CS225841B2 - Process for preparing macrolide antibiotics - Google Patents

Process for preparing macrolide antibiotics Download PDF

Info

Publication number
CS225841B2
CS225841B2 CS814338A CS433881A CS225841B2 CS 225841 B2 CS225841 B2 CS 225841B2 CS 814338 A CS814338 A CS 814338A CS 433881 A CS433881 A CS 433881A CS 225841 B2 CS225841 B2 CS 225841B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
dmt
solution
dissolved
ethyl acetate
toluene
Prior art date
Application number
CS814338A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard H Baltz
Gene M Wild
Eugene T Seno
Herbert A Kirst
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CS225841B2 publication Critical patent/CS225841B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/08—Oxygen as only ring hetero atoms containing a hetero ring of at least seven ring members, e.g. zearalenone, macrolide aglycons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/54—Streptomyces fradiae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká makrolidních antibiotik, zejména sloučenin, které jsou obdobné dobře známému léčivu tylosinu, který byl například popsán v publikaci Tetrahedron Lettere. 2339 (1970).
Přestože tylosin je velmi cenným antibiotikem, je zapotřebí získávat antibiotika další také pro možnost vzniku odolných kmenů. Modifikace ve struktuře antibiotika mohou také vést ke změnám ve spektru účinnosti. Chemické modifikace struktury makrolidních antibiotik tylosinového typu jsou však velmi nesnadné. Například v publikaci J. Org. Chem. 44 (12), 2050 až 1052 (1979) se poukazuje na nepřekonatelný problém, který je spojen 8 pokusem o odštěpení mycinosylglykosidové vazby tylosinu chemickým způsobem. Z tohoto důvodu se ve většině případů veškerá snaha vyvíjela směrem k získávání nových mikroorganismů, přírodně se vyskytujících nebo uměle získaných, protože jejich pěstováním by bylo také možno získat antibiotika s podobnou strukturou.
Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že je možno získat sloučeniny, podobné tylosinu, avšak bez mycinosylového cukru, obsaženého v tylosinu pěstováním některých kmenů Streptomyces fradiae v submerzní kultuře ze aerobních podmínek. Způsobem podle vynálezu je tedy možno získat nová mekrolidní antibiotika obecného vzorce I (I)
kde
Q znamená skupinu -CHgOH nebo -CHO, nebo z farmaceutického hlediska přijatelných solí nebo ecyleeterů těchto látek za předpokladu, že v případě, . že se v příloze 3 nachází O-acetylová skupina, nachází se na poloze 4 skupina, . odlišná od O-isovelerylové skupiny, tak, že se
a) pěstuje Streptomyces fradiae NRRL 12170 v eubímerzní kultuře ze aerobních - podmínek při teplotě až 37 °C a při nasycení živného prostředí vzduchem 30 % nebo vyšším do nahromadění antibiotika a
b) popřípadě se vzniklá sloučenina převede na farmaceuticky přijatelnou sůl nebo acylester.
Přestože po svrchu uvedenou strukturu není vyznačena žádná stereochemická konfigurace, je zřejmé, že tato konfigurace je totožná s korrfigurací tyl osinu. Neutrálním cukrem je mfkaróza a aminocukrem je mkkrnnnoza.
V případě, že Q znamená skupinu -CHO, je sloučenina obecného vzorce - I novým makkdidovým antibiotkkem. Jde o 23-denmcinnoyytyyosin, který bude dále nazýván deimcinnsyylylosin nebo DMT a má strukturní vzorec:
-ihyУdoSerivát DMI, to jest 20-dLhy<^i^r^-^^:^-^i^(^n^<^i^nn82ylt5^1<^í^in bude dále nazýván dihydro-DMT a je možno'jej vyjádMt strukturním vzorcem:
Sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu inhibují růst mikroorganismů, patogenních pro'teplokrevné živočichy. Tato antibakteriální činidla jsou zvláště účinná proti grampoziti^niím mikroorgprnSsnům a proti mikroorganismům čeledi Meoplasma.
Hy<3droxylové skupiny DDT a dihydro-DDT je možno esterifikovat v polohách 2*, 4”, ' 3*\ 23 a 3 ze vzniku cenných ecylesterů. Dmoto ditydro-DMT je možno esterifikovat na hydroxylové skupině v poloze 20. NejjednoduSSÍ esterifikace hydroxylové skupiny je v poloze 2*. Typickými estery jsou estery monokarboxylových kyselin nebo heiniestery dikarboxylových kyselin o 2 ež 18 atomech uhlíku.
DDT, dihydro-DMT e ecylestery jsou bázické sloučeniny, které se působením kyselin mění ’ne ediční soli s kyselinami. Pod pojmem sloučeniny typu DMT se v průběhu přihlášky rozumí DDT, dihydro-DMT i farmakologicky přijatelné ediční soli DMT, dityrdro-DMT nebo acylestery těchto sloučenin s kyselinami.
Tyto látky je možno získat při použití nového kmene Streptomyces fradiae NHRL 12170, DDT nebo dihyfdro-MT lze získat pěstováním tohoto kmene v submcezní kultuře ze aerobních podmínek do nahromadění antibiotik. DD-nebo dihydroDDDT se extrahuje z alkalioovaného filtrátu živného prostředí polárními organickými rozpouštědly a je možno je dále čistit extrakcí, adsorpcí a/nebo krystaližací.
Je rovněž popsán zlepšený způsob výroby 5-O-msУamisosyltylonoOidu (OMT) a 20-dihydro“ -5-O-smУaminosyltylonoridu (dihydro-ODT) ·hydrolýzou v mírně kyselém prostředí, kyselinou se působ:! ne DMT a dihydroDDDT.
Dlíhfcdoodelvát DMT je získat chemickou redukcí nebo fermentací. V případě výr oo by dihyrdro-DDT chemickou redukcí je možno užít známých způsobů, například se působí na DMT přibližně stech! omet^ kým množstvím chemického redukčního činidle jako borohycdridu sodíku například v rozpouštědle ,typu alkoholu. DihydroDDDT je rovněž možno získat pěstováním kmene S. fradiae NRRL 12170 ze řízených podmínek.
DDT a dehydro-DDT je možno esterifikovat v polohách 2*, 4 ** , 3 , 23 a 3 za vzniku ecylesterů působením acylačních činidel známým způsobem. D-moto je možno esterifikovat dUyrdooDDlT v poloze 20. NejsnednnjSí je esterifikace hydroxylové skupiny v poloze 2. Typickými ,acylačními činidly jsou anhydridy, halogenidy, a to obvykle v kommbnaci se zásadou nebo jinou látkou, pohlcc^c! kyselinu a aktivní estery organických kyselin. Acylaci je rovněž možno provést použitím směsi organické kyseliny a dehydratačního činidla, nspř. N,N'-decyklohexylkarbodeisedk. Acc^ci je rovněž možno provést enzymaaicky, jak bylo popsáno v publdkůci Okamoto·a delSí v US patentu č. 4 092 473. Po skončené reakci je možno ecylova~ né deriváty izolovat a čistit známým způsobem.
2*-Monooeterové deriváty je možno získat selektivní esterifikecí, která je zásadně známe, například tak, že se ne entibiotkkum působí stechiometrikým rnioOstvím nebe malým přebytkem acylačního činidla jako acylanhydridu při teplotá mísltnoolti po dobu 1 až 24 hodin do dovršení esterifikaie. 2'-Mooooeter . je možno z reakční směsi izolovat standaidnďm způsobem, například extrakcí a ihroDmatorrfií nebo krystalizací·
Použitelné ecylesteiy jsou estery organických kyselin včetně alifatických, a iyklo tických kyselin, aryllfrbexylevýih, araUylkarboxylových nebo heteroiyHiekýih karboxylových kyselin, kyselin sulfonových a all:exylarbooylevých kyselin, s výhodou o 2 až 18 atomech uhlíku, zejména o'2 až 12 atomech uhlíku.
Vhodnými estery jsou tedy estery, odvozené například od kyseliny octové, chloroctové, propionově, máselné, isovalerové, alloxylarbonylových kyyelio, kyseliny stearové, cykloprepaokarbeχslevé, cyllehexaokarbe:χylevé, bθta-cyllohexylprepienevé, 1 o>adfmantaIOlβrboχrlevé, benzoové, fenyloctové, fsnoxyoctové, mandlové a 2-thieoyloitové, jakož i od tyselio alkylsulfonových, arylsufoonovýih a aralkylsufoonovýih, přičemž tyto substituované kyseliny mohou popřípadě nést delší substituenty Jako atom halogenu, oitroskupiou, nižší all:oxysltpint a podobně na aromatickém kruhu· Vhodnými estery Jsou také hemiestery, odvozené od dikarboxylových kyselin, například od kyseliny jantarové, mefeinevé, fumerové, melooové a ftelové.
Farmaceuticky přijatelné estery jsou výhodnou skupinou svrchu uvedených sloučenin. , Oasa tni estery je možno pou2žt jako meziprodukty.
DMT, ditydoo-DMT a acylderiváty tvoří adičoí soli s kyselinami. Tyto adičoí soli DMT, dihydoo-DMT a acylderiváty s kyselinami jsou rovněž zahrnuty do předmětu vynálezu. Tyto soli Jsou ' cenné například při izolaci a čištění DMT, dihydoo—DMT a acylovaoých derivátů. Mimoto maj tyto soli obvykle dekcoofιjSÍ rozpustnost ve vodě.
Vhodnými solemi jsou například soli, vznOknaící běžnými reakcemi s organickými nebo anorganickými kyselinami, jde tedy oepříkled o adiční soli s kyselinou sírovou, chlorovodíkovou, fosforečnou, octovou, jantarovou, citrónovou, mléčnou, maleinovou, fumarovou, palmitovou, cholinovou, pamoovou, muc:lnovou, D-glutamovou, d-kafrovou, glutarovou, glykolovou, ftalovou, vinnou, mravenOí, laurovou, stehovou, s^^ylovou, metensulf ooovou, benze ros ufonovou, fskerbeveu, párovou, benzoovou, skořicovou a podobně.
Farmaceuticky přijatelné adičoí soli s kyselinami Jsou vzláště výhodnou skupinou solí, které je možno získat způsobem podle vyiálezu. Pod pojmem farmaceuticky přijatelné se rozumí takové so^i, které jsou dostatečně oetoxické, aby je bylo možno pouužt k léčbě teplo-, krevných živočichů.
VvnOlez se rovněž týká zlepšeného způsobu výroby OMT a ditydr-oOMT hydrolýzou v mírně kyselém prostředí, přičemž se hydrolyzuje DMT a dHydro-DMT. OMT a dUydo-oMT maj tutéž strukturu Jako DMT a di^ly^do-^-DMT s tím rozdílem, že mykrosylová skupina je nahrazena vodíkem. Provádění hydrolýzy v mírně kyselém prostředí je známé. Při hydrolýze se užijí roztoky, jejichž pH je 4 nebo nižší. Při provádění hydrolýzy je možno pouužt teploty 20 až 100 °C. Reakční doba, nutná k proveden:! hydrolýzy se mění a závisí oa pH reakční směsi a oa použité teplotě. Při vyšším pH se reakční rychlost zpoi^a^e, při vyfiš teplotě se reakční rychlost zvětšuje. Reakce se provádí tak, že se působí oa DMT nebo di^hy^c^o-^D^MT mírně kyselým roztokem po dobu, dostatečnou k odstranění mykrosy^ové skupiny ze vzniku OMT nebo dihydoOoMT.
Je také možno OMT nebo dibydo-oOMT získat tak, že se působí oa DMT nebo ditydo--DMT přímo ve f orientačním prostředí, v němž pyly tyto látky získány, přičemž se působí mírně kyselým roztokem svrchu uvedeným způsobem po dobu, dostatečnou k přeměně DMT nebo ditydo-DDMT oe OMT nebo dihydroOOMT. OMT nebo dihydo-OOMT po získání tímto způsobem je možno izolovat z fermentačoího prostředí známým způsobem.
OMT a . dihyrdoo-MT byly· popsány Gormanem a dalšími v US patentu č. 3 4 59 853. V US patentu č. 3 459 853 se OMT a dilyrdo-OOMT připravují řízenou hydrolýzou tylosinu, desmmkooinu, mmkrocinu a laOtenocinu a jejich dihydroderivátů v kyselám ·prostředí. Při tomto způsobu výroby se odstraňijí všechny neutrální cukry z tylosinu, desmyooiini,, makro činu nebo laOtenocinu za vzniků OMT. Analogiclým způsobem je možno získat dihydoo-OMT. -stranění neutrálního cukru v poloze 23.vyžaduje podmínky, Oteré současně způsobují velké ztráty výsledného produktu. PSi provádění. postupu podle vynálezu O těmto ztrátám nedochází.
JaO již bylo uvedeno, je možno získat DMT a dihyrdoo-MT taO, že se pěstuje kmen Streptomrces fradiae,·který produkuje tyto látky v submerzní kultuře za aerobních podmínek ve vhodném živném prostředí do nahromadění dostatečného mmOství antibiotika. JaO je z oboru známo, DMT se vždy produkuje na počátku fermentace. -ihydro--KT se produkuje po určité době fermentace, Oterá Sovooí enzymatickou re^dukci · přdCOomného DMT
K pěstování Strepoomyces fradiae NRR- 12170 je možno užít celou řadu živných prostředí. Z hlediska · hospoOSánooSi, optimálního výtěžOu a izolace jsou vŠaO výhodná některá živná prostředí. Výhodnými zdroOi uhlíku·pro fermentaci ve větším mmřítOu jsou uhlo^/dráty, např. dOKtrin, glukóza, ěOrob a kukuřičná moučka a oleje, například sojový olej. Výhodným zdrojem dusíOu je kukuřičná mouka, sojová 'monlce, rybí mouka, aminokyseliny apodobně. Z anorganických solí se včleňují do živného prostředí běžné rozpustné soli obsahuuící železo, draslík,.sodík, hořčík, vápníO, amonný ion, chloridový ion, uhličitonsvý ion, síranový ion, dusičnanový ion a podobně. ' živné prostředí má obsahovat taOové stopové prvOy, Oteré jsou nutné pro růst a vývoj mikroorganismu. Tc^o stopové prvOy se běžně vyslo/uj jako nečistoty v ostatních složkách živného prostředí v · mnOživí, Oteré je dostatečné pro růstové požadavky mikroorganismů. Někdy však může být zapotřebí přidat malé mnnOžtví protipěnového činidla (0,2 ml/litr), například propylenglykolu o molekulové hmoOnnoti přibližně 2 000, protože zejména ve větším mměítku je nutno pěnění zahránt.
Při yýrobě větěích mnOž^í DMT nebo dihyrdro-DMT je výhodná aerobní fermentace v submerzní kultuře. Malá mnOžtví . -MT nebo Si^ysdro-DMT je možno také získat v třepacích lahvích. Vzhledem k období flek · při výrobě antibiotik, Oteré je obvykle spojeno s· očkováním spor· přímo do velkých tanků je výhodné užít vegetativní očkovací matteiál. Tento vegetativní očkovací matriál · se získává tak, že se malý obejm živného prostředí naočkuje sporami nebo fragmenty myceeia.organismu, čímž se získá čerstvá, aktivně rostoucí kultura organismu. Tento vegetativní očkovací maateiál se pak přenese do většího tanku. K získání vegetativního očkovacího maateiálu je možno užít téhož prostředí jako pro fermenlteci ve větším měřítku, je však možno užít i jijých živných prostředí.
S. frtSiae NRRL 12170 je možno pěstovat při teplotách 10 až 37 °C. K optimální produkci antibiotika dochází při pěstování mikroorganismu při teplotě 28 °C.
Tak, jak je obvyklé při fermentacích v submmrzní kultuře za aerobních podmínek, probublává se kulturou sterilní . vzduch. Pro efektivní produkci antibiotika má být prostředí v tanku nasyceno vzduchem alespoň na 30 % nebo více, při teplotě 28 °C to znamená tlak 0,1 MPa.
K produkci antibiotika dochází v průběhu fermentace a vzrůst mnnOžtví antibiotika je možno sledovat odebíráním vzorků živného prostředí a testováním těchto vzorků na mikroorganismech, citlivých na tato antibiotika. Vhodným pokusným organimmem je Staphyloeoecus aureus ATCC ' 9144. Biologická zko^ta se obvykle provádí autommticOy měřením zákalu. Mimoto je·možno sledovat produkci antibiotika kapalinovou ehromíatoritií při současném sledování v ultrafialovém světle.
Po nahromadění dostatečného množství antibiotik v submerzní kultuře Je možno izolovat DMT nebo dihydro-DMT z fermentačního prostředí obvyklými způsoby. Obvykle se při izolaci DMT nebo dihydro-DMT nejprve fermentační prostředek zfiltruje. Zfiltrované prostředí je možno dále čistit za získání požadovaných antibiotik. Toto čištění je možno provádět různým způsobem. Výhodné Je postupovat tak, že se filtrát upraví na pH 9 e pak se extrahuje vhodným rozpouštědlem, například etylacetátem, amylacetátem nebo metylisobutylketonem, organická fáze se pak extrahuje kyselým vodným roztokem a antibiotikum se vysráží alkalizací tohoto prostředí. Další čištění spočívá v extrakci, adsorpci, a/nebo srážení.
Mikroorganismus
Mikroorganismus, používaný při provádění způsobu podle vynálezu byl získán chemickou mutací kmene Streptomyces fradiae, který produkuje tylosin; Mikroorganismus, získaný touto mutací produkuje pouze velmi malé množství tylosinu avšak jako hlavní složku produkuje DMT.
Při stanovení vlastností byl nový mikroorganismus srovnáván s kmenem Streptomyces fradiae Μ4Θ-Ε 2724.1, který produkuje tylosin a je odvozen od kmene S. fradiae NRRL 2702. Tento kmen byl popsán v US patentu č. 3 178 341 (Hamill a delší), uveřejněn 13· dubna 1965. Dále bude kmen S. fradiae M48-E 2724.1, který produkuje tylosin, nazýván pouze E2724.1.
Nový kmen, produkující DMT a dihydro-DMT, kmen NRRL 12170 je také klasifikován jako Streptomyces fradiae. Při popisu vlestnostní tohoto organismu byl uchováván postup, doporučovaný Internetional Streptomyces Project pro stanovení vlastností Čeledi Streptomyces /Е. B. Shirling a D. Gottlieb, Methodes For Characterization of Streptomyces Species*', Internal. Journal of Systémetic Bakteriology, 16 (3), 313 až 340 (1966)/» Mimoto byly provedeny ještě některé další testy. V úvehu byly vzaty také popisy S. fradiae v literatuře:
. R. E. Buchenan a N. E. Gibbons, Bergey^s Manual of Determinative Becteriology 8. vydání, The Williams and Wolkins Gol., Baltimore, Md, 1974, str. 815 a
2. E. B. Shirling a D. Gottlieb, Cooperative Description of Streptomyces· II· Species Description from First Study, Internal. Journal of Systematic Bacterlology, 18 (2), 118, (1968).
Dále bude srovnán kmen, který produkuje DMT s kmenem, který produkuje tylosin, S. fradiae E2724.1.
Vlastnosti mikroorganismu
Morfologie spor u nového kmene i u E2724.1 spadá do oblasti Retirieculum-Apertum /RA/« Háčky, kličky a nepravidelné spirály jsou velmi krátké a obvykle nejsou široké. To je nejlépe vidět na živném prostředí ISP 2, to jest na agaru s extraktem z kvasnic a ze sladu v případě kmene E2724.1 a na Czapkově agaru v případě nového kmene. Spory mají hladký povrch a kulovitý tvar při průměrném rozměru 0,65 /im. Rozmezí tohoto průměru je 0,61 až 0,71 μ&·
Největší rozdíl mezi oběma kmeny je možno pozorovat na vlastnostech jejich kultur. Kmen E2724.1 produkuje poměrně dobře vzdušné mycelium na většině živných prostředí a toto mycelium má světlou barvu. Nový kmen obvykle produkuje velmi malé vzdušné mycelium nebo Žádné a v případě, že je přítomno, bývá šedavé. Zadní strana těchto kolonií neprodukuje žádný pigment a je světlá až mírně nažloutlá. Produkce melanoidního pigmentu je negativní.
Produkce melanoidního pigmentu byla zkoumána při použití živných prostředí ISP 1, to jest bujónu s tryptonem a extraktem z kvasnic, ISP 6, to jest agaru s peptonem, extraktem kvasnic a železa, ISP 7, to jest agaru s tyroslnem a téhož prostředí bez tyrosinu·
225341
Shrnutí důležitých obdobných i rozdílných vlastností mezi kmenem E2724.1 a novým kmenem je podáno v následující tabulce 1.
Tabulka 1
Srovnání Streptomyces fradiae E2724.1 a NRRL 12170
Podobné vlastnosti
Rozdíly
Podobné vlastnosti
Rozdíly
Morfologie řetězců spor
Vlastnosti kultury
Vzhled povrchu spor Rozměr spor Bezbarvost
Chybění rozpustného pigmentu
Růst ne stejiých vegetativních prostředcích využití zdrojů uhlíku zkapalnění želatiny tolerance NaCl oblast pH oblast teploty
Redukce dusičnanu Pozitivní katalézová reakce
Pozitivní fosfetážová reakce
Negativní ureázová reakce Spektrum citlivosti na antibiotika
Hydrolýza škrobu
Negativní fermentace odstředěného mléka
Morfologie a růstové vlastnosti kmenů S. fradiae E2724.1 a NRRL 12171 jsou srovnány v tabulce 2. V tabulce 3 je srovnávána citlivost mikroorganismu na produkovaná antibiotika, v tabulce 4 je srovnáváno využití zdrojů uhlíku a v tabulce 5 různé fyziologické vlastnosti obou kmenů.
Tabulka 2
Růst a morfologie
E2724.1 NRRL 12170
Sporofory RA RA
Řetězec spor 10 10
Povrch spor1 hladký hladký
Tvar spor kulovitý kulovitý
ISP 2 G2 dobrý dobrý
R 87. m. Žlutý^ 87. m. žlutý
Am 263. bílý dobrý 263. bílý střední
Sp žádný
ISP 3 G Špatný špatný
R 263. bílý 263. bílý
Am Špatný 263. bílý stopy
Sp žádný žádný
ISP 4 G bohatý dobrý
R 87. m. žlutý 87. m. žlutý
Am bohatý 263. bílý Špatný
Sp žádný žádný
ISP 5 G dobrý dobrý
R 86,1. žlutý 86,1. žlutý
Am dobrý 92. y. bílý Žádný
Sp žádný žádný
pokračování tabulky 2
E2724.1 NRRL 12170
ISP 7 G bohatý dobrý
R 87. m. žlutý 87. m. žlutý
Am bohatý 263. bílý 265. středně šedé
Sp žádný světle hnědý
BennottSv agar G špatný žádný
R 90. gy. žlutý žádný
Am žádný žádný
Sp žádný žádný
Ca-mmtát G dobrý špatný
R 263. bílý 92. y. bílý
Am dobrý 263. · bílý žádný
Sp. žádný žádný
Czapkův agar G dobrý s tředoí
R 87. m. žlutý 87. m. žlutý
Am bohatý 263. bílý stopy
Sp žádný žádný
Glukozootparagio G žádný žádný
R žádný žádný
Am žádný žádný
Sp žádný žádný
Agar v protaakem z rajčat
e ovesnou moukou G bohatý dobrý
R 92. y. bílý 87. · m. žlutý
Am bohatý 263. bílý žádný
Sp žádný žádný .
Vysvětlivky k tabulce 2:
Vzhled povrchu spor tyl stanoven elektoooovým mikroskopem p
G Růst, R = zadní nebo vpodní strana kolonie, Am = vzdušné mmselium, Sp =·rozpustný pigment 3 Názvy barev jsou v soulačlu v 1SCC-NBS tabulemi (K. L. Kelly a D. B. Judd, ^e TSCC-NBS CenOrold Color Chirts Standard Semple č. 2106, US. Dept. of Cotmmere, National Bureau of Standards, Waahhngton, D. S. 20234)
Tabulka3
Citlivost na antibiotika8’ b
Annibiotikum KonocnOrtce Sloučenina E2724.1 NRRL 12170
Chloramfenikol 30 /ig oitrofeiylový derivát + +
Erythromycio 15 /ig eekkolid tr tr
CCefloridin 30 ^g beta-laktam + +
Linkomycin 2 /ig lioliovaeinid - -
Polymyxin B 300 jednotek peptid tr tr
Streptomycin 10 /ig tminoglykosid + +
Tetrtcyklio 30 ^g tetrtcsklio + +
Vankoiomsin 30 ^g glykopeptid + +
Vysvětlivky к tabulce 3:
8 Stanoveno na agaru s použitím kotoučů b - = odolnost (0 zóna inhibice) + = citlivost (zóna inhibice) tr = stopy citlivosti
Tabulka 4
Využití zdrojů uhlíku8’ b
Zdroj uhlíku E2724.1 NRRL 12170
Kontrola: bez uhlíku - -
Kontrola: glukóza + +
L-arabinóza - +
D-Fruktóza + +
D-galaktóza + +
i-inositol +
D-mannitol - -
rafinóza - -
salicin - -
sacharóza + 4-
D-xylóza + 4-
D-rhamnóza — +
0 - = 0 využití + = využití b Stanoveno podle International Streptomyces Project (ISP) 9 na agaru s uhlíkovým zdrojem přidaným po sterilizaci filtrací do koncentrace 1,0%. Inkubace při 30 °C, odečtení po 7 a 12 dnech.
Tabulka5
Různé fyziologické vlastnosti
E2724.1 NRRL 12170
ISP 1 (chromogenicita) - -
ISP 6 (chromogenicita) - -
ISP 7 (chromogenicita) - -
Zkapalnění želatiny - 4-
Fermentece odstředěného mléka . - -
Růstová oblast 1’ 2 6,1 až 8,8 6,1 až 7,8
Růstová teplota 1’ 3 10 až 37 °C 10 až 30 °C
Tolerance NaCl1’ * 8 % 4 %
Hydrolýza škrobu 4- 4-
Redukce dusičnanu 4- +
Kataláze^ + +
Fosfatáza^ + +
Ureáza^ - -
225Q41
Vysvětlivky k tabulce 5:
Na ISP 2 (agar v extraktem z kvasnic e sladu), inkubace 7 dnů
Stanoveno při. použití následujících pufrů v konceetraci 0,05 M: tysol^a ci-trónová, pH 3, 4, 5, kyselina 2-(N-mooforin)rtatvulfstrvá, pH 6, . kyselina 3-(N-moorfoin)propanvulfonová, pH 7, kyselina N-^-lwSrrxystySiipeeazln-N^-etenvulfonová, pH · 8, *
2-amino-2-(bSdrc»xyetyS)-1|3-propandiol, pH 9, kyselina 3-cykloheyylamino-1 ,1-propanvulfonová, · pH 10,11.
Po inkubaci 7 dnů bylo bráno pH agaru jeko správná hodnota, protože některé pufry neudržely stanovené pH. ToxXcita pufru byle zkoumána po úpravě vSech pufrů na pH 7, a stanovením růstu. Nebyla prokázána žádná toxicita.
pokusy byly prováfó^ při 5, W, 20, 25, 30, 37, 40 45, 50 a 55 °C.
4 Měřeno přičiním NeCl к agaru do 0, 2, 4, 6 8, 10 a 12 hmotrnstní^ %
HSdolýza Skrobu byle stanovena testy na přítomnost Skrobu působením jodu na prostředí ISP 4 (Agar s anorganickými solemi a Škrobem)
Při enzy^mt^tLckých . zkouškách byla užita mmtoda D. J. ' Blazevice a G. M. Ederere uvedená v publikaci Principl^ of Biochemical Test in Diagnoosic Microbiology , John Wiley and Soně, New York, N. Y., 1975.
Na základě svrchu uvedených vlastností mikroorganismu, který produkuje DMT a dihydro-DMT, to jest kmene· NRRL 12170 byl tento kmen klasifikován jako nový kmen .S-treptomyces fradiae. Nová kultura byla uložena ve veřejné sbírce Northern Regional Research ·Agricultural Research. North Region, 1815 North Un^ve-rity Street, Peoria, Illinris,
61604, odkud jr možno ji získat pod číslem NRRL 12170·
Jako je tomu v případě jiných mikroorganismů, vlastnosti Strep0oeycev fradiae NRRL 12170 se mohou mentt· Je možno například získat ummié varianty a mutanty kmene NRRL 12170 působením známých .fyzikálních a chemických m^u-agenů, například · ultrafaarvvéhr světla, pa1prsků gama a N-metyS-ϊN-nitrr-N-titrosoruatidinu· Všechny přírodní i ummié varianty, mutanty a rekrmbinвnty Streptomyces fradiae NRRL 12170, které si zechovávvaí jako základní vlastnost produkci, DMT spadení do oboru vynálezu.
Sloučeniny typu DMT inhibují růst patogenních baattrií, zvláště g^mp^li-ivních bakterií a . črlrdi MMyoplasma. V následující tabulce 6 jsou shrnuty inhibiční koncentrace (MIC) měřené standardním . ředěním v agaru, při nichž DMT vr volné formě působí inhibici některých druhů baakterí.
Tabulleó
Úč innost DMT ve volné formě in vitro
s · Organismus mic ( ^g/mi)
Streitocrccus py^nes C203 0,25
Streptococcus pnrumonirr Park I 0,13
Streitr>coccus sp. (skupina D) 282 0.5
Staphylococcuv aureus 3055 1,0
Staihylococcuv aureus 209P 0,25
Past^rella m^utocida 3,12
Past^rella heeorytice 12,5
MMyoplasma rrllisepiižue 0,097
MMyoplasma hyrinrueoniar 0,195
MMyoplasma hyc^^is 0,78
Sloučeniny typu DMT mají antimikrobiální účinnost in vivo .proti· pokusným bakteriálním infekcím. V případě, že se myším při experimentální infekci podaaí 2 dávky zkoumané látky a měří se účinnost, získají se hodnoty · to jest · účinná dávka v m^kg, která· chrání % pokusných zvířat. Stanoven:! bylo popsáno v publikaci Warmn Wick a další, J. Baateriol. 81 233 až 235· (1961), Hodnoty EDjq pro DMT a DMT-tartrát jsou uvedeny v tabulce 7.
Tabulka 7 a perorální hodnoty ED^ (mgg/kg x 2)
Sloučenina Strnptscscius pyogenes C203 Sírnptscsicus p^amc^ae Park I Síaphclpcoc.cus aureus 3055 podkožně perorálně
podkožně perorálně podkožně perorálně
DMT ve volné formě . 2,2 218 15,7 66 . 2,7 64
DMT vinen 2,3 172 9,9 100 NTX NT
bakterie (x »«») 13 11,3 3 2,7 21 26
pokus nebyl proveden.
Účinnost proti čeledi Tycoplasma je v případě sloučenin typu DMT rovněž velmi důležitá. V tabulkách 8 a 9 jsou uvedeny výsledky pokusů,·při nichž byl užit DMT a DMT tartrát pro léčbu infekcí Mycoplasma gallispeiiuum u ·kuřat. Sloučeniny byly podány v pitné vodě, · a to v dávce 1 a 2 g na 4 litry vody po dobu · 1 až 3 dny nebo injekčně v dávce 15 nebo 30 mg/kg.
Taabllk8
Léčba infekce Mycoplašma gθllisepiiuum u kuřat ve volné formě DMT
Sloučenina Dávka
Počet uhynnuí/ Počet s poškoze- Průměrná Po<*et s protilátkami ním vzdušného hmoonost proti /celkový počet vaku M. gallispeicuum
Les ions/c elkový (g) An^i^ody/celkový počet počet
DMT báze 2,0 g/gal
1 až 3 dny 9/30 (30 %)
DMT báza 1,0 g/gal 13/30 (43,3 %)
1 až 3 dny
DMT báze 15 mg/kg 10/30 (33,3 %)
infikované · kontroly - 19/30 (63 %)
26/30 (86,7 %) 397 21/21 (100 %)
28,/30 (93,3 %) 392 15/17 (88,2 %)
24/30 (80 %) 453 20/20 (100 %)
30/30 (100 %) 304 11/11 (100 %)
Tabulka 9
Léčbě infekce Mycoplasme gellisepticum u kuřat vinenem DMT
Sloučenina Dávka Počet uhynnuí/ /celkový počet Pofie*t s poěkoze-Průměrná Počet s proti látkami pro 1ti M. gaϊli8peiicum AntibodyZctlkový počet
ním vzdušného vaku Lesions/celkový počet hmoonost (g)
DMT 2,0 g/gal 0/30 (0 %) 13/30 (43,3 %) 458 17/30 (56,7 %)
vinan 1 až 3 dny
DMT ' >0 g/gel
vinan 1 až 3 ďny 2/30 (6,7%) 22/29 (75,9 «) 354 27/28 (96,4 »)
•DMT vinan 30 mm/kg 10/30 (33,3 ») 27/30 (90 %) 330 16,/20 (80 %)
infikované kontroly - 15/30 (50 %) 30/30 (100 %) 231 15/15 (100 #)
Při prevenci infekce Mycoplesmy u drůbeže je tedy možno podat netoxické miožství DMT perorálně nebo parenterálné. Sloučeniny typu DMT se obvykle podávají spolu s nosičem, přijetený/m z farmaceutického hlediska, například s pitnou vodou.
Shrnutí údajů o akutní toxicitě DMT je uvedeno v následnicí tabulce 10. Při těchto pokusech byly užity myši Harlan ICR ve stáří 4 až 5 týdnů. Střední smetná dávka LD^q byla stanovena pro DMT při perorálním podiání (p. o·), podkožním podáním(s. c.), nitrožinním podáním (i. v.), a totraperiOoneálním podáním (i. p.),.
Tabulka 10
Akutní toxicita DMT
Způsob podání W50 (mg/kg)
samci samice
p. o. - >5 000
s. c. - 5 447
i. v. ' 100 186
i. p. 721 325
V případě léčby teplokrevných živočichů budou sloučeniny,získané způsobem podle vynálezu podávány obvykle ve formě veterinárních přípravků. Veterinární přípravek bude obsahovat jako účinnou složku sloučeninu obecného vzorce I, její sůl, přijatennou z farmaceuuického hlediska, nebo její ester a mimoto ještě vhodný inertní nosič.
Je zřejmé, že použité nosiče budou podobné těm, které se pouužveaí v případě plosinu,
Vynniez bude osvětlen následujícími příklady.
Příklad 1
A. Fermentace DMT v třepací lahvi
Lyofilizovaná paleta Streptomyces fradiae NRRL 12170 se disperguje ví až 2 ml sterilizované vody. 0,5 ml tohoto roztoku se užije к naočkování 150 ml vegetativního živného prostředí následujícího složení:
Složka Množství v %
kukuřičný výluh 1 >°
extrakt z kvasnic 0,5
drl ze sojových bobů 0,5
uhličitan vápenatý 0,3
surový sojový olej 0,45
deionizovaná voda 97,25
Je také možno postupovat tak, že se vegetativní kultura S. fradiae NRRL 12170, zmrazená do objemu 1 ml v kapalném dusíku rychle nechá roztát a roztok se užije к naočkování vegetativního živného prostředí. Toto prostředí se inkubuje v Erlenmeyerové baňce o objemu 500 ml při teplotě 29 °C po dobu 48 hodin v uzavřené třepačce při 300 otáčkách za minutu.
0,5 ml tohoto irikubovaného vegetativního prostředí se užije к naočkování 7 ml produkčního prostředí následujícího složení:
Složka Množství v %
řepná melasa 2,0
kukuřičná mouka 1,5
rybí mouka 0,9
kukuřičný gluten 0,9
NaCl 0,1
(He4)2HP04 0,04
CaCO^ 0,2
surový sojový olej 3,0
deionizovaná voda 91 ,36
Naočkované fermentační prostředí se inkubuje v lahvi o objemu 50 ml při teplotě 29 °C po dobu 6 dnů v uzavřené třepačce při 300 otáčkách za minutu.
B. Fermentace DMT v tanku
Aby bylo možno získat větší množství očkovacího materiálu, bylo užito 1 200 ml inkubovaného vegetativního prostředí, získaného podle odstavce А к naočkování 1 000 ml vegetativního růstového prostředí následujícího složení:
Složka Mnnožtví v %
kukuřičný výluh 1.0
sojová mouka 0,5
extrakt z kvasnic 0,5
CaCO^ 0,3
surový sojový olej 0,5
surový lecitin 0,015
voda 97,185
Vegetativní prostředí se upraví na pH 8,5, přidáním 50% roztoku hydroxidu sodného.
Vegetativní prostředí se inkubuje v tanku o objemu 1 400 litrů po dobu 48 hodin při teplotě 28 °C při provzdušnování a míchání.
560 litrů takto získaného živného . prostředí se užije k očkování 3 007 litrů sterilního produkčního prostředí následujícího složení:
Složka Minožtví v %
rybí mouka 0,875
kukuřičná mouka 1,5
kukuřičný- gluten 0,875
žhhičiatt vápenatý 0,2
chlorid sodný 0,1
hydrogθnfo8fortčntt amonný 0,04
řepná melasa 2,0
surový sojový olej 3,0
lecitin 0.,09
voda 91 ,32
Úprava pH tohoto živného prostředí na 7,2 byla provedena 50% roztokem hydroxidu sodného.
Po naočkování bylo toto produkční prostředí podrobeno fermentaci v tanku.o objemu
000 litrů po dobu .8 až 9 dnů při teplotě 28 °C. Fermentační prostředí bylo provzdušňováno sterilním vzduchem na koncentraci 30 až 50 % rozpuštěného kyslíku a bylo mícháno běžnými míchadly 250 otáčkami za minutu.
Příklad 2
Izolace DMT
800 - litrů takto získaného materiálu se zfiltruje při použití pomocného prostředku pro filtraci. MyccKáH koláč se pro^je vodou a tato promývecí voda se přidá k filtrátu.
Filtrát se upraví na pH 9,2 při pouužtí 50% vodného roztoku hydroxidu sodného, obvykle je zapotřebí 9,5 litrů, filtrát se extrahuje 2 000 litry etylacetátu. K etylaceta0oéémž extraktu se přidá 450 litrů de^ni^ované vody a 6,4 kg dihydrogttfosforečntnž sodného a výsledný roztok se důkladně promíchá. ' Pak. se pH upraví na 6,0 . na 4,35, přidá se přibližně 3 300 ml roztoku kyseliny fosforečné, který sestává - z 2 dílů vody a 1 dílu kyseliny fosforečné. Vodná fáze se oddělí a ' pH se upraví na 6,5 přidáním 700 ml vodného roztoku hydroxidu sodného ' o koncern^ci 50 %.
Výsledný roztok se zahustí ve vakuu na objem 225 litrů. Roztok se upraví na pH 9,2 přidáním 16 litrů vodného roztoku hydroxidu sodného o konceettraci 10 %. Výsledný alkalický roztok '' se nechá stát přes noc. Vzniklé krystaly se filtrací, promují se 50 litry deionizovené vody e vysuší, čímž se získá 8,6 kg produktu. 3 kg tohoto produktu se nechají překrystalovat ze směsi acetonu a vody, Čímž se získá 2,07 kg volného DMT.
DMT měkne při teplotě 32 °C a pomalu taje do teploty. 150 °C. K^menněmí analýza DMT ukazuUe, že tato . látka má následnicí procentuální složení: ' . uhlík 61 ' %, vodík 8,5 %,. dusík 2 %, kyslík 28 %. DMT má empirický vzorec C38H63®°13 ® molekulovou hmoonost přibližně 742 (741'podle stanovení hmotovou spektrommtrii).
Na př^cenném výkresu je znázorněno absorpční spektr rum volného DMT v světle v chloroformu. Pozorovatelná absorpční maxima jsou při' následujících frekvencích (cm-1): 3 634 (velmi iBea^h 3 559 (hrb^ 3 432 (ěi^ké), 2 955 (ÍíUízívíí), 2 907 .(tatuttzívni), 174 0 (intenzívní), 1 676 (hrb), 1 588 (intenzívní), 1 447 (hrb), 1 396 (hrb),
359 (maaé), 1 309 (velmi 1 178 (hrb), 1 156 (intenzívní), 1 111 (hrb), 1 072 (hrb),
048 (intenzívní), 1 013 (hrb), 984 (hrb), 926 (velmi 898 (velmi malé) a 833 (velmi mmaá).
Absorpční spektrum DMT v sltгafaiSaéép světle v neutrálním etanolu má absorpční . maximum při 283 nm ( £ 22,296, е]*щ = 300,9).
DMT ve volné formě má následnicí specifickou «otáčivost
W25 -53,5° (c = 1, C^OH).
Elektrometrická titrace DMT v 66% vodném dim^,ty]^:^om^e^midu prokazuje iříSopno8t titrovatelné skupiny s hodnotou ρΚ0 přibližně 7,25.
DMT ve volné formě je rozpustný ve vodě a ve většině polárních organických rozpouštědel jako je acetát, metanol, etanol, chloroform, dipetylfomlapidu a dipetyl8slf,sχids. Adiční soli DMT s kyselinami jsou roz^utnější ve vodě než volná báze.
DMT je možno oddišit od tylosinu a dalších sloučenin typu tylosinu chrsmpaosгiaií na papíře a na tenké vrstvě. Přibližné hodnoty Rf a Rx pro DMT a další sloučeniny podobné tylosinu jsou uvedeny v tabulkách 11 a 12. V tabulce 12 je hodnota Rx poměr pohybu k pohybu tylosinu, jehož hodnota tyla stanovena na 1,0. K.detekci bylo užito bioatografie a Baacilus* subttlis. .
T a b u 1 k a 11 duismáosrraie DMT ia.teíké vrstvě®
Hodnota Rf
Sloučenina Ab B C
tylosin 0,53 0,53 0,67
DMT 0,45 0,52 0,61
0,47 0,24 0,17
^mkrocin 0,23 0,49 0,60
relomycin V 1 0,34 0,51 0,63
Prostředí: Merck, Darimtadt - Silika Gel 60 ** R^^J^osLsš^<^<^:io: A = etylecetát a dietylamin v ^měru 96:4
B = aceton a etanol v poměru 2:1
C = chloroform a metanol v poměru 3:1
Tabulka
Ctaronatografle DMT na papíře 0
Sloučenina Db Rx E
tylosin 1,0 1,0
DMT 0,76 0 0,95
desmykosin 0,22 0,83
m^ak^r^í^in 0,43 0,87
relomycin 0,63 1,0.
e
Papír: Wetmen δ. 1 po zpracování 0,75 M KHgPO^ jako pufrea při pH 4,0 a usušení b Roopooššědlo: D =-etylacetát nasycený vodou
E = n-butenol nasycený vodou
Příklad 3
Výroba OMT
DMT, připravené podle příkladu 2 se rozpuutí v roztoku kyseliny chlorovodíkové, který se připraví tak, že se kyselina přidá do vody do pH roztoku 1>6. Výsledný roztok sa nechá stát 24 hodin při teplotě místnosti a pak se upraví na pH 9,0 přidáním hydroxidu sodného. Tento alkalický roztok se extrahuje etylacetátem, dichlořmetaném nebo chloroformem. Ectrakt se vysuší ve vakuu, čímž se získá OMT.
Příklad ’ 4
Výroba OMT '
500 g.DMT, připraveného podle příkladu 2 se umele a přidá k 1,5 litrům deionizované vody. V případě potřeby se pH udržuje v rozm^!^:í 3,5 až 7,5 přidáváním 20% kyseliny sírové. Po 30 minutách se rozpustí veškerý DMT. Po úpravě roztoku na pH 1,4 se roztok nechá stát při teplotě 22 °C po dobu 42 hodin. Po dalším běžném zpracování sé získá 366 - g OMT, jehož totožnost byla potvrzena srovnáním chroraaorg‘tfie na tenké vrstvě výsledného produktu .
a autentického vzerku, získaného způsobem podle US patentu δ. 3 459 853.
Příklad 5 .
Výroba dihydro-DMT mg DMT, připraveného podle příkladu 2, - se rozpistí ve 25 ml vodného roztoku lsopropylalkoholu o konceetraci 40 %. 20 mg borohydridu sodíku se rozpistí v 10 ml vodného roztoku isopropylalkoholu o koncentraci 30 %. 1 ml rpztoku borohydrodu sodného se přidá k roztoku, který obsahuje DMT. Výsledná směs se míchá 5 minut, upraví se ne pH 7,5 kyselinou fosforečnou a zahustí ve vakuu k odstranění isopropylalkoholu. K výslednému vodnému ^ncce^ětu se přidá - voda do objemu 25 ml a pak 50 ml chloroform. Vodná fáze se upraví na pH 7,5· Po extrakci se chloroform odpaří do sucha ve vakuu,- čímž se jako výsledný produkt získá dihydro-DMT.
Příklad 6
Vroba dihydroOOMT <
Dihydro-DMT, získaný způsobem podle příkladu 5 se zpracovává obdobným způsobem, jako v příkladu 3, čímž se získá dihydro-OMT.
Příklad 7
Jiný způsob výroby OMT
OMT ' se získá z DMT tak, že se na DMT působí přímo ve fermentačním prostředí kyselinou způsobem podle příkladu 3. OMT se izoluje obdobným způsobem, jako DMT v příkladu 2.
P ří.kla d 8
2*-0-aceyyl-MJT g, 13,5 mmmlu DMT se rozpustí v 260 ml acetonu a pak se po kapkách přidá za stálého 'míchání při teplotě místnosti 1,6 ml (15,7 mmmlu) enhy&ridu kyseliny octové. Směs se míchá 18 hodin přes noc a pak se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozputí ve 200 ml etylacetátu a extrahuje dvakrát 200 ml nasyceného vodného roztoku hydrogennuiičitenu sodného. Organický roztok se vysuší sodným, zfiltruje a odpaří. Odpea*ek se rozpustí v malém objemu etylacetátu a roztok se nanese na sloupec silikaeelu (Weters Prep 500) a ' sloupec se vymývá 4 litry etylacetátu. Frakce s obsahem požadovaného výsledného produktu se identifikují í ne tenké vrstvě, slijí a odepři dosuda, čímž se ve výtěžku 61 % získá ' 6,5 g 2'-Oa8eeyyl-DOT.
Příklad 9
2*-O·-ртoployyl-OШ
Analogickým způsobem se působí na 6,0 g (8,1 emmou) DMT ve 120 ml acetonu, 1,2 ml (9,2 οαιο^) enhydridu kyseliny prlailnlvé. Po zpracování a chromθttleafii se ve výtěžku 57 % získá 3,7 g 2*-Ooproponyyl-DMT.
Příklad 10 '220d<i000-ceeto--ONT g (4,05 molu) DMT se rozpiutí v 90 ml meeylenchloridu a 7,8 ml pyridinu a po kapkách se při teplotě eíítnooti ze stálého míchání přidá 1,4 ol (13,7 omoTu) enhyťdridu kyseliny octové. Směs se míchá 17 hodin přes noc a pak se zředí 15 ml toluenu a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Odpadek se rozpiutí v oeléo оо^М etylacetátu a nanese na sloupec silikagelu (Waaers Prep 500) a vymývá 4 litry etylacetátu, čímž se získá 2,1 g. surového produktu. Tento tnetterál se rozpistí v co nejmenšíe objemu toluenu, nanese ·se na sloupec s obsahem 300 ml silikagelu a sloupec se vymývá.
a) 300 ml soOsi toluenu a etylacetátu v objemovém poměru 311,
b) 600 ml směsi toluenu a etylacetátu v objemovém poměru 514 a>
c) 1 000 ml soOsí toluenu a·etylacetátu v objemovém poměru 111.
Frakce s obsahem výsledného produktu se zjistí na tenké vrstvě, slijí ' a odppaí dosucha, čímž se ve výtěžku 64 * 'získá 1,7 g 2',23-dO-Oaeeetyl-DOT.
Příklad 11
2',2 3-di-O-propi onyl-DMT g (4,05 mmolu) DMT se rozpistí v 90 ml metylenchloridu a 7,8 ml pyridinu a přidá 9β po kapkách ze stálého míchání při teplotě místnosti 1,8 ml (13,8 rnmmlu) anhydridu kyseliny propionové. Směs se míchá přes nec, pak se přidá 15 ml toluenu a roztok se odpaří dosuche za sníženého tlaku. Odpprek se rozpustí ve 20 ml toluenu a nanese na sloupec s obsahem 300 ml silikogelu (E. Merck 60) e sloupec se vymývá.
a) 300 ml směsi toluenu a etylacetátu v objemovém poměru 3:1,
b) 300 ml směsi toluenu a etylacetátu v objemovém poměru 5:4 a
c) 1 000 ml směsi toluenu a etylacetátu v objemovém poměru 1:1.
Ve výtěžku 72 % se získá 2,5 g 2*,23-di-O-propoonyl-DMT.
Příklad 12
2*-O-acetyl-2 3-0-^0 pponyl-DMT g 7,7 mmd.u 2*-O-acltyl-DMT se rozpustí ve 180 ml · meeylenchloridu a 15 ml pyidinu a po kapkách ze stálého míchání při teplotě ^íí^1Lo(^s^1^:L se přidá 1,2 ml (9,2 minoou) anhydridu kyseliny propanové. Směs se míchá 17 hodin přes noc · a pak se zředí 300 ml toluenu, odpaří dosucha za sníženého tlaku. Odparek se rozpistí v toluenu a extrahuje nasyceným vodným roztokem hydrogennUliϋtonu sodného. · Toluenová vrstva se vyeuěí síranem sodným, zfiltruje a odppOí. Odpprek se rozpustí v malém objemu toluenu a nanese se ne vrchol sloupce s obsahem 300 mg silikagelu ve směsi toluenu a·etylacetátu v·poměru 1:1. Sloupec se vymývá směsí toluenu a etylacetátu v poměru 1:1, užije se 1 litr roztoku. Frakce s obsahem produktu se identifikují chromeetorraií na tenké vrstvě, slijí a odpaří za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 70 % získá 4,5 g · 2*—0—eceyylL233-0-propionyl-llT.
Příklad .13
2*“0-propiooylL-3--0-ccedyl-lДT
Obdobným způsobem se působí ne · 1,5 g (2 mmoly) 2'-Oppoo^onyl-DMT ve 45 ml mstylenchloridu a 3,9 ml pyridinu anhydridem kyseliny octové v oooožsví 0,3 ml (2,9 ощоИ). Po hhromoeoorrOii ne silikaTe^ (WaOers Prep 500) se ve výtěžku 51 % získá 0,81 g 2*-0-proOionyl-23-O-acedyl-DlT.
Příklad 14
2*-0-ecetyl223“0-eodyeceetyl-MT
2,75 g (3,5 mamou) 2'-ac-acetyl-TMT se rozpustí v 75 ml ιneeylenchl.oriru a 0,8 ml pyidinu o přidá se 0,56 ml (3,5 mm mou) · roztoku feoylocβtylchloriru ve 13 · ml mmeylenchloridu po kapkách ze stálého míchání při teplotě tmítnossi. Po 1,5 hodinách se přidá jeStě roztok 0,56 ml·feoylocetylchlorLru ve 13 ml metydenchhoridu. Po dalších 1,5 hodinách je výchozí maOteiál spotřebován, jek je možno prokázat chromattlraaií na tenké vrstvě. Roztok'se odpaří za sníženého tlaku · a odparek se rozpětí v oeeylθnchhoriru a extrahuje nasycerým vodným . roztokem hydrogeeoUheδitoou sodného. Orgaan.cká vrstva se vysuěí síranem sodným, zfiltruje a odpprí dosucha. Odpprek se rozpučí V toluenu a chromoOosrefuje no . sloupci sililogelu. (WaOers Prep 500). Sloupec se vymývá při pouuití 4 litr) soOsí toluenu o etylacetátu v poměru 1:1 o 4 litr) etylacetátu. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí o odjpří, čímž se ve výtěžku 35 % získá 1,1 g 2*-O-ecetyl-23-O-fenylacetyl-D№. Z počátečních frakcí se joětě ve výtěžku 24 % získá 0,86 g 2*-O-ocetel-23,4**-dl-Oifenylecetyl-lM.
Příklad 15
23-0-j;r*op0onyl-DlT
1,6 g 1,9 ornmlu 2*-0-aceCyl-23-0-]0'OOÍoyyl-Dbff se rozpustí v 80 ml 95% metanolu o roztok se míchá 42 hodin při teplotě míísnosst. Pak se roztok odppa^í dosucha za sníženého tlaku. OdppOOk se rozpustí v malém mnoožtví toluenu, nanese se na sloupec s obsahem 200 ml silDregelu (E. Merck 60) a chromaeo/gaOický sloupec se vymývá 2 litry smOsi toluenu a etclacetátu v objemovém poměru 1:1. Frakce s obsahem výsledného produktu se identifikují chrooelogrrOií no tenké vrstvě, slijí o odpaří za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku 79 % získá 1,2 g 23-O-propionyliDMT.
Příklad 16
23-0-feoyУlaeeeyl-MlT
0,6 g (0,67 mrnmlu) 2'-O-acety-22--OoOoyyacletyl-lJЛ se rozpustí v 50 ml 80% vodného ' metanolu a opatrně se zahřívá ne teplotu varu pod zpětným chladičem 4,5 hodiny. Roztok se zchladí no teplotu o o^]p^i^:í dpsuche za sníženého tlaku, čímž se ve výtěžku % získá 0,39 g 23-O-Olnelacθeyl-DЬ^T.
Příklad 17
23,4-(i--OoOoeyOcletyl-Mlff
0,36 g <0,36 omolu) 2*-O-oclteУ-23,4**--O-Olfenylacct-l-MT se rozpustí ve 30 ml 80% vodného roztoku metanolu o zahřívá 4,5 hodiny na teplotu voru . pod zpětrým chladičem. Po zchlazení no teplotu místnosti o odp^a^ení dosucha za sníženého tlaku se ve výtěžku 84 % .
získá O‘,29 g 23,4*'dil--oOoyyacletyl-DlT.
P říkl s ď 18
2*-O-ace tyl-3,23,4 -tr--O-propi onyl-DMT g (2,6 mmolu) 2*-O-aceeyl-l>lT se rozpustí ve 40 ol acetonu a 8 ml pyridinu a přidá se 20 ml acetonu se 40 ol anhycdridu kyseliny propionové po kapkách ze stálého míchání při teplotě místnosti. Směs se míchá 5 dnů a pak se odpoiří za sníženého tlaku. Výsledné olejovitá kapalina se rozpiuutí v ltellcltétu o extrahuje nasyceným roztokem hy(drogenoιhlУčlteou sodného. -panická vrstva se vysuěí síranem sodným, zfyytruje a odpaří. Odparek se rozpustí v malém monoství toluenu a ctaroшeOoóg^aOujl ne sloupci siiykogelu (Wtars Prep 500). Sloupec se vymývá lineárním gradientem při pcouužtí 4 litrů toluenu o 4 litrů ltcllcltácu. Frakce s obsahem produktu se slijí o odpeOí, čímž se ve výtěžku 57 % získá 1,4 g 2'-^О^^<^<^1Сс^1-3,23,4**-íi^0-^C-^opí^o0mi-—MlT.
Příklad 19 .
3,23,4 -tr У-O-pOpyonyl-MT
0,7 g (0,74 mmoou) 2'-0-acltcУ-3,23,4-tr0-0-ртΌpУoyl--llíΓ se rozpistí v 55 ol 80% vodného metanolu a směs se vaří pod zpětným chladičem 5 hodin. Pak se roztok zchladí a odpOří za sníženého tlaku. Vodný zbytek se extrahuje meeyleochlorУdem, organická vrstva se odděěí, vysuěí síranem sodným, zOiltruje a odpaří dosucha za snížené tlaku, čímž se ve výtěžku 56 % získá 0,38 g 3,23,4-t-O-Ο-^ο^Ι-ΕΜΓ.
Příklad
2', 4'-23-Гг1-0-асе1у1-МТ
10,0 g (13,5 mmolu) DMT se rozpustí ve 150 ml pyridinu a za stálého mícháhí př teplotě místnosti se přidá 5,8 ml (60,7 ornoOu) anhy&ridu kyseliny octové· Směs se míchá přes noc a rozpouštědlo se odpsiř 2© sníženého tlaku. Ztývvjící Hej se rozpuutí v dichlOTmetanu a extrahuje se nasyceným roztokem hycdrogennUhlčitanu sodného. Organická vrstva se oddělí, vysuší síranem sodným, zfiltruje a odj^t^a^:! za sníženého tlaku. Odparek ' se chromoaoseraaiuja ne sloupci sríikagelu (Waaere Prep 500), který se vymývá 4 litry soOsí toluenu a etylacetátu v poměru 3:1 a 4 litry etylecetátu. Frakce s obsahem výsledného produktu se ' identifikiu* chrornmatoeraií na tenké vrstvě, slijí a odpaří ze sníženého tlaku, Símž se získá 4,5 g 2',4 , 23-tri-0-aeaeyl-DMT.
Příklad 21
2'-O-acetyl-33-Oifeloeyceity--D!T
2,75 g (3,5 mamou) 2'-O-acetyl-DMT se rpzpxutí v 75 ml dichlormetanu a 0,8 ml pyridinu a přidá se roztok 1,2 ml, 8,8 omolu ieooxyacetylchlorlěu ve 25 ml dichlormetanu po kapkách za.stálého míchání při teplotě mlítnoott. Po 1 hodině se. reaklní směs vlije - do 200 ml nasyceného vodného - roztoku hy^^en^h-Čitanu sodného, orgaOLcká . vrstva se oddělí, vysuší se síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Výsledný pěntorf.tý produkt se nanese na sloupec sríikagelu a produkty se vymwaí pH pouHtí so0si toluenu a etylecetátu v poměru 1:1. Tímto způsobem se izoluje 1,5 g 2*-0-eceeyl-33-ieOoшyaгacety--DlЛ spolu s 0.,55 g
2-0-acetyl--23,4-di-O-fenoxyaceeyl-MιT a 0,03 g 2*-0~acetylзЗ,33-di-i-0onoe□rccβty--MT.
Příklad 22
2'-0-ecetyl223-0-(p-hhOrrfoeylceetyl)-DliT
4,3 g (25 mmolu) p-chlsriaoyloctsvé kyyelity a 3,4 g (25 mmmlu) 1 -hy<ě!*oэqebaozSrlβzolu se rozpuutí ve 150 ml tetraheěroiUraou. Roztok se zchladí na ledové lázni - a.-přidá - se
5,2 g (25,3 mmolu) dlceklohexylkkrbsdiioiěu. HeBků^ srnOs se -míchá 3 hodiny pH, teplotě 0 °C a pak se nechá stát přes noc v ledními. Směs se zfiltruje a filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Odjprek se rozpuutí v 75 ml acetonu, roztok se zfilmuje a přidá se 10 g (12,8 mmooů) 2*-^O-ac^etyj^.^-MT a 0,87 g (12,8 mornOu) Loidazolu. Pak se přidá aceton do 125 01 a pak ještě 1,87 ml (12,8 omoo.u) ^Г^у^оГо^ Směs se míchá 20 hodin při teplotě οί.βΐηοβ'ϋ a pak se rozpouštědlo odpaří za sníženého tlaku a odparek se nanese na sloupec sríikagelu, který se vymývá soSsí toluenu a aielaceiáiu v poměru 4:1 až samotným atelacetátem. Získá se 4,75 g 2*-O-acatel223-O-(pcchSriao]elkθceeyl)-DMT.
Příklad 23 '-O-aaetyl-4 -O-propionyl-DMT
1,0 g (1,3 mamou) 2*-O-eeeeyl-MT se rozpuutí ve 30 ml pyridinu a přidá se po kapkách 0,6 ol (4,6 mamOu) anhycdrldu kyseliny propionové za stálého míchání při teplotě mí^1^i^(^stl. Po 20 hodinách se přidá ještě 3,0 ml (23 mmoou) anhydridu kyseliny propionové a reakční směs se míchá ještě 26 hodit při teplotě тШим^. Pak se směs zředí 30 ml toluenu a rozpouštědlo se odj^f^a^zí za sníženého tlaku. Výsledná slajsviiá kapalina se rozpuutí v 50 ol ěichlormatanu a extrahuje nasyceiýo hecě?ogenuhličlkeneo - sodným. togartcká vrstva se oddělí, vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpař. Odparek se nanese ne sloupec tililkgalu (Wacrs Prep 500) a vymývá lineárním gradientem při pouHtí 4 litrů toluenu a 4 lirů aielacaiáiu. Nejprve se získá 305 mg 2dr0-aceoyl30,4-ML-0-^o^onyl-MT a pak 286 mg 2*-ο-βοοtyl-4 -O-pripiony4-DMT.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob výroby mkroHdních antibiotik obecného vzorce I (I) kde
    Q znamená skupinu -CHgOH nebo -CHO, nebo z farmaceutického hlediska přijetelrých solí nebo acylesterS ttclto látek zt předpokladu, že v případě, že se v příloze 3 nachází O-acetylová skupina, nachází se na poloze 4** skupina, odlišná od Oi-sovi^^Leryl^o^vé skupiny, vyzno^ící se tím, že se » ' ·
    a) pěstuje Streptomyces fradiae NRRL 12170 v s^mcez^ kultuře za aerobních podmínek při teplotě 10 až 37 °C a při nasycení živného prostředí vzduchem 30% nebo vyšším do nahromadění antibiotika a
    b) popřípadě se vzrOLklé sloučenina převede na farmaceuticky přijatelnou sSl nebo acylester.
CS814338A 1980-06-12 1981-06-10 Process for preparing macrolide antibiotics CS225841B2 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/156,855 US4321362A (en) 1980-06-12 1980-06-12 De(mycinosyloxy)tylosin and process for its production
US06/156,854 US4321361A (en) 1980-06-12 1980-06-12 Demycinosyltylosin and process for its production

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS225841B2 true CS225841B2 (en) 1984-02-13

Family

ID=26853578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS814338A CS225841B2 (en) 1980-06-12 1981-06-10 Process for preparing macrolide antibiotics

Country Status (26)

Country Link
US (2) US4321361A (cs)
EP (1) EP0042250B1 (cs)
JP (1) JPS5731699A (cs)
KR (1) KR840001956B1 (cs)
AR (2) AR226899A1 (cs)
AU (1) AU544988B2 (cs)
CA (1) CA1172189A (cs)
CS (1) CS225841B2 (cs)
DD (1) DD159644A5 (cs)
DE (1) DE3162500D1 (cs)
DK (1) DK255681A (cs)
ES (1) ES8203962A1 (cs)
FI (1) FI811826A7 (cs)
GB (1) GB2077731B (cs)
GR (1) GR75277B (cs)
HU (1) HU189512B (cs)
IE (1) IE51614B1 (cs)
IL (1) IL63075A (cs)
NZ (1) NZ197359A (cs)
PH (1) PH16171A (cs)
PL (2) PL131731B1 (cs)
PT (1) PT73165B (cs)
RO (1) RO81016A (cs)
SU (1) SU1151218A3 (cs)
YU (1) YU144381A (cs)
ZA (1) ZA813579B (cs)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4486584A (en) * 1980-07-15 1984-12-04 Eli Lilly And Company Demethylmacrocin compounds and derivatives thereof
US4419508A (en) * 1980-11-10 1983-12-06 Eli Lilly And Company 20-Dihydro-20-deoxy-23-demycinosyltylosin and process for its production
US4487923A (en) * 1981-12-14 1984-12-11 Eli Lilly And Company Method of preparing 23-monoesters of OMT and DMT
US4401660A (en) * 1981-12-14 1983-08-30 Eli Lilly And Company Ester derivatives of 5-O-mycaminosyl tylonolide and method of using same
US4396613A (en) * 1981-12-14 1983-08-02 Eli Lilly And Company 23-Ester derivatives of DMT and method of using same
US4436733A (en) 1982-03-03 1984-03-13 Eli Lilly And Company 4"- And 3-ester derivatives of DMT and DMOT
US4435388A (en) 1982-06-10 1984-03-06 Schering Corporation Tylosin 20-imino-20-deoxo-4"-acyl derivatives, pharmaceutical compositions and method of use
JPS58219197A (ja) * 1982-06-15 1983-12-20 Sanraku Inc マクロライド系抗生物質の誘導体
US4436729A (en) * 1982-06-30 1984-03-13 Schering Corporation 23-Demycinosyltylosin compounds, pharmaceutical compositions and method of use
US4528369A (en) * 1982-07-02 1985-07-09 Eli Lilly And Company 20-Dihydro-20-deoxy-23-de(mycinosyloxy)tylosin
US4459290A (en) * 1982-07-19 1984-07-10 Eli Lilly And Company C-23-Modified derivatives of OMT, pharmaceutical compositions and method of use
US4452784A (en) * 1982-07-19 1984-06-05 Eli Lilly And Company C-23-Modified derivatives of DMT
US4820695A (en) * 1982-09-13 1989-04-11 Eli Lilly And Company C-20-dihydro-deoxy-(cyclic amino)-derivatives of macrolide antibiotics
US4443436A (en) * 1982-09-13 1984-04-17 Eli Lilly And Company C-20-Modified macrolide derivatives of the macrolide antibiotics tylosin, desmycosin, macrocin, and lactenocin
IL71032A0 (en) * 1983-02-28 1984-05-31 Lilly Co Eli C-20 and c-23-modified macrolide derivatives
US4629786A (en) * 1983-02-28 1986-12-16 Eli Lilly And Company C-20- and C-23 modified macrolide derivatives
US4468511A (en) * 1983-02-28 1984-08-28 Eli Lilly And Company C-20- And C-23-Modified macrolide derivatives
JPS59181294A (ja) * 1983-03-30 1984-10-15 Satoshi Omura 抗生物質ｐｔｌ−４４８とその誘導体およびそれらの製造方法
US4851518A (en) * 1985-12-23 1989-07-25 Schering Corporation Di and tri-O-acetyl-"O-iso-valeryl-23-O-demycinosyl tylosins, hydrazone derivatives thereof and processes for their preparation
US4808575A (en) * 1986-06-23 1989-02-28 Schering Corporation 12,13-oxoderivatives of macrolides
US4962146A (en) * 1987-04-29 1990-10-09 Schering Corporation 3-O-glycosyl 16-membered macrolide antibacterials and related derivatives
JPH01230559A (ja) * 1988-03-11 1989-09-14 Sagami Chem Res Center ５−置換メチリデンヒダントイン誘導体
IL98599A (en) * 1990-06-28 1995-06-29 Merck & Co Inc Stable salts of 4"-deoxy-4"-epi-methylamino avermectin b1a/b1b and insecticidal compositions containing them
US7247617B2 (en) * 2004-07-13 2007-07-24 Kosan Biosciences Incorporated Sixteen-member macrolide antiinfective agents
US7378508B2 (en) * 2007-01-22 2008-05-27 Optimer Pharmaceuticals, Inc. Polymorphic crystalline forms of tiacumicin B

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3178341A (en) * 1960-06-27 1965-04-13 Lilly Co Eli Antibiotics tylosin and desmycosin and derivatives thereof
US3326759A (en) * 1962-07-19 1967-06-20 Lilly Co Eli Antibiotics macrocin and lactenocin
US3344024A (en) * 1963-04-17 1967-09-26 American Cyanamid Co Antibiotic am-684 and method of production
BE667952A (cs) * 1964-08-05
US4161523A (en) * 1972-11-15 1979-07-17 Schering Corporation Rosamicin esters, acid addition salts and methods for production thereof
US3923784A (en) * 1973-09-10 1975-12-02 Hoffmann La Roche Erythromycin a derivatives
YU35363B (en) * 1974-01-14 1980-12-31 Pliva Zagreb Process for obtaining n-(benzene-sulfonyl)-5-0desosaminyl-erythromycilamine derivatives
JPS52139088A (en) * 1976-05-15 1977-11-19 Sanraku Inc Antibiotics tyrocin derivatives and their preparation
US4056616A (en) * 1976-03-05 1977-11-01 Schering Corporation Rosamicin derivatives and method of using same
JPS5315160A (en) * 1976-07-27 1978-02-10 Nippon Steel Corp Sensitivity controller of self-scan image sensor in thermal radiating object measuring apparatus
GB1587685A (en) * 1977-03-09 1981-04-08 Microbial Chem Res Found Macrolactone derivatives and their production
US4205163A (en) * 1977-11-08 1980-05-27 Sanraku-Ocean Co., Ltd. Tylosin derivatives
JPS6016960B2 (ja) * 1978-09-20 1985-04-30 メルシャン株式会社 マクロライド系抗生物質ｎ−１及びその製造法

Also Published As

Publication number Publication date
IL63075A0 (en) 1981-09-13
AU7144681A (en) 1981-12-17
IE51614B1 (en) 1987-01-21
PL231594A1 (cs) 1982-02-15
FI811826L (fi) 1981-12-13
PL231598A1 (cs) 1982-02-15
EP0042250A1 (en) 1981-12-23
PL131731B1 (en) 1984-12-31
ES502980A0 (es) 1982-04-16
PT73165A (en) 1981-07-01
YU144381A (en) 1983-09-30
JPS5731699A (en) 1982-02-20
HU189512B (en) 1986-07-28
ES8203962A1 (es) 1982-04-16
GB2077731A (en) 1981-12-23
KR840001956B1 (ko) 1984-10-26
IE811297L (en) 1981-12-12
AR227316A1 (es) 1982-10-15
KR830006429A (ko) 1983-09-24
GR75277B (cs) 1984-07-13
DE3162500D1 (en) 1984-04-12
ZA813579B (en) 1983-01-26
DD159644A5 (de) 1983-03-23
GB2077731B (en) 1984-04-26
PL131733B1 (en) 1984-12-31
US4321361A (en) 1982-03-23
DK255681A (da) 1981-12-13
AU544988B2 (en) 1985-06-27
AR226899A1 (es) 1982-08-31
NZ197359A (en) 1984-03-16
FI811826A7 (fi) 1981-12-13
CA1172189A (en) 1984-08-07
PT73165B (en) 1982-07-16
IL63075A (en) 1984-07-31
US4321362A (en) 1982-03-23
EP0042250B1 (en) 1984-03-07
PH16171A (en) 1983-07-21
RO81016A (ro) 1983-02-01
SU1151218A3 (ru) 1985-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS225841B2 (en) Process for preparing macrolide antibiotics
US4559301A (en) Process for preparing macrocin derivatives
US4992425A (en) Antibiotics BU-3608D and BU-3608E
US4252898A (en) Antibiotics A6888C and A6888X
CS236663B2 (en) Manufacturing process of macro antibiotics 2%-dihydro-2%-deoxy-5-%-mycaminosyltylonolide
CS228517B2 (en) Method for the production of macrolide
KR840001957B1 (ko) 데(마이시노실옥시)타일로신의 제조방법
US4385116A (en) Demethylmacrocin and process for its production
EP0245012B1 (en) Method for the preparation of 14-hydroxy-6-0-methyl-erythromycin a
EP0121328B1 (en) Macrolide derivatives
US4358584A (en) Antibiotics A6888C and A6888X
EP0002589B1 (en) A-40104 antibiotics, their preparation, and formulations containing them
US4419447A (en) Fermentation process for producing demycinosyltylosin
KR840001193B1 (ko) 마크로라이드 항생물질의 제조방법
JPS5927899A (ja) デ（ミシノシルオキシ）タイロシン誘導体
US4656258A (en) Macrocin derivatives
US4486584A (en) Demethylmacrocin compounds and derivatives thereof
US5096817A (en) Process for producing antibiotics BU-3608 D and BU-3608 E
US4859655A (en) Urdamycin G and derivatives thereof, a process for their preparation and their use
US4537957A (en) Process for the production of mycaminosyltylonolide
JPH0365944B2 (cs)
HU179912B (en) Process for producing polyether antibiotics
US4334019A (en) Process for producing de(mycinosyloxy)tylosin
US4732976A (en) 3,3-neotrehalosadiamine antibiotic and producing it with novel microorganism
US4792545A (en) Boholmycin antibiotic