CS239932B2 - Method of intensification of microbiological trnsformation of steroids - Google Patents
Method of intensification of microbiological trnsformation of steroids Download PDFInfo
- Publication number
- CS239932B2 CS239932B2 CS826856A CS685682A CS239932B2 CS 239932 B2 CS239932 B2 CS 239932B2 CS 826856 A CS826856 A CS 826856A CS 685682 A CS685682 A CS 685682A CS 239932 B2 CS239932 B2 CS 239932B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- substrate
- cyclodextrin
- conversion
- microbiological
- steroid
- Prior art date
Links
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title claims abstract description 45
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 88
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 76
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 55
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 7
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 abstract description 10
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 abstract description 10
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 abstract description 7
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 abstract description 6
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 abstract description 6
- 229940043377 alpha-cyclodextrin Drugs 0.000 abstract description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 15
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 11
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 8
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 8
- -1 steroid compounds Chemical class 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 6
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- 241000203720 Pimelobacter simplex Species 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 229960001566 methyltestosterone Drugs 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- GCKMFJBGXUYNAG-UHFFFAOYSA-N 17alpha-methyltestosterone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C)(O)C1(C)CC2 GCKMFJBGXUYNAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 3
- GCKMFJBGXUYNAG-HLXURNFRSA-N Methyltestosterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@](C)(O)[C@@]1(C)CC2 GCKMFJBGXUYNAG-HLXURNFRSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000187410 Streptomyces purpurascens Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 230000000979 retarding effect Effects 0.000 description 2
- KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N (-)-beta-Sitosterol Natural products O[C@@H]1CC=2[C@@](C)([C@@H]3[C@H]([C@H]4[C@@](C)([C@H]([C@H](CC[C@@H](C(C)C)CC)C)CC4)CC3)CC=2)CC1 KZJWDPNRJALLNS-VPUBHVLGSA-N 0.000 description 1
- CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-ethyl-5alpha-cholest-22-en-3beta-ol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 CSVWWLUMXNHWSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 11-deoxycortisol Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 WHBHBVVOGNECLV-OBQKJFGGSA-N 0.000 description 1
- KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 24xi-n-propylcholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CCC)C(C)C)C1(C)CC2 KLEXDBGYSOIREE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 1
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 1
- JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N Chlorothiazide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC2=C1NCNS2(=O)=O JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 1
- LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N Citrostadienol Natural products CC=C(CC[C@@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC[C@H]4[C@H](C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)C(C)C LPZCCMIISIBREI-MTFRKTCUSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241001099954 Curvularia prasadii Species 0.000 description 1
- ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N Dehydro-beta-sitosterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)CCC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 ARVGMISWLZPBCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- YFGQJKBUXPKSAW-UHFFFAOYSA-N Lanatosid A Natural products CC1OC(OC2CC3C(C4C(C5(CCC(C5(C)CC4)C=4COC(=O)C=4)O)CC3)(C)CC2)CC(O)C1OC(OC1C)CC(O)C1OC(OC1C)CC(OC(C)=O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YFGQJKBUXPKSAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFGQJKBUXPKSAW-YSTAXILLSA-N Lanatoside A Chemical compound O([C@H]1[C@@H](OC(C)=O)C[C@@H](O[C@@H]1C)O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O[C@@H]1C)O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@H](O[C@@H]1C)O[C@@H]1C[C@@H]2[C@]([C@@H]3[C@H]([C@]4(CC[C@@H]([C@@]4(C)CC3)C=3COC(=O)C=3)O)CC2)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YFGQJKBUXPKSAW-YSTAXILLSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012377 Salvia columbariae var. columbariae Nutrition 0.000 description 1
- 240000005481 Salvia hispanica Species 0.000 description 1
- 235000001498 Salvia hispanica Nutrition 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N Tetrahydropyran Chemical compound C1CCOCC1 DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HDEDWNHZBWFQCB-JZYPGELDSA-N [(8s,9s,10r,11s,13s,14s,17r)-11-hydroxy-17-(2-hydroxyacetyl)-10,13-dimethyl-3-oxo-2,6,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl] acetate Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)CO)(OC(=O)C)[C@@]1(C)C[C@@H]2O HDEDWNHZBWFQCB-JZYPGELDSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001514 alkali metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001617 alkaline earth metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001440 androstane derivatives Chemical class 0.000 description 1
- MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N beta-Sistosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2C3CC=C4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C MJVXAPPOFPTTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N beta-sitosterol Natural products CCC(CCC(C)C1CCC2(C)C3CC=C4CC(O)CCC4C3CCC12C)C(C)C NJKOMDUNNDKEAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 235000014167 chia Nutrition 0.000 description 1
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 1
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006356 dehydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000003798 microbiological reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000007040 multi-step synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N sitosterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CC[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 KZJWDPNRJALLNS-VJSFXXLFSA-N 0.000 description 1
- 229950005143 sitosterol Drugs 0.000 description 1
- NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N sitosterol Natural products CC=C(/CCC(C)C1CC2C3=CCC4C(C)C(O)CCC4(C)C3CCC2(C)C1)C(C)C NLQLSVXGSXCXFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015500 sitosterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/06—Hydroxylating
- C12P33/08—Hydroxylating at 11 position
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
(54) Způsob zintenzivnění mikrobiologické přeměny steroidů
Způsob zintenzivnění mikrobiologické přeměny steroidů, s použitím pomocných látek, při němž se mikrobiologická přeměna provádí za přítomnosti alfa-, beta- nebo gama-cyklodextrinu nebo za přítomnosti libovolné směsi těchto látek v množství 0,2 až 3 moly na 1 mol steroidního substrátu a po skončení přeměny se cyklodextrin popřípadě ze systému regeneruje a vrací zpět k mikrobiologické přeměně.
Vynález se týká způsobu zintensivnění mikrobiologické' přeměny steroidních sloučenin použitím přísady na bázi c.ykkodextrinu.
Při výrobě steroidaích sloučenin často dochází k tomu, že se'jeden stupeň vícestupňové syntézy těchto látek provádí při využití specifické funkce některého mikroorganismu. Buňky mikroorganismu, enzymy, extrahované z těchto buněk, popřípadě fixované buňky nebo fixované enzymy z těchto buněk se použivaSí při biologických způsobech přeměny, které probíhaaí ve vodném prostředí. Přestože tyto enzymaaické reakce ve svrchu uvedeném prostředí probíhají velmi standardně, maaí současně ve srovnání s reakcemi, probíhajícími v organických rozpouštědlech tu podstatnou nevýhodu, že steroidní sloučeniny jsou nesnadno rozpustné ve vodě. Roopuusnost celé řady steroidních sloučenin ve vodě je velmi malá, což v řadě případů znamená, že jejich výsledná koncentrace je niiáí než koncentrace, při které biologické způsoby přeměny jsou ještě proveddtelné z ekonomického hlediska.
V případě známých způsobů se v průběhu reakce obvykle nachází , určité množší substrátu nebo určité množní výsledného steroidního produktu v průběhu reakce v pevné formě. Rozpouštění substrátu z uvedené pevné fáze může určovat výslednou reakční rychlost v případě heterogenní velikosti částic je rychlost rozpouštění při zvyšování průměru částic nerozpuštěného podílu stále nižší. Může dokonce do;jít k tomu, že v důsledku špatného rozpouštění se reakce sama zastaví před dosažením požadované přeměny·
Ke zvýšení rozpustnosti sterol^ího substrátu ve vodě nebo ke zrychlenému rozpouštění produktu byla navrhována celá řada postupů.
V briskkém patentn-č.. ' 1 211 356 se k dosažení humooeentíhu rozptýleného substrátu před reakcí přiváděný steroid mechanicky disperguje. Podle US patentu č. 4 124 607 se subbtrát s jemnými zrny připravuje v odděleném stupni tak, že se steroidní roztok, získaný podle v organickém rozpouštědle disperguje ve vodě a pak se rozpouštědlo oddásstluje. Je možno také po8tupovva,tak, že se steroidní sloučenina rozpustí v organickém rozpouštědle a vysrážení se provádí až v průběhu biologické přeměny. Podle maďarského patentu č. 149 678 se rozpouštědlo, použité k rozpuštění sul^s^t^irátu, například pyridin nebo kyselina octová, před počátkem biologické přeměny neutralizuje a rozpustnost se zlepšuje v případě alkoholu přidáním chloridů alkalických kovů a chloridů kovů alkalických zemin.
Podle britského patentu č. 1 083 204 se zlepšuje rozpustnost steroidního substrátu v reakčním prostředí tak, že se přidává některé z organických rozpouušědel, s výhodou dimeeyysulfoxid, a to současně se substráeem nebo po jeho uvedení do reakční směěi. Je také možno postupovat tak, že se rozpustnost steroidního substrátu zajišťuje pomocí rozpouštědel nemísstelných s vodou, v tomto případě je umožněna rychlá výměna látek velkou hraniční plochou ve vzniklé emulzi, jak je uvedeno například v pubbikaci B-otechn. Bioeng. 21 . 39 (1979). Ve farmaceutickém průmrslu se často používá činidel, napom^haících rozpoutání. Podle NSR patentu č. 1 543 431 je možno podstatně ztyšit výtěžek sndrustendionl při jeho výrobě z 4-kolleзttn-3-onu přidáním činidel tohoto typu. <
Známá řešení mohou zmennšt nevýhody, spojené se špatnou ruzpultnoutí steroidního substrátu ve vodě, nejsou však ekonomické nebo ííSí nepříznivé účinky na celý systém. Například v případě, že se vyrobí s^bs^t v milkOlkyssalické formě, znamená to nutnost většího počtu pracovních stupňů při technologickém postupu a mimoto ke ztráám výsledného míSteiáll· Podle jiných pozorování dochází také k poškození mikroorganismu při delším působení organického rozpouštědla, zejména v množs-V.!, jehož je zapotřebí k' ' dost^enému zvýšení rozpustnost tteyuidl ve vodě, jak bylo popsáno například v pubbikaci Steroids, J2, 525/196β).
V případě, že se používá činidel, usnadňujících rozpouštění, dochází současně ke tvorbě pěny, což ztěžuje dostatečné provzdušňování systému, v němž probíhá biologická přeměna.
Vynález si klade za úkol navrhnout způsob, který by na jedné straně odstraňoval nevýhody známých postupů, na druhé straně by při prováděni tohoto způsobu mělo dojít ke zintensivnění mikrobiologické přeměny steroidů.
Nyní bylo zjištěno, že cykLodextriny je možno použít v systémech pro biologickou přeměnu ke zlepšení rozpustnosti steroidních molekul ve ' . . vodě, v případě nerozpustného zbytku ke zvýšení rychlosti jeho rozpouštění a tím k podstatnému zvýšení rychlosti biologické přeměny a mimoto v daném systému k zábraně zpomaaení reakce při vznikání většího výsledného produktu a k zábraně blokády reakce působením některých stxriclýih skupin ve steroidní-molekule. C^b^!^L^(^d^3^t^]riny alfa- a beta- nebo jejich sméěi mají katalytický účinek při hydrolýze esterů. V případě, íe mikroorganismus má dvě nebo větší počet funkcí, může dooít k selektivnímu ovlivnění poměru mezi reakčními produkty, tedy ke zintenzivnění celé přeměny,
Předmětem vynálezu je způsob zintenzivnění mikrobiologické přeměny steroidů, s použitím pomociých látek, který se provádí tak, íe se mikrobiologická přeměna uskutečňuje za přítomno ti alfa -, beta- nebo gjmaa-yУlojdχtrinu nebo za přítomnost libovolné směsi těchto látek v m^ísv! 0,2 aí 3 moly na 1 mol steroidního substrátu a po skončení přeměny se cyklodextrin popřípadě ze systému regeneruje a vrací zpět k mikrobiologické přeměně. Pod pojmem cykloddetriť', se dále rozumí alfa-, beta- nebo gamaa-yУlojfχtrit nxbo libovolná směs těchto látek. Před . počátkom mikrobiologické přeměn/, při jejím začátku nebo v průběhu přeměny se přidává na 1 mol substrátu celkem 0,2 aí 3 moly cykljdextritu. Podle jednoho z možných provedení se přidává odppliddjící cyOndextrin před přívodem sub» strátu do směsi pro biologickou přeměnu.
Podle dalšího možného provedení se smísí subbtrát s cyklodettrinem a vzniklý Skluzní komplex nebo jeho vodný roztok nebo jeho suspenze se pak přidávají do prostředí pro biologickou přeměnu. Podle dalšího možného provedení se cyklodextrin přidává jako takový nebo ve formě ^kluzního komplexu se substrátem, popřípadě ve formě vodného roztoku nebo suspenze ^kluzního komplexu v průběhu mikrobiologické reakce, obvylkLx po dosaíení 30 aí 50% přeměny. Roztok cyklldextritu nebo inkluzního komplexu cykljdeχtritu a substrátu je možno před přívodem do prostředí pro biologickou přeměnu sterilizovat nebo je moíno tyto látky sterilizc)ijt společně s prostředím pro biologickou přeměnu. СуУкос^х^^ je moíno získat z vodného prostředí pro biologickou přeměnu tak, íx se steroid extrahuje organickým rozpouštědlem a суУк^ех^^ sx vysráíí přidáním rozpouštědla, které silně sniíuje jeho rozpustnost, s výhodou hexanu a pak se odfiltruje a popřípadě suší.
Zintenzivnění mikrobiologické přeměny steroidů podle vynálezu je velmi výhodné, protoíe zajišlujx reakční rychlosti a tím zkrácení doby reakce, současně je moíno zvýýit 10^0X^801 s^bírštu v prostředí, odstraňuje se nepříznivý vliv hromadění výsledného produktu, z většího počtu možných reakcí je možno katalyzavat plíafoianlu reakci a je také moím zvýis selektivitu mikrobiologického postupu.
Skluzní komplex cyklldextгitu se steroidním substráXem je možno vyrofabt různými způsoby. Podle jednoho způsobu sx k prostředí pro biologickou přeměnu přidá vodný roztok plíjflvanéhl cyklodextrinu určité koncentrace’ a k němu se přidá steroidní subbtrát, čímí vznikne Skluzní komplex. (Vaaianta 1).
Je také možno postupovat tak, íx sx vyloučí přímě přidávání steroidů do systému a v odděleném tanku se vyrobí vodný roztok inkl-uzního komplexu substaátu s cy^^e^^nem, který se sterilizuje filtrací a pak sx přidá do prostředí pro biologickou přeměnu (varianta 2). Za přítomnost určitého mn^s^ví vody jx moíno směs cyklodextrinu a steni-dů přxkryštelovat za vzniku krystalického komplexu steroidů s cyklodextrinem, který jx moíno p^x^á^í^^t při biologické přeměně, ktxrá nevyíaduje sterilizaci, v pevné formě (varianta 3).
Cyklodextriny jsou polymery glukózy přírodního původu, které sestávají z velkých kruhů ze 6, 7 nebo 8 glukózových jednotek. Jejich struktura je charakterizována zvláštním uspořádáním hydroxylových skupin. Všechny sekund&mí hydrotylové skupiny se nacházejí na stejném ola*aji kruhu, primární hydroxylové skupiny se nacházeei na opačném okraji. V důsledku toho je zevní plocha kruhu hydrooilnd a z tohoto důvodu jsou cyklodextriny rozpustné ve vodě.
V^třní strana kruhu je hydrofóbní. Cykkodextriny mohou vytvářet s molekulami odpooídaaící velikosti a tvaru inkluzní komplexy. Су^ос^х^^ s obsahem 6 glukopyrano'zových jednotek je elia-cyklodextrin, beta-cyklodextrin je tvořen 7 glukopyranozotými jednotkami a gamía-yklolextrin je tvořen 8 glukopyranozovými jednotkami. Podle své vazby se nazývají cyklodextriny také cyklojpylo'zy. Kornptexy steroidních molekul s cyklodextrnnem již byly sledovány v průběhu zkoumání většího počtu fa^a^^gických účinných látek a látek, napomPhhjících rozpouštění, jak bylo popsáno například v publikaci Lech a Pauli: J. Pharm. Sci. 55. 32 0966). V případě testcзt·ronu a loltislnacetátu byl stanoven i pravděpodobný stechicpetriclý poměr jednotlivých složek. Zvětšenou rozpustností se zvyšovala naděje na lepší vstřebávání farmaceutických účinných látek. Až dosud však nebyly cyklodextriny nikdy použity k zintenzivnšní reakce mikrobiologické přeměny steroidních substrátů. Bylo prokázáno, že komplex steroidního substrátu s cyklodextrinep podléhá ve vodném prostředí rychle disociaci a v pystému pro biologickou přeměnu je v dynamické rovnováze s volnými molekulami steroidu a s molekulami cyklodextrinu. V systému pro biologickou přeměnu, který obsahuje pevný steroid v suspenzi závisí okamžitá koncentrace rozpuštěného podílu, na který může působit enzym, vždy na rychlosti rozpouštění substrátu a na rychlosti enzymatické reakce. / případě, že rozpouštění je pomelé, zůstává v průběhu reakce koncentrace steroidního roztoku daleko pod nasycením a reekce trvá podle základních pravidel enzymatických reakcí podstatně déle.
ИааюИ tomu z inkL-uzního komípexu s cyklodeχtrjnep se subbtrát uvolňuje prakticky ok^íži^ě. Moosteí rozpuštěného substrátu zůstává orotl v tomto případě stálé v průběhu celého lottulu až do jeho konce a dosahuje nasycení, takže je možno zajjstit p^j^íí^PIl^zÍ rychlost přeměny pro danou enzyppaickou reakci.
Při jiném typu reakcí pro přeměnu steroidů může doo^t k tomu, že výsledný produkt při své tvorbě zpo^pti^ije nebo zastavuje reakci v případě, že se váže na enzym nebo na povrch buňky. Vzhledem k odlišné struktuře substrátu a potekuly výsledného produktu k tomuto jevu při pouHtí komplexu s cylkLodextrnnep nedochází. Podle nejnovёjšdch sledování je možno zvoHt tak příznivé reakční podmínky, při nichž se výsledný steroid převádí na komplex s cyklodextrinep, aniž by tip byla zhoršena dostupnost původního ttercidrího substrátu. V případě, že stálost komplexu substrátu s cyklodextrnnep překročí stálost komplexu výsledného produktu s cyktedextrineí, je možno postupovat tak, že se cyklodextrin přidává do reakční směsi pouze v top případě, že se v systému nachází přebytek reálního produktu.
Bylo také prokázáno, že je možno příznivě ovlivnit enzypítickou hydrolýzu esteriHované sterčidní potekuly tvorbou ldpoc·íddjícíhl komplexu s alfa- a/nebo betj-cykLcdeettinem. Je možno to vysvěttit katalytckýp účinkem, který .vyplývá ze struktury cyklodextrinu.
V případě různých biologických přeměn bylo možno také pozorovat, že tvorba komplexu s cyklodextrneeí má za následek další různé změ^ny, které mohou vést v případě komplexu s cdpolídající stálostí například k tomu, že se zmínkuje rychlost reakce pro některou konfiguraci nebo dojde k téměř úplnému vyloučení jednoho typu reakce.
Tvorba innuzních komplexů t účinek na zintenzivněni biologické přeměny platí obecně zejména pro sloučeniny steránového typu. S určitými úpravtí je možno příznivě ovlivnit také přeměny, při nichž docbázX k tvorbě estrirnových, androst trnových, pregntnov^ch, cholest uniových, stigmas! trnových sloučenin t tak jak je uvedeno v následujících příkladech, které však nemají sloužit k ovlivnění rozsahu vynálezu.
Přikladl
Substrát: hydrokortison
Mikroorganismus Arthrobacter simplex (ATCC 6 946) alfe-cyklodextrin, zvýšení rychlosti
Přidávání substrátu: 1· varianta
Agarová kultura Arthrobacter simplex (ATCC,6 946) se promyje fyziologický· roztokem soli a 5 ml této suspenze se naočkuje následující živná půd·: glukóze 0,3 %, enzymaticky hydrolyzovaný kasein 0,5 %, extrakt z kvasnic 0,1 %, ph 6,7. Roztek se doplní vodou na 100 ml a sterilizuje v Erlexmeyerově bance o obsahu 500 ml. Kultivace se provádí při teplotě 32 °C na třepačce při 230 výkyvech po dobu 18 hodin, pak se přidá 5 mg hydrokortisonu v 0,5 ml metanolu a přivádí se požadovaný enzym. Enzym se přivádí 3 hodiny za týchž podmínek, při nichž se provádí kultivace. Kultura, obsahující 50 ml delta-1-dehydrogenázy jako enzymu se vloží do Erlenmeyerovy baňky o obsahu 3 litry s obsahem 950 ml sterilizované vody přeměna se provádí э dvacetinásobně zředěnou aktivní kulturou. Substrát obsahuje 2 g hydrokortisonu, reakce probíhá následujícím způsobem:
g alfa-cyklodextrinu se přidá ke kultuře, po jeho rozpuštění se rozpustí hydrokortison ve 20 ml metanolu s obsahem 10 % hmot, chloridu vápenatého. Získaný roztok . se přidá ke kultuře s obsahem alfa-cyklodextrinu. Přeměna probíhá při teplotě 32 °C na svrchu uvedeném zařízení 5 hodin. Přítomnost alfa-cyklodextrinu brání v průběhu přívodu substrátu do vodného prostředí jeho vysrážení, přeměna substrátu po jeho rozpuštění probíhá rychleji než v systému, v němž se substrát nachází jako suspenze. Doba přeměny substrátu bez cyklodextrinu je 8 hodin. Na konci přeměny je možno ve fermentačním prostředí prokázat 1 920 ^ug/ml prednisolonu, *40 /ug/ml 20*-beta-hydroxyprednisolonu a 8 ^ug/ml hydrokortisonu.
Příklad 2
Substrát: 17alfa-metylteetosteron (androstanový derivát)
Mikroorganismus: Arthrobacter simplex (ATCC 6 946)
Beta-cyklodextrin, odstranění brzdicího účinku výsledného produktu
Přidávání substrátu: varianta 1.
Indukovaná kultura získaná způsobem podle příkladu 1 se pětkrát zředí а к delta-1-dei hydrogenaci metyltestosteronu se použije na začátku přeměny roztok 1,0 g metyltestosteronu v 10 ml metanolu, který se přivádí do systému. Přeměna se sleduje chromatografií na tenké vrstvě. Substrát se ze systému vylučuje a v průběhu kontinuálního rozpouštěni dochází к jeho dehydrogenaci. Při dosažení koncentrace přibližně 400 jig/nl delta-1-metyl.testoeteronu se do systému přidá 6,0 g beta-cykledextrinu. Tato přísada vytváří komplex se vznikajícím produktem, což je velmi důležité, protože jinak dochází ke zpomalení enzymatické reakce, protože převaha výsledného produktu reakci zpomaluje. Tvorba komplexu s beta-cyklodextrinem probíhá přibližně pětkrát intenzivněji než tvorba komplexu se substrátem. Přidávání se provádí ve druhé hodině a inkubace se provádí až de 6. hodiny při sledování chromatografií na tenké vrstvě.
Obsah steroidů ve fermentačním prostředí na konci fermentace je 970 /Ug/ml delia-1-metyltestosteronu, 6 /Ug/ml metyltestosteronu. Bez přidání cyklodextrinu ее reakoe zastaví při zbývající koncentraci substrátu 100 až 120 ^g/ml.
Příklad 3
Substrát: 5-pregnen-3beta,17alfa,21-triol-20-on-21-acetát (acylovaný pregnenový derivát)
Mikroorganismus: Flavobacterium lucecoloratum (NIB 9 324)
Gama-cyklodextrin se přidává podle varianty 3«
Kulturou Flavobacterium lucecoloratum (NCIB 9 324) ze šikmého agaru se naočkuje 200 ml živného prostředí v Erlenmeyarových baňkách o obsahu 750 ml. Kultivace se provádí 20 hodin při teplotě 30 °C na třepačce s 230 výkyvy. Touto kulturou se naočkuje 5 litrů sterilního vodného prostředí téhož složení v laboratorním fermentoru. Prostředí obsahuje 1,0 % hmot, extraktu z kvasnic 0,1 % hmot, di/hydrogenfosforečnanu draselného a 0,4 % hmot, hydrogenfosforečnanu draselného. К naočkovanému živnému prostředí se přidá 250 mg substrátu v roztoku v 1,5 ml dimetylformamidu. Roztok se sterilizuje filtrací. Přítomnost substrátu umožňuje tvorbu potřebných enzymů' při růstu kultury. Po 12 hodinách kultivace jo počet bakterií a enzymatická účinnost vhodná к počátku biologické přeměny a přidá se tedy 100 g pregnen-3beta-17alfa,21-trihydroxy-20,21-acetátu ke kultuře, к níž se předem přidá gama-cyklodextrin;
Postupuje se následujícím způsobem:
100 g substrátu se homogenizuje se stejným množstvím gama-cyklodextrinu a 200 ml vody 20 minut, v průběhu této doby vytvoří určitý podíl substrátu s cyklodextrinem snadno rozpustný komplex. Suspenze se míchá ve fermentoru a inkubuje dalších 11 hodin tak dlouho, až se substrát spotřebuje. V laboratorním fermentoru se udržuje teplota 30 °C. Prostředí se míchá při 420 otáčkách za minutu a provzdušňuje rychlostí 0,5 litru za minutu. Přeměna se sleduje chromatografií na tenké vrstvě. Obsah steroidů ve fermentačním prostředí po ukončení přeměny ja 9 020 pg/ml 4-pregnen-17alfa,21-dihydroxy-3,20-dionu a 30 jUg/ml substrátu. Bez cyklodextrinu by bylo možno biologickou přeměnu provádět až při množství 10 g substrátu v 1 litru.
Příklad 4
Substrát: 4-pregnen-17alfa,21-dihydroxy-3,20-dion-17-acetát (acylovaný kortikosteroid)
Mikroorganismus: Curvularia prasadii (IMI 71 475)
Beta-cyklodextrin, katalýza hydrolýzy esteru
Přívod substrátu podle varianty 1.
Suspenzí spor, získaných omytím kultury Culvularia prasadii (IMI 71 475) na šikmém agaru se naočkuje 100 ml živného prostředí v Erlenmeyarových baňkách o objemu 500 ml. živné prostředí obsahuje 1,0 % hmot, sojové mouky, 0,3 % hmot, kukuřičného výluhu, 0,3 % hmot, kukuřičného škrobu a 0,5 % hmot, sladového extraktu při pH 6,2. Kultura ее inkubuje 24 hodin při teplotě 25 °C, 10 ml této kultury se pak použije к naočkování 100 ml živného prostředí v baňkách stejné velikosti, živné prostředí v tomto případě neobsahuje sladový extrakt, jinak má stejné složení jako svrchu. Mikroorganismus se inkubuje při teplotě 26 °C na třepačce*’, v průběhu jeho růstu se po 16 hodinách přidá substrát, a to 4-pregnen-17al£a,21-dihydroxy-3,20-dionacetát. .
Přidává se 0,12 g substrátu v roztoku ve 3 ml metanolu. Pak se kultura dále inkubuje přičemž dochází к hydroxylaci v poloze 11 beta, čímž vzniká hydrokortison-17-acetát. Ve 20. hodině přeměny, sledované chromatografií na tenké vrstvě, zbývá ještě 10 % hmot, substrátu.
Pak se přidá 0,96 g beta-cyklodextrinu. Cyklodextrin působ:! katalyticky na enzymatickou hydralýzu acetylové skupiny steroidní modekily, takže ve zlývající době biologické přeměny se kromě zpommlující se hydroxylace odštěpuje acetyloaá skupina. Po dalších 3 hodinách je možno postup přerušit.
Fermwitační prostředí na konci biologické přeměny obsahuje hydrokOTtison (4-pregnen-Hbeta, 177Дfa,21-trilkedroty-3,20-dion) a mnoství 0,730 /ug/m., 0,185 ^ug/ril hydrokootison-17acetátu, 0,005/ug/ml 4-prxgten-177lfll2l-dihydroχr-3,20-dion-17-acetátu a 0,040/Ug/ml ^preginen^lf a, 21-dihydroty-3,20-dion.
Příklad 5
Suussrát: hydrokot,tison
Mikroorganismus: Arthrobacter simplex (ATCC 6 946)
Betl-cyklddextгit, zvýšení rychlosti reakce
Přidání substrátu: varianta 2.
Katura Athrobacter simplex (ATCC 6 946) získaná na pevné živné půdě se omyje a 30 ml suspenze této kultury se použije k naočkování 5 litrů sterilního živného prostředí v laboratorním fermentoru.
Živné prostředí obsahuje 0,3 % hmot, glukózy, 0,3 % hmoo. peptonu, 0,1 % hmoo. extraktu z kvasnic při pH 6,8. K^utiura se pěstuje při teplotě 35 °C a při 240 otáčkách za minutu při provzdušnování 0,5 litry vzduchu na 1 litr živného prostředí za minutu 20 hodin.
Pak se použije 1 litr kuLtury k naočkování 9 litrů sterilního živného prostředí v laboratorním fermentonu. Prostředí obsahuje 0,5 % hmot· glukózy, 0,5 % hmoo, peptonu, 0,4 % hmoo, extraktu z kvasnic při pH 6,8.
&u.tura se pěstuje při teplotě 35 °C a 600 otáčkách za minutu při provzduěňování 0,3 litry vzduchu na 1 litr prostředí za minutu celkem 18 hodin a pak se k indukci tvorby enzymu přidá roztok 0,5 g hydrokootisonu’v 50 ml metanolu. Směs se inkubuje ještě 4 hodiny, načež se aktivní kultura uloží do zařízení, odolného proti kyselinám a prostředí se dále zpracovává.
V uvedeném zOřísení bylo předem připraveno prostředí pro biologickou přeměnu tak, že se 90 litrů vody z vodovodu a 1 200 g beta-cykLodextrinu zaseje na 100 °C a prostředí se při této teplotě sterilizuje 20 minut a pak zchladí na 35 °C. Pak se rozpuutí 1,0 g 2-mej^]^-1,4-nafi^c^c^h^j^r^o^nu a 400 g hydrokortisonu ve 4 litrech metanolu s obsahem 400 g chloridu vápenatého, roztok se sterilizuje filtrací a přidá se do zařízení. Pak se do září' zení přidá ještě svrchu uvedená kiltura, čímž počne probíhat biologická přeměna. V průběhu přeměny se nachází steroidní substrát prakticky v roztoku, což je důležité z toho důvodu, že se tímto způsobem vylučuje lrystllizlce při počátku vylučování výsledného produktu z prostředí. Jinak se totiž mohou tvořit smíšené krystaly substrátu a výsledného produktu.
Při biologické přeměně se udržuje teplota na 35 °C při 180 otáčkách za minutu a provzduěnování 0,6 litry vzduchu na 1 litr prostředí za minutu. Podle výsledků chromatografie na tenké vrstvě se reakce přeruší při obsahu sibesrátu 2 % hmot, a fermantační prostředí, se pak dvakrát extrahuje etylacetáeem v protiproudu v zařízení, které dovoluje ořítomnost pevného podílu. Extrakt se odpaří ve vakuu při teplotě nepřevyšující 40 °C na konceenraci 8 g/litr, čímž se získá přibližně 50 litrů prvního konnceinrátu, přidá se směs 40 g aktivního uhlí a 100 g celitu a směs se dále koncentrujx až na přibližně 2 litry, přičemž dojde ke 1^;^é^s^i^].ízi(^í. Suspenze se zchladí na 5 až 10 °C a po několika hodinách se zfiltruje.
Matečný louh se sráží pěti násobkem diisopropyleteru, načež se zchladí a zflltruje.
Získá se 375 g výsledného produktu β následuuícími vlastnostmi:
Čistota ztráta při sušení sulfátový popel zbytek hydrokortisonu d^l.S:í steroidy teplota tání % hmot.
% hmot
0,1 % hmot 1,2 % hmot 0,35 % hmot
234 až 236 °C = +98° (dioxan, c = 1 % h^oo).
Ke zpětnému získání beta-cyklodaxtrinu se extrakt míchá s 1 lirrem cyklohexanu hodinu při teplotě.18 až 20 °Q. Vzniklý pevný podíl se odděH flitraci, uvede se v suspenzi v 1 Litru vody a cyklohexan.se odstraní ze směsi varem deettlací s vodní parou. Vodná suspenze beta-cykl^extrinu·. se ud^uje přes noc na tepteta 5 až 10 °C krystaly se oddMi filtrací a suší ve vakuu. Tímto způsobem se získá 700 g beta-cylklodextrlnu, který je možno znovu poouít.
Příklady 6 až 11
Násseduuící mikrobiologické přeměny se prováděl analogickým způsobem jako v příkladech 1 až 5 za podmínek, uvedených v těchto příkladech, cyk^cete^^ po užije ke zintensivnění jednotlivých reakcí.
Příklad . 6
Suussrát: sitosterol
Mikroorganismus: Mysobscterium sp. (NRRL B 3 805)
Beta-cyklddíχtrin: zvýšení koncentrace
Přidávání subssrátu: varianta 1
Výsledný prodat: anddOdSa-14~dinn-4,17-Uidt
Odboouáváií postranního řetězce ze subssrátu se provádí způsobem podle publikace W. J. Miurscheck, S. Kraychi a R. D. Mdr (1972) Appl. MicrobSo! £3, 72. při pouuití steroidu a cyldcdextrinu v moládním poměru 1:0,2.
živné prostředí obsahuje 0,5 % NagHPOo*7 HgO. V případě, že se bez cyklodextrinu získá koncentrace 1 g/litr sit-oste^lu, je možno při stejné době přeměny 170 hodin působením cyklodextrinu zvýšit koncentraci 8itdsterdlu na 2 g/Utr.
Příklad 7
Subssrát: progesteron
Mikroorganismus: Ophlobolus herpotrichus
Beta-eyklodíntrit: úplná přeměna
Subssrát se přidává podle varianty 1
Výsledný produkt: 21-dihydroxyprogesteron
Reakce se provádí způsobem podle publikace Meyetre a daláí Hh1v. Chin. Acta 37. 1 548 (1954) při použití molárního poměru steroidu a cyklodextrinu 1:0,2· živným prostředím je pivovarský zákvas, v němi se pěstuje mikroorganismus 3 dny, pak se přidává acetonový roztok ' progesteronu jako substrátu ai do dosaženi koncentrace 0,25 g/litr. Bez použití сукШехХг!nu trvá přeměna dalSí 3 dny a zbytek substrátu je téměř 25 %. V případě, ie se 24 ai 30 hodin po začátku přeměny přidá cykloáextrin, je zbytek subbtrátu podstatně oíŽSÍ.
Příklad 8
Suussrát: 4-pregnen-17·lfa,21-dihyůrlχy·3,20-diln (Reichstein-S)
Mikroorganismus: Cuvvuaria lunata (IFO 49)
Beta-cyklldextrin: ovlivnění poměru reakčních produktů.
Přidáván;! substrátu? varianta i
H-awxí produkt: hydrokootison
Reakce se provádí způsobem podle publikace Rondo E. a Mtsugl T, J. Agic. Chem. Soc. Japan .35, 521 (1961). Pouuije se moHární poměr steroidu a 1:0,3. Bez přidání cyklodextrinu se v průběhu biologické přeměny získá 35 ai 40 % hmoo. 6-beta-hydrlχy 4-pregnen-17aafa, 21-diiydrlχy-3,20-dionu, 15 ai 20 % hmot. 11 alfa-lydroxy-4-pregnen-17alfa,21-dilyrdrlxy-3,20-dionu a přibliině 5 % hmoo. 7,14alfa-dihydroxy- a 15 % hmoo. 6-beta-14alfa-diУ/droзy—4-pregnen-17alfa^’21-diiydroχy-3,20-dilnu. V případě, ie se v hodině 0 biologické přeměny přidá ke smmsi beta-cyOlldextrinuve svrchu uvedeném pnimru, je možno z^ěSt imožitví 11 alfa-iydroχy4-pregaen-177afa,21-diiydroχy3,20-dionu (epi-iydrl0ortiзlnu) na dvojnásobek.
Příklad 9
Substrát: 76alfa-eetyl-4-pregnen-17alfa,21-diiydroχy-3,20-dion
Mikroorganismus: Curvu^ia lunata (ATCC 12 017)
Beta-cyklodeetrin: zvýěení efektivnosti přeměny
Přidávání substrátu: varianta 1
Výsledný produkt: 11beta,17alfa,21-trihyrltyi6alfa-meryl-4-pregoeo-3,20-dilo (l6alfa- mey^a^^^^)
Reakce se provádí způsobem podle publikace Canonica L. a dalSí Oass. Chia. Ital. 93. 368 (1963). Použije se ^c^olá^i^zí poměr steroidu a cyklodextrinu 1:1. Bez poulit! cyklodextrinu vzniká hlavní výsledný produkt v иоШу! přibliině 55 % . hmoo. V případě, ie se v hodině 0 biologické přeměny přidá k reakční směji beta-cykl^e/trin ve svrchu uvedeném poměru, stoupne mmnoisví hlavního výsledného produktu o 5 ai 10%.
Příklad 10
Substrát: 3tota,17alfa,21-trlhydro3ypragn-5-®n-20-on-21-acatát
MLkrojorganiaaus: Flavobacteriua dtlydrogtnant (ATCC 13 930)
Bta-cyldodettrin: zvýšení koncentrace
Přidávání ^Ьь^г^^: varianta 1
Výsledný produkt: 4-prtgnen-11alfa,21-dilydroχУ3l20-dion
Reakce at provádí podle US patentu í. 3 009 936. MoOární poměr tttroidb a cylk.odeetrinu je 1:0,3· Při poožiií cyklodextrinu je možno získat dvojnásobek výsledného produktu.
Příklad 11
Subbsrát: balato sid-A (digitaisoový glukosid)
Mikroorganismus: Streptomyces purpurascens
Beta-cylk.odettrin: zvýšení koncentrace
Přidávání substrátu: varianta 1.
Reakce se provádí podle maďarského patentu S. 176 250. Poobije se lanatosid-A a cyklodextrin v mooárním poměru 1:1. Bez použití cylk-odextrinu se přidává k dvoudenní kultuře Streptomyces purpurascens roztok lanatutldb-A v organickém rozpouštědle v koncentraci 0,5 g/litr. V případě, že se po dvou dnech kultivace přidá k reakční směsi v hodině 0 biologické přeměny beta-cyklodextrin ve svrchu uvedeném poměru, je možno z výšt konccntraci ^hbi^tu na 2 glitr. ’
Příklad 12
Subesrát: Hylrokoutitut.
Mkroorganimus: Ap^obacte? simplex (ATTC 6 946).
Směs оуМ^елХг!!!: zvýšení rychlost.
Přidávání ^Ьв^гё^: varianta 2.
Mikrobiologická přeměna se provádí obdobným způsobem jako v příkladu 5 s tím rozdílem, že se místo beta-cykludtxtritb pobije sněsi OLfa-, beta- a gai^^cck^^is^^^ v poměru 6:75:19. Minožsví a kvaita výsledného produktu stejně jako reakění rychlost byly stejné jako v příkladu 5.
Claims (7)
1. Způsob zintenzivnění mikrobiologické přeměny steroidů s použitím vyznačující se tím, že se mikrobiologická přeměna provádí za přítomnosti nebo gama-cyklodextrinu nebo za přítomnosti libovolné směsi těchto látek 0,2 až 3 moly ne 1 mol steroidního substrátu a po skončení přeměny se cyklodextrin popřípadě ze systému regeneruje a vrací zpět k mikrobiologické přeměně.
pomocných látek, alfa-, beta-, v množství
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se cyklodextrin přivádí do systému před počátkem mikrobiologické přeměny, při jejím začátku nebo v jejím orůběhu
3.
přivádí
Způsob podle bodu 1 a 2, vyznačující se do systému pro mikrobiologickou přeměnu tím, před že se odpovídající cyklodextrin přidáním substrátu.
tím, je inkluzního komplexu substrátu s cyklodextrinern, s inkluzního komplexu substrátu
4.
Způsob podle bodu 1 a 2, vyznačující se že se k mikrobiologické přeměně použivýhodou roztoku nebo suspenze s oyklodextrinem.
5.
systému
Způsob podle bodu po ukončení 35 až
2, vyznačující se tím, mikrobiologické přeměny že se cyklodextrin přivádí do
2, vyznačující se tím, že se komplex cyklodextrinu se steroidním substrátem nebo roztok přívodem do prostředí pro mikrobiologickou přeměnu.
Způsob podle bodu cyklodextrin těphto látek nebo inkluzní sterilizuje před
7. Způsob podle bodu 1 a 2, vyznačující se tím, že se cyklodextrin, přidaný do prostředí pro mikrobiologickou přeměnu sterilizuje spolu s tímto prostředím.
8. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se steroid extrahuje z vodného prostředí pro mikrobiologickou přeměnu organickým rozpouštědlem a cyklodextrin se vysráží přidáním rozpouštědla, snižujícího jeho rozpustnost, s výhodou hexanu, načež se z rafinátu izoluje filtrací a po případném sušení se vrací zpět k mikrobiologické přeměně.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU812785A HU190784B (en) | 1981-09-28 | 1981-09-28 | Process for the intensification of the microbiological transformation of steroid compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS239932B2 true CS239932B2 (en) | 1986-01-16 |
Family
ID=10961091
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS826856A CS239932B2 (en) | 1981-09-28 | 1982-09-24 | Method of intensification of microbiological trnsformation of steroids |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4528271A (cs) |
| JP (1) | JPS5867194A (cs) |
| AT (1) | ATA357182A (cs) |
| BE (1) | BE894501A (cs) |
| CA (1) | CA1185548A (cs) |
| CH (1) | CH656642A5 (cs) |
| CS (1) | CS239932B2 (cs) |
| DD (1) | DD204267A5 (cs) |
| DE (1) | DE3235884A1 (cs) |
| DK (1) | DK422182A (cs) |
| ES (1) | ES8400146A1 (cs) |
| FR (1) | FR2513656B1 (cs) |
| GB (1) | GB2108965B (cs) |
| HU (1) | HU190784B (cs) |
| IT (1) | IT1157322B (cs) |
| NL (1) | NL8203746A (cs) |
| SE (1) | SE452777B (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU638532B2 (en) * | 1990-01-29 | 1993-07-01 | Roquette Freres | Process of refining mixtures obtained from treatments of fatty media with cyclodextrin and containing complexes of cyclodextrin with lipophilic compounds of the fatty acid type |
| FR2657545B1 (fr) * | 1990-01-29 | 1992-08-14 | Roquette Freres | Procede de raffinage de melanges issus de traitements de milieux gras a l'aide de cyclodextrine et comprenant des complexes de cyclodextrine avec des composes lipophiles. |
| AU638531B2 (en) * | 1990-01-29 | 1993-07-01 | Roquette Freres | Process of refining mixtures obtained from treatments of fatty media with cyclodextrin and containing complexes of cyclodextrin mainly with lipophilic substances other than fatty acids |
| FR2664604B1 (fr) * | 1990-07-13 | 1994-05-06 | Monserbio | Procede de decomposition de complexes d'inclusion de beta-cyclodextrines. |
| FR2776666B1 (fr) * | 1998-03-31 | 2002-09-06 | Commissariat Energie Atomique | Complexes d'inclusion dans des cyclodextrines d'isothiocyanates organiques, en particulier bacteriostatiques, bactericides et/ou fongicides ou de leurs precurseurs naturels, et leur preparation |
| KR100422161B1 (ko) * | 2001-05-11 | 2004-03-10 | (주)유진사이언스 | 4-안드로스텐-3,17-디온 및안드로스타-1,4-디엔-3,17-디온의 제조 방법 |
| HU227117B1 (en) | 2002-05-10 | 2010-07-28 | Richter Gedeon Nyrt | Process for dehydrogenation of aza-androstane compounds |
| RU2236464C2 (ru) * | 2002-09-10 | 2004-09-20 | Закрытое акционерное общество "АСГЛ-Исследовательские Лаборатории" | Способ получения метандростенолона |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3639212A (en) * | 1968-08-12 | 1972-02-01 | Sankyo Co | Process for the preparation of estrane compound by fermentation |
| FR2313395A1 (fr) * | 1975-06-06 | 1976-12-31 | Mitsubishi Chem Ind | Procede d'oxydation microbiologique de steroides |
| HU176250B (en) * | 1978-10-30 | 1981-01-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Process for producing mikrobiologically 12-beta-hydroxycardenolide derivatives |
| JPS578794A (en) * | 1980-06-17 | 1982-01-18 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | Preparation of androstane-type steroid |
-
1981
- 1981-09-28 HU HU812785A patent/HU190784B/hu not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-09-21 GB GB08226894A patent/GB2108965B/en not_active Expired
- 1982-09-22 DK DK422182A patent/DK422182A/da not_active Application Discontinuation
- 1982-09-24 US US06/423,084 patent/US4528271A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-09-24 CS CS826856A patent/CS239932B2/cs unknown
- 1982-09-27 FR FR8216234A patent/FR2513656B1/fr not_active Expired
- 1982-09-27 AT AT823571A patent/ATA357182A/de not_active Application Discontinuation
- 1982-09-27 IT IT23453/82A patent/IT1157322B/it active
- 1982-09-27 DD DD82243525A patent/DD204267A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-09-27 CH CH5673/82A patent/CH656642A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-09-27 CA CA000412267A patent/CA1185548A/en not_active Expired
- 1982-09-27 BE BE0/209097A patent/BE894501A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-09-27 SE SE8205506A patent/SE452777B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-09-28 NL NL8203746A patent/NL8203746A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-09-28 JP JP57167770A patent/JPS5867194A/ja active Granted
- 1982-09-28 ES ES516007A patent/ES8400146A1/es not_active Expired
- 1982-09-28 DE DE19823235884 patent/DE3235884A1/de active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES516007A0 (es) | 1983-10-16 |
| IT1157322B (it) | 1987-02-11 |
| GB2108965B (en) | 1985-07-10 |
| SE8205506L (sv) | 1983-03-29 |
| IT8223453A0 (it) | 1982-09-27 |
| US4528271A (en) | 1985-07-09 |
| DE3235884A1 (de) | 1983-10-06 |
| DE3235884C2 (cs) | 1991-07-25 |
| DK422182A (da) | 1983-03-29 |
| FR2513656B1 (fr) | 1985-08-02 |
| NL8203746A (nl) | 1983-04-18 |
| CA1185548A (en) | 1985-04-16 |
| GB2108965A (en) | 1983-05-25 |
| SE8205506D0 (sv) | 1982-09-27 |
| SE452777B (sv) | 1987-12-14 |
| DD204267A5 (de) | 1983-11-23 |
| ES8400146A1 (es) | 1983-10-16 |
| CH656642A5 (de) | 1986-07-15 |
| JPH047197B2 (cs) | 1992-02-10 |
| BE894501A (fr) | 1983-03-28 |
| ATA357182A (de) | 1992-08-15 |
| JPS5867194A (ja) | 1983-04-21 |
| FR2513656A1 (fr) | 1983-04-01 |
| HU190784B (en) | 1986-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL207379B1 (pl) | Sposób fermentacji kompozycji fitosteroli do androstadienodionu i Fusarium solani FMI 33 | |
| CS239932B2 (en) | Method of intensification of microbiological trnsformation of steroids | |
| US4524134A (en) | Process for preparing 1,2-dehydro steroids | |
| US5166055A (en) | Microbiological preparation of 9-alpha-hydroxy-17-keto steroids | |
| IL27858A (en) | Microbiological process for the preparation of 11beta-hydroxysteroids | |
| US20070212751A1 (en) | Microbial method for the 11beta hydroxylation of 9beta, 10alpha-steriods | |
| GB2123833A (en) | Steroid 1,2-dehydrogenation using dried microbial cells | |
| CS258482B2 (en) | Method of 4-androstane-3,17-dione and 1,4-androstadiene-3,17-dione production | |
| HU194318B (en) | Process for the delta 1-dehydrogenation of steroids in the presence of materials relieving from toxic kinds of oxygen | |
| HU187390B (en) | Process for producing 3-oxo-delta-1,4-steroide derivatives | |
| US2762747A (en) | Preparation of 17-keto steroid by penicillium | |
| GB1601168A (en) | Hydroxylated 1a,2a-methylene-steroids | |
| US2872380A (en) | Process for the production of 17-beta hydroxysteroids by neocosmospora | |
| IE47691B1 (en) | Process for the manufacture of 21-hydroxy-20-methylpregnane derivatives | |
| KR20080108974A (ko) | 아미코라톱시스 메디테라네이 세포들을 이용하는11베타-히드록시-9베타, 10알파-스테로이드의 제조방법 | |
| US5298398A (en) | Preparation of 9-α-hydroxy-17-keto steroids using Mycobacterium species CBS 482.86 | |
| US3285830A (en) | 16-oxygenation of steroids by stagonospora species | |
| US5472854A (en) | Process for the production of 17-oxosteroids via the fermentative oxidation of 17β-hydroxysteroids by Mycobacterium | |
| US3190809A (en) | Process for the preparation of 11alpha-hydroxy-delta4-3-keto steroids from 11-unsubstituted delta5-3-hydroxy and 3-acyloxy steroids using psilocybe caerulescens var. mazatecorum | |
| US3149050A (en) | Process for the production of 11alpha-hydroxylation steroids with panaeolus | |
| HU213017B (en) | Method of preparing 17-oxosteroids | |
| HU212769B (en) | Process for producing 4-pregnene-3,20-dione and its derivatives | |
| JPH07501689A (ja) | １４α−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３，１７−ジオンの製造方法 | |
| JPH0676B2 (ja) | ステロイド類の製造法 | |
| CS200518B2 (cs) | Způsob výroby androslanových derivátů |