CS119492A3 - N-hydroxy-n-/3-/2-/halophenylthio/phenyl/prop-2-enyl/urea and apharmaceutical composition comprising thereof - Google Patents

Description

1

K-hydroxy-H-/ 3-/ 2-/halogenfenylthio/fenyl_7prop-2-enyl 7-'močovina a farmaceutický prostředek, který ji obsahuje

Oblast techniky

Vynález se týká určitých íT-hydroxy-N-/“3-^“2-/halogen-fenylthio/^enyl_7prop-2-enyl_7moČovin, způsobu jejich přípra-vy a farmaceutických prostředků, které je obsahují a kteréjsou inhibitory 5-lipoxygenasy ·-

Dosavadní stav techniky

Enzym. 5-lipÉifeenasa /5-10/ katalyzuje první stupeň bio-chemického způsobu přípravy, při kterém se arachidonová kyse-lina převádí na leukotrieny. Leukotrieny mají četná a mimořád-ně výrazná biologická působení. Významným způsobem se podíle-jí na různých chorobných stavech, jako je astma, ischemie,arthritis, alergie, syndrom dýchacích obtíží dospělých /AKDS/,a zánětlivé střevní onemocnění /IBD/.

Značné úsilí se zaměřuje na kontrolu leukotrienů pro-střednictvím leukotrienových antagonistů nebo ovlivňovánímbiosyntezy leukotrienů. Obecně se výzkumné úsilí zaměřuje nařízení biosyntezy leukotrienů, přičemž se zkoumají inhibitorysyntézy 5-lipoxygenasy /5-1*0/ a zvláště specifické inhibito-ry 5-LO.

Zveřejněná britská přihláška vynálezu číslo 2 196629 setýká určitých, v kruhu substituovaných, N-hydroxy-N-substitu-ovaných benzamidů a cinnamamidů jakožto protileukotrienovýchčinidelf Jakožto možné substituenty kruhu se uvádějí skupinyobecného vzorce /Ra//Rb/C = CH- kde znamená /Ra//Rb/C- nenasycenou alifatickou hydrokarbyle-novou skupinu se 3 až 19 atomy uhlíku$ skupinu obecnéhovzorce R3-C=C- , kde znamená R^ atom vodíku nebo nasycenounebo nenasycenou uhlovodíkovou alifatickou skupinu s 1 až 18atomy uhlíku; skupinu obecného vzorce R^-S-, kde znamená R^ - 2 - alifatickou uhlovodíkovou skupinu s 1 až 20 atomy uhlíku.Substituentem na atomu dusíku může být alkylová skupina s 1až 6 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomyuhlíku nebo substituovaná nebo nesubstituovaná arylová sku-pina.

Ve zveřejněné evropské přihlášce vynálezu číslo O 196184se popisují určité arylové sloučeniny, mezi které patří takékromě jiných určité analogy cinnamohydroxamové kyseliny. V příkladech 81 až 91 se popisují také určité JT-eryl-ff-hydroxymočoviny. Určité sloučeniny na bázi močoviny nebo ob-sahující močovinu, o nichž se uvádí, že inhibují lipoxygena-su, jsou popsány v evropských patentových spisech EPO číslo0292699, 0279281 a 0279263. Mkde se však nezmiňuje močovinasubstituovaná 3-/”2-/halogenfenylthio/fenyl__7prop-2-enyleme.

Ve světovém patentovém spise WO 90/12008 se popisují ur-čité nesubstituované nebo substituované fenyl-, naftyl- a thie-nyl-IT-hydroxymočoviny jakožto inhibitory 5-lipóxygenasy a 12-lipoxygenasy. Uvádí se příprava a biologická účinnost čet-ných takových derivátů.

Tento vynález je založen na objevu že určitá skupina N-hydroxy-N'-/"3-/*"2-/4-halogenf enylthio/f eny l__7prop-2-eny 1_7-močovin je mimořádně účinným inhibitorem 5-lipoxygenasy /5-10/.Sloučeniny obecného vzorce I podle vynálezu jsou s překvape-ním výhodnými inhibitory 5-10 a mají užitečné farmaceuticképrofylaktické a terapeutické vlastnosti. Sloučeniny podle vy-nálezu a jejich farmaceuticky vhodné soli mají překvapivě vy-sokou účinnosti.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je: Jí-hydroxy-N-/ 3-/ 2-/halogen-fenylthio/fenyl_7prop-2-enyl_7močovina obecného vzorce I - 3 -

E

OH

S

/1/ kde znamená R? atom vodíku nebo atom halogenu aX atom fluoru nebo chlorua její farmaceuticky vhodné soli.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou překvapivě účinnýmiselektivními inhibitory 5-lipoxygenesy a jsou účinné při o-šetřování astma, alergických onemocnění, zánětlivého onemocnění střev, lupenky, záchvatů, ischemie, syndromu dechových ob-tíží dospělých PAEDS/ a arthritis. Vynález se proto také tý-ká terapeutických prostředků pro ošetřování uvedených nemo-cí a chorobných stavů. -tyto farmaceutické prostředky vedlesloučenin obecného vzorce I podle vynálezu obsahují také far-maceuticky vhodný nosič, ředidlo nebo excipient.

Vynález se také týká ošetřování astma, alergických one-mocnění, zánětlivého onemocnění střev, lupenky, záchvatů, ARDS' a arthritis: u savců, přičemž se jim v případě potřebypodává účinné množství 5-10 inhibující dávky sloučeniny obec-ného vzorce I.

Vynález se také týká způsobu přípravy 2-/“”2-/4-halogen-fenylthio/fenyl__7-4,4-dimethyloxazolinových meziproduktů,vhodných pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.

Pro objasnění sloučenin obecného vzorce I podle vynálezuse uvádějí následující sloučeniny: E-hydroxy-N-/“"3-Z"2-/4-fluorfenylthio/-6-fluoEfenyle7prop-2- enyl_7močovina, - 4 řr-hydroxy-N-/“*3-Z“2-/4-chlorf enylthio/f eny l__7prop-2-enyl_7-moč ovina, EÍ--hydro3y~N-/“3-/“2-/4“fluorfenylthio/-5-fluorfenyl/prop-2-eny l_7moč ovina, fT-hydroxy-N·-/"^ -/~2-/4-f luorf enylthio/-4-fluorf enyl_7prop-2eny l_7moč ovina, ÍT-hydro xy -K-/""3 -f/2.-/4-f luorf eny 1 thi o/-3 -f luorf eny 1__7pr o p-2eny l__7moč ovina, N-hydr oxy-N-/“3 -/“2-/4-f luorf enylthio/f eny l_7prop-2-enyl_7 -močovina, N-hydroxy-N-/“3-/“2-/4-chlorf enylthio/-3-fluorfenyl_7prop-2enyl_/močovina a N-hydroxy-N-/“3-/“2-/4-chlorfenylthio/-6-fluorfenyl_7prop-2eny l__7moč o vina»

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich prekursory se mohou připravovat, následujícími způsoby.

Schéma 1

x - 5 - kde znamená Y atom bromu nebo chloru, THP tetrahydropyranylo-vou skupinu, TMS trimethylsilylovou skupinu a RJ a X mají u o-becného vzorce I uvedený význam. Při způsobu podle schéma 1 se nechává reagovat 2-halogen-f.enylthiocinnamylhalogenid s o-tetrahydropyranylhydroxylaminem,který se může izolovat nebo nechávat dále reagovat s kyselinouv inertním nebo v podstatě inertním rozpouštědle nebo ve směsitakových rozpouštědel, čímž se získá odpovídající H-cinnamyl-H-hydroxylamin. N-/2-Helogenfenylthiocinnamyl/-N-hydroxyl-amin se může izolovat nebo se může nechávat dále reagovat s tri-methylsilylisokyanátem v inertním nebo v podstatě inertním roz-pouštědle nebo ve směsi takových rozpouštědel, čímž se získajížádané sloučeniny obecného vzorce I.

Jakožto vhodná rozpouštědla pro první reakci ve shora uve-deném Způsobu přípravy se uvádějí aprotická rozpouštědla, s vý-hodou dimethylformamiff.

Reakce se může provádět při teplotě přibližně 0 až přib-ližně 50 °C. ,S výhodou se reakce provádí přibližně při teplo-tě místnosti.

Jakožto vhodná kyselina pro druhý stupen přípravy sa uvá-dějí anorganické kyseliny, s výhodou koncentrovaná kyselinachlorovodíková.

Jakožto vhodná rozpouštědla pro druhý stupeň přípravy se u-vádějí protická rozpouštědla a s výhodou methanoí.

Druhý reakční stupeň se může provádět při teplotě 0 ažpřibližně 30 °C. S výhodou se reakce provádí přibližně při tep-lotě místnosti.

Jakožto vhodná rozpouštědla pro isokyanátovou kondenzačníreakci se uvádějí ethery a s výhodou dioxan. Reakce se může pro-vádět při teplotě přibližně 0 až přibližně 50 °C, s výhodou seprovádí při teplotě místnosti. Reakční složka vzorce HgKOTHPse připravuje způsobem, který je popsán v Angew. C^em. Int. Ed.5, str. 511 /1966/. 2-ttalogenfenylthiocinnamylhalogenidy, používané při způsobu - 6 - podle schéme 1, pokud nejsou obchodně dostupné, se připravujíkterýmkoliv ze způsobů podle schéme 2 a 3, pracovníkům v oborudobře známých.

Schéme 2

e katalyzátor

Cesta B

, Při způsobu podle schéma 2 se vychází z benzaldehydu. Pod-le cesty B se nechává reagovat, 2-halogenfenylthiobenzaldehyds vinyl Grignardovým činidlem v inertním nebo v podstatě inert-ním rozpouštědle nebo ve směsi takových rozpouštědel, čímž sezíská odpovídající 1-hydroxy-l-/2-halogenthiofenyl/prop-2-en,který se může izolovat nebo nechávat dále reagovat, jak je dá-le uvedeno. Reakce se provádí za standardních podmínek pro Grignardovu reakci, které jsou pracovníkům v oboru známy. Podobněse podle cesty A nechává reagovat 2-brombenzaldehyď s vinylGrignardovým činidlem v inertním nebo v podstatě inertním roz-pouštědle nebo ve směsi takových rozpouštědel, čímž se získáodpovídající 1~/2-bromfenyl/prop-2-en-Ol, který se může izolo-vat nebo se může nechávat dále reagovat se vhodnou skupinouchránící alkohol, s výhodou s dihydropyranem v přítomnosti ka-talyzátoru, s výhodou v přítomnosti oxychloridu fosforečného,čímž se získá odpovídající 1-tetrahydropyranyloxy-1-/2-bromfe-nyl/prop-2-en. Tento získaný 1-tetrahydropyranyloxy-1-/2-brom- - 7 - fenyl/prop-2-en se může ,izolovat nebo se ho může přímo použí-vat pro substituční reakci v poloze 2 v inertním nebo v pod-statě inertním rozpouštědle nebo v jejich směsi, čímž se získáodpovídající 1-tetrahydropyranyloxy-1-/2-halogenfenylthiofenyl/-prop-2-en, který se může izolovat nebo hydrolyzovat kyselinouv inertním nebo v podstatě inertním rozpouštědle nebo v jejichsměsi, čímž se získá 2-halogenfenylthiocinnamylhalogenid.

Kondenzace s vinyl Grignardovým činidlem se provádí zastandardních podmínek pro Grignardovu reakci, které jsou pra-covníkům v oboru známy. Jakkoliv je tetrahydropyranyl uvedenve schéma 2, cesta A, může se používat nejrůznějších skupinchránících alkohol a stálých k 2ésadám, jako jsou skupiny tet-rahydropyranyloxyskupina, methoxyethoxymethylová, methoxymethy^-lová a silylová skupina, Reakce se provádí v inertním nebo v podstatě inertním rozpouštědle nebo ve směsi takových rozpouštědelv přítomnosti vhodného kyselého nebo zásaditého katalyzátoruv závislosti na skupině chránící alkohol, které jsou pracovníkůmv oboru dobře známy. Substituční reakce se provádí následnýmzpracováním: 1 -tetrahydropyranyloxy-1 -/2-bromfenyl/prop-2-enualkyllithiovým činidlem s 1 až 4: atomy uhlíku a vhodným fe-nyldisulfidem. Vhodnými rozpouštědly pro substituční reakcijsou aprotické ethery, například diethylether- a s výhodou tet-rahydrofuran. Reakce se provádí při teplotě přibližně -100 až;přibližně -40 0C, s výhodou při teplotě přibližně -55 až přib-ližně -85 °C·

Jak podle cesty A tak podle cesty B schéma 2 se nechávajímeziprodukty reagovat β koncentrovanou kyselinou, napříklads anorganickou kyselinou, jako je kyselina chlorovodíkové nebobromovodíková, čímž se jakožto meziprodukt získá 2-halogenfe-nylthiocinnamylhalogenid.

Pokud nejsou obchodně dostupné, připravují se výchozí lát-ky pro cestu A a B reakcemi o sobě známými pracovníkům v oboru.Nebo a výhodně se sloučeniny, používané jekožto výchozí látkypro destu B připravují podle schéma 3. - 8 -

Podle schéma 3 se 4-halogenthiofenol zpracovává alkyllithiovým činidlem s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylovém podílu, jakonapříklad methyllithiem, n-butyllithiem, sekv-butyllithiem atBEC.-butyllithiem v aprotickém rozpouštědle; včetně etherů, ja-ko je například tetrahydrofuran a diethylether, s výhodou v tet-rahydrofuranu, při teplotě přibližně -40 až přibližně >—100 °G,s výhodou při teplotě přibližně -55 až přibližně -85 °C, čímžse získá odpovídající lithiumthiolát. Lithiumthiolát se paknechává reagovat, s 2-/2-fluorfenyl/-4,4-dimethyioxazolinem v ar·protickém rozpouštědle, jako jsou například ethery^ napříkladtetrahydrofuran a diethylether, s výhodou tetrahydrofuran, přiteplotě přibližně 0 až přibližně 100 °C, s výhodou přibližně 20až přibližně 70 °C, čímž se získá orto-halogenfenylthiosubsti-tuent na fenylovém jádru.

Pak se 2-oxazolin hydrolyzuje za použití 4,5K kyselinychlorovodíkové, přičemž je koncentrace 2-oxazolinu přibližně0,05 M a udržováním na teplotě zpětného toku se získá odpoví-dající kyselina 2-/4-halogenfenyltnio/benzoová, která se redu-kuje lithiumaluminiumhydridem nebo jiným vhodným hydridovým re-dukčním činidlem v inertním nebo v podstatě inertním rozpouš-rtědle nebo ve směsi takových rozpouštědel na odpovídající al-kohol, který se může izolovat nebo dále nechávat reagovat s py-ridiniumdvojchromanem ve vhodném inertním nebo v podstatě inertním rozoouštědle nebo ve směsi takových rozpouštědel za získání - 9 — 2-/4-helogenfenylthio/benzaldehyďu.

Nebo se může 2-oxazolin kvarternizovát reakcí s methyljo-didem, který se pak redukuje borhydridem sodným nebo jinýmvhodným hydridovým redukčním činidlem ve vhodném inertním ne-bo v podstatě inertním rozpouštědle nebo ve směsi takovýchrozpouštědel a pak se hydrolyzuje 3N kyselinou chlorovodíko-vou, čímž se získé 2-/halogenfenylthio/benzaldehyd.

Vynález se také týká způsobu přípravy 2-^~2-/4-halogenfe-nylthio/fenyl_7-4,4-dimethyloxazolinu obecného vzorce

kde znamená atom vodíku nebo halogenu a X atom fluoru ne-bo chloru, přičemž se nechává reagovat a/ 4-fluoirthiofenol nebo 4-chlorthiofenol s alkyllithiovým či-nidlem s 1 až 4 atomy uhlíku v aprotickém rozpouštědle přiteplotě přibližně -40 až přibližně -100 °C a b/ odpovídající získaný lithiumthiolát se nechává reagovats 2-/2-fluorfenyl/-4,4-dimethyloxazolinem obecného vzorce

kde znamená R1 atom vodíku nebo halogenu,v aprotickém roz· - 10 - pouštědle při teplotě přibližně 0 až přibližně 100 °C, čímžse získá 2-/~2-/4-halogenfenylthio/fenyl__7-4,4-dimethyloxa-zolin. Výrazem “inertní nebo v podstatě inertní rozpouštědlo” sezde vždy míní rozpouštědla, která vytvářejí prostředí, vhodnépro reakci, která se však na reakci nijak materiálově nepodí-lejí.

Popřípadě mohou být nutné modifikace shora uvedených po-stupů, pokud to vyžadují funkční skupiny určitých substituen-tů. Takové modifikace nečiní pracovníkům v oboru potíže.

Jak shora uvedeno, týká se vynález také farmaceuticky vhodných soli sloučenin obecného vzorce I. Jakkoliv jsou tyto slou-čeniny obecně neutrální, mohou určité sloučeniny podle vynále-zu obsahovat, dojstatečné množství kyselých nebo zásaditých sku-pin, aby reagovaly s různými netoxickými anorganickými zásada-mi a netoxickými anorganickými nebo organickými kyselinami zsevzniku farmaceuticky vhodných solí. Běžně používanými kyseli-nami pro přípravu edičních solí s kyselinami jsou anorganickékyseliny, jako je například kysjelina chlorovodíková, bromobodí-ková, jodovodíková, sírová a fosforečná, a organické kyseliny,jako je například kyselina p-toluensulfonová, methansulfono-vá, štavelová, p-bromfenylsulfonová, karboxylová, jantarová,citrónová, benzoová a octová kyselina. Jakožto příklady tako-vých farmaceuticky vhodných solí se uvádějí sulfát, pyrosulfát,hydrogensulfát, sulfit, hydrogensulfit, fosfát, monohydrogen-fosfát, dihydrogenfosfát, methanfosfát, pyrofosfát, chlorid,bromid, jodiď, acetát, propionát, cjfcanoát, kaprylát, akrylát,formát, isobutyrát, kaproát, heptanoát, propiolát, oxalát, ma-lonát, sukcinát, suberát, sebakát, fumarát, maleát, butin-1,4;-dioát, hexin-1,β-dioát, benzoát, chlorbenzoát, methylbenzoát,dinitrobenzoát, hydroxybenzoáť, methoxybenzoát, ftalát, sul-fonát, xylensulfonát, fenylacetát, fenylpropionát, fenylbuty-rát, citrát, laktát, y-hydroxybutyrát, glykolát, tartrát,methansulfonát, propansulfonát, naftalen—1 —sulfonát, naftalen— 2-sulfonát a mandelát. Jakožto farmaceuticky výhodné se uvádějíadiční soli s kyselinou bučí minerální, jako chlorovodíkovounebo bromovodíkovou nebo s organickou jako maleinovou a methan- 11 sulfonovou.

AdiČní soli se zásadou se odvozují od hydroxidů, uhličita-nů a hydrogenuhličitanů alkalických kovů a kovů alkalických ze-min a od podobných sloučenin· Jakožto zásady, vhodné pro pří-pravu adičních solí sloučenin obecného vzorce X se příkladně u-vádějí, hydroxid sodný nebo draselný, uhličitan sodný nebo dra-selný, hydrogenuhličitan sodný nebo draselný a hydroxid nebouhličitan vápenatý. Obzvláště výhodnými jsou soli sodné a dra-selné·

Je jasné, že sloučeniny obecného vzorce I mohou být v růz-ných isomerních formách. Vynález není omezen na nějakou urči-tow isomerní formu, nýbrž zahrnuje všechny možné isomery a je-jich směsi.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou být také ve formě růz-ných solvátů, podobně jako soli těchto sloučenin, přičemž jsoutakové solváty s vodou, methanolem, ethanolem, dimethylformami-dem a s podobnými látkami. Také se mohou připravovat směsi ta-kových solvátů. Solváty vznikají například při krystalizaciz rozpouštědel nebo při přípravě v přítomnosti rozpouštědel»Takové solváty rovněž patří do rozsahu vynálezu. ffflT»macautíčky vhodné soli sloučenin obecného vzorce Ipodle vynálezu se mohou připravovat reakcí s ekvimolárním množ-stíía nebo s nadbytkem kyseliny nebo zásady sloučeniny obecnéhovzorce Z ve vhodném inertním nebo v podstatě inertním rozpouš-tědle nebo ve směsi takových rozpouštědel. Volba příslušnéhorozpouštědla závisí na relativní rozpustnosti výchozích láteka výsledných solí a může se používat suspenzí raději než rozto-ků určitých reakčních látek pro získání solí. Reakce přípravysoli se provádí při teplotě přibližně -10 až přibližně 100 °C,s výhodou při teplotě místnosti, přičemž se rozpouštědlo oď-atraňuje o sobě známými způsoby. Následující příklady praktického provedení vynález objas- ňují, nijak jej však neomezují. 12 Příklady provedení vynálezu Příklad 1 Příprava N-hydroxy-N-/"3-/~2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl>_7-prop-2-enyl_7močoviny A. 2-/“2-/4-Pluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-4,4-ďimethyloxazoliix

Do roztoku 4-fluorthiofenolu /3,6 g, 28,4 mmol/ v 50 mltetrahydrofuranu se při teplotě -78 °C vnese n-butyllithium/17,8 ml 1,6M roztoku v hexanu/. Po 30 minutách se po kapkáchpřidá 2-/2,6-difluorfenyl/-4,4-dimethyloxazolin /5,0 g, 23,7mmol/ v 10 ml suchého tetrahydrofuranu. Reakční směs se necháohřát na teplotu místnosti a pak se ohříváním udržuje na tep-lotě 60 °C po dobu 5,5 hodin. Po ochlazení se reakční směsvlije do vody a extrahuje se diethyletherem. Extrakty se pro-myjí vodou, vysuší se síranem hořečnatým, čímž se získá suro-vý produkt. Chromátografií na silikagelu za eluování systémem 10 í 1 hexan/ethylacetát se získá žádaná sloučenina. Elementární analýza vypočteno C 63,93 HL 4,73 4,39 S 10,04 P 11,90 nalezeno C 63,69 H 4,75 ΚΓ 4,39 S 10,4.1 P '11,61 teplota tání 118 až 120 ( ’c B. 2-/4-Pluor£enylthio/-6-fluorbenzoová kyselina

Vnese se 2-/f*2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-4,4-di-methoxazolin /5,0 g, 15,66 mmol/ do 310 ml 4,5 H roztok^ ky-seliny chlorovodíkové ve vodě a udržuje se na teplotě zpětnéhotoku přes noc* Ochlazená reakční směs se extrahuje dvakrátethylacetátem. Extrakty se promyjí vodou, pak solankou a vy-suší se síranem hořečnatým, čímž se získá žádaná sloučenina. C. 2-/4-Eluorfenylthio/-6-fluorbenzylalkohol

Suspenduje se lithiumalumipiumhydrid ve 30 ml suchého di-ethyletheru za chlazení v ledové lázni. Pak se vnese 2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorbenzoová kyselina /4,53 g, 17,0 mmol/v 6 ml diethyletfaeru a 6 ml tetrahydrofuranu a reakční směs se - 13 - se míchá při teplotě místnosti přes noc. Do reakční směsi sepak postupně přidá 0,8 ml vody, 0,8 ml 15% vodného roztoku hyd-roxidu sodného a 2,4 ml vody. Vzniklá bílá sraženina se odfil-truje a důkladně se promyje diethyletherem. Filtrát a promýva-cí kapalina se spojí a zkoncentrují se, čímž se získá žádanásloučenina. D. 2-/4-Fluorfenylthio/-6-fluorbenzaldehyd Pýridiniumdvojchroman /8,34 g}, 22,2 mmol/ se suspendujeve 30 ml methylenchloridu, Do suspenze se po kapkách přidároztok 2-/4-fluorfenylthio/-6-£luorbenzylalkoholu /3,73 g, 14,8 mmol/ v 10 ml methylenchloridu. Reakční směs se pak míchápřes noc. Reakční směs se zfiltruje přes kremelinu /Celíte/ apřes silikagel, čímž se získá Žádaná sloučenina o teplotě tání94 až 97 °C. E. I-/.’’2"/ 4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7prop-2-en-1 -ol

Rozpustí se 2-/4-f luorf enylthio/-6-fluorhenzaldehyd /2,06 g, 8,23 mmol/ ve 21 ml suchého tetrahydrofuranu a ochladí se na tep-lotu -78 °C. Pak se po kapkách přidá vinylmagnesiumbromidovýroztok:/12,4 ml 1,0M roztoku v tetrahydrofuranu/ a reakční směs1se nechá ohřát na teplotu místnosti. Reakční směs se pak vlijedo nasyceného roztoku chloridu amonného a extrahuje se diethyl-etherem. ^trakty se promyjí vodou a solankou a vysuší se uhli-čitanem draselným, čímž se získá žádaná sloučenina. H, 1-/~2-/4-fluorfenylthio/-6- .fluorf enyl_7-3-bromprop-1-en

Rozpustí se 1-/“2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7prop- 2-en-1-ol /2,29 g, 8,23 mmol/ v 10 ml hexanu a 10 ml diethyl-etheru a ochladí se v ledové lázni. Pak se po kapkách přidákoncentrované kyselina bromovodíková /4,6 ml, 41,2 mmol/ a re-akčni směs se intenzivně míchá po dobu pěti hodin při teplotěmístnosti. Reakční směs se pak vlije do vody a extrahuje sedvakrát diethyletherem. Extrakty se promyjí vodou a pak solan-kou a vysuší se síranem hořečnatým, čímž se híská žádaná slou-čenina. 14 - G. N-/”3-Z"2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7prop-2-enyl_7-0-tetrahydropyranylhydroxylamin

Rozpustí se O-tetrahydropyranylhydroxylamin /2,88 g, 24,6mmol/ v 15 ml tetrahydrofuranu suchého. Přidá se roztok 1-/~2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-3-bromprop-1-enu /2,80 g, 8,2 mmol/ v 6 ml dimethylformamidu a reakční směs se míchá podobu 4 hodin při teplotě místnosti. Pak se reakční směs vlijedo 200 ml vody a extrahuje se dvakrát diethyletherem. Extrak-ty/ se promyjí třikrát vodou a pak solankou a vysuší se síranemhořečnatým, čímž se získá surový produkt. Chromatografie "nasilikagelu za eluování systémem 5 : 1 hexan/ethylacetát po-skytuje žádanou sloučeninu. H. N-/“3-/”2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl__7prop-2-enyl_7-hydroxylamin

Rozpustí se N-/“3-/~2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-prop-2-enyl__7-0-tetrahydropyranylhydroxylamin /1,26 g, 3,34:mmol/ vr 17 ml methanolu a ochladí se v ledové lázni. Pak sepo kapkách přidá koncentrovaná kyselina chlorovodíková /1,7 ml/a reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakčnísměs se odpaří k suchu a pak se suspenduje v nasyceném roztokuhydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se dvakrát diethylethe-rem. Extrakty se promyjí vodou a pak solankou a vysuší se uh-ličitanem draselným, čímž se získá žádaná sloučenina. I. N-gydroxy-N-/"3-/~2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-prop-2-enyl__7močovina ·

Rozpustí se N-^“N-^"2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7-prop-2-enyl_7hydroxylamin /0,91 g, 3,1 mmol/ v 16 ml suchéhodioxanu. Potom se přidá po kapkách trimethylsilylisokyanát/0,36 g, 3,1 mmol/ a reakční směs se míchá při teplotě míst-nosti přes noc. Reakční směs se vlije do 1H roztoku kyselinychlorovodíkové a pak se extrahuje dvakrát diethyletherem.Extrakty se promyjí vodou a pak solankou a vysuší se uhličita-nem draselným, čímž se získá žádaný surový produkt. Překrystalovínim z ethylacetátu se získá žádaná sloučenina o teplotě tání138 až 139,5 °C. - 15 -

Elementární analýza vypočteno C 57,13nalezeno C 57,42 H 4,19Η 4,32 N 8,33N 8,13 S 9,53S 9,27 F 11,29F 11,11 Příklad 2 Příprava N-hydroxy-H-/"3-/,"2-/4-fluorf enylthio/f enyl^prop^-enyl_7močoviny A. 1-/2-bromfenyl/prop-2-en-1-ol

Do 2-brombenzaldehydu /27 g, 0,146 mmol/ v suchém tetra-hydrofuranu, ochlazeném na -78 0C v lázni suchého ledu a iso-propylalkoholu, se přidá 175 ml 1,0M rotoku vinyl Grignardovačinidla v tetrahydrofuranu po kapkách a reakční směs se nechápomalu přes noc ohřát na teplotu místnosti. Do reakční směsise pak přidá chlorid amonný /nasycený roztok/ a tetrahydrofu-ran se odpaří. Beakční směs se vlije do vody a extrahuje sedvakrát diethyletherem, promyje se vodou a solankou a vysuší iuhličitanem draselným, čímž se získá žádaná sloučenina. H. 1 -Tetrahydropyranyloxy-1 -/2-bromfenyl/prop-2-en

Do 1-/2-bromfenyl/prop-2-en-1-olu /31,0 g, 0,145 mol/ ve150 ml suchého tetrahydrofuranu se přidá 20 ml 3,4-dihydro-2H-pyranu a pak 1 ml oxychloridu fosforečného a směs se míchápřes konec,týdne při teplotě místnosti. Reakční směs se pakneutralizuje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného azkoncentruje se. Získaná hmota se rozdělí mezi vodu a diethylether a vodná vrstva se opět extrahuje diethyletherem. Orga-nické extrakty se spojí a promyjí se vodou a solankou a vysu-ší se uhličitanem draselným a zkoncentrují se. Surová žádanásloučenina se zpracovává chromatografií v tenké vrstvě za použití gradientu čistý hexan až 5 % ethylacetátu v hexanu, čímžse získá žádaná sloučenina. 1. 1 -Tetrahydropyranyloxy-1 -/“2-/4-f luorf enylthio/f enyl__7- prop-2-en

Do 1-tetrahydropyranyloxy-1-/2-bromfenyl/prop-2-enu /5,39 g, 18,1 mmol/ v 60 ml suchého tetrahydrofuranu, ochlaze

ného na teplotu j-78 °C se přidá n-butyllithium /12,5 ml 1,6M 16 roztoku v hexanu/ 8 reakční směs se míchá po dobu pěti minut*

Do reakční směsi se přidá 4-fluorfenyldisulfid /5,54 g, 18 mmol/v 15 ml suchého tetrahydrofuranu. Chladicí lázeň se odstraní areakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Do směsi sevnese nasycený roztok chloridu amonného a extrahuje se dvakrát,diethyletherem. Organické extrakty se promyjí dvakrát vodou apak solankou a vysuší se síranem hořečnatým a zkoncentrují se.Chromatografií v tenké vrstvě surového produktu se získá žáda-ná sloučenina za použití hexanu a pak systému 20 : 1 hexan/di-ethylether. D. 1-/ 2-/4-fluorfenylthio/fenyl_7-3-bromprop-1-en

Do 1 -tetrahydropyranyloxy-1 -/~2-/4-fluorf enylthio/f enylprop-2-enu /2,71 g, 7,87 mmol/ ve 20 ml diethyletheru v prostře-dí dusíku a v ledové lázni se vnese koncentrovaný bromovodík asměs se míchá při teplotě 0 °C po dobu jedné hodiny. Ledové lá-zeň se odstraní a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc.Reakční směs se vlije do vody a extrahuje se dvakrát hexanem.Organické extrakty se spojí a promyjí se vodou a pak solankou,vysuší se síranem hořečnatým a zkoncentrují se, čímž se získážádaná sloučenina. E. N-/“3-/f"2-/4-fluorfenylthio/fenyl_7prop-2-enyl_7-O-tetra-hydropyranylhydroxylamin

Do O-tetrahydropyranylhydroxylaminu /2,77 g, 23,6 mmol/v 10 ml suchého dimethylformamidu se přidá po kapkách 1-/ 2-/4-fluorfenylthio/fenyl_7-3-bromprop-1 -en /2,54 g, 7,87 mmol/v 10 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá přes noc přiteplotě místnosti. Směs se vlije do 200 ml vody a extrahuje sedvakrát diethyletherem. Organické extrakty se spojí, promyjíse dvakrát vodou a pak solankou,, vysuší se uhličitanem drasel-ným a zkoncentrují se. Surový produkt se čistí chromatografiív tenké vrstvě za použití systému 3 : 1 hexan/ethylacetát a pak2 í 1 hexan/ethylacetát, čímž se získá žádaná sloučenina. P. N-/"3-/“2-/4-fluorfenylthio/fenyl_7prop-2-enyl_7hydroxylamin

Do N-/"3-/'2-/4-fluorfenylthio/fenyl_7prop-2-enyl_7-0-tet-rahydropyranylhydroxylaminu /1,76 g, 4,9 mmol/ ve 25 ml methanolu - 17 a ochlazeného v ledové lázni se vnese 2,5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové po kapkách. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a zahustí se pak k suchu. Směs se roz-dělí mezi diethylether a nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného a vodná vrstva se extrahuje ještě jednou diethyletherem·Organické extrakty se spojí, promyjí se vodou a solankou a vy-suší s® uhličitanem draselným, čímž se získá žádaná sloučenina. G. N-hydroxy-N-/“3-/~2-/4-fluorfenylthio/f enyl_7prop-2-enyl__7 močovina

Do N‘-/“‘3-/'’2-/4-fluorfěnylthio/fenyl>iiit7prop-2-enyl__/hydro-xylaminu /1,30 g, 4,7 mmol/ ve 24 ml suchého dioxanu se přiďápo kapkách trimethylsilylislokyanát a reakční směs se míchá přiteplotě místnosti přes noc. Směs se pak vlije do nasycenéhoroztoku chloridu amonného a extrahuje se dvakrát diethylethe-rem· Organické extrakty se spojí, promyjí se 1N kyselinouchlorovodíkovou a dvakrát vodou a potom solankou, vysuší sesíranem hořečnatým· Pevlá látka se překrystaluje z ethylacstá-tu a promyje se studeným diethyletherem, čímž se získá žádaná sloučenina o teplotě tání 124 až 125 °cr. Elementární analýza vypočteno C 60,36 H 4,75 N 8,80 S 10,07 nalezeno C 60,54 tt. 4,75 N 8,66 S 9,85 Příklad 3 Příprava N-hydroxy-N-á/"3-Z"2-/4-fluorfenylthio/-4- fluorfenyl__7prop-2-enyl __7moč oviny A. 2-/""2-/4-fluorf enylthio/-4-fluorf enyl_7-4,4-dimethyloxazol

Do 4-fluorthiofenolu /9,26 g, 72,2 mmol/ v suchém tetra-hydrofuranu se v prostředí dusíku a za ochlazení na teplotu-78 °C přidá po kapkách n-butyllithium /45,2 ml 1,6M roztoku/za získání bílé suspenze. Do této směsi se přidá 2,/2,4-di-fluorfenyl/-4,4-dimethyloxazolin /7,63 g, 36,1 mmol/ ve 20ml suchého tetráhyarofuranu po kapkách. Reakční směs se nechá 18 - ohřát na teplotu místnosti přes noc. Přidá se dalších 50 mltetrahydrofuranu, čímž se získá roztok a reakčni směs se pakmíchá pře konec týdne. Směs se vlije do vody, okyselí se nahodnotu pH 5 1 N kyselinou chlorovodíkovou. Smě se extrahujedvakrát diethyletherem a organické extrakty se spojí a promy-jí se vodou a pak 0,2 N roztokem hydroxidu sodného. Organickávrstva se opět promyje vodou a pak solankou, vysuší seraném hořečnatým a zkoncentruje se za získání 13,2 g surovéhoproduktu9 který se překrystaluje z hexanu, čímž se získá žádanýprodukt. B. N-hydroxy-N-/“3-/"2-/4-fluorfenylthio/-4- fluorfenyl_7-prop-2-enyl-_7močovina V podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 1,stupeň B až stupeň I se získá žádaná sloučenina. Po překrysta-lování z ethylacetátu se získá 0,94 g žádané sloučeniny o tep-lotě tání 151 až 153 °C.

Elementární analýza vypočteno C 57,13 H 4,20 N 8,33 S 9,53 E 11,30 nalezeno C 57,11 H 4,39 ΕΓ 8,52 S 9,36 E 11,60 Příklad 4: Příprava &- hydroxy-If-/“3-/“'2-/4-fluorfenylthio/-5-fluorfenyl_7prop-2-enyl__7moč oviny V podstatě stejně, jako je popsáno v příkladu 3, za použitívhodně substituovaného 2-/2,5~difluorfenyl/-4,4-dimethyloxa-zolinu se získá 0,31 žádané sloučeniny po překrystalováníz ethylacetátu.

Elementrátní analýza vypočteno C 57,13 H 4,20 N 8,33 S 9,53 E 11,30nalezeno C 57,32 H 4,16 K 8,10 S 9,57 F 11,50 Příklad 5 Příprava N-hydroxy-N- /, 3-/ 2-/4-chlorfenylthio/fenyl_i7pz,op- 2-enyl_7močoviny 18a - V podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 1 v stupen E až I se získá žádaná sloučenina z obchodně dostupného 2-/"74-chlorfsnyl/thio__7benzaldehydu. Má teplotu tání 126 až128 °C<, Elementární analýza: vypočteno C 57,40 H 4,52 N 8,37 nalzeneo C 57,54 H 4,41 N 8,37 Příklad 6 Příprava N-hydroxy-N-/’~3-/’*2-/4-fluorfenylthio/-3--í,luorí,enyl__7-prop-2-enyl__7moč oviny V podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 1,se získá žádaná sloučenina o teplotě tání 127 až 128 °C.Elementární analýza vypočteno C 57,13 H ¢,19 N 8,33 S 9,53 F 11,39 nalezeno C 57,12 H 4,15 H 8,27 S 9,69 F 11,85 Příklad 7 Příprava N-hydroxy-N-^”3-/~2-/4-chlorfenylthio/-3-fluorfenyl_7-prop-2-enyl_7moč oviny V podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 3, se připraví žádaná sloučenina o teplotě tání 125 až 127 C. Elementární analýza nalezeno C 54,47 H 4,00 N 7,94 S 9,09 Cl 10,05 F 5,38 vypočteno C 54,39 H 4,00 N 7,65 S 8,83 Cl 10,00 F 5,69 Příklad 8 Příprava u-hydroxy-!í-£<,’3-Z"2-/4chlorfenylthio/-6-fluorfenyl-7-prop-2-enyl_7močoviny V podstatě stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 3,se získá žádaná sloučenina o teplotě tání 137 sž 139 °C. 19

Elementární analýza vypočteno C 54,57 S 4 N 7,94 S 9,09 Cl 10,05 F 5,38 nalezeno C 54,67 H 4 N 7,78 S 9,24 Cl 10,03 F 5,66

Způsobem, popsaným v uvedených příkladech, může pracovníkv oboru připravit také další sloučeniny obecného vzorce Ipodle vynálezu.

Jak shora uvedeno, hodí se sloučenina podle vynálezu obec-ného vzorce I pro inhibici konverze arachidonové kyseliny 5-lipoxygenasou na 5-hydroxy-6,8,11,14-dikosatetraenoovou ky-selinu /5-HPETE/. Proto se vynález také týká způsobu ihnibi-ce konverze arachidonové kyseliny na leukotrieny, čímž se mí-ní podávání savcům v případě potřeby 5-lipoxygenasové inhibi-ce 5-lipoxygenasu inhibující dávky sloučeniny obecného vzor-ce I nebo její farmaceuticky vhodné soli.

Zde používaným výrazem “účinné množství“ se vždy mínímnožství sloučeniny podle vynálezu, které je schopné inhibovat.první stupeň biochemické syntézy,,při kterém se kyselina ara-chidonová převádí na leukotnenj^ která je katalyzovaná enzy-mem 5-lipoxygenasa a které zvláště inhibuje 5-lipoxygenasu.Inhibice 5-lipoxygenasy podle vynálezu zahrnuje jak případnéléčebně terapeutické tak profylaktické ošetřování. Specifickádávka sloučeniny, podávané podle vynálezu, závisí na různýchokolnostech, jako je například příslušná podávaná sloučenina,cesta podání a ošetřovaný stav. Zpravidla je denní dávka při-bližně 0,01 mg/kg až přibližně 20 mg/kg účinné látky. Výhod-nou', denní dávkou je přibližně 0,05 až přibližně 10 mg/kg a nej-výhodnější přibližně 0,1 až přibližně 5,0 mg/kg.

Farmaceutické prostředky se mohou podávat nejrůznějšímzpůsobem, například orálně, rektálně, transdermálně, subkutánně,intravenozně, intramuskulárně a intranasálně, Zvláštní cha-Iřakteristikou sloučenin obecného vzorce I je jejich vysoká 20 účinnost, a proto i malé dávky jsou schopny účinně inhibovat 5-LO katalyzovanou reakci. S leukotrieny jsou spojeny nejrůznější fysiologické funk-ce. Proto je možno sloučenin obecného vzorce I podle vynálezupoužívat v případě savc.ů pro ošetřování nejrůznějších poruch,souvisejících s leukotrieny, jako je astma, alergická onemocně-ní /včetně alergické rýmy/, zánětlivých onemocnění střev, lu-penky, ischemie, záchvatů, arthritis a AKDS. Sloučeniny obec-ného vzorce I podle vynálezu jsou proto vhodné pro ošetřováníuvedených onemocnění prostřednictvím ihnibice 5-lipoxygenasoukatalyzované konverze arachidonové kyseliny na leukotrieny po-dáváním účinné dávky při astma, při alergických nemoc ech, přizánělivém onemocnění střev, při lupence, při záchvatech, přiischemii při ARDS nebo při arthritis.

Sloučeniny obecného vzorce I se s výhodou před podánímzpracovávají na farmaceutické prostředky. Vynález se proto takétýká farmaceutických prostředků, které obsahují účinné množs-tví sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhod-né soli a farmaceuticky vhodný nosič, excipient nebo ředidlo. Účinná látka v takových prostředcích je obsažena ve hmot-nostním množství 0,1 až 99,9 %· Výrazem "farmaceuticky vhodný”se míní nosič, ředidlo nebo excipient kompatibilní s ostatní-mi složkami prostředku a zdravotně nezávadný. farmaceutické prostředky podle vynálezu se připravují osobě známými způsoby za použití snadno dostupných složek. Při přípravě farmaceutického prostředku se účinný látka mísís nosičem a pak se zpracovává na kapsle nebo se uzavírá do sáč-ku, nebo do papírového nebo jiného obalu. Pokud je nosič ředid -lem, může být pevný, polopevný nebo kapalný, a působí ja-ko excipient nebo pojidlo nebo prostředí pro účinnou látku.Farmaceutické prostředky mohou mít formu tablet, pilulek,prášků, kosočtverečků, sáčků, elixírů, suspenzí, emulzí, roz-toků, sirupů, aerosolů /ve formě pevné látky nebo v kapalnémprostředí/, mastí s až hmotnostně 10 % účinné látky, měkkýcha tvrdých želatinových kapslí, čípků, sterilních vstřikova-telných roztoků, sterilních prášků a podobných prostředků. 21

Jakožto příklady vhodných nosičů, excipientů a ředidelse příkladně uvádějí, laktoza, dextroza, sacharoza, sorbitol,mannitol, škroby, akacia, fosforečnan vápenatý, algináty,. tra-gakanth, želatina', křemičitan vápenatý, mikrokrystalická celu-lóza, polyvinylpyrrolidon, celulóza, vodný sirup, methyleelu-lóza, methylhydroxybenzoáty, propylhydroxybenzoáty, mastek,stearát horečnatý a minerální olej. farmaceutické prostředkymohou kromě toho obsahovat mazadla, smáčedla, sladidla, ochu-covací přísady a pomocné přísady. Prostředky podle vynálezu semohou formulovat tak, že mají okamžité, prodloužené nebo odlo-žené působení po podání účinné látky, nemocnému.

Prostředky se výhodně formulují jakožto jednotkové dávky,přičemž každá dávka obsahuje přibližně 0,1 až přibližně 500mg a s výhodou 1 až přibližně 250 mg účinné látky. Výrazem“jednotková dávkovači forma" zde užívaným se vždy míní fyzi-kálně oddělené jednotky, které jsou vhodné pro podávání lidema savcům, přičemž každá jednotka obsahuje předem stanovenémnožství účinné látky stanovené k dosažení žádoucího terapeu-tického působení spolu se vhodným nosičem. Následující příklady objasňují, avšak nijak neomezují,farmaceutické prostředky podle vynálezu. "Účinnou látkou sevždy míní sloučenina obecného vzorce I nebo její farmaceutic-ky vhodná sůl.

Farmaceutický prostředek 1

Tvrdé želatinové kapsle se připravují za použití těchto složek: účinná látkasušený škrobstearát hořečnatýcelkem

Množství /mg/kapsle/250200 1 0 460 mg

Uvedenévých kapslí, složky se promísí a plní se do tvrdých želatino-aby každá kapsle obsahovala 460 mg. 22 farmaceutický prostředek 2

Tablety se připravují 2 následujících složek:

Množství /mg/tableta/ účinná látka 250 mikrokrystalická celulóza 400 sublimovaný oxid křemičitý 10 kyselina stearová 5 celkem 665 mg

Složky se smísí a tlačí se na formu tablet vždy o hmot-nosti tablety 665 mg.

Farmaceutický prostředek 3

Aerosolový roztok se připravuje z těchto složek:

Množství /hmo'tn. %/ účinná látka 0,25ethanól ' -.29,75hnací prostředék 22 /chlořdifluor- TO-00 . methan/ „celkem 100,00 Účinná látka se smísí s ethanolem a směs· se přidá počástech do hnacího prostředku 22, ohřeje se na 30 °C a převedese do plnicího zařízení. Požadované množství se vnese do nádo-by z nerezavějící oceli a zředí se zbylém hnacím prostředkem.Obal se opatří ventilem, uvolňujícím jednotkovou dávku.

Farmaceutický prostředek 4

Tahleta, obsahující vždy 60 mg účinné látky účinná látka 60 mg škrob 45 mg mikrokrystalická celulóza 35 mg polyvinylpyrroliďon /10% vodný roztok/ 4 mg natriumkarboxymethylovaný škrob 4,5 mg magnesiumstearátový škrob 0,5 mg mastek 1,0 mg celkem. 1 50 mg - 23 .Účinná látka, škrob a celulóza se vedou sítem o nr»úměrnok 355 mikrometrů /US mesh 4.5/ a důkladně se promísí. Vbdnýroztok, obsahující polyvinylpyrrolidon, se smísí se získanýmpráškem a směs se vede sítem o průměru ok 1400 mikrometrů /USmesh.. 14/. Takto připravené granule se suší při teplotě 50 °Ca vedou s;e sítem o průměru ok 1000 mikrometrů /US mesh 18/.

Fak se přidá nstriumkarboxymethylovaný Škrob, st.earát hořeč-natý a mastek, předem protlačené sítem o průměru ok 250 mik-rometrů /US mesh 60/, 3měs se promísí a lisuje se na tableto-vacím stroji na tablety o hmotnosti 150 mg.

Farmaceutický prostředek 5

Kapsle, obsahující vždy- 80 mg účinné látky se připravuje z těch-to složek: účinná látka θθ mg škrob 59 mg mikrokr.ystalická celulóza 59 mg stearát hořečnatý 2 mg eelkem 200 mg Účinná látka, škrob, mikrokrystalická celulóza a stearát hořečnatý se smísí, vedou se sítem o průměru ok 355 mikrometrů/US mesh 45/ a plní se do tvrdých želatinových kapslí vždy.v množství 200 mg na kapsli.

Farmaceutický prostředek 6' Čípek, obsahující vždy 225 mg účinné látky, se připravujez těchto složek: účinná látka glyceridy nasycené mastné kyselinycelkem 225 mg2000 mg 2225 mg Účinná látka se vede sítem o průměru ok 250 mikrometrů/US mesh 6Ό/ a suspenduje se v glyceridech nasycené mastnékyseliny, oředem roztavených za použití minimálního tepla.Směs se lije do šípkové formy o jmenovité kapacitě 2 g anechá se ochladit. - 24 -

Farmaceutický prostředek T

Suspenze obsahující 50 mg účinné látky na 5 ml dávku právu je- z těchto složek: účinná látka 50,00 mg natriumkarboxymethylcelulóza 50,00 mg sirup T,25 ml roztok kyseliny benzoové 0,10 ml chutová přísada q.v. barvivo q.v. čištěná voda do 5,00 ml tfčinná látka se vede sítem.o průměru ok 355 mikrometrů/US mesh 45/ a smísí se s natriumkarboxymethylcelulózou nahladkou pastu. Pak se přidá roztok kyseliny benzoové, chuto-vá přísada a barvivo, zředěné částí vody, za míchání. Nakonecse přidá dostatečné množství vody k dosažení požadovaného ob-jemu.

Farmaceutický prostředek 8

Prostředek pro intravenozní podání se připravuje z následuji-,cích složek: účinná látka 100 mg alginát sodný 500 mg isotonická solanka 1000 mg

Roztok shora uvedených složek se obecně podává intrsvenozneošetřovanému jedinci rychlostí 1 ml/min. Následující zkoušky dokládají schopnost, sloučenin obecnéhovzorce I podle vynálezu inhibovat 5-lipoxygenasu,

Senzitizační procesy

Sameček morčete kmene Hartley /o hmotnosti 200 až 250g/ se aktivně senzitizuje třemi injekcemi ovalbuminu /OA, 10 mg/kg/. Ovalbumin se podává intraperitoneálně první dena třetí den a subkutánně pátý den. Pokusy in vitro se pakprovádějí za 21 až 15 dní. - 25 -

Obecně in vitro: V den zkoušky se morče usmrtí zadušením oxidem uhličitýma vyjmou se průdušnice, očistí se od obklopující tkáně a roz-říznou se na spirálovité pásky. Každý pásdc se rozpůlí k prove-dení paralelních zkoušek. Tkáně se vnesou do 10 ml opláštěnýchtkáňových lázní, udržovaných na teplotě 37 °C a bavlněnou nití - se upevní snímač tlaku Grass /PTJJC/. Změny isometrickéhotlaku se objeví na obrazovce polygrafii Grass /Model 7P/. Prů-dušnicové pásky se smočí v modifikovaném Krebsově roztoku následujícího složení /v miXimol/ 118,2 chloridu sodného, 4,6 chlo-ridu draselného, 2,5 dihydrátu chloridu vápenatého, 1,2 hepta-hyďrátu síranu hořečnátého, 2,8 hydrogenuhličitanu sodného, 1,0dihydrogenfosforečnanu draselného, 10,0 de;xtro2y. Pufr obsahujeindomethacin /5 /&amp;&amp;/, který navozuje kontrakce cysteinylleuko-trienů /LT/ odstraněním vlivu cyklooxygenasových produktů. Tká-ňové lázně se provzdušní směsí 95 % kyslíku a 5 % oxidu uhli-čitého. Průdušnicové pásky se za zbytkového napětí 2 g pone-chají minimálně 60 minut stabilizovat, a pak se zkouší. V průbě-hu stabilizace se lázeň vyměňuje každých 15 minut. Křivky odezvy na koncentraci

Kumulativní křivky odezvy na koncentraci se získají z prů-dušnicových pásků při zvyšování koncentrace agonistu v orgáno-vé lázni při pdodávkových přivážeích, přičemž předchozí kon-centrace zůstává ve styku s tkáni /van Rossum, Arch. Int.Pharmacodyn. Ther. 143, 299 až 330 /1963/. Agonistová koncen-trace se zvyšuje po dosažení vrcholu kontrakce vyvolané pře-dešlou koncentrací. Jedna křivka koncentrace - odezva se zís-ká pro každou tkáň. K minimalizace odchylek mezi tkáněmi sekontrakční odezvy vyjadřují jako procento maximální odezvycarbacholu /10 /Ul£/, přidanéío do lázně na konci křivky koncen-trace - odezva. Zpočátku se tkáně iniciují carbacholem /10

Mff/ a pak se 60 minut, stabilizují k zajištění životnosti tká-ně. Po zaznamenání maximální odezvy na počáteční iniciaci car-bacholem se tkáně promyjí a Znova se stabilizují po dobu 60 mi-nut; před započetím zkušebního protokolu. - 26 -

Stanovení EC^-θ a procenta inhibice

Hodnocení vlivu nových inhibitorů 5—lipoxygenasy při.

Schul t z -Dal o vě reakci, se provádí tak, že se. každá sloučeninainkubuje s tkání po dobu 30 minut přeď nastartování« křivek*Přidá se pojidlo /DMSO/ ďo párových kontroních tkání. Pyrilamin/1 0 yUJJ/ se přidá do všech lázní v této chvíli k blokování působení uvolněného histaminu.Získaná odezva koncentrace an-t i genu 30 ng/ml se zaznamenává v; nepřítomnosti a v přítomnosti,drogy podle vynálezu a pro každou dvojici tkání se vypočteprocentová inhibice. Hodnoty IC^q se stanoví lineární regresí.

Používá se křivky odezvy na LT nebo earbachol ke stanove-ní specificity činidla jakožto inhibitoru 5-lipoxygenasy. Přitěchto zkouškách se zkoušené sloučenina obecného vzorce I in-kubujé, jak shora uvedeno. Hodnoty EC^q, které znamenají molár-ní koncentraci agonistu, potřebné k. navození 50 % maximální o-dezvy, se stanové lineární geresí. Rozdíly EC^q v přítomnostinebo v nepřítomnosti zkoušené sloučeniny obecného vzorce I seanalyzují Studentovým t-testem.ys hodnotou P menši než 0,05se považují jako významné.

Studie in vivo

Sameček morčete Hartley /o hmotnosti 350 až 500 g/ pasiv-· *ně senzitizovaný proti ovalbuminu i.p. podáním 0,3 ml antise-ra 2 dny před zkouškou se používá při pokusech. Připraví sehyperimarni sérum z aktivně senzitizovaného samečka morčete,kondicionovaného 2 mg ovalbuminu v 50% kompletním Erenndově .aďjuvantu i.p. den 1 a den 5. Ve dnu 21 se morčata zabijí asérum se shromáždí a uloží při teplotě -20 °C. V den zkoušky se pasivně senzitizované morčata anestetizují 35 až 40 mg/kg i.p. podáním natriumpentobarbitalu. Pravá krční žíla^se ka-nyluje trubičkou Tygon /o.d. 03/ spojenou s injekční stříkač-kou pro podání zvolené drogy podle vynálezu. Měří se krevnítlak měřičem tlaku Statham spojeným se sondou Tygon, umístě-nou v levé hrdelní tepně. Průdušnice se kanuluje a každémuzvířetijse dodává vzduch Harvardovým respirátorem pro hlodav-ce, přivádějícím objemově 1 ml/100 g tělesné hmotnosti přimíře 60 nádechů ze minutu. Podá se sukeinylcholin /5 mg/kg/ i.v. k potlačení spontánního dýchání. Měří se vnitroprůduš- - 27 - nicový tlak, index celkové plicní odolnosti Stathamovým měři-čem tlaku, spojeným s T trubičkou průdušnicové kanyly. Vý-stupní signál měřiče tlaku se přenáší na obrazovku polygra-fu Grass- Tělesná teplota se udržuje na normální výši iso-termální poduškou Deltaphase. Před operativním zákrokem semorčeti podá zkoušená sloučenina nebo nosič; /PSG 400/orální sondou nebo OA a stanovuje se čas po orálním podání.Mordata se předem ošetří i.v. pyrilaminem /5 mg/kg, propra-nololem./1 mg/kg/ a indomethacinem 10 mg/kg/ 5 minut před.před podáním ovalbuminu /0A£ Ovalbuminem navozený vzrůsttlaku· v průdušnici se vyjadřuje jako procento maximálníhotlaku? získaného při zasvorkování průdušnice hemistatem» Kestanovení vlivu každé drogy podle vynálezu se vypočítáváprocento inhibice se zřetelem na nosič a na každou drogu,použitcu pro ošetření morčat se zřetelem na každou zkouše-nou koncentraci.

Tabulka IIInhibice 5-LO

In vitro ICB 1 y-uM 2,10 30 mg/kg, P.o78 2 1,00 50 3 0,60 30a 4 0,39 81 5 1,2Ů 76 6 0,62 75 T 2,40 93 8 1,80 51 9 1 ,00 93 Poznámka: a znamená dávku 10 mg/kg 2 h

Popis a příklady vynález toliko objasňují a jsou přirozeně možné různé modifikace, spadající do rozsahu patentovýchnároků.

Průmyslová využitelnost Účinné látky inhibující 5-lipoxygenasu.

Claims (6)

- 28 - PATENTOVÉ NÁROKY 1 e N-Hydroxy-N-/"3-/”2-/halogenfenylthio_7fenyl__7prop-2-eny l—7mo2 ovina obecného vzorce Γ
1. /1/------ "IJtfd ΑΛ3Γ90VλΖ3ΐγΝΛ,'. Odd avgn kde znamená K? atom vodíku: nebo atom halogenu ®X atom fluoru nebo chloru a Z 6 ΛΙ 7

   jejich farmaceuticky vhodné soli.
2. 2. N-Hydrozy*N-^5-/72-/halogenf‘enylthio-7fenyl-7prop«-2-enyl_7moč ovina podle nároku 1 obecného vzorce I, kterou jeN'-hydroxy-N-/~3-/’2-/4-fluorfenylthio/-6-fluorfenyl_7prop-2- -eny l„.7mo^ ovina, N-hydroxy-N-/73-/“2-/4-fluorfenylthio/-5-fluorfenyl_7prop-2-enyl__7moč ovina, N-hydroxy-N-/’“3r-/*2-/4-fluorfenylthio/-4-fluorfenyl—7prop-2-enyl^močovina, N-hydroxy-N-/7*’3-J/”2-/4-chlorfenylthio/-6-fluorfenyl-i7prop-2-enyl_7močovina, N-hydroxy-N-/*3-/^*2-/4-chlorfenylthio/fenyl_7prop-2-enyl-7- močovina, N-hydroxy-N-/"3-/“2-/4-fluorfenylthio/-3-fluorfenyl_7prop-2-enyl—7močovina, N-hydroxy-N-^"'3-^*2-/4-chlorfenylthio/-3-fluorfenyl_7prop-2-enyl_7moč ovina, - 29 - N-hydroxy-Π-/“3 -/’ 2-/4-fluorfenylthi o/f enyl__7pr op-2-eny 1_7-moδovina a jejich farmaceuticky vhodné soli.
3. 3. farmaceutický prostředek, inhibující 5-lipoxygenaau,vyznačující se tím, že obsahuje;jako účinnoulátku sloučeninu obecného vzorce 1 podle nároku 1 a 2 spolu s jedním nebo s několika farmaceuticky vhodnými nosiči, ex-cipienty nebo ředidly.
4. 4. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a 2jakožto činidla inhibujícího 5-lipoxygenasu.
5. 5. Sloučenina obecného vzorce I podle nároku 1 a 2 použí-vaná při ošetřování astma, arthritis, alergie, zánětlivého onemocnění střev, lupenky, záchvatů, syndromu dechových obtížídospělých nebo ischemie.
6. 6. Způsob přípravy 2-/”'2-/4-halogenf enyl thio/f enyl__/-4,4-dimethyloxazolinu obecného vzorce r s

   kde znamená R1 atom vodíku nebo atom halogenu a X atom fluorunebo atom chloru, vyznačující se tím, že a/ nechává se reagovat 4-fluorthiofenyl nebo 4-chlorthiofe-nyl s alkyllithiovým činidlem s 1 až 4 atomy uhlíku v a-protickém rozpouštědle při teplotě -40 až -100 Ca b/' získaný lithiumthiolát, se nechává reagovat s 2-/2-fluor- fenyl/-4,4-dimethyloxazolinem obecného vzorce 30 -

   kde znamená atom vodíku nebo atom halogenu, v aprotickémrozpouštědle při teplotě 0 až 1QO °C·