CN1981781A - 熊胆总结合胆酸注射剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从中药熊胆粉(人工引流熊胆粉)提取纯化有效部位熊胆总结合胆酸提取物，再加入适量辅料制成的可供静脉注射用中药有效部位注射剂—熊胆总结合胆酸注射剂，本发明也涉及制备该熊胆总结合胆酸注射剂的方法，以及该熊胆总结合胆酸注射剂在抗感染及治疗肝胆系统疾病、心脑血管疾病方面的药物用途。以人工引流熊胆粉为原料，加水溶解后上大孔吸附树脂柱纯化，制得有效部位含量大于80％(以熊胆总结合胆酸计)的熊胆总结合胆酸提取物，加入适量辅料和注射用水，制成可供静脉注射用的小水针、输液及冻干粉针。熊胆总结合胆酸提取物有效部位含量高，杂质低，注射剂制剂安全性符合要求，静脉使用不良反应小。经药效毒理试验研究证明，熊胆总结合胆酸注射剂安全剂量范围大，疗效好，是一种具有良好开发前景的中药有效部位注射剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药有效部位注射剂，特别是以人工引流熊胆粉为原料，提取纯化有效部位制得熊胆总结合胆酸提取物，再以适当比例与辅料配伍制成的可供静脉注射用的熊胆总结合胆酸注射剂，本发明也涉及制备该熊胆总结合胆酸注射剂的方法及药物用途。
背景技术
熊胆为传统珍稀名贵药材，尽管其疗效确切但临床应用并不广泛，近年来，人工引流熊胆的成功开辟了丰富的药源，已有大量研究结果证明人工引流熊胆粉在抗菌、解热、抗炎、镇静、抗惊、解痉；利胆保肝、溶解胆结石；降血糖；抗肿瘤；以及治疗心脑血管疾病方面与天然熊胆有同样的药理活性与临床疗效，引流熊胆单方或复方口服制剂也有较多的开发应用。但就熊胆所治病症(一般为急重症)的特点来说，口服给药生物利用度较低，起效较为缓慢，临床疗效不甚理想，注射剂应是一个较佳的选择。
有关熊胆注射剂的研究开发，在20世纪90年代起即已有研究报道，中国人民解放军第465医院石丽霞等将熊胆粉以乙醇提取加注射用水制成可供肌肉注射小水针，含熊去氧胆酸2.2-3.0％，鹅去氧胆酸1.4-2.0％，于1992年初获得中国人民解放军空军后勤部卫生部批准的非标制剂文号，用于治疗肝胆系统疾病[1，2]；成冬生等报道了2％熊胆注射液肌肉注射治疗慢性肝病的临床研究结果[3]；张静报道了以熊胆粉1g用注射用水配制成10ml熊胆注射液穴位注射治疗高脂血症[4]；王天章公开的发明专利“熊胆注射液”采用熊胆汁或熊胆粉加水溶解，过滤，冻干，再加生理盐水溶解用射线灭菌制成熊胆注射液[5]。有关熊胆粉静脉给药注射剂(特别是冻干粉针剂)的研究开发，以延边大学医学院有较多的研究报道，赵凤泽等获得的发明专利“引流熊胆冻干粉针剂的制备方法”以引流熊胆粉为原料，分别以石油醚、乙醇进行回流、浓缩、脱色、调整pH值、灭菌、冻干制成冻干粉针剂[6]，采用赵凤泽等配制的熊胆注射液或冻干粉针剂，文献报道了其降血脂、对家兔血小板粘附功能和实验性血栓形成的影响、对失血性休克大鼠脂质过氧化的影响等[7-11]。以上公开的不管是注射液还是冻干粉针制备工艺，都不是以提取纯化有效部位，制备有效部位注射剂为目标，仅以石油醚脱脂并水醇处理，不能有效去除杂质，难以达到静脉用中药有效部位注射剂的要求。
目前中药注射剂临床应用经常有过敏反应、甚至致死的报道，中药注射剂的安全性问题已引起临床医生与政府的高度重视，并已成为阻碍中药注射剂发展的一大瓶颈。究其原因，很大程度在于大多数中药注射剂都没有经过严格的提取分离纯化处理，有效部位不明确或有效部位含量低，有害杂质含量较高，造成临床上各种不明原因的毒副反应。按照现行药品注册相关法规，供静脉使用的中药有效部位注射剂，要求原料提取物中有效部位含量应在80％以上。近年来，引流熊胆粉的化学与药理研究取得了令人鼓舞的进展，已经探明其中主要活性成分为以牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为主的总结合胆酸，但有关该有效部位总结合胆酸的适合工业化生产的提取与纯化工艺，特别是可使有效部位含量达80％以上并达到静脉注射剂用原料要求的提取与纯化工艺，未见有研究报道与公开，以熊胆有效部位总结合胆酸制成的注射剂也未见有报道。
发明内容
本发明的目的在于：针对引流熊胆粉已有研究报道与开发的注射剂存在的问题，为临床提供一种新的熊胆有效部位注射剂-熊胆总结合胆酸注射剂，该注射剂以引流熊胆粉为原料，采用大孔吸附树脂柱纯化处理，制成可供静脉注射的熊胆总结合胆酸提取物，再以该提取物制成注射剂。
本发明的另一个目的是提供这种熊胆总结合胆酸注射剂的制备方法，其中并包含原料熊胆总结合胆酸提取物的制备方法。
本发明的又一目的是提供熊胆总结合胆酸注射剂在抗感染、治疗肝胆系统疾病、治疗心脑血管疾病方面的药物用途。
本发明的目的是通过如下配方和制备方法制取的药物来实现的：
一种熊胆总结合胆酸注射剂组合物，由适量的熊胆总结合胆酸提取物、辅料和注射用水组成，其特征在于：所述熊胆总结合胆酸提取物是指以引流熊胆粉为原料，采用大孔吸附树脂柱纯化制得，其指纹图谱与熊胆总结合胆酸提取物标准指纹图谱相同；含有重量百分比80％以上的熊胆总结合胆酸，其中包含牛磺熊去氧胆酸30-60％，牛磺鹅去氧胆酸20-60％，牛磺胆酸0-10％，牛磺去氧胆酸0-10％。熊胆总结合胆酸注射剂每剂量单位处方中药物含量为：熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)20～1000mg。
本发明的熊胆总结合胆酸注射剂药物组合物的优选每剂量单位处方中药物含量为：熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)100mg。
附加技术特征是：
a、小容量熊胆总结合胆酸注射液：每剂量单位含熊胆总结合胆酸20～1000mg，亚硫酸氢钠5～20mg，枸橼酸钠5～20mg，加注射用水至5～10ml。
b、大容量熊胆总结合胆酸氯化钠注射液：每剂量单位含熊胆总结合胆酸20～1000mg，注射用氯化钠380～1520mg，亚硫酸氢钠75～300mg，枸橼酸钠75～300mg，加注射用水至50～200ml。
c、大容量熊胆总结合胆酸葡萄糖注射液：每剂量单位含熊胆总结合胆酸20～1000mg，注射用葡萄糖2.5～10g，亚硫酸氢钠75～300mg，枸橼酸钠75～300mg，加注射用水至50～200ml。
d、熊胆总结合胆酸冻干粉针：每剂量单位含熊胆总结合胆酸20～1000mg，甘露醇100～500mg，磷酸二氢钠2-10mg，注射用水至2-10ml，冷冻干燥制成。
上述熊胆总结合胆酸注射剂的制备方法，包含熊胆总结合胆酸提取物的制备方法和熊胆总结合胆酸注射剂的制备方法。
熊胆总结合胆酸提取物制备方法：
a.取熊胆粉1重量份，加水3-10重量份，加热溶解，滤过，得熊胆水溶液；
b.熊胆水溶液经聚乙烯型大孔树脂吸附并用水洗除去杂质；
c.吸附于聚乙烯型大孔树脂上的有效组分用20～90％的含水乙醇洗脱，含水乙醇的用量为熊胆粉原生药重量的10-100倍；
d.乙醇洗脱液回收乙醇并浓缩，干燥，即得熊胆总结合酸提取物。
此工艺所得熊胆总结合胆酸提取物指纹图谱与熊胆总结合胆酸提取物标准指纹图谱相同；以牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸为对照，高效液相色谱法测定，含有重量百分比80％以上的总结合胆酸；以高效液相色谱法测定，含牛磺熊去氧胆酸30-60％，牛磺鹅去氧胆酸20-60％，牛磺胆酸0-10％，牛磺去氧胆酸0-10％。
小容量熊胆总结合胆酸注射液的制备方法：取上述熊胆总结合酸提取物，加注射用水使溶解，加入药用辅料，搅拌溶解，调节pH，加活性炭适量，搅匀，煮沸，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂。
大容量熊胆总结合胆酸氯化钠注射剂制备方法：取上述熊胆总结合酸提取物，加注射用水使溶解，加注射用氯化钠及适量药用辅料，搅拌溶解，调节pH，加活性炭适量，搅匀，煮沸，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂。
大容量熊胆总结合胆酸葡萄糖注射液的制备方法：取上述熊胆总结合酸提取物，加注射用水使溶解；加注射用葡萄糖及适量药用辅料，搅拌溶解，调节pH，加活性炭适量，搅匀，煮沸，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂。
熊胆总结合胆酸冻干粉针剂的制备方法：取上述熊胆总结合酸提取物，加注射用水使溶解，加赋形剂及适量药用辅料，搅拌溶解，调节pH，加活性炭适量，搅匀，煮沸，滤过，分装至西林瓶，冷冻干燥，即得。
本发明的优点在于：
①原料熊胆总结合胆酸的制备方法采用熊胆粉以水溶解，通过大孔吸附树脂柱纯化处理，工艺过程简单，生产成本低，且避免使用石油醚等易燃易爆有机溶剂脱脂，特别适合工业化生产；
②制得的熊胆总结合胆酸提取物中有效部位总结合胆酸含量达80％以上，杂质含量低，符合静脉注射用有效部位原料要求；
③本发明的熊胆总结合胆酸注射剂有效部位含量高、制剂质量稳定、制剂安全性良好，可作为静脉使用，相比其它剂型更具有药物吸收快、生物利用度高、作用迅速、适用于急性及中重度病例、静脉输注可避免二次污染等突出优点。
本发明的熊胆总结合胆酸注射剂药物组合物经系统药效学、毒理学试验研究证明，用于抗感染、治疗肝胆系统疾病、治疗心脑血管疾病，疗效确切，使用安全。
1、抗感染药效学研究
①对腺病毒3型感染小鼠的保护作用
表1说明，30～5mg/kg熊胆总结合胆酸静脉注射给药，每日1次，连续3天，有极显著或明显降低腺病毒3型尿囊液(50个LD50攻击量)滴鼻感染小鼠15天内死亡率作用(P＜0.001～＜0.05)。
表1 熊胆总结合胆酸对腺病毒3型感染小鼠的保护作用
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 15天组内死亡数(只) | 死亡率(％) | P |
| 病毒感染模型组利巴韦林注射液组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组 | -，i.v60，i.v30，i.v20，i.v10，i.v5，i.v | 303030303030 | 291313151721 | 96.6743.3343.3350.0056.6770.00 | ＜0.001＜0.001＜0.01＜0.05＞0.05 |
注：P值为各给药组与病毒感染对照组比较
②对腺病毒3型感染小鼠肺指数的影响
表2说明，30～5mg/kg熊胆总结合胆酸对腺病毒3型尿囊液(50个LD50攻击量)滴鼻感染小鼠肺指数升高有极显著或明显抑制作用(P＜0.001～P＜0.05)。
表2熊胆总结合胆酸对腺病毒3型感染小鼠肺指数的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 体重(g) | 肺指数(g/100g体重) | 抑制率(％) | |
| 感染前 | 感染5天 | |||||
| 正常对照组病毒感染模型组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组 | ---，i.v30，i.v20，i.v10，i.v5，i.v | 202020202020 | 10.60±0.5010.65±0.4910.65±0.4910.50±0.5110.40±0.5010.56±0.51 | 13.05±0.7611.40▲▲▲±0.5012.40***±0.8812.15*±0.6711.90*±0.7211.50±0.73 | 0.92±0.101.25▲▲▲±0.120.98***±0.171.04***±0.171.11***±0.101.16*±0.18 | ----21.2116.9710.777.29 |
注：①病毒感染模型组与正常对照组比较 ▲▲▲P＜0.001
②各给药组与病毒感染对照组比较***P＜0.001 **P＜0.01 *P＜0.05
③对甲型流感病毒H1N1感染小鼠的保护作用
表3说明，30～10mg/kg熊胆总结合胆酸静脉注射给药，每日1次，连续3天，有极显著或明显降低甲型流感病毒H1N1感染小鼠15天内死亡率作用(P＜0.001～＜0.05)。
表3 熊胆总结合胆酸对甲型流感病毒H1N1感染小鼠的保护作用
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 组内死亡数(只) | 死亡率(％) | P |
| 病毒感染模型组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组 | -，i.v30，i.v20，i.v10，i.v5，i.v | 2020202020 | 20791013 | 10030.0045.0050.0065.00 | ＜0.001＜0.01＜0.05＞0.05 |
注：P值为各给药组与病毒感染模型组比较
④对甲型流感病毒H1N1感染小鼠肺指数的影响
表4说明，30～5mg/kg熊胆总结合胆酸对甲型流感病毒H1N1感染感染小鼠肺指数升高有极显著或明显抑制作用(P＜0.001～P＜0.05)。
表4 熊胆总结合胆酸对甲型流感病毒H1N1感染小鼠肺指数的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 体重 | 肺指数(g/100g体重) | 抑制率(％) | |
| 感染前 | 感染5天 | |||||
| 正常对照组病毒感染模型组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组熊胆总结合胆酸组 | -，i.v-，i.v30，i.v20，i.v10，i.v5，i.v | 202020202020 | 12.55±0.5112.60±0.6012.69±0.4812.65±0.4912.60±0.5012.60±0.50 | 15.60±0.5013.35±0.5914.38***±0.6214.10*±0.7214.00*±0.9213.80±0.70 | 0.89±0.031.28±0.121.04***±0.131.09***±0.161.18*±0.131.21*±0.12 | ----19.4714.687.495.07 |
注：①病毒感染模型组与正常对照组比较▲▲▲P＜0.001
②各给药组与病毒感染对照组比较***P＜0.001 **P＜0.01 *P＜0.05
⑤解热试验显示，2，4二硝基苯酚致热试验结果表明，20～2.5mg/kg熊胆总结合胆酸对能显著或明显降低致热大鼠的体温(P＜0.01或P＜0.05)。
内毒素致热试验结果表明，10～2.5mg/kg熊胆总结合胆酸能明显降低致热家兔的体温(P＜0.05)。
结论：熊胆总结合胆酸有明显的抗菌、抗病毒、抗炎、解热、抗过敏、止血、镇痛等作用。
2、治疗肝胆系统疾病药效学研究
①熊胆总结合胆酸对大鼠胆汁流量的影响
表5显示24～4mg/kg熊胆总结合胆酸有促进大鼠胆汁流量作用(p＜0.01～p0.05)。
表5 熊胆总结合胆酸对大鼠胆汁流量的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 胆汁流量(ml/30min) | ||||
| 给药前30min | 给药后30min | 60min | 90min | 120min | |||
| 对照组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --241684 | 1010101010 | 0.44±0.070.43±0.060.45±0.050.45±0.070.43±0.06 | 0.44±0.060.61**±0.100.58*±0.050.56*±0.070.52*±0.06 | 0.43±0.050.66**±0.120.62**±0.090.57**±0.080.55*±0.07 | 0.46±0.060.62**±0.090.58**±0.070.54*±0.070.52*±0.05 | 0.45±0.070.59**±0.080.56*±0.070.52*±0.050.51±0.09 |
注：各给药组与对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
②对α-萘异氰酸酯致急性黄疸模型大鼠的退黄作用
表6说明24～4mg/kg熊胆总结合胆酸有退黄作用(p＜0.001～p＜0.05)。
表6 熊胆总结合胆酸对α-萘异氰酸酯致急性黄疸模型大鼠的退黄作用
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | T-Bil(mg/dl) | D-Bil(mg/dl) |
| 正常对照组模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | ----241684 | 101010101010 | 0.48±0.055.13±1.44△△△2.61±0.75***2.95±0.86***3.25±0.98**3.86±0.91* | 0.23±0.063.84±0.87△△△2.32±0.63**2.62±0.71**2.82±0.74*2.96±0.75* |
注：①模型组与正常对照组比较△△△P＜0.001 ②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01
③对急性化脓性胆管炎模型的影响
表7说明24～4mg/kg熊胆总结合胆酸对大鼠急性化脓性胆管炎有显著抗炎作用(p＜0.001～P＜0.05)。
表7 对大鼠急性化脓性胆管炎的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | ALT(U/L) | AST(U/L) | 炎细胞面积(μm2) |
| 正常对照组模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | ----241684 | 101010101010 | 42.30±4.67516.30△△△±86.25297.57***±64.28318.23***±75.63346.27*±78.25412.54*±81.63 | 246.2±21.98732.24△△△±122.37395.54***±98.06411.54***±102.34458.35**±110.53512.87*±117.6 | 238.64±61.275695.34△△△±1745.242861.27**±1334.342964.34**±1362.243335.25**±1423.283685.42*±1557.32 |
注：①模型组与正常对照组比较△△△P＜0.001 △△P＜0.01
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
3、治疗心脑血管系统疾病药效学研究
①抗冠状动脉左降枝(LAD)结扎所致心肌缺血模型犬左心室梗塞作用
表8试验结果显示，18～9mg/kg熊胆总结合胆酸减少LAD结扎心肌缺血模型犬左心室梗塞范围作用显著(p＜0.01～p＜0.05)。
表8熊胆总结合胆酸对LAD结扎所致心肌缺血模型犬左心室梗塞范围的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 犬数(只) | 左心室梗塞范围(％) |
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --1894.5 | 6666 | 21.27±0.8318.23±0.33**19.13±0.54*20.06±0.69 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01
②对LAD结扎所致心肌缺血模型犬血清心肌酶谱的影响
表9试验结果显示，18～9mg/kg熊胆总结合胆酸减少LAD结扎心肌缺血模型犬血清LDH和CK作用显著(p＜0.001～P＜0.05)。
表9 熊胆总结合胆酸对LAD结扎心肌缺血模型犬血清心肌酶谱的影响(X±SD)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 犬数(只) | LDH(U/L) | CK(U/L) | ||
| 结扎前 | 结扎后 | 结扎前 | 结扎后 | |||
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --1894.5 | 6666 | 78.4±18.679.2±19.380.2±20.378.9±17.4 | 895.3△△△±86.3689.2**±62.4726.9*±74.6823.7±80.7 | 171.6±41.3170.9±40.5173.6±38.7170.5±35.4 | 1358.4△△△±141.3896.7***±105.71085.3**±115.31142.8*±124.7 |
注：①模型组结扎前与结扎后比较△△△P＜0.001
②各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
③对结扎LAD心肌缺血模型犬标准II导联心电图(EpiECCST位移,mv)的影响
表10试验结果显示，18～9mg/kg熊胆总结合胆酸减少LAD结扎心肌缺血模型犬EpiECCST位移作用显著(p＜0.001～P＜0.05)。
表10熊胆总结合胆酸对结扎LAD心肌缺血模型犬EpiECCST位移的影响(X±SD，n＝6)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 结扎LAD前及给药前ST位移 | 结扎LAD后ST位移增减百分率(％) | |||
| 15min | 30min | 60min | 120min | |||
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --1894.5 | 0.12±0.030.13±0.030.11±0.030.12±0.04 | 41.68±24.52-7.62***±16.54-6.48**±15.34-5.12*±16.58 | 33.54±24.25-4.18***±8.65-3.42**±14.17-2.03*±13.87 | 26.85±17.84-0.98**±8.27-0.54*±9.171.06*±11.65 | 25.21±16.242.15*±10.233.18*±12.344.16*±15.94 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
④对结扎LAD心肌缺血模型犬心肌耗氧指数(MVO2，mlO2/min/100g)的影响
表11试验结果显示，18～4.5mg/kg熊胆总结合胆酸减少LAD结扎心肌缺血模型犬心肌MVO2作用显著(p＜0.01～P＜0.05)。
表11 熊胆总结合胆酸对结扎LAD心肌缺血模型犬MVO2的影响(X±SD，n＝6)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 结扎LAD前及给药前MVO2 | 结扎LAD后MVO2增减百分率(％) | ||||
| 5min | 15min | 30min | 60min | 120min | |||
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --1894.5 | 17.8±2.217.9±2.117.3±2.417.7±2.3 | -4.4±6.1-8.9±4.2-6.8±5.2-5.6±6.4 | -4.3±3.8-14.2**±6.7-11.2*±5.6-11.6±5.4 | -5.1±5.3-16.9**±5.2-13.8*±4.8-11.9*±5.3 | -6..1±5.3-14.1*±5.7-12.7*±4.1-10.4±6.2 | -4.4±5.4-12.3*±4.4-10.7*±3.8-7.8±6.4 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01
⑤熊胆总结合胆酸对实验性犬脑缺血的影响
表12试验结果显示，18～4.5mg/kg熊胆总结合胆酸减少大脑中动脉结扎致脑缺血模型犬脑缺血区重量及缺血区重/全脑重(％)的作用显著(p＜0.001～P＜0.05)。
表12熊胆总结合胆酸对实验性犬脑缺血的影响(x±SD)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 犬数(只) | 全脑重(g) | 脑缺血区重(g) | 缺血区重/全脑重(％) |
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --1894.5 | 6666 | 71.34±2.5371.15±2.4471.28±2.2671.35±2.41 | 15.35±2.0810.03***±1.3211.19**±2.2112.35*±2.22 | 21.52±2.1314.10***±1.8915.70**±2.5717.31*±2.02 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
⑥熊胆总结合胆酸促进实验性脑缺血大鼠神经功能恢复作用
表13试验结果显示，24～8mg/kg熊胆总结合胆酸能极显著促进实验性脑缺血大鼠神经功能(意识和运动能力)恢复(p＜0.01～P＜0.05)。
表13 熊胆总结合胆酸促进实验性脑缺血大鼠神经功能恢复作用(x±SD)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | 鼠数(只) | 大鼠的意识和运动能力评分(分，x±SD) | |||
| 4h | 6h | 12h | 24h | |||
| 模型组熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸熊胆总结合胆酸 | --241684 | 1010101010 | 2.97±0.301.89***±0.711.92**±0.712.05*±0.892.25*±0.91 | 2.06±0.671.02***±0.091.27**±0.481.36*±0.611.68±0.74 | 1.94±0.561.06***±0.161.35*±0.371.48±0.421.67±0.43 | 1.51±0.331.05**±0.071.23±0.421.26±0.431.35±0.42 |
注：各给药组与模型组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
4、安全性研究
(1)一般药理学研究
①神经系统：100～25mg/kg熊胆总结合胆酸对小鼠自发活动有明显抑制作用(P＜0.05)，能明显协同阈剂量戊巴比妥钠催眠的作用(P＜0.05)。
②心血管系统：100～25mg/kg熊胆总结合胆酸对清醒Beagle犬心电图和血压无明显影响(P＞0.05)。
③呼吸系统：100～25mg/kg熊胆总结合胆酸对清醒Beagle犬呼吸无明显影响(P＞0.05)。
结论：熊胆总结合胆酸静脉注射一般药理学试验研究显示，该药100～25mg/kg对清醒Beagle犬神经系统、心血管系统和呼吸系统无明显作用，未引起明显的不良反应。
(2)动物急性毒性试验研究
熊胆总结合胆酸小鼠尾静脉注射给药和腹腔注射给药的最大给药量分别为600mg/kg/24h和750mg/kg24h，最大给药倍数分别为60kg体重成人临床口服日用药量的180倍和225倍。熊胆总结合胆酸大鼠尾静脉注射给药和腹腔注射给药的最大给药量分别为600mg/kg/24h和800mg/kg24h，最大给药倍数分别为60kg体重成人临床口服日用药量的180倍和240倍。
(3)大鼠长期毒性试验
熊胆总结合胆酸按333.33、166.67和83.33mg/kg三个剂量，分别相当于其临床剂量的100、50和25倍，连续对大鼠腹腔注射给药30天及停药14天，观察结果如下：①一般情况及体重：熊胆总结合胆酸连续给药45天未见明显异常(P＞0.05)。②血常规：给药45天及停药14天血常规检查未见剂量依赖性异常毒性。③电解质检查：给药45天及停药14天电解质检查未见剂量依赖性异常毒性。④肝功能：给药45天及停药14天肝功能检查未见剂量依赖性异常毒性。⑤肾功能：给药45天及停药14天肾功能检查未见剂量依赖性异常毒性。⑥其它生化指标：未见异常。⑦系统尸解及脏器指数：给药45天及停药14天系统尸解及脏器指数检查未见剂量依赖性异常毒性。⑧病理组织学检查：未见异常。结论：熊胆总结合胆酸以333.33～83.33mg/kg大剂量长期给药，未见剂量依赖性异常毒性，亦未见延迟性毒性反应，166.67mg/kg及以下为其安全剂量范围。
(4)Beagle犬长期毒性试验结论
熊胆总结合胆酸按166.67、83.33和41.67mg/kg三个剂量，分别相当于其临床剂量的50、25和12.5倍，连续对Beagle犬静脉滴注给药30天及停药14天，结果如下：①生长发育及一般情况观察：给药期间和停药观察，动物的精神行为活动、皮毛、呼吸、循环、食欲，大小便等均未见明显异常。给药及停药期间，对犬体重增长和发育无明显影响，亦无延迟性毒性反应。②尿常规检查：未见异常。③对血象的影响：未见异常。④对电解质的影响：未见异常毒性。⑤对肝肾功能的影响：未见异常毒性。⑥对其它生化指标的影响：未见异常毒性。⑦对心电图的影响：未见异常。⑧活体动物骨髓检查：未见异常。⑨系统尸解和脏器指数：未见异常。⑩病理组织学检查：未见异常。结论：熊胆总结合胆酸较大剂量(166.67～41.67mg/kg)连续静脉滴注给药45天及停药14天，未见明显异常影响，亦无明显延迟性毒性反应，166.67mg/kg及以下剂量属安全剂量范围。
附图说明
图1为本发明熊胆总结合胆酸提取物的标准指纹图谱
图2为本发明熊胆总结合胆酸注射剂的标准指纹图谱
图3为本发明熊胆总结合胆酸参照物的标准指纹图谱
具体实施方式
实施例中熊胆粉药材购自四川省中药材公司鹿场。
总结合胆酸测定方法：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.031mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH值4)为流动相梯度洗脱，洗脱梯度见下表；检测波长为210nm；理论塔板数按牛磺熊去氧胆酸峰计算应不低于4000。
| 时间(min) | 乙腈 | 0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH4) |
| 06455065 | 2525352525 | 7575657575 |
对照品溶液的制备 精密称取以牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含牛磺熊去氧胆酸0.1mg、牛磺鹅去氧胆酸0.1mg、牛磺胆酸0.003mg、牛磺去氧胆酸0.003mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，即得。
测定法 分别精密吸取上述对照品溶液5μl与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
下面给出最佳实施例进一步说明本发明但并不对本发明限制。
实施例1：熊胆总结合胆酸提取物的制备
取熊胆粉1Kg，加5倍量水加热溶解，滤过，得熊胆水溶液，通过装有30升预处理好的D101大孔吸附树脂柱，加水60L洗脱，弃去水溶液，继用70％乙醇70L洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.08～1.12(60℃)的清膏，喷雾干燥，得熊胆总结合酸提取物700g。以高效液相色谱法测定，该熊胆总结合胆酸提取物含熊胆总结合胆酸89.4％，其中含牛磺熊去氧胆酸46.2％、牛磺鹅去氧胆酸40.5％、牛磺胆酸2.2％、牛磺去氧胆酸0.5％。
实施例2：小容量熊胆总结合胆酸注射液的制备
取熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)100g，加注射用水5000ml使溶解，加亚硫酸氢钠10g，枸橼酸钠10g，加热煮沸，加活性炭5g，搅匀，煮沸30分钟，滤过，滤液加注射用水至10000ml，精滤，分装于10ml安培瓶中，制成1000支，熔封，灭菌，检查澄明度，包装，即得。
实施例3：大容量熊胆总结合胆酸氯化钠注射液的制备
取熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)100g，加注射用水10L使溶解，备用；取注射用氯化钠760g，亚硫酸氢钠150g，枸橼酸钠150g，加注射用水10L使溶解，与上述药液合并，加活性炭20g，搅匀，煮沸30分钟，滤过，滤液加注射用水至100L，精滤，分装于100ml输液瓶中，制成1000瓶，轧盖，灭菌，检查澄明度，包装，即得。
实施例4：大容量熊胆总结合胆酸葡萄糖注射液的制备
取熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)100g，加注射用水10L使溶解，备用；取注射用葡萄糖5Kg，亚硫酸氢钠150g，枸橼酸钠150g，加注射用水10L使溶解，与上述药液合并，加活性炭20g，搅匀，煮沸30分钟，滤过，滤液加注射用水至100L，精滤，分装于100ml输液瓶中，制成1000瓶，轧盖，灭菌，检查澄明度，包装，即得。
实施例5：熊胆总结合胆酸冻干粉针的制备
取熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)100g，取甘露醇100g，加0.02mol/L磷酸二氢钠注射用水溶液2000ml使溶解，加活性炭2g，搅匀，煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液加注射用水至2000ml，精滤，分装成1000瓶，冷冻干燥，即得。
参考文献
1.石丽霞等.熊胆注射液的研制与临床应用.中药材.1998，21(11)：592
2.石丽霞等.熊胆注射液治疗黄疸型肝炎280例疗效观察.新中医.2001，33(4)：23
3.成冬生等.熊胆注射液治疗慢性肝病111例.陕西中医.1992，13(8)：349
4.张静.熊胆注射液穴位注射治疗高脂血症临床疗效观察.针灸临床杂志.2001，17(3)：14
5.王天章.熊胆注射液.发明专利(申请号99100180.X；公开号CN1231182A)
6.赵凤泽等.引流熊胆冻干粉针剂的制备方法.发明专利(专利号98101235.3；授权公开号CN1057909C)
7.金正男等.引流熊胆针剂，口服液，水溶液.中草药.1994，25(1)：
8.金正男等.熊胆注射液的降血脂作用.中草药.1997，28(1)：216
9.张红英等.熊胆注射液静脉注射对家兔血小板粘附功能和实验性血栓形成的影响.中国中医药科技.1998，5(1)：39
10.金京春等.熊胆冻干粉针剂对失血性休克大鼠脂质过氧化的影响.中国中医药科技.2002，9(5)：F003
11.丁涛等.精制熊胆粉活血化瘀作用研究.中国天然药物.2005，3(3)：184
12.沈丽娟等.注射用熊胆粉及其原料熊胆粉指纹图谱研究.中国药业.2004，13(9)：23
Claims (8)
1、一种熊胆总结合胆酸注射剂组合物，其特征在于该注射剂组合物是由适量的熊胆总结合胆酸提取物、辅料和注射用水组成，每剂量单位处方中含熊胆总结合胆酸提取物(以总结合胆酸计)20～1000mg。
2、根据权利要求1所述的熊胆总结合胆酸注射剂组合物，其特征在于：所述熊胆总结合胆酸提取物是指以引流熊胆粉为原料，采用大孔吸附树脂提取纯化有效部位总结合胆酸制得的提取物，其指纹图谱与熊胆总结合胆酸提取物标准指纹图谱相同，含有重量百分比80％以上的总结合胆酸，其中主要为牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺胆酸及牛磺去氧胆酸4种有效成分；所述辅料为药学上可接受的赋形剂。
3、根据权利要求1所述的熊胆总结合胆酸注射剂组合物，其特征在于所述的注射剂包括大容量葡萄糖输液、大容量氯化钠输液、小水针和冻干粉针。
4、如权利要求1、2、3所述的熊胆总结合胆酸注射剂组合物的制备方法，其特征在于：包含熊胆总结合胆酸提取物的制备方法及注射剂的制备方法。
5、根据权利要求4所述的熊胆总结合胆酸提取物的制备方法，其特征在于是以引流熊胆粉为原料，按以下方法制备：
a.取熊胆粉1重量份，加水3-10重量份，加热溶解，滤过，得熊胆水溶液；
b.熊胆水溶液经聚乙烯型大孔树脂吸附并用水洗除去杂质；
c.吸附于聚乙烯型大孔树脂上的有效组分用20～90％的含水乙醇洗脱，含水乙醇的用量为熊胆粉原生药重量的10-100倍；
d.洗脱液回收乙醇并浓缩，干燥，即得熊胆总结合胆酸提取物。
6、根据权利要求4所述的注射剂的制备方法，其特征在于是以熊胆总结合胆酸提取物为原料，按以下方法制备：取上述熊胆总结合胆酸提取物，加注射用水使溶解，加入药用辅料，搅拌溶解，调节pH，加活性炭适量，搅匀，煮沸，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂，包括大容量葡萄糖输液、大容量氯化钠输液、小水针和冻干粉针。
7、根据权利要求6所述的注射剂的制备方法，其特征在于所述的药用辅料包含注射剂用抗氧剂、稀释剂、渗透压调节剂、赋形剂等中的一种或几种。
8、如权利要求1、2、3、4、5、6、7所述的熊胆总结合胆酸注射剂组合物的用途，其特征在于所说的用途是在抗感染，以及治疗肝胆系统疾病和心脑血管疾病方面的用途。
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|---|---|---|---|---|
| CN101785789B (zh) * | 2009-01-22 | 2013-03-20 | 张雪峰 | 制备动物胆粉的方法 |
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| CN115337312A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-15 | 金熊药业(珠海横琴)有限公司 | 胆酸复合物及其制备方法和应用 |
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101785789B (zh) * | 2009-01-22 | 2013-03-20 | 张雪峰 | 制备动物胆粉的方法 |
| CN101890048B (zh) * | 2009-05-21 | 2013-12-04 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种熊胆粉总胆酸提取物及其注射剂的制备方法和用途 |
| CN111012754A (zh) * | 2020-01-07 | 2020-04-17 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 熊胆滴丸在制备抗病毒药物中的应用 |
| CN111635447A (zh) * | 2020-06-22 | 2020-09-08 | 百顺药业有限公司 | 一种从牛胆汁中提取高纯度结合胆汁酸的方法 |
| CN111635447B (zh) * | 2020-06-22 | 2022-07-01 | 百顺药业有限公司 | 一种从牛胆汁中提取高纯度结合胆汁酸的方法 |
| CN115337312A (zh) * | 2022-08-19 | 2022-11-15 | 金熊药业(珠海横琴)有限公司 | 胆酸复合物及其制备方法和应用 |
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