CN1981057B

CN1981057B - 改良核酸表达的新序列

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Publication number: CN1981057B
Application number: CN2005800229700A
Authority: CN
Inventors: 阿里·彼得·奥特; 特奥多鲁斯·亨德里克斯·雅各布斯·科瓦克斯; 理查德·乔治·安东尼厄斯·伯纳德斯·斯瓦尔特; 亨里克斯·约翰内斯·马里亚·范布洛克兰
Original assignee: Chromagenics BV
Current assignee: Chromagenics BV
Priority date: 2004-07-08
Filing date: 2005-07-07
Publication date: 2012-07-04
Anticipated expiration: 2025-07-07
Also published as: JP4805262B2; US7825232B2; NO341862B1; DE602005003369T2; CN1981057A; JP2008505626A; CA2573022A1; DE602005003369D1; ES2296201T3; WO2006005718A3; EA011747B1; IL180531A0; US20070212755A1; MXPA06014553A; ZA200610470B; WO2006005718A2; PT1763586E; AU2005261699A1; AU2005261699B2; NO20070757L

Abstract

本发明提供了一种新的抗阻抑物元件，其可用于改良核酸在宿主细胞中的表达。本发明还提供了使用所述新的抗阻抑物元件生产感兴趣蛋白质的方法。本发明还提供了包含抗阻抑物元件的表达盒的新构型。

Description

改良核酸表达的新序列

本发明涉及分子生物学和生物技术领域。更特别地，本发明涉及改良可在宿主细胞中编码蛋白质的一或多种核酸的产生的手段和方法。

可以在多种宿主细胞中产生的蛋白质在生物学和生物技术学中具有广泛应用，例如可用于生物制药学。这种产生方法已经确立，通常是使编码感兴趣蛋白质的核酸(也称作转基因)在宿主细胞中表达。

与转基因的表达相关的一个问题是其是不可预知的，这是由于转基因由于基因沉默而将变得无活性的高度可能性(McBurney et al.，2002)，因此对于转基因的高表达需要测试许多宿主细胞克隆。另外，一旦这种克隆已经确定，则所述转基因的表达通常是不稳定的，在延长的宿主细胞培养期间常常观测到转基因表达沉默的现象。在脊椎动物细胞中，这可能是由于异染色质在转基因座形成，阻止了转基因的转录所致(Whitelaw et al，2001)。转基因沉默是随机的，其通常可以在转基因整合进基因组之中后立刻发生，或者只是在细胞分化之后发生。这样在延长的培养之后产生异质细胞群，其中一些细胞持续表达高水平的重组蛋白质，而其它细胞表达低水平或者不可检测水平的蛋白质(Martin & Whitelaw，1996，McBumey etal.，2002)。用于产生异源蛋白质的细胞系衍生自单一细胞，通常对其按比例扩大并长期维持在1000升或更大体积的培养器中每毫升1千万个细胞以上的密度。这些大细胞群(10¹⁴-10¹⁶个细胞)由于转基因沉默而倾向于生产力明显下降(Migliaccio et al.，2000，Strutzenberger et al.，1999)。

克服上述问题的一种可能性是在表达系统中应用所谓的STAR序列。多种这样的STAR序列在WO 03/004704中描述。这些序列可用于在一些类型宿主细胞中使用表达构建体而改良蛋白质生产的可预测性、产量和/或稳定性(WO 03/004704；Kwaks et al，2003)。

国际出版物WO 03/106674描述了STAR序列在一些细胞系中表达编码重组蛋白质的核酸的应用。

国际出版物WO 03/106684描述了STAR序列表达编码多聚体蛋白质如抗体的核酸的应用。

本发明提供了改良蛋白质生产的另外的手段和方法。

发明概述

一方面，本发明提供了包含选自如下一组的具有抗阻抑物活性的核酸序列的重组核酸分子：a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)与a)或b)的核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性，及d)与a)-c)任一序列互补的序列；所述重组核酸分子进一步包含表达盒，所述表达盒包含与感兴趣核酸连接的异源启动子，且其中所述感兴趣核酸优选编码全部或部分感兴趣蛋白质。在一个优选的实施方案中，所述具有抗阻抑物活性的核酸序列位于所述表达盒中所述启动子的上游，在其特别优选的实施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列和所述启动子间隔少于2kb。在某些实施方案中，所述编码感兴趣蛋白质的核酸存在于多顺反子基因中，所述多顺反子基因进一步编码可选择标记基因。在某些实施方案中，所述分子进一步包含至少一个其它具有抗阻抑物活性的序列，所述至少一个其它序列选自：a)SEQ.ID.NO.1-65任一序列；b)SEQ.ID.NO.1-65任一序列的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)与a)-c)任一序列互补的序列。本发明还提供了包含表达盒的重组核酸分子，其包含5’-抗阻抑物序列A-启动子-编码全部或者部分感兴趣蛋白质的核酸-抗阻抑物序列B-3’，其中抗阻抑物序列A和B可以相同或不同，并选自：(i)SEQ.ID.NO.1-65任一序列；(ii)SEQ.ID.NO.1-65任一序列的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；(iii)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及(iv)与(i)-(iii)任一序列互补的序列，特征在于所述表达盒在所述抗阻抑物序列A和B之间进一步包含具有抗阻抑物活性的序列，该序列选自：a)SEQ.ID.NO.66；b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)与a)-c)任一序列互补的序列。

本发明进一步提供了包含本发明分子的细胞。优选所述细胞是哺乳动物细胞，在某些实施方案中所述细胞是CHO细胞。

本发明进一步提供了一种生产感兴趣蛋白质的方法，包括培养包含编码感兴趣蛋白质的重组核酸分子的细胞，以在所述细胞中表达编码感兴趣蛋白质的所述核酸，其特征在于所述重组核酸分子包含具有抗阻抑物活性的、选自如下一组的核酸序列：a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)与a)-c)任一序列互补的序列。在一个优选的实施方案中，所述方法进一步包括分离所述感兴趣蛋白质。在优选的实施方案中，所述具有抗阻抑物活性的核酸序列位于控制感兴趣蛋白质表达的启动子的上游。在其优选的实施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列与所述启动子间隔少于2kb。在某些实施方案中，所述编码感兴趣蛋白质的核酸存在于多顺反子基因中，所述多顺反子基因进一步编码可选择标记基因。在某些实施方案中，所述细胞是哺乳动物细胞，例如CHO细胞。

本发明还提供了选自如下一组的具有抗阻抑物活性的核酸序列在增加感兴趣核酸表达中的应用：a)SEQ.ID.NO.66；b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性；c)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性；及d)与a)-c)任一序列互补的序列。

另一方面，本发明提供了一种产生表达两种感兴趣多肽的宿主细胞的方法，所述方法包括：a)向宿主细胞中导入一或多种核酸分子，所述一种核酸分子或多种核酸分子一起包含：(i)与编码第一种感兴趣多肽和第一种可选择标记基因的序列功能性连接的启动子，及(ii)与编码第二种感兴趣多肽和第二种可选择标记基因的序列功能性连接的启动子，及(iii)具有抗阻抑物活性的至少一个序列，选自：(a)SEQ.ID.NO.1-66任一序列，(b)SEQ.ID.NO.1-66任一序列的片段，所述片段具有抗阻抑物活性，(c)与(a)或(b)至少70％相同并具有抗阻抑物活性的序列，及(d)与(a)-(c)任一序列互补的序列；b)通过基本上同时选择表达所述第一种和第二种可选择标记基因而选择宿主细胞。本发明还提供了表达两种感兴趣多肽的方法，所述方法包括：培养通过本发明的方法获得的宿主细胞以表达所述第一种和第二种多肽，及任选分离所述多肽。在一个实施方案中，所述具有抗阻抑物活性的序列选自：a)SEQ.ID.NO.66，b)SEQ.ID.NO.66的片段，其中所述片段具有抗阻抑物活性，c)与a)或b)核苷酸序列至少70％相同的序列，其中所述序列具有抗阻抑物活性，及d)与a)-c)任一序列互补的序列。在某些实施方案中，所述两种多肽是多聚体蛋白质的一部分。

发明详述

抗阻抑物序列

本发明使用的具有抗阻抑物活性的序列是当HP1或HPC2蛋白质与DNA结合(tether)时，能至少部分抵消这些蛋白质的阻抑作用的序列。适于本发明的具有抗阻抑物活性的序列(在本文有时也称作抗阻抑物序列或者抗阻抑物元件)在WO 03/004704中揭示，其并入本文参考，在该文章中将其称作STAR序列(在本文中无论什么情况下将一序列称作STAR序列，则该序列具有本发明的抗阻抑物活性)。作为非限制性的例子，称作STAR1-65的65个抗阻抑物元件的序列(见WO 03/004704)在本文分别以SEQ.ID.NO.1-65表示。

根据本发明，一指定抗阻抑物元件的功能性片段或衍生物当其仍具有抗阻抑物活性时，被认为与所述抗阻抑物元件等同。这种抗阻抑物活性的存在可易于由本领域技术人员例如通过下述分析而检测。功能性片段或者衍生物可易于由分子生物学领域技术人员通过用指定的抗阻抑物序列起始产生缺失、添加、取代、翻转等而获得(见例如WO 03/004704)。功能性片段或者衍生物还包含其它物种的直向同源物(ortholog)，其可以被本领域技术人员通过已知方法使用已知的抗阻抑物序列发现(见例如WO 03/004704)。因此，本发明涵盖抗阻抑物序列的片段，其中所述片段仍具有抗阻抑物活性。对于指定序列的片段，相同性百分比是指在该片段中发现的参考天然序列的部分。本发明还涵盖与所述具有抗阻抑物活性的序列或其具有抗阻抑物活性的功能片段在核苷酸序列水平至少70％相同的序列，只要这些至少70％相同的序列仍具有本发明的抗阻抑物活性。优选地，所述序列与参考天然序列或其功能片段至少80％相同、更优选至少90％相同、更优选至少95％相同。

根据本发明具有抗阻抑物活性的序列可以通过多种方法获得，包括但不限于从人基因组或者另一种生物体的基因组中克隆，或者通过例如利用对序列的了解例如通过PCR从这种基因组中直接扩增已知抗阻抑物序列，或者可以部分或全部化学合成。

具有抗阻抑物活性的序列或其功能片段或衍生物在本发明通过其序列在结构上加以限定，另外限定为具有抗阻抑物活性的序列进行功能性限定，使用下文所述分析确定。

本发明的具有抗阻抑物活性的任何序列应至少能通过如下的功能分析(见WO 03/004704，实施例1，并入本文作参考)。将人U-2OS细胞(ATCC HTB-96)用pTet-Off质粒(Clontech K1620-A)及用编码含有LexA DNA结合结构域和HP1或HPC2编码区的LexA-阻抑物融合蛋白的核酸(当与DNA结合时抑制基因表达的果蝇Polycomb群蛋白质；该分析对任一融合蛋白质均起作用)，在Tet-Off转录调节系统(Gossen and Bujard，1992)控制下稳定转染。这些细胞在下文抗阻抑物活性分析中称作报道细胞。提供潮霉素抗性的报道质粒位于四个LexA操纵基因位点与控制zeocin抗性基因的SV40启动子之间含有一个多接头序列。可以将测试抗阻抑物活性的序列克隆在所述多接头中。合适的报道质粒如pSelect的构建在WO 00/004704的实施例1和图1中描述。将该报道质粒转染进报道细胞中，将该细胞在潮霉素选择(25μg/ml；针对报道质粒的存在而选择)和四环素抑制(强力霉素，10ng/ml；防止LexA-阻抑物融合蛋白表达)下培养。在这些条件下生长一周后，将强力霉素的浓度降低至0.1ng/ml(或更低)以诱导LexA-阻抑物基因，两天后加入250μg/ml的zeocin。将细胞培养5周，直至对照培养物(用空白报道质粒转染，即在多接头中没有克隆的抗阻抑物序列)被zeocin杀死(在这个对照质粒中，SV40启动子被与LexA操纵位点结合的LexA-阻抑物融合蛋白抑制，导致在这种细胞中无效的zeocin表达，以在zeocin选择中存活)。如果一个序列克隆在报道质粒的多接头中，所述报道细胞在zeocin选择下存活5周，则所述序列具有本发明的抗阻抑物活性。这种集落的细胞在zeocin选择5周后仍可以在含有zeocin的新培养基上增殖，而用没有抗阻抑物序列的报道质粒转染的细胞在含有zeocin的新培养基上不能增殖。在这个分析中在5周后不能赋予在zeocin上这种生长的任何序列不能认为是本发明具有抗阻抑物活性的序列或者其功能片段或者功能衍生物。例如，已知的边界序列如Van der Vlag等(2000)测试的那些序列，包括果蝇scs(Kellum and Schedl，1991)、鸡β-球蛋白基因座的5’-HS4(Chung et al，1993，1997)或者MatrixAttachment Regions(MARs)(Phi-Van et al.，1990)，在这个分析中不存活。

另外，当与报道基因两侧无抗阻抑物或者具有较弱的阻抑封闭序列如Drosophila scs相对比时，优选位于整合进U-2OS或CHO细胞基因组中的报道基因(例如荧光素酶，GFP)两侧的所述抗阻抑物序列或者其功能片段或者衍生物产生较高比例的报道基因过表达克隆。这可以使用例如pSDH载体或者相似的载体证实，如WO03/004704的实施例1和图2所述。

本发明的抗阻抑物元件可具有生产蛋白质的三个结果的至少一个：(1)在工业可接受水平提高鉴别表达蛋白质的宿主细胞系的可预测性；(2)使得宿主细胞系的蛋白质产量增加；和/或(3)使得宿主细胞系在延长的培养期间呈现更稳定的蛋白质产生。这些特性在下文更详细地论述：(1)可预测性提高：转基因表达盒的整合可以在整个宿主细胞基因组的随机位置发生。然而，许多基因组是转录沉默的异染色质。当所述表达盒在转基因两侧包括抗阻抑物元件时，整合的位置对表达具有减弱的作用。所述抗阻抑物元件削弱相邻异染色质使转基因沉默的能力。因此，含有可接受表达水平的转基因的宿主细胞比例增加。当转染同量的DNA时，抗阻抑物序列的掺入与无抗阻抑物序列的相同转基因相比确实导致多至10倍的集落建立。

(2)产量：在转基因整合后立即测定原始重组宿主细胞群中蛋白质的表达水平。群体中的个体表达水平不同。然而，当所述转基因被抗阻抑物元件保护时，可变性降低。这种降低的可变性在回收低水平表达的较少克隆中是最显著的。另外，具有抗阻抑物元件的群体通常具有显著高水平表达的个体。这些高产量的个体对于蛋白质的产生是有利的，无论对于收获还是改变细胞或者包含这种细胞的生物体的表型均有利。

(3)增加的稳定性：抗阻抑物元件增加重组宿主细胞系中转基因的稳定性，通过保证转基因在延长的培养期间不被转录沉默而实现。对比试验表明，在未被抗阻抑物元件保护的转基因逐渐沉默的条件下(5-25传代培养)，抗阻抑物元件保护的转基因持续高水平表达。这在蛋白质样分子的工业化生产期间是有利的，在此期间细胞培养时间持续延长，从几周延长至几个月。相似地，延长期间的表达稳定性在由于抗阻抑物保护的转基因的重组表达而产生的表型改变的植物或动物中是有利的。

STAR67

本发明提供了具有抗阻抑物活性的新序列，其被称作STAR67(SEQ.ID.NO.66)。当将这种抗阻抑物序列置于驱动感兴趣基因表达的启动子的上游时明显增加表达，如本发明提供的实施例所揭示，而迄今为止已知的有效抗阻抑物序列如STAR6或者STAR7看起来在这种构型中不太有利(它们特别在位于在转基因两侧时起作用，即当位于转基因的上游和下游时)。因此，STAR67提供了已知的抗阻抑物序列的一种替代，当其被置于启动子上游时与已知的这类抗阻抑物序列相对比时具有增加的益处。STAR67不是增强子-阻断剂，与测试这种性质的其它抗阻抑物序列相反(Kwaks et al，2003)，其提供了STAR67与其它以前公开的抗阻抑物序列之间的另一种不同之处。STAR67可以双向方式操纵，如实施例7所示。根据本发明，表达盒中STAR67序列的存在提供了改良的可预测性和/或产量和/或表达稳定性。本发明论证了STAR67与多种启动子组合在不同细胞系中起作用。

表达盒

本发明的核酸分子，包括STAR67，可以是任何形式，例如是DNA片段，任选存在于克隆载体如质粒、优选表达载体上，并且可用于例如使用标准重组DNA技术进行克隆。在本发明优选的实施方案中，核酸包含表达盒，其可用于在例如宿主细胞中表达感兴趣的序列。

如本文所用，“表达盒”是指包含与希望表达的序列功能性连接的至少一个启动子的核酸序列，希望表达的序列优选是编码全部或部分感兴趣蛋白质的开放读框。所述启动子优选对于所述感兴趣核酸而言是异源启动子，异源启动子是指不是所述感兴趣序列的天然启动子的启动子。换而言之，已经使用了一些人类干预形式例如分子克隆将异源启动子与感兴趣核酸功能组合，在本文中异源启动子可以衍生自与感兴趣序列相同或者不同的生物体。优选地，表达盒进一步含有转录终止和聚腺苷酸化序列。也可以包括其它调节序列如增强子。本发明的表达单位进一步包含至少一个抗阻抑物序列，如STAR67。在某些优选的实施方案中，所述抗阻抑物序列，优选STAR67，被置于所述启动子的上游，优选所述抗阻抑物序列的3’末端与启动子序列起始点之间间隔少于2kb。在优选的实施方案中，所述抗阻抑物序列的3’末端与启动子序列的起始点之间间隔少于1kb，更优选少于500个核苷酸(nt)，更优选少于大约200、100、50或者30个nt。在某些优选的实施方案中，所述抗阻抑物序列直接克隆在启动子的上游，导致抗阻抑物序列的3’末端与启动子序列起始点之间仅间隔大约0-20个nt。

为了获得编码重组蛋白质的核酸序列的表达，本领域技术人员熟知可以将能驱动这种表达的序列与编码所述蛋白质的核酸序列功能性连接，产生可表达形式的编码重组蛋白质的重组核酸分子。通常，所述启动子序列置于编码感兴趣蛋白质的序列的上游。可用的表达载体可在本领域获得，例如Invitrogen的pcDNA和pEF载体系列，BD Sciences的pMSCV和pTK-Hyg，Stratagene的pCMV-Script等等。

在编码感兴趣多肽的序列正确插入控制编码的多肽的转录和翻译的序列中的情况中，所得表达盒可用于产生感兴趣蛋白质，这即称作表达。驱动表达的序列可包括启动子、增强子等，及其组合。这些序列应能在宿主细胞中起作用，从而驱动与其功能性连接的核酸序列的表达。本领域技术人员知道可以使用多种启动子获得感兴趣基因在宿主细胞中的表达。启动子可以是组成型或者被调节的，可以得自多种来源，包括病毒、原核生物或者真核生物来源，或者是人工设计的。感兴趣核酸的表达可以从天然启动子或其衍生物或者从完全异源的启动子中表达(Kaufman，2000)。用于在真核细胞中表达的一些熟知和常用的启动子包含衍生自病毒如腺病毒的启动子，例如E1A启动子，衍生自巨细胞病毒(CMV)的启动子，如CMV立即早期(IE)启动子(在本文称作CMV启动子)(可得自例如pcDNA，Invitrogen)，衍生自猿猴病毒40(SV40)的启动子(Das et al，1985)等等。合适的启动子也可以衍生自真核细胞，如金属硫蛋白(MT)启动子，延伸因子1a(EF-1α)启动子(Gill et al.，2001)，遍在蛋白C或UB6启动子(Gill et al.，2001；Schorpp et al，1996)，肌动蛋白启动子，免疫球蛋白启动子，热激启动子等等。适合本发明的在真核细胞中获得表达的一些优选启动子是CMV启动子，哺乳动物EF1-α启动子，哺乳动物遍在蛋白启动子如遍在蛋白C启动子，或者SV40启动子(例如可得自pIRES，cat.no.631605，BD Sciences)。测试启动子功能和强度由本领域技术人员常规进行，通常可例如包括在启动子序列之后克隆一个测试基因如lacZ、荧光素酶、GFP等，并测试该测试基因的表达。当然，启动子可以通过对序列进行缺失、添加、突变而改变，并测试其功能性以发现新的弱化的或者改良的启动子序列。

本发明的表达盒可以是单顺反子、双顺反子或者多顺反子的。术语“双顺反子基因”是指能提供编码两种蛋白质/多肽的RNA分子的基因。术语“单顺反子基因”是指能提供编码一种蛋白质/多肽的RNA分子的基因。术语“多顺反子基因”是指能提供编码两或多种蛋白质/多肽的RNA分子的基因，双顺反子基因因此包含在多顺反子基因的范畴内。本发明所用术语“基因”可包含染色体DNA，cDNA，人工DNA，其组合等，并且也可以是其它核酸形式，例如RNA。在某些实施方案中，蛋白质表达单位包含一个多顺反子基因。包含一些顺反子的单位可以转录为单一mRNA。该RNA上存在的第二个及其它编码区的翻译可以多种方式实现，包括使用翻译再引发位点或者内在核糖体进入位点，优选后者。双或多顺反子单位的一个优势是可以易于选择表达感兴趣蛋白质的克隆，通过将编码可选择标记蛋白的核酸置于编码感兴趣蛋白质或多肽的核酸下游而进行。

对于多聚体蛋白质的产生，可以使用两或多个表达盒。这个实施方案经证实提供良好结果，例如抗体重链和轻链的表达。根据本发明，至少一种表达盒，但优选每种表达盒，均应包含STAR序列。在另一个实施方案中，多聚体蛋白质的不同亚单位或部分存在于一个表达盒中。

代替或除了置于表达盒中启动子上游的抗阻抑物序列的存在之外，在表达盒的两侧具有抗阻抑物序列经证实是非常有益的，这样包含转基因的表达盒的两侧具有两个抗阻抑物序列，这两个序列在某些实施方案中基本上彼此相同。当然，这也可以用STAR67进行，获得在两侧具有两个STAR67序列的表达盒。表达盒中一个STAR67序列的其它位置例如在转基因之后也是可能的，优选在转录终止和聚腺苷酸化信号之后，STAR67序列的3’末端面对转基因。

本发明的表达盒可任选包含一个选择标记基因。术语“选择标记或者可选择标记”典型用于描述其存在可以直接或者间接在细胞中检测的基因和/或蛋白质，例如使选择剂失活并且保护宿主细胞免于该制剂的致死或者生长抑制作用的基因和/或蛋白质(例如抗生素抗性基因和/或蛋白质)。另一种可能性是所述选择标记诱导荧光或者颜色沉积(例如绿色荧光蛋白及衍生物，荧光素酶，lacZ，碱性磷酸酶等等)。在某些实施方案中，用于本发明的选择标记是zeocin，对于选择第二种表达盒使用嘌呤霉素。本领域技术人员已知可以获得及利用其它选择标记，例如新霉素、杀稻瘟素、嘌呤霉素、博来霉素、潮霉素、dhfr等等。

术语“选择”典型是指使用选择标记/可选择标记和选择剂鉴别具有特殊遗传性质的宿主细胞的过程(例如宿主细胞含有整合进其基因组中的转基因)。本领域技术人员明白可以将选择标记组合。可能的抗生素例子如上文提供。特别有利的一种抗生素是zeocin，因为zeocin-抗性蛋白(zeocin-R)通过结合药物并使其无害而起作用。因此，易于滴定测定杀死低水平表达zeocin-R的细胞的药物量，同时使得高水平表达的细胞存活。常用的所有其它抗生素抗性蛋白是酶，并因此通过催化起作用(与药物不是1∶1)。当进行两步选择时，因此优选使用具有这种1∶1结合作用模式的抗生素抗性蛋白。因此，抗生素zeocin是优选的选择标记。为方便起见，在两步选择方法中，zeocin抗生素可以组合例如嘌呤霉素、杀稻瘟素或者潮霉素，例如可存在于单顺反子基因中。

也可以将抗生素选择标记与提供诱导荧光或者提供颜色沉积的选择标记组合。可以使用不同的启动子，只要其在使用的细胞中起作用即可。

在某些实施方案中，提供了一种表达盒，其在例如感兴趣蛋白质的开放读框与选择标记开放读框之间具有(弱)内在核糖体结合位点(IRES)作为具有降低翻译效力的蛋白质翻译起始位点的例子。蛋白质从IRES元件中的翻译比帽依赖性翻译的效力低：从IRES依赖性开放读框(ORF)中翻译的蛋白质的量比从第一个ORF中翻译的蛋白质的量低20％-50％(Mizuguchi et al.，2000)。另外，IRES元件的突变可以使其活性弱化，并使从IRES依赖性ORF中的表达降低至低于从第一个ORF中表达的10％(Lopez de Quinto & Martinez-Salas，1998，Rees et al.，1996)。当IRES依赖性ORE编码一种可选择标记蛋白时，其相对低翻译水平意味着必须存在绝对高的转录水平以选择重组宿主细胞。因此，选择的重组宿主细胞分离株必需表达高量的转基因mRNA。因为重组蛋白质是从帽依赖性ORF中翻译的，因此其可以大量产生，导致高产物产量。

常规的表达系统是重组质粒或者重组病毒基因组形式的DNA分子。通过本领域已知方法将质粒或者病毒基因组导入(真核宿主)细胞中，并优选整合进其基因组中。在优选的实施方案中，本发明还使用这些类型的DNA分子输送其改良的转基因表达系统。本发明的一个优选实施方案是使用质粒DNA输送表达系统。质粒含有许多成分：本领域已知的常规成分是复制起点和可选择标记以使得质粒在细菌细胞中增殖；在真核细胞中起作用以鉴别和分离携带整合的转基因表达系统的宿主细胞的可选择标记；编码感兴趣蛋白质的核酸，其高水平转录通过在真核细胞中起作用的启动子进行(例如人巨细胞病毒主要立即早期启动子/增强子，pCMV(Boshart et al.，1985)；及感兴趣的转基因和可选择标记的转录终止子(例如SV40聚腺苷酸化位点(Kaufman & Sharp，1982)。使用的载体可以是适于克隆DNA并且可用于转录感兴趣核酸的任何载体。当使用宿主细胞时，优选所述载体是一种整合载体。或者，所述载体可以是附加型复制载体。

图1提供了表达盒的可能构型的一些非限制性示意图。这是质粒中以及整合进基因组中之后表达盒的DNA元件的构型。构建体A含有包含编码蛋白质的开放读框的一个表达单位(基因)。其位于弱化的EMCV IRES(Martinez-Salas et al 1999；Mizuguchi et al 2000；Rees et al 1996)和编码zeocin抗性可选择标记蛋白(zeo)的开放读框的上游。所述基因盒在其3’末端具有SV40转录终止子(t)。这种双顺反子转基因从CMV启动子中高水平转录。构建体B衍生自构建体A，但是将STAR67克隆在CMV启动子的上游。构建体C衍生自构建体B，但是将两种抗阻抑物元件(在这种情况中是STAR7)克隆在完整表达盒的两侧。

表达盒中抗阻抑物序列的组合

本发明示出组合启动子上游的第一个抗阻抑物元件及表达盒两侧的两个其它抗阻抑物序列提供了极佳的结果。特别地，当在CHO细胞中使用SV40启动子时，在没有抗阻抑物序列的条件下表达已经非常高，但是当将STAR67置于所述启动子上游及在完整表达盒两侧具有两个抗阻抑物元件如STARβ、STAR7或STAR 40时，表达显著增强。

因此，本发明的一个目的是提供包含表达盒的重组核酸分子，所述表达盒包含(从5’至3’)：抗阻抑物序列A-启动子-编码感兴趣蛋白质的核酸-抗阻抑物序列B，特征在于所述表达盒在所述抗阻抑物序列A与B之间进一步包含一个抗阻抑物序列C。在一个优选的实施方案中，所述抗阻抑物序列C存在于所述启动子的上游，如上述标题为“表达盒”的段落中描述的构型。抗阻抑物序列A与B之间的表达盒可进一步包含如上述表达盒的元件，例如转录终止子序列、聚腺苷酸化信号、选择标记基因、增强子等等，并且可以是如上述单顺反子、双顺反子或者多顺反子。

抗阻抑物序列A、B和C的两个或所有三个可以相同或所有三个可以不同。抗阻抑物序列A和B可以与抗阻抑物序列C相同或不同。在某些实施方案中，抗阻抑物序列A和B彼此(基本)相同。在一个实施方案中，抗阻抑物序列C是STAR67或者其功能片段或衍生物。抗阻抑物序列A和B可以是任何抗阻抑物序列，在某些实施方案中包含SEQ.ID.NO.1-65之一或其功能片段或衍生物。在某些实施方案中，表达盒含有一个多顺反子基因，在其优选的实施方案中，所述多顺反子基因包含编码感兴趣蛋白质和选择标记基因的序列。或者，选择标记基因在单独的启动子控制下存在。

在某些实施方案中，在STAR序列A与B之间可以存在第四个抗阻抑物序列D。在这种实施方案中，所述抗阻抑物序列D优选位于编码感兴趣蛋白质的核酸的下游。再者，这个抗阻抑物序列D与重组核酸分子中的其它抗阻抑物序列可以相同或不同，其可以是任何抗阻抑物序列，在某些实施方案中其选自SEQ.ID.NO.1-66任一序列或其功能片段或衍生物。

由于至少一些抗阻抑物序列可以是有方向的(WO 00/004704)，因此在表达盒两侧的抗阻抑物序列(抗阻抑物序列A和B)可以彼此相反方向放置，由此这些抗阻抑物的3’末端向内面向表达盒(及彼此向内面向)。因此，在优选的实施方案中，抗阻抑物元件的5’末端面向DNA/染色质，其对转基因的影响通过所述抗阻抑物元件而降低。对于表达盒中启动子上游的抗阻抑物序列而言，3’末端面向启动子。除非特别指出，则序列表中的抗阻抑物元件的序列(SEQ.ID.NO.1-66)是以5’至3’方向提供的。

本发明的细胞

包含本发明的STAR序列和/或表达盒的核酸分子可用于改良核酸的表达，优选在宿主细胞中的表达。术语“细胞‘V’宿主细胞”及“细胞系‘V’宿主细胞系”典型分别是指通过本领域已知的方法在细胞培养中可以保持并且具有表达异源或者同源蛋白质的能力的细胞及其同种群。本发明的宿主细胞优选是真核细胞，更优选是哺乳动物细胞，如啮齿动物细胞或者人细胞或者不同细胞的融合体。在某些非限制性实施方案中，所述宿主细胞是U-2OS骨肉瘤、CHO(中国仓鼠卵巢)、HEK 293、HuNS-1骨髓瘤、WERI-Rb-1成视网膜细胞瘤、BHK、Vero、非分泌性小鼠骨髓瘤Sp2/0-Ag 14、非分泌性小鼠骨髓瘤NSO、NCI-H295R肾上腺癌或者PER.细胞。

在本发明的某些实施方案中，宿主细胞是表达腺病毒的至少E1A、优选也表达E1B的细胞。作为非限制性的例子，这种细胞可以衍生自例如人体细胞，例如衍生自肾(例如HEK 293细胞，见Graham et al，1977所述)、肺(例如A549，见例如WO 98/39411所述)或者视网膜(例如HER细胞，商品名为PER.

见美国专利5,994,128所述)，或者衍生自羊水(例如N52.E6，见美国专利6,558,948所述)及相似地衍生自其它细胞。获得这种细胞的方法见例如美国专利5,994,128和US 6,558,948所述。本发明应用的PER.

细胞是在ECACC保藏号为96022940的细胞的上游或下游传代或者上游或下游传代的后代。先前已经示出这种细胞能高水平表达蛋白质(例如WO 00/63403及Jones et al，2003所述)。

表达本发明所需蛋白质的这种宿主细胞可以通过将本发明的核酸分子、优选表达盒形式导入细胞中而获得。在另一个实施方案中，将STAR67序列定向整合进染色体区域中以改良已经整合进该基因组中的感兴趣基因的表达，例如天然发生的基因，任选在靶向所述基因上游的异源启动子控制下调节所述基因的表达。

优选地，所述宿主细胞来自可以根据本领域技术人员已知的标准方法选择和增殖的稳定克隆。这种克隆的培养物能产生感兴趣的重组蛋白质。本发明的细胞优选能在无血清的培养基中悬浮生长。

本发明的感兴趣蛋白质可以是任何蛋白质，可以是单体蛋白质或者多聚体蛋白质。多聚体蛋白质包含至少两个多肽链。感兴趣蛋白质的非限制性例子是酶、激素、免疫球蛋白链、治疗性蛋白质如抗癌蛋白质、血液凝聚蛋白如因子VIII，、多功能蛋白质如红细胞生成素、诊断性蛋白质、或者用于接种目的的蛋白质或其片段，所有这些蛋白质均为本领域技术人员所已知。

在某些实施方案中，本发明的表达盒编码免疫球蛋白重链或轻链或其抗原结合部分、衍生物和/或相似物。在一个优选的实施方案中，提供了本发明的蛋白质表达单位，其中所述感兴趣蛋白质是免疫球蛋白重链。在另一个优选的实施方案中，提供了本发明的蛋白质表达单位，其中所述感兴趣蛋白质是免疫球蛋白轻链。当这两种蛋白质表达单位存在于同一(宿主)细胞中时，装配成多聚体蛋白质，更特别地装配成抗体。因此在某些实施方案中，感兴趣蛋白质是免疫球蛋白，如抗体，其是多聚体蛋白质。优选地，这种抗体是人或人源化抗体。在其某些实施方案中，这种抗体是IgG、IgA或者IgM抗体。免疫球蛋白可以由不同表达盒或者一个表达盒上的重链和轻链编码，其中编码每个链的基因可以在多顺反子转录单位中单独启动子的控制下，或者这两个链均可在多顺反子基因上编码。

感兴趣蛋白质可以来自任何来源，在某些实施方案中是哺乳动物蛋白质，人工蛋白质(例如融合蛋白或者突变蛋白)，优选是人蛋白质。

显而易见，当最终的目的不是生产蛋白质而是RNA自身时，也可以使用本发明的抗阻抑物序列和表达盒构型，例如从表达盒中生产增加数量的RNA，这可用于调节其它基因(例如RNAi，反义RNA)、基因治疗、体外蛋白质产生等目的。

生产感兴趣蛋白质的方法

一方面，本发明提供了一种表达感兴趣序列、优选编码感兴趣蛋白质的序列的方法，通过提供具有本发明的核酸分子或者表达盒的宿主细胞、培养该细胞并表达感兴趣序列而进行。

术语“表达”典型用于描述细胞中特异的一或多种RNA产物或者特异的一或多种蛋白质的产生。在RNA产物的情况中，表达是指转录过程。在蛋白质产物的情况中，表达是指转录、翻译及任选翻译后修饰(例如糖基化、二硫键形成等)的过程。在分泌的蛋白质的情况中，表达是指转录、翻译、及任选翻译后修饰及随后的分泌过程。

导入要在细胞中表达的核酸可以通过如本领域技术人员已知的几种方法之一进行，也依赖于导入的核酸的形式。所述方法包括但不限于转染、感染、注射、转化等。

对细胞进行培养是使其能代谢和/或生长和/或分裂和/或产生感兴趣的重组蛋白质。这种培养可以通过本领域技术人员熟知的方法实现，包括但不限于为细胞提供营养。所述方法包括附着在表面生长、悬浮生长或其组合。培养可以例如在培养皿、滚瓶或者在生物反应器中进行，使用分批培养、补料分批培养、持续系统如灌注系统等方式进行。为了达到在细胞培养期间大规模(持续)产生重组蛋白质，优选使细胞能悬浮生长，及优选使细胞能在无得自动物或人的血清或者得自动物或人的血清成分的条件下培养。

生长或者繁殖细胞的条件(见例如Tissue Culture，Academic Press，Kruse and Paterson，editors(1973))及表达重组产物的条件为本领域技术人员所已知。通常，使哺乳动物细胞培养物的生产力最大化的原理、方案及实践技术可见于Mammalian Cell Biotechnology：aPractical Approach(M.Butler，ed.，IRL Press，1991)所述。

在一个优选实施方案中，从细胞或者培养基或者这两者中收集(分离)表达的蛋白质。然后使用本领域技术人员通常已知的方法进一步纯化，例如通过过滤、柱层析等。

新的选择方法

本发明揭示了一种产生表达两种感兴趣多肽的宿主细胞的新方法，所述方法提供了令人惊奇的良好结果，不使用抗阻抑物序列则几乎没有或没有集落出现，而存在抗阻抑物序列则导致克隆在选择下存活，这些克隆通常高水平表达感兴趣的两种多肽(实施例7，图11)。本发明因此提供了一种产生表达两种感兴趣多肽的宿主细胞的方法，所述方法包括：a)向宿主细胞中导入一或多种核酸分子，所述核酸分子包含：(i)与编码第一种感兴趣多肽和第一种可选择标记基因的序列功能性连接的启动子，及(ii)与编码第二种感兴趣多肽和第二种可选择标记的序列功能性连接的启动子，及(iii)至少一种抗阻抑物序列，其选自：(a)SEQ.ID.NO.1-66任一序列，(b)SEQ.ID.NO.1-66任一序列的片段，所述片段具有抗阻抑物活性，(c)与(a)或(b)至少70％相同并具有抗阻抑物活性的序列，及(d)与(a)-(c)任一序列互补的序列；b)通过基本上同时选择表达所述第一种和第二种可选择标记基因而选择宿主细胞。选择的宿主细胞可便利地用于表达所述两种多肽，通过培养所述选择的宿主细胞进行。在一个实施方案中，两种核酸分子用于导入宿主细胞中，所述分子之一含有(i)，另一分子含有(ii)。在这个实施方案中，每个核酸分子优选含有至少一种所述抗阻抑物序列。在另一个实施方案中，使用含有(i)和(ii)两者的一个核酸分子，其然后必须含有至少一个所述抗阻抑物序列。在一个核酸分子上具有这两种多肽的编码序列的一个优势是在将核酸导入细胞之前仅需要一种核酸制品。另外，在这种实施方案中，一次整合对于两种多肽的编码序列即足够，从而避免了编码第一种多肽的核酸与编码第二种多肽的核酸整合位置不同或者具有不同拷贝数的可能性。在优选的实施方案中，所述两种多肽可以形成多聚体蛋白质如免疫球蛋白的部分。所述方法因此特别适于表达抗体。所述两个启动子可以相同或不同，可以是前述任何启动子。当使用含有(i)和(ii)两者的一个核酸分子时，这一个核酸分子上的两个转录单位的方向可例如是同向的或者彼此面向反向或者彼此向外反向的。在后者情况中，所述抗阻抑物序列可以置于两个启动子之间(例如图HB所示)。适合本发明这方面的一个抗阻抑物序列是SEQ.ID.NO.66(见实施例7)，但是其它抗阻抑物序列也可以起作用。这可易于由本领域技术人员使用本文揭示的方法测试，因此本发明这方面使用其它抗阻抑物序列也包含在本发明范围内。另外，抗阻抑物序列可以添加在一或两个转录单位两侧。标记基因必须是不同的，可例如选自如前述的标记基因。在某些实施方案中，一种可选择标记是zeocin，另一可选择标记是例如嘌呤霉素。然而，应清楚可以使用其它组合，这也包含在本发明这方面范围内。标记的表达应优选依赖于感兴趣多肽的表达。这可以通过将标记基因的表达与感兴趣多肽的表达联系起来而建立，例如使用多顺反子基因进行，例如使用如前述IRES序列。“基本上同时”选择是指至少在部分时间、优选至少一天、更优选至少两天、更优选至少五天，这两种选择剂均存在，这可以通过将这两种选择剂同时加入培养基中或者加入包含这两种选择剂的培养基而进行(例如实施例7所述)。应清楚在第一种选择剂已经存在于培养基中之后只是几小时或几天加入第二种选择剂在本发明仍意味着是基本上同时选择。这种情况有别于其中将细胞首先用第一种选择剂选择，一旦集落形成则将细胞在加入了第二种选择剂而没有第一种选择剂的新的培养基上选择的情况(连续选择，例如实施例5和WO 03/106684所述)。通过基本上同时选择这两种可选择标记，本发明令人惊奇地提供了快速和强力的选择，从而消除了许多低产量的克隆，明显降低了发现具有所需表达特性的克隆的工作量。这对于生物技术工业特别有利，该行业在鉴别具有高表达水平的所需克隆之前通常需要筛选几百甚至几千个集落。

另外，该系统提供了测试抗阻抑物元件、至少STAR67但也可以是其它抗阻抑物序列在这个系统中起作用的部分的功能性的可能性。这个简单筛选在许多情况中提供了几乎或者甚至完全显而易见的差异，因此有助于鉴别抗阻抑物序列的功能部分或衍生物，和/或有助于鉴定新的抗阻抑物序列。所述筛选甚至可用于发现新的抗阻抑物和/或表达增强序列(因为这种类型的筛选不是仅针对抗阻抑物活性而是针对增强表达的活性进行选择，因此其也可以发现具有后者而非前者活性的序列)。因此，本发明的另一方面提供了一种鉴别抗阻抑物和/或表达增强序列或其功能片段或衍生物的方法，所述方法包括：a)向宿主细胞中导入一或多种核酸分子，所述一种核酸分子或多种核酸分子一起包含：(i)与第一种可选择标记基因功能连接的启动子，及(ii)与第二种可选择标记功能连接的启动子，及(iii)要测试抗阻抑物和/或表达增强活性的至少一个序列；b)通过基本同时选择所述第一种和第二种可选择标记基因的表达选择宿主细胞。经过这种筛选存活的细胞很可能含有功能性抗阻抑物和/或表达增强元件。然后对这种元件可易于进一步分析，例如通过确定其序列和/或通过将其进行如上述抗阻抑物活性的其它功能测试而分析。在一个实施方案中，(i)和(ii)均在一个核酸分子上，例如由启动子分隔(第一个和第二个可选择标记向外反向)，在此之间可以克隆测试序列以进行分析。优选地，所述可选择标记基因不是高表达的，例如通过使用相对弱启动子直接驱动可选择标记基因，所述相对弱启动子是已知的和/或可以由本领域技术人员通过常规分析鉴别，或者例如使用强启动子进行转录，及使用IRES、优选如前述相对弱的IRES翻译标记基因。所述标记基因也可以便利地置于编码多肽的核酸序列的下游，并在多顺反子基因中例如通过IRES与其表达连接(例如实施例7所述，图11示出可能的构型)。这种多肽可同样是感兴趣的多肽，由此获得表达所述感兴趣多肽的直接可用克隆，但对于筛选目的也可以是其表达可易于量化的标记，例如GFP或其衍生物、SEAP、lacZ、荧光素酶等等。在这种组合中，多肽的表达可以直接量化以挑选在同时选择期间提供足够的集落及提供高转录水平的抗阻抑物和/或表达增强元件或其片段。当“随机”核酸(即仍未知其具有抗阻抑物或表达增强活性的核酸)，例如基因组片段形式，用作测试序列测试抗阻抑物和/或表达增强活性时，可以发现新的抗阻抑物和/或表达增强序列。当测试已知抗阻抑物序列时，这个分析可用于对其进一步鉴定。当测试已知抗阻抑物序列的片段时，所述分析将提供这种已知抗阻抑物序列的功能片段。

除非特别指出，实践本发明应用本领域技术人员已知的免疫学、分子生物学、微生物学、细胞生物学及重组DNA等常规技术。见例如Sambrook，Fritsch and Maniatis，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，2^nd edition，1989；Current Protocols in MolecularBiology，Ausubel FM，et al，eds，1987；the series Methods inEnzymology(Academic Press，Inc.)；PCR2：A Practical Approach，MacPherson MJ，Hams BD，Taylor GR，eds，1995；Antibodies：ALaboratory Manual，Harlow and Lane，eds，1988所述。

本发明在如下实施例中得以进一步解释。所述实施例非以任何方式限制本发明。所述实施例只是为了阐明本发明。

实施例

实施例1：STAR67载体的构建

使用如WO 03/004704所述遗传筛选方法分离到一种新的抗阻抑物序列，将这个新序列称作STAR67(SEQ.ID.NO.66)。测试了STAR67对转基因在哺乳动物细胞中表达的作用。在此我们描述了各种构建体的构建。

材料和方法

产生三种质粒(图1)：

A)CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV对照)，

B)STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)，

C)STAR7-STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(CMV-STAR67 7/7)

构建体A的构建如下所述。将质粒pd2EGFP(Clontech 6010-1)通过在BsiWI位点插入一个接头而修饰，产生pd2EGFP-link。通过退火寡核苷酸GTACGGATATCAGATCTTTAATTAAG(SEQ.ID.NO.67)和GTACCTTAATTAAAGATCTGATAT(SEQ.ID.NO.68)产生的这一接头导入PacI、BglII和EcoRV限制性核酸内切酶位点。这样产生了多克隆位点MCSII用以插入STAR元件。然后使用引物GATCAGATCTGGCGCGCCATTTAAATCGTCTCGCGCGTTTCGGTGATGACGG(SEQ.ID.NO.69)和(AGGCGGATCCGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGG(SEQ.ID.NO.70)扩增pd2EGFP中的一个0.37kb区域，将其插入在pIRES(Clontech 6028-1)的BglII位点，产生pIRES-stuf。这样在MCSI导入AscI和SwaI限制性核酸内切酶的位点，并且作为“填充片段”避免STAR元件与相邻启动子之间的潜在干扰。将pIRES-stuf用BglII和FspI消化以释放由填充片段、CMV启动子、IRES元件(两侧为多克隆位点MCS A和MCSB)及SV40聚腺苷酸化信号组成的DNA片段。将这个片段与通过BamHI和StuI消化产生的pd2EGFP-link的载体主链连接，产生pIRES-link。

如下所述将zeocin抗性基因的开放读框插入pIRES下游的BamHI/NotI位点：通过使用引物GATCGGATCCTTCGAAATGGCCAAGTTGACCAGTGC(SEQ.ID.NO.71)和AGGCGCGGCCGCAATTCTCAGTCCTGCTCCTC(SEQ.ID.NO.72)经PCR从质粒pCMV/zeo(Invitrogen，cat.no.V50120)中扩增zeocin-抗性ORF，用BamHI和NotI消化，并与BamHI/NotI-消化的pIRES-link连接，产生pIRES-link-zeo。将d2EGFP报道ORF导入pIRES-link-zeo中，这通过使用引物GATCGAATTCTCGCGAATGGTGAGCAAGCAGATCCTGAAG(SEQ.ID.NO.73)和AGGCGAATTCACCGGTGTTTAAACTTACACCCACTCGTGCAGGCTGCCCAGG(SEQ.ID.NO.74)扩增pd2EGFP(Clontech 6010-1)，及将EcoRI-消化的d2EGFP表达盒插入pIRES-link-zeo质粒中的EcoRI位点而进行。这样产生构建体A，即CMV-d2EGFP-IRES-Zeo(CMV对照)。

将STAR67克隆在CMV启动子上游AscI位点(在STAR67与启动子之间保留大约15个核苷酸)。这样产生构建体B，即STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)。

还将STAR67置于还含有STAR7(SEQ.ID.NO.7)的表达盒中进行了测试，所述STAR7被定向克隆在5’SalI和XbaI位点以及3’BglII和PacI位点以使STAR7位于整个表达盒的两侧。这是构建体C(CMV-STAR67 7/7)。

实施例2：在稳定转染的CHO细胞中STAR67增强从CMV、EF1α和UB6启动子的表达水平

我们测试了CMV、EF1α和UB6启动子邻近存在STAR67是否影响这些启动子在CHO细胞中的表达水平。用于这个目的的构建体是实施例1所述的构建体A和B(图1)，它们针对各自的启动子进行修饰：

1 CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV对照)

2 STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)

3 EF1α-d2EGFP-ires-Zeo(EF1α对照)

4 STAR67-EF1α-d2EGFP-ires-Zeo(EF1α-STAR67)

5 UB6-d2EGFP-ires-Zeo(UB6对照)

6 STAR67-UB6-d2EGFP-ires-Zeo(UB6-STAR67).

材料和方法

将图1所述质粒中的CMV启动子更换为UB6和EF1α启动子。UB6启动子如下克隆。如实施例1所述，将pd2EGFP质粒的0.37kbDNA填充片段经使用SEQ.ID.NO.69和70引物进行PCR扩增。将所得DNA填充片段克隆进pUB6/V5-His[Invitrogen V250-20]的BglII位点，产生pUB6-stuf。从pUB6-stuf中，将一个AscI-SacI片段克隆进CMV-d2EGFP-IRES-Zeo中，从中除去CMV启动子。

用pEF1α/V5-His[Invitrogen V920-20]作为模板使用引物GATCGGCGCGCCATTTAAATCCGAAAAGTGCCACCTGACG(SEQ.ID.NO.79)和AGGCGGGACCCCCTCACGACACCTGAAATGGAAG(SEQ.ID.NO.80)经PCR扩增EF1α启动子。将PCR片段克隆进CMV-d2EGFP-IRES-Zeo的AscI和PpuMI位点，从中除去CMV启动子。

将中国仓鼠卵巢细胞系CHO-K1(ATCC CCL-61)在HAMS-F12培养基+10％胎牛血清及2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素中在37℃/5％CO₂条件下培养。使用SuperFect(QIAGEN)根据厂商所述将细胞用质粒转染。简而言之，将细胞接种在培养容器中并生长过夜至70-90％铺满。将SuperFect试剂与质粒DNA以6μl/μg比率组合(例如对于10cm Petri培养皿，使用20μgDNA和120μl SuperFect)并加入细胞中。在过夜保温后，将转染混和物用新鲜培养基置换并进一步保温转染的细胞。在过夜培养后，将细胞经胰蛋白酶消化并接种在具有新鲜培养基的新鲜培养容器中。在再次过夜保温之后，加入zeocin至浓度为50μg/ml并进一步培养细胞。过三天后，将培养基用含有zeocin(100μg/ml)的新鲜培养基置换并进一步培养。当可见各个集落时(大约转染后10天)，除去培养基，用无zeocin的新鲜培养基更换。分离各个克隆并移至无zeocin的24孔平板中。在分离集落1天后，向培养基中加入zeocin。在转染后大约3周评定d2EGFP报道基因的表达。两周后测定集落中的d2EGFP表达水平。当在转染后最初的两周后第一次测定d2EGFP时，将集落在无zeocin或者其它抗生素的培养基中培养。这持续至实验结束。

结果

图2示出了与无STAR67的“空白”对照CMV对照相比，含有克隆在CMV启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了许多表达显著较高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。当在转染后25天测定时，用CMV对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为34。在转染后60天，这10个集落中d2EGFP信号平均值降低为13，表明表达随着时间的推移是不稳定的。对比之下，当在转染后25天测定时用STAR67-CMV质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为42，在转染后60天测定时为32。因此在转染后60天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的CMV构建体比CMV启动子驱动的报道蛋白表达水平高2.5倍。重要的是在转染25天后，在第一次测定之后，通过将集落在无zeocin的培养基中培养而除去选择压力。因此，含有STAR67构建体的集落在无选择压力的条件下与不含STAR67构建体的集落相比随着时间的推移是更稳定的。

图3示出了与无STAR67的“空白”对照EF1α对照相比，含有克隆在EF1α启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了表达显著较高水平d2EGFP蛋白的许多CHO集落。当在转染后25天测定时，用EF1α对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为31。在转染后60天，这10个集落中信号平均值为26。对比之下，当在转染后25天测定时用EF1α-STAR67质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为60，在转染后60天测定时为76。因此在转染后25和60天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的EF1α构建体比EF1α启动子驱动的报道蛋白表达水平高2.9倍。

图4示出了与无STAR67的“空白”对照UB6对照相比，含有克隆在UB6启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了许多表达显著较高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。当在转染后25天测定时，用UB6对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为51。在转染后60天，这10个集落中信号平均值为29，表明该表达随着时间的推移是不稳定的。对比之下，当在转染后25天测定时用UB6-STAR67质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为218，在转染后60天测定时为224。因此在转染后25天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的UB6构建体比UB6启动子驱动的报道蛋白表达水平高4.3倍。在60天后高7.7倍，这是由于对照集落的表达不稳定性和UB6-STAR67集落的稳定性所致。重要的是在转染25天后，在第一次测定后，通过将集落在无zeocin的培养基中培养而除去选择压力。因此，含有STAR67构建体的集落在无选择压力的条件下与不含有STAR67构建体的集落相比随着时间的推移是更稳定的。

总之，STAR67增加从三种不同的彼此不相关的启动子的表达。实施例3：在稳定转染的PER.C6细胞中STAR67增强从CMV、EF1α和UB6启动子的表达水平

我们测试了在CMV、EF1α和UB6启动子邻近存在STAR67是否影响这些启动子在除了CHO细胞之外的另一种细胞类型即人PER.C6细胞中的表达水平。使用如实施例1中的相同构建体。

材料和方法

PER.C6细胞的转染、培养和分析

将PER.

细胞在DMEM培养基+吡哆醇+9％胎牛血清(非加热而失活)、8.9mM MgCl₂、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素中在37℃/10％CO₂条件下培养。使用Lipofectamine 2000(Invitrogen)如厂商所述将细胞用质粒转染。简而言之，将细胞接种在6孔平板中并生长过夜至70-90％铺满。将Lipofectamine试剂与质粒DNA以15μl/3μg比率组合(例如对于10cm Petri培养皿，使用20μg DNA和120μl Lipofectamine)，在25℃保温30分钟之后加入细胞中。在保温β小时之后，将转染混合物用新鲜培养基置换，并进一步保温转染的细胞。在培养过夜后，将细胞经胰蛋白酶消化并接种于(1∶15、1∶30、1∶60、1∶120稀释)新鲜petri培养皿(90mm)中的含有100μg/ml浓度的zeocin的新鲜培养基，进一步培养细胞。当可见集落时，通过刮擦分离各个集落并移至24孔平板中的含有zeocin的培养基中。当生长至大约70％铺满时，将细胞移至6孔平板中。将稳定的集落在6孔平板中扩增2周，之后在XL-MCL Beckman Coulter流式细胞计量仪上确定d2EGFP信号。取d2EGFP信号的平均值作为d2EGFP表达水平的量值。2周后对集落再次测量。之后将集落在无zeocin的条件下进一步培养。

结果

图5示出了与无STAR67的“空白”对照CMV对照相比，含有克隆在CMV启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了许多表达显著较高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。当在转染后30天测定时，用CMV对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为37。在转染后60天，这10个集落中信号平均值降低为14，表明该表达随着时间的推移是不稳定的。对比之下，当在转染后30天测定时用STAR67-CMV质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为101，在转染后60天测定时为45。因此在转染后60天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的CMV构建体比CMV启动子驱动的报道蛋白表达水平高3.2倍。

图6示出与无STAR67的“空白”对照EF1α对照相比，含有克隆在EF1α-启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了许多表达显著较高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。在转染30天后测定时，用EF1α对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为5。在转染60天后这10个集落中d2EGFP信号平均值为6。对比之下，当在30天后测定时，用EF1α-STAR67质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为25，在转染后60天测定时为20。因此，在转染后30和60天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的EF1α构建体比EF1α启动子驱动的报道蛋白表达水平高4倍。

图7示出与无STAR67的“空白”对照UB6对照相比，含有克隆在UB6启动子上游的STAR67的构建体的转染产生了许多表达显著较高水平d2EGFP蛋白的PER.C6集落。在转染30天后测定时，用UB6对照质粒转染的10个集落中d2EGFP信号的平均值为4。在转染60天后这10个集落中d2EGFP信号平均值为2。对比之下，当在30天后测定时，用UB6-STAR67质粒转染的10个集落中d2EGFP信号平均值为27，在转染后60天测定时为18。因此，在转染后30和60天，在稳定转染的克隆中包含STAR67的UB6构建体比UB6启动子驱动的报道蛋白表达水平高7-9倍。

因此，与无STAR67的构建体相对比，将STAR67置于启动子上游在PER.C6细胞中产生显著较高的蛋白质表达水平。因此STAR67在不同的彼此不相关的细胞类型中均起作用。

实施例4：STAR67组合其它抗阻抑物元件的新构型在CHO细胞中增强SV40启动子

我们测试了SV40启动子邻近单独存在STAR67或者存在STAR67与另一种抗阻抑物元件(在这个实施例中是STAR7)的组合是否影响这个启动子的表达水平。用于这个目的的构建体是(见图8)：

1 SV40-d2EGFP-ires-Zeo(SV40Control)

2 STAR67-SV40-d2EGFP-ires-Zeo(SV40-STAR67)

3 STAR7-SV40-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(SV40-STAR7/7)

4 STAR7-STAR67-SV40--d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(SV40-STAR677/7)

材料和方法

使用pIRES作模板，使用如下引物将SV40启动子经PCR扩增：TTGGTTGGGGCGCGCCGCAGCACCATGGCCTGAAATAACCTCTGAAAGAGG(SEQ.ID.NO.81)和TTGGTTGGGAGCTCAAGCTTTTTGCAAAAGCCTAGGCCTCCAAAAAAGCCTCCTC(SEQ.ID.NO.82)。将PCR片段克隆进CMV-d2EGFP-IRES-Zeo的AscI和SacI位点，从中除去CMV启动子。如实施例2所述转染CHO细胞、分离集落及增殖和分析。

结果

图8示出了与无抗阻抑物元件的“空白”对照(SV40对照)相比，含有克隆在SV40启动子上游的STAR67的构建体(SV40-STAR67)或者含有克隆在完整构建体两侧的STAR7的构建体(SV40-STAR 7/7)的转染不产生表达明显较高水平d2EGFP蛋白的CHO集落。当在转染后40天测定时，用SV40对照质粒转染的18个集落中d2EGFP信号的平均水平为86。对比之下，当在40天后测定用SV40-STAR67质粒转染的18个集落中d2EGFP信号的平均水平为82，在40天后测定用SV40-STAR 7/7质粒转染的18个集落中信号平均水平为91。因此，观测到这些抗阻抑物元件对CHO细胞中SV40启动子无明显作用。

看起来在这些细胞中从SV40启动子的表达水平已经非常高，甚至高于用被认为是非常强的启动子的CMV启动子所观察到的表达水平。这种在CHO细胞中使用SV40启动子在无抗阻抑物元件的条件下的高背景表达，可以解释为什么观察到单独的STAR67或者位于转基因两侧的STAR7无明显作用。

然而，当在40天后测定时，用SV40-STAR67 7/7质粒转染的18个集落中d2EGFP信号的平均水平为209，这比18个对照集落的平均水平(86)高2.4倍。因此，当STAR67元件与另一种抗阻抑物元件组合使用时，产生了许多示出显著较高d2EGFP表达水平的稳定转染的CHO集落。

因此在这种新的构型中(5’-STAR序列A-STAR序列C-启动子-编码感兴趣蛋白质的核酸-STAR序列B-3’，其中在本实施例中STAR序列A和B是STAR 7，STAR序列C是STAR67)，STAR元件的功能看起来均好于迄今为止揭示的构型。

我们进行了其中两侧的STAR7元件由两侧的STAR6元件(SEQ.ID.NO.6)或者两侧的STAR4元件(SEQ.ID.NO.4)置换，组合SV40启动子上游的STAR67(分别为SV40-STAR676/6和SV40-STAR674/4，使用如上述相同命名法)的实验，使用这些组合也观测到改良的表达。这证实了两侧的STAR7元件可以用其它STAR序列置换，并仍观测到具有STAR序列的表达盒的新构型的改良作用。

实施例5：STAR67与STAR7的组合在稳定转染的CHO细胞中增强UB6驱动的抗体表达水平

在实施例4中，我们示出STAR67与STAR7的组合增强了CHO细胞中d2EGFP蛋白的表达水平。在此我们测试了STAR67与STAR7的组合是否可用于产生抗体。我们选择抗EpCAM分子的抗体(Huls etal，1999)作为测试蛋白，并使用UB6启动子。

材料和方法

质粒

将重链cDNA(HC-EpCAM)克隆进包含UB6启动子的构建体中。将HC-EpCAM通过IRES序列与Zeocin抗性基因结合。将轻链cDNA(LC-EpCAM)也克隆进包含UB6启动子的构建体中。将LC-EpCAM通过IRES序列与嘌呤霉素抗性基因结合。这两个质粒代表UB6(HC+LC)对照质粒(图9)。

为了测试STAR67和STAR7的作用，将STAR67克隆进这两个HC+LC构建体中UB6启动子的上游。STAR7克隆在完整表达盒的两侧5’和3’末端(图9)。这两个质粒代表STAR7-STAR67-UB6(HC+LC)STAR7。

CHO细胞的转染和培养

将中国仓鼠卵巢细胞系CHO-K1(ATCC CCL-61)如实施例2所述转染和培养，使用zeocin(100μg/ml)和嘌呤霉素(2.5μg/ml)进行选择。在转染后1天，向培养基中加入zeocin。当可见第一个集落时(大约加入zeocin 7天后)，除去培养基并用含有嘌呤霉素的培养基置换。在大约7天后，分离集落并移至24孔平板中仅含有zeocin的培养基中。

结果

图9示出与没有STAR67和STAR7的“空白”对照UB6(HC+LC)对照相对比，含有克隆在UB6启动子上游的STAR67及克隆在完整表达盒两侧的两个STAR7元件的抗体构建体的转染产生了大量表达显著较高水平EpCAM抗体的CHO集落(使用抗人IgG抗体通过ELISA测定)。当在转染后25天测定时，用UB6(HC+LC)对照质粒转染的18个集落中EpCAM的产量平均为2.7pg/细胞/天。25天后除去选择剂zeocin和嘌呤霉素。转染后45天，这18个集落中EpCAM的产量平均为2.7pg/细胞/天。对比之下，当在转染后25天测定时，用STAR7-STAR67-UB6(HC+LC)-STAR7质粒转染的18个集落中EpCAM产量信号平均为6.7pg/细胞/天，在转染后45天测定时是7.7pg/细胞/天。因此，在转染30和45天后，在稳定转染的CHO克隆中包含STAR67/STAR7的UB6构建体与UB6启动子驱动的EpCAM表达水平相比高2.5-2.9倍。

因此，与不含STAR67/STAR7的构建体相比，将STAR67置于启动子上游及将两个STAR7元件置于表达盒两侧导致CHO细胞中显著较高的EpCAM抗体表达水平。

实施例6：STAR67不是增强子阻断剂(enhancer blocker)，而STAR6和STAR7是增强子阻断剂

已对其性质进行了测试的迄今为止所有已知STAR元件，包括STAR6和STAR7，均是增强子阻断剂(WO 03/004704，Kwaks et al，2003)。增强子阻断剂活性是通过将STAR元件置于强增强子和启动子之间而测试。在此我们测试了STAR67是否是一种增强子阻断剂。

材料和方法

将d2EGFP基因使用引物TTGGTTGGTCATGAATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTC(SEQ.ID.NO.75)和ATTCTCTAGACTACACATTGATCCTAGCAGAAGCAC(SEQ.ID.NO.76)经PCR扩增，并克隆进质粒pGL3-启动子(Promega)中，使用NcoI和XbaI限制位点代替萤光素酶基因以产生质粒pGL3-promoter-GFP。将一接头(通过退火寡核苷酸CGATATCTTGGAGATCTACTAGTGGCGCGCCTTGGGCTAGCT(SEQ.ID.NO.77)和GATCAGCTAGCCCAAGGCGCGCCACTAGTAGATCTCCAAGATATCGAGCT(SEQ.ID.NO.78)而产生)克隆进SacI和BglII位点，产生多克隆位点。原始的BglII位点基于接头的连接而被破坏，产生接头DNA内一新的唯一的BglII位点。使用BsaBI和BamHI将SV40-增强子从质粒pGL3-basic(Promega)中切下，并使用EcoRV和BglII位点克隆进pGL3-linker-promoter-GFP中，产生质粒pGL3-enhancer-promoter-GFP。使用KpnI和SacI位点将STAR40元件(SEQ.ID.NO.40)置于SV40增强子上游，以防止增强子对上游序列的作用。最后，使用SpeI和AscI限制位点将抗阻抑物元件STAR6、STAR7和STAR67置于SV40增强子和SV40最小启动子之间。

CHO细胞的转染和培养

中国仓鼠卵巢细胞系CHO-K1(ATCC CCL-61)如实施例2所述转染。在转染后1天，在Epics XL流式细胞计量仪(Beckman Coulter)上测定d2EGFP水平。

结果

图10示出STAR67不是增强子阻断剂，而STAR6和STAR7在相同分析中发挥增强子阻断剂作用。将STAR6、STAR7和STAR67克隆在d2EGFP基因上游的SV40增强子和最小SV40启动子之间。当在增强子与启动子之间无STAR元件克隆时，发生强转录激活作用(设定为100％)。当STAR6或STAR7置于增强子与启动子之间时，转录降低至背景水平，表明STAR6和STAR7是强增强子阻断剂。相反，当STAR67克隆在增强子与启动子之间时，相对的转录水平仍为对照组的80％，表明STAR67不是好的增强子阻断剂，这与如先前所述的STAR6和STAR 7以及其它抗阻抑物元件(WO 03/004704，Kwaks et al，2003)相反。

实施例7：STAR67增强稳定转染的CHO细胞中UB6和CMV驱动的抗体表达水平

在实施例5中，我们示出使用含有重链和轻链的两种不同的质粒，组合STAR67和STAR7增强CHO细胞中EpCAM抗体表达水平。在本实施例中，我们测试了当重链和轻链被置于一个质粒上时STAR67是否可以用于产生EpCAM抗体。我们针对每个选择标记使用同时选择方法。

材料和方法

质粒

重链cDNA(HC-EpCAM)在UB6启动子的控制下，并通过IRES序列与Zeocin抗性基因结合。轻链cDNA(LC-EpCAM)在CMV启动子的控制下，并通过IRES序列与嘌呤霉素抗性基因结合。基本上这些是实施例5中使用的构建体。将这两种表达盒置于一个质粒上，使这两个表达单位的转录具有相反方向。在对照质粒中，UB6与CMV启动子由一500bp填充片段间隔(EpCAM对照)(图10)。在另一个质粒中，将STAR67置于UB6与CMV启动子之间(EpCAM STAR67)(图10)。

CHO细胞的转染和培养

将中国仓鼠卵巢细胞系CHO-K1(ATCC CCL-61)如实施例2所述转染和培养，使用zeocin(100μg/ml)和嘌呤霉素(2.5μg/ml)进行选择。在实施例5中，使用针对两种选择标记的相继选择方法。相反，在此这两种选择标记同时存在于培养基中。在转染后1天，向培养基中加入zeocin和嘌呤霉素。持续存在选择培养基直至分离集落(转染后大约14天)。在分离集落并移至24孔平板中之后，将细胞在存在zeocin和嘌呤霉素的条件下培养。

结果

图11示出含有克隆在UB6和CMV启动子之间的STAR67的抗体构建体的转染产生了许多表达EpCAM抗体的CHO集落(使用抗人IgG抗体通过ELISA测定)。当在转染后25天测定时，用EpCAM STAR67质粒转染的19个集落中EpCAM产量的平均值为9.8pg/细胞/天。

相反，令人惊奇地，用EpCAM对照质粒转染无集落存活。当只用zeocin或者嘌呤霉素进行选择时，EpCAM对照集落存活。然而，当通过对重链和轻链均施加选择压力而增加选择压力时，这些条件使得只有在转染的质粒中存在STAR67的集落存活。

该结果还示出掺入STAR67对置于一个STAR67元件的上游和下游的两种启动子(UB6和CMV启动子)均具有有益作用。这表明STAR67可以双向方式操纵。

EpCAM对照和EpCAM STAR67质粒之间的差异是显著的，当选择压力较高时，只有EpCAM STAR67转染导致集落建立。这使得有机会使用这种质粒构型鉴别STAR67中介导这种作用的区域。将STAR67的较小的重叠部分置于驱动EpCAM分子的UB6和CMV启动子之间。当STAR67的一部分有功能时，集落在zeocin和嘌呤霉素同时用作选择剂时存活。当STAR67的一部分没有功能时，在相同选择条件下无集落存活。

因此，将STAR67置于启动子上游导致与没有这种抗阻抑物元件的构建体对比在CHO细胞中明显较高的EpCAM抗体表达水平。进行相似实验使用SV40启动子驱动抗-EpCAM抗体的重链和轻链的表达。在其它实验中，将STAR67用其它STAR序列置换。在进一步的实验中，改变编码重链和轻链的两个表达单位的方向，由此这两个单位的方向一致。在另一个实验中，将重链和轻链的表达单位分别置于不同的核酸分子上(如实施例5所述)，对所得克隆针对两个选择标记同时进行选择。在另一个实验中，改变宿主细胞类型。组合这些变化进行实验。

附图描述

图1：：本发明的示意图。

A)含有(从5’至3’)转基因(编码例如d2EGFP基因)、IRES和可选择标记(zeo，赋予zeocin抗性)的在CMV启动子控制下的双顺反子基因。表达单位在其3’末端具有SV40转录终止子(t)。该构建体的名称是CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV对照)。

B)如A的构建体，但是STAR 67克隆在CMV启动子的上游。该构建体的名称是STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo(CMV-STAR67)。

C)如B的构建体，但是上游和下游STAR7元件克隆在完整构建体的两侧。该构建体的名称是STAR7-STAR67-CMV-d2EGFP-ires-Zeo-STAR7(CMV-STAR67 7/7)。

图2：STAR67改良CHO细胞中CMV驱动的d2EGFP表达。对10个单独的稳定集落的d2EGFP信号平均值针对CHO细胞中指定构建体进行绘图。A)CMV对照；B)STAR67-CMV。X(10)：10个集落的平均d2EGFP表达水平。见实施例2详述。

图3：STAR67改良CHO细胞中EF1α驱动的d2EGFP表达。与图2相同，但是使用EF1α启动子。A)EF1α对照；B)STAR67-EF1α。

图4：STAR67改良CHO细胞中UB6驱动的d2EGFP表达。与图2和3相同，但是使用UB6启动子。A)UB6对照；B)STAR67-UB6。

图5：STAR67改良PER.C6细胞中CMV驱动的d2EGFP表达。与图2相同，但是是在PER.C6细胞中。A)CMV对照；B)STAR67-CMV。

图6：STAR67改良PER.C6细胞中EF1α驱动的d2EGFP表达。与图3相同，但是是在PER.C6细胞中。A)EF1α对照；B)STAR67-EF1α。

图7：STAR67改良PER.Cβ细胞中UB6驱动的d2EGFP表达。与图4相同，但是是在PER.C6细胞中。A)UBβ对照；B)STAR67-UB6。

图8：STAR67组合其它STAR元件改良CHO-K1细胞中SV40驱动的d2EGFP表达。与图2相似，但在CHO细胞中使用SV40启动子及指定的构建体。对在转染60天后的18-20个单独的稳定集落的d2EGFP信号进行绘图。A)SV40对照，SV40-STAR67，SV40-STAR7/7；B)SV40对照及SV40-STAR67 7/7。见实施例4详述。

图9：STAR67改良CHO-K1细胞中UB6驱动的EpCAM抗体表达水平。见实施例5详述。A)无STAR元件的构建体；B)具有启动子上游STAR67和两侧STAR7元件的构建体。抗-EpCAM抗体浓度以pg/细胞/天表示。X(18)：18个集落的平均产生水平。

图10：STAR67不是增强子阻断剂，而STAR 6和7是。见实施例6详述。

图11：STAR67增强稳定转染的CHO细胞中UB6和CMV-驱动的抗体表达水平。见实施例7详述。A)含有抗-EpCAM重链(HC)和轻链(LC)的DNA分子，所述重链和轻链均在启动子之后，均与不同的可选择标记基因连接(同时选择用于这两种标记)：无STAR元件的构建体。未发现集落；B)相同构建体，在两个启动子之间具有STAR67。抗-EpCAM抗体浓度以pg/细胞/天表示。X(19)：19个集落的平均产生水平。

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序列表

<110>科罗迈吉尼科斯公司

<120>改良核酸表达的新序列

<130>0111WO 00 ORD

<150>PCT/EP2004/051405

<151>2004-07-08

<160>82

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>749

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR1

<400>1

atgcggtggg ggcgcgccag agactcgtgg gatccttggc ttggatgttt ggatctttct 60

gagttgcctg tgccgcgaaa gacaggtaca tttctgatta ggcctgtgaa gcctcctgga 120

ggaccatctc attaagacga tggtattgga gggagagtca cagaaagaac tgtggcccct 180

ccctcactgc aaaacggaag tgattttatt ttaatgggag ttggaatatg tgagggctgc 240

aggaaccagt ctccctcctt cttggttgga aaagctgggg ctggcctcag agacaggttt 300

tttggccccg ctgggctggg cagtctagtc gaccctttgt agactgtgca cacccctaga 360

agagcaacta cccctataca ccaggctggc tcaagtgaaa ggggctctgg gctccagtct 420

ggaaaatctg gtgtcctggg gacctctggt cttgcttctc tcctcccctg cactggctct 480

gggtgcttat ctctgcagaa gcttctcgct agcaaaccca cattcagcgc cctgtagctg 540

aacacagcac aaaaagccct agagatcaaa agcattagta tgggcagttg agcgggaggt 600

gaatatttaa cgcttttgtt catcaataac tcgttggctt tgacctgtct gaacaagtcg 660

agcaataagg tgaaatgcag gtcacagcgt ctaacaaata tgaaaatgtg tatattcacc 720

ccggtctcca gccggcgcgc caggctccc 749

<210>2

<211>883

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR2

<400>2

gggtgcttcc tgaattcttc cctgagaagg atggtggccg gtaaggtccg tgtaggtggg 60

gtgcggctcc ccaggccccg gcccgtggtg gtggccgctg cccagcggcc cggcaccccc 120

atagtccatg gcgcccgagg cagcgtgggg gaggtgagtt agaccaaaga gggctggccc 180

ggagttgctc atgggctcca catagctgcc ccccacgaag acggggcttc cctgtatgtg 240

tggggtccca tagctgccgt tgccctgcag gccatgagcg tgcgggtcat agtcgggggt 300

gccccctgcg cccgcccctg ccgccgtgta gcgcttctgt gggggtggcg ggggtgcgca 360

gctgggcagg gacgcagggt aggaggcggg gggcagcccg taggtaccct gggggggctt 420

ggagaagggc gggggcgact ggggctcata cgggacgctg ttgaccagcg aatgcataga 480

gttcagatag ccaccggctc cggggggcac ggggctgcga cttggagact ggccccccga 540

tgacgttagc atgcccttgc ccttctgatc ctttttgtac ttcatgcggc gattctggaa 600

ccagatcttg atctggcgct cagtgaggtt cagcagattg gccatctcca cccggcgcgg 660

ccggcacagg tagcggttga agtggaactc tttctccagc tccaccagct gcgcgctcgt 720

gtaggccgtg cgcgcgcgct tggacgaagc ctgccccggc gggctcttgt cgccagcgca 780

gctttcgcct gcgaggacag agagaggaag agcggcgtca ggggctgccg cggccccgcc 840

cagcccctga cccagcccgg cccctccttc caccaggccc caa 883

<210>3

<211>2126

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR3

<400>3

atctcgagta ctgaaatagg agtaaatctg aagagcaaat aagatgagcc agaaaaccat 60

gaaaagaaca gggactacca gttgattcca caaggacatt cccaaggtga gaaggccata 120

tacctccact acctgaacca attctctgta tgcagattta gcaaggttat aaggtagcaa 180

aagattagac ccaagaaaat agagaacttc caatccagta aaaatcatag caaatttatt 240

gatgataaca attgtctcca aaggaacaag gcagagtcgt gctagcagag gaagcacgtg 300

agctgaaaac agccaaatct gctttgtttt catgacacag gagcataaag tacacaccac 360

caactgacct attaaggctg tggtaaaccg attcatagag agaggttcta aatacattgg 420

tccctcacag gcaaactgca gttcgctccg aacgtagtcc ctggaaattt gatgtccagt 480

atagaaaagc agagcagtca aaaaatatag ataaagctga accagatgtt gcctgggcaa 540

tgttagcagc accacactta agatataacc tcaggctgtg gactccctcc ctggggagcg 600

gtgctgccgg cggcgggcgg gctccgcaac tccccggctc tctcgcccgc cctcccgttc 660

tcctcgggcg gcggcggggg ccgggactgc gccgctcaca gcggcggctc ttctgcgccc 720

ggcctcggag gcagtggcgg tggcggccat ggcctcctgc gttcgccgat gtcagcattt 780

cgaactgagg gtcatctcct tgggactggt tagacagtgg gtgcagccca cggagggcga 840

gttgaagcag ggtggggtgt cacctccccc aggaagtcca gtgggtcagg gaactccctc 900

ccctagccaa gggaggccgt gagggactgt gcccggtgag agactgtgcc ctgaggaaag 960

gtgcactctg gcccagatac tacacttttc ccacggtctt caaaacccgc agaccaggag 1020

attccctcgg gttcctacac caccaggacc ctgggtttca accacaaaac cgggccattt 1080

gggcagacac ccagctagct gcaagagttg tttttttttt tatactcctg tggcacctgg 1140

aacgccagcg agagagcacc tttcactccc ctggaaaggg ggctgaaggc agggaccttt 1200

agctgcgggc tagggggttt ggggttgagt gggggagggg agagggaaaa ggcctcgtca 1260

ttggcgtcgt ctgcagccaa taaggctacg ctcctctgct gcgagtagac ccaatccttt 1320

cctagaggtg gagggggcgg gtaggtggaa gtagaggtgg cgcggtatct aggagagaga 1380

aaaagggctg gaccaatagg tgcccggaag aggcggaccc agcggtctgt tgattggtat 1440

tggcagtgga ccctcccccg gggtggtgcc ggaggggggg atgatgggtc gaggggtgtg 1500

tttatgtgga agcgagatga ccggcaggaa cctgccccaa tgggctgcag agtggttagt 1560

gagtgggtga cagacagacc cgtaggccaa cgggtggcct taagtgtctt tggtctcctc 1620

caatggagca gcggcggggc gggaccgcga ctcgggttta atgagactcc attgggctgt 1680

aatcagtgtc atgtcggatt catgtcaacg acaacaacag ggggacacaa aatggcggcg 1740

gcttagtcct acccctggcg gcggcggcag cggtggcgga ggcgacggca ctcctccagg 1800

cggcagccgc agtttctcag gcagcggcag cgcccccggc aggcgcggtg gcggtggcgc 1860

gcagccaggt ctgtcaccca ccccgcgcgt tcccaggggg aggagactgg gcgggagggg 1920

ggaacagacg gggggggatt caggggcttg cgacgcccct cccacaggcc tctgcgcgag 1980

ggtcaccgcg gggccgctcg gggtcaggct gcccctgagc gtgacggtag ggggcggggg 2040

aaaggggagg agggacaggc cccgcccctc ggcagggcct ctagggcaag ggggcggggc 2100

tcgaggagcg gaggggggcg gggcgg 2126

<210>4

<211>1625

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR4

<400>4

gatctgagtc atgttttaag gggaggattc ttttggctgc tgagttgaga ttaggttgag 60

ggtagtgaag gtaaaggcag tgagaccacg taggggtcat tgcagtaatc caggctggag 120

atgatggtgg ttcagttgga atagcagtgc atgtgctgta acaacctcag ctgggaagca 180

gtatatgtgg cgttatgacc tcagctggaa cagcaatgca tgtggtggtg taatgacccc 240

agctgggtag ggtgcatgtg gtgtaacgac ctcagctggg tagcagtgtg tgtgatgtaa 300

caacctcagc tgggtagcag tgtacttgat aaaatgttgg catactctag atttgttatg 360

agggtagtgc cattaaattt ctccacaaat tggttgtcac gtatgagtga aaagaggaag 420

tgatggaaga cttcagtgct tttggcctga ataaatagaa gacgtcattt ccagttaatg 480

gagacaggga agactaaagg tagggtggga ttcagtagag caggtgttca gttttgaata 540

tgatgaactc tgagagagga aaaacttttt ctacctctta gtttttgtga ctggacttaa 600

gaattaaagt gacataagac agagtaacaa gacaaaaata tgcgaggtta tttaatattt 660

ttacttgcag aggggaatct tcaaaagaaa aatgaagacc caaagaagcc attagggtca 720

aaagctcata tgccttttta agtagaaaat gataaatttt aacaatgtga gaagacaaag 780

gtgtttgagc tgagggcaat aaattgtggg acagtgatta agaaatatat gggggaaatg 840

aaatgataag ttattttagt agatttattc ttcatatcta ttttggcttc aacttccagt 900

ctctagtgat aagaatgttc ttctcttcct ggtacagaga gagcaccttt ctcatgggaa 960

attttatgac cttgctgtaa gtagaaaggg gaagatcgat ctcctgtttc ccagcatcag 1020

gatgcaaaca tttccctcca ttccagttct caaccccatg gctgggcctc atggcattcc 1080

agcatcgcta tgagtgcacc tttcctgcag gctgcctcgg gtagctggtg cactgctagg 1140

tcagtctatg tgaccaggag ctgggcctct gggcaatgcc agttggcagc ccccatccct 1200

ccactgctgg gggcctccta tccagaaggg cttggtgtgc agaacgatgg tgcaccatca 1260

tcattcccca cttgccatct ttcaggggac agccagctgc tttgggcgcg gcaaaaaaca 1320

cccaactcac tcctcttcag gggcctctgg tctgatgcca ccacaggaca tccttgagtg 1380

ctgggcagtc tgaggacagg gaaggagtga tgaccacaaa acaggaatgg cagcagcagt 1440

gacaggagga agtcaaaggc ttgtgtgtcc tggccctgct gagggctggc gagggccctg 1500

ggatggcgct cagtgcctgg tcggctgcaa gaggccagcc ctctgcccat gaggggagct 1560

ggcagtgacc aagctgcact gccctggtgg tgcatttcct gccccactct ttccttctaa 1620

gatcc 1625

<210>5

<211>1571

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR5

<400>5

cacctgattt aaatgatctg tctggtgagc tcactgggtc tttactcgca tgctgggtcc 60

acagctccac tgtcctgcag ggtccgtgag tgtgggcccc ttatctattt catcatcata 120

accctgcgtg tcctcaactc ctggcacata ttgggtggcc ccatccacac acggttgttg 180

agtgaatcca tgagatgaca aaggctatga tgtagactat atcatgagcc agaaccaggc 240

tttcctacct ccagacaatc aagggccttg atttgggatt gagggagaaa ggagtagaag 300

ccaggaagga gaagagattg aggtttacca agggtgcaaa gtcctggccc ctgactgtag 360

gctgaaaact atagaaatga tagaacaatt ttgcaatgaa atgcagaaga ccctgcatca 420

actttaggtg ggacttcggg tatttttatg gccacagaac atcctcccat ttacctgcat 480

ggcccagaca cagacttcaa aacagttgag gccagcaggc tccaggtaag tggtaggatt 540

ccagaatgcc ctcagagtgt tgtgggaggc agcaggcgat tttcctggac ttctgagttt 600

atgagaaccc caaaccccaa ttggcattaa cattgaggtc tcaatgtatc atggcaggaa 660

gcttccgagt ggtgaaaagg aaagtgaaca tcaaagctcg gaagacaaga gggtggagtg 720

atggcaacca agagcaagac ccttccctct cctgtgatgg ggtggctcta tgtgaagccc 780

ccaaactgga cacaggtctg gcagaatgag gaacccactg agatttagcg ccaacatcca 840

gcataaaagg gagactgaca tagaatttga gttagttaaa aataaggcac aatgcttttc 900

atgtattcct gagttttgtg gactggtgtt caatttgcag cattcttagt tgattaaatc 960

tgagatgaag aaagagtgtc caacactttc accttggaaa gctctggaaa agcaaaaggg 1020

agagacaatt agcttcatcc attaactcac ttagtcatta tgcattcatt catgtaacta 1080

ccaaacacgt actgagtgcc taacactcct gagacactga gaagtttctt gggaatacaa 1140

agatgaataa aaaccacgcc aggcaggagt tggaggaagg ttctggatgc caccacgctc 1200

tacctcctgg ctggacacca ggcaatgttg gtaaccttct gcctccaatt tctgcaaata 1260

cataattaat aaacacaagg ttatcttcta aacagttctt aaaatgagtc aactttgttt 1320

aaacttgttc tttttagaga aaaatgtatt tttgaaagag ttggttagtg ctaggggaaa 1380

tgtctgggca cagctcagtc tggtgtgaga gcaggaagca gctctgtgtg tctggggtgg 1440

gtacgtatgt aggacctgtg ggagaccagg ttgggggaag gcccctcctc atcaagggct 1500

cctttgcttt ggtttgcttt ggcgtgggag gtgctgtgcc acaagggaat acgggaaata 1560

agatctctgc t 1571

<210>6

<211>1173

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR6

<400>6

tgacccacca cagacatccc ctctggcctc ctgagtggtt tcttcagcac agcttccaga 60

gccaaattaa acgttcactc tatgtctata gacaaaaagg gttttgacta aactctgtgt 120

tttagagagg gagttaaatg ctgttaactt tttaggggtg ggcgagaggg atgacaaata 180

acaacttgtc tgaatgtttt acatttctcc ccactgcctc aagaaggttc acaacgaggt 240

catccatgat aaggagtaag acctcccagc cggactgtcc ctcggccccc agaggacact 300

ccacagagat atgctaactg gacttggaga ctggctcaca ctccagagaa aagcatggag 360

cacgagcgca cagagcaggg ccaaggtccc agggacagaa tgtctaggag ggagattggg 420

gtgagggtaa tctgatgcaa ttactgtggc agctcaacat tcaagggagg gggaagaaag 480

aaacagtccc tgtcaagtaa gttgtgcagc agagatggta agctccaaaa tttgaaactt 540

tggctgctgg aaagttttag ggggcagaga taagaagaca taagagactt tgagggttta 600

ctacacacta gacgctctat gcatttattt atttattatc tcttatttat tactttgtat 660

aactcttata ataatcttat gaaaacggaa accctcatat acccatttta cagatgagaa 720

aagtgacaat tttgagagca tagctaagaa tagctagtaa gtaaaggagc tgggacctaa 780

accaaaccct atctcaccag agtacacact cttttttttt ttccagtgta atttttttta 840

atttttattt tactttaagt tctgggatac atgtgcagaa ggtatggttt gttacatagg 900

tatatgtgtg ccatagtgga ttgctgcacc tatcaacccg tcatctaggt ttaagcccca 960

catgcattag ctatttgtcc tgatgctctc cctcccctcc ccacaccaga caggccttgg 1020

tgtgtgatgt tcccctccct gtgtccatgt gttctcactg ttcagctccc acttatgagt 1080

gagaacgtgt ggtatttggt tttctgttcc tgtgttagtt tgctgaggat gatggcttcc 1140

agcttcatcc atgtccctgc aaaggacacg atc 1173

<210>7

<211>2101

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR7

<400>7

aggtgggtgg atcacccgag gtcaggagtt caagaccagc ctggccaaca tggtaaaacc 60

tcgtctctac taaaaaatac gaaaaattag ctggttgtgg tggtgcgtgc ttgtaatccc 120

agctactcgg gaggctgagg caggagaatc acttgaatct gggaggcaga ggttgcagtg 180

agctgagata gtgccattgc actccagcct gggcaacaga cggagactct gtctccaaaa 240

aaaaaaaaaa aaatcttaga ggacaagaat ggctctctca aacttttgaa gaaagaataa 300

ataaattatg cagttctaga agaagtaatg gggatatagg tgcagctcat gatgaggaag 360

acttagctta actttcataa tgcatctgtc tggcctaaga cgtggtgagc tttttatgtc 420

tgaaaacatt ccaatataga atgataataa taatcacttc tgacccccct tttttttcct 480

ctccctagac tgtgaagcag aaaccccata tttttcttag ggaagtggct acgcactttg 540

tatttatatt aacaactacc ttatcaggaa attcatattg ttgccctttt atggatgggg 600

aaactggaca agtgacagag caaaatccaa acacagctgg ggatttccct cttttagatg 660

atgattttaa aagaatgctg ccagagagat tcttgcagtg ttggaggaca tatatgacct 720

ttaagatatt ttccagctca gagatgctat gaatgtatcc tgagtgcatg gatggacctc 780

agttttgcag attctgtagc ttatacaatt tggtggtttt ctttagaaga aaataacaca 840

tttataaata ttaaaatagg cccaagacct tacaagggca ttcatacaaa tgagaggctc 900

tgaagtttga gtttgttcac tttctagtta attatctcct gcctgtttgt cataaatgcg 960

tttagtaggg agctgctaat gacaggttcc tccaacagag tgtggaagaa ggagatgaca 1020

gctggcttcc cctctgggac agcctcagag ctagtgggga aactatgtta gcagagtgat 1080

gcagtgacca agaaaatagc actaggagaa agctggtcca tgagcagctg gtgagaaaag 1140

gggtggtaat catgtatgcc ctttcctgtt ttatttttta ttgggtttcc ttttgcctct 1200

caattccttc tgacaataca aaatgttggt tggaacatgg agcacctgga agtctggttc 1260

attttctctc agtctcttga tgttctctcg ggttcactgc ctattgttct cagttctaca 1320

cttgagcaat ctcctcaata gctaaagctt ccacaatgca gattttgtga tgacaaattc 1380

agcatcaccc agcagaactt aggttttttt ctgtcctccg tttcctgacc tttttcttct 1440

gagtgcttta tgtcacctcg tgaaccatcc tttccttagt catctaccta gcagtcctga 1500

ttcttttgac ttgtctccct acaccacaat aaatcactaa ttactatgga ttcaatccct 1560

aaaatttgca caaacttgca aatagattac gggttgaaac ttagagattt caaacttgag 1620

aaaaaagttt aaatcaagaa aaatgacctt taccttgaga gtagaggcaa tgtcatttcc 1680

aggaataatt ataataatat tgtgtttaat atttgtatgt aacatttgaa taccttcaat 1740

gttcttattt gtgttatttt aatctcttga tgttactaac tcatttggta gggaagaaaa 1800

catgctaaaa taggcatgag tgtcttatta aatgtgacaa gtgaatagat ggcagaaggt 1860

ggattcatat tcagttttcc atcaccctgg aaatcatgcg gagatgattt ctgcttgcaa 1920

ataaaactaa cccaatgagg ggaacagctg ttcttaggtg aaaacaaaac aaacacgcca 1980

aaaaccttta ttctctttat tatgaatcaa atttttcctc tcagataatt gttttattta 2040

tttattttta ttattattgt tattatgtcc agtctcactc tgtcgcctaa gctggcatga 2100

t 2101

<210>8

<211>1821

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR8

<400>8

gagatcacct cgaagagagt ctaacgtccg taggaacgct ctcgggttca caaggattga 60

ccgaacccca ggatacgtcg ctctccatct gaggcttgct ccaaatggcc ctccactatt 120

ccaggcacgt gggtgtctcc cctaactctc cctgctctcc tgagcccatg ctgcctatca 180

cccatcggtg caggtccttt ctgaagagct cgggtggatt ctctccatcc cacttccttt 240

cccaagaaag aagccaccgt tccaagacac ccaatgggac attccccttc cacctccttc 300

tccaaagttg cccaggtgtt catcacaggt tagggagaga agcccccagg tttcagttac 360

aaggcatagg acgctggcat gaacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 420

acacgactcg aagaggtagc cacaagggtc attaaacact tgacgactgt tttccaaaaa 480

cgtggatgca gttcatccac gccaaagcca agggtgcaaa gcaaacacgg aatggtggag 540

agattccaga ggctcaccaa accctctcag gaatattttc ctgaccctgg gggcagaggt 600

tggaaacatt gaggacattt cttgggacac acggagaagc tgaccgacca ggcattttcc 660

tttccactgc aaatgaccta tggcgggggc atttcacttt cccctgcaaa tcacctatgg 720

cgaggtacct ccccaagccc ccacccccac ttccgcgaat cggcatggct cggcctctat 780

ccgggtgtca ctccaggtag gcttctcaac gctctcggct caaagaagga caatcacagg 840

tccaagccca aagcccacac ctcttccttt tgttataccc acagaagtta gagaaaacgc 900

cacactttga gacaaattaa gagtccttta tttaagccgg cggccaaaga gatggctaac 960

gctcaaaatt ctctgggccc cgaggaaggg gcttgactaa cttctatacc ttggtttagg 1020

aaggggaggg gaactcaaat gcggtaattc tacagaagta aaaacatgca ggaatcaaaa 1080

gaagcaaatg gttatagaga gataaacagt tttaaaaggc aaatggttac aaaaggcaac 1140

ggtaccaggt gcggggctct aaatccttca tgacacttag atataggtgc tatgctggac 1200

acgaactcaa ggctttatgt tgttatctct tcgagaaaaa tcctgggaac ttcatgcact 1260

gtttgtgcca gtatcttatc agttgattgg gctcccttga aatgctgagt atctgcttac 1320

acaggtcaac tccttgcgga agggggttgg gtaaggagcc cttcgtgtct cgtaaattaa 1380

ggggtcgatt ggagtttgtc cagcattccc agctacagag agccttattt acatgagaag 1440

caaggctagg tgattaaaga gaccaacagg gaagattcaa agtagcgact tagagtaaaa 1500

acaaggttag gcatttcact ttcccagaga acgcgcaaac attcaatggg agagaggtcc 1560

cgagtcgtca aagtcccaga tgtggcgagc ccccgggagg aaaaaccgtg tcttccttag 1620

gatgcccgga acaagagcta ggcttccgga gctaggcagc catctatgtc cgtgagccgg 1680

cgggagggag accgccggga ggcgaagtgg ggcggggcca tccttctttc tgctctgctg 1740

ctgccgggga gctcctggct ggcgtccaag cggcaggagg ccgccgtcct gcagggcgcc 1800

gtagagtttg cggtgcagag t 1821

<210>9

<211>1929

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR9

<400>9

cacttcctgg gagtggagca gaggctctgc gtggagcatc catgtgcagt actcttaggt 60

acggaaggga ttgggctaaa ccatggatgg gagctgggaa gggaagggac caacttcagg 120

ccccactggg acactggagc tgccaccctt tagagccctc ctaaccctac accagaggct 180

gagggggacc tcagacatca cacacatgct ttcccatgtt ttcagaaatc tggaaacgta 240

gaacttcagg ggtgagagtg cctagatatt gaatacaagg ctagattggg cttctgtaat 300

atcccaaagg accctccagc tttttcacca gcacctaatg cccatcagat accaaagaca 360

cagcttagga gaggttcacc ctgaagctga ggaggaggca gccggattag agttgactga 420

gcaaggatga ctgccttctc cacctgacga tttcagctgc tgcccttttc ttttcctggg 480

aatgcctgtc gccatggcct tctgtgtcca caggagagtt tgacccagat actcatggac 540

caggcaaagg tgctgttcct cccagcccag ggcccaccat gaagcatgcc tgggagcctg 600

gtaaggaccc agccactcct gggctgttga cattggcttc tcttgcccag cattgtagcc 660

acgccactgc attgtactgt gagataagtc aaggtgggct caccaggacc tgcactaaat 720

tgtgaaattc agctccaaag aactttggaa attacccatg catttaagca aaatgaatga 780

tacctgagca aaccctttca cattggcaca agttacaatc ctgtctcatc ctcttgatta 840

caaattccat ccaggcaaga gctgtatcac cctgaggtct ccccattcat gttttggtca 900

ataatattta gtttcctttt gaaaatagat ttttgtgtta ctccattatg atgggcagag 960

gccagatgct tatattctat ttaaatgact atgtttttct atctgtaact gggtttgtgt 1020

tcaggtggta aatgcttttt ttttgcagtc agaagattcc tggaaggcga ccagaaatta 1080

gctggcegct gtcagacctg aagttacttc taaagggcct ttagaaatga attctttttt 1140

atgccttctc tgaattctga gaagtaggct tgacttcccc taagtgtgga gttgggagtc 1200

aactcttctg aaaagaaagt ttcagagcat tttccaaagc catggtcagc tgtgggaagg 1260

gaagacgatg gatagtacag ttgccggaaa acactgatgg aggcggatgc tccagctcag 1320

ccaaagacct ttgttctgcc caccccagaa atgccccttc ctcaatcgca gaaacgttgc 1380

cccatggctc ctgatactca gaatgcagcc tctgaccagg accatctgca tcctccagga 1440

gctcgtaaga aatgcagcat cgtgggacct gctggcacct ggtgaaccca aacctgcagg 1500

gctcctgggt gtgcttgggg cggctgcagg ggaagaggga gtcagcagcc tcctcctgac 1560

cttcccgggg gctgcttttc tgaggggcca gaatgcaccg gttgaccttg ttgcatcact 1620

ggcccatgac tggctgcttt ggtcaggtgt aaaaaggtgt ttccagaggg tctgctcctc 1680

tcactatcgg accaggtttc catggagagc tcagcctccc agcaaggata gagaacttca 1740

aatggctcaa agaactgaga ggccacacat gtgtgacctg aatagtctct gctgcaaaac 1800

aaagggtttc ttaatgtaaa acgttctctt cctcacagag gggttcccag ctgctagtgg 1860

gcatgttgca ggcatttcct gggctgcatc aggttgtcat aagccagagg atcatttttg 1920

ggggctcat 1929

<210>10

<211>1167

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR10

<220>

<221>misc_feature

<222>(452)..(1143)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>10

aggtcaggag ttcaagacca gcctggccaa catggtgaaa ccctgtccct acaaaaaata 60

caaaaattag ccgggcgtgg tggggggcgc ctataatccc agctactcag gatgctgaga 120

caggagaatt gtttgaaccc gggaggtgga ggttgcagtg aactgagatc gcgccactgc 180

actccagcct ggtgacagag agagactccg tctcaacaac agacaaacaa acaaacaaac 240

aacaacaaaa atgtttactg acagctttat tgagataaaa ttcacatgcc ataaaggtca 300

ccttctacag tatacaattc agtggattta gtatgttcac aaagttgtac gttgttcacc 360

atctactcca gaacatttac atcaccccta aaagaagctc tttagcagtc acttctcatt 420

ctccccagcc cctgccaacc acgaatctac tntctgtctc tattctgaat atttcatata 480

aaggagtcct atcatatggg ccttttacgt ctaccttctt tcacttagca tcatgttttt 540

aagattcatc cacagtgtag cacgtgtcag ttaattcatt tcatcttatg gctggataat 600

gctctattgt atgcatatcc ctcactttgc ttatccattc atcaactgat tgacatttgg 660

gttatttcta ctttttgact attatgagta atgctgctat gaacattcct gtaccaatcg 720

ttacgtggac atatgctttc aattctcctg agtatgtaac tagggttgga gttgctgggt 780

catatgttaa ctcagtgttt catttttttg aagaactacc aaatggtttt ccaaagtgga 840

tgcaacactt tacattccca ccagcaagat atgaaggttc caatgtctct acatttttgc 900

caacacttgt gattttcttt tatttattta tttatttatt tatttttgag atggagtctc 960

actctgtcac ccaggctgga gtgcagtggc acaatttcag ctcactgcaa tctccacctc 1020

tcgggctcaa gcgatactcc tgcctcaacc tcccgagtaa ctgggattac aggcgcccac 1080

caccacacca agctaatttt ttgtattttt agtagagacg gggtttcatc atgtcggcca 1140

ggntgtactc gaactctgac ctcaagt 1167

<210>11

<211>1377

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR11

<400>11

aggatcactt gagcccagga gttcaagacc agcctgggca acatagcgag aacatgtctc 60

aaaaaggaaa aaaatggggg aaaaaaccct cccagggaca gatatccaca gccagtcttg 120

ataagctcca tcattttaaa gtgcaaggcg gtgcctccca tgtggatgat tatttaatcc 180

tcttgtactt tgtttagtcc tttgtggaaa tgcccatctt ataaattaat agaattctag 240

aatctaatta aaatggttca actctacatt ttactttagg ataatatcag gaccatcaca 300

gaatgtctga gatgtggatt taccctatct gtagctcact tcttcaacca ttcttttagc 360

aaggctagtt atcttcagtg acaacccctt gctgccctct actatctcct ccctcagatg 420

gactactctg attaagcttg agctagaata agcatgttat cccgggattt catatggaat 480

attttataca tgagtgagcc attatgagtt gtttgaaaat ttattatgtt gagggagggt 540

aaccgctgta acaaccatca ccaaatctaa tcgactgaat acatttgacg tttatttctt 600

gttcacctga cagttcagtg ttacctaaat ttacatgaag acccagaggc ccacgctcct 660

tcattttggg ctccaccgac ctccaaggtt tcagggccct ctgccccgcc ttctgcaccc 720

acaggggaag agagtggagg atgcacacgc ccaggcctgg aagtgacgca tgtggcttcc 780

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tgcagttttt attcagatag gaaaggctgt taaaatctta acacctaact ggaagaaggg 1080

ttttagagaa gtgtggtttt cagtaagcca gttctttcca caatccaaga aacgaaataa 1140

atttccagca tggagcagtt ggcaggtaag gtttttgttg tggtctcgcc caggcttgag 1200

tgtaaccggt gtggtcatag ctcactacat tctcaaactc ctggccttaa gtcatcctcc 1260

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<210>12

<211>1051

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR12

<400>12

atcctgcttc tgggaagaga gtggcctccc ttgtgcaggt gactttggca ggaccagcag 60

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gcttacgttg ttaagaaata tttggcaaga agatgcacac agaatttctg taacgaatag 240

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caccaccaag tttgaaatcg attttattgg acgaatgtct cactttaaat ttaaatggag 360

tccaacttcc ttttctcacc cagacgtcga gaaggtggca ttcaaaatgt ttacacttgt 420

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cgtttcatcg cacacatatg ctcatcttta tatttacata tatataattt ttatatatgg 540

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acagtgggga gattgggcac atgtacattc tgtactgcaa agttgcacaa cagaccaagt 660

ttgttataag tgaggctggg tggtttttat tttttctcta ggacaacagc ttgcctggtg 720

gagtaggcct cctgcagaag gcattttctt aggagcctca acttccccaa gaagaggaga 780

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aggccgagat ccagggtcca gggaggtcaa g 1051

<210>13

<211>1291

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR13

<400>13

agccactgag gtcctaactg cagccaaggg gccgttctgc acatgtcgct caccctctgt 60

gctctgttcc ccacagagca aacgcacatg gcaacgttgg tccgctcagc cactggttct 120

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tgctttggga ggagagtgaa catcacaggg aatggctcat gtcagcccca ggagggtggg 300

ctggcccctg gtccccgggc tccttctggc cctgcaggcg atagagagcc tcaacctgct 360

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gctcaaagat gttgttgagc gtgtgcagga agatgatgag gtccggcagg cggaccgtgg 600

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<210>14

<211>711

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR14

<400>14

ccctggacca gggtccgtgg tcttggtggg cactggcttc ttcttgctgg gtgttttcct 60

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ccttttaatc ccacttttat tctgtactgc ttctgaaggg cggtgggggt tgctggcttt 360

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<210>15

<211>1876

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR15

<400>15

gagtccaaga tcaaggtgcc agcatcttgt gagggccttc ttgttacgtc actccctagc 60

gaaagggcaa agagagggtg agcaagagaa aggggggctg aactcgtcct tgtagaagag 120

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tccagggcag gcagctcttc tctgtccctc tgctggcccc acctcatcct ctgttgtcct 420

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tcatgtatat ttttaaaaat aattactgca ctcagtagaa taacatgaaa atgttgcctg 1200

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tgatgaatcc gatttttcca aaatagccga ttctgatgat tcagacgatt ctgatgttct 1560

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tttcccccag gaatgtctgg gagcccactg ccgggtttgc tgtccgtctc gtttggactc 1860

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<210>16

<211>1282

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR16

<400>16

cgcccacctc ggctttccaa agtgctggga ttacaggcat gagtcactgc gcccatcctg 60

attccaagtc tttagataat aacttaactt tttcgaccaa ttgccaatca ggcaatcttt 120

gaatctgcct atgacctagg acatccctct ccctacaagt tgccccgcgt ttccagacca 180

aaccaatgta catcttacat gtattgattg aagttttaca tctccctaaa acatataaaa 240

ccaagctata gtctgaccac ctcaggcacg tgttctcagg acctccctgg ggctatggca 300

tgggtcctgg tcctcagatt tggctcagaa taaatctctt caaatatttt ccagaatttt 360

actcttttca tcaccattac ctatcaccca taagtcagag ttttccacaa ccccttcctc 420

agattcagta atttgctaga atggccacca aactcaggaa agtattttac ttacaattac 480

caatttatta tgaagaactc aaatcaggaa tagccaaatg gaagaggcat agggaaaggt 540

atggaggaag gggcacaaag cttccatgcc ctgtgtgcac accaccctct cagcatcttc 600

atgtgttcac caactcagaa gctcttcaaa ctttgtcatt taggggtttt tatggcagtt 660

ccactatgta ggcatggttg ataaatcact ggtcatcggt gatagaactc tgtctccagc 720

tcctctctct ctcctcccca gaagtcctga ggtggggctg aaagtttcac aaggttagtt 780

gctctgacaa ccagccccta tcctgaagct attgaggggt cccccaaaag ttaccttagt 840

atggttggaa gaggcttatt atgaataaca aaagatgctc ctatttttac cactagggag 900

catatccaag tcttgcggga acaaagcatg ttactggtag caaattcata caggtagata 960

gcaatctcaa ttcttgcctt ctcagaagaa agaatttgac caagggggca taaggcagag 1020

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aatgaaagaa agtaaagtac atttggaaga gggccaagtg ggcgacatga gagagtcaaa 1140

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gcatccttct cccctgattc ttcccttggg gtgggctgtc cgcatgcaca atggcctgcc 1260

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<210>17

<211>793

<212>DNA

<213>Homo sapiens

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<400>17

atccgagggg aggaggagaa gaggaaggcg agcagggcgc cggagcccga ggtgtctgcg 60

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tccctcaggg acttttcaca cctccccacc cccatttcca ctacagtctc ccagggcaca 480

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caggctccat cacagggccg agagcagcgc cactctggtc gtacttttgg gtcaagagat 780

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<210>18

<211>492

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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atctttttgc tctctaaatg tattgatggg ttgtgttttt tttcccacct gctaataaat 60

attacattgc aacattcttc cctcaacttc aaaactgctg aactgaaaca atatgcataa 120

aagaaaatcc tttgcagaag aaaaaaagct attttctccc actgattttg aatggcactt 180

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<210>19

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<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<400>19

tcacttcctg atattttaca ttcaaggcta gctttatgca tatgcaacct gtgcagttgc 60

acagggcttt gtgttcagaa agactagctc ttggtttaat actctgttgt tgccatcttg 120

agattcatta taatataatt tttgaatttg tgttttgaac gtgatgtcca atgggacaat 180

ggaacattca cataacagag gagacaggtc aggtggcagc ctcaattcct tgccaccctt 240

ttcacataca gcattggcaa tgccccatga gcacaaaatt tgggggaacc atgatgctaa 300

gactcaaagc acatataaac atgttacctc tgtgactaaa agaagtggag gtgctgacag 360

cccccagagg ccacagttta tgttcaaacc aaaacttgct tagggtgcag aaagaaggca 420

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aaatatatag gcttgtattg agctattaaa tgtaaattgt ggaatgtcag tgattccaag 720

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gtaaaattaa taatgtaaaa gtttaatttt tacttagaat gacattaaat agcaaataaa 840

agcaccatga taaatcaaga gagagactgt ggaaagaagg aaaacgtttt tattttagta 900

tatttaatgg gactttcttc ctgatgtttt gttttgtttt gagagagagg gatgtggggg 960

cagggaggtc tcattttgtt gcccaggctg gacttgaact cctgggctcc agctatcctg 1020

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agtgcagtgg catgatagcg gctcactgca gcctcaacct cctcagctta agctactctc 1200

ccacttcagc ctcctgagta gccaggacta cagttgtgtg ccaccacacc tgtggctaat 1260

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tcatttggct tctggggcat cacactctct ttgagttact cattcctcat tgatagcttc 1620

ttcctagtct tctttactgg ttcttcctct tctccctgac tccttaatat tgtttttctc 1680

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tcatccagag tcatgaactt aaacctgttt ctgtgcagat aattcacatt attatatctc 1800

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<210>20

<211>780

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR20

<400>20

gatctcaagt ttcaatatca tgttttggca aaacattcga tgctcccaca tccttaccta 60

aagctaccag aaaggctttg ggaactgtca acagagctac agaaaagtca gtaaagacca 120

atggacccct caaacaaaaa cagccaagct tttctgccaa aaagatgact gagaagactg 180

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ttcccttcaa tcctctaggc ttcgagagtt ttgacctgcc tgaagagcac cagattgcac 300

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tgtttcagct gggcccccct tcacctttga agatgccctc tccaccatgg aaatccaatc 420

tgttgcagtc tcctttaagc attctgttga ccctggatgt tgaattgcca cctgtttgct 480

ctgacataga tatttaaatt tcttagtgct ttagagtttg tgtatatttc tattaataaa 540

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tgcttaatcc aaaataaagc agaaaatgaa gaaaaatgaa atgaagaaca gataaataga 720

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<210>21

<211>607

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR21

<400>21

gatcaataat ttgtaatagt cagtgaatac aaaggggtat atactaaatg ctacagaaat 60

tccattcctg ggtataaatc ctagacatat ttatgcatat gtacaccaag atatatctgc 120

aagaatgttc acagcaaatc tctttgtagt agcaaaaggc caaaaggtct atcaacaaga 180

aaattaatac attgtggcac ataatggcat ccttatgcca ataaaaatgg atgaaattat 240

agttaggttc aaaaggcaag cctccagata atttatatca tataattcca tgtacaacat 300

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<210>22

<211>1380

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR22

<400>22

cccttgtgat ccacccgcct tggcctccca aagtgctggg attacaggcg tgagtcacta 60

cgcccggcca ccctccctgt atattatttc taagtatact attatgttaa aaaaagttta 120

aaaatattga tttaatgaat tcccagaaac taggatttta catgtcacgt tttcttatta 180

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gtgaaaaaaa taaacaacac tcctgtcaaa aaacaacagt tgtgataaaa cttaagtgcc 300

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catagttttg gtcattggtt ctgtttatgt gatggattat gtttattgat ttgtgtatgt 420

tgaacttatc tcaatagatg cagacaaggc cttgataaaa gtttttaaca ccttttcatg 480

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aaaactggca caagacaagg atgccctctc tcaccactcc tattaaatgt agtattggaa 660

gttctggcca gagcaatcag gcaggagaaa gaaaaggtat taaaatagga agagaggaag 720

tcaaattgtc tctgtttgca gtaaacatga ttgtatattt agaaaacccc attgtctcat 780

cctaaaaact ccttaagctg ataaacaact tcagcaaagt ctcaggatac aaaatcaatg 840

tgcaaaaatc acaagcattc ctatacaccg ataatagaca gcagagagcc aaatcatgag 900

tgaagtccca ttcacaattg cttcaaagaa aataaaatac ttaggaatac aactttcacg 960

ggacatgaag gacattttca aggacaacta aaaaccactg ctcaaggaaa tgagagagga 1020

cacaaagaaa tggaaaaaca ttccatgctc atggaagaat caatatcatg aaaatggcca 1080

tactgcccaa agtaatttat agattcaatg ctaaccccat caagccacca ttgactttct 1140

tcacagaact agaaaaaaac tattttaaaa ctcatatgta gtcaaaaaga gtcggtatag 1200

ccaagacaat cctaagcata aagaacaaag ctggatgcat cacgctgact tcaaaccata 1260

ctacaaggct acagtaacca aaacagcatg gtactggtac caaaacagat agatagaccg 1320

atagaacaga acagaggcct cggaaataac accacacatc tacaaccctt tgatcttcaa 1380

<210>23

<211>1246

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR23

<400>23

atcccctcat ccttcagggc agctgagcag ggcctcgagc agctggggga gcctcactta 60

atgctcctgg gagggcagcc agggagcatg gggtctgcag gcatggtcca gggtcctgca 120

ggcggcacgc accatgtgca gccgccccca cctgttgctc tgcctccgcc acctggccat 180

gggcttcagc agccagccac aaagtctgca gctgctgtac atggacaaga agcccacaag 240

cagctagagg accttgtgtt ccacgtgccc agggagcatg gcccacagcc caaagaccag 300

tcaggagcag gcaggggctt ctggcaggcc cagctctacc tctgtcttca cacagatggg 360

agatttctgt tgtgattttg agtgatgtgc ccctttggtg acatccaaga tagttgctga 420

agcaccgctc taacaatgtg tgtgtattct gaaaacgaga acttctttat tctgaaataa 480

ttgatgcaaa ataaattagt ttggatttga aattctattc atgtaggcat gcacacaaaa 540

gtccaacatt gcatatgaca caaagaaaag aaaaagcttg cattccttaa atacaaatat 600

ctgttaacta tatttgcaaa tatatttgaa tacacttcta ttatgttaca tataatatta 660

tatgtatatg tatatataat atacatatat atgttacata taatatactt ctattatgtt 720

acatataata tttatctata agtaaataca taaatataaa gatttgagta gctgtagaac 780

attgtcttat gtgttatcag ctactactac aaaaatatct cttccactta tgccagtttg 840

ccatataaat atgatcttct cattgatggc ccagggcaag agtgcagtgg gtacttattc 900

tctgtgagga gggaggagaa aagggaacaa ggagaaagtc acaaagggaa aactctggtg 960

ttgccaaaat gtcaagtttc acatattccg agacggaaaa tgacatgtcc cacagaagga 1020

ccctgcccag ctaatgtgtc acagatatct caggaagctt aaatgatttt tttaaaagaa 1080

aagagatggc attgtcactt gtttcttgta gctgaggctg tgggatgatg cagatttctg 1140

gaaggcaaag agctcctgct ttttccacac cgagggactt tcaggaatga ggccagggtg 1200

ctgagcacta caccaggaaa tccctggaga gtgtttttct tactta 1246

<210>24

<211>939

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR24

<400>24

acgaggtcac gagttcgaga ccagcctggc caagatggtg aagccctgtc tctactaaaa 60

atacaacaag tagccgggcg cggtgacggg cgcctgtaat cccagctact caggaggctg 120

aagcaggaga atctctagaa cccaggaggc ggaggtgcag tgagctgaga ctgccccgct 180

gcactctagc ctgggcaaca cagcaagact ctgtctcaaa taaataaata aataaataaa 240

taaataaata aataaataaa tagaaaggga gagttggaag tagatgaaag agaagaaaag 300

aaatcctaga tttcctatct gaaggcacca tgaagatgaa ggccacctct tctgggccag 360

gtcctcccgt tgcaggtgaa ccgagttctg gcctccattg gagaccaaag gagatgactt 420

tggcctggct cctagtgagg aagccatgcc tagtcctgtt ctgtttgggc ttgatcctgt 480

atcacttgat tgtctctcct ggactttcca tggattccag ggatgcaact gagaagttta 540

tttttaatgc acttacttga agtaagagtt attttaaaac attttagcaa aggaaatgaa 600

ttctgacagg ttttgcactg aagacattca catgtgagga aaacaggaaa accactatgc 660

tagaaaaagc aaatgctgtt gagattgtct cacaaacaca aattgcgtgc cagcaggtag 720

gtttgagcct caggttgggc acattttacc ttaagcgcac tgttggtgga acttaaggtg 780

actgtaggac ttatatatac atacatacat ataatatata tacatattta tgtgtatata 840

cacacacaca cacacacaca cacacagggt cttgctatct tgcccagggt ggtctccaac 900

tctgggtctc aagcgatcct ctgcctcccc ttcccaaag 939

<210>25

<211>1067

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR25

<400>25

cagcccctct tgtgtttttc tttatttctc gtacacacac gcagttttaa gggtgatgtg 60

tgtataatta aaaggaccct tggcccatac tttcctaatt ctttagggac tgggattggg 120

tttgactgaa atatgttttg gtggggatgg gacggtggac ttccattctc cctaaactgg 180

agttttggtc ggtaatcaaa actaaaagaa acctctggga gactggaaac ctgattggag 240

cactgaggaa caagggaatg aaaaggcaga ctctctgaac gtttgatgaa atggactctt 300

gtgaaaatta acagtgaata ttcactgttg cactgtacga agtctctgaa atgtaattaa 360

aagtttttat tgagcccccg agctttggct tgcgcgtatt tttccggtcg cggacatccc 420

accgcgcaga gcctcgcctc cccgctgccc tcagcctccg atgacttccc cgcccccgcc 480

ctgctcggtg acagacgttc tactgcttcc aatcggaggc acccttcgcg ggagcggcca 540

atcgggagct ccggcaggcg gggaggccgg gccagttaga tttggaggtt caacttcaac 600

atggccgaag caagtagcgc caatctaggc agcggctgtg aggaaaaaag gcatgagggg 660

tcgtcttcgg aatctgtgcc acccggcact accatttcga gggtgaagct cctcgacacc 720

atggtggaca cttttcttca gaagctggtc gccgccggca ggtaaagtgg acgcagccgc 780

ggtgggagtg tttgttggca ccgaagctca aatcccgcga ggtcaggacg gccgcaggct 840

ggcgcgcggt gacgtgggtc cgcgttgggg gcggggcagt cggacgaggc gacccagtca 900

aatcctgagc cttaggagtc agggtattca cgcactgata acctgtagcg gaccgggata 960

gctagctact ccttcctaca ggaagccccg ttttcactaa aatttcaggt ggttgggagg 1020

aaagatagag cctttgcaaa ttagagcagg gttttttatt tttttat 1067

<210>26

<211>540

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR26

<400>26

ccccctgaca agccccagtg tgtgatgttc cccactctgt gtccatgcat tctcattgtt 60

caactcccat ctgtgagtga gaacatgcag tgtttggttt tctgtccttg agatagtttg 120

ctgagaatga tggtttccag cttcatccat gtccttgcaa aggaagtgaa cttatccttt 180

tttatggctt catagtattc catggcacat atgtgccaca tttttttaat ccagtctatc 240

attgatggac atttgggttg gttccaagtc tttgctattg tgaatagcac cacaattaac 300

atatgtgtgc atgtatacat ctttatagta gcatgattta taatccttcg ggtatatacc 360

ctgtaatggg atcgctgggt caaatggtat ttctagttct agatccttga ggaatcacca 420

cactgctttc cacaatggtt gaactaattt acgctcccac cagcagtgta aaagcattcc 480

tatttctcca cgtcctctcc agtatctgtt gtttcctgac tttttaatga tcatcattct 540

<210>27

<211>1520

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR27

<400>27

cttggccctc acaaagcctg tggccaggga acaattagcg agctgcttat tttgctttgt 60

atccccaatg ctgggcataa tgcctgccat tatgagtaat gccggtagaa gtatgtgttc 120

aaggaccaaa gttgataaat accaaagaat ccagagaagg gagagaacat tgagtagagg 180

atagtgacag aagagatggg aacttctgac aagagttgtg aagatgtact aggcaggggg 240

aacagcttaa ggagagtcac acaggaccga gctcttgtca agccggctgc catggaggct 300

gggtggggcc atggtagctt tcccttcctt ctcaggttca gagtgtcagc cttgaacttc 360

taattcccag aggcatttat tcaatgtttt cttctagggg catacctgcc ctgctgtgga 420

agactttctt ccctgtgggt cgccccagtc cccagatgag acggtttggg tcagggccag 480

gtgcaccgtt gggtgtgtgc ttatgtctga tgacagttag ttactcagtc attagtcatt 540

gagggaggtg tggtaaagat ggagatgctg ggtcacatcc ctagagaggt gttccagtat 600

gggcacatgg gagggctgga aggataggtt actgctagac gtagagaagc cacatccttt 660

aacaccctgg cttttcccac tgccaagatc cagaaagtcc ttgtggtttc gctgctttct 720

cctttttttt tttttttttt tttctgagat ggagtctggc tctgtcgccc aggctggagt 780

gcagtggcac gatttcggct cactgcaagt tccgcctcct aggttcatac cattctccca 840

cctcagcctc ccgagtagct gggactacag gcgccaccac acccagctaa ttttttgtat 900

ttttagtaga gacggcgttt caccatgtta gccaggatgg tcttgatccg cctgcctcag 960

cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcgc ccggcctgct ttcttctttc 1020

atgaagcatt cagctggtga aaaagctcag ccaggctggt ctggaactct tgacctcaag 1080

tgatctgcct gcctcagcct cccaaagtgc tgagattaca ggcatgagcc agtccgaatg 1140

tggctttttt tgttttgttt tgaaacaagg tctcactgtt gcccaggctg cagtgcagtg 1200

gcatacctca gctccactgc agcctcgacc tcctgggctc aagcaatcct cccaactgag 1260

cctccccagt agctggggct acaagcgcat gccaccacgc ctggctattt tttttttttt 1320

tttttttttt gagaaggagt ttcattcttg ttgcccaggc tggagtgcaa tggcacagtc 1380

tcagctcact gcagcctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc agcctcccga 1440

gtagctggga ttataggcac ctgccaccat gcctggctaa tttttttgta tttttagtag 1500

ggatggggtt tcaccatgtt 1520

<210>28

<211>961

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR28

<400>28

aggaggttat tcctgagcaa atggccagcc tagtgaactg gataaatgcc catgtaagat 60

ctgtttaccc tgagaagggc atttcctaac tctccctata aaatgccaag tggagcaccc 120

cagatgaaat agctgatatg ctttctatac aagccatcta ggactggctt tatcatgacc 180

aggatattca cccactgaat atggctatta cccaagttat ggtaaatgct gtagttaagg 240

gggtcccttc cacatggaca ccccaggtta taaccagaaa gggttcccaa tctagactcc 300

aagagagggt tcttagacct catgcaagaa agaacttggg gcaagtacat aaagtgaaag 360

caagtttatt aagaaagtaa agaaacaaaa aaatggctac tccataagca aagttatttc 420

tcacttatat gattaataag agatggatta ttcatgagtt ttctgggaaa ggggtgggca 480

attcctggaa ctgagggttc ctcccacttt tagaccatat agggtatctt cctgatattg 540

ccatggcatt tgtaaactgt catggcactg atgggagtgt cttttagcat tctaatgcat 600

tataattagc atataatgag cagtgaggat gaccagaggt cacttctgtt gccatattgg 660

tttcagtggg gtttggttgg cttttttttt tttttaacca caacctgttt tttatttatt 720

tatttattta tttatttatt tatatttttt attttttttt agatggagtc ttgctctgtc 780

acccaggtta gagtgcagtg gcaccatctc ggctcactgc aagctctgcc tccttggttc 840

acgccattct gctgcctcag cctcccgagt agctgggact acaggtgcct gccaccatac 900

ccggctaatt ttttctattt ttcagtagag acggggtttc accgtgttag ccaggatggt 960

c 961

<210>29

<211>2233

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR29

<400>29

agcttggaca cttgctgatg ccactttgga tgttgaaggg ccgccctctc ccacaccgct 60

ggccactttt aaatatgtcc cctctgccca gaagggcccc agaggagggg ctggtgaggg 120

tgacaggagt tgactgctct cacagcaggg ggttccggag ggaccttttc tccccattgg 180

gcagcataga aggacctaga agggccccct ccaagcccag ctgggcgtgc agggccagcg 240

attcgatgcc ttcccctgac tcaggtggcg ctgtcctaaa ggtgtgtgtg ttttctgttc 300

gccagggggt ggcggataca gtggagcatc gtgcccgaag tgtctgagcc cgtggtaagt 360

ccctggaggg tgcacggtct cctccgactg tctccatcac gtcaggcctc acagcctgta 420

ggcaccgctc ggggaagcct ctggatgagg ccatgtggtc atccccctgg agtcctggcc 480

tggcctgaag aggaggggag gaggaggcca gcccctccct agccccaagg cctgcgaggc 540

tgcaagcccg gccccacatt ctagtccagg cttggctgtg caagaagcag attgcctggc 600

cctggccagg cttcccagct aggatgtggt atggcagggg tgggggacat tgaggggctg 660

ctgtagcccc cacaacctcc ccaggtaggg tggtgaacag taggctggac aagtggacct 720

gttcccatct gagattcaag agcccacctc tcggaggttg cagtgagccg agatccctcc 780

actgcactcc agcctgggca acagagcaag actctgtctc aaaaaaacag aacaacgaca 840

acaaaaaacc cacctctggc ccactgccta actttgtaaa taaagtttta ttggcacata 900

gacacaccca ttcatttaca tactgctgcg gctgcttttg cattaccctt gagtagacga 960

cagaccacgt ggccatggaa gccaaaaata tttactgtct ggccctttac agaagtctgc 1020

tctagaggga gaccccggcc catggggcag gaccactggg cgtgggcaga agggaggcct 1080

cggtgcctcc acgggcctag ttgggtatct cagtgcctgt ttcttgcatg gagcaccagg 1140

ggtcagggca agtacctgga ggaggcaggc tgttgcccgc ccagcactgg gacccaggag 1200

accttgagag gctcttaacg aatgggagac aagcaggacc agggctccca ttggctgggc 1260

ctcagtttcc ctgcctgtaa gtgagggagg gcagctgtga aggtgaactg tgaggcagag 1320

cctctgctca gccattgcag gggcggctct gccccactcc tgttgtgcac ccagagtgag 1380

gggcacgggg tgagatgtca ccatcagccc ataggggtgt cctcctggtg ccaggtcccc 1440

aagggatgtc ccatcccccc tggctgtgtg gggacagcag agtccctggg gctgggaggg 1500

ctccacactg ttttgtcagt ggtttttctg aactgttaaa tttcagtgga aaattctctt 1560

tcccctttta ctgaaggaac ctccaaagga agacctgact gtgtctgaga agttccagct 1620

ggtgctggac gtcgcccaga aagcccaggt actgccacgg gcgccggcca ggggtgtgtc 1680

tgcgccagcc atgggcacca gccaggggtg tgtctacgcc ggccaggggt aggtctccgc 1740

cggcctccgc tgctgcctgg ggagggccgt gcctgacact gcaggcccgg tttgtccgcg 1800

gtcagctgac ttgtagtcac cctgcccttg gatggtcgtt acagcaactc tggtggttgg 1860

ggaaggggcc tcctgattca gcctctgcgg acggtgcgcg agggtggagc tcccctccct 1920

ccccaccgcc cctggccagg gttgaacgcc cctgggaagg actcaggccc gggtctgctg 1980

ttgctgtgag cgtggccacc tctgccctag accagagctg ggccttcccc ggcctaggag 2040

cagccgggca ggaccacagg gctccgagtg acctcagggc tgcccgacct ggaggccctc 2100

ctggcgtcgc ggtgtgactg acagcccagg agcgggggct gttgtaattg ctgtttctcc 2160

ttcacacaga accttttcgg gaagatggct gacatcctgg agaagatcaa gaagtaagtc 2220

ccgcccccca ccc 2233

<210>30

<211>1851

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR30

<400>30

gggtgcattt ccacccaggg gacacttggc aatggtggga gacattgctt gttgtcacaa 60

ctgggcatgg gagtgctgct gcgtctagtg ggtagaggcc agagatgctc ctaatatcct 120

acaaggcaca gaacagcccc ccacaacaga gaattatcca gcctgaaaat gtccacagtg 180

ctgaggttgg gaaaccctat tctagagcca acaggctgtg aagcttgact catggttcca 240

tcaccaatag ctgcgtgacc ttggtgagtt ccttagctgc tctgtgcctc ggattcatgg 300

taggttttcc ttgttaggtt taaatgagtg aagttataca gagggcctga agtctcatgg 360

tattttacta gagcctcatt gtgttttagt tataattaga aattgggtaa ggtaaggaca 420

cagaagaagc catctgatct gggggcttca cacttagaag tgacctcgga gcaattgtat 480

tggggtggaa agggactaac agccaggagc agagggcaca ttggaattgg ggccagaggg 540

cacagactgc cttgtccatc aggcatagca atggacagag gaaggggaat gactagttat 600

ggctgcaagg ccaagtacag gggacttatt tctcatatct atctatctat ctacctaccg 660

tctatttatc tatcatctat ctacttattt atctatctat ttatgcatgt gtaccaaccg 720

aaagttttag taaatgcaca aactgcgata taatgaaaat ggaaattttc aaaagaagag 780

aaatcacctg ccacctgact accttaacaa atgagtggtt ttcatctctc cttccaggcc 840

tgtcattttt acagtgcttt agtcataaaa caggtcctct attctattgt tttatgtcac 900

atgaaattgt accataagca ttttccatga tgtgactcca ctgtttcatt ttccattttt 960

ttccagaatg aagataacct cattgttttt ttcctgattg taaaaatgct ctgtgctctt 1020

tttttttttt tttaacaatg caggcagtac caaaaagtat gaagaagaat gtaatagttc 1080

ccatttccca tctcactctt taaggccagc attttggtga acatccatcc gaacaaatct 1140

ccacgcgttt atcaatttgt tgacttactc cttcttttat gtaaatatga acatgattta 1200

actgccagtc catttggaac cttaaagtga aggtttttta ttgttggggt ttgctatggt 1260

ctgaatatgt gtgtcccccc aaaatttatg ttgaatccta acgcccaatg cgattaggag 1320

gtggggccat taggaggtga ttaagtcatg aagtcatcag ccctaatgaa tgggatttgt 1380

ggccttgaaa agggacccca gagagctgcc ttgccccttc tgccatgtaa ggacacagtg 1440

aggagctagg aagggggcct cagcagagac caaatgtgat ggtgcctcga tattggactt 1500

cccagcctcc agaatgtgag aaatgaattt ctgttgttta taagtcaccc agtctatagt 1560

attttgttct agcagcccaa acagactaag tcagggttgt tgttttagga agtggggaat 1620

ggggccatgc atgggtgtac gccagaacaa aggaagccag caagtcctga aagatactgg 1680

aaaagggaat agtgggcacg tgcagtgtgt tagtttcctg aggctgctat aacaaagcac 1740

cacaggttgg gtggcttaaa taacagaaat tcattctccc atcattctgg ggaccagacg 1800

tctgaaatca agactcctat gccatgctcc ttctgaaggc tccaggggag g 1851

<210>31

<211>1701

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR31

<220>

<221>misc_feature

<222>(159)..(1696)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>31

cacccgcctt ggccccccag agtgctggga ttacaagtgt aaaccaccat tcctggctag 60

atttaatttt ttaaaaaata aagagaagta ggaatagttc attttaggga gagcccctta 120

actgggacag gggcaggaca ggggtgaggc ttcccttant tcaagctcac ctcaaaccca 180

cccaggactg tgtgtcacat tctccaataa aggaaaggtt gctgcccccg cctgtgagtg 240

ctgcagtgga gggtagaggg ccgtgggcag agtgcttcat ggactgctca tcaagaaagg 300

cttcatgaca atcggcccag ctgctgtcat cccacattct acttccagct aggagaaggc 360

ggcttgccca cagtcaccca gccggcaagt gtcacccctg ggttggaccc agagctatga 420

tcctgcccag gggtccagct gagaatcagg cccacgttct aggcagaggg gctcacctac 480

tgggactcca gtagctgtag tgcatggagg catcatggct gcagcagcct ggacctggtc 540

tcacactggc tgtccctgtg ggcaggccat cctcaatgcc aggtcaggcc caagcatgta 600

tcccagacaa tgacaatggg gtggaatcct ctcttgtccc agaagccact cctcactgtt 660

ctacctgagg aaggcagggg catggtggaa tcctgaagcc tgctgtgagg gtctccagcg 720

aacttgcaca tggtcagccc tgccttctcc tccctgaact agattgagcg agagcaagaa 780

ggacattgaa ccagcaccca aagaattttg gggaacggcc tctcatccag gtcaggctca 840

cctccttttt aaaatttaat taattaatta attaattttt ttttagagac agagtcttac 900

tgtgtggccc aggctgtagt gcagtggcac aatcatagtt cactgcagcc tcaaactccc 960

cacctcagcc tctggattag ctgagactac aggtgcacca ccaccacacc cagctaatat 1020

ttttattttt gtagagagag ggtttcacca tcttgcccag gctggtctca aactcctggg 1080

ctcaagtgat cccgcccagg tctgaaagcc cccaggctgg cctcagactg tggggttttc 1140

catgcagcca cccgagggcg cccccaagcc agttcatctc ggagtccagg cctggccctg 1200

ggagacagag tgaaaccagt ggtttttatg aacttaactt agagtttaaa agatttctac 1260

tcgatcactt gtcaagatgc gccctctctg gggagaaggg aacgtgactg gattccctca 1320

ctgttgtatc ttgaataaac gctgctgctt catcctgtgg gggccgtggc cctgtccctg 1380

tgtgggtggg gcctcttcca tttccctgac ttagaaacca cagtccacct agaacagggt 1440

ttgagaggct tagtcagcac tgggtagcgt tttgactcca ttctcggctt tcttcttttt 1500

ctttccagga tttttgtgca gaaatggttc ttttgttgcc gtgttagtcc tccttggaag 1560

gcagctcaga aggcccgtga aatgtcgggg gacaggaccc ccagggaggg aaccccaggc 1620

tacgcacttt agggttcgtt ctccagggag ggcgacctga cccccgnatc cgtcggngcg 1680

cgnngnnacn aannnnttcc c 1701

<210>32

<211>771

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR32

<400>32

gatcacacag cttgtatgtg ggagctagga ttggaacccc agaagtctgg ccccaggttc 60

atgctctcac ccactgcata caatggcctc tcataaatca atccagtata aaacattaga 120

atctgcttta aaaccataga attagtagcg taagtaataa atgcagagac catgcagtga 180

atggcattcc tggaaaaagc ccccagaagg aattttaaat cagctttcgt ctaatcttga 240

gcagctagtt agcaaatatg agaatacagt tgttcccaga taatgcttta tgtctgacca 300

tcttaaactg gcgctgtttt tcaaaaactt aaaaacaaaa tccatgactc ttttaattat 360

aaaagtgata catgtctact tgggaggctg aggtggtggg aggatggctt gagtttgagg 420

ctgcagtatg ctactatcat gcctataaat agccgctgca ttccagcttg ggcaacatac 480

ccaggcccta tctcaaaaaa ataaaaagta atacatctac attgaagaaa attaatttta 540

ttgggttttt ttgcattttt attatacaca gcacacacag cacatatgaa aaaatgggta 600

tgaactcagg cattcaactg gaagaacagt actaaatcaa tgtccatgta gtcagcgtga 660

ctgaggttgg tttgtttttt cttttttctt ctcttctctt ctcttttctt tttttttgag 720

acggagcttt gctctttttg cccaggcttg attgcaatgg cgtgatctca g 771

<210>33

<211>1368

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR33

<400>33

gcttttatcc tccattcaca gctagcctgg cccccagagt acccaattct ccctaaaaaa 60

cggtcatgct gtatagatgt gtgtggcttg gtagtgctaa agtggccaca tacagagctc 120

tgacaccaaa cctcaggacc atgttcatgc cttctcactg agttctggct tgttcgtgac 180

acattatgac attatgatta tgatgacttg tgagagcctc agtcttctat agcactttta 240

gaatgcttta taaaaaccat ggggatgtca ttatattcta acctgttagc acttctgttc 300

gtattaccca tcacatccca acatcaattc tcatatatgc aggtacctct tgtcacgcgc 360

gtccatgtaa ggagaccaca aaacaggctt tgtttgagca acaaggtttt tatttcacct 420

gggtgcaggt gggctgagtc tgaaaagaga gtcagtgaag ggagacaggg gtgggtccac 480

tttataagat ttgggtaggt agtggaaaat tacaatcaaa gggggttgtt ctctggctgg 540

ccagggtggg ggtcacaagg tgctcagtgg gagagccttt gagccaggat gagccagaag 600

gaatttcaca aggtaatgtc atcagttaag gcagggactg gccattttca cttcttttgt 660

ggtggaatgt catcagttaa ggcaggaacc ggccattttc acttcttttg tgattcttca 720

cttgcttcag gccatctgga cgtataggtg caggtcacag tcacagggga taagatggca 780

atggcatagc ttgggctcag aggcctgaca cctctgagaa actaaagatt ataaaaatga 840

tggtcgcttc tattgcaaat ctgtgtttat tgtcaagagg cacttatttg tcaattaaga 900

acccagtggt agaatcgaat gtccgaatgt aaaacaaaat acaaaacctc tgtgtgtgtg 960

tgtgtgtgag tgtgtgtgta tgtgtgtgtg tgtgtattag agaggaaaag cctgtatttg 1020

gaggtgtgat tcttagattc taggttcttt cctgcccacc ccatatgcac ccaccccaca 1080

aaagaacaaa caacaaatcc caggacatct tagcgcaaca tttcagtttg catattttac 1140

atatttactt ttcttacata ttaaaaaact gaaaatttta tgaacacgct aagttagatt 1200

ttaaattaag tttgttttta cactgaaaat aatttaatat ttgtgaagaa tactaataca 1260

ttggtatatt tcattttctt aaaattctga acccctcttc ccttatttcc ttttgacccg 1320

attggtgtat tggtcatgtg actcatggat ttgccttaag gcaggagg 1368

<210>34

<211>755

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR34

<400>34

actgggcacc ctcctaggca ggggaatgtg agaactgccg ctgctctggg gctgggcgcc 60

atgtcacagc aggagggagg acggtgttac accacgtggg aaggactcag ggtggtcagc 120

cacaaagctg ctggtgatga ccaggggctt gtgtcttcac tctgcagccc taacacccag 180

gctgggttcg ctaggctcca tcctgggggt gcagaccctg agagtgatgc cagtgggagc 240

ctcccgcccc tccccttcct cgaaggccca ggggtcaaac agtgtagact cagaggcctg 300

agggcacatg tttatttagc agacaaggtg gggctccatc agcggggtgg cctggggagc 360

agctgcatgg gtggcactgt ggggagggtc tcccagctcc ctcaatggtg ttcgggctgg 420

tgcggcagct ggcggcaccc tggacagagg tggatatgag ggtgatgggt ggggaaatgg 480

gaggcacccg agatggggac agcagaataa agacagcagc agtgctgggg ggcaggggga 540

tgagcaaagg caggcccaag acccccagcc cactgcaccc tggcctccca caagccccct 600

cgcagccgcc cagccacact cactgtgcac tcagccgtcg atacactggt ctgttaggga 660

gaaagtccgt cagaacaggc agctgtgtgt gtgtgtgcgt gtatgagtgt gtgtgtgtga 720

tccctgactg ccaggtcctc tgcactgccc ctggg 755

<210>35

<211>1193

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR35

<220>

<221>misc_feature

<222>(312)..(1191)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>35

cgacttggtg atgcgggctc ttttttggtt ccatatgaac tttaaagtag tcttttccaa 60

ttctgtgaag aaagtcattg gtaggttgat ggggatggca ttgaatctgt aaattacctt 120

gggcagtatg gccattttca caatgttgat tcttcctatc catgatgatg gaatgttctt 180

ccattagttt gtatcctctt ttatttcctt gagcagtggt ttgtagttct ccttgaagag 240

gtccttcaca tcccttgtaa gttggattcc taggtatttt attctctttg aagcaaattg 300

tgaatgggag tncactcacg atttggctct ctgtttgtct gctgggtgta taaanaatgt 360

ngtgatnttn gtacattgat ttngtatccn tgagacttng ctgaatttgc ttnatcngct 420

tnngggaacc ttttgggctg aaacnatggg attttctaaa tatacaatca tgtcgtctgc 480

aaacagggaa caatttgact tcctcttttc ctaattgaat acactttatc tccttctcct 540

gcctaattgc cctgggcaaa acttccaaca ctatgntngn aataggagnt ggtgagagag 600

ggcatccctg ttcttgttgc cagnttttca aagggaatgc ttccagtttt ggcccattca 660

gtatgatatg ggctgtgggt ngtgtcataa atagctctta tnattttgaa atgtgtccca 720

tcaataccta atttattgaa agtttttagc atgaangcat ngttgaattt ggtcaaaggc 780

tttttctgca tctatggaaa taatcatgtg gtttttgtct ttggctcntg tttatatgct 840

ggatnacatt tattgatttg tgtatatnga acccagcctn ncatcccagg gatgaagccc 900

acttgatcca agcttggcgc gcngnctagc tcgaggcagg caaaagtatg caaagcatgc 960

atctcaatta gtcagcaccc atagtccgcc cctacctccg cccatccgcc cctaactcng 1020

nccgttcgcc cattctcgcc catggctgac taatnttttt annatccaag cggngccgcc 1080

ctgcttganc attcagagtn nagagnnttg gaggccnagc cttgcaaaac tccggacngn 1140

ttctnnggat tgaccccnnt taaatatttg gttttttgtn ttttcanngg nga 1193

<210>36

<211>1712

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR36

<400>36

gatcccatcc ttagcctcat cgatacctcc tgctcacctg tcagtgcctc tggagtgtgt 60

gtctagccca ggcccatccc ctggaactca ggggactcag gactagtggg catgtacact 120

tggcctcagg ggactcagga ttagtgagcc ccacatgtac acttggcctc agtggactca 180

ggactagtga gccccacatg tacacttggc ctcaggggac tcaggattag tgagccccca 240

catgtacact tggcctcagg ggactcagga ttagtgagcc ccacatgtac acttggcctc 300

aggggactca ggactagtga gccccacatg tacacttggc ctcaggggac tcagaactag 360

tgagccccac atgtacactt ggcttcaggg gactcaggat tagtgagccc cacatgtaca 420

cttggacacg tgaaccacat cgatgtgctg cagagctcag ccctctgcag atgaaatgtg 480

gtcatggcat tccttcacag tggcacccct cgttccctcc ccacctcatc tcccattctt 540

gtctgtcttc agcacctgcc atgtccagcc ggcagattcc accgcagcat cttctgcagc 600

acccccgacc acacacctcc ccagcgcctg cttggccctc cagcccagct cccgcctttc 660

ttccttgggg aagctccctg gacagacacc ccctcctccc agccatggct ttttcctgct 720

ctgccccacg cgggaccctg ccctggatgt gctacaatag acacatcaga tacagtcctt 780

cctcagcagc cggcagaccc agggtggact gctcggggcc tgcctgtgag gtcacacagg 840

tgtcgttaac ttgccatctc agcaactagt gaatatgggc agatgctacc ttccttccgg 900

ttccctggtg agaggtactg gtggatgtcc tgtgttgccg gccacctttt gtccctggat 960

gccatttatt tttttccaca aatatttccc aggtctcttc tgtgtgcaag gtattagggc 1020

tgcagcgggg gccaggccac agatctctgt cctgagaaga cttggattct agtgcaggag 1080

actgaagtgt atcacaccaa tcagtgtaaa ttgttaactg ccacaaggag aaaggccagg 1140

aaggagtggg gcatggtggt gttctagtgt tacaagaaga agccagggag ggcttcctgg 1200

atgaagtggc atctgacctg ggatctggag gaggagaaaa atgtcccaaa agagcagaga 1260

gcccacccta ggctctgcac caggaggcaa cttgctgggc ttatggaatt cagagggcaa 1320

gtgataagca gaaagtcctt gggggccaca attaggattt ctgtcttcta aagggcctct 1380

gccctctgct gtgtgacctt gggcaagtta cttcacctct agtgctttgg ttgcctcatc 1440

tgtaaagtgg tgaggataat gctatcacac tggttgagaa ttgaagtaat tattgctgca 1500

aagggcttat aagggtgtct aatactagta ctagtaggta cttcatgtgt cttgacaatt 1560

ttaatcatta ttattttgtc atcaccgtca ctcttccagg ggactaatgt ccctgctgtt 1620

ctgtccaaat taaacattgt ttatccctgt gggcatctgg cgaggtggct aggaaagcct 1680

ggagctgttt cctgttgacg tgccagacta gt 1712

<210>37

<211>1321

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR37

<400>37

aggatcacat ttaaggaagt gtgtggggtc cctggatgac accagcaccc agtgcggctc 60

tgtctggcaa ccgctcccaa ggtggcagga gtgggtgtcc cctgtgtgtc agtgggcagc 120

tcctgctgag cctacagctc actggggagc ctgacagcgg ggccatgtgc ctgacactcc 180

tctctgcttg tggacctggc aaggcaggga gcagaaaaca gagccacttg aaggctttct 240

gtctgcgtct gtgtgcagtg tggatttagt tgtgcttttt tcttgctggg agagcacagc 300

caccatttac aagcagtgtc accctcatgg gtggcgagga cagaacagga gcctctgctc 360

tctgtaccta tctgggcccg gtgggctccc ttgtcctggc ttccatctct gtctcagcga 420

ccattcagcc ctgcgcagga acacatgttg cttagaaaag ccaaattcag cccttgtctc 480

tgcctcctct ggtctcatga tgtgcatctg ttaccttgaa actggaaacc agtctatcaa 540

tgtctgtgcc aattttttat tccctcccca acctccttcc ccatacgact ttttatttat 600

gtaggatgtg tgctgtctaa tgatgggatg accacatttt tccatgttct aaaagtgctc 660

ctctcccgca gggtcccagg gctggtggtt gctttgggtc tacagctacg tcttacccgc 720

ctcctgcctc aacagcctgt gtggtggcaa agccggtgtg gggctgggga acgcagcgtt 780

ctccaggagg gggacccggc tctccttctg cagtgcaggc gaaggcctag atgccagtgt 840

gacctcccac aaggcgtggc ttccagactc cccggctgga agtgatgctt ttttgcctcc 900

ggccctgggt ttgaagcagc ctggctttct cttggtaagt ggctggtgtc ttagcagctg 960

caatctgagc tcagccacct acacaccacc gtggccgaca ctttcattaa aaagtttcct 1020

gagacgactt gcgtgcatgt tgacttcatg atcagcgccg ctgggaagaa cccctgagcc 1080

ggtggggtgg ggctggaagc agcaggtgca gtgatggggc tgggtgccca ggaggcctca 1140

gtgctcaatc aggccaaggt ggccaagccc aggctgcagg gaaggccggc ctgggggttg 1200

tgggtgagca caggcaggca ccagctgggc agtgttagga tgctggagca gcatccgtaa 1260

ccccactgag tggggtagtc tggttggggc agggaccgct gttgctttgg cagagagaga 1320

t 1321

<210>38

<211>1445

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR38

<220>

<221>misc_feature

<222>(348)..(949)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>38

gatctatggg agtagcttcc ttagtgagct ttcccttcaa atactttgca accaggtaga 60

gaattttgga gtgaaggttt tgttcttcgt ttcttcacaa tatggatatg catcttcttt 120

tgaaaatgtt aaagtaaatt acctctcttt tcagatactg tcttcatgcg aacttggtat 180

cctgtttcca tcccagcctt ctataaccca gtaacatctt ttttgaaacc agtgggtgag 240

aaagacacct ggtcaggaac gcggaccaca ggacaactca ggctcaccca cggcatcaga 300

ctaaaggcaa acaaggactc tgtataaagt accggtggca tgtgtatnag tggagatgca 360

gcctgtgctc tgcagacagg gagtcacaca gacacttttc tataatttct taagtgcttt 420

gaatgttcaa gtagaaagtc taacattaaa tttgattgaa caattgtata ttcatggaat 480

attttggaac ggaataccaa aaaatggcaa tagtggttct ttctggatgg aagacaaact 540

tttcttgttt aaaataaatt ttattttata tatttgaggt tgaccacatg accttaagga 600

tacatataga cagtaaactg gttactacag tgaagcaaat taacatatct accatcgtac 660

atagttacat ttttttgtgt gacaggaaca gctaaaatct acgtatttaa caaaaatcct 720

aaagacaata catttttatt aactatagcc ctcatgatgt acattagatc gtgtggttgt 780

ttcttccgtc cccgccacgc cttcctcctg ggatggggat tcattcccta gcaggtgtcg 840

gagaactggc gcccttgcag ggtaggtgcc ccggagcctg aggcgggnac tttaanatca 900

gacgcttggg ggccggctgg gaaaaactgg cggaaaatat tataactgna ctctcaatgc 960

cagctgttgt agaagctcct gggacaagcc gtggaagtcc cctcaggagg cttccgcgat 1020

gtcctaggtg gctgctccgc ccgccacggt catttccatt gactcacacg cgccgcctgg 1080

aggaggaggc tgcgctggac acgccggtgg cgcctttgcc tgggggagcg cagcctggag 1140

ctctggcggc agcgctggga gcggggcctc ggaggctggg cctggggacc caaggttggg 1200

cggggcgcag gaggtgggct cagggttctc cagagaatcc ccatgagctg acccgcaggg 1260

cggccgggcc agtaggcacc gggcccccgc ggtgacctgc ggacccgaag ctggagcagc 1320

cactgcaaat gctgcgctga ccccaaatgc tgtgtccttt aaatgtttta attaagaata 1380

attaataggt ccgggtgtgg aggctcaagc cttaatcccc agcacctggc gaggccgagg 1440

aggga 1445

<210>39

<211>2331

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR39

<400>39

gtgaaataga tcactaaagc tgattcctct tgtctaaatg aaactttcta ccctttgatg 60

gacagctatg ctttccccat cctctcccgt cccccagccc ttggtaacca tcatcctact 120

ctctacttgt aggagttcaa cttgtttaga ttttgtgagt gagaacatgt ggtatttgcc 180

tttagagtcc tctaggttta tccatattgt gttaaatgac aggattccct gcctttttaa 240

ggctgaatag tatttcattg taatatatat acatacacac acacatatac acacacatat 300

atatacatat atacatatat gtacatagat acatatatat gtacatatat acacacacat 360

atacacacat atatacacat atatacatat acatatatac acatatatgt acatatatat 420

aacttttttt catttatcca ttcacttaat acatatgatg gagggcttta tatatgccag 480

gctctgtgat gaatgctgga aattcaatag tgagaaagac tcagtctctg cctccaaaga 540

gcatcatggg ctaggtgctg caacgaggaa ttgccaactg ttgtcatgag agcacagaga 600

agggactcaa ccagccttga agaatcaggg gaggcttcta agctaatggt gtgtgcctgg 660

ggatcacatt gtttcaagca gcagtaacag gatgtgctca ggtccagatg tgagagagag 720

agagagcata tgtcttcaag aaactaacag tagctcccta tagctgaagc aggagtacaa 780

aatagtgagt ttaagtgatg aggcaagaga tatgaagaag cttgaccatg cagctacacc 840

gggcagcatg ccctctgaga catctcatgg aagccggaaa tgggagtgcc ttgataccaa 900

gccagagaaa ttataatact aagtagatag actgagcagc actcctcctg ggaagaatga 960

gacaagccct gaatttggag gtaagttgtg gattggtgat tagaggagag gtaacaggca 1020

ccaaagcaag aaatagtatt gatgcaaagc tgaggttaat tggatgacaa aatgaagagc 1080

ataaggggct cagacacaga ctgagcagaa aacgagtagc atctgaacct agattgagtt 1140

actaatggat gagaaagagt tcttaaagtt gatgaccacg ggatccatat ataagaatgt 1200

ccaatctccc caaattgatc cacgagttca gtgcaatgcc aatcaaaatc ccactaacaa 1260

gtttatttta aaatgtaaat gaaaatacaa aatttttaaa aagcaaagca atattgaaaa 1320

cccaggaaaa attaggagga cttacacaac ctgatctcaa aacttaccat tatcaagaca 1380

gagtgttatt gacacaagga gagacaaata gataaacgga atgtggtagt ctggagatgc 1440

acccacatgt atgtggtcaa ttgatttttg gccaaggcac caagtcaatt caaaggagca 1500

aggaaagtag tacagaaaca accaaatatt gttttggaaa ataatgacaa agggcttata 1560

accagaatat aagcatataa atataattct ttcaaatcaa taataagaag gcaaatatct 1620

aataaaaatg agcaaagact tgaaaagtca cttaaaaagg cttattaatt agaaatatgc 1680

aaatgttatt agtcttcagt ggaatttaca ttaaaccaca agggatacta ttatatctta 1740

tgcccactag aataaccaaa ggaaaaaaga cagacaaaac aaaatgctgg tgaggatgtg 1800

aagcaactgg aactctcata cattattggt ggtaatgtaa aatttataca accattatga 1860

ataaaggttt ggcagtttct tacaaagttg aatgcacttc tccacgatga ctaggctttt 1920

cactcatagg cgtctggctc cctagaactg aaaacatatg ttcacaagaa gacttgcaaa 1980

tatatattct cccacgtcag gagatatttg ctatgcattt aactgacata agattagtgc 2040

tagagtttat aatgaggttc ttcaaatcta aaagaaaatg caaagcatat aatagtaagg 2100

ggtgcaggcc aggcgcagtg gctcactctg taatcccagc actttgggag gccgaggtgg 2160

gcggatcaca aggtcaggag ttcgagacca acctggccaa catagtgaaa ccctgtctct 2220

actaaaaata caaaaactag ccaggtgcgg tgtcatgcac ctgtagtccc agctactcgg 2280

gaggccgagg caggagaatc acttgaacct gggaggtgga ggttgcagtg a 2331

<210>40

<211>1071

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR40

<400>40

gctgtgattc aaactgtcag cgagataagg cagcagatca agaaagcact ccgggctcca 60

gaaggagcct tccaggccag ctttgagcat aagctgctga tgagcagtga gtgtcttgag 120

tagtgttcag ggcagcatgt taccattcat gcttgacttc tagccagtgt gacgagaggc 180

tggagtcagg tctctagaga gttgagcagc tccagcctta gatctcccag tcttatgcgg 240

tgtgcccatt cgctttgtgt ctgcagtccc ctggccacac ccagtaacag ttctgggatc 300

tatgggagta gcttccttag tgagctttcc cttcaaatac tttgcaacca ggtagagaat 360

tttggagtga aggttttgtt cttcgtttct tcacaatatg gatatgcatc ttcttttgaa 420

aatgttaaag taaattacct ctcttttcag atactgtctt catgcgaact tggtatcctg 480

tttccatccc agccttctat aacccagtaa catctttttt gaaaccagtg ggtgagaaag 540

acacctggtc aggaacgcgg accacaggac aactcaggct cacccacggc atcagactaa 600

aggcaaacaa ggactctgta taaagtaccg gtggcatgtg tattagtgga gatgcagcct 660

gtgctctgca gacagggagt cacacagaca cttttctata atttcttaag tgctttgaat 720

gttcaagtag aaagtctaac attaaatttg attgaacaat tgtatattca tggaatattt 780

tggaacggaa taccaaaaaa tggcaatagt ggttctttct ggatggaaga caaacttttc 840

ttgtttaaaa taaattttat tttatatatt tgaggttgac cacatgacct taaggataca 900

tatagacagt aaactggtta ctacagtgaa gcaaattaac atatctacca tcgtacatag 960

ttacattttt ttgtgtgaca ggaacagcta aaatctacgt atttaacaaa aatcctaaag 1020

acaatacatt tttattaact atagccctca tgatgtacat tagatctcta a 1071

<210>41

<211>1135

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR41

<400>41

cgtgtgcagt ccacggagag tgtgttctcc tcatcctcgt tccggtggtt gtggcgggaa 60

acgtggcgct gcaggacacc aacatcagtc acgtatttca ttctggaaaa aaaagtagca 120

caagcctcgg ctggttccct ccagctctta ccaggcagcc taagcctagg ctccattccc 180

gctcaaggcc ttcctcaggg gcctgctcac cacaggagct gttcccatgc agggactaag 240

gacatgcagc ctgcatagaa accaagcacc caggaaaaca tgattggatg gagcgggggg 300

gtgtggtctc tagccttgtc cacctccggt cctcatgggt ctcacacctc ctgagaatgg 360

gcaccgcaga ggccacagcc catacagcca agatgacaga ctccgtaagt gacagggatc 420

cacagcagag tgggtgaaat gttccctata aactttacaa aattaatgag ggcaggggga 480

ggggagaaat gaaaatgaac ccagctcgca gcacatcagc atcagtcact aggtcggcgt 540

gctctctgac tgcttcctcg tagctgcttg gtgtctcatt gcctcagaag catgtagacc 600

ctgtcacaag attgtagttc ccctaactgc tccgtagatc acaacttgaa ccttaggaaa 660

tgctgttttc cctttgagat attcctttgg gtcctgtata ctgatggagc tactgactga 720

gctgctccga aggaccccac gaggagctga ctaaaccaag agtgcagttt gtacaccctg 780

atgattacat cccccttgcc ccaccaatca actctcccaa ttttccagcc cctcaccctc 840

cagtcccctt aaaagcccca gcccaggccg ggcacagtgg ctcatgcctg taatcccagc 900

actttgggag gccaaggtgg gcagatcacc tgagggcagg aatttgagac cagcctgacc 960

aacatgaaga aaccccgtct ctattacaaa tacaaaatta gccgggcgtg ttgctgcata 1020

ctggtaatcc cagctacttg ggagggtgag gcaggagaat cacttgaatc tgggaggcgg 1080

aggttgcgat gagccgagac agcgccattg cactgcagcc tgggcaacaa gagca 1135

<210>42

<211>735

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR42

<400>42

aagggtgaga tcactaggga gggaggaagg agctataaaa gaaagaggtc actcatcaca 60

tcttacacac tttttaaaac cttggttttt taatgtccgt gttcctcatt agcagtaagc 120

cctgtggaag caggagtctt tctcattgac caccatgaca agaccctatt tatgaaacat 180

aatagacaca caaatgttta tcggatattt attgaaatat aggaattttt cccctcacac 240

ctcatgacca cattctggta cattgtatga atgaatatac cataatttta cctatggctg 300

tatatttagg tcttttcgtg caggctataa aaatatgtat gggccggtca cagtgactta 360

cgcccgtagt cccagaactt tgggaggccg aggcgggtgg atcacctgag gtcgggagtt 420

caaaaccagc ctgaccaaca tggagaaacc ccgtctctgc taaaaataca aaaattaact 480

ggacacggtg gcgtatgcct gtaatcccag ctactcggga agctgaggca ggagaactgc 540

ttgaacccag gaggcggagg ttgtggtgag tcgagattgc gccattgcac tccagcctgg 600

gcaacaagag cgaaattcca tctcaaaaaa aagaaaaaag tatgactgta tttagagtag 660

tatgtggatt tgaaaaatta ataagtgttg ccaacttacc ttagggttta taccatttat 720

gagggtgtcg gtttc 735

<210>43

<211>1227

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR43

<400>43

caaatagatc tacacaaaac aagataatgt ctgcccattt ttccaaagat aatgtggtga 60

agtgggtaga gagaaatgca tccattctcc ccacccaacc tctgctaaat tgtccatgtc 120

acagtactga gaccaggggg cttattccca gcgggcagaa tgtgcaccaa gcacctcttg 180

tctcaatttg cagtctaggc cctgctattt gatggtgtga aggcttgcac ctggcatgga 240

aggtccgttt tgtacttctt gctttagcag ttcaaagagc agggagagct gcgagggcct 300

ctgcagcttc agatggatgt ggtcagcttg ttggaggcgc cttctgtggt ccattatctc 360

cagcccccct gcggtgttgc tgtttgcttg gcttgtctgg ctctccatgc cttgttggct 420

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ttgggctatt ttgattcccc gttgggtata ttccctaggt aagacccaga agacacagga 540

ggtagttgct ttgggagagt ttggacctat gggtatgagg taatagacac agtatcttct 600

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tagacttgtt catgttgaca tttagtcttg ccttttcggt ggtgatttaa aaattatgta 840

tatcttgttt ggaatatagt ggagctatgg tgtggcattt tcatctggct ttttgtttag 900

ctcagcccgt cctgttatgg gcagccttga agctcagtag ctaatgaaga ggtatcctca 960

ctccctccag agagcggtcc cctcacggct cattgagagt ttgtcagcac cttgaaatga 1020

gtttaaactt gtttattttt aaaacattct tggttatgaa tgtgcctata ttgaattact 1080

gaacaacctt atggttgtga agaattgatt tggtgctaag gtgtataaat ttcaggacca 1140

gtgtctctga agagttcatt tagcatgaag tcagcctgtg gcaggttggg tggagccagg 1200

gaacaatgga gaagctttca tgggtgg 1227

<210>44

<211>1586

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR44

<400>44

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ttttccagac aattggaaga gcatgtgaaa gacacagatt ttgagaaatg ttaagtctag 180

ggaactgcaa ggcttttggc acaagaaagc cactgtagac tatagaggca ggatgcctag 240

attcaaatcc caactgctac acttctaagc tttgtaattt tggcaagttt ttaccctcta 300

ttttcttatc tataaaatat agattttata tatatagata tagatatata gatagataat 360

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ggtgatagga acccaggaag ggctctatga atattatgta ttattattat tctaaagtag 480

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gccagaacat aaagtgcctc ctatattata ttttacataa ttggaacatc attgaaaaat 600

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aaatatcttt ctgatgtcac tgtgaacaac agatgagaag aagtgaatcc tgagttaagg 720

agaccagctc tctgattact gccataatcc agggagggta ccataaggat ttcaactgga 780

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agatagggaa aatgggagga gaagcaggct ttgaaaaagt ggcttgtctt gtaaaattat 960

gtgctgttaa aacagtacaa gaaattaata tattcaatcc caaaatacag ggacaattct 1020

ttttgaaaga gttacccaga tagtcttcct tgaagttttc agttaaagaa atttcttgtt 1080

aacaaataat gtagtcatag aagaaaacac ttaaaacttt attgaataaa gctaataaat 1140

catttaatat aatttatagg aaattgttac ataacacaca cattcaatac tttttgctaa 1200

agtataaatt aatggaagga gagcacgcac acagaggttg aattatgttt atgactttat 1260

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agaacaaaat agggtctcac ccgacctata atgttctttt cttgatataa atatgcacat 1440

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<210>45

<211>1981

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR45

<400>45

atggatcata gggtaaataa atttataatt tcttgagaaa gcttcgtact gttttccaag 60

atggctgtac taatttccat tcctaccaac agtgtacagg gtttcttttt ctccacatcc 120

tcaccaacac ttatcttcca tcttttttta taatagccct agtaaaatgt gtgaggtgat 180

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g 1981

<210>46

<211>1859

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR46

<400>46

attgtttttc tcgcccttct gcattttctg caaattctgt tgaatcattg cagttactta 60

ggtttgcttc gtctccccca ttacaaacta cttactgggt ttttcaaccc tagttccctc 120

atttttatga tttatgctca tttctttgta cacttcgtct tgctccatct cccaactcat 180

ggcccctggc tttggattat tgttttggtc ttttattttt tgtcttcttc tacctcaaca 240

cttatcttcc tctcccagtc tccggtaccc tatcaccaag gttgtcatta acctttcata 300

ttattcctca ttatccatgt attcatttgc aaataagcgt atattaacaa aatcacaggt 360

ttatggagat ataattcaca taccttaaaa ttcaggcttt taaagtgtac ctttcatgtg 420

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caatacctca aaaagaagtc tgtactcatt agtagtcatt tcacattcac cactccctct 540

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tatactttat ttgtccatca gttgttcatg ctttatttgt ccatcagttg atgaacattt 780

gcgtttttgc cactttgggc tattaagaat aatgctactg tgaacaagtg tgtacaagtt 840

cctctacaaa tttttgtgtg gacatatcct ttcagttctc tcaggtgtat atctgggaat 900

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acacctgtaa tcccaacact tcaggaagct gaggtgggag gatcacttga gcctagtagt 1140

ttgagaccag cctgggcaac atagggagac cctgtctcta caaaaaataa tttaaaataa 1200

attagctggg cgttgtggca cacacctgta gtcccagcta catgggaggc tgaggtggaa 1260

ggattccctg agcccagaag tttgaggttg cagtgagcca tgatggcagc actatactgt 1320

agcctgggtg tcagagcaag actccgtttc agggaagaaa aaaaaaagtg ggatgatatt 1380

tttgacactt ttcttcttgt tttcttaatt tcatacttct ggaaattcca ttaaattagc 1440

tggtaccact ctaactcatt gtgtttcatg gctgcatagt aatattgcat aatataaata 1500

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<210>47

<211>1082

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR47

<400>47

atcattagtc attagggaaa tgcaaatgaa aaacacaagc agccaccaat atacacctac 60

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cattgatggt agaaatggat aaagttgcag ccactgtgaa aaacagtctg cagtggctca 180

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atagagaaca gaaatcaaac agatgtttgt atactaatgt ttgtagcatc acttttcaca 300

ggagccaaaa ggtggaaata atccaaccat cagtgaacaa atgaatgtaa taaaagcaag 360

gtggtctgca tgcaatgcta catcatccat ctgtaaaaaa cgaacatcat tttgatagat 420

gatacaacat gggtggacat tgagaacatt atgcttagtg aaataagcca gacacaaaag 480

gaatatattg tataattgta attacatgaa gtgcctagaa tagtcaaatt catacaagag 540

aaagtgggat aggaatcacc atgggctgga aataggggga aggtgctata ctgcttattg 600

tggacaaggt ttcgtaagaa atcatcaaaa ttgtgggtgt agatagtggt gttggttatg 660

caaccctgtg aatatattga atgccatgga gtgcacactt tggttaaaag gttcaaatga 720

taaatattgt gttatatata tttccccacg atagaaaaca cgcacagcca agcccacatg 780

ccagtcttgt tagctgcctt cctttacctt caagagtggg ctgaagcttg tccaatcttt 840

caaggttgct gaagactgta tgatggaagt catctgcatt gggaaagaaa ttaatggaga 900

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ta 1082

<210>48

<211>1242

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<223>sequence of STAR48

<400>48

atcatgtatt tgttttctga attaattctt agatacatta atgttttatg ttaccatgaa 60

tgtgatatta taatataata tttttaattg gttgctactg tttataagaa tttcattttc 120

tgtttacttt gccttcatat ctgaaaacct tgctgatttg attagtgcat ccacaaattt 180

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tcacaccact gtactccagc ctgggcgaca gagtgagaca ccatctcaca aaaacacata 300

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<210>49

<211>1015

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<400>49

aaaccagaaa cccaaaacaa tgggagtgac atgctaaaac cagaaaccca aaacaatggg 60

agggtcctgc taaaccagaa acccaaaaca atgggagtga agtgctaaaa ccagaaaccc 120

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<210>50

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<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

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<400>50

caaccatcgt tccgcaagag cggcttgttt attaaacatg aaatgaggga aaagcctagt 60

agctccattg gattgggaag aatggcaaag agagacaggc gtcattttct agaaagcaat 120

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aggcggaagg ggagaagcag caggctcagg tgtcgccaga gaggctggga ggaaactata 420

aacctgggca atttcctcct catcagcgag cctttcttgg gcaatagggg cagagctcaa 480

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agagggtctg acacttgagg ggttctaatg ggaaaggaaa gacccacact gaattccact 600

tagccccaga ccctgggccc agcggtgccg gcttccaacc ataccaacca tttccaagtg 660

ttgccggcag aagttaacct ctcttagcct cagtttcccc acctgtaaaa tggcagaagt 720

aaccaagctt accttcccgg cagtgtgtga ggatgaaaag agctatgtac gtgatgcact 780

tagaagaagg tctagggtgt gagtggtact cgtctggtgg gtgtggagaa gacattctag 840

gcaatgagga ctggggagag cctggcccat ggcttccact cagcaaggtc agtctcttgt 900

cctctgcact cccagccttc cagagaggac cttcccaacc agcactcccc acgctgccag 960

tcacacatag ttacacacat acaatcacat atatgttccc atatagacac attcacactc 1020

ataccttcac acatgcacac gcatgtgcac acacagtcac tcatttctgt gttggagatt 1080

gggtgaggac attcaatggg tgaggaccaa caggtgtgaa gattgctttc tagaaaatga 1140

ctcctgtctc tctttgccat tcttcccaat ccgatggagc tactaggctt ttccctcatt 1200

tcatgtttaa taaaccttcc caatggcgaa atgggctttc tcaagaagtg gtgagtgtcc 1260

catccctgcg gtggggacag gggtggcagc ggacaagcct gcctggaggg aactgtcagg 1320

ctgattccca gtccaactcc agcttccaac acctcatcct ccaggcagtc ttcattcttg 1380

gctctaattt cgctcttgtt ttctttttta tttttatcga gaactgggtg gagagctttt 1440

ggtgtcattg gggattgctt tgaaaccctt ctctgcctca cactgggagc tggcttgagt 1500

caactggtct ccatggaatt tcttttttta gtgtgtaaac agctaagttt taggcagctg 1560

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gggcaaacag atgccgtgtc tctcaactca ccaattaaga agcccagaaa atgtggcttg 1680

gagaccacat gtctggttat gtctagtaat tcagatggct tcacctggga agccctttct 1740

gaatgtcaaa gccatgagat aaaggacata tatatagtag ctagggtggt ccacttctta 1800

ggggccatct ccggaggtgg tgagcactaa gtgccaggaa gagaggaaac tctgttttgg 1860

agccaaagca taaaaaaacc ttagccacaa accactgaac atttgttttg tgcaggttct 1920

gagtccaggg agggcttctg aggagagggg cagctggagc tggtaggagt tatgtgagat 1980

ggagcaaggg ccctttaaga ggtgggagca gcatgagcaa aggcagagag gtggtaatgt 2040

ataaggtatg tcatgggaaa gagtttggct ggaacagagt ttacagaata gaaaaattca 2100

acactattaa ttgagcctct actacgtgct cgacattgtt ctagtcactg agataggttt 2160

ggtatacaaa acaaaatcca tcctctatgg acattttagt gactaacaac aatataaata 2220

ataaaagtga acaaaagctc aaaacatgcc aggcactatt atttatttat ttatttattt 2280

atttatttat tttttgaaac agagtctcgc tctgttgccc aggctggagt gtagtggtgc 2340

gatctcggct cactg 2355

<210>51

<211>2289

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR51

<400>51

tcacaggtga caccaatccc ctgaccacgc tttgagaagc actgtactag attgactttc 60

taatgtcagt cttcattttc tagctctgtt acagccatgg tctccatatt atctagtaca 120

acacacatac aaatatgtgt gatacagtat gaatataata taaaaatatg tgttataata 180

taaatataat attaaaatat gtctttatac tagataataa tacttaataa cgttgagtgt 240

ttaactgctc taagcacttt acctgcagga aacagttttt tttttatttt ggtgaaatac 300

aactaacata aatttattta caattttaag catttttaag tgtatagttt agtggagtta 360

atatattcaa aatgttgtgc agccgtcacc atcatcagtc ttcataactc ttttcatatt 420

gtaaaattaa aagtttatgc tcatttaaaa atgactccca atttcccccc tcctcaacct 480

ctggaaacta ccattctatt ttctgcctcc gtagttttgc ccactctaag tacctcacat 540

aagtggaatt tgtcttattt gcctgtttgt gaccggctga tttcatttag tataatgtcc 600

tcaagtttta ttcacgttat atagcatatg tcataatttt cttcactttt aagcttgagt 660

aatatttcat cgtatgtatc tcacattttg cttatccatt catctctcag tggacacttg 720

agttgcttct acattttagc tgttgtgaat actgctgcta tgaacatggg tgtataaata 780

tctcaagacc tttttatcag ttttttaaaa tatatactca gtagtagttt agctggatta 840

tatggtaatt ttatttttaa tttttgagga actgtcctac ccttttattc aatagtagct 900

ataccaattg acaattggca ttcctaccaa cagggcataa gggttctcaa ttctccacat 960

attccctgat acttgttatt ttcaggtgtt tttttttttt tttttttttt atgggagcca 1020

tgttaatggg tgtaaggtga tatttcatta tagttttgat ttgcatttcc ctaatgatta 1080

gtgatgttaa gcatctcttc atgtgcctat tggccatttg tatatcttct ttaaaaatat 1140

atatatactc attcctttgc ccatttttga attatgttta ttttttgtta ttgagtttca 1200

atacttttct atataaccta ggtattaatc ctttatcaga cttaagattt gcaaatattc 1260

tctttcattc cacaggttgc taattctctc tgttggtaat atcttttgat gctgttgtgt 1320

ccagaattga ttcattcctg tgggttcttg gtctcactga cttcaagaat aaagctgcgg 1380

accctagtgg tgagtgttac acttcttata gatggtgttt ccggagtttg ttccttcaga 1440

tgtgtccaga gtttcttcct tccaatgggt tcatggtctt gctgacttca ggaatgaagc 1500

cgcagacctt cgcagtgagg tttacagctc ttaaaggtgg cgtgtccaga gttgtttgtt 1560

ccccctggtg ggttcgtggt cttgctgact tcaggaatga agccgcagac cctcgcagtg 1620

agtgttacag ctcataaagg tagtgcggac acagagtgag ctgcagcaag atttactgtg 1680

aagagcaaaa gaacaaagct tccacagcat agaaggacac cccagcgggt tcctgctgct 1740

ggctcaggtg gccagttatt attcccttat ttgccctgcc cacatcctgc tgattggtcc 1800

attttacaga gtactgattg gtccatttta cagagtgctg attggtgcat ttacaatcct 1860

ttagctagac acagagtgct gattgctgca ttcttacaga gtgctgattg gtgcatttac 1920

agtcctttag ctagatacag aacgctgatt gctgcgtttt ttacagagtg ctgattggtg 1980

catttacaat cctttagcta gacacagtgc tgattggtgg gtttttacag agtgctgatt 2040

ggtgcgtctt tacagagtgc tgattggtgc atttacaatc ctttagctag acacagagtg 2100

ctgattggtg cgtttataat cctctagcta gacagaaaag ttttccaagt ccccacctga 2160

ccgagaagcc ccactggctt cacctctcac tgttatactt tggacatttg tccccccaaa 2220

atctcatgtt gaaatgtaac ccctaatgtt ggaactgagg ccagactgga tgtggctggg 2280

ccatgggga 2289

<210>52

<211>1184

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR52

<400>52

ctcttctttg tttttttatt ttggggtgtg tgggtacgtg taagatgaga aatgtacaaa 60

cacaagtatt tcagaaactc caagtaatat tctgtctgtg agttcacggt aaataaataa 120

aaagggcaaa gtgacagaaa tacaggatta ttaaaagcaa aataatgttc tttgaaatcc 180

cccccttggt gtatttttta tcttaggatg cagcactttc agcatgccca agtattgaaa 240

gcagtgtttt tacgctacca cggtaatttt atttagaaac cccatgttca cttttagttt 300

taaaatggtc tttatgacat aaaattatca gcattcatat ttttgtgttt taatattcct 360

ttggctactt attgaaacag taaacattac gaaaattagt aaacaaatct ttgatagttg 420

cttatttttg tttaattgaa tgtttatttt attaggtaaa tatacaatca aatttattta 480

aaaataatga ggaaaagaat acttttcttt cgctttgcga aagcaaagtg atttttcatt 540

cttctccgtc cgattccttc tcttccagct gccacagccg actgacaggc tcccggcggc 600

ctgaggagta gtatgcaaat tttggatgat tgacacctac agtagaagcc aatcacgtca 660

aagtaggatg ctgattggtt gacaacaata ggcgtaaacc ttgacgtttt aaaaacctga 720

cacccaatcc aggcgattca tgcaaataaa ggaagggagt cacattacca ggggccagag 780

agacttgagt acgacctcac gtgttcagtg gtggatattg cacagacgtc tgcaaggtct 840

atataaacgc tacataatgt tcaactcaat tgcttgcctt ggcctttccc aaacttgtca 900

ctggaatata aattatccct tttttaaaaa taaaaaaata agaattatgt agtgcacata 960

tatgatggtt catgtagaaa tctaaatgga cttccaacgc atggaatttt cctatttccc 1020

cctttcttta aattaatcct cagtgaagga ggctgttttc ccctagattt caaaaggacg 1080

agatttacag agcctttcct tggagaaacc cgctctaggc acagatggtc agtaaattta 1140

gcttcttcag cgaagttcca catggcaccg ccagatggca taag 1184

<210>53

<211>1431

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR53

<400>53

ccctgaggaa gatgacgagt aactccgtaa gagaaccttc cactcatccc ccacatccct 60

gcagacgtgc tattctgtta tgatactggt atcccatctg tcacttgctc cccaaatcat 120

tcccttctta caattttcta ctgtacagca ttgaggctga acgatgagag atttcccatg 180

ctctttctac tccctgccct gtatatatcc ggggatcctc cctacccagg atgctgtggg 240

gtcccaaacc ccaagtaagc cctgatatgc gggccacacc tttctctagc ctaggaattg 300

ataacccagg cgaggaagtc actgtggcat gaacagatgg ttcacttcga ggaaccgtgg 360

aaggcgtgtg caggtcctga gatagggcag aatcggagtg tgcagggtct gcaggtcagg 420

aggagttgag attgcgttgc cacgtggtgg gaactcactg ccacttattt ccttctctct 480

tcttgcctca gcctcaggga tacgacacat gcccatgatg agaagcagaa cgtggtgacc 540

tttcacgaac atgggcatgg ctgcggaccc ctcgtcatca ggtgcatagc aagtgaaagc 600

aagtgttcac aacagtgaaa agttgagcgt catttttctt agtgtgccaa gagttcgatg 660

ttagcgttta cgttgtattt tcttacactg tgtcattctg ttagatacta acattttcat 720

tgatgagcaa gacatactta atgcatattt tggtttgtgt atccatgcac ctaccttaga 780

aaacaagtat tgtcggttac ctctgcatgg aacagcatta ccctcctctc tccccagatg 840

tgactactga gggcagttct gagtgtttaa tttcagattt tttcctctgc atttacacac 900

acacgcacac aaaccacacc acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 960

acacaccaag taccagtata agcatctgcc atctgctttt cccattgcca tgcgtcctgg 1020

tcaagctccc ctcactctgt ttcctggtca gcatgtactc ccctcatccg attcccctgt 1080

agcagtcact gacagttaat aaacctttgc aaacgttccc cagttgtttg ctcgtgccat 1140

tattgtgcac acagctctgt gcacgtgtgt gcatatttct ttaggaaaga ttcttagaag 1200

tggaattgct gtgtcaaagg agtcatttat tcaacaaaac actaatgagt gcgtcctcgt 1260

gctgagcgct gttctaggtg ctggagcgac gtcagggaac aaggcagaca ggagttcctg 1320

acccccgttc tagaggagga tgtttccagt tgttgggttt tgtttgtttg tttcttctag 1380

agatggtggt cttgctctgt ccaggctaga gtgcagtggc atgatcatag c 1431

<210>54

<211>975

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR54

<400>54

ccataaaagt gtttctaaac tgcagaaaaa tccccctaca gtcttacagt tcaagaattt 60

tcagcatgaa atgcctggta gattacctga ctttttttgc caaaaataag gcacagcagc 120

tctctcctga ctctgacttt ctatagtcct tactgaatta tagtccttac tgaattcatt 180

cttcagtgtt gcagtctgaa ggacacccac attttctctt tgtctttgtc aattctttgt 240

gttgtaaggg caggatgttt aaaagttgaa gtcattgact tgcaaaatga gaaatttcag 300

agggcatttt gttctctaga ccatgtagct tagagcagtg ttcacactga ggttgctgct 360

aatgtttctg cagttcttac caatagtatc atttacccag caacaggata tgatagagga 420

cttcgaaaac cccagaaaat gttttgccat atatccaaag ccctttggga aatggaaagg 480

aattgcgggc tcccattttt atatatggat agatagagac caagaaagac caaggcaact 540

ccatgtgctt tacattaata aagtacaaaa tgttaacatg taggaagtct aggcgaagtt 600

tatgtgagaa ttctttacac taattttgca acattttaat gcaagtctga aattatgtca 660

aaataagtaa aaatttttac aagttaagca gagaataaca atgattagtc agagaaataa 720

gtagcaaaat cttcttctca gtattgactt ggttgctttt caatctctga ggacacagca 780

gtcttcgctt ccaaatccac aagtcacatc agtgaggaga ctcagctgag actttggcta 840

atgttggggg gtccctcctg tgtctcccca ggcgcagtga gcctgcaggc cgacctcact 900

cgtggcacac aactaaatct ggggagaagc aacccgatgc cagcatgatg cagatatctc 960

agggtatgat cggcc 975

<210>55

<211>501

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR55

<400>55

cctgaactca tgatccgccc acctcagcct cctgaagtgc tgggattaca ggtgtgagcc 60

accacaccca gccgcaacac actcttgagc aaccaatgtg tcataaaaga aataaaatgg 120

aaatcagaaa gtatcttgag acagacaaaa atggaaacac aacataccaa aatttatggg 180

acacagcaaa agcagtttta ggagggaagt ttatagtgat gaatacctac ctcaaaatca 240

ttagcctgat tggatgacac tacagtgtat aaatgaattg aaaaccacat tgtgccccat 300

acatatatac aatttttatt tgttaattaa aaataaaata aaactttaaa aaagaagaaa 360

gagctcaaat aaacaaccta actttatacc tcaaggaaat agaagagcca gctaagccca 420

aagttgacag aaggaaaaaa atattggcag aaagaaatga aacagagact agaaagacaa 480

ttgaagagat cagcaaaact a 501

<210>56

<211>741

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR56

<400>56

acacaggaaa agatcgcaat tgttcagcag agctttgaac cggggatgac ggtctccctc 60

gttgcccggc aacatggtgt agcagccagc cagttatttc tctggcgtaa gcaataccag 120

gaaggaagtc ttactgctgt cgccgccgga gaacaggttg ttcctgcctc tgaacttgct 180

gccgccatga agcagattaa agaactccag cgcctgctcg gcaagaaaac gatggaaaat 240

gaactcctca aagaagccgt tgaatatgga cgggcaaaaa agtggatagc gcacgcgccc 300

ttattgcccg gggatgggga gtaagcttag tcagccgttg tctccgggtg tcgcgtgcgc 360

agttgcacgt cattctcaga cgaaccgatg actggatgga tggccgccgc agtcgtcaca 420

ctgatgatac ggatgtgctt ctccgtatac accatgttat cggagagctg ccaacgtatg 480

gttatcgtcg ggtatgggcg ctgcttcgca gacaggcaga acttgatggt atgcctgcga 540

tcaatgccaa acgtgtttac cggatcatgc gccagaatgc gctgttgctt gagcgaaaac 600

ctgctgtacc gccatcgaaa cgggcacata caggcagagt ggccgtgaaa gaaagcaatc 660

agcgatggtg ctctgacggg ttcgagttct gctgtgataa cggagagaga ctgcgtgtca 720

cgttcgcgct ggactgctgt g 741

<210>57

<211>1365

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR57

<400>57

tccttctgta aataggcaaa atgtatttta gtttccacca cacatgttct tttctgtagg 60

gcttgtatgt tggaaatttt atccaattat tcaattaaca ctataccaac aatctgctaa 120

ttctggagat gtggcagtga ataaaaaagt tatagtttct gattttgtgg agcttggact 180

ttaatgatgg acaaaacaac acattcttaa atatatattt catcaaaatt atagtgggtg 240

aattatttat atgtgcattt acatgtgtat gtatacataa atgggcggtt actggctgca 300

ctgagaatgt acacgtggcg cgaacgaggc tgggcggtca gagaaggcct cccaaggagg 360

tggctttgaa gctgagtggt gcttccacgt gaaaaggctg gaaagggcat tccaagaaaa 420

ggctgaggcc agcgggaaag aggttccagt gcgctctggg aacggaaagc gcacctgcct 480

gaaacgaaaa tgagtgtgct gaaataggac gctagaaagg gaggcagagg ctggcaaaag 540

cgaccgagga ggagctcaaa ggagcgagcg gggaaggccg ctgtggagcc tggaggaagc 600

acttcggaag cgcttctgag cgggtaaggc cgctgggagc atgaactgct gagcaggtgt 660

gtccagaatt cgtgggttct tggtctcact gacttcaaga atgaagaggg accgcggacc 720

ctcgcggtga gtgttacagc tcttaaggtg gcgcgtctgg agtttgttcc ttctgatgtt 780

cggatgtgtt cagagtttct tccttctggt gggttcgtgg tctcgctggc tcaggagtga 840

agctgcagac cttcgcggtg agtgttacag ctcataaaag cagggtggac tcaaagagtg 900

agcagcagca agatttattg caaagaatga aagaacaaag cttccacact gtggaagggg 960

accccagcgg gttgccactg ctggctccgc agcctgcttt tattctctta tctggcccca 1020

cccacatcct gctgattggt agagccgaat ggtctgtttt gacggcgctg attggtgcgt 1080

ttacaatccc tgcgctagat acaaaggttc tccacgtccc caccagatta gctagataga 1140

gtctccacac aaaggttctc caaggcccca ccagagtagc tagatacaga gtgttgattg 1200

gtgcattcac aaaccctgag ctagacacag ggtgatgact ggtgtgttta caaaccttgc 1260

ggtagataca gagtatcaat tggcgtattt acaatcactg agctaggcat aaaggttctc 1320

caggtcccca ccagactcag gagcccagct ggcttcaccc agtgg 1365

<210>58

<211>1401

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR58

<400>58

aagtttacct tagccctaaa ttatttcatt gtgattggca ttttaggaaa tatgtattaa 60

ggaatgtctc ttaggagata aggataacat atgtctaaga aaattatatt gaaatattat 120

tacatgaact aaaatgttag aactgaaaaa aaattattgt aactccttcc agcgtaggca 180

ggagtatcta gataccaact ttaacaactc aactttaaca acttcgaacc aaccagatgg 240

ctaggagatt cacctattta gcatgatatc ttttattgat aaaaaaatat aaaacttcca 300

ttaaattttt aagctactac aatcctatta aattttaact taccagtgtt ctcaatgcta 360

cataatttaa aatcattgaa atcttctgat tttaactcct cagtcttgaa atctacttat 420

ttttagttac atatatatcc aatctactgc cgctagtaga agaagcttgg aatttgagaa 480

aaaaatcaga cgttttgtat attctcatat tcactaattt attttttaaa tgagtttctg 540

caatgcatca agcagtggca aaacaggaga aaaattaaaa ttggttgaaa agatatgtgt 600

gccaaacaat cccttgaaat ttgatgaagt gactaatcct gagttattgt ttcaaatgtg 660

tacctgttta tacaagggta tcacctttga aatctcaaca ttaaatgaaa ttttataagc 720

aatttgttgt aacatgatta ttataaaatt ctgatataac attttttatt acctgtttag 780

agtttaaaga gagaaaagga gttaagaata attacatttt cattagcatt gtccgggtgc 840

aaaaacttct aacactatct tcaaatcttt ttctccattg ccttctgaac atacccactt 900

gggtatctca ttagcactgc aaattcaaca ttttcgattg ctaatttttc tccctaaata 960

tttatttgtt ttctcagctt tagccaatgt ttcactattg accatttgct caagtatagt 1020

gacgcttcaa tgaccttcag agagctgttt cagtccttcc tggactactt gcatgcttcc 1080

aacaaaatga agcactcttg atgtcagtca ctcaaataaa tggaaatggg cccatttact 1140

aggaatgtta acagaataaa aagatagacg tgacaccagt tgcttcagtc catctccatt 1200

tacttgctta aggcctggcc atatttctca cagttgatat ggcgcagggc acatgtttaa 1260

atggctgttc ttgtaggatg gtttgactgt tggattcctc atcttccctc tccttaggaa 1320

ggaaggttac agtagtactg ttggctcctg gaatatagat tcataaagaa ctaatggagt 1380

atcatctccc actgctcttg t 1401

<210>59

<211>866

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR59

<400>59

gagatcacgc cactgcactc cagcctgggg gacagagcaa gactccatct cagaaacaaa 60

caaacacaca aagccagtca aggtgtttaa ttcgacggtg tcaggctcag gtctcttgac 120

aggatacatc cagcacccgg gggaaacgtc gatgggtggg gtggaatcta ttttgtggcc 180

tcaagggagg gtttgagagg tagtcccgca agcggtgatg gcctaaggaa gcccctccgc 240

ccaagaagcg atattcattt ctagcctgta gccacccaag agggagaatc gggctcgcca 300

cagaccccac aacccccaac ccaccccacc cccacccctc ccacctcgtg aaatgggctc 360

tcgctccgtc aggctctagt cacaccgtgt ggttttggaa cctccagcgt gtgtgcgtgg 420

gttgcgtggt ggggtggggc cggctgtgga cagaggaggg gataaagcgg cggtgtcccg 480

cgggtgcccg ggacgtgggg cgtggggcgt gggtggggtg gccagagcct tgggaactcg 540

tcgcctgtcg ggacgtctcc cctcctggtc ccctctctga cctacgctcc acatcttcgc 600

cgttcagtgg ggaccttgtg ggtggaagtc accatccctt tggactttag ccgacgaagg 660

ccgggctccc aagagtctcc ccggaggcgg ggccttgggc aggctcacaa ggatgctgac 720

ggtgacggtt ggtgacggtg atgtacttcg gaggcctcgg gccaatgcag aggtatccat 780

ttgacctcgg tgggacaggt cagctttgcg gagtcccgtg cgtccttcca gagactcatc 840

cagcgctagc aagcatggtc ccgagg 866

<210>60

<211>2067

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR60

<220>

<221>misc_feature

<222>(92)..(1777)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>60

agcagtgcag aactggggaa gaagaagagt ccctacacca cttaatactc aaaagtactc 60

gcaaaaaata acacccctca ccaggtggca tnattactct ccttcattga gaaaattagg 120

aaactggact tcgtagaagc taattgcttt atccagagcc acctgcatac aaacctgcag 180

cgccacctgc atacaaacct gtcagccgac cccaaagccc tcagtcgcac caagcctctg 240

ctgcacaccc tcgtgccttc acactggccg ttccccaagc ctggggcata ctncccagct 300

ctgagaaatg tattcatcct tcaaagccct gctcatgtgt cctnntcaac aggaaaatct 360

cccatgagat gctctgctat ccccatctct cctgccccat agcttaggca nacttctgtg 420

gtggtgagtc ctgggctgtg ctgtgatgtg ttcgcctgcn atgtntgttc ttccccacaa 480

tgatgggccc ctgaattctc tatctctagc acctgtgctc agtaaaggct tgggaaacca 540

ggctcaaagc ctggcccaga tgccaccttt tccagggtgc ttccgggggc caccaaccag 600

agtgcagcct tctcctccac caggaactct tgcagcccca cccctgagca cctgcacccc 660

attacccatc tttgtttctc cgtgtgatcg tattattaca gaattatata ctgtattctt 720

aatacagtat ataattgtat aattattctt aatacagtat ataattatac aaatacaaaa 780

tatgtgttaa tggaccgttt atgttactgg taaagcttta agtcaacagt gggacattag 840

ttaggttttt ggcgaagtca aaagttatat gtgcattttc aacttcttga ggggtcggta 900

cntctnaccc ccatgttgtt caanggtcaa ctgtctacac atatcatagc taattcacta 960

cagaaatgtt agcttgtgtc actagtatct ccccttctca taagcttaat acacatacct 1020

tgagagagct cttggccatc tctactaatg actgaagttt ttatttatta tagatgtcat 1080

aataggcata aaactacatt acatcattcg agtgccaatt ttgccacctt gaccctcttt 1140

tgcaaaacac caacgtcagt acacatatga agaggaaact gcccgagaac tgaagttcct 1200

gagaccagga gctgcaggcg ttagatagaa tatggtgacg agagttacga ggatgacgag 1260

agtaaatact tcatactcag tacgtgccaa gcactgctat aagcgctctg tatgtgtgaa 1320

gtcatttaat cctcacagca tcccacggtg taattatttt cattatcccc atgagggaac 1380

agaaactcag aacggttcaa cacatatgcg agaagtcgca gccggtcagt gagagagcag 1440

gttcccgtcc aagcagtcag accccgagtg cacactctcg acccctgtcc agcagactca 1500

ctcgtcataa ggcggggagt gntctgtttc agccagatgc tttatgcatc tcagagtacc 1560

caaaccatga aagaatgagg cagtattcan gagcagatgg ngctgggcag taaggctggg 1620

cttcagaata gctggaaagc tcaagtnatg ggacctgcaa gaaaaatcca ttgtttngat 1680

aaatagccaa agtccctagg ctgtaagggg aaggtgtgcc aggtgcaagt ggagctctaa 1740

tgtaaaatcg cacctgagtc tcctggtctt atgagtnctg ggtgtacccc agtgaaaggt 1800

cctgctgcca ccaagtgggc catggttcag ctgtgtaagt gctgagcggc agccggaccg 1860

cttcctctaa cttcacctcc aaaggcacag tgcacctggt tcctccagca ctcagctgcg 1920

aggcccctag ccagggtccc ggcccccggc ccccggcagc tgctccagct tccttcccca 1980

cagcattcag gatggtctgc gttcatgtag acctttgttt tcagtctgtg ctccgaggtc 2040

actggcagca ctagccccgg ctcctgt 2067

<210>61

<211>1470

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR61

<220>

<221>misc_feature

<222>(130)..(976)

<223>n is a，c，g，or t on various positions

<400>61

cagcccccac atgcccagcc ctgtgctcag ctctgcagcg gggcatggtg ggcagagaca 60

cagaggccaa ggccctgctt cggggacggt gggcctggga tgagcatggc cttggccttc 120

gccgagagtn ctcttgtgaa ggaggggtca ggaggggctg ctgcagctgg ggaggagggc 180

gatggcactg tggcangaag tgaantagtg tgggtgcctn gcaccccagg cacggccagc 240

ctggggtatg gacccggggc cntctgttct agagcaggaa ggtatggtga ggacctcaaa 300

aggacagcca ctggagagct ccaggcagag gnacttgaga ggccctgggg ccatcctgtc 360

tcttttctgg gtctgtgtgc tctgggcctg ggcccttcct ctgctccccc gggcttggag 420

agggctggcc ttgcctcgtg caaaggacca ctctagactg gtaccaagtc tggcccatgg 480

cctcctgtgg gtgcaggcct gtgcgggtga cctgagagcc agggctggca ggtcagagtc 540

aggagaggga tggcagtgga tgccctgtgc aggatctgcc taatcatggt gaggctggag 600

gaatccaaag tgggcatgca ctctgcactc atttctttat tcatgtgtgc ccatcccaac 660

aagcagggag cctggccagg agggcccctg ggagaaggca ctgatgggct gtgttccatt 720

taggaaggat ggacggttgt gagacgggta agtcagaacg ggctgcccac ctcggccgag 780

agggccccgt ggtgggttgg caccatctgg gcctggagag ctgctcagga ggctctctag 840

ggctgggtga ccaggnctgg ggtacagtag ccatgggagc aggtgcttac ctggggctgt 900

ccctgagcag gggctgcatt gggtgctctg tgagcacaca cttctctatt cacctgagtc 960

ccnctgagtg atgagnacac ccttgttttg cagatgaatc tgagcatgga gatgttaagt 1020

ggcttgcctg agccacacag cagatggatg gtgtagctgg gacctgaggg caggcagtcc 1080

cagcccgagg acttcccaag gttgtggcaa actctgacag catgacccca gggaacaccc 1140

atctcagctc tggtcagaca ctgcggagtt gtgttgtaac ccacacagct ggagacagcc 1200

accctagccc cacccttatc ctctcccaaa ggaacctgcc ctttcccttc attttcctct 1260

tactgcattg agggaccaca cagtgtggca gaaggaacat gggttcagga cccagatgga 1320

cttgcttcac agtgcagccc tcctgtcctc ttgcagagtg cgtcttccac tgtgaagttg 1380

ggacagtcac accaactcaa tactgctggg cccgtcacac ggtgggcagg caacggatgg 1440

cagtcactgg ctgtgggtct gcagaggtgg 1470

<210>62

<211>1011

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR62

<400>62

agtgtcaaat agatctacac aaaacaagat aatgtctgcc catttttcca aagataatgt 60

ggtgaagtgg gtagagagaa atgcatccat tctccccacc caacctctgc taaattgtcc 120

atgtcacagt actgagacca gggggcttat tcccagcggg cagaatgtgc accaagcacc 180

tcttgtctca atttgcagtc taggccctgc tatttgatgg tgtgaaggct tgcacctggc 240

atggaaggtc cgttttgtac ttcttgcttt agcagttcaa agagcaggga gagctgcgag 300

ggcctctgca gcttcagatg gatgtggtca gcttgttgga ggcgccttct gtggtccatt 360

atctccagcc cccctgcggt gttgctgttt gcttggcttg tctggctctc catgccttgt 420

tggctccaaa atgtcatcat gctgcacccc aggaagaatg tgcaggccca tctcttttat 480

gtgctttggg ctattttgat tccccgttgg gtatattccc taggtaagac ccagaagaca 540

caggaggtag ttgctttggg agagtttgga cctatgggta tgaggtaata gacacagtat 600

cttctctttc atttggtgag actgttagct ctggccgcgg actgaattcc acacagctca 660

cttgggaaaa ctttattcca aaacatagtc acattgaaca ttgtggagaa tgagggacag 720

agaagaggcc ctagatttgt acatctgggt gttatgtcta taaatagaat gctttggtgg 780

tcaactagac ttgttcatgt tgacatttag tcttgccttt tcggtggtga tttaaaaatt 840

atgtatatct tgtttggaat atagtggagc tatggtgtgg cattttcatc tggctttttg 900

tttagctcag cccgtcctgt tatgggcagc cttgaagctc agtagctaat gaagaggtat 960

cctcactccc tccagagagc ggtcccctca cggctcattg agagtttgtc a 1011

<210>63

<211>1410

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR63

<400>63

ccacagcctg atcgtgctgt cgatgagagg aatctgctct aagggtctga gcggagggag 60

atgccgaagc tttgagcttt ttgtttctgg cttaaccttg gtggattttc accctctggg 120

cattacctct tgtccagggg aggggctggg ggagtgcctg gagctgtagg gacagagggc 180

tgagtggggg ggactgcttg ggctgaccac ataatattct gctgcgtatt aatttttttt 240

tgagacagtc tttctctgtt gcccaggctg gagtgtaatg gcttgatagc tcactgccac 300

ctccgcctcc tgggttcaag tgattctcct gcttcagctt ccggagtagc tgggactgca 360

ggtgcccgcc accatggctg gctaattttt gtatttttat tagcaatggg gttttgctat 420

gttgcccagg ccggtcccga actcctgccc tcaagtgata cacctgcctc ggcctcccaa 480

agtgctggga ttagaggctt gagccactgc gcctggccag ctgcatattg ttaattagac 540

ataaaatgca aaataagatg atataaacac aaaggtgtga aataagatgg acacctgctg 600

agcgcgcctg tcctgaagca tcgcccctct gcaaaagcag gggtcagcat gtgttctccg 660

gtccttgctc ttacagagga gtgagctgcc tatgcgtctt ccagccactt cctgggctgc 720

tcagaggcct ctcacgggtg ttctgggttg ctgccacttg caggggtgct gaggcggggc 780

tcctcccgtg cggggcatgt ccaggccgcc ctctctgaag gcttggcagg tacaggtggg 840

agtgggggtc tctgggctgc tgtggggact gggcaggctc ctggaagacc tccctgtgtt 900

tgggctgaaa gcgcagcccg aggggaggtc cccagggagg ccgctgtcgg gggtgggggc 960

ttggaggagg gaggggccga ggagccggcg acactccgtg acggcccagg aacgtcccta 1020

aacaaggcgc cgcgttctcg atggggtggg gtccgctttc ttttctcaaa agctgcagtt 1080

actccatgct cggaggactg gcgtccgcgc cctgttccaa tgctgccccg gggccctggc 1140

cttggggaat cggggccttg gactggaccc tgggggcttc gcggagccgg gcctggcggg 1200

gcgagcggag cagaggctgg gcagccccgg ggaagcgctc gccaaagccg ggcgctgctc 1260

ccagagcgcg aggtgcagaa ccagaggctg gtcccgcggc gctaacgaga gaagaggaag 1320

cgcgctgtgt agagggcgcc caccccgtgg ggcgaacccc cttcctcaac tccatggacg 1380

gggctcatgg gttcccagcg gctcagacgc 1410

<210>64

<211>1414

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR64

<400>64

tggatcagat ttgttttata ccctcccttc tactgctctg agagttgtac atcacagtct 60

actgtatctg tttcccatta ttataatttt tttgcactgt gcttgcctga agggagcctc 120

aagttcatga gtctccctac cctcctccca aatgagacat ggacctttga atgctttcct 180

gggaccacca ccccaccttt catgctgctg ttatccagga ttttagttca acagtgtttt 240

aaccccccaa atgagtcatt tttattgttt cgtatagtga atgtgtattt gggtttgctt 300

atatggtgac ctgtttattt gctcctcatt gtacctcatg ctctgctctt tccttctaga 360

ttcagtctct ttcctaatga ggtgtctcgc agcaattctt tacaagacag ccaagatagg 420

ccagctctca gagcacttgt tgtctgaaaa agtcttgtct tatttaattt ctttttctta 480

gagatggggt ctcattatgt tacccacact ggtctcaaac ttctggctta aagcggtcct 540

cccaccttgg cctcccaaag tgctaggatt acaggcgtga gcgacctcgt ccagcctgtc 600

tgagaaagcg tttgttttgc ccttgctctc agatgacagt ttggggatag aattctaggt 660

ggacggtttt tttccttcag ccctttgaag agtctgtatt ttcattatct ccctgcatta 720

gatgttcttt tgcaagtaac gtgtcttttc tctctgggta ttcttaaggt tttctctttg 780

cctttggtga gctgcagtgg atttgctttt ttcaagaggt caagagaaag gaaagtgtga 840

ggtttctgtt ttttactgac aatttgtttg ttgatttgtt ttcccaccca gaggttcctt 900

gccactttgc caggctggaa ggcagacttc ttctggtgtc ctgttcacag acggggcagc 960

ctgcggaagg ccctgccaca tgcagggcct cggtcctcat tcccttgcat gtggacccgg 1020

gcgtgactcc tgttcaggct ggcacttccc agagctgagc cccagcctga ccttcctccc 1080

atactgtctt cacaccccct cctttcttct gatacctgga ggttttcctt tctttcctgt 1140

cacctccact tggattttaa atcctctgtc tgtggaattg tattcggcac aggaagatgc 1200

ttgcaagggc caggctcatc agccctgtcc ctgctgctgg aagcagcaca gcagagcctc 1260

atgctcaggc tgagatggag cagaggcctg cagacgagca cccagctcag ctggggttgg 1320

cgccgatggt ggagggtcct cgaaagctct ggggacgatg gcagagctat tggcagggga 1380

gccgcagggt cttttgagcc cttaaaagat ctct 1414

<210>65

<211>1310

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR65

<400>65

gtgaatgttg atggatcaaa tatctttctg tgttgtttat caaagttaaa ataaatgtgg 60

tcatttaaag gacaaaagat gaggggttgg agtctgttca agcaaagggt atattaggag 120

aaaagcagaa ttctctccct gtgaagggac agtgactcct attttccacc tcatttttac 180

taactctcct aactatctgc ttaggtagag atatatccat gtacatttat aaaccacagt 240

gaatcatttg attttggaat aaagatagta taaaatgtgt cccagtgttg atatacatca 300

tacattaaat atgtctggca gtgttctaat tttacagttg tccaaagata atgttagggc 360

atactggcta tggatgaagc tccaatgttc agattgcaaa gaaacttaga attttactaa 420

tgaaaccaaa tacatcccaa gaaatttttc agaagaaaaa aagagaaact agtagcaaag 480

taaagaatca ccacaatatc atcagatttt ttttatatgt agaatattta ttcagttctt 540

ttttcaagta caccttgtct tcattcattg tactttattt tttgtgaagg tttaaattta 600

tttcttctat gtgtttagtg atatttaaaa tttttattta atcaagttta tcagaaagtt 660

ctgttagaaa atatgacgag gctttaattc cgccatctat attttccgct attatataaa 720

gataattgtt ttctcttttt aaaacaactt gaattgggat tttatatcat aattttttaa 780

tgtctttttt tattatactt taagttctgg gatacatgtg cagaacgtgc aggtgtgtta 840

catagatata cacgtgccat ggtggtttgc tgcacccact aacctgttat cgacattagg 900

tatttctcct aatgctatca ccccctattt ccccaccccc cgagaggccc cagtgtgtga 960

tgttctcctc cctgtgtcca tgtgttctca ttgttcatct cccacttatg gtatctacca 1020

taaccttgaa attgtcttat gcattcactt gtttggttgt tatatagcct ccatcaggac 1080

agggatattt gctgctgctt cttttttttt tctttttgag acagtcttgc tccgtcatcc 1140

aggctggagt gcttctcggc tcaatgcaac ctccacctcc caggtttaag cgattctcca 1200

acttcagcct cccaaatggc tgggactgca ggcatgcacc actacacctg gctaattttt 1260

gtatttgtaa tagagacaat gtttcaccat gttggccagg ctggtctcga 1310

<210>66

<211>1917

<212>DNA

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>sequence of STAR67

<400>66

aggatcctaa aattttgtga ccctagagca agtactaact atgaaagtga aatagagaat 60

gaaggaatta tttaattaag tccagcaaaa cccaaccaaa tcatctgtaa aatatatttg 120

ttttcaacat ccaggtattt tctgtgtaaa aggttgagtt gtatgctgac ttattgggaa 180

aaataattga gttttcccct tcactttgcc agtgagagga aatcagtact gtaattgtta 240

aaggttaccc atacctacct ctactaccgt ctagcatagg taaagtaatg tacactgtga 300

agtttcctgc ttgactgtaa tgttttcagt ttcatcccat tgattcaaca gctatttatt 360

cagcacttac tacaaccatg ctggaaaccc aagagtaaat aggctgtgtt actcaacagg 420

actgaggtac agccgaactg tcaggcaagg ttgctgtcct ttggacttgc ctgctttctc 480

tctatgtagg aagaagaaat ggacataccg tccaggaaat agatatatgt tacatttcct 540

tattccataa ttaatattaa taaccctgga cagaaactac caagtttcta gacccttata 600

gtaccacctt accctttctg gatgaatcct tcacatgttg atacatttta tccaaatgaa 660

aattttggta ctgtaggtat aacagacaaa gagagaacag aaaactagag atgaagtttg 720

ggaaaaggtc aagaaagtaa ataatgcttc tagaagacac aaaaagaaaa atgaaatggt 780

aatgttggga aagttttaat acattttgcc ctaaggaaaa aaactacttg ttgaaattct 840

acttaagact ggaccttttc tctaaaaatt gtgcttgatg tgaattaaag caacacaggg 900

aaatttatgg gctccttcta agttctaccc aactcaccgc aaaactgttc ctagtaggtg 960

tggtatactc tttcagattc tttgtgtgta tgtatatgtg tgtgtgtgtg tgtgtttgta 1020

tgtgtacagt ctatatacat atgtgtacct acatgtgtgt atatataaat atatatttac 1080

ctggatgaaa tagcatatta tagaatattc ttttttcttt aaatatatat gtgcatacat 1140

atgtatatgc acatatatac ataaatgtag atatagctag gtaggcattc atgtgaaaca 1200

aagaagccta ttacttttta atggttgcat gatattccat cataggagta tagtacaact 1260

tatgtaacac acatttggct tgttgtaaaa ttttggtatt aataaaatag cacatatcat 1320

gcaaagacac ccttgcatag gtctattcat tctttgattt ttaccttagg acaaaattta 1380

aaagtagaat ttctgggtca agcagtatgc tcatttaaaa tgtcattgca tatttccaaa 1440

ttgtcctcca gaaaagtagt aacagtaaca attgatggac tgcgtgtttt ctaaaacttg 1500

catttttttc cttattggtg aggtttggca ttttccatat gtttattggc attttaattt 1560

tttttggttc atgtctttta ttcccttcct gcaaatttgt ggtgtgtctc aactttattt 1620

atactctcat tttcataatt ttctaaagga atttgacttt aaaaaaataa gacagccaat 1680

gctttggttt aatttcattg ctgctttttg aagtgactgc tgtgttttta tatactttta 1740

tattttgttg ttttagcaaa ttcttctata ttataattgt gtatgctgga acaaaaagtt 1800

atatttctta atctagataa aatatttcaa gatgttgtaa ttacagtccc ctctaaaatc 1860

atataaatag acgcatagct gtgtgatttg taattagtta tgtccattga tagatcc 1917

<210>67

<211>26

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>oligo for making linker containing MCSII of pd2EGFP-link

<400>67

gtacggatat cagatcttta attaag 26

<210>68

<211>24

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>oligo for making linker containing MCSII of pd2EGFP-link

<400>68

gtaccttaat taaagatctg atat 24

<210>69

<211>52

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of 0.37kb from pd2EGFP

<400>69

gatcagatct ggcgcgccat ttaaatcgtc tcgcgcgttt cggtgatgac gg 52

<210>70

<211>41

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of 0.37 kb from pd2EGFP

<400>70

aggcggatcc gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg g 41

<210>71

<211>36

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying zeocin resistance gene ORF

<400>71

gatcggatcc ttcgaaatgg ccaagttgac cagtgc 36

<210>72

<211>32

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying zeocin resistance gene ORF

<400>72

aggcgcggcc gcaattctca gtcctgctcc tc 32

<210>73

<211>40

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying d2EGFP ORF

<400>73

gatcgaattc tcgcgaatgg tgagcaagca gatcctgaag 40

<210>74

<211>52

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying d2EGFP ORF

<400>74

aggcgaattc accggtgttt aaacttacac ccactcgtgc aggctgccca gg 52

<210>75

<211>41

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying d2EGFP gene

<400>75

ttggttggtc atgaatggtg agcaagggcg aggagctgtt c 41

<210>76

<211>36

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplifying d2EGFP gene

<400>76

attctctaga ctacacattg atcctagcag aagcac 36

<210>77

<211>42

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>oligo for preparing linker for creating MCS in pGL3-promoter-GFP

<400>77

cgatatcttg gagatctact agtggcgcgc cttgggctag ct 42

<210>78

<211>50

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>oligo for preparing linker for creating MCS in pGL3-promoter-GFP

<400>78

gatcagctag cccaaggcgc gccactagta gatctccaag atatcgagct 50

<210>79

<211>40

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of EF-lalfa promoter

<400>79

gatcggcgcg ccatttaaat ccgaaaagtg ccacctgacg 40

<210>80

<211>34

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of EF-lalfa promoter

<400>80

aggcgggacc ccctcacgac acctgaaatg gaag 34

<210>81

<211>51

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of SV40 promoter

<400>81

ttggttgggg cgcgccgcag caccatggcc tgaaataacc tctgaaagag g 51

<210>82

<211>55

<212>DNA

<213>Artificial

<220>

<223>primer for amplification of SV40 promoter

<400>82

ttggttggga gctcaagctt tttgcaaaag cctaggcctc caaaaaagcc tcctc 55

Claims

1.一种重组核酸分子，其包含如SEQ.ID.NO.66所示的具有抗阻抑物活性的核酸序列，所述重组核酸分子进一步包含表达盒，所述表达盒包含与感兴趣核酸连接的异源启动子，其中所述感兴趣核酸编码全部或者部分感兴趣蛋白质，并且其中具有抗阻抑物活性的所述核酸序列位于所述表达盒中所述启动子的上游，其中所述具有抗阻抑物活性的序列和所述启动子相隔少于2kb。

2.权利要求1的分子，其中所述编码感兴趣蛋白质的核酸存在于多顺反子基因中，所述多顺反子基因进一步编码一个可选择标记基因。

3.权利要求1的分子，进一步包含选自SEQ.ID.NO.1-65任一序列的至少一个其它的具有抗阻抑物活性的序列。

4.一种包含表达盒的重组核酸分子，所述表达盒包含：

5’-抗阻抑物序列A-启动子-编码全部或部分感兴趣蛋白质的核酸-抗阻抑物序列B-3’，其中抗阻抑物序列A和B可以相同或者不同并且选自SEQ.ID.NO.1-65任一序列组成的组，特征在于所述表达盒在所述抗阻抑物序列A和B之间进一步包含如SEQ.ID.NO.66所示的具有抗阻抑物活性的序列。

5.一种包含权利要求1-4任一项的分子的细胞。

6.权利要求5的细胞，其是哺乳动物细胞。

7.权利要求6的细胞，其是CHO细胞。

8.一种生产感兴趣蛋白质的方法，包括培养包含编码感兴趣蛋白质的重组核酸分子的细胞以及在所述细胞中表达编码感兴趣蛋白质的所述核酸，特征在于所述重组核酸分子包含如SEQ.ID.NO.66所示的具有抗阻抑物活性的核酸序列，其中所述具有抗阻抑物活性的核酸序列位于控制感兴趣蛋白质表达的启动子的上游并且其中所述具有抗阻抑物活性的所述序列和所述启动子间隔少于2kb。

9.权利要求8的方法，其进一步包括分离所述感兴趣蛋白质。

10.权利要求8的方法，其中编码感兴趣蛋白质的所述核酸存在于多顺反子基因中，所述多顺反子基因进一步编码一个可选择标记基因。

11.权利要求8-10任一项的方法，其中所述细胞是哺乳动物细胞。

12.权利要求11的方法，其中所述细胞是CHO细胞。

13.如SEQ.ID.NO.66所示的具有抗阻抑物活性的核酸序列在增加感兴趣核酸表达中的应用。

14.一种产生表达两种感兴趣多肽的宿主细胞的方法，所述方法包括：

a)向宿主细胞中导入一或多种核酸分子，所述一种核酸分子包含或多种核酸分子一起包含：

(i)与编码第一种感兴趣多肽和第一种可选择标记基因的序列功能连接的启动子，及

(ii)与编码第二种感兴趣多肽和第二种可选择标记基因的序列功能连接的启动子，及

(iii)如SEQ.ID.NO.66所示的具有抗阻抑物活性的序列；

b)通过同时选择所述第一种和第二种可选择标记基因的表达而选择宿主细胞，

其中所述具有抗阻抑物活性的序列位于控制每一个感兴趣蛋白质表达的每一个启动子的上游并且其中所述具有抗阻抑物活性的序列和所述每一个启动子间隔少于2kb。

15.一种表达两种感兴趣多肽的方法，所述方法包括：培养通过权利要求14的方法获得的宿主细胞以表达所述第一种和第二种多肽，任选分离所述多肽。

16.权利要求14或15的方法，其中所述两种多肽是多聚体蛋白质的部分。