CN100360137C - 抗辐射损伤药物 - Google Patents
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Abstract
本发明提出一种能预防和治疗辐射损伤的抗辐射损伤药物，由下述按重量百分比混合的活性成分组成：松茸多糖80-60%、人参多糖20-40%，所述的松茸多糖、人参多糖是从天然植物松茸、人参中通过水提醇沉法提取获得。本发明药物具有清除体内自由基、增强特异和非特异免疫力、保护造血功能、抑制肿瘤细胞等功能，特别适用于预防和治疗辐射引起的机体损伤。
Description
技术领域
本发明涉及一种能预防和治疗辐射损伤的抗辐射损伤药物。
背景技术
在现代生活与工作环境中，到处充满电磁辐射。按辐射产生原因一般可分五种：天然辐射主要是指阳光照射；电器辐射是指电视广播设备、电信产品(如手机、电脑等)、家用电器(如电磁炉、微波炉等)和各种工业设备的电磁辐射；医疗辐射是指X光透视、CT、核磁共振、钴60放射治疗等发出的高强度辐射；建筑材料辐射是指各种墙体和装饰材料(如石材、瓷砖、涂料等)中异常的放射性元素所产生的辐射；最后一种是指核辐射，极其危险的辐射，随着核电事业的发展，这种潜在辐射危险是不容忽视的。所有这些辐射使得现代人们生活在一个辐射无处不在的环境中，长期接受电磁辐射可使人在不知不觉中导致精力和体力减退，引发心血管疾病、肿瘤、白血病、性功能低下、死精、胎儿畸形、视力降低以及骨髓造血机能降低、神经衰弱综合症、肩颈腕综合症、易患感冒、衰老加快等多种不良反应。目前在我国，放射治疗仍然是肿瘤治疗的主要手段，肿瘤患者在接受放射治疗时，机体的正常细胞也接受了同样强度的辐射损伤，引起胃肠功能紊乱、骨髓抑制，尤其是严重的损伤了人体免疫系统，如不及时进行免疫修复，一方面可加剧残余癌细胞的增殖和转移，另一方面会继发机体的多系统多器官疾病，这些问题已成为放射医学和肿瘤治疗亟待解决的问题。
目前在辐射防护和临床肿瘤治疗上用于防治辐射损伤的药物，多为化学合成药物，其毒副作用较大，所以开发药食同用、抗辐射功效较强且无毒副作用天然药物是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能有效预防和治疗辐射损伤且无毒副作用的抗辐射损伤药物。
盛产于长白山区的松茸〔Tricholoma matsutake(S.Ito et Imai)Sing.〕在真菌分类系统中隶属于担子菌门，口蘑属，属药食两用植物，味道鲜美独特，富含多种氨基酸、维生素、微量元素和多糖，营养价值丰富，已有研究表明松茸具有免疫增强活性及较强的抗肿瘤活性；人参(Panax ginseng C.A.Mey.)为五加科多年生宿根性草本植物，具有提高脑、体力活动能力和免疫功能，增强抗应激、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老及抗炎症等作用。
本发明人通过大量实验研究发现，松茸中的松茸多糖具有较好的预防和治疗辐射损伤作用，与人参多糖按一定比例进行组合的协同作用对预防和治疗辐射损伤的效果更为明显。
据此，提出本发明抗辐射损伤药物，即由下述按重量百分比混合的活性成分组成：松茸多糖80-60％、人参多糖20-40％，所述的松茸多糖、人参多糖是从天然植物松茸、人参中通过水提醇沉法提取获得。
本发明药物的制备方法如下：
1.松茸多糖的提取：鲜松茸去除其表面泥土，清水洗净，置烘箱中40～60℃恒温烘干至恒重，粉碎过40目筛，得松茸干粉。索氏提取法回流去除脂肪，得药渣，按与水1∶40～1∶20的比例水提，温度控制在90-100℃之间，浸提三次，3h/次，合并滤液，抽滤去除杂质，加热浓缩至原液的1/40后，90％以上乙醇沉淀两次，最后将沉淀干燥、研磨得多糖粉末。
2.人参多糖的提取：采用在提取人参皂甙过程中产生的大量人参根“废渣”直接水提，温度控制在95℃以上，水提三次，3h/次，合并滤液，抽滤去除杂质，加热浓缩至原液的1/40后，90％以上乙醇沉淀三次，最后将沉淀干燥、研磨得多糖粉末。
3.将松茸多糖粉末与人参多糖粉末按设定比例混合均匀，即制备成了本发明抗辐射损伤药物的活性成分。
本发明药物的活性成分可辅以任何药学上可接受的载体或辅料制成任何一种常规的口服剂型，如胶囊剂、口服液、片剂等。
本发明药物具有清除体内自由基、增强特异和非特异免疫力、保护造血功能、抑制肿瘤细胞等功能，特别适用于预防和治疗辐射引起的机体损伤。
本发明药物的药效学试验如下：
一、动物药效学实验
(一)受试药物对X射线照射小鼠氧化功能的保护作用
1.实验材料
SOD、MDA、CAT、GSH-Px试剂盒ICR小鼠Philips深部X线治疗机。
2.实验步骤
清洁级雄性ICR小鼠购于吉林大学基础医学部动物中心，20±2g，150只，随机分为正常对照组(NC)、辐射对照组(IC)和低(400mg/kg)、中(800mg/kg)、高(1200mg/kg)三个受试药物组，每日灌胃给药，0.1ml/10g，正常对照组和辐射对照组给予等量的生理盐水，连续7天，第8天除正常对照组外均接受2Gy剂量的照射，于照后第1、5、14天每组各取50只摘眼球取血，离心，获得血清。测定血清中的SOD、MDA、CAT、GSH-Px含量，使用SPSS统计软件进行统计处理。
3.实验结果
受试药物对X射线照射小鼠氧化功能的保护作用实验结果详见表1至表4。
表1.受试药物对X射线照射小鼠血清中SOD活性的影响(U/ml)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 269.2343±10.0111<sup>*</sup>133.9986±11.9604156.4816±6.8564<sup>*</sup>165.9245±17.0040<sup>**</sup>178.0653±19.9453<sup>**</sup> | 271.5810±16.2347<sup>*</sup>160.6739±9.1586176.2667±11.9873<sup>**</sup>194.5713±13.6855<sup>**</sup>208.8082±16.1858<sup>**</sup> | 268.4565±15.2371<sup>*</sup>239.4664±17.4616251.4138±10.9270255.5694±20.335262.3222±16.1155 |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
表2.受试药物对X射线照射小鼠血清中CAT活性的影响(nmol/ml)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 5.482±0.778<sup>*</sup>11.590±1.01210.618±0.694<sup>*</sup>10.436±0.493<sup>*</sup>10.205±0.844<sup>*</sup> | 5.399±1.011<sup>*</sup>11.032±1.9149.161±0.725<sup>*</sup>8.903±0.597<sup>*</sup>8.774±0.651<sup>*</sup> | 5.518±0.247<sup>*</sup>5.649±1.3475.603±1.0185.542±0.8025.527±1.183 |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
表3.受试药物对X射线照射小鼠血清中MDA含量的影响(ku/L)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 191.0475±12.254<sup>**</sup>130.0234±13.0545142.9648±15.5524146.3443±7.8501<sup>*</sup>154.9942±11.4652<sup>*</sup> | 195.0107±18.230<sup>**</sup>140.4276±10.9453167.3263±10.9453<sup>*</sup>177.3424±19.0026<sup>**</sup>185.8432±18.5404<sup>**</sup> | 193.56±10.5617<sup>*</sup>167.184±13.8614183.0377±17.3548185.9202±24.6490193.1264±15.6227<sup>*</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
表4.受试药物对X射线照射小鼠血清中GSH-Px含量的影响(ku/L)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 584.5±48.4<sup>**</sup>429.5±21.4453.0±18.7475.5±26.2<sup>*</sup>505.0±20.3<sup>**</sup> | 588.0±44.5<sup>**</sup>454.0±18.5478.0±13.6<sup>*</sup>508.5±22.4<sup>**</sup>523.0±26.2<sup>**</sup> | 595.0±27.3<sup>*</sup>501.0±24.6530.0±22.5551.0±32.4<sup>*</sup>571.5±30.1<sup>**</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
(二)受试药物对X射线照射小鼠免疫系统的保护作用
1.实验材料
1640培养液小牛血清
2.实验步骤
1)模型制作同(一)
2)脾细胞对刀豆蛋白A(ConA)反应性测定：采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法。调小鼠脾细胞浓度为1×107个/ml，ConA浓度为10ug/ml，于96孔平底培养板上每孔各加入100ul的脾细胞，每个样品设三复孔，刺激孔每孔加入100ul ConA，细胞对照孔每孔加入100ul培养液，37℃、5％CO2培养箱中培养48h，终止培养前2h每孔加入10ulMTT，培养结束后，吸出上清，每孔加入二甲亚枫100ul，570nm酶标仪测定吸光度OD值。
3.实验结果
受试药物对X射线照射小鼠免疫系统的保护作用实验结果见表5。
表5.受试药物对X射线照射小鼠脾细胞ConA诱导增殖反应的影响
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 2.0506±0.1508<sup>**</sup>1.2503±0.13621.4331±0.105<sup>*</sup>1.5022±0.1486<sup>*</sup>1.5641±0.2449<sup>*</sup> | 2.2459±0.1547<sup>**</sup>1.3954±0.08841.5912±0.0755<sup>**</sup>1.8180±0.162<sup>**</sup>1.9433±0.0896<sup>**</sup> | 2.2822±0.0758<sup>*</sup>1.5152±0.12551.7328±0.19240<sup>*</sup>2.1858±0.1882<sup>**</sup>2.3498±0.2071<sup>**</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
(三)受试药物对X射线照射小鼠造血系统的保护作用
1.实验材料
Giemsa染液荧光显微镜752紫外分光光度计倒置显微镜
2.实验步骤
(1)模型制作同上述实验(一)
(2)骨髓成纤维祖细胞集落形成单位(CFU-F)测定
1)骨髓细胞悬液制备：脱颈椎法处死小鼠，无菌条件下取股骨，用5ml注射器吸取RPMI1640培养液将骨髓细胞全部冲入到广口瓶中，200目细胞过滤网过滤制备成单细胞悬液，计数有核细胞，备用。
2)配制培养体系：配制10ml培养体系，20％小牛血清，1×107个细胞，其余用培养液补齐，植入培养瓶内，置37℃、5％CO2培养箱中培养7天，终止培养后，倒掉培养液，生理盐水冲洗两遍，甲醇固定10分钟，Giemsa染色12分钟，倒置显微镜下观察，计数超过50个细胞以上的为一个集落。
(3)单细胞凝胶电泳测定骨髓细胞DNA损伤
1)制片和电泳：磨砂载玻片上铺正常熔点琼脂糖(NMA)为第一层，第二层为80ul低熔点琼脂糖(LMA)与10ul细胞混合液，第三层铺正常熔点琼脂糖，置于冰盒上凝固。将铺好的凝胶玻片置于预冷的新鲜配制的细胞裂解液中，4℃避光裂解1.5小时，避光解旋40min后，调电压25V，电流为300mA，避光电泳20min.
2)中和与染色：取出玻片，Tris缓冲液冲洗中和至中性，EB染色，荧光显微镜下观察，每张玻片计数100个细胞，求拖尾率。
(4)骨髓DNA含量的测定
剪开股骨头，0.005mol·L-1氯化钙10ml将全部骨髓冲入离心管中，置4℃冰箱30min，2500转/min离心15min，弃去上清液，将沉淀物加0.2ml 0.1mol·L-1高氯酸5ml充分混合，90℃加热15min冷却，过滤，滤液用紫外分光光度计于260nm处测定A260，计算DNA含量，DNA(μg)＝40×50×A(260nm)吸光度值。
3.实验结果
(1)受试药物对X射线照射小鼠CFU-F的影响见表6。
表6.受试药物对X射线照射CFU-F的影响(个/1×107)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 145.8±11.8<sup>**</sup>33.4±7.840.4±8.155.8±11.1<sup>**</sup>67.8±12.4<sup>**</sup> | 149.8±17.7<sup>**</sup>61.8±13.481.4±9.3<sup>*</sup>95.2±13.5<sup>**</sup>105.0±17.7<sup>**</sup> | 146.8±18.0<sup>**</sup>95.4±18.0117.4±15.9126.0±17.0<sup>*</sup>132.2±24.2<sup>**</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
(2)受试药物对X射线照射小鼠骨髓DNA损伤的影响见表7。
表7.受试药物对X射线照射小鼠骨髓DNA损伤的影响(个/1×105)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 2.19±1.08<sup>*</sup>10.24±2.139.98±1.22<sup>*</sup>9.04±3.53<sup>**</sup>8.97±1.41<sup>**</sup> | 2.34±＝1.87<sup>*</sup>9.23±1.458.12±3.42<sup>*</sup>6.98±2.22<sup>**</sup>6.88±1.33<sup>**</sup> | 2.11±＝2.00<sup>*</sup>2.99±3.102.72±2.332.84±1.422.08±2.74<sup>*</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
(3)受试药物对X射线照射骨髓DNA含量的影响见表8。
表8.受试药物对X射线照射骨髓DNA含量的影响(ug/m)
| 接受2.0 Gy X射线照射后 | |||
| 第1天 | 第5天 | 第14天 | |
| 正常对照组辐射对照组400mg/kg800mg/kg1200mg/kg | 317.6±19.2<sup>**</sup>115.4±10.9141.0±10.6<sup>**</sup>186.8±14.4<sup>**</sup>204.6±17.4<sup>**</sup> | 320.6±23.3<sup>**</sup>169.4±5.7209.8±19.2<sup>**</sup>236.2±17.0<sup>**</sup>270.2±12.0<sup>**</sup> | 312.0±17.2<sup>**</sup>264.4±12.6282.2±21.9301.8±17.1<sup>**</sup>322.2±15.9<sup>**</sup> |
*p＜0.05与辐射对照组比较，**p＜0.01与辐射对照组比较
(四)急性毒性实验
清洁级ICR小鼠100只，体重20±2g，随机分为五组，雌雄各半，采用完全法分组，最高剂量为15000mg/kg，最低剂量为5000mg/kg体重，经口灌胃给药，给药后观察小鼠全身反应，连续观察2周。
实验结果：各组小鼠未有死亡，生长状态良好，体重增加，LD50＞5000mg/kg。
二、临床实验
我们选择18例放疗科接受一个疗程放射治疗的宫颈癌、肝癌、乳腺癌患者并随机分为两组，实验组和对照组。在其他临床相同的情况下，实验组在接受放射治疗前，每日口服受试药物所制备成的口服液2次，连续服用1周，接受放射治疗后，继续服用3周；对照组不服用本受试药物。实验结果表明，与对照组相比，服用受试药物的患者，恶心、呕吐等胃肠道反应得到改善，食欲增加，一般体重都略有增加，睡眠、虚弱无力状态很快得到改善。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
本发明抗辐射损伤药物的制备。
1.松茸多糖的提取：将松茸干粉索式回流去除脂肪物质后，水提三次，每次加水量为干粉体积的40倍，合并三次水煎液，经过滤、浓缩后，用90-100％浓度乙醇沉淀三次，挥干溶酶后，得松茸多糖固体粉末。
2.人参多糖的提取：采用在提取人参皂甙过程中产生的大量人参根“废渣”直接水提，温度控制在95℃以上，水提三次，3h/每次，合并滤液，抽滤去除杂质，加热浓缩至原液的1/40后，用90％以上浓度乙醇沉淀三次，最后将沉淀干燥、研磨得人参多糖粉末。
3.将上述提取的松茸多糖粉末和人参多糖粉末按松茸多糖为80-60％、人参多糖为20-40％的重量百分比混合均匀，即为本发明药物的活性成分组合物。
将该活性成分组合物辅以任何药学上可接受的载体或辅料可制成任何一种常规的口服剂型抗辐射损伤药物。
实施例2
抗辐射损伤药物胶囊的制备。
称取80g实施例1方法制备的活性成分组合物置于混合器中，边搅拌边缓慢加入15g淀粉，喷入适量纯水，高速搅拌5分钟，湿粒过16目筛，置烘箱60℃干燥后整粒，加入硬脂酸镁5g混匀，灭菌，装0号胶囊(0.25g/胶囊)，即得胶囊剂型抗辐射损伤药物。
实施例3
抗辐射损伤药物口服液的制备。
称取80g实施例1方法制备的活性成分组合物置于混合器中，边搅拌边缓慢加入蜂蜜10g、蔗糖6g、柠檬酸2g、硬脂酸镁2g，混合均匀后，加1L蒸馏水混匀制备成溶液，灭菌，分装成100瓶(10ml/瓶)，即得本发明口服液剂型抗辐射损伤药物。
实施例4
抗辐射损伤药物含片的制备。
称取80g实施例1方法制备的活性成分组合物置于混合器中，边搅拌边缓慢加入蜂蜜6g、蔗糖10g、柠檬酸2g、硬脂酸镁2g，混合均匀后加适量蒸馏水混匀干燥、制片(0.25g/片)，即得本发明含片剂型抗辐射损伤药物。
Claims (2)
1.一种抗辐射损伤药物，其特征在于由下述按重量百分比混合的活性成分组成：松茸多糖80-60％、人参多糖20-40％，所述的松茸多糖、人参多糖是从天然植物松茸、人参中通过水提醇沉法提取获得。
2.根据权利要求1所述的抗辐射损伤药物，其特征在于辅以药学上可接受的载体或辅料制成片剂、胶囊剂或口服液剂型。
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| CN1823810A (zh) | 2006-08-30 |
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