CN1583095A - 参银注射剂及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种治疗脑中风及中风后遗症、胸痹心痛证的新药－参银注射剂及制备方法；该药由人参皂苷1.2～3.6毫克、人参多糖25～75毫克、银杏叶提取物40～120毫克，适量辅剂和注射用水组成；可制成大输液、小水针及冻干粉针剂；制备工艺有人参皂苷、人参多糖、银杏叶提取物及注射剂制备工艺；红参经乙醇回流、乙醚萃取、仲丁醇萃取、醇沉纯化、浓缩获人参皀苷；红参药渣经水提醇沉、聚酰胺吸附层析柱洗脱、洗脱液醇沉、沉淀干燥获人参多糖；银杏叶粉经乙醇回流，石油醚萃取，乙酸乙脂和仲丁醇萃取，聚酰胺吸附、乙醇洗脱，浓缩，干燥，得银杏叶提取物；优点是药物吸收快、生物利用度高、血药浓度高、药效作用快、无污染和用药省。

Description

参银注射剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗缺血性心脑血管疾病的药物，特别是涉及一种由红参或人参、银杏叶提取物制成，具有改善脑缺血和心肌缺血、改善心脏血流动力学、降低心肌耗氧量、改善微循环、抑制动脉血栓形成功能，用于医治脑缺血性中风及中风后遗症、胸痹心痛证的静脉注射用新药--参银注射剂及其制备方法。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病，简称冠心病，是工业化国家目前最重要的慢性病，以美国为例每年死于冠心病的人数达60万，用于治疗冠心病的费用约50亿美元。近20年来，许多发展中国家包括我国在内，冠心病发病率也不断上升。脑血管病又称脑卒中或脑中风，是多数工业化国家最重要的脑血管疾病之一，其死亡率占第二位或第三位。在中国、日本以及一些以东方民族为主的国家中，脑中风对人群的危害程度较冠心病严重。在脑血管疾病存活者中，约有四分之三的患者有不同程度的劳动力丧失，重度致残者占40％。统计资料显示，这种心脑血管疾病的发病率和死亡率随年龄的增长而增高，我国60岁以上的人口发病率和死亡率更高，社会对于治疗心脑血管疾病药物的需求更加迫切。

然而，上市用于治疗心脑血管疾病的药物，西药制剂虽然有效但是毒副作用较大，不良反应较多，中药制剂效果也不够理想。二十世纪60年代，德国Willamar Schwabe首次从银杏叶中获得银杏提取物，并用于治疗心脑血管病和神经系统疾病，具有显著的疗效且无明显的毒副作用。继后许多国家相继对银杏叶的化学成份和药理作用进行了深入研究，已开发出药品、保健品、化妆品等多达上百种。据1996年报导，银杏提取物成为欧洲最畅销的保健品，在美国也是最受欢迎的五种保健品之一，银杏制剂年销售额已突破10亿美元。中国是最大的银杏叶生产国和出口国，银杏资源占世界银杏资源的70％以上，但在银杏叶的研究开发利用上还落后于一些发达国家。90年代后，国内也掀起了研究开发银杏药物的热潮，由于生产工艺、质量控制技术不同，造成产品质量良莠不齐。由于银杏叶提取物的化学成份复杂，提取工艺难度大，无有效的工艺标准，将银杏提取物用作药物使用的只有德国、法国和中国。目前，国内外均有银杏叶提取物片剂、胶囊剂、口服液、注射液上市，用于治疗心脑血管疾病。国外还有商品名为Gincosan的含银杏叶提取物60mg与红参提取物100mg制成的胶囊剂上市，国内有银杏达莫注射液，其每个剂量单位含银杏叶提取物40mg和双嘧达莫4mg。这些由单一银杏叶提取物或银杏叶提取物与化学药剂制成的药剂，经本申请人药效学试验证明：其活性低于红参与银杏叶提取物的复方药物活性。然而，国外的Gincosan银杏红参提取物口服胶囊，却具有生物利用度低、血药浓度低、药效发挥作用慢、药物浪费多等缺点，只适用于轻度和慢性病人，不适宜用于重度和急性发作病人。

发明内容

本发明的目的在于：针对目前治疗心脑血管疾病药物存在的问题，为医药界提供一种生物利用度高、血药浓度高、药效发挥作用快、用药省、具有更强活性、疗效更好的复方注射剂--参银注射剂，其中包括参银小容量注射液、参银大容量氯化钠注射、参银大容量葡萄糖注射液及注射用参银冻干粉针剂。

本发明的另一个目的是提供这种参银注射剂的制备方法。

本发明的目的是通过如下配方和制备工艺制取的药物来实现的：

一种参银注射剂组合物，由红参或人参提取物、银杏叶提取物，适量的添加辅剂和注射用水组成，其特征在于：所用红参或人参提取物为人参皂苷和人参多糖，所用银杏叶提取物为分离去除了银杏酚酸类物质的银杏叶提取物。

附加技术特征是：

a、小容量注射液：含人参皂苷1.2～3.6mg，人参多糖25～75mg，银杏叶提取物40～120mg，组合物总量8％～16％的乙醇或丙二醇或甘油或复合助溶剂，加至5～20ml的注射用水，其中复合助溶剂为重量比为4∶6的甘油与乙醇或丙二醇与乙醇。

b、大容量氯化钠注射液：含人参皂苷1.2～3.6mg，人参多糖25～75mg，银杏叶提取物40～120mg，组合物总重量0.9％的氯化钠，加至50～200ml的注射用水。

c、大容量葡萄糖注射液：含人参皂苷1.2～3.6mg，人参多糖25～75mg，银杏叶提取物40～120mg组合物总重量5％的葡萄糖，加至50～200ml的注射用水。

d、0.2g～0.6g冻干粉针剂：含人参皂苷0.6～1.8mg，人参多糖12.5～37.5mg，银杏叶提取物20～60mg，甘露醇或山梨醇或木糖醇膨松剂140～280mg，加注射用水2～4ml，冷冻干燥制成。

本发明参银注射剂，由红参或人参提取物的提取工艺、银杏叶提取物的提取工艺及注射剂制备工艺组成；其中红参或人参提取物的提取工艺，为人参皂苷的提取和人参多糖的提取，其特征是：人参皂苷提取包括以下步骤：红参或人参原料药依次经过乙醇回流提取、乙醚萃取、仲丁醇或正丁醇萃取、乙醇沉淀纯化、滤液浓缩至清膏即得人参皂苷；人参多糖的提取包括以下步骤：经过乙醇回流提取后的红参或人参药渣，经水提醇沉、聚酰胺吸附及层析柱洗脱分离纯化、洗脱液醇沉、沉淀经真空干燥即得人参多糖；银杏叶提取物的提取工艺依序包括以下步骤：银杏叶粗粉的乙醇回流提取，滤液浓缩，石油醚萃取，加热挥去残存石油醚，取水相先后用乙酸乙脂和仲丁醇萃取，然后用聚酰胺吸附和不同浓度乙醇的层析柱洗脱，除去银杏酚类等脂溶性有害物质，再将洗脱液回收乙醇后浓缩至稠膏、经真空干燥即得银杏叶提取物。

注射剂制备工艺，包括供注射用人参皂苷滤液制备、人参多糖滤液制备、银杏叶提取物滤液制备各工序，人参多糖浓配液与人参皀苷滤液和银杏叶提取物滤液三液合并加适量辅料，加水至全量、精滤、灌封、灭菌、冷却、灯检、贴标、包装、成品检验诸工序。

本发明的优点在于：作为注射剂，比其它剂型更具有药物吸收快、生物利用度高、血药浓度高、药效发挥作用快、用于中重度病例能尽快缓解症状、静脉输注可避免二次污染和具有用药省的突出优点，由红参或人参提物中的人参皂苷和人参多糖与银杏叶提取物组方，药效学证明具有更强的活性，治疗心脑血管疾病疗效更好。

本发明药物治疗心脑血管疾病的理伦依据如下：

中医理论认为心脑血管疾病，包括脑缺血性中风、中风后遗症及胸痹心痛证等，其脑缺血性疾病主要是由气血逆乱，络脉溢破，血溢于脉外，脑髓受伤，瘀血，痰浊，水饮积聚，致脑脉闭塞，元神被困，窍机闭塞，五脏失统，六腑气闭，肢体失和所致；胸痹心痛证主要由气虚血瘀，脏气不足，气化失调，津血营运不畅，以致津液凝聚成痰，血液涩滞成瘀，痰瘀闭阻，心脉不通所致。中医学认为“气为血帅，气虚血亏，脉道不充，气滞血瘀”。中医治疗上述心脑血管疾病，以使用补气温阳或补气滋阴药与活血化瘀通络药组方。红参为补虚药，具有大补元气，复脉固脱，益气攝血功效。用于体虚欲脱，肢冷脉微，气不攝血，久病虚赢，惊悸失眠，肾精不足，心力衰竭，心原性休克等症。银杏叶提取物为银杏叶中的黄酮类和萜类内酯成份，具有活血化瘀，通脉舒络之功效，用于脑缺血性中风、中风后遗症，胸痹心痛(即冠心病心绞痛)。两药组方具有补气活血，化瘀通络之功效，用于缺血性脑中风、中风后遗症以及冠心病心绞痛，符合中医理论，是合理可行的。

根据现代医药学研究证明：红参或人参含有人参皀苷类、人参多糖及其它多种氨基酸等有效成份，具有健身、强壮、提高机体免疫功能，抗衰老、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗炎、抗过氧化、增强心功能，改善心脑血流，改善心肌缺血，镇静、催眠、兴奋中枢等多种作用。

银杏叶提取物，内含黄酮类和萜类内酯成份。现代药理研究表明，银杏叶提取物具有改善脑微循环、增加脑血流量、保护脑组织抗氧化酶活性、抑制脂质过氧化、减轻或清除自由基对脑组织的损害、对缺血再灌注脑组织有保护作用、增加心肌血流量减少心肌耗氧量、对缺血性心肌有保护作用；具有拮抗PAF作用、抗血小板聚集、降低血液粘度、改善血液流变学等作用。

两药组方联用，可相互弥补药理作用和相互增强其药理作用，使治疗心脑血管疾病更加有效。

根据本申请人所作药理毒理研究结果表明：本发明的参银注射剂，有改善脑缺血和心肌缺血的作用，改善心脏血流动力学，降低心肌耗氧量，改善微循环和血液流变性，改善学习记忆能力，抑制动脉血栓形成，延长凝血酶原时间，抗血小板聚集，抗应激和改善气虚症状等作用。

经申请人拆方研究结果表明，组成复方制剂可达到补气活血，通脉舒络，相互增强其药理作用，较单味药的药效更强，主要表现为：

a、犬局灶性脑缺血试验拆方研究表明，人参皀苷与人参多糖(以下简称红参组)作用不明显；而银杏组作用明显，两药合用作用增强。

b、抗犬心肌缺血试验表明，红参组可显著降低模型动物LDH(P＜0.01)，银杏组可分别显著和明显降低模型动物的LDH(P＜0.01)和CPK(P＜0.05)，两药合用对LAD结扎的心肌梗死有更好的保护作用，明显缓解心肌缺血所致ST段抬高，用药后5～10分钟即可明显降低动物心率(P＜0.05)，更加显著降低模型动物的MV02(P＜0.01)。

c、改善小鼠微循环试验拆方研究表明，红参组和银杏组均有明显改善微循环作用，两药合用后作用有增强趋势。

d、增加家兔肺动脉血栓溶解试验拆方研究表明，红参组和银杏组均有显著促进肺栓溶解的作用，但后者显著优于前者；两药合用作用增强。

e、家兔纤维蛋白溶解活性测定的拆方研究表明，红参组和银杏组均明显和极显著加速溶解血浆中纤维蛋白，缩短纤维蛋白溶解时间，但后者显著优于前者；两药合用作用增强。

附图说明

图1为本发明人参皀苷与人参多糖的提取工艺流程图

图2为本发明银杏叶提取物的提取工艺流程图

图3为本发明小容量参银注射液制备工艺流程图

图4为本发明大容量参银氯化钠注射液制备工艺流程图

图5为本发明大容量参银葡萄糖注射液制备工艺流程图

图6为本发明注射用参银冻干粉针剂制备工艺流程图

具体实施方式

提取工艺：

a、人参皀苷的提取

取吉林红参切片1000克，用75％乙醇回流提取4次，每次用8倍量乙醇回流提取1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.05左右(60℃测定)，冷至室温，用1/4量乙醚萃取3次，弃去乙醚液，水相煮沸，挥去残留乙醚，滤过，滤液冷至室温，用水饱和的等体积仲丁醇萃取4次，合并仲丁醇萃取液，用1/4量的水洗涤2次，弃去水液，减压回收仲丁醇，浓缩至相对密度1.05～1.10(60℃测定)，加乙醇使乙醇浓度达40％，搅拌均匀，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至每1毫升约相当于原生药材5克的清膏，即得人参皀苷，冷藏备用。

b、人参多糖的提取

将乙醇回流提取滤过后的药渣，用10倍量水煎煮3次，每次1.0小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.1～1.2(60℃测定)，加乙醇使乙醇浓度达80％，静置12～小时，滤取沉淀，于70℃～80℃下干燥，即得人参粗多糖，加30倍水煮沸溶解，冷藏过夜，取上清液浓缩至相对密度1.2左右(60℃测定)，加200克聚酰胺拌匀，干燥，装于层析柱中，用水3500毫升以每分钟10毫升速度洗脱，收集洗脱液，浓缩至相对密度1.2(60℃测定)，加乙醇使乙醇浓度达80％，搅匀，静置12小时，滤取沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀2～3次，在70℃～80℃下真空干燥，即得人参多糖。

c、银杏叶提取物的提取及去除所含银杏酚酸类物质的方法

取干燥绿色银杏叶粗粉1000克，用8倍量65％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，蒸发除去残醇，加0.05％(W/V)蛋氨酸搅拌溶解后，用10％(W/V)枸橼酸调节PH值至4.0，浓缩至流浸膏(1∶1)，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至200毫升(每毫升相当于原生药材5克)，用1/2量石油醚萃取3次，萃取后的水相加热挥去残余石油醚后，用等量的乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，在约50℃下减压回收乙酸乙酯，残余物备用；将乙酸乙酯萃取后的水相，用等量的水饱和的仲丁醇萃取4次，合并仲丁醇萃取液，在95℃下减压回收仲丁醇，与上述残余物合并，蒸发除去残酯和残醇，加入200克聚酰胺，拌匀，干燥，装于层析柱中，先用35％乙醇洗脱，收集洗脱液1000毫升，然后再用65％(W/V)乙醇洗脱，将洗脱液用制备的氢化白果酸对照品作比对验测，确保提取物中银杏酚酸类脂溶性物质含量不得高于5ug/g(以氢化白果酸计)即5ppm，合并两次洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至稠膏，在70℃～80℃下真空干燥，即得供注射用银杏叶提取物。

d、氢化白果酸对照品的制备工艺

取60℃～70℃干燥白果外种皮，用乙醇在60℃～70℃下回流提取2～4次，第一次用4～8倍量提取2～5小时，第2次用3～6倍量提取2～4小时，合并提取液，在60℃～90℃下减压回收乙醇，浓缩液上D101大孔树脂柱，先用50％～70％乙醇约2500ml洗脱，洗脱液流速每秒约3～4滴，至洗脱液澄明为止；然后用65％～85％乙醇5000ml洗脱，收集乙醇洗脱液，在60℃～90℃下减压回收乙醇，减压浓缩至近干，加甲醇200～300ml微热溶解，加10％活性炭吸附约15分钟，期间搅拌2～3次，过滤脱炭，用80～120ml甲醇分三次洗涤滤器，洗液与滤液合并，用等体积的石油醚萃取3～6次，合并石油醚，在50℃～70℃下减压回收石油醚，残渣用150～300ml甲醇超声溶解，过滤澄明，用制备色谱进行柱分离，流动相为甲醇-水-冰醋酸(88∶12∶0.6)，收集含氢化白果酸部分的流动相，在50℃～80℃下减压回收甲醇，减压浓缩至约200ml，加等量甲醇，再用等体积的石油醚萃取3～5次，合并石油醚，在50℃～70℃下减压回收石油醚，残渣用适量70％～90％甲醇溶解，冷藏结晶，滤取结晶，用70％--90％甲醇重结晶1次，冷冻干燥即得氢化白果酸对照品；其性状为白色结晶或结晶性粉末，薄层色谱Rf值0.45--0.7，含量达98％以上；该对照品经结构确证，包括①熔点，②元素分析，③红外光谱，④紫外吸收光谱，⑤核磁共振谱，⑥质谱，等项确证为氢化白果酸，其分子式为C₂₂H₃₆O₃，分子结构式为：

实施例A  小容量参银注射液：

由红参或人参1～3g提取物(即人参皂苷含量1.2～3.6mg，人参多糖含量25～75mg)，银杏叶提取物40～120毫克，组合物总重量8％～16％的乙醇，注射用水加至5～20毫升组成。

例1  由红参1g提取物(人参皂苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，乙醇0.4ml，注射用水加至5ml组成。

例2  红参2g提取物(人参皂苷2.4mg，人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg，乙醇0.8ml，注射用水加至10ml组成。

例3  由红参3g提取物(人参皂苷3.6mg，人参多糖75mg)，银杏叶提取物120mg，乙醇1.6ml，注射用水加至20ml组成。

例4  由人参2g提取物(人参皀苷2.4mg，人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg，乙醇0.8ml，注射用水加至10ml组成。

例5  由人参2g提取物(人参皀苷2.4mg，人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg，丙二醇0.8ml，注射用水加至10ml组成。

例6  由人参1g提取物(人参皀苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，甘油0.4ml，注射用水加至5ml组成。

例7  由人参3g提取物(人参皀苷3.6mg，人参多糖75mg)，银杏叶提取物120mg，丙二醇-乙醇(4∶6)1.6ml，注射用水加至20ml组成。

例8  由人参1g提取物(人参皀苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，甘油-乙醇(4∶6)0.4ml，注射用水加至5ml组成。

按下述方法制备出成品：

取银杏叶提取物，加10倍量的注射用水煮沸溶解，冷却过夜，滤过，滤液加入处方量的乙醇搅匀，备用；

取人参皂苷提取物，加处方量约30％的注射用水搅拌稀释后，过滤澄明后与上述银杏叶提取物混匀，调节PH值至4.5左右，加热煮沸约10分钟，冷藏过夜，滤过，滤液加热至70℃～80℃，加0.1％(W/V)活性炭搅匀，吸附约10分钟，期间搅拌2～3次，过滤澄明备用；

取人参多糖，用处方量约40％的注射用水煮沸溶解，过滤澄明，滤液加热煮沸，加0.3％活性炭搅匀，吸附约15分钟，期间搅拌2～3次，过滤脱炭澄明后，置稀配缸中，加入上述人参皂苷提取物和银杏叶提取物混合液，加注射用水至全量，调节PH至5.0左右，搅匀，用0.65um和0.45um复合微膜滤器精滤澄明，灌封于5ml曲颈安瓿中，于100℃灭菌30分钟，经检漏、灯检、印字、包装即得。

实施例B  大容量参银氯化钠注射液：

由红参或人参1～3g提取物(即人参皂苷1.2～3.6mg，人参多糖25～75mg)，银杏叶提取物40～120mg，组合物总量0.9％的氯化钠，注射用水加至100--200ml组成。

例1  由红参1g提取物(人参皂苷1.2g、人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，氯化钠0.45g，注射用水加至50ml组成。

例2  由红参2g提取物(人参皂苷2.4g、人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg，氯化钠0.9g，注射用水加至100ml组成。

例3  由红参3g提取物(人参皂苷3.6g、人参多糖75mg)，银杏叶提取物120mg，氯化钠1.8g，注射用水加至200ml组成。

例4  由人参2g提取物(人参皂苷2.4g、人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg，氯化钠0.9g，注射用水加至100ml组成。

按下述方法制备出成品：

取人参皂苷、人参多糖、银杏叶提取物过滤备用液，加入氯化钠0.9％，加注射用水至全量，搅匀，调节PH至5.0左右，用0.65μm、0.45μm和0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，半成品检验合格后，灌封于100～200ml输液玻瓶中，105℃灭菌30分钟，经冷却、灯检、贴标、包装即得。

实施例C  大容量参银葡萄糖注射液：

由红参或人参1～3g提取物(人参皂苷1.2～3.6mg，人参多糖25～75mg)，银杏叶提取物40～120mg，组合物总量5％的葡萄糖，注射用水加至100～200ml组成。

例1  由红参1g提取物(人参皂苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg、葡萄糖2.5g，注射用水加至50ml组成。

例2  由红参2g提取物(人参皂苷2.4mg，人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg、葡萄糖5g，注射用水加至100ml组成。

例3  由红参3g提取物(人参皂苷3.6mg，人参多糖75mg)，银杏叶提取物120mg、葡萄糖10g，注射用水加至200ml组成。

例4  由人参2g提取物(人参皂苷2.4mg，人参多糖50mg)，银杏叶提取物80mg、葡萄糖5g，注射用水加至100ml组成。

按下述方法制备出成品：

取人参皂苷、人参多糖、银杏叶提取物过滤备用液，加葡萄糖5％，加注射用水至全量，搅匀，调节PH至5.0左右，用0.65μm、0.45μm和0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，半成品检验合格后，灌封于100～200ml输液玻瓶中，105℃灭菌30分钟，经冷却、灯检、贴标、包装即得。

实施例D  0.2～0.4g注射用参银冻干粉针剂

由红参或人参0.5～1.5g提取物(人参皂苷0.6～1.8mg，人参多糖12.5～37.5mg)，银杏叶提取物20～60mg，甘露醇140～280mg，加注射用水2～4ml，冷冻干燥制成。

例1  由红参0.5g提取物(人参皂苷0.6mg，人参多糖12.5mg)，银杏叶提取物20mg，甘露醇140mg，加注射用水2ml，冷冻干燥制成0.2g冻干粉针剂。

例2  由红参1g提取物(人参皂苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，甘露醇210mg，加注射用水3ml，冷冻干燥制成0.3g冻干粉针剂。

例3  由红参1.5g提取物(人参皂苷1.8mg，人参多糖37.5mg)，银杏叶提取物60mg，甘露醇280mg，加注射用水4ml，冷冻干燥制成0.4g冻干粉针剂。

例4  由人参1g提取物(人参皂苷1.2mg，人参多糖25mg)，银杏叶提取物40mg，山梨醇210mg，加注射用水3ml，冷冻干燥制成0.3g冻干粉针剂。

按下述方法制备出成品：

取人参皂苷、人参多糖、银杏叶提取物过滤备用液，加入适量甘露醇搅拌溶解后，加注射用水至全量，搅匀，调节PH至5.0左右，用0.65μm、0.45μm和0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，无菌条件下分装于已灭菌的7～10ml冻干瓶中，在-40℃～-55℃下预冻2～3小时，开机冷冻干燥，在抽真空前，凝结器先降温至-50℃-- -60℃，在第一阶段，真空度维持在0.1mmHg柱左右，升华温度-20℃-- -30℃，干燥6～8小时，当看到制品中水晶存在时，(即以除去90％以上水份)，进入第二阶段干燥，此时将干燥箱中搁板的温度升至30℃左右并保持恒定，继续干燥5小时左右，取出封口即得。

下述内容为验证本发明参银注射制剂药效的主要药效学试验研究结果：

一、治疗脑中风后遗症药效学试验

(一)局灶性脑缺血模型试验

1、犬大脑中动脉结扎所致脑缺血模型试验：

参银注射液能减少犬大脑中动脉结扎后的脑组织缺血区重量，升高犬大脑中动脉平均血流速度及峰值流速。

2、大鼠颈内动脉注射血栓致局部脑缺血模型试验：

参银注射液能改善局灶性脑缺血大鼠2～24小时的意识和运动能力及神经行为学症状，并能降低局灶性脑缺血大鼠缺血区重量和脑缺血百分比。

(二)全脑缺血模型试验

1、沙土鼠颈动脉结扎法所致脑缺血模型试验：

参银注射液能升高脑缺血再灌注沙土鼠的LDH活力，降低脑缺血再灌注沙土鼠的大脑皮层含水量，并能减轻沙土鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的损伤，保护其存活。

2、小鼠断头法全脑缺血模型试验：

参银注射液能够延长小鼠断头后张口喘气时间。

3、对犬脑循环血流量的测定(正常状况和抗缩血管物质作用情况)：参银注射液对麻醉犬的收缩压和舒张压给药前后均无明显影响。

4、改善大脑损伤模型动物学习记忆试验：

参银注射液能够减少40％乙醇引起小鼠记忆再现障碍的避暗实验错误次数。

二、冠心病药效学模型试验

(一)抗心肌缺血试验

1、犬冠状动脉结扎法所致心肌硬塞模型试验：

参银注射液可使左心室梗塞范围明显缩小，降低模型动物的LDH和CPK，对LAD结扎的心肌梗死有更好的保护作用。此外，参银注射液能缓解结扎冠状动脉前降支后，由于心肌缺血所致ST段抬高，降低动物心率及心肌耗氧量，升高模型动物的LV+dp/dt，LV-dp/dt。

2、药物法所致心肌缺血坏死模型试验：

参银注射液与模型组，分别能对抗垂体后叶素诱发急性心肌缺血，且存在明显的量效规律性。

3、抗低糖低氧对培养心肌细胞损伤的保护试验：

参银注射液能够降低LDH、CK和AST，对体外培养心肌细胞缺氧缺血性损伤有直接的保护作用。

(二)犬心脏功能及血流动力学试验

参银注射液可降低心肌耗氧量，增加冠脉流量，升高模型动物的CO。对心电、心率平均动脉压等血流动力学参数无明显影响。

三、活血化瘀试验

1、改善小鼠微循环试验：

参银注射液能增加滴加盐酸肾上腺素后，小鼠耳廓毛细血管网交点开放数，扩张耳廓微血管，加快血流速度。

2、改善血瘀模型大鼠血液流变性试验：

参银注射液能降低血瘀模型大鼠血流变各指标，延长PT，有良好的活血化瘀作用。

3、增强家兎肺动脉血栓溶解试验：

参银注射液能降低血栓干湿重量，有良好的对抗血栓形成的作用。

4、溶栓试验一家兔纤维蛋白溶解活性测定：

参银注射液能加速溶解血浆中纤维蛋白，缩短纤维蛋白溶解时间。

5、抗血小板聚集试验：

显示参银注射液能够降低血小板聚集率。

四、抗应激试验

1、耐缺氧试验：

参银注射液能延长小鼠死亡时间，增强小鼠耐缺氧能力的作用。

2、抗疲劳试验：

参银注射液能够延长小鼠游泳时间，增强小鼠抗疲劳的能力。

五、改善中医气虚模型试验

参银注射液能够明显提高小鼠气虚模型RBC-C3b受体花环率和RBC-IC受体花环率，对原发性红细胞免疫功能低下有良好的改善作用。

六、临床效果：

用本发明参银注射剂，治疗脑缺血性中风及中风后遗症180例，显效119例，有效57例，无效4例，总有效率98％，显效率66％，无效率2％；治疗冠心病心绞痛205例，显效136例，有效62例，无效7例，总有效率97％，显效率66％，无效3％。

Claims (9)

1、一种参银注射剂组合物，包括小容量参银注射液、大容量参银氯化钠注射液、大容量参银葡萄糖注射液、参银冻干粉针剂，均由适量的红参或人参提取物、银杏叶提取物、辅剂和注射用水组成，其特征在于：所用红参或人参提取物为人参皂苷和人参多糖，所用银杏叶提取物为分离去除了银杏酚酸类物质的银杏叶提取物。

2、按照权利要求1所述的小容量参银注射液组合物，其特征在于：含人参皂苷1.2～3.6毫克、人参多糖25～75毫克，银杏叶提取物40～120毫克，含组合物总重量8％～16％的乙醇或丙二醇或甘油或复合助溶剂，加至5～20ml的注射用水，其中复合助溶剂为重量比4∶6的甘油与乙醇，或者是4∶6的丙二醇与乙醇。

3、按照权利要求1所述的大容量参银氯化钠注射液组合物，其特征在于：含人参皂苷1.2～3.6毫克、人参多糖25～75毫克，银杏叶提取物40～120毫克，含组合物总重量0.9％的氯化钠，加至50～200毫升的注射用水。

4、按照权利要求1所述的大容量参银葡萄糖注射液组合物，其特征在于：含人参皂苷1.2～3.6毫克、人参多糖25～75毫克，银杏叶提取物40～120毫克，含组合物总重量5％的葡萄糖，加至50～200毫升的注射用水。

5、按照权利要求1所述的参银冻干粉针剂组合物，其特征在于：在0.2～0.4克冻干粉针剂中，含人参皂苷0.6～1.8毫克，人参多糖12.5～37.5毫克，银杏叶提取物20～60毫克，含膨松剂：甘露醇或山梨醇或木糖醇140～280毫克，含注射用水2～4毫升，冷冻干燥制成。

6、一种制备权利要求1、2、3、4、5所述参银注射剂的工艺方法，由红参或人参提取物的提取工艺、银杏叶提取物的提取工艺及注射剂制备工艺组成；其中红参或人参提取物的提取工艺，为人参皂苷的提取和人参多糖的提取，其特征在于：人参皂苷提取工艺包括以下步骤：红参或人参原料药依次经过乙醇回流提取、乙醚萃取、仲丁醇或正丁醇萃取、乙醇沉淀纯化、滤液浓缩至清膏即得人参皀苷；人参多糖的提取工艺包括以下步骤：经过乙醇回流提取后的红参或人参药渣，经水提醇沉、聚酰胺吸附及层析柱洗脱分离纯化、洗脱液醇沉、沉淀经真空干燥即得人参多糖；银杏叶提取物的提取工艺依序包括以下步骤：银杏叶粗粉的乙醇回流提取、滤液浓缩、石油醚萃取、加热挥去残存石油醚，取水相先后用乙酸乙脂和仲丁醇萃取、再用聚酰胺吸附和不同浓度乙醇的层析柱洗脱、，除去了银杏酚类等脂溶性有害物质后，将洗脱液回收乙醇后浓缩至稠膏、经真空干燥即得银杏叶提取物。

7、按照权利要求6所述制备参银注射剂的方法，其特征在于：所述注射剂制备工艺，包括小容量参银注射液制备工艺、大容量参银氯化钠注射液制备工艺、大容量参银葡萄糖注射液制备工艺、及参银冻干粉针剂制备工艺；其中：

a、小容量参银注射液制备工艺如下：

取银杏叶提取物，加10倍量的注射用水煮沸溶解，冷藏过夜，滤过，滤液加入处方量的乙醇搅匀备用；取人参皂苷提取物，加处方量约30％的注射用水搅拌稀释后，过滤澄明后与上述银杏叶提取物混匀，调节PH值至4.5左右，加热煮沸约10分钟，冷藏过夜，滤过，滤液加热至70℃～80℃，加0.1％(W/V)活性炭搅匀，吸附约10分钟，期间搅拌2～3次，过滤澄明备用；取人参多糖，用处方量约40％的注射用水煮沸溶解滤过，澄明，滤液加热煮沸，加0.3％活性炭搅匀，吸附约15分钟，期间搅拌2～3次，过滤脱炭澄明后，置稀配缸中，加入上述人参皂苷提取物和银杏叶提取物混合液，加注射用水至全量，调节PH至5.0左右，搅匀，用0.65μm和0.45μm复合微膜滤器精滤澄明，灌封于5～20毫升曲颈安瓿中，于100℃灭菌30分钟，经检漏、灯检、印字、包装即得。

b、大容量参银氯化钠注射液制备工艺如下：

取人参皂苷、人参多糖、银杏叶提取物过滤备用液，加入氯化钠0.9％，加注射用水至全量，搅匀，调节PH至5.0左右，用0.65μm、0.45μm和0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，半成品检验合格后，灌封于是100～200毫升输液玻瓶中，105℃灭菌30分钟，经冷却、灯检、贴标、包装即得。

c、大容量参银葡萄糖注射液制备工艺如下：

取银杏叶、人参皂苷、人参多糖提取物备用液，加葡萄糖5％，再加注射用水至全量，调节PH至4.0～6.0，用0.65μm、0.45μm、0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，检验合格后，灌封于100～200ml输液瓶中，于95℃～125℃灭菌，经冷却、灯检、贴标、包装即得。

d、参银冻干粉针剂制备工艺如下：

取处方量银杏叶、人参皂苷、人参多糖提取物备用液，加入甘露醇量70％，加入注射用水至全量，调节PH至4.0～6.0，用0.65～0.22μm复合微膜滤器精滤澄明，无菌条件下按2～10毫升分装于已灭菌冻干瓶中，-40～-55℃预冻2～3小时，再开机冷冻干燥，第一阶段-50～-60℃，真空度维持在0.5～1.5mmHg，升华温度-20～-30℃干燥6～8小时，第二阶段干燥箱温度30℃，并恒定5小时，取出封口即得。

8、按照权利要求6所述制备参银注射剂的方法，其特征在于：去除银杏叶提取物中银杏酚类脂溶性有害物质的方法，是将银杏叶经乙醇回流提取，滤液加入蛋氨酸并用枸橼酸调PH值，浓缩至流浸膏后的浓缩液，用1/2量石油醚萃取3次，萃取后的水相加热挥去残余石油醚，用等量的乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，在约50℃下减压回收乙酸乙酯，残余物备用；将乙酸乙酯萃取后的水相用等量的水饱和的仲丁醇萃取4次，合并仲丁醇液，在95℃下减压回收仲丁醇，与上述残留物合并，蒸发除去残酯和残醇，加入200g聚酰胺，拌匀，干燥，装于层析柱中，先用35％乙醇洗脱，收集洗脱液，再用65％乙醇洗脱，将洗脱液用制备的氢化白果酸对照品作比对验测，即可保证提取物中银杏酚类脂溶性有害物质的含量不超过5ppm。

9、按照权利要求8所述制备参银注射剂的方法，其特征在于：在去除银杏叶中所含银杏酚类等脂溶性有害物质，控制银杏叶提取物中银杏酚酸类物质不得高于5μg/g即5ppm的提取工艺中，所需用的以氢化白果酸计量的银杏酚酸类物质对照品的提取纯化工艺过程是：取白果外种皮1000克，用乙醇在70℃回流提取2次，第一次用6倍量提取3小时，第二次用4倍量提取2小时，合并提取液，在70℃～80℃减压回收乙醇，浓缩液上D101大孔树脂柱，先用60％乙醇约2500毫升洗脱，至洗脱液澄明为止，然后用75％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，在70℃～80℃下减压回收乙醇，减压浓缩至近干，加甲醇250毫升微热溶解，加10％活性炭吸附约15分钟，过滤脱炭，用100毫升甲醇分三次洗涤滤器，洗液与滤液合并，用等体积的石油醚萃取4次，合并石油醚，在60℃下减压回收石油醚，残渣用200毫升甲醇超声溶解，过滤澄明，用制备色谱进行柱分离，流动相为甲醇-水-冰醋酸(88∶12∶0.6)，收集氢化白果酸部分的流动相，在60℃～70℃减压回收甲醇，减压浓缩至200毫升，加等量甲醇，再用等体积的石油醚萃取4次，合并石油醚，在60℃下减压回收石油醚，残渣用适量80％甲醇溶解，冷藏结晶，滤取结晶，用80％甲醇重结晶1次，冷冻干燥即得性状为白色结晶性粉末，薄层色谱R_f值0.45～0.7，含量达98％以上的氢化白果酸对照品；该对照品经结构确证，包括熔点，元素分析，红外光谱，紫外吸收光谱，核磁共振谱，质谱，各项确证为氢化白果酸，其分子式为C₂₂H₃₆O₃，分子结构式为：

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