Tabulka 2
Sloučenina 60 dnech Odbourání /v %/ při 45 °C po
120 dnech 180 dnech 240 dnech 360 dnech
S-adenosylmetionin.HjSO^ 80 100 100 100 100
monoacetyl-S-adenosylmetionin.2H_SO. /r2 3 H/ 2 4 0 1,4 3 4,6 5,5
triacetyl-S-adenoxyl- metionin.2H2SO4 1 1,9 4,1 5,9 8
Estery obecného vzorce II jsou v suchém stavu pri teplotě 45 °C stálé ^vale.
Jak již bylo uvedeno, je další·velmi významnou výhodou těchto nových sloučenin obecného vzorce I jejich schopnost procházet buněčnými přepážkami.
Údaje uvedené v tabulce III dokládají tuto výhodnou vlastnost uvedených nových produktů .
Při prvním testu, označeném jako in šitu /intestinální vaky/, se 2 mg každého ze zkoumaných produktů v 1 ml fyziologického roztoku vnesou do intestinálních vaků upravených v krysách anestetizovaných éterem. Po 2 hodinách se krysy usmrtí a zbytkový obsah vaku /stěna + obsah/ se analyzuje..
Při druhém pokusu se použije částí střeva obráceného vnitřkem ven, které se inkubují při teplote 37 oC podle metody Krebs - Ringera proti vnější konccenraci i produktu 10 M.
Všechny testované produkty se přemění v sooi působením kyseeiny sírové, u nichž m je O nebo 1 a n je 3.
Tabulka III
Testovaná sloučenina Absom· •a testované látky ze střeva obráceného vniřke^m ven nmooy/h/mg tkáně
R R1 R2 ve vacích 4 z dávky
H H H 5 0,009
CH3 II H 55 0,078
C2H5 H H 59 0,061
C3H7 H H 61 0,045
СЛ H H 65 0,037
VHn H H 68 0,025
Cgh13 · H H 67 0,023
H C0CH3 H 10 0,046
H CO^Hg H 18 0,028
H COCrHc 6 5 H 12 0,017
H p-toluénsulf0n H 13 0,021
H sukkinyl H 25 0,016
H glutaryl H 23 0,018
H oktyl H 62 0,023
H dodecyl II 65 0,019
H COCH3 COCH „ 65 0,047
H COC 4 H9 C0C4Hg 87 0,031
H sukciny1 COCH3 91 0,035
Nové sloučeniny obecného vzorce I se připravší dále uvedenými, postupy.
PPi způsobu podle vynálezu
A/ k přípravj esterů S-adenooyУmekioninž obecného vzorce II je možno vyjít z kterékooi sooi S-adenooyУmkioninž připravené známými metodami. Výhodně se jako výchozí sloučeniny ponuce sulfátu.
Připraví se roztok o koncentraci 1 ai 3 % /s výhodou u 2 % koncentrované kyseliny sírové v bezvodém alkoholu, jiaz se má S-adcnooyУτmkionin esserifkkovat.
Za míchání se přidá dostatečné nmost.', S-adenosylraaeioninsv Lf atu, aby se dosáhlo konečné koncentrace iontů S-adenosy laetion i n a v re^.n-i·...*] l'i az 100 g/Ho , s výhodou 50 g/litr.
Při poouití alkoholů o nízké molekuec·/’? hioonoosi se získá Čirý roztok, zatímco při poiouiti alkohelů o vysoké molekulová imornos ; .e získá suspenze.
Podle toho, jakého alkoholu se p^iuije, se získá roztok nebo suspenze, která se pak zahřívá pod zpětným chladičem. Po skončení reakce vznikne ve všech případech čirý roztok.
Kromě esteru S-adenoosymeeioninu obsahuje výsledná reakční směs malé zbytkové mnoóisví
S··’aů·?rnssjlktíonicž /nanejvýš 5.%/ a razná m^noisví. produktů tepelného rozkladu S-adenosylnecp-odie druhu použitého alkoholu.
.241123
Tyto podíly jsou v rozmezí od 80 % esteru a 20 % produktů rozkladu v případě metylesteru, až do 50 % esteru a 50 % produktů rozkladu v případě alkoholů o 5 až 6 atomech uhlíku.
PO skončení zahřívání pod zpětným chladičem se reakční směs ochladí a přidá se stejný objem vody /nebo se směs extrahuje vodou, jestliže alkohol se nemísí s vodou/.
Nadbytek kyseliny sírové se odstraní úpravou pH na hodnotu 3 přidáním zásadité pryskyřice v OH -cyklu. /Amberlite IRA 401 nebo Amberlite IRA 93/
Pak se pryskyřice odfiltruje a podrobí regeneraci.
Při použití alkoholů mísitelných s vodou se alkohol odpaří za sníženého tlaku.
Jestliže zbytkové množství S-adenosylmetioninu v takto získaném roztoku převyšuje 1 %, zahřívá se roztok 20 minut k varu, aby se zbytek S-adenosylmetioninu rozložil.
pH se upraví na 6,5 za míchání a roztok se nectá projít sloupcem pryskyřice v H+ -cyklu na bázi alabé kyseliny /Amberlite IRC 50 nebo CG 50/, která se předtím promyje vodou, za těchto provozních parametrů sloupce:
- poměr průměru pryskyřičného lože k jeho výšce: 1:10
- množství esteru S-adenosylmetioninu, připadající na 1 litr pryskyřice: 20 g
- průtokové množství za ' 1 hodinu: objem sloupce.
Pak se sloupec promyje vodou a 0,1 N kyselinou octovou v množství odpovídajícím objemu sicupue, až pH eluátu dosáhne hodnoty 3.
poté se sloupec znovu promyje dalším objemem vody.
Ester S-adenosylmetioninu se pak eluuje 0,1 N kyselinou sírovou /nebo jinou silnou kyselinou, jestliže se má připravit jiná sůl/.
Takto získaný roztok se zkoncentruje za sníženého tlaku na koncentraci 50 g/litr, načež se přefiltruje přes aktivní uhlí /použité v množství 0,1 množství esteru S-adenosylmetioninu/, množství kyseliny se upraví na požadovanou hodnotu /3 až 5 ekvivalentů, s výhodou 4/, přidáním koncentrované kyseliny sírové /nebo jiné silné kyseliny/ a výsledný roztok se pak lyofilizuje.
B/ Acylové deriváty S-adenosylmetioninu obecného vzorce III
Výchozí látkou je opět kterákoliv rozpustná sůl S-adenosylmetloninu, výhodně sulfát.
Připraví se vodný roztok soli S-adenosylmetioninu o koncentraci S-adenosylmetioninu v rozmezí 50 až 200 g/Mtr s výhodou 100 g/litr. Tento roztok se ochladí na teplotu 1 °C, na které se udržuje chlazením, zatímco se pH upraví na hodnotu 7 přídavkem 2 N hydroxidu sodného.
Podle druhu požadovaného derivátu se postupuje takto:
- Monoacylové deriváty alifatických kyselin o 2 až 6 atomech uhlíku a aromatických kyselin:
Acylační činidlo /anhydrid nebo chlorid zvolené kyseliny/ se přidá v malých podílech v molárním poměru 1:1,2 vztaženo na množství S-adenosylmetioninu, přičemž se teplota udržu7
Po skončení reakce /což se projeví tím, že se pH už nemění/ se teplota reakční směsi ponechá vystoupit na 20 °C.
Pak se roztok zředí na koncentraci 20 g/litr a případně vzniklá sraženina se odfiltruje.
Konverze S-adenosylmetioninu v monoacylový derivát je vyšší než 90 %.
Takto získaný roztok se chromatografuje na iontoměničové pryskyřici.
- Monoacylové deriváty alifatických kyselin o 7 až 12 atomech uhlíku:
Chlorid zvolené kyseliny se rozpustí, v molárním poměru 1:3, vztaženo na množství S-adenosylmetioninu, v bezvodém rozpouštědle /acetonu, dimetylformamidu, dimetylsulfoxidu nebo pod./ k získání 10% roztoku, a tento roztok se pak přidává po malý cl dávkách, přičemž se teplota udržuje na 1 °C a pH na hodnotě 7 přidáváním 2 N roztoku NaOH.
po skončení reakce se teplota reakční sitési nechá vystoupit na 20 °C.
Vzniklý roztok se zředí na koncentraci 20 g/litr, rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a vyloučená sraženina se odfiltruje.
Konverze v monoacylový derivát je v tomto případě přibližně 80%.
Takto získaný roztok se chromatografuje na iontoměničové pryskyřici.
- Triacylové deriváty alifatických a směsných kyselin o 2 až 6 atomech uhlíku:
Acylační činidlo se přidá v molárním poměru od 1:5 k 1:10, vztaženo na množství S-adenosylmetioninbi, přičemž se teplota stále udržuje na 1 °C a pH na hodnotě 7 přidáváním 2 N roztoku NaOH.
po skončení reakce se teplota reakční směsi nechá vystoupit na 20 °C*
Konverze S-adenosylmetioninu v triacylový derivát je přibližně 80%.
Získaný roztok se pak zředí na koncentraci 20 g/litr, a případně vzniklá sraženina se odfiltruje.
Takto získaný roztok se chromatografuje na iontoměničové pryskyřici.
Ve všech uvedených případech se použije sloupce pryskyři.ce v H+-cyklu na bázi slabé kyseliny : Amberlite IRC 50 nebo CG 50/, předem promyté vodou, za dodržování těchto provozních parametrů:
- poměr průměru lože pryskyřice k jeho výšce: 1:10
- množství derivátu S-adenosylmetioninu, připadající na 1 1 pryskyřice: ' 20 g
- průtokové množství za 1 hodinu: objem sloupce.
Sloupec se pak promyje 1 objemem vody a 0,1 N kyseliny octové, až pH eluátu dosáhne hodnoty 3. Pak se promyje 20 mN ^SO^ až do úplného vymytí zbytku S-adenosylmetioninu a jiných vedlejších produktů, a požadovaný produkt se eluuje 0,1 N H2SO4 /nebo jinou silnou kyselinou, má-li se připravit jiná sůl/.
Takto získaný roztok se zahustí za sníženého tlaku na koncentraci 50 g/litr.
Pak se roztok přefiltruje přes aktivní uhlí /použité v množství 0,1 množství derivátu S-adenosylmetioninu/, množství kyseliny se upraví na požadovanou stechiometrickou hodnotu a roztok se lyofilizuje.
C/ Smíšené deriváty obecného vzorce I
Deriváty S-adenosylmetioninu, u nichž symboly R, R a R^ mají vždy jiný význam než vodík, se připraví tak, že se nejprve provede esterifikace, jak popsáno v odstavci A/, načež se vzniklé estery podrobí acylacl ve vodném roztoku, jak popsáno v odstavci B/.
K bližšímu objasnění vynálezu jsou v dalším uvedeny příklady provedení, na něž však vynález není omezen.
Příklad 1
Množství S-adenosylmetioninsulfátu, odpovídající 1 kg iontů S-adenosylmetioninu, se rozpustí ve 20 litrech metanolu obsahujících koncentrovanou kyselinu sírovou v objemovém množství 2 %. Vzniklý roztok se zahřívá 16 hodin pod zpětným chladičem. Pak se ochladí a zředí 20 litry destilované vody.
Zředěný roztok se zpracuje zásaditou pryskyřicí v OH -cyklu /Amberlite IRA 93/, která se předem aktivuje 2 N roztokem NaOH a promyje do neutrální reakce, až pH roztoku dosáhne hodnoty 3. Použije se přibližně 15 litrů pryskyřice.
Směs se zfiltruje a promyje destilovanou vodou. Metanol se odpaří za sníženého tlaku. Roztok se zahřívá 20 minut k varu pro odstranění posledních stop nezreagovaného S-adenosylmetioninu, načež se ochladí.
Připraví se sloupec pryskyřice v H+-cyklu na bázi slabé kyseliny /Amber^te IRC 50/ ze 40 litrů pryskyřice aktivované 100 litry 0,5 N H2SO4 a promyté do neutrální reakce. Výše získaný roztok se zneutralizuje na pH 6,5, přidáním 2 N roztoku NaOH a nechá se projít výše uvedeným sloupcem pryskyřice rychlostí 40 1/h. Sloupec se pak promyje 40 litry vody.
Sloupcem pryskyřice se nechá projít 0,1 N roztok kyseliny octové, až pH eluátu dosáhne hodnoty 3 /přibližně 200 litrů množství/, načež následuje průtok 40 litrů destilované vody.
Pak se sloupec eluuje 60 litry 0,1 N H2SO4- Eluát se zahustí za sníženého tlaku /při teplotě 35 °C za tlaku 4 kPa/ na objem asi 10 litrů, přidá se 50 g aktivovaného uhlí a směs se zfiltruje. Pak se roztok titruje.
Přidá se dostatečné množství koncentrované kyseliny sírové k dosažení poměru molárního množství metylesteru S-adenosylmetioninu k molárnímu množství kyseliny sírové 1:2, načež se roztok lyofilizuje.
Získá se 820 g produktu o složení;
metylester S-adenosylmetioninu 66,8 %
h2so4 31,7 i
voda 1,5 %
což odpovídá vý- ' žku 54,7 %, vztaženo na ion S-adenosylmetioninu.
c Při vysokotlaké kapalinové chromatografické analýze /sloupec Partisilu 10 SCX, eluační činidlo, 0,1 M mravenčan amonný o pH 4, 20 % metanolu, průtoková rychlost 1 ml/min./ produkt . v' r vykazuje jediný pík s aretační dobou 580 sekund.
Produkt lze identifikovat podle UV spektra a NMR spektra.
UV spektrum:
při pH 4, maximální absorpce při 258 nm s e«14 040 při pH 1, maximální absorpce při 257 nm s ει 13 500.
NMR spektrum:
při 3 p.p.m., singlet skupiny S-CH^ při 3,7 p.p.m., singlet skupiny R-C-O-CH_.
i! J
Jestliže se stechiometrické složení upraví před lyofilizací na poměr metylester S-adenosylmetioninu: kyselina sírová 1:1,5 resp. 1:2,5 a roztok se pak lyofilizuje, získají se tyto soli:
- metylester S-adenosylmetioninu . 1,5 ^SO4 . 0,5 H20
- metylester S-adenosylmetioninu . 2,5 ^SO^ . 0,5 H20.
Jestliže se sloupec pryskyřice IRC 50 eluuje kyselinou chlorovodíkovou místo kyselinou sírovou, získají se tyto soli:
- metylester S-adenosylmetioninu . - metylester S-adenosylmetioninu . . 3 HCl . . 4 HCl . . 0,5 H20
. 0r5 H20
- metylester S-adenosylmeeioninu . , 5 HCl . . 0,5 H 2o.
Podobně, použije-li se kyseliny metansulfonové, získají se příslušné metansulfonáty.
Analytické údaje těchto solí jsou uvedeny v následující tabulce:
Sůl
Empirický vzorec
Analýza E.% 1 cm /%/ pH »4
metyles^]. C16H27N 6°11S2,5·0' 5 H2° vypočteno: N 14,79 S 14 ,08 247
.1,5 H2SO..O,5 H„0 2 4 2 nalezeno: N 14,78 S 14 ,01
metylester. C16H28N 6°13S3‘0'5 h2° vypočteno: N 13, 61 S 15 ,56 228
.2 H2SO4.O,5 H?0 nalezeno: N 13,73 S 15 ,61
mety^ste^ C16H29N ЛУ53,5·0' 5 H2° vypočteno: N 12,61 S 16 ,82 211
. 2,5 H2SO4.O,5 H20 nalezeno: N 12,59 S 16 ,72
mety^ste^ C16H27N .°5SC13.0,5 0 Э J h2° vypočteno: N 15,85 S 6, 04 265
. 3 HCl.0,5 H20 nalezeno: N 15,79 S 6, 01
metyles^!·. C16H28N 6°5SC^O' 5 h2° vypočteno: N 14,81 S 5, 64 248
. 4 HCl.0,5 H20 nalazeno: N 14,87 S 5, 65
metyltster. St29 6°6SC1y0'5 h2° vypočteno: N 13,93 S 5, 31 233
.5 HCl.0,5 H9O nalezeno: N 13,95 S 5, 29
metylester. W3^ 6°l4Sr°'5 H2° vypočteno: N 11,85 S 18 ,05 198
.3 CH3S03H.0,5 H20 nalezeno: N 11,87 S 17 ,99
Pokračování tabulky
Sůl Empirický vzorec Analýza /V Ε.o 1 cm 1 % pH 4
metylester. .4.CH3SO3H.O,5 H20 C2OH4ON6°17S5·0'5 H2° vypočteno: N 10,43 S 19,88 nalezeno: N 10,49 S 19,86 174
metylester. .5 CH3SO3H.O,5 H20 C21H44N6°2OS6·0'5 «2° vypočteno: N 9,32 S 21,31 nalezeno: N 9,29 S 21,35 156
Příklad 2
Postupuje se jako v příkladu 1, přičemž se použije bezvodého etanolu obsahujícího 2 % kyseliny sírové.
Získá se etylester S-adenosylmetioninu vzorce etylester S-adenosylmetioninu . 2 H2SO4 . . 0,5 H20.
UV spektrum:
při pH 4, maximální absorpce při 258 nm s ε * 14 040 při pH 1, maximální absorpce při 256 nm s ε 13 500
NMR spektrum:
při 1,25 p.p.m., triplet skupiny R-CHO ♦ J pri 3 p.p.m., singlet skupiny S-CH3 při 4,2 p.p.m., kvadruplet skupiny R-C-O-CH2-R
II
Při vysokotlaké kapalinové chromatografické analýze za podmínek, uvedených v př. 1, produkt vykazuje jediný pík s retenční dobou 600 s.
Jako v příkladu 1, je možno získat celou řadu solí, totiž:
etylester S-adenosylmetioninu . 1,5 H2SO4 . 0,5 H20
etylester S-adenosylmetioninu . 2,5 H2SO . 0,5 H O
etylester S-adenosylmetioninu . 3 HC1 . 0,5 H20
etylester S-adenosylmetioninu . 4 HC1 . 0,5 H2°
etylester S-adenosylmetioninu . 5 HC1 . 0,5 H2°
etylester S-adenosylmetioninu . 3 ch3so3h . 0,5 H20
etylester S-adenosylmetioninu . 4 CH3SO3H . 0,5 H20
etylester S-adenosylmetioninu . 5 CH3SO3H . 0,5 H20
Všechny tyto soli mají UV spektrum a NMR spektrum shodné se spektry výše uvedené soli.
Příklad 3
Postupuje se jako v příkladu 1, přičemž se použije n-butanolu obsahujícího 2 % kyseliny sírové.
Nejprve se získá suspenze, která se přemění zahříváním pod zpětným chladičem v čirý roztok.
Získá se n-butylester S-adenosylmetioninu vzorce n-butylester S-adenoxylmetioninu .
. 2 H2SO4 . 0,5 ^0
UV spektrum:
při pH 4, maximální absorpce při 258 nm s ε = 14 040 při pH 1, maximální absorpce při 256 nm s ε — 13 500,
NMR spektrum při 0,9 p.p.m., triplet charakteristický pro skupinu R-CH^ při 3 ^р.п!^ singlet skupiny Š'CH^ při 4,1 p.p.m., kvadruplet charakteristický pro skupinu R-C-O-CH.-R.
II o
Při vysokotlaké kapalinové chromatografické analýze za podmínek, uvedených v příkladu 1, vykazuje produkt jediný pík s retenční dobou 650 sekund.
Za podmínek, jak byly popsány v předchozích příkladech, se získají úplné řady solí jako v příkladech 1 a 2.
Použitím n-pentanolu a n-hexanolu místo n-butanolu se získají n-pentylestery a n-hexylestery S-adenosylmetioninu.
Analytické údaje esterů S-adenosylmetioninu z příkladů 2 a 3 jsou uvedeny v následující tabulce. .
Tabulka
Sloučenina
Empirický vzorec
Analýza /%/
El% 1 cm pH > 4
etylester S-adenosyl- C17H 3ON6°13S3|·'0' 5 H2° vypočteno: N 13,29 S 15,19 222
metioninu. 2 nalezeno: N 13,27 S 15,18
n-propylester S-adenosyl-
meticninu. 2 ^5^.0,5 HjO C18« mW^'5 h2o vypočteno: N 13,00 S 14,86 217
nalezeno: N 13,02 s 14,85
n-butylester S-adenosyl- vypočteno: N 12,73 s 14,55 213
metioninu.2 ^6^.0,5 ^0 Cl9» зЛ013·0'5 H 2° nalezeno: N 12,71 s 14,52
n-pentylester S-adenosyl-
metioninu.2 HjSO^O.Š N30 W 36N6013S3·0'5 H20 vypočteno: N 12,46 s 14,24 208
nalezeno: N 12,45 s 14,25
n-hexylester S-adenosyl- caiH 3BN6013S3·0'5 H2O vypočteno: N 12,21 s 13,95 204
metioninu.T ^SO^.O^ nalezeno: N 12,23 s 13,93
Příklad 4
Množství S-adenosylmetioninsulfátu, odpovídající 1 kg iontu S-adenosylmetioninu, se rozpustí v !° 1 vody a vzn^lý roztok se ochladí ha teplotu 1 °C.
pH roztoku se upraví na hodnotu 7 přidáním 2 N roztoku hydroxidu sodného, přičemž se uvedená teplota udržuje konstantní cirkulací chladicí kapaliny.
Za udržování teploty 1 °C se během 1 hodiny přidá 285 ш1 anhydridu kyseliny octové, přičemž se pH udržuje na hodnotě 7 přidáváním 2 N roztoku hydroxidu sodného.
Po skončení přídavku anhydridu kyseliny octové se pH ponechá stabilizovat za týchž teplotních podmínek:, nataž se teplot.a ponechá vystoupit na 20 °C. Výtěžek konverze v mono acetylový derivát je 95 ϊ. Reakční směs se pak zředí 20 1 destilované vody.
0dděleně se připraví sloupec 50 1 pryskyřice v H+-cyklu na bázi slabé pryskyřice /Amberlite IRC 50/, předem aktivované 100 litry 0,5 N RSO^ a promyté do neutrální reakce.
Uvedená reakční směs se nechá procházet tímto sloupcem rychlostí 50 1/h.
Pak se pryskyřice promyje 50 1 destilované vody. Poté se kolonou nechá procházet přibližně 400 1 0,1 N roztoku kyseliny octové, dokud pH eluátu nedosáhne hodnoty 3. Sloupec se poté promyje 50 1 20 mN - odstranění posledních stop S-adenosylmetioninu, načež se eluuje 50 1 0,1 N RSCR. Roztok se zahustí za sazeného tlaku 40 kPa při teplotě 35 °C na objem přibližně 10 1, načež se zpracuje 50 g aktivovaného uhlí, které se pak odfiltruje.
Získaný roztok se titruje a přidá se dostatečné množství koncentrované kyseliny sírové, ajjy se dosáhlo molárního poměru monoacetyl-S-adenosylmetioninu: H2SO4 1:2, načež se roztok lyofilizuje.
Získá se 900 g monoacetyl-S-adenosylmetioninu . 2 I2 SO4
0,5 H2O o složení:
monoacety1-S-adenosylmetionin 68.3 %
RSO4 30.3 %
H2° 1,4 % což odpovídá výtěžku 61,5 í vztaženo na S-adenosylmetionin.
Při vysokotlaké kapalinové chromatografické analýze /sloupec PARTISILU 10 SCX, eluční činidlo 0,1 M mravenčan amonný o pH 4, 20 % metanol, průtoková rychlost 1 mi/min./ vykazuje takto získaný proddkt jediný pík s retenční dobou 360 s.
Produkt lze identifikovat jeho UV spektrem a NMR spektrem.
UV spektrm:' pří pH 4, maximální absorpce je při 258 nm s 4 « 44 <400 při pH 1, maximální absorpce je při 256 nm s c = 13 500.
NMR spektrum:
při 2 p.p.m., singlet acetylové skupiny' při 3 p.p.m., singlet skupiny S-CH2.
Získaný prodUkt neskýtá pozitivní odezvu při ninhydrínovém testu, což naznačuje modifikaci skupiny aminnkkssliny.
Úpravou molárního stechiometrického poměru na 1,5 resp. 2,5 vzhledem ke kyselině sírové před lyofilizací se získají tyto soli:
- monoacetyl-S-adenosylmetionin . 1,5 í^SO^ . 0,5 H2O
- monoacetyl-S-adenosylmetionin . 2,5 H^SO^ . 0,5 H20.
Použitím kyseliny chlorovodíkové nebo kyseliny metansulfonové místo kyseliny sírové pro eluování sloupce pryskyřice, se získají tyto soli:
- monoacetyl-S-adenosylmetionin .
- monoacetyl-S-adenosylmetionin .
- monoacetyl-S-adenosylmetionin .
- monoacetyl-S-adenosylmetionin .
- monoacetyl-S-adenosylmetionin .
- mnoacetyl^J^-ad^i^c^í^’/;Lmetl.onin .
3 HC1 . 0,5 H 2o
4 HC^l . 0,5 H2°
5 HC1 . 0,5 H2°
3 CH3S03H . 0,5 V
4 CH3S03H . 0,5 H20
5 CH^O^i . 0,5 H20
Všechny tyto soli mají táž charakteristická UV spektra a NMR spektra jako výše uvedený produkt.
Analytické údaje týkající se těchto solí jsou uvedeny v následující tabulce:
Tabulka
Sloučenina Empirický vzorec Analýza /%/ Ei% pb 1 cm 4
monoacetyl-S-adenosylmetionin. C17H22N6°12S2,5· vypočteno: N 14,07 S 13,40 235
. 1,5 H2SO4 . 0,5 H20 . 0,5 H20 nalezeno: N 14,09 S 13,49
monoacetyl-S-adenosylmetionin. C17H2SN6°14S3- vypočteno: N 13,00 S 14,86 217
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 . 0,5 H30 nalezeno: N 12,96 S 14,79
monoacetyl-S-adenosylmetionin. vypočteno: N 12,09 S 16,11 272
. 2,5 H2SO4 . 0'5 H20 .0,5 H20 nalezeno: N 12,03 S 16,10
monoacetyl-S-adenosylmetionin. vypočteno: N 17,25 S 6,57 288
. 3 HC1 . 0,5 HjO . 0,5 1Ц0 nalezeno: N 17,32 S 6,61
monoacetyl-S-adenosylmetionin. CnH28WC14· vypočteno: N 16,06 S 6,12- 269
. 4 HC1 . 0,5 H20 . 0,5 H0O nalezeno: N 16,04 S 6,09
monoacetyl-S-adenosylmetionin. vypočteno: Π 15,03 S 5,72 251
. 5 HC1 . 0,5 H20 . 0,5 H.,0 nalezeno: N 15,02 S 5,70
monoacetyl-S-adenosylmetionin. WVW4 * vypočteno: N 11,38 S 17,34 190
. 3 CH.S03H . 0,5 H20 . 0,5 H20 nalezeno: N 11,35 S 17,31
monoacetyl-S-adenosylmetionin. C21H40OV°1tíS5* vypočteno: N 10,07 S 19,18 168
. 4 CH3SO3H . 0,5 H?0 . 0,5 H30 nalezeno: N 10,09 S 19,16
monoacetyl-S-adenosylmetionin. V^W6’ vypočteno: N 9,03 S 20,65 151
. CH3SO3H . 0,5 1^0 . 0,5 II90 nalezeno: N 9,01 S 20,64
Příklad 5
Postupuje se jako v příkladu 4, avšak místo anhydridu octového se použije anhydrid kyseliny propionové resp. anhydridu kyseliny máselné, resp. hexanoylchloridu, resp. benzoylchloridu resp. p-toluensulfonylchloridu resp. anhydridu kyseliny jantarové, resp. anhydridu kyseliny glutarové. Získají se příslušné acylové deriváty S-adenosylmetioninu, jejichž analytické údaje jsou uvedeny v následující tabulce.
Tabulka
Sloučenina
Empirický vzorec
Analýza /»/ El% * 1 * * * cna pH = 4 propionyl-S-adenosylmetionin. . 2 H2SO4 . 0,5 H20 butyry1-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4.O,5 H20 hexanoy1-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 benzoyl-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 p-toluensulfonyl-S-adenosylmetionin . 2 H2SO4 . 0,5 ^0 sukcinyl-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 glutary1-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20
vypočteno
. 0,5 H20 nalezeno:
C19H32N6°14S1· vypočteno:
. 0,5 H20 nalezeno:
WAÓ· vypočteno:
. 0,5 H20 nalezeno:
WeWr vypočteno;
. 0,5 H20 nalezeno:
C22H32N6°15S4· vypočteno:
. 0,5 H20 nalezeno:
C19H30N6°16S3· vypočteno:
. 0,5 H20 nalezeno:
C20H32N6°16S3· vypočteno:
. 0,5 H20 naiazeno:
N 12,73 S 14,55 213
N 12,70 S 14,51
N 12,46 S 14,24 208
N 12,48 S 14,24
N 11,97 S 13,68 200
N 11,95 S 13,70
N 11,86 S 13,56 198
N 11,85 S 13,59
N 11,08 S 16,88 185
N 11,10 S 16,85
N 11,93 S 13,64 199
N 11,95 S 13,61
N 11,70 S 13,37 196
N 11,67 S 13,35
Příklad 6
Postupuje se jako v příkladu 4, avšak místo anhydridu kyseliny octové se použije
540 ml dekanoylchloridu v přibližně 15 1 acetonu.
Po skončení reakce se roztok zředí 20 1 vody, aceton se odpaří za sníženého tlaku a sraženina kyseliny kaprinové se odfiltruje.
Postupem podle příkladu 4 se získá dekanoy1-S-adenosylmetionin . 2 HjSO^ . 0,5 H20.
Při analýze vysokotlakou chromatografickou kapalinovou analýzou za podmínek uvedených. . v příkladu 4 jeví vzniklý produkt jediný pík s retenční dobou 340 sekund.
Produkt se též vyznačuje těmito charakteristikami UV spektra:
- při pH 4, maximální absorpce při 258 nm s 4 . 44 040.
- - při pH 1, maximální absorpce při 256 nm s ( =14 50..
Použije-li se oktylchloridu resp. dodecyklchloridu místo dekanoylchloridu, získají se tyto produkty:
- n-oktyl-S-adenosylmetionin - 2 H_S04 . 0,5 H2O resp.
- n-dodecy1-S-adenosylmetionin . 2 H2SO4 . 0,5 H20.
Analytické údaje těchto produktů jsou uvedeny v následující tabulce.
Tabulka
Sloučenina Empirický vzorec Analýza /%/ El% 1 cra pH 4
n-oktyl-S-adenosylmetionin. C23H4ON6°14S3· vypočteno: : N 11,51 S 13,15 192
. 2 H2SO4 . 0,5 Нэ0 . 0,5 H20 nalezeno: N 11,48 S 13,14
n-decyl-S-adenosylmetionin. C25H44N6°14S3· vypočteno: ; N 11,08 S 12,66 185
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 . 0,5 H20 nalezeno: N 11,10 S 12,64
n-dodecyl-S-adenosylmetionin. C27H48N6°14S3· vypočteno: N 10,69 S 12,21 179
. 2 H2S04 . 0,5 H20 . 0,5 II20 nalezeno: N 10,66 S 12,19
Příklad 7
Množství jakékoliv soli S-adenosylmetioninu, jež je ekvivalentní 1 kg iontů S-adenosylmetioninu, se rozpustí v 10 1 vody a vzniklý roztok se ochladí na teplotu 1 °C.
pH vzniklého roztoku se upraví na hodnotu 7 přidáním 2 N roztoku hydroxidu sodného, přičemž se udržuje teplota 1 °C cirkulující chladicí kapalinou. ,
Během 2 hodin se pomalu přidá 1 200 ml anhydridu kyseliny octové, přičemž se udržuje teplota 1 °C a pH na hodnotě 7 přidáváním 2 N roztoku hydroxidu sodného.
Výtěžek přeměny v triacetylový derivát je 80%.
Dále se postupuje jak popsáno v příkladu 4, čímž se získá 720 g triacetyl-S-adenosylmetioninu . 2 HoS04 . 0,5 H^O o složení:
triacetyl-S-adenosylmetionin 71,9 %
H 2S°4 26,8 %
h2° 1,3 %
což odpovídá výtěžku 51,8 %, vztaženo na S-adenosylmetionin.
Při vysokotlaké kapalinové chromatografickc analýze za podmínek popsaných v příkladu 4 jeví vzniklý produkt jediný pík s retenční dobou 820 sekund.
Vzniklý produkt se též vyznačuje těmito charakteristickými údaji UV spektra a NMR spektra.
UV spektrum:
- při pH 4, maximální absorpce při 258 nm s i; e 14 050
- při pH 1, maximální absorpce při 256 nm s c s 13 500.
NMR spektrum:
- při 2 p.p.m., singlet acetylové skupiny na metioninu
- při 2,2 p.p.m., singlet odpovídající dvěma acetylovým skupinám na ribóze, +
- při 3 p.p.m., singlet skupiny S-CH^.
Použije-li se místo anhydridu kyseliny octové anhydrid u kyseliny propionové, resp. anhydridu kyseliny máselné, získají se tyto produkty:
- tripropionyl-S-adenosylmetionin. 2 „ .· HjSO^ . 0,5 H20
- tributyryl-S-adenosylmetionin . 2 Η,δΟ^ . 0,5 H20.
Analytické údaje triacetylderivátů S-adenosylmetionlnu jsou uvedeny v následující tabulce.
Tabulka
Sloučenina
Empirický vzorec
Analýza /V El% 1 cm pH = 4 triacetyl-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20 tripropionyl-S-adenosylmetionin. . 2 H2SO4 . 0,5 H2O tributyryl-S-adenosylmetionin.
. 2 H2SO4 . 0,5 H20
C21H32N6O16S3* vypočteno: N 11,51 s 13,15
. 0,5 H20 nalezeno: N 11,50 s 13,12
C24H38N6O16S3’ vypočteno: N 10,88 s 12,43
. 0,5 н2 0 nalezeno: N 10,85 s 12,40
C27H44N6O16S3· vypočteno: N 10.32 s 11,79
. 0,5 H20 nalezeno: N 10,33 s 11,77
192
180
172
Příklad 8
Postupuje se jako v příkladu 5, čímž se získají reakční směsi obsahující hexanoyl-Sadenosylmetionin resp. benzoyl-S-adenosylmetionin, resp. sukcinyl-S-adenosylmetionin.
Během 1 hodiny se ke každé z výše uvedených směsí přidá 1 000 ml anhydridu kyseliny octové, přičemž se pH udržuje na hodnotě 7 přidáváním 2 N roztoku hydroxidu sodného a teplota se udržuje na 1 OC. Další postup je obdobný posypu popsanému v příkladu 4.
Získají se níže uvedené směsné deriváty:
- hexanoyl-diacetyl-S-adenosylmetionin . 2 H2SO^ . 0,5 H2°
- benzoyl-diacetyl-S-adenosylmetionin . 2 H2S0^ . 0,5 H20
- sukcinyl-diacetyl-S-adenosylmetionin . 2 H2S04 . 0,5 H20;
analytické údaje těchto sloučenin jsou uvedeny v následující tabulce. Tabulka
Sloučenina Empirický vzorec Analýza /%/ El% 1 cm pH » 4
hexanoyl-diacetyl-S-adenosyl- C25H4°U6O16S3· vypočteno: N 10,69 S 12,21 179
metionin . 2 H2SO4 . 0,5 1Ц0 2 4 '2 . 0,5 H20 nalezeno: N 10,68 S 12,19
benzoyl-diacetyl-S-adenosyl- C26ÍI34:,6O16S 3' vypočteno: N 10,61 S 12,12 177
metionin . 2 H2SO4 . 0,5 H20 . 0,5 HnO nalezeno: N 10,60 S 12,10
sukcinyl-diacetyl-S-adenosyl- AAVW3* vypočteno: N 10,66 S 12,18 178
metionin . 2 H^SO^ . 0,5 H,0 . 0,5 Ho0 nalezeno: N 10,63 S 12,20
Všechny tyto deriváty vyrobené způsobem podle vynálezu byly podrobeny tesům v širotata farmakologickém programu a ve všech případech prokázaly vysokou účinnost a nízké hodnoty toxicity.
Bylo zjištěno, že účinnost nových sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu, závisí převážně na jejich schopnosti uvolňovat v organismu kation S-adenosylmetioninu a na schopnosti tohoto působit jako dárce metylových skupin jakožto přirozeného substrátu velkého počtu trans-metylázových enzymů, které katalyzují základní reakce lipidového, protidového a glucir dového metabolismu.
Důležitost nových sloučeniny vyrobených způsobem podle vynálezu tedy vyplývá v podstatě z okolnosti, že činí S-adenosylmetionin absolutně stálým, takže umožňují, aby jeho transmetylační účinnost v lidském organismu byla využita na 100 % bez nebezpečí vzniku toxických produktů odbourání, které negativně zasahují do biologických dějů aktivovaných kationtem S-adenosylmetioninu.
Sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu též umožňují, že S-adenosylmetionin prostupuje buněčnými přepážkami a tím se stává vysoce biologicky využitelným.
Toxicita
Při stanovení akutní toxicity na myši byly ve všech případech zjištěny tyto hodnoty:
LDjq při orální aplikaci: vyšší než 3 g/kg
LDjjQ při intravenozní aplikaci: vyšší než 1 g/kg.
Testy snášenlivosti a chronické toxicity byly provedeny na krysách druhů Wistar a Sprague-Dowley; při těchto testech byla pokusným zvířatům podávána testovaná sloučenina v množství 20 mg/kg denně po dobu 12 měsíců. Po skončení testů nebyly na jednotliných orgánech a systémech pokusných zvířat zjištěny žádné patologické změny.
Teratogenní testy byly provedeny na králících. Ani po aplikaci desateronásobných dávek oproti maximálním terapeutickým dávkám nebyl zjištěn žádný teratogenní nebo znetvořující účinek na zárodky nebo vyvinuté plody.
Intravenozní aplikace dávek až 200 mg/kg nevyvolala u králíků žádný pyrogenní projev.
Žilní aplikace 40 mg/kg u králíka ani krysy nevyvolala žádnou změnu tlaku v krční tepně, ani změnu frekvence srdečních tepů nebo dýchání, ani žádnou změnu na elektrokardiogramu.
Lokální snášenlivost intramuskulární injekce, i po aplikacích opakovaných po dobu až 60 dnů, a intravenozní injekce do okrajové žíly ušního boltce králíků, byla velmi dobrá.
Farmakologie
Celá řada pokusů provedených na krysách ukázala, že nové sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu mají velmi značný ochranný a rozháněcí účinek při steatóze jater ' vyvolané podle Handlera hyperlipidní hyperproteinovou dietou a při steatíze vyvolavé akutní alkoholickou Qtra« vou a jinými toxickými činidky, i při aplikaci dávek 10 mg/kg kationtů S-adenosylmetioninu;
Při experimentální hyperlipemii u krysy, vyvolané například Tritonem S, prokázaly nové sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu velmi výraznou hypolipemickou účinnost, která - v poměru k použité dávce, tj. 10 mg/kg /opět vyjádřené jako kationty S-adenosylmetioninu/ - byla mnohem intenzivnější než při použití jiných látek majících hypolipemickou účinnost.
U kuřat s aterosklerózou, vyvolanou dietou obohacenou cholesterolem a fruktózou, snížila parenterální aplikace nových sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu v dávce 10 mg/kg cholesterolemii a příznivě ovlivnila poranění, vyskytující se u kontrolních zvířat na hrudní a břišní aortě a na malých cévách spodiny mozku.
Pokud jde o fosfolipidový metabolismus, bylo pokusně zjištěno, že dohází ke zvýšení množství fosfatidylcholinu v jaterní tkáni krys při nezkompenzované steatóze. Bylo též pozorováno zřetelné zvýšení množství fosfatidylcholinu . na úkor tematických alfa-lipoproteinu při pokusných změnách vyvolaných různými poměry beta/alfa lipoproteinu.
Všechny tyto testy zřetelně ukázaly léčivý účinek nových sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu při změnách metabolismu lipidů.
Další řada testů provedených na krysách ukázala, že aplikace dávek 1 mg/kg vyvolává hromadění zásob glykogenu v játrech a svalech, což lze dokázat jak histochemickými metodami, tak kvantitativním stanovením. Při cukrovce, pokusně vyvolané alloxanem, se aplikací sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu v dávce ekvivalentní 0,5 mg/kg kationtu S-adenosylmetioninu značně snížilo množství insulinu potřebné pro navrácení hladiny cukru na normální hodnotu.
Tato řada testů prokázala zřetelně kladný účinek sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu na metabolismus glycidů.
Při jiné řadě zkoušek byly krysám s experimentálně vyvolanou hypodisproteinemií aplikovány dávky 10 mg/kg derivátů S-adenosylmetloninu. Bylo zjištěno, že tyto sloučeniny vrací hladinu veškerých proteinů v krvi na normální hodnotu tím, že podstatně zvyšují hladinu albuminu a vyznačují se tedy výraznou účinností při anabolismu proteinů.
Tyto a jiné obdobné testy prokázaly léčebný účinek sloučeniny vyrobených způsobem podle vynálezu př-i poruchách proteidového metabolismu.
Souhrnně řešeno, na základě výše krátce popsaných farmakologických zkouškách a mnoha jiných zkoušek, které umožnily průzkum účinnosti nových sloučenin vyrobených způsobem podle vynálezu ve všech ohledech v lidském organismu, byla klinicky zjištěna účinnost těchto sloučenin v hepatologii při akutních a chronických otravách jater, dále v neurologii jakožto antidepresivních látek a v osteologii při rheumatoidní arthritidě.
Účinnost těchto sloučenin v řadě jiných oblastí humánního lékařství se stále ještě zkoumá.
Zcela nečekaně projevují tyto sloučeniny též značnou protizánétlivou a analgetickou účinnost.
Nové sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu se mohou aplikovat orálně nebo intramuskulárními či intravenózními injekcemi. Poněvadž však se vyznačují větší intestinální absorpcí než S-adenosylmetionin, jsou obzvláště vhodné pro přípravu farmaceutických prostředků pro orální aplikaci..
Jinými možnými formami aplikace jsou čípky, očkovací kapaliny, aerosoly, nebo prostředky pro zevní aplikaci.

Claims (2)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    1. Způsob výroby derivátů S-adenosylmetioninu obecného vzorce I /I/, ve kterém
    R znamená vodík nebo alkylový zbytek s 1 až 6 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, znamená vodík nebo aromatický nebo alifatický acylový zbytek o 2 až 12 atomech uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci,
    R2 znamená vodík nebo aromatický nebo alifatický acylový zbytek o 2 až 12 atomech uhlíku, m znamená 0 nebo 1, n znamená 0 až 5 a
    A znamená ekvivalent aniontu anorganické nebo organické kyseliny o pK menším než 2,5, přičemž symbol má stejný nebo odlišný význam od symbolu R2 a přičemž symbol Rj, má jiný význam než vodík v případě, že R znamená vodík, vyznačující se tím, že se sůl S-adenosylmetioninu ve vodném roztoku esterifikuje zahříváním pod zpětným chladičem s alkoholem obecného vzorce ROH, ve kterém R má výše uvedeným význam, obsahujícím 1 až 3 % kyseliny sírové a/nebo se acyluje působením aktivované kyseliny obecného vzorce R^X a/nebo R2X, ve kterém a R^ znamenají výše zmíněné acylové zbytky а X znamená aktivní skupinu, při teplotě 1 °C a pH 7, načež se vzniklý produkt přečistí průchodem svého vodného roztoku sloupcem pryskyřice na bázi slabé kyseliny, eluuje zředěným vodným roztokem příslušné kyseliny obecného vzorce HA, ve kterém A má výše uvedený význam, а к získanému vodnému roztoku se po zahuštění přidá stechiometrické množství kyseliny, potřebné к dosažení zvolené hodnoty symbolu j),.
  2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako асуladního činidla použije anhydridu nebo chloridu kyseliny.
CS826560A 1981-09-11 1982-09-10 Method of s-adenosylmethionine derivatives production CS241123B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT23940/81A IT1139974B (it) 1981-09-11 1981-09-11 Derivati della s-adenosilmetionina,processo per la preparazione e composizioni terapeutiche che li contengono come principio attivo

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS656082A2 CS656082A2 (en) 1985-07-16
CS241123B2 true CS241123B2 (en) 1986-03-13

Family

ID=11211012

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS826560A CS241123B2 (en) 1981-09-11 1982-09-10 Method of s-adenosylmethionine derivatives production

Country Status (25)

Country Link
US (1) US4558122A (cs)
EP (1) EP0074555B1 (cs)
JP (1) JPS5857397A (cs)
AT (1) ATE14884T1 (cs)
AU (1) AU564577B2 (cs)
CA (1) CA1213886A (cs)
CS (1) CS241123B2 (cs)
DE (1) DE3265425D1 (cs)
DK (2) DK149957C (cs)
ES (1) ES8403494A1 (cs)
FI (1) FI74290C (cs)
GR (1) GR76720B (cs)
HU (1) HU186117B (cs)
IL (1) IL66713A (cs)
IT (1) IT1139974B (cs)
MX (1) MX5670A (cs)
NO (1) NO153397C (cs)
NZ (1) NZ201824A (cs)
PL (1) PL141706B1 (cs)
PT (1) PT75516B (cs)
RO (1) RO85286B (cs)
RU (1) RU2041235C1 (cs)
SU (1) SU1340592A3 (cs)
YU (1) YU43092B (cs)
ZA (1) ZA826408B (cs)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1169773B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina
CA1291092C (en) * 1988-03-11 1991-10-22 Donald A. Poole Easy opening gable top carton
IT1229514B (it) * 1989-01-30 1991-09-03 Farmhispania S A A Montme Glicoconiugati anfifilici sintetici per impiego neurologico.
JPH02290896A (ja) * 1989-04-28 1990-11-30 Fuji Kagaku Kogyo Kk 新規なｓ―アデノシルメチオニン誘導体
US5180714A (en) * 1990-10-31 1993-01-19 Health Research, Inc. Adenosine compounds for the treatment of diseases caused by parasitic protozoa
US8642581B1 (en) 2000-02-11 2014-02-04 Brian D. Halevie-Goldman Compositions and methods for the production of S-adenosylmethionine within the body
US6649753B2 (en) * 2001-06-07 2003-11-18 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation
US20040116351A1 (en) * 2002-12-06 2004-06-17 Fast Balance, Inc. Method for enhancing the natural reward system for exercise
US20050272687A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-l-methionine
US20090012036A1 (en) * 2005-05-24 2009-01-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-L-methionine
ITMI20060629A1 (it) 2006-03-31 2007-10-01 Daniele Giovannone Composizioni solide orali a base di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento
JP2008013509A (ja) * 2006-07-07 2008-01-24 Fujifilm Corp Ｓ−アデノシルメチオニンの保存方法
ITMI20071374A1 (it) * 2007-07-10 2009-01-11 Gnosis Spa Sali stabili di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento.
US20100004191A1 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Rolland F Hebert Compositions of S-adenosyl-L-methionine.
US20130210664A1 (en) 2010-08-05 2013-08-15 Cellzome Ag Methods for the Identification of Methyltransferase Interacting Molecules and for the Purification of Methyltransferase Proteins
JP6479681B2 (ja) 2013-01-16 2019-03-06 ヘーベルト サム−イー エルエルシー Ｓ−アデノシル−ｌ−メチオニンの安定なインドール−３−プロピオネート塩
WO2015028927A1 (en) * 2013-08-25 2015-03-05 Mahesh Kandula Compositions and methods for the treatment of metabolic diseases
DK3153414T3 (en) 2015-10-05 2018-06-25 Tetra Laval Holdings & Finance APPLICATION UNIT TO APPLY A COVER TO A CONTAINER

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2969353A (en) * 1957-02-06 1961-01-24 Merck & Co Inc Process for the preparation of "active methionine" and products obtained thereby
DE1803978C2 (de) * 1968-10-18 1985-05-02 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur Gewinnung von S-Adenosyl-l-methionin und S-Adenosyl-l-ethionin
IE37913B1 (en) * 1972-08-02 1977-11-09 Bioresearch Sas Salt of s-adenosyl-l-methionine
US4028183A (en) * 1973-06-27 1977-06-07 Bioresearch Limited Process of preparing double salts of S-adenosyl-L-methionine
IE39517B1 (en) * 1973-06-27 1978-10-25 Bioresearch Sas Double salts of s-adenosyl-l-methhionine
JPS5320998B2 (cs) * 1974-06-13 1978-06-29
FR2275220A1 (fr) * 1974-06-21 1976-01-16 Merieux Inst Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus
AR221676A1 (es) * 1974-07-12 1981-03-13 Bioresearch Sas Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico
GB2001976B (en) * 1977-08-03 1982-03-10 Yamasa Shoyu Kk S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof
GB2064523B (en) * 1979-12-04 1983-06-29 Kanegafuchi Chemical Ind Stable composition of s-adenosyl-l-methionine
JPS5699499A (en) * 1980-01-10 1981-08-10 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Composition containing s-adenosyl-l-methionine, and its preparation
JPS56145299A (en) * 1980-04-11 1981-11-11 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Purification of s-adenosyl-l-methionine
JPS57156500A (en) * 1981-03-23 1982-09-27 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Composition containing s-adenosyl-l-methionine and its preparation

Also Published As

Publication number Publication date
FI823142L (fi) 1983-03-12
DK349085D0 (da) 1985-08-01
DK349085A (da) 1985-08-01
EP0074555B1 (en) 1985-08-14
RU2041235C1 (ru) 1995-08-09
PL238201A1 (en) 1983-05-09
DK405382A (da) 1983-03-12
AU8813582A (en) 1983-03-17
IT1139974B (it) 1986-09-24
AU564577B2 (en) 1987-08-20
HU186117B (en) 1985-06-28
IL66713A0 (en) 1982-12-31
EP0074555A1 (en) 1983-03-23
DK155332C (da) 1989-08-14
FI823142A0 (fi) 1982-09-10
RO85286B (ro) 1984-10-30
PL141706B1 (en) 1987-08-31
NO153397C (no) 1986-03-12
CA1213886A (en) 1986-11-12
JPH0149276B2 (cs) 1989-10-24
YU204682A (en) 1985-06-30
ATE14884T1 (de) 1985-08-15
CS656082A2 (en) 1985-07-16
DE3265425D1 (en) 1985-09-19
DK149957C (da) 1987-06-15
ES515613A0 (es) 1984-04-01
RO85286A (ro) 1984-09-29
ZA826408B (en) 1983-07-27
FI74290C (fi) 1988-01-11
IL66713A (en) 1987-08-31
JPS5857397A (ja) 1983-04-05
DK149957B (da) 1986-11-03
FI74290B (fi) 1987-09-30
GR76720B (cs) 1984-08-29
YU43092B (en) 1989-02-28
MX5670A (es) 1994-01-31
NO823088L (no) 1983-03-14
US4558122A (en) 1985-12-10
SU1340592A3 (ru) 1987-09-23
DK155332B (da) 1989-03-28
NO153397B (no) 1985-12-02
PT75516A (en) 1982-10-01
IT8123940A0 (it) 1981-09-11
PT75516B (en) 1985-07-26
NZ201824A (en) 1986-05-09
ES8403494A1 (es) 1984-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS241123B2 (en) Method of s-adenosylmethionine derivatives production
US3954726A (en) Double salts of S-adenosil-L-methionine
US4057686A (en) Sulphonic acid salts of S-adenosilmethionine
US3893999A (en) Salt of S-adenosil-L-methionine and process of preparation
US4465672A (en) Stable S-adenosylmethionine salts, the process for their preparation, and therapeutic compositions which contain them as active principle
US5073546A (en) Lipophilic salts of S-adenosyl-L-methionine (SAM) with acylated taurine derivatives
US3832341A (en) Purine nucleoside nitrates
FI72525B (fi) Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stabila s-adenocylmetioninsalter.
US4028183A (en) Process of preparing double salts of S-adenosyl-L-methionine
RU2190598C2 (ru) Производные тиоколхицина, способы их получения, соединение, фармацевтическая композиция
JPS61176598A (ja) シチジン−ジホスフエ−ト−コリンのアシル化誘導体、その製造方法及びその治療的使用
US4157439A (en) Novel nitrosourea derivatives
GRZYBOWSKA et al. Hydrazides-a novel type of derivatives of polyene macrolide antifungal antibiotics
US3278518A (en) Process for preparing nucleosides
PT2702033T (pt) Utilização de sais de 3-carboxi-n-etil-n,n-dimetilpropan-1-amínio no tratamento de doença cardiovascular
KR920001689B1 (ko) 시티딘-디포스페이트-콜린의 아실화 유도체의 제조방법
JPS6036494A (ja) Ν−アセチルノイラミン酸の新規誘導体およびその製造法