CN1557403A - 一种治疗心脑血管疾病的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物，它是以黄芪、三七为原料经提取、纯化后，加入适量药用辅料制备而成的中药注射剂，包括注射液、大输液和冻干粉针剂。本发明还公开了该药物的制备方法。本发明药物稳定性好、有效期长，可用于肌肉注射、静脉注射或静脉滴注。经药效学试验表明：本发明药物对缺血再灌注所致SD大鼠脑血缺血和心肌损伤有均有保护作用。可明显提高小鼠耐脑缺氧能力，改善脑缺血大鼠神经症状和脑水肿，降低病理改变；可明显抑制缺血再灌注所致大鼠心肌损伤时LDH、CK溢出，降低血清LDH、CK活性，缩小心肌梗塞范围，用于治疗心脑血管疾病，起效迅速，疗效确切，无毒副作用。

Description

一种治疗心脑血管疾病的药物及其制备方法

所属技术领域

本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的药物，具体涉及一种以中药黄芪和三七为原料制备的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。

背景技术

心脑血管病疾病是危害人民生命健康最严重的疾病之一，其发病率、致残率和病死率均占各类疾病之首。由于环境的污染、饮食习惯的改变、生活节奏的加快，在我国心脑血管病发病呈明显上升趋势，而且发病人群逐渐年轻化。目前临床上使用的治疗心脑血管疾病中药制剂以口服制剂为主，口服制剂虽然有一定的疗效，但由于通过消化系统吸收，起效缓慢，生物利用度低，疗程长，尚不能满足临床用药的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以中药为原料制成的治疗心脑血管疾病的药物，其有效成分明确，质量可控，使用本发明的药物治疗心脑血管疾病起效迅速、疗效确切，无副作用。

本发明的另一目的还在于提供这种药物的制备方法，该制备方法以充分提取各味药中的有效成分，并采用先进的药剂剂型。

本发明提供的一种治疗心脑血管疾病的药物，是由下述重量配比的中药原料制成的药剂：

黄芪9～1、三七1～9。

上述用于治疗心脑血管疾病的药物，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如注射液、大输液、冻干粉针剂、口服液、滴丸、胶囊、片剂、缓释片、分散片、软胶囊，颗粒剂、鼻腔用喷雾剂。

将上述重量配比的原料制成本发明药物的方法，包括以下步骤：

(1)取三七，粉碎，每次用3～15倍量30～80％乙醇加热回流提取，共2～5次，每次0.5～4小时，合并提取液，减压回收尽乙醇后，浓缩液加0.5～3倍量水，搅匀，冷藏4～48小时，高速离心，上清液合并、备用；离心所得沉淀用水充分洗涤1～3次，合并洗液，滤过，滤液与上述备用上清液合并后，上大孔吸附树脂层析柱，依次用去离子水和30～70％的乙醇洗脱，收集30～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.03～1.20，干燥，得三七提取物；

(2)取黄芪，每次加5～15倍量水煎煮，共1～4次，每次0.5～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.35，加乙醇使含醇量达70～80％，冷藏10～50小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.28，加0.5～3倍量水，搅匀，冷藏4～48小时，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用50～75％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.05～1.38，干燥，得黄芪提取物；

(3)取上述步骤(2)的沉淀，加2～6倍量的水溶解，以0.5～1％的活性炭脱色，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000～6000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖；

(4)取三七提取物、黄芪提取物、总多糖，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH5.5～8，静置2～24小时，滤过，滤液按常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液和冻干粉针剂。

本发明所述的药用辅料为制备注射剂所用的常用药用辅料，如甘露醇、山梨醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖、吐温80、精氨酸、环糊精及其衍生物、丙二醇、甘油等其中的一种或几种组合。

本发明所使用的原料——黄芪和三七，要求分别符合《中国药典》2000年版一部黄芪和三七项下有关的各项规定。

本发明中的三七提取物收率为7～15％，用比色法测得其中三七总皂苷含量高于55％；黄芪提取物得率1～6％，用比色法测得黄芪总皂苷含量高于50％；总多糖得率0.8～4％，酚-硫酸法测得黄芪总多糖含量高于50％。

本发明的药物具有以下有益效果：

1、本发明由黄芪、三七两味药物制成，其中黄芪中含有黄芪皂苷、多糖类、黄酮类、胆碱、甜菜碱等，药理研究表明黄芪皂苷和黄芪多糖为黄芪中最重要生理活性成分；三七含皂苷类、黄酮、多糖、氨基酸、甾醇、挥发油等化学成分，药理研究表明三七总皂苷为三七中最重要生理活性成分。因此本发明的制备方法根据各中药所含主要有效成分的性质和药理作用，选用经济易得、对环境无污染的水和乙醇作为提取溶剂，并以大孔吸附树脂和超滤法进行纯化处理提取液，以充分提取精制各味药中的有效成分，因而本发明的药物具有生产成本低、有效成份明确、质量可控的特点。

2、本发明剂型为注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂，可直接用于静脉注射，因而起效迅速、生物利用度高、效果确切可靠。

3、本发明药物经稳定性试验研究表明，有效期长达2.6年，澄明度、溶血性、色泽、pH值、无菌、热源、刺激性等指标均符合《中国药典》有关注射剂的规定。

4、本发明冻干粉针剂除具有注射液特点外，尚有贮存方便、便于携带和使用的优点。

5、经临床初步试验表明，本发明药物具有益气活血，化瘀通络、增强机体免疫功能，对冠心病、心肌梗塞、心绞痛、脑梗塞、脑溢血后遗症等病有显著疗效，明显优于血塞通，尚未发现明显毒副作用。

下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。

实施例1冻干粉针剂的制备

(1)取三七1000g，粉碎，每次用10倍量65％乙醇加热回流提取，共3次，每次2小时，合并提取液，减压回收尽乙醇后，浓缩液加1倍量水，搅匀，冷藏24小时，高速离心，上清液合并、备用；离心所得沉淀用水充分洗涤2次，合并洗液，滤过，滤液与上述备用上清液合并后，上AB-8型大孔吸附树脂层析柱，依次用去离子水和60％的乙醇洗脱，收集60％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.20(60℃)，减压干燥，得三七提取物。

(2)取黄芪2000g，每次加10倍量水煎煮，共3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30(60℃)，加乙醇使含醇量达70％，冷藏48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.13(60℃)，加1倍量水，搅匀，冷藏28小时，过滤，滤液上D101型大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.28(60℃)，真空干燥，得黄芪提取物。

(3)取上述(2)项下的沉淀，加4倍量的水溶解，以0.8％的活性炭脱色，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为6000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。

(4)取三七提取物、黄芪提取物、总多糖，加入注射用水800ml和甘露醇100g、聚维酮K30 5g，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH6.5～7.5，冷藏静置24小时，滤过，滤液加注射用水稀释至1000ml，分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液分装于已灭菌的西林瓶中，冷冻干燥，压塞、压盖，即制得本发明冻干粉针剂。

实施例2注射液的制备

(1)取三七900g，粉碎，每次用8倍量70％乙醇加热回流提取，共4次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收尽乙醇后，浓缩液加1.2倍量水，搅匀，冷藏28小时，高速离心，上清液合并、备用；离心所得沉淀用水充分洗涤3次，合并洗液，滤过，滤液与上述备用上清液合并后，上AB-8型大孔吸附树脂层析柱，依次用去离子水和70％的乙醇洗脱，收集70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.2(60℃)，减压干燥，得三七提取物。

(2)取黄芪2100g，每次加12倍量水煎煮，共3次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.27(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏50小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.18(60℃)，加1倍量水，搅匀，冷藏48小时，过滤，滤液上D101型大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用75％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.30(60℃)，减压干燥，得黄芪提取物。

(3)取上述(2)项下的沉淀，加3倍量的水溶解，以1％的活性炭脱色，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。

(4)取三七提取物、黄芪提取物、总多糖，加入注射用水900m搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6.5～7.5，冷藏静置24小时，滤过，滤液加注射用水稀释至1000ml，分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于安瓿中，灭菌、质检，即制得本发明注射液。

实施例3大输液的制备

(1)取黄芪4000g、三七700g，同实施例1项下(1)(2)(3)分别制备三七提取物、黄芪提取物、总多糖。

(2)取上述人参提取物、黄芪提取物、总多糖，加入注射用水6000ml和葡萄糖500g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6.5～7.5，冷藏静置45小时，滤过，滤液加注射用水稀释至10000ml，再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于100ml/瓶的输液瓶中，灭菌、质检，即制得本发明大输液剂。

主要药效试验

本发明(以下简称HBS)具有益气活血、祛瘀，通脉活络的功效，用于治疗心脑血管疾病，如冠心病心绞痛，急性脑梗死，中风后遗症等。以下通过主要药效学试验对本发明进一步说明：

1.HBS冻干粉小鼠急性脑缺氧的影响(两批实验)

昆明种小鼠80只，体重18-22g，随机分成8组，每组10只，静脉用药组分别ivHBS冻干粉0.9g/kg，1.8g/kg，3.6g/kg注射给药组，阳性对照组iv注射用血塞通15mg/kg，生理盐水组iv等容量的生理盐水。

     表1HBS冻干粉对小鼠急性脑缺氧的影响(x±s，n＝10)

                     剂量

        组别                       张口次数              喘息连续时间(s)

                  (g生药/kg)

    生理盐水          -            9.6±2.51             13.3±1.49

注射用血塞通       15mg/kg         11.2±1.28            15.0±1.80*

   HBS冻干粉         0.9           10.5±1.90            15.0±1.31*

                     1.8           11.7±1.95            15.9±1.37**

                     3.6           12.1±2.17            17.8±1.26**

与生理盐水组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结果表明，HBS冻干粉各剂量组与注射用血塞通静脉给药后均能明显延长小鼠断头张口次数及喘息时间，HBS冻干粉中、高剂量组效果优于注射用血塞通。表明HBS冻干粉静脉注射后能提高小鼠脑耐急性缺氧的能力，改善脑能量代谢。

2.对大鼠双侧颈总动脉结扎致脑缺血再灌注损伤的保护作用

方法：将大鼠用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉(ip)，颈正中切口，分离双侧颈总动脉，用大鼠动脉夹夹闭颈总动脉2h，使大鼠全脑不完全缺血，缺血30min后静脉注射(iv)给药或iv生理盐水。缺血2h后松开动脉夹，大鼠脑血液得以再灌注，再灌注后2、8小时再给两次药。再灌注24h后观察大鼠以下有关指标。

血管通透性的测定

大鼠经脑缺血2h再灌注24h后iv 2％伊文氏蓝(EB，Sigma产品)50mg/kg体重，1小时后心脏取血，置4℃冰箱制备血清；然后作心脏生理盐水灌注，至灌流液清亮。取脑称重，按1ml/1g用PBS液匀浆，300000×g，4℃离心30分钟，取上清液备用，用UV-265FM紫外分光光度计(日本岛津公司)测定脑组织提取液中的EB含量(μg/g脑湿重)，实验条件：测定波长620nm。用脑和血清中EB含量的比值反映血管通透性的变化。

   表2HBS冻干粉对脑梗塞大鼠血管通透性的影响(x±s，n＝10)

    组别       剂量(g/kg)      EB含量(μg/ml)        P值

  假手术组         -             7.21±1.30        ＜0.01

 模型对照组        -             12.9±1.43           -

注射用血塞通    10mg/kg          10.3±1.39        ＜0.01

  HBS冻干粉       0.6            11.2±1.25        ＜0.05

                  1.2            10.3±0.78        ＜0.01

                  2.4            9.5±0.92         ＜0.01

从表2可以看出，模型组EB含量显著高于假手术组；大剂量组、中剂量组和小剂量组显著低于模型对照组，而与假手术组接近。

脑含水量

大鼠脑缺血2h再灌注24h后快速断头取大脑。取全脑称湿重，置120℃烤箱内烘干至恒重，按以下公式计算脑组织含水量，脑组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％。

         表3HBS冻干粉对脑梗塞大鼠脑含水量的影响(x±s，n＝20)

组别      剂量                       脑含水量                 脑指数

         (g/kg)     湿重(g)       干重(mg)   含水量(％)

假手术              1.54±0.13    354±39.5  77.1±0.84    0.55±0.019

模型        0       1.91±0.12^** 346±30.2  81.8±0.86^** 0.70±0.015^**

血塞通   10mg/kg    1.78±0.09^#  350±39.0  80.55±1.88^# 0.63±0.028^#

HBS冻干粉  2.4      1.75±0.12^## 376±38.6  78.5±0.92^## 0.59±0.005^##

           1.2      1.73±0.12^## 351±32.8  79.7±0.67^## 0.60±0.009^##

           0.6      1.75±0.08^## 349±24.7  80.1±0.82^## 0.64±0.012^#

与假手术组比较，^**P＜0.01；与模型组比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01。

从表3可以看出，模型组脑含水量显著高于假手术组；大剂量组和中剂量组则显著低于模型对照组，而与假手术组接近，并且HBS组明显优于血塞通组。

病理检查

将脑片置10％福尔马林中固定，经脱水、包埋、切片、HE染色等步骤制备组织切片。并用电子显微镜进行超微结构的观察。

假手术组：神经元及脑实质细胞结构基本正常，细胞核未见肿胀，核仁清楚，虎斑清晰可见，细胞周围间隙略扩大，毛细血管内有轻微充血，呈轻度变性水肿改变。

模型(生理盐水治疗)组：脑膜血管间隙增大。神经元及脑实质细胞周围间隙明显扩大，细胞肿胀明显，核仁不清楚，虎斑消失，偶见细胞坏死灶。脑实质细胞内有充血，毛细血管周围间隙增大，局部有些胶质小细胞集结成团。

注射用血塞通(10mg/kg)组：神经元及细胞核轻度肿胀，核仁不清楚，神经元及脑实质细胞周围间隙增大，毛细血管周围有少量渗出性出血灶。

HBS冻干粉(0.6g/kg)组：神经元及脑实质细胞周围间隙增大。细胞肿胀较明显，核仁不清楚，偶见细胞坏死灶，脑实质细胞内有轻度充血，毛细血管周围间隙增大。

HBS冻干粉(1.2g/kg)组：神经元脑实质细胞及毛细血管周围间隙略增宽。神经元细胞核轻度肿胀，核仁可见，可见较多胶质细胞增生。

HBS冻干粉(2.4g/kg)组：神经元脑实质细胞及毛细血管周围间隙略增宽。神经元细胞核轻度肿胀，核仁清楚，可见较多胶质细胞增生现象。

3、对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

动物手术和冠状动脉结扎法：雄性SD大鼠，戊巴比妥钠(45mg/kg腹腔注射)麻醉，仰卧位固定。以心电图机记录II导联心电图监测心脏情况。颈前正中切开，行气管插管，接人工呼吸机，频率为55次/分，潮气量20ml/kg。分离一侧股静脉供给药用。在胸左侧第五肋间处切开胸壁并沿胸骨左缘2mm处切断第四和第五肋骨，剪开心包膜，暴露心脏，于左冠状动脉前降支下穿1根0/3号缝合线，稳定10min(稳定后心电图不正常者弃去)，将两个线头穿过一小段细硅胶管，在另一小段细硅胶管上打结作为缺血结扎(无ST段及T波改变者淘汰)，缺血10min后从股静脉缓慢注射给药，40min后剪断结扎线，使前降支再灌注30min。

乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的测定：再灌注结束后，腹主动脉取血，紫外分光法测定血清LDH、CK活性。

心肌梗塞范围测定法：在冠脉结扎线下，平行于冠状沟，等厚地将心室肌横切成5片，将5片心肌置于硝基四氮唑蓝(N-脉复通T)染液中，振摇染色15min后取出，正常心肌染为暗蓝色，梗塞区心肌则不着色为浅黄色。在解剖镜下分离梗塞区，分别称重，以梗塞区心肌重量占心肌重量的百分比(％)作为衡量梗塞范围的指标。

观察指标及观察时间：观察大鼠心肌梗塞范围和血清LDH、CK的检测，观察时间为给药后60分钟。

             表4HBS对缺血再灌注大鼠

血清LDH、CK活性、心肌梗塞程度的影响( x±s，n＝10)

      组别     剂量    CK(IU/L)          LDH(IU/L)         梗塞区比例(％)

假手术组      1ml/kg   510.8±80.9       655.5±78.3       --

模型对照组    1ml/kg   865.4±189.1^ΔΔ   989.9±184.6^ΔΔ    33.73±3.83^ΔΔ

注射用血塞通  10mg/kg  709.1±100.4^*    806.0±92.0^*     29.98±4.16^*

HBS冻干粉     0.6g/kg  710.7±106.8^*    857.7±124.0      29.87±5.33^*

              1.2g/kg  630.6±108.6^**   809.4±128.4^*    24.80±3.32^**

              2.4g/kg  559.4±72.9^**    744.0±149.2^**   23.71±3.66^**

^*P＜0.05，^**P＜0.01与生理盐水组比较；

^ΔΔP＜0.01与假手术组比较。

心肌缺血再灌注后，血清LDH、CK活性明显增加，心肌梗塞区重量明显增加，与假手术对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01)；HBS低、中、高剂量组血清CK活性、心肌梗塞区重量明显低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)；HBS中、高剂量组血清LDH显著低于模型组(P＜0.05)，注射用血塞通组与HBS给药组相似，血清LDH、CK活性、心肌梗塞区重量也明显降低(P＜0.05)，但中、高剂量组HBS效果优于血塞通10mg/kg组。

结论：HBS静脉注射对缺血再灌注所致SD大鼠脑血缺血和心肌损伤有均有保护作用。可明显提高小鼠耐脑缺氧能力，改善脑缺血大鼠神经症状和脑水肿，降低病理改变；可明显抑制缺血再灌注所致大鼠心肌损伤时LDH、CK溢出，降低血清LDH、CK活性，缩小心肌梗塞范围，并有一定的量效关系。中、高剂量组的HBS药效明显优于血塞通组。

Claims (4)

1、一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于是由下述重量配比的原料制成的药剂：

黄芪9～1、三七1～9。

2、根据权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。

3、根据权利要求2所述的治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于所述的药剂是注射剂。

4、权利要求3所述的治疗心脑血管疾病的药物的制备方法，包括以下步骤：

(1)取三七，粉碎，每次用3～15倍量30～80％乙醇加热回流提取，共2～5次，每次0.5～4小时，合并提取液，减压回收尽乙醇后，浓缩液加0.5～3倍量水，搅匀，冷藏4～48小时，高速离心，上清液合并、备用；离心所得沉淀用水充分洗涤1～3次，合并洗液，滤过，滤液与上述备用上清液合并后，上大孔吸附树脂层析柱，依次用去离子水和30～70％的乙醇洗脱，收集30～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.03～1.20，干燥，得三七提取物；

(2)取黄芪，每次加5～15倍量水煎煮，共1～4次，每次0.5～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.35，加乙醇使含醇量达70～80％，冷藏10～50小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.28，加0.5～3倍量水，搅匀，冷藏4～48小时，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用50～75％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.05～1.38，干燥，得黄芪提取物；

(3)取上述步骤(2)的沉淀，加2～6倍量的水溶解，以0.5～1％的活性炭脱色，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000～6000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖；

(4)取三七提取物、黄芪提取物、总多糖，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH5.5～8，静置2～24小时，滤过，滤液按常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液和冻干粉针剂。