CS229923B2

CS229923B2 - Production method of 4-pregnenone derivative

Info

Publication number: CS229923B2
Application number: CS818959A
Authority: CS
Inventors: Bror A Thalen; Ralph L Brattsand
Original assignee: Draco Ab
Priority date: 1980-12-04
Filing date: 1981-12-03
Publication date: 1984-07-16
Also published as: NO158508C; JPS57122100A; US4404200A; AU546379B2; DK163003C; DE3169108D1; DK535981A; ZA817772B; GR76919B; SU1156600A3; FI813807L; KR870001904B1; NO814098L; PT74078B; IE812827L; FI70582B; DD202034A5; JPS6261599B2; DK163003B; EP0054010B1

Description

Vynález se týká způsobu výroby 4-pregneno<vých derivátů. Tyto látky jsou nové, farmakologicky účinné sloučeniny. V mnoha případech je výhodné získanou stereoisomeirní směs dělit na jednotlivé složky. Získané deriváty je možno zpracovat na farmaceutické prostředky, které se používají jako (protizánětlivé přípravky.

Takto získané farmaceutické prostředky man současně vysokou protizánětlivou účinnost v místě podání a nízké systemické účinky.

Je známo, že některé glukokortikoidy je možno použít k místní léčbě zánětových a alergických stavů kůže a dýchacích cest i pro injekční léčbu kloubů. Ve švédském patentu č. 378 110 se popisuje protizánětlivá stereoisomerní složka stereoisomerní směsi steroidů obecného vzorce

kde

Xi a X₂, stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo atom fluoru,

Z znamená hydroxylovou skupinu, popřípadě esterifikovanou a

R znamená alkyl .s 'přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 10 atomech uhlíku, přičemž vazby v polohách 1, 2 a 4, 5 jsou nasycené nebo je alespoň v jedné z těchto poloh dvojná vazba.

Ve švédském patentu č. 378 110 se popisují sloučeniny svrchu uvedeného vzorce, v nichž v poloze 4, 5, avšak nikoli v poloze 1, 2 je dvojná vazba a jde o stereoisomerní sloučeniny vzorce

(III, epimer R).

Výsledky, které jsou uvedeny dále v popisu patenjtu prokazují, žo stereoisomerní složka R těchto látek nemá tytéž vlastnosti jako sloučeniny, získané zjpůsobe-m podle vynálezu.

Vynález je založen na pozorování, že některé nesymetrické 16,17-acetaly 16«.-hydroxykortisolu mají vysokou protizánětlivou účinnost v místě použití a současně malé systemičké účinky typu glukokortikoidů. Sloučeniny získané zipůsobem podle vynálezu je z tohoto důvodu možno použít к potlačování těžkých zánětových stavů.

Sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu je možno vyjádřit obecným vzorcem I

U) kde

A znamená n-propyl nebo n-butyl a

Z znamená hydroxyl, popřípadě esterifikovaný alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku.

Jednotlivé stereoisomerní složky, které jsou přítomny ve steroidní sloučenině svrchu uvedeného vzorce I je možno znázornit tímto způsobem:

Diasterěomery vzorce II а III, jejichž konfigurace se liší pouze ina uhlíkovém atomu číslo 22 se označují jako epimery.

Při srovnání chemických a fyzikálních vlastností, například chování při chromatografii, měrné rotaci a spektroskopických vlactnoiitech, při Ή—NMR a hmotové spektrometrii bylo prokázáno', že qpimery součcciin, vyrobených způsobem podle vynálezu a epimery analogických sloučenin, u nichž je konfigurace známá, mají strukturu, kterou je možno odvodit od známých látek. Toto srovnání bylo provedeno s epimery budesonidu, u nichž byla konfigurace jednoznačně stanovena a je uvedena v publikaci Acita Cryst. (1978), В 34, 3027 až 3036.

Sloučeniny podle vynálezu je možno získat tak, že se uvede v reakci 16a-hydroxykortisol vzorce

s aldehydem obecného vzorce

A—CHO, kde

A má svrchu uvedený význam, nebo jeho acetalem obecného vzorce

Bi

I

C - O. A ¹

8₃- C - θ' H I nebo e₃-⁴č^B5 B6 kde

A znamená n- propyl nebo· n-bufyl,

Bj až Ββ stejné nebo různé znamenají atom vodíku nebo alkyl is přímým . nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 10 atomech uhlíku, načež se ₍pr.o přípravu 21-esteru eeterifikuje skupina OH v získaném produktu alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným uhlovodíkovým řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku a pro přípravu epimeru R nebo S se získaný produkt, který je směsí epimeru R a S -před esterifikací nebo po ní dělí na jednotlivé epimery chromatografií.

Používá se acetalů n-butanolu nebo n-pentanolu s ethylenglykolem, propylenglykolem,

1.2- butandiiole.m, 1,2-pentandiolem, 2,2.4-trlmethyl-l,2ipentandiolem·, 2,3-hexandiolem,

1.2- okiandi · alem, methanolem, ethanolem, propanolem, isopropylalkoholem, butanolem, is obutanolem, -terč.butan olem, -pentan olem, hexanolem, heptanolem, - diethylisopropylkarbinolem a 2,2,5,5Hte.t_rnmethyl-3-hexanolem.

V případě, že se požaduje esterifikace v poloze 21, je zapotřebí výsledný produkt dále esterifikovat.

Tato eaterifikace se provádí alifatickou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku. . Jde například o kyselinu octovou, máselnou nebo trimethyloctovou.

Reakce 16aihydroxykort^ísolu s aldehydem nebo acetalem se s výhodou provádí tak, že se přidá steroid do roztoku aldehydu nebo acetalu spolu s katalyzátorem kyselé povahy, který tvoří například kyselina chloristá, p-toluensuifonová, chlorovodíková a podobně. Reakce se provádí v dio-xanu nebo podobném rozpuštědle, načež se reakčnísměs' vlije do methylench^-ridu a .neutralizuje se. Takto získaný surový sterolům acetalový derivát, který sestává ze směsi 22R- a 2?S-pimeru se po izolaci čistí chroma^^h na vhodném materiálu, například na dextranovém gelu s příčnými můstky typu Sephadex LH při použití- vhodného rozpouštědla, například halogenovaných uhlovodíků, etherů, esterů, například ethylacetátu nebo acttcnitrilu.

V případě, že mají být získány 21-acyloxyderiváty, je možno k esterifikací použít volnou kyselinu, její halogenid nebo anhydrid.

Jednotlivé epimery R a S, které se při reakci tvoří mají prakticky stejnou rozpustnost. Není tedy možné je izolovat z epimerní směsi běžnými způsoby, například trakční krystalizaci. Při provádění způsobu podle vynálezu se postupuje tak, že se stereoisomerní směs sloučenin obecného vzorce I zpracovává chromatcgrafií na sloupci, takže se epimery R a S oddělí vzhledem k různé -pohyblivosti ve -stacionární fázi a je možno je odděleně izolovat.

Chromatografií je možno provádět například na ůextranu s příčnými můstky typu Sephadex LH, .například Spphadex LH— —20, při použití vhodného organického rozpouštědla jako elučního činidla; Sephadex LH—20 je hddrcxyproρylcvaný dextranový gel, v němž jsou dextranové řefiezco spojeny příčnými můstky, takže vzniká trojrozměrná síť polysacharidu. Elučním činidlem může · být například směs n-heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 0 až 50·: 50 až 100 : 10 až 1, s výhodou v poměru 20· : : 20 : 1.

Epimery R a S obecných vzanců II a III, v nichž Z znamená hydroxylovou skupinu je rovněž -možno získat ze sttrecisomtrní · směsi obecného vzorce I, v němž Z znamená hydroxylovou skupinu, esterifikovanou alifatickou kyselinou, po rozdělení chromatografií na Sephadexu LH—20 při použití vhodného rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel, například směsi n-heptan^u, chloroformu a Oty-andu v poměru 0 až 50 : 50 až 100 : 10 až 1, s· výhodou 20 : 20· : 1 jako pohyblivé fáze. Ododělené a izolované epimery R a S obecných vzorců II a III, v nicHž Z znamená hydroxylovou skupinu, esttrifikcvancu alifatickou kyselinou, je také možno podrobit hydrolýze za použití katalyzátoru typu zásady, například hydroxidů, uhličitanů nebo hydrogenuyličitanů alkalických kovů, například hydroxidu sodného nebo draselného, uhličitanu sodného nebo draselného nebo УyrcgenuУličitanu sodného nebo draselného za vzniku epimeru R -a S, v nichž Z znamená hydroxylovou · skupinu.

Sloučeniny -vyrobené způsobem podle vynálezu je možno použít místně různým způsobem v závislosti na místě zánětu, tj. přímo na kůži, parenterálně nebo pro místní podání v dýchacích cestách inhalací. Cílem je dosáhnout optimální biologické přístupnosti účinného steroidu. Tato přístupnost při podání na kůži se dosáhne nejlépe tehdy, když -se steroid rozpustí v rozpouštědle s vysokou termodynamickou účinností. Je tedy zapotřebí použít vhodného systému rozpouštědel, jako jsou například -glykoly, jako prepylenglyko! nebo 1,3-butandiol jako takové nebo ve směsi s vodou.

Je také možno steroid rozpuůtit úplně nebo alespoň částečně v lipofilní fázi za pomoci smáčedla jako činidla napomáhajícího rozpuštění. Prostředkem pro místní podání na kůži může být mazání, krém- typu olej ve -vodě, krém - typu voda v oleji nebo emulze. V případě, že -se použije prostředku typu emulze, je možno postupovat tak, že se vytvoří disperzní nebo kontinuální fáze. Steroid může rovněž existovat v prostředcích svrchu uvedeného typu jako mikronizovaná pevná látka.

Aerosoly pod tlakem jsou vhodným způsobem podání pro peroi^č^l-ní nebo nosní inhalaci. Ao.osolový systém je proveden tak, aby každá dávka obsahovala 100 až 1000, s výhodou 20 až 250 μ-g účinného steroidu.

Účinnější steroidy se - používají v nižší dávce. Částice rnikr ionizovaného steroidu jsou obvykle podstatně menší než 5 nm a jsou uvedeny v suspenzi v hnacím plynu pomocí dispergač.ního čiin<ldia, například sorbitantrioleátu, kyseliny olejové, lecitinu nebosodné soli kyseliny dioktylsulfojantarové.

Vynález bude osvětlen následujícími příklady. V těchto příkladech se při preparativní chromaiOgrafii používá rychlosti průtoku 2,5 ml/cm². h”1. Molekulová hmotnost se ve všech příkladech stanoví hmotovou spektrometrií a teplota tání na mikroskopu Leitz Wetzler. Všechny analýzy pomocí vysokotlaké. kapalinové chromatografie (HPLC) byly provedeny na .sloupci s vnitřním průměrem 300 x 3,9- mm s . porézní náplní kysličníku křemičitého o průměru částic 10 дщ, .na něž je trvale vázána stacionární fáze. oktadecylsilanu (μ Bendapak C₁₈k při rychlosr.i průtoku 1,0 ml/min .a při použití ethanolu a vody v poměrech. 42 : 58 až. 52' : 48 jako pohyblivé fáze.

Příklad 1

16α,17α-[ 22R,S]-propylmeitjhylendío:yy-4-preguein-ll,,1I-diio--3,2C-dion

K roztoku . 125. mg čerstvě destilovaného n-butanolu a·. 0,1 mil 72% kyseliny chloristé ve 20 ml· čištěného. bezvodého ' dioxanu. se přidá po částech 500 mg 16a-hydroxykortisolu v (průběhu 15 minut za stálého míchání. Reakční směs. se pak nechá stát dalších 5 hodin· při. teplotě místnosti, za· stálého míchání a pak se zředí 100 ' ml methylenchloridu. Rozi ' ok se promyje roztokem uhličitanu draselného o koncentraci 10 '%' ve vodě a pak vodou, . načež .se vysuší a .odpaří ve vakuu. Odparek, se chromatografuje na sloupci o rozměrech 77' x 6,3. cm s náplní Sephadexu LH—20. při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 1995. až 2235. ml se izoluje a odpaří. Odparek se rozpustí· v methylenchloridu a vysráží se petroletherom. . Ve výtěžku 89 % se tímto způsobem. získá . 446 . mg 16'a,17ai(22R,S]-propylmethyJendioxy-4-pregnen-1.13,21-diol-3 . 2'0-di(cnu. Analýza vysokotlakou ' kapalinovou chromatografií prokázala. čistotu 99,2 % a poměr 47 : 53 . mezi. epimerem 22S a 22R. Produkt. měl tyto ' vlastnosti:

Teplala tání: 175 až 203 °C Optická . otáčivost.

(ajo²⁵ -= +138,0° (c = 0,198, . CMý Molekulová· hmotnost. — 432 (vypočteno

432,6).

Příklad 2 a- 7 a- [ 22R,S ] -propylmethylendioxy-4-pregnen-lí3J,21-diol-3,20-dion

K roztoku . 118 mg n-butanold-ethylacetalu a í+1. ml 72% kyseliny, chloristé ve 25 mililitrech čištěného bezvodého dioxanu se po částech přidá 200 .mg 16a-hydroxykortisolu v průběhu 15 minut. Reakční směs se pak nechá stát .při (teplotě místnosti ještě 5. hodin. Pak se směs zpracovává způsobem podle příkladu 1, čímž se získá 214 mg surového produktu. Tento produkt se chromatografuje na sloupci o. rozměrech 83 x 2,5 centimetru s. obsahem Sephadexu LH—20' při použití chloroformu jako elučního' činidla. Frakce v rozmezí 365 až 455 ml se oddělí a odpaří. Odparek .se dále čistí chromatografií na sloupci o rozměrech 85 x 2,5 cm s^;obsahem· Sephadexu LH—20 při použití směsi n-heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : 1 jako elučního činidla.

Frakce v rozmezí 855 až 1010' ml se oddělí a odpaří. Odparek se rozpustí v methylenchloridu' a sráží se petroletherem:, čímž se ve výtěžku 67 % získá 152 mg 16a,17a- [ 22R,S ]-pr opy lmethylendioxy-4-pregnen-ll-i,21-d-ol-3,30-dlonu. Analýza vysokotlakou kapalinovou chromatografií prokázala čistotu 98,2' % a poměr 43' 57 mezi epimerem 22S a 22R.

Molekulová. hmotnost — 432 (vypočítáno· 432,6).

Příklad 3

16a,17 a- [ 22R,S ] -propylmethylendioxy-llS-hydroxy-21-acetoxy-4-pregíien-3',20~dion:

K roztoku 918 mg 16a,l'7a-['22R,S']propylmethylend^ioxy-4-preg^r^^r^-lj^^/,2^1^-d^io^l^3,20-dionu· v 60 ml' pyridinu se přidá po. kapkách za stálého míchání roztok 460 mg acetylchloridu ve 30 ml dioxanu. Reakční směs . se nechá stát .přes noc při teplotě místnosti a pak' se zředí 500 ml' methylenchloridu, . promyje se uhličitanem sodným, (5% roztok ve vodě), pak' vodou a' pak se vysuší. Po odpaření ve vakuu se odparek' chromatograifuje ' na 'sloupci o rozměrech 72 x 6,3 centimetrů' s náplní Sephadexu LH—20 ' při použití chloroformu jako elučního' činidla. Frakce v .rozmezí 1275 .až' 1695 ml se oddělí, odpaří a vysráží směsí methylenchloridu . a. petroletheru. Ve ' .výtěžku ' 67 % se ' tímto způsobem získá 671 mg 16a,17a-[22R,S)-piOpyl‘meithylendioxy-ll'S-hyd.roxy-21-aceⁱtoxy-4-.pregnen-3,20-dionu.

Analýza vysokotlakou .kapalinovou chvomatograflí prokazuje čistotu 99 % a poměr 53 ' :47 .mezi epimerem . 22S .a 22R. Výsledný produkt má tyto . vlastnosti:

Teplota 'tání 118 ' až 1'37 °c ' Optická. otáčivost [a]_D25 = +125,0° (c = 0;200, CH2C1₂)'. Molekulová hmotnost: 474 (vypočteno 474,6).

Příklad 4

16a,.17a^l--22S]- a 16a,17a-[22R]-propylme.i:hyleιnd.ioxy-ll-:--hydtoxy-21-acθtoyy-4‘

-pregnen-3,20-dion mg 16a,17a-[22R,S]-propylmethylendioxy-ll3-hydroxy-21-a:etoxy-2-pregneii-3,20-dionu se chromatografuje na sloupci o rozměrech 75 x 6,3 cm s náplní Sephadexu LH—20 při použití směsi n-Ieptanu, chloroformu a ethanolu v poměru 20 : 20 : : 1 jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 1530 až 1680 ml '-a 1681 až 1860 ml se izolují a odpaří. Oba dva produkty se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru; 16,5 mg produktu z první frakce se identifikuje pomocí Ή—NMR a hmotové spektrometrie jako 22S-epimer a 13,0 mg produktu z druhé frakce se tímto způsobem identti-fikuje jako 22R--epimer. Epi-mery mají tyto vlastnosti:

Epimer S:

Teplota tání: 176 až 179 °C,

Optická otáčivost [,a]_D25 = +107,3 ° (c = 0,262, CH2C1₂), Molekulová hmotnost: 474 (vypočteno 474,6).

Epimer R:

Teplota tání: 112 až 117 °C,

Optická otáčivost:

[ajD²⁵ = +132,2 ° (c = 0,152, · CH₂C1₂), Molekulová hmotnost: 474 (vypoůteno 474,6).

Čistota epimerů byla stanovena vysokotlakou kapalinovou cňromaitograHi a bylo prokázáno, že je 99,7 % pro S-epimer a 95,0 proč, pro R-epimer; 4 % nečistot v epimeru R tvoří epimer S.

Příklad 5

16a, 17 «- [ 22R,S ] -propylmethylendioxy-llJ-hydroxy-21-butyryloxy-4-pregnen-3,?0-diori

K roztoku 100 mg 16a,17a-[22R,S)-propylmethylenidioxy-4-pregnen--113,21-diol-3,20-dionu v 5 ml pyridinu se po kapkách přidá roztok 70 mg butyrylchlo-ridu νε· 3 ml dioxanu. Reakce a izolace surového produktu se provádí stejným způsobem jako v příkladu 2. Získaný surový produkt se chromatografuje na sloupci o rozměrech 80 x x 2,5 s náplní' Sephadexu LH—20· při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 200 až 250 ml se odebere, odpaří a vysráží směsí methylenchloridu a petroletheru. Ve výtěžku 60 % se tínoltO způsobem získá 70 mg 16a,17a-[22R,S]-propylmethylendioxy-113-hydroxy-21-butyryloxy-4-pregne'n-3,20-dio.nu.

Vysokotlakou kapalinovou chromatografií je možno prokázat čistotu 99,7 %' a poměr 44 : 56 mezi epimery 22S a 22R. Výsledný produkt má tyto vlastnosti: Teplota tání: 64 až 75 °C, Optická otáčivost [φ25 = 121,0° (c - 0,218, CH₂C1₂).

Molekulová hmotnost: 502 (vypočteno 502,6).

Příklad 6 ,S ]]-^i^(^]^^^]^]^^^hylen^dioxy-11^3^-bydr-o^yy21<pivaloyloxy-4-pregnen^-3,20-dion

K roztoku 100 mg 16a17tf-[22R,S]-propylmethylejidioxy-4~pregnen-l1Sí,21-diol-3,20-dionu v 5 ml pyridinu se po kapkách přidá roztok 65 mg trimethylacetylchloridu ve 3 mililitrech dioxanu. Reakce a izolace surového produktu se provádí stejným způsobem jako v příkladu 2.

Surový produkt se chromatografuje · na sloupci o rozměrech 73 x 6,3 cm s náplní Sephadex LH—20 při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 1245 až 1485 ml se odebere, odpaří a vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Ve výtěžku 61 % se získá · 73 mg 16α,17α- [ '22R,S Ppropylmpthylendioxy-llS-hydr oxy-2.1-pivalyloxy-4-pregnen-3,20-dionu.

Analýza vysokotlakou kapalinovou chromatografií prokázala čistotu 98,7 ' % a poměr 46 : 54 mezi epimerem 22S a 22R. Výsledný produkt má tyto vlastnosti:

Teplota tání: 95 až 105 '°C. Optická otáčivost [a]D²⁵ = +115,5° (c = 0,110, CH₂C1₂). Molekulová hmotnost: 516 (vypočteno 516,7).

Příklad 7

16a,17a- [ 22R,S ] -butylmethylendioxy-4-pregnen-lld,21-diol-3,20-dion

K roztoku 170 mg 'n-penltanalu a 0,3 ml kyseliny chloristé o koncentraci 72 % v čištěném bezvodém dioxanu se po· částech přidá 500 mg 1.6ca-hydroxykortisolu v průběhu 15 minut. Reakční směs se pak nechá ' stát při teplotě místnosti ještě 5 hodin. Směs se zpracovává způsobem podle příkladu 1, čímž se získá 590 mg surového produktu. Tento produkt se chromatografuje na sloupci o rozměrech 73 x 6,3 cm s · náplní Sephadexu LH—20 při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 1860 až 2400 mililitrů se odebere a odpaří. Odparek se roqpus-tí v methylenchloridu a vys-ráží petroletherem. Ve výtěžku 87 % se získá -513 miligramů 16aA7ca422R,S]-butylmethylendioxy-4-pregneπ-ll_J6,21-diol-3,20ldionu.

Vysokotlakou kapalinovou chromatografií byla prokázána čistota 98,9 % a poměr 50 : : 50 mezi epimery 2?S a 22R. Produkt má tyto vlastnosti:

Teplota tání: 154 až 163 °C.

Optická djt^í^tvost [«]_d25 = +129,6 ° (c == 0,308, CH₂C1₂), Mooekulová hmotnost: 446 (vypočteno 446,6).

Příklad 8

16a, 17a- [ 22R,S ] -butylmethylendioxy^-pregnelllll^á₁21ldiol-3,20ldion

K roztoku 58 mg n-p&ntanalpropylenaeetalu a 0,1 ml kyseliny ehloristé o koncentraci 72 °/o ve 25 ml čištěného bezvodého dioxanu se po . .částech přidá 100 mg 16t»hydroxykortisolu v průběhu 15 minut. Reakční směs se pak nechá stát při teplotě místnosti ještě 5 hodin a pak se zpracuje způsobem podle příkladu 1. Surový produkt se chromatografuje na sloupci o .rozměrech 83 x x 25 cm s náplní Sephadexu LH—-20 při použití. chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 285 až 380 ml se odebere a odpaří. Tento produkt se dále čistí chromatografií na sloupci Sephadexu LH—20 o rozměru sloupce 85 x . 2,5 cm při použití směsi n-hoptanu a chloroformu .a ethanolu v objemovém poměru 20 : 20 : 1 jako elučního činidla. Frakce· v rozmezí 735 až 915 mililitrů se odebere a odpaří. Odparek se rozpustí v methylenchloridu a vysráží se peiiroletherem, čímž se ve výtěžku 64 % . získá 77 mg 16a,177--22R,S]-butylmethylendioxy-4-pregnen-HSÍ,21-diol-3,20-dionu.

Vysokotlakou kapalinovou chromaitografií je možno prokázat čistotu 96,8 % a poměr 46 : 54 mezi epimery 22S a 22R. Molekulová hmotnost je 446 (vypočteno 446,6).

P říklad 9

76α,77a-[22SJ- a 76α,77α-[22R]-butyhnethylendioxy-4-pregnen-l 1 ]--21^101-3,20-dion

500 mg 76α,77α--22R,S]-butylmethylendioxy-4-pregnen-llS,27-diol·3,20-dionu se chromatografuje na sloupci o rozměrech 76 x 6,3 cm s náplní Sephadexu LH—20 při použití směsi n-heptanu, chloroformu a ethanolu v objemovém poměru 20 : 20 ; 1 jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 4050 až 4395 a 4771 až 4950 ml se odeberou a odpaří. Oba dva produkty se vysráží ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Produkty se identifikují pomocí Ή—NMR a hmotovou spektrometrií .jako 79 mg . epimeru S . a . 127 mg epimeru R. Čistota . obou epimerů byla stanovena vysokotlakou kapalinovou chromatografií a byla 97,3 % (obsah 2,1 % epimeru R) pro epimer S a 97,9 % (obsah 0,5 % epimeru S) pro epimer R. Epimery měly tyto vlastnosti:

Epimer S:

Teplota tání: 165 až 171 °C.

Optická otáčivost [ajn²⁵ = +119,19 ⁰ (c = 0,382, СН₂С12), Molekulová hmotnost: 446 (vypočteno 446,6). i

Epimer R:

Teplota tání 154 až 162 “C.

Optická otáčivost [•·ά]_η26 = 148,3 ° (c = 0,302, CH2C12),

Molekulová hmotnost: 446 (vypočteno 446,6).

Příklad 10

76α,77α- [ 22R,S ] -butylmethylendioxy-7 7 β-hydroxy-21^<acetoxy-4-^-^iregnen-3,20-<dion

658 mg 76α,77α-[22R,S]-butylmethylend.ioxy-4-pregneni71<,27-diol-3,20-dionu a 5 ml anhydridu kyseliny octové se rozpustí v 5 mililitrech pyridinu a směs se nechá stát přes noc při teplotě místnosti. Pak se reakční směs vlije do směsi ledu a vody a několikrát se extrahuje methylenchloridem. Extrakty se slijí a .promyjí se kyselinou chlorovodíkovou o koncentraci 1 %, vodným roztokem uhličitanu sodného o koncentraci 5 %, nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, načež se vysuší a odpaří ve vakuu. Odparek se chromatografuje na sloupci o rozměrech 73 až 6,3 cm s náplní Sephadexu LH—20 při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 1215 až 1455 ml se odebere a odpaří. Odparek se rozpustí v methylenchloridu a vysráží . z petroletheru.

Ve výtěžku 71 % se .získá 507 mg 16·α,17α-[22R,S] butylmethylendioxy-llS-hyd.roxy-21-;acetOxy-^-^-^-3regne.n-3,20--di.onu. Vysokotlakou kapalinovou chromatografií bylo možno .prokázat čistotu 98,5 % a poměr 51 : : 49 mezi opimerem 22S a 22R. Produkt měl tyto vlastnosti:

Teplota tání: 108 až 125 °C.

Optická otáčivost [а']|?5= +126,5 0 (c = 0,238, CH2W2). Molekulová hmotnost: 488 (vypočteno 488,6).

Příklad 11

76α,77α-[22S]- a 16ar,17a-[22Rj-butylmethylen.dioxy-l7+-hydroxy-27-acetoxy-4-pregnen-3,20-dion

485 mg ^a^a-^RSS-butylmothylendioxy-ll'3-hydtoxy-27-acetoxy-4-pregne.n-3,20- -dionu se chromatografuje . . způsobem podle příkladu 3. Frakce v rozmezí 1275 až 1425 a 1486 až 1590 ml se odeberou a odpaří. Oba produkty se sráží ze směsi meithylenchloridu a petroletheru. Produkty se identifikují pomocí Ή—NMR a hmotové spektrometrie jako 140 mg epimeru S a 204 mg epimeru R. Čistota obou epimerů .stanovená vysokotlakou kapalinovou chrom^^^o^irafií byla. 97,5 (obsah 1,3 °/o epimeru R) pro epimer S . a 97,1 % (obsah 1,2 % Qpimeuu S. pro epimeir R. Oba epimery mají tyto vlastnosti:

Epimer S:

Teplota tání: 153 až 157 °C.

Optická otáčivost [rfajn²³ = +1O4,4° (c = 0,226, ^2^2),

M^t^kulová hmotnost: 488 (vypočteno 488,6).

Epimor R:

Teplota tání: 75 až 77 -°C.

Optická otáčivost [a]o^ = +140,4° (C = 0,228, CH₂C1₂). Molekulová hmotnost: 488 (vypočteno 488,6).

Příklad 12

16a, 17 a- [ 22S ] -buiiyimethylendi oxy-4-pregnen-110,21-diol-3,20-dion

K roztoku 53 mg 16a,T7]-[22S]-butylmethylendioxy-U3-hydroxy-21-acetoxy-4-pregnen-3,20-dionu v 10 ml methanolu se přidá 1,5 ml uhličitanu draselného ve formě 10·% roztoku ve vodě. Směs so 10 minut míchá při teplotě místnosti v dusíkové -atmosféře a pak se .neutralizuje kyselinou octovou, zředí se 25 ml vody a extrahuje methylenchloridem. Extrakty se slijí, vysuší a odpaří ve vakuu. Odpa-rek se chromatografuje na sloupci o rozměrech 83 x 2,5 cm s náplní Sephadexu LH—20 při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce 285 až 330 ml se odpaří, čímž , se ve výtěžku 73 % ' získá 35 mg 16a,17a-Í22S]-butylmethylendo:>xy-4-pregnen-ll3,2.1-dio--3,20-dio.nu po vysrážení ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Tento produkt byl identifikován hmotovou spektrometrií a jeho čistota byla prokázána vysokotlakou kapalinovou chromatografií jako 98,8 - % (obsah 0,8 % epimeru R).

Teplota tání: 160 až 167 '°C.

Optická otáčivost [aj_D25 = +115,0° (c = 0,332, CHTCb). Molekulová hmotnost: 446 [vypočteno 446,6).

Příklad 13

16a, 17 a-[22R]-buty Imethy lendioxy-4-pregne.n-110,21-diol-3,2O-dion

K roztoku 16a,17.a-[22R]-butylmethylendioxy-ll3-hydroxy-21-acetoxy-4-pregnen-3,20-dionu (58 mg) v 10 ml methanolu se přidá 1,5 ml uhličitanu draselného jako 10% roztok ve vodě. Reakční směs se pak zpracovává stejně jako v příkladu 10. Surový produkt se chromatografuje na sloupci o rozměrech 83 x 2,5 cm s náplní Sephadexu LH—20 při použití chloroformu jako elučního činidla. Frakce v rozmezí 305 až 360 ml se odpaří, čímž se ve výtěžku 81 % získá 43 mg 16^a,17a-[22R]b^ittlmit^thl^]^&n^d^i^c^x^y^-4-pregnen-ll0,21-dio--3,2O-di.onu po vysrážení ze směsi methylenchloridu a petroletheru. Produkt se Identifikuje hmotovou spektrometrií a jeho čistota při stanovení vysokotlakou kapalinovou chromatografií byla 95,4 proč, (obsah 2,5 % epimeru S).

Teplota tání: 152 až 162 °C.

OptloKá otáčivost [a]o²⁵ = +149,0 ° [c = 0,312, CtyCb).

Molekulová hmotnost: 446 (vypočteno 446,6).

Příklad , 14

Farmaceutické prostředky

V následujících příkladech, které však nemají sloužit omezení vynálezu jsou jako příklad uvedeny různé formy pro místní podání. Množství účinného steroidu při podání na kůži je obvykle 0,001 až 0,2 %’ hmot., s výhodou 0,01 až 0,1 % hmot.

Léková forma 1: Mazání

Mikronizovaný steroid kapalný parafin bílý měkký parafin do

Léková forma 2: Mazání

0,025 g

10,0 g

100.0 g

steroid	0,025 g
propylenglykol	5,0	g
sorbitan sesqioleát	5,0	g
kapalný parafin	10,0	g
bílý měkký parafin do	100,0	g

Léková forma 3: krém typu olej ve vodě

steroid	0,025 g
cetanol	5,0 g
glycerylmono-stearát	5,0 g
kapalný parafin	10,0 g
cetomakrogol 1000	2,0 g
kyselina citrónová	0,1 g
citronan sodný	0,2 g
propylenglykol	35,0 g
voda do	100,0 g

Cetomacrogol 1000 použitý v lékové formě č. 3 je polyethylenglykol(1000)monocetylether obecného vzorce

CH3 (CH2 ) mO ( CH2OCH2 )nCH₂OH, kde m je ceié číslo 15 nebo· 17 a n je celé číslo 19 až 23. Připravuje , se kondenzací ethylenoxidu s cetylalkoholem nebo cotostearylalkoholem. Používá se jako emulgační čin+dloo, zvláště při výrobě emulzí typu olej ve vodě,

Sorbimacrogolstearát (polysorbát 60,

Tween 60) použitý v lékové formě č. 4 je polyoxy(^iihylen (20) sorbita.nmcncsteaгát vzorce CggH^Ae» používá se rovněž jako emulgátor.

Léková forma 4: krém typu olej ve vodě

mikronizovaný steroid	0,025 g
bílý měkký parafin	15,0	g
kapalný parafin	5,0	g
cetanol	5,0	g
sorbimakrogol stearát	2,0	g
sorbitan momostearát	0,5	g
kyselina sorbová	0,2	g
kyselina citrónová	0,1	g
citronan sodný	0,2	8
voda do	100,0	g

Léková forma 5: krém typu voda v oleji

steroid	0,025 g
bílý měkký parafin	15,0 g
kapalný parafin	5,0 g
sorbitan sesoioleát	5,0 g
kyselina sorbová	0,2 g
kyselina citrónová	0,1 g
citronan sodný	0,2 g
voda do	100,0 g

Léková forma 6: lotion steroid 0,25mg iso.proipylalkohol 0,5ml karboxyvi.nylpolymer 3mg hydroxid sodný q . s.

voda do 1,0g

Léková forma 7: suspenze pro injekční podání mikronizovaný steroid 0,05 až 10 mg sodná sůl karboxymethylcelulózy 7mg chlorid sodný 7mg polyoxyethylen (20) sorbitanmonooleát 0,5mg fenylkarbinol 8mg sterilní voda do 1,0 ml

Léková forma 8: aerosol pro perorální a nosní inhalaci mikronizovaný steroid sorbltantrioleát trichlorfluormethan dichlortetrafluormethan dichlordifluormethan

0,1 % hmot.

0,7 % hmot.

24,8 °/o hmot.

24,8 % hmot.

49,6 % hmot.

Léková forma 9: roztok pro atomizaci steroid propylenglykol voda do

Farmakologické zkoušky

7,0 mg

5,0 g

10,0 g

Všechny steroidy vyrobené způsobem podle vynálezu jsou fyziologicky účinné látky. Glukokortikoidní vlastnosti těchto látek byly srovnány s týmiž vlastnostmi bude-sonidu {116,117--22R,S J-propylmethylendioxypregna-l,4-dien-ll/3,21-dioL3,20-dion|, protože tato látka je jedním z. glukokortikoidů, které se dnes nejvíce blíží požadované kombinaci místních a systemlckých účinků, jak bylo popsáno v publikaci Thalén a Brattsand, Arzneim.-Forsch. 29, 1687 až 1690 (1979).

Místní protizánětlivý účinek byl zkoumán jako schopnost zabránit otoku ucha u krys v následujícím pokusu.

Otoky ucha byly vyvolány u ' krysích samců o hmotnosti přibližně 90 g tak, že se v množství 20 μΐ na jednu . stranu ucha podal

5% roztok ethylfeeylpropiolátu v acetonu. Po 2 hodinách byl měřen otok ucha speciálním mikrometrem. Glukokortikoidy byly naneseny předběžně 16 hodin před vyvoláním otoku tak, že ucho bylo ošetřeno 20 μΐ roztoku acetonu (0,08 až 50 pg steroidu/ml '= — 0,0064 až 4 μg/krysa). Na každou dávku bylo použito 6 uší. Relativní účinnost zkoumaných látek zabránit otoku ucha byla vypočítána vzhledem k účinnosti srovnávací sloučeniny budesonidu analýzou lineární regrese.

Schopnost sloučenin vyvolat systemický glukokortikoideí účinek byla sledována při podkožním podání, protože žádné •systemické · účinky nebyly .pozorovány při svrchu uvedeném místním · podání. Krysám téhož pohlaví a hmotnosti bylo injekčně . podáno 0,5 ml stoτoideí látky. Bylo použito alespoň 5 dávek každé zkoumané látky v rozmezí 20 až 1280 qg/krysa při použití 4 zvířat pro jednu dávku. Přírůstek na hmotnosti byl stanoven první dva dny po injekčním podání a hmotnost brzlíku byla stanovena po dalších dvou dnech, protože tyto časové intervaly jsou pro stanovení systemického účinku optimální.

Relativní účinnost sloučenin byla propočítána stejně jako svrchu při použití budesonidu jako srovnávací látky. Výsledky, získané při použití glykokortikoidů vyrobených způsobem podle vynálezu, jsou shrnuty v následující tabulce 1.

Jo známo, že zavedení dvojné vazby do polohy 1,2 kortisolu způsobí vzestup jeho glukokortikoidní účinnosti. Z tabulky 1 je zřejmé, že nové sloučeniny, které jsou deriváty d-presnenu mají neočekávaně přibližně stejný místní protizánětlivý účinek jako budosoeid, který je derivátem 1.4-pregeadienu.

Z tabulky 1 je zřejmé, že · nové sloučeniny jsou přibližně l až 20x méně účinné než budosoeid, pokud jdo o vyvolání nežádoucích systemiakých glukokortikoidních účinků. Nové sloučeniny mají také 5 až . lOkrát vyšší protizánětlivý účinek než dříve známý 16a, 17 a- [ 22R ] -methylmethyleedioxy-4-pregeen-110,21-diol-l,2O-dion (švédský .patent č. 178 110], přičemž jsou stejně účinné . při rovnání systemického glukokortikoideího účinku.

Při léčbě vážných zánětlivých a alergických onemocnění kůže, například lupenky a plic, například astmatu, je stálá potřeba sloučenin, které spojují vysoký místní protizánětlivý účinek s výhodným poměrem mezi tímto účinkem a nežádoucími systemickými účinky. Nové sloučeniny oba tyto požadavky splňují.

OOOlOm\OCO\O rá' ^O ' UO~ CM~ r-T ' cd τ—I Ή CM OO tH CD rl H rl

OD O rH o cT

LCD CC \M CD ITD CD ITD CD~ rH ο° o? ' oo uo m lo o τ—I rH

I

CD ω

4-> w r

ω

Г 'cd

Λ <O o q _WJ ю > o 'ZD _ 2 Д S w'cd c; o-g* > * -

ň ^ň \i-H s

&

ω ω 2 Ή > α

4í Si—<

N

Í-H •O rH OQ CO rH H rl o j CD O rH rH cm o

CD CD CO [> CD LO ”Φ |> CD Oh Od Cd CM H Oh Cd H vd CD CD θ' θ' CD θ' Cd Cd Cd

NCOC^ODnCoI cm i—HTH rH CQ OMQ C> rl r-D o o θ CD θ CD o CD CD

4-J

С/Э §

*Cd n > ω •г! C3 2

S & ’§

CU 2 = rl

CD 00. O rH rH CD

CM CO ID CD CD rH · · CD CD rH CM~ CD rH CM~ HOrHHrH hH H

CD CD

ctí

4í

Λ s Η

Λ

CD '>ч й ctí e s o

4rí N >> 4í .s >O &

'Ф

4Í .2 ’5o o

Q 4!

cd S t-l cd ÍI4

O

I cú u pí _ ”^τ+ΉιPíD_-tóPí Pí Pí Pí Pí Pí . \r

ÍC K K

X X’ o o

O CD CD

X i O CD

CD o o CD O CD O cc ?Z £ X cd ω oi oi oi л ем co « сок

Cl N M Ol n CN οι Μri xxrcxxxxxx ω o cd cd cd cd cd cd cde cc r л c·: « co ?c mH

XXKXXXXXX S

CDCDCDCDCDCDCDCDCD 6

X XX

CD CD CD ' CD CD CD CD CD CD

II II I ^1 I I I I I I I I

Ol Ol O) Ol Ol Ol Ol Ol Ol Ol

HH Нт-Ч HtH Нг-Ч H[-4 hrt Hy-4 Hrt ·~Τ Ή кН нН Д< ιΗ Д| Η Η Η Η-ι нН

CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD

Claims

1. Způsob výroby 4-pregnenových derivátů obecného vzbrcr I ár formě siVeroisomerní směsi nebo ve formě epimeru v typu R nebo S · vzhledem k orientaci substituentů na uhlíkovém atomu v poloze 22, kde

A znamená n-propyl nebo n-butyl a

P .znamená hydroxylovou skupinu, popřípadě esterifikovanou alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku, vyznačující se tím, že se uvede v reakci 16a-hydroxykortisol vzorce

CH- OH

I * s aldehydem obecného vzorce A—CHO nebo jeho acetalem obecného vzorce

-o _x a

I c ^By-c-⁰' '_H ^B¥ nebo

X^B’ '..............

B.-C- O. .A в,-C - O _H ^B5 ^Bb kde

A má svrchu uvedený význam a

Bj. až B_G stejné nebo různé znamenají atom vodíku nc«bo alkyl s .přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 10 atomech uhlíku, načež se popřípadě pro přípravu ZR^p^í^iteru esterifikuje skupina OH v získaném produktu alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku a popřípadě pro přípravu epimeru R nebo S se získá produkt, který je směsí epimeru R a S, před esterifikací nebo po· ní dělí na jednotlivé epimery chromatografií.

2. Ppůsob podle bodu 1 pro výrobu sloučenin obecného vzorce I ve formě stereoisomerní směsi nebo epimeru typu R nebo S vzhledem k orientaci substituentů na uhlíkovém atomu v poloze 22, vyznačující se tím, že se použije aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená n-propyl nebo n-butyl, načež se pro přípravu 21-esteru esčerifikuje skupina OH v získaném produktu alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku a pro přípravu epimoru R nebo S se získaný produkt, který je směsí epimeru R a S, před esterifikací nebo po ní dělí na jednotlivé epimery chromatografií.

3. Ppůsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se použije aldehydu ' nebo acetalu, v .němž A znamená n-propyl nebo n-butyl.

4. Ppůsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se použije aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená n-propyl.

5. Ppůsob podle bodu 4, vyznačující se tím, že se izoluje epimer R.

6. Ppůsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že se použije aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená . n-butyl.

7. Ppůsob podle bodu 6, vyznačující se tím, že se izoluje epimer R.

8. Ppůsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se použije aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená n-propyl nebo n-butyl a načež se pro přípravu 21-esteru esterifikuje skupina OH v získaném produktu alifatickou karboxylovou kyselinou s přímým nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 5 atomech uhlíku a pro přípravu epimeru R nebo S se získaný .produkt, který je směsí epimeru R a S, před · esterifikací nebo po ní dělí na jednotlivé epimery chromatografií.

9. Ppůsob podle bodu 8, vyznačující se tím, že se použije ' aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená n-propyl.

10. Ppůsob podle bodu 9, vyznačující se tím, že se v získaném produktu skupina OH esčerifikuje kyselinou octovou.

11. Ppůsob podle bodu 10, vyznačující se tím, že se izoluje epimer R.

12. Ppůsob podle bodu 9, vyznačující se tím, že se v získaném produktu skupina OH esterifikuje kyselinou máselnou.

13. Způsob podle bodu 9, vyznačující se tím, že se ve výsledném . produktu skupina OH esterifikuje kyselinou trimethyloctovou.

14. Způsob podle bodu 8, vyznačující se tím, .že se použije aldehydu nebo acetalu, v němž A znamená n-butyl.

15. Způsob podle bodu 14, vyznačující so tím, že se ve výsledném produktu skupina OH esterifikuje kyselinou octovou.

16. Způsob podle bodu 15, vyznačující se tím, že .se izoluje epimer R.

17. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se stereoisomerní směs dělí na epimery itypu R a S vzhledem k orientaci substituentů na uhlíkovém atomu v poloze 22 chromatografii na hydroxypropylovém dextranovém gelu, v němž jsou dextranové řetězce spojeny příčnými můstky za vzniku trojrozměrné polysachavidové sítě, .přičemž jako elučního činidla sc» použije směsi n-heptanu, chloroformu a ethanolu v poměru až do 50 : 50 až 100 : 10 až 1.