EA011747B1 - Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, обладающая антирепрессорной активностью, и способы ее применения - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к новому антирепрессорному элементу, который пригоден для улучшения экспрессии нуклеиновой кислоты в клетках-хозяевах. Также обеспечиваются способы применения нового антирепрессорного элемента для получения интересующего белка. Изобретение также относится к новым конфигурациям экспрессирующих кассет, содержащих антирепрессорные элементы.

Description

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии. Конкретнее настоящее изобретение относится к средствам и способам усовершенствования получения одной или нескольких нуклеиновых кислот, которые могут кодировать белки в клетке-хозяине.

Белки могут продуцироваться в различных клетках-хозяевах для широкого ряда применений в биологии и биотехнологии, например, в качестве биологических фармацевтических препаратов. Хорошо разработаны способы такого получения, и в основном они включают экспрессию в клетке-хозяине нуклеиновой кислоты (также относится к «трансгену»), кодирующей интересующий белок.

Одной проблемой, связанной с экспрессией трансгенов, является то, что невозможно спрогнозировать, с большой долей вероятности, что трансген станет неактивным в результате «молчания» гена (МсВигпеу е! а1., 2002), и, следовательно, необходимо тестировать многие клоны клеток-хозяев на высокую экспрессию трансгена. Кроме того, даже при установлении такого клона экспрессия трансгена часто является нестабильной, и часто наблюдают такое явление, как «молчание» экспрессии трансгена во время продолжительного культивирования клетки-хозяина. В клетках позвоночных это может быть вызвано образованием гетерохроматина в локусе трансгена, который препятствует протеканию транскрипции трансгена (^Ы1е1ает е! а1., 2001). «Молчание» трансгена является вероятностным; оно может возникнуть вскоре после интеграции трансгена в геном или только после ряда клеточных делений. Это приводит к образованию неоднородных популяций клеток после продолжительного культивирования, когда некоторые клетки продолжают экспрессировать высокие уровни рекомбинантного белка, в то время как другие экспрессируют низкие или необнаруживаемые уровни количества белка (Майш & ^Ы1е1ает, 1996; МсВигпеу е! а1., 2002). Клеточную линию, которую используют для продукции гетерологичного белка, получают из одной клетки, часто размноженной до и поддерживаемой в течение длительного периода времени при плотности клеток более 10 млн клеток на мл в культиваторах емкостью 1000 л или более. Данные большие клеточные популяции (10¹⁴-10¹⁶ клеток) проявляют склонность к значительному падению продуктивности в результате «молчания» трансгена (МфНассю е! а1., 2000; 81ги1хепЬегдег е! а1., 1999).

Одной возможностью для преодоления описанных выше проблем является применение так называемых последовательностей 8ТЛВ в экспрессирующей системе. В заявке \¥О 03/004704 описан ряд таких последовательностей 8ТЛВ. Данные последовательности можно использовать для повышения предсказуемости, выхода и/или стабильности продукции белка при использовании экспрессирующих конструкций в некоторых типах клеток-хозяев (\УО 03/004704; К^акк е! а1., 2003).

В международной публикации \УО 03/106674 описывается применение последовательностей 8ТЛВ для экспрессии нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантные белки в некоторых клеточных линиях.

В международной публикации \УО 03/106684 описывается применение последовательностей 8ТЛВ для экспрессии нуклеиновых кислот, кодирующих мультимерные белки, такие как антитела.

Настоящее изобретение направлено на обеспечение альтернативных средств и способов повышения продукции белка.

Сущность изобретения

В одном аспекте изобретение относится к молекуле рекомбинантной нуклеиновой кислоты, включающей нуклеиново-кислотную последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из: а) последовательности 8ЕО Ш Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8ЕО Ш Νο: 66, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и б) комплементарной последовательности к одному из а)-с); где указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты дополнительно содержит экспрессирующую кассету, где указанная экспрессирующая кассета включает гетерологичный промотор, связанный с интересующей нуклеиновой кислотой, и где указанная интересующая нуклеиновая кислота предпочтительно кодирует весь или часть интересующего белка. В предпочтительном варианте осуществления указанная нуклеиново-кислотная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, расположена слева от указанного промотора в указанной экспрессирующей кассете, и в особо предпочтительных вариантах осуществления указанная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, и указанный промотор разделены менее чем 2 т.п.н. В некоторых вариантах осуществления указанная нуклеиновая кислота, кодирующая интересующий белок, находится в мультицистронном гене, дополнительно кодирующем селектируемый маркерный ген. В некоторых вариантах осуществления указанная молекула дополнительно содержит по меньшей мере одну другую последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, где указанная по меньшей мере одна другая последовательность выбрана из: а) любой из последовательностей 8ЕО Ш Νο: 1-65; Ь) фрагментов любой из последовательностей 8ЕО Ш Νο: 1-65, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и б) комплементарной последовательности к одному из а)-с). Изобретение также относится к молекуле рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащей экспрессирующую кассету,

- 1 011747 включающую 5' - антирепрессорную последовательность А - промотор - нуклеиновую кислоту, кодирующую весь или часть интересующего белка - антирепрессорную последовательность В - 3', где антирепрессорные последовательности А и В могут быть одинаковыми или различными и выбраны из группы, состоящей из: ί) любой из последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο: 1-65; ίί) фрагментов любой из последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο: 1-65, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; ίίί) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и ίν) комплементарной последовательности к одному из ί)-ίίί), отличающейся тем, что указанная экспрессирующая кассета дополнительно включает между указанными антирепрессорными последовательностями А и В последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из: а) последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66, где указанный фрагмент обладает антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и й) комплементарной последовательности к одному из а)-с).

Изобретение дополнительно относится к клетке, содержащей молекулу по изобретению. Предпочтительно указанная клетка является клеткой млекопитающих, и в некоторых вариантах осуществления данная клетка представляет клетку СНО.

Изобретение дополнительно относится к способу получения интересующего белка, включающему культивирование клетки, содержащей молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей интересующий белок, для экспрессии указанной нуклеиновой кислоты, кодирующей интересующий белок в указанной клетке, отличающемуся тем, что указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты содержит нуклеиново-кислотную последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из: а) последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и й) комплементарной последовательности к одному из а)-с). В предпочтительном варианте осуществления способ дополнительно включает выделение указанного интересующего белка. В предпочтительных вариантах осуществления указанная нуклеиново-кислотная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, расположена слева от промотора, который контролирует экспрессию интересующего белка. В его предпочтительном варианте осуществления указанная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, и указанный промотор разделены менее чем 2 т.п.н. В некоторых вариантах осуществления указанная нуклеиновая кислота, кодирующая интересующий белок, находится в мультицистронном гене, дополнительно кодирующем селектируемый маркерный ген. В некоторых вариантах осуществления указанная клетка является клеткой млекопитающего, например клеткой СНО.

Изобретение также относится к применению нуклеиново-кислотной последовательности, обладающей антирепрессорной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: а) последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66, где указанный фрагмент обладает антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и й) комплементарной последовательности к одному из а)-с), для повышения экспрессии интересующей нуклеиновой кислоты.

В еще одном аспекте изобретение относится к способу получения клетки-хозяина, экспрессирующей два интересующих полипептида, где способ включает: а) введение в клетку-хозяин одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, где молекула или молекулы нуклеиновой кислоты вместе содержат: ί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей первый интересующий полипептид и первый селектируемый маркерный ген, и ίί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей второй интересующий полипептид и второй селектируемый маркерный ген, и ίίί) по меньшей мере одну последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из: (а) любой из последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο: 1-66; (Ь) фрагментов любой из последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο: 1-66, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; (с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности (а) или (Ь) и обладают антирепрессорной активностью; и (й) комплементарной последовательности к одному из (а)-(с); Ь) селекцию клетки-хозяина, по существу, одновременным отбором по экспрессии указанного первого и второго селектируемых маркерных генов. Изобретение также относится к способу экспрессии двух интересующих полипептидов, где способ включает культивирование клетки-хозяина, полученной способом по данному аспекту изобретения, для экспрессии первого и второго полипептидов и необязательно выделение указанных полипептидов. В одном варианте осуществления изобретения указанная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, выбрана из группы, состоящей из: а) последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8ЕО ΙΌ Νο: 66, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; с) последова

- 2 011747 тельностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности а) или Ь), где указанные последовательности обладают антирепрессорной активностью; и й) комплементарной последовательности к одному из а)-с). В некоторых вариантах осуществления указанные два полипептида являются частью мультимерного белка.

Подробное описание изобретения

Антирепрессорные последовательности.

Последовательности, обладающие антирепрессорной активностью, в том смысле, в котором здесь используется данный термин, представляют последовательности, которые способны, по меньшей мере, частично противодействовать репрессивному эффекту белков НР1 или НРС2, когда данные белки связываются с ДНК. Последовательности, обладающие антирепрессорной активностью (в некоторых случаях также относящиеся здесь к антирепрессорным последовательностям или антирепрессорным элементам), подходящие для настоящего изобретения, раскрыты в νθ 03/004704, включенной здесь для сведения, и названы здесь последовательностями «БТАВ» (там, где последовательность относится к последовательности БТАВ, то данная последовательность обладает антирепрессорной активностью по изобретению). В качестве неограничивающего примера последовательности из 65 антирепрессорных элементов, названные БТАВ1-65 (см. νθ 03/004704), представлены здесь соответственно последовательностями БЕО Ш Νο: 1-65.

Согласно изобретению функциональный фрагмент или производное данного антирепрессорного элемента рассматривается равноценным указанному антирепрессорному элементу до тех пор, пока он по-прежнему обладает антирепрессорной активностью. Наличие такой антирепрессорной активности может легко проверить специалист в данной области, например, тестом, описанным ниже. Функциональные фрагменты или производные могут легко получить специалисты в области молекулярной биологии, начав с данной антирепрессорной последовательности и осуществив делеции, добавления, замены, инверсии и т.п. (например, см. νθ 03/004704). Функциональный фрагмент или производное также включает ортологи от других видов, которые можно найти с использованием известных антирепрессорных последовательностей, способами, хорошо известными специалистам в данной области (например, см. νθ 03/004704). Следовательно, настоящее изобретение включает фрагменты антирепрессорных последовательностей, где указанные фрагменты по-прежнему обладают антирепрессорной активностью. Для фрагментов данной последовательности процентная идентичность относится к той части стандартной природной последовательности, которая обнаружена во фрагменте. Изобретение также включает последовательности, которые по меньшей мере на 70% идентичны по нуклеотидной последовательности указанным последовательностям, обладающим антирепрессорной активностью, или их функциональным фрагментам, обладающим антирепрессорной активностью, при условии, что данные последовательности, которые по меньшей мере на 70% идентичны, по-прежнему обладают антирепрессорной активностью по изобретению. Предпочтительно указанные последовательности по меньшей мере на 80% идентичны, более предпочтительно по меньшей мере на 90% идентичны и еще более предпочтительно по меньшей мере на 95% идентичны стандартной природной последовательности или ее функциональному фрагменту.

Последовательности, обладающие антирепрессорной активностью по изобретению, можно получить различными способами, включая, но не ограничиваясь клонированием из человеческого генома или из генома другого организма, или, например, амплификацией известных антирепрессорных последовательностей, непосредственно из такого генома при использовании информации о последовательностях, например, ПЦР, или их можно частично или полностью синтезировать химическим путем.

Последовательности, обладающие антирепрессорной активностью, и их функциональные фрагменты или производные здесь определяют структурно по их последовательности и в дополнении определяют функционально в качестве последовательностей, обладающих антирепрессорной активностью, что можно оценить тестом, описанным ниже.

Любая последовательность, обладающая антирепрессорной активностью по настоящему изобретению, должна, по меньшей мере, быть способной сохраняться в следующем функциональном тесте (см. νθ 03/004704, пример 1, включенную здесь для сведения). Человеческие клетки Ц-2 ОБ (АТСС НТВ-96) стабильно трансфицируют плазмидой рТе1-ОГГ (С1оп1есй К1620-А) и нуклеиновой кислотой, кодирующей гибридный белок ЬехА-репрессор, содержащий связывающийся с ДНК домен ЬехА, и кодирующую область НР1 или НРС2 (группа белков Ро1усотЬ дрозофилы, которые подавляют экспрессию гена при связывании с ДНК; тест функционирует с любым гибридным белком) под контролем транскрипционной регуляторной системы Те1-ОГГ (Оо55еп апй Вщагй. 1992). Данные клетки относятся ниже к репортерным клеткам для постановки теста определения антирепрессорной активности. Репортерная плазмида, которая обеспечивает резистентность к гигромицину, содержит последовательность полилинкера, расположенную между четырьмя сайтами оператора ЬехА и промотором БУ40, который контролирует ген резистентности к зеоцину. Последовательность, предназначенную для тестирования на антирепрессорную активность, можно клонировать в указанный полилинкер. Конструирование подходящей репортерной плазмиды, такой как рБе1ес1, описано в примере 1 и на фиг. 1 заявки νθ 00/004704. Репортерную плазмиду трансфицируют в репортерные клетки и клетки культивируют при селекции гигромицином

- 3 011747 (25 мкг/мл; селекция на присутствие репортерной плазмиды) и репрессии тетрациклином (доксициклин, 10 нг/мл; подавляет экспрессию гибридного белка ЬехА-репрессора). Через 1 неделю культивирования в таких условиях концентрация доксициклина снижается до 0,1 нг/мл (или ниже) с индукцией гена ЬехЛрепрессора, и через 2 суток добавляют зеоцин до концентрации 250 мкг/мл. Клетки культивируют в течение 5 недель до тех пор, пока контрольные культуры (трансфицированные пустой репортерной плазмидой, т.е. без клонированной антирепрессорной последовательности в полилинкере) погибают в результате действия зеоцина (в данной контрольной плазмиде промотор 8У40 репрессируется гибридным белком ЬехЛ-репрессором, который связывается с оперативными сайтами ЬехЛ, приводя к недостаточной экспрессии зеоцина в таких клетках для выживания при селекции зеоцином). Последовательность обладает антирепрессорной активностью по настоящему изобретению в тех случаях, когда указанную последовательность клонируют в полилинкер репортерной плазмиды, и репортерные клетки выживают в течение 5 недель отбора в присутствии зеоцина. Клетки из таких колоний могут по-прежнему размножаться на новой среде, содержащей зеоцин, через 5 недель после отбора по зеоцину, в то время как клетки, трансфицированные репортерными плазмидами, без антирепрессорных последовательностей не могут размножаться на новой среде, содержащей зеоцин. Любую последовательность, не способную к такому росту через 5 недель в присутствии зеоцина в данном тесте, не определяют в качестве последовательности, обладающей антирепрессорной активностью, или ее функционального фрагмента или функционального производного по настоящему изобретению. В качестве примера известные ограниченные последовательности, такие как тестированные Уаи бег У1ад е1 а1. (2000), включая 5С5 дрозофилы (Ке11ит апб 8с11еб1. 1991), 5'-Н84 локус птичьего β-глобина (Сйиид е1 а1., 1993, 1997) или области присоединения матрикса (МАК) (РЫ-Уаи е1 а1., 1990), не проходят данный тест.

Кроме того, предпочтительно, чтобы антирепрессорная последовательность или ее функциональный фрагмент или производное придавали большее количество клонов с гиперэкспрессией репортера при фланкировании гена-репортера (например, люциферазы, СРР), который интегрируют в геном клеток и-2 Θ8 или СНО, по сравнению с указанным геном-репортером, который не фланкирован антирепрессорными последовательностями или фланкирован последовательностями с более слабой блокирующей репрессию активностью, такими как 5С5 дрозофилы. Это можно проверить с использованием, например, вектора р8ЭН или аналогичных векторов, как описано в примере 1 и на фиг. 2 заявки νΟ 03/004704.

Антирепрессорные элементы по изобретению могут иметь по меньшей мере одно из трех последствий в отношении продукции белка: 1) они повышают прогнозируемость идентификации линий клетокхозяев, которые экспрессируют белок на промышленно приемлемых уровнях; 2) они приводят к получению линий клеток-хозяев с повышенным выходом белка и/или 3) они приводят к получению линий клеток-хозяев, которые проявляют более стабильную продукцию белка во время продолжительного культивирования. Каждое из данных качеств более подробно обсуждается ниже.

1) Повышенная прогнозируемость: интеграция экспрессирующих трансген кассет может происходить в случайных положениях в геноме клетки-хозяина. Однако большая часть генома представляет транскрипционно «молчащий» гетерохроматин. Когда экспрессирующие кассеты включают антирепрессорные элементы, фланкирующие трансген, то положение интеграции имеет незначительное влияние на экспрессию. Антирепрессорные элементы снижают способность смежного гетерохроматина к «умалчиванию» трансгена. Следовательно, увеличивается относительное количество содержащих трансген клеток-хозяев с экспрессией на приемлемом уровне. Действительно, включение антирепрессорных последовательностей приводит к получению колоний в 10 раз больше, по сравнению с тем же трансгеном без антирепрессорных последовательностей, когда трансфицируется тоже количество ДНК.

2) Выход: оценивали уровень экспрессии белка в первичных популяциях рекомбинантных клетокхозяев непосредственно после интеграции трансгена. Уровень экспрессии у отдельных клонов в популяции варьировал. Однако когда трансгены были защищены антирепрессорными элементами, то вариабельность снижалась. Данная пониженная вариабельность наиболее заметно проявляется в том, что получают меньшее число клонов с низким уровнем экспрессии. Кроме того, популяции с антирепрессорными элементами, как правило, имеют отдельные клоны с очень высокой экспрессией. Данные отдельные клоны с высоким выходом пригодны для продукции белков либо в целях получения, либо в целях изменения фенотипа клетки или организма, включающего такие клетки.

3) Повышенная стабильность: антирепрессорные элементы повышают стабильность трансгенов в линиях рекомбинантных клеток-хозяев обеспечением того, что трансгены не становятся транскрипционно «молчащими» во время продолжительного культивирования. В сравнительных исследованиях было показано, что в условиях, при которых трансгены не защищены антирепрессорными элементами, они прогрессивно «молчат» (5-25 пассажей при культивировании), в то время как защищенные антирепрессорными элементами трансгены продолжают экспрессироваться на высоких уровнях. Это является преимуществом для промышленного получения белковых молекул, во время которого культивирование клеток продолжается в течение продолжительных периодов времени от нескольких недель до многих месяцев. Аналогично, стабильность экспрессии в течение продолжительных периодов времени может быть преимущественной для растений или животных с измененными фенотипами в результате рекомбинантной экспрессии защищенных антирепрессорными элементами трансгенов.

- 4 011747

8ТЛВ67.

Настоящее изобретение относится к новой последовательности, обладающей антирепрессорной активностью, которой дали название 8ТЛК67 (8ЕС ΙΌ Νο: 66). Данная антирепрессорная последовательность уже в большой степени повышает экспрессию, когда ее помещают только слева от промотора, регулирующего экспрессию интересующего гена, как следует из представленных здесь примеров, в то время как оказалось, что известные к настоящему времени сильные антирепрессорные последовательности, такие как 8ТЛК6 или 8ТЛК7, обеспечивают меньшее преимущество в данной конфигурации (они функционируют особенно хорошо, когда фланкируют трансген, т.е. когда находятся как слева, так и справа от трансгена). Следовательно, 8ТЛК67 обеспечивает альтернативу для уже известных антирепрессорных последовательностей, и при расположении слева от промотора, обладает повышенным преимуществом, по сравнению с известными антирепрессорными последовательностями. 8ТЛК67 не является блокатором энхансера в противоположность другим антирепрессорными последовательностям, тестированным на данное свойство (Кетакк с1 а1., 2003), обеспечивая другое отличие между 8ТЛК67 и другими антирепрессорными последовательностями, раскрытыми ранее. Кроме того, 8ТЛК67 может функционировать в двух направлениях, как показано в примере 7. По изобретению наличие последовательности 8ТЛК67 в экспрессирующей кассете обеспечивает повышенную прогнозируемость, и/или выход, и/или стабильность экспрессии. Здесь показано, что 8ТЛК67 является функциональной в комбинации с различными промоторами и в различных клеточных линиях.

Экспрессирующая кассета.

Молекула нуклеиновой кислоты по изобретению, содержащая 8ТЛК67, может находиться в любой форме, например, в виде фрагмента ДНК, необязательно присутствующего в клонирующем векторе, таком как плазмида, предпочтительно экспрессирующем векторе, и ее можно применять, например, для целей клонирования с использованием обычной технологии рекомбинантной ДНК. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения нуклеиновая кислота содержит экспрессирующую кассету, которая является пригодной для экспрессии интересующих последовательностей, например, в клеткаххозяевах.

Экспрессирующая кассета, в том смысле, в котором здесь используется данный термин, представляет нуклеиново-кислотную последовательность, содержащую, по меньшей мере, промотор, функционально связанный с последовательностью, экспрессия которой является желательной, где данная последовательность, экспрессия которой является желательной, предпочтительно представляет открытую рамку считывания, кодирующую весь или часть интересующего белка. Предпочтительно промотор представляет гетерологичный промотор по отношению к интересующей нуклеиновой кислоте, в результате чего гетерологичный промотор определяется как промотор, который не является природным промотором указанной интересующей последовательности. Другими словами, осуществляется некоторая форма вмешательства человека, например, молекулярное клонирование, на любой временной точке для получения функциональной комбинации гетерологичного промотора с интересующей нуклеиновой кислотой, и легко понять в данном контексте, что гетерологичный промотор может быть получен из того же или из другого организма, что и интересующая последовательность. Предпочтительно экспрессирующая кассета дополнительно содержит последовательности терминации транскрипции и полиаденилирования. Могут быть также включены другие регуляторные последовательности, такие как энхансеры. Экспрессирующие единицы по изобретению дополнительно содержат по меньшей мере одну антирепрессорную последовательность, такую как 8ТЛК67. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления указанную антирепрессорную последовательность, предпочтительно 8ТЛК67, помещают слева от указанного промотора, предпочтительно так, чтобы присутствовало менее чем 2 т.п.н. между З'-концом антирепрессорной последовательности и началом последовательности промотора. В предпочтительных вариантах осуществления менее чем 1 т.п.н., более предпочтительно менее чем 500 нуклеотидов, еще более предпочтительно менее чем примерно 200, 100, 50 или 30 нуклеотидов находилось между З'-концом антирепрессорной последовательности и началом последовательности промотора. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления антирепрессорную последовательность клонируют непосредственно слева от промотора, что приводит к расстоянию примерно 0-20 нуклеотидов между З'-концом антирепрессорной последовательности и началом последовательности промотора.

Специалистам в данной области хорошо известно, что для получения экспрессии нуклеиновокислотных последовательностей, кодирующих рекомбинантный белок, последовательности, способные регулировать такую экспрессию, могут быть функционально связаны с нуклеиново-кислотными последовательностями, кодирующими белок, давая молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующие рекомбинантный белок в экспрессируемой форме. В основном последовательность промотора помещают слева по отношению к последовательностям, кодирующим интересующий белок. В данной области имеются подходящие экспрессирующие векторы, например, серии векторов ροΌΝΆ и рЕЕ производства ΙηνίΙΐΌβοη. рМ8СУ и рТК-Нуд производства ΒΌ 8с1спсс5. рСМУ-8спр! производства 81га!адепе, и т.д.

В тех случаях, когда последовательность, кодирующую интересующий полипептид, вставляют правильно по отношению к последовательностям, регулирующим транскрипцию и трансляцию кодируемого

- 5 011747 полипептида, то полученная экспрессирующая кассета пригодна для получения интересующего белка, в отношении экспрессии. Последовательности, регулирующие экспрессию, могут включать промоторы, энхансеры и т.п. и их комбинации. Они должны быть способны функционировать в клетке-хозяине, тем самым, регулируя экспрессию нуклеиново-кислотных последовательностей, которые функционально связаны с ними. Специалисты в данной области знают, что можно использовать различные промоторы для обеспечения экспрессии интересующего гена в клетках-хозяевах. Промоторы могут быть конститутивными или регулируемыми, и их можно получить из различных источников, включая вирусы, прокариотические или эукариотические источники, или созданные искусственно. Экспрессия интересующих нуклеиновых кислот может быть с природного промотора или его производного, или с полностью гетерологичного промотора (КаиЕтап, 2000). Некоторые хорошо известные и широко применяемые промоторы для экспрессии в эукариотических клетках включают промоторы, полученные из вирусов, таких как аденовирусы, например, промотор Е1А, промоторы, полученные из цитомегаловирусов (СМУ), таких как немедленный ранний промотор СМУ (ΙΕ) (здесь относится к промотору СМУ) (полученному, например, из ροΩΝΑ. ΙηνίίΓΟβοη). промоторы, полученные из вируса обезьян 40 (8У40) (Эа5 с1 а1., 1985), и т.п. Подходящие промоторы можно также получить из эукариотических клеток, такие как промоторы металлотионеина (МТ), промотор фактора элонгации 1а (ΕΕ-1α) (СШ с1 а1., 2001), промотор убиквитина С или иВ6 (СШ с1 а1., 2001; 8сйотрр с1 а1., 1996), промотор актина, промотор иммуноглобулина, промоторы теплового шока и т. п. Некоторыми предпочтительными промоторами для обеспечения экспрессии в эукариотических клетках, которые являются подходящими промоторами в настоящем изобретении, являются СМУ-промотор, ΕΕ1-альфа-промотор млекопитающих, промотор убиквитина млекопитающих, такой как промотор убиквитина С, или промотор 8У40 (например, полученный из ρΙΚΕδ, номер по каталогу 631605, ΒΌ 8с1епсе5). Тестирование функции промотора и силы промотора является обычной практикой для специалистов в данной области, и в основном оно может, например, включать клонирование тестируемого гена, такого как 1ас2, люциферазы, СЕВ и т.д., за последовательностью промотора, и постановку теста на экспрессию тестируемого гена. Конечно, промоторы можно изменить делецией, добавлением, мутацией его последовательностей и тестировать на функциональность для поиска новых, аттенуированных или усовершенствованных промоторных последовательностей.

Экспрессирующая кассета по изобретению может быть моноцистронной, бицистронной или мультицистронной. Термин «бицистронный ген» определяется как ген, способный обеспечивать молекулу РНК, которая кодирует два белка/полипептида. Термин «моноцистронный ген» определяется как ген, способный обеспечивать молекулу РНК, которая кодирует один белок/полипептид. Термин «мультицистронный ген» определяется как ген, способный обеспечивать молекулу РНК, которая кодирует два или несколько белков/полипептидов и, следовательно, бицистронный ген входит в определение мультицистронного гена. «Ген», в том смысле, в котором используется данный термин в настоящем изобретении, может включать хромосомную ДНК, кДНК, искусственную ДНК, их комбинации и т.п. и также может быть в форме другой нуклеиновой кислоты, например, РНК. В некоторых вариантах осуществления экспрессирующая белок единица включает мультицистронный ген. Единицы, содержащие несколько цистронов, могут транскрибироваться в виде одной мРНК. Трансляцию второй и последующих кодирующих областей, присутствующих в такой РНК, можно обеспечить различными путями, включая применение сайтов реинициации трансляции или внутренних сайтов входа рибосом, из которых последний является предпочтительным. Одно преимущество би- и мультицистронных единиц заключается в простой селекции клонов, экспрессирующих интересующий белок, помещением нуклеиновой кислоты, кодирующей селектируемый маркерный белок справа от нуклеиновой кислоты, кодирующей интересующий белок или полипептид.

Для получения мультимерных белков можно использовать две или несколько экспрессирующих кассет. Было показано, что данный вариант осуществления дает хорошие результаты, например, для экспрессии тяжелой и легкой цепи антител. По изобретению по меньшей мере одна из экспрессирующих кассет и предпочтительно каждая из них должна включать последовательность 8ТАВ. В другом варианте осуществления различные субъединицы или части мультимерного белка находятся в одной экспрессирующей кассете.

Вместо или в дополнение к наличию антирепрессорной последовательности, помещенной слева по отношению к промотору в экспрессирующей кассете, было показано, что очень преимущественно обеспечить антирепрессорную последовательность с обоих концов экспрессирующей кассеты, так, чтобы экспрессирующая кассета, содержащая трансген, была фланкирована двумя антирепрессорными последовательностями, которые в некоторых вариантах осуществления в основном идентичны друг другу. Конечно, это также можно сделать со 8ТАВ67 для получения экспрессирующей кассеты, фланкированной двумя последовательностями 8ТАВ67. Также возможны альтернативные положения одной последовательности 8ТАВ67 в экспрессирующей кассете, например, за трансгеном, предпочтительно за последовательностью терминации транскрипции и сигналом полиаденилирования, притом, что З'-конец последовательности 8ТАВ67 обращен к трансгену.

Экспрессирующая кассета по изобретению может необязательно содержать селективный маркерный ген. Термин «селективный маркер или селектируемый маркер» обычно используют при обращении

- 6 011747 к гену и/или белку, присутствие которых можно детектировать прямо или опосредованно в клетке, например, ген и/или белок, который инактивирует агент селекции и защищает клетку-хозяин от летального или ингибирующего рост действия агента (например, ген и/или белок резистентности к антибиотику). Другая возможность заключается в том, что указанный селективный маркер индуцирует флуоресценцию или окраску (например, белок и производные с зеленой флуоресценцией, люцифераза, 1ас2, щелочная фосфатаза и т.д.). В некоторых вариантах осуществления селективный маркер, используемый для изобретения, представляет собой зеоцин, и для отбора второй экспрессирующей кассеты используют пуромицин. Специалистам в данной области известно, что имеются и можно использовать другие селективные маркеры, например неомицин, бластицидин, пуромицин, блеомицин, гигромицин, бЬГг и т.д.

Термин «селекция» обычно определяется как способ применения селективного маркера/селектируемого маркера и агента селекции для идентификации клеток-хозяев со специфическими генетическими свойствами (например, если клетка-хозяин содержит трансген, интегрированный в ее геном). Специалистам в данной области очевидно понятно, что возможны многочисленные комбинации селективных маркеров. Пример возможного антибиотика приведен выше. Одним наиболее преимущественным антибиотиком является зеоцин, поскольку белок резистентности к зеоцину (зеоцин-К) функционирует при связывании лекарственного препарата и делает его безвредным. Следовательно, легко оттитровать количество препарата, которое приводит к гибели клеток с низким уровнем экспрессии зеоцинаК в то же время позволяя выжить клеткам с высокой экспрессией. Все другие белки резистентности к антибиотикам в основном являются ферментами и, таким образом, действуют каталитически (не в соотношении 1:1 с препаратом). Когда проводят двухстадийный отбор, то, следовательно, предпочтительно использовать белок резистентности к антибиотикам при данном связывающем механизме действия 1:1. Следовательно, антибиотик зеоцин является предпочтительным селективным маркером. Для удобства антибиотик зеоцин в двухстадийном способе отбора можно объединить, например, с пуромицином, бластицидином или гигромицином, которые могут, например, находиться в моноцистронном гене.

Также является возможным объединить селективный антибиотик-маркер с селективным маркером, который обеспечивает индукцию флуоресценции или который обеспечивает окраску. Можно использовать различные маркеры при условии, что они функционируют в используемой клетке.

В некоторых вариантах осуществления экспрессирующая кассета содержит (слабый) внутренний сайт связывания с рибосомой (ΙΚΕ8) в качестве примера сайта инициации трансляции белка с пониженной эффективностью трансляции, например, между открытой рамкой считывания интересующего белка и открытой рамкой считывания селективного маркера. Трансляция белков с элементов ΙΒΕ8 является менее эффективной, по сравнению с кэп-зависимой трансляцией: количество белка с ΣΚΕδ-зависимых открытых рамок считывания (ОКЕ) составляет менее чем 20-50% от количества с первой ОКЕ (ΜίζιΐβΐιΟιί с! а1., 2000). Кроме того, мутация элементов ΙΚΕ8 может ослабить их активность и снизить экспрессию с ΙΚΕδ-зависимых ОКЕ до менее 10% от первой ОКЕ (Εοροζ бе ΟιιίηΙο & Μ;·ιΠίηοζ-δ;·ι1;·ΐ5. 1998; Ксс5 с! а1., 1996). В тех случаях, когда ГКТБ-зависимая ОКЕ кодирует селектируемый маркерный белок, то его относительно низкий уровень трансляции означает, что должны иметь место высокие абсолютные уровни транскрипции для отбора рекомбинантной клетки-хозяина. Следовательно, отобранные изоляты клеткихозяина будут обязательно экспрессировать высокие количества мРНК трансгена. Поскольку рекомбинантный белок транслируется с кэп-зависимой ОКЕ, то он может продуцироваться в избытке с высоким выходом продукта.

Обычные экспрессирующие системы представляют молекулы ДНК в виде рекомбинантной плазмиды или рекомбинантного вирусного генома. Плазмиду или вирусный геном вводят в (эукариотический хозяин) клетки и предпочтительно интегрируют в их геном способами, известными в данной области. В предпочтительных вариантах осуществления в настоящем изобретении также используются данные типы молекул ДНК для доставки ее улучшенной системы для экспрессии трансгена. Предпочтительный вариант осуществления изобретения представляет применение плазмидной ДНК для доставки экспрессирующей системы. Плазмида содержит ряд компонентов: обычные компоненты, известные в данной области, представляют точку начала репликации и селектируемый маркер для размножения плазмиды в бактериальных клетках; селектируемый маркер, который функционирует в эукариотических клетках для идентификации и выделения клеток-хозяев, которые несут интегрированную систему для экспрессии трансгена; нуклеиновую кислоту, кодирующую интересующий белок, транскрипция которой на высоком уровне обеспечивается промотором, который функционирует в эукариотических клетках (например, основной немедленный ранний промотор/энхансер человеческого цитомегаловируса, рСМУ (ВокйагГ с! а1., 1985)); и терминаторы транскрипции (например, сайт полиаденилирования 8У40 (КаиГтап & 8 На гр, 1982)) интересующего трансгена и селектируемого маркера. Используемый вектор может быть любым вектором, который подходит для клонирования ДНК и который можно использовать для транскрипции интересующей нуклеиновой кислоты. В тех случаях, когда используются клетки-хозяева, то предпочтительно, чтобы вектор представлял собой интегрирующий вектор. Альтернативно, вектор может быть эписомально реплицирующимся вектором.

Некоторые неограничивающие схематичные представления возможных конфигураций экспрессирующих кассет представлены на фиг. 1. Это конфигурация ДНК-элементов экспрессирующих кассет в

- 7 011747 плазмиде, а также после интеграции в геном. Конструкция А включает экспрессирующую единицу, которая содержит открытую рамку считывания, кодирующую белок (ген). Это слева от аттенуированного ЕМСУ 1ВЕ8 (Маг11псх-8а1а5 с1 а1., 1999; Μίζιΐβΐιοίιί с1 а1., 2000; Веек с1 а1., 1996) и открытой рамки считывания, кодирующей селектируемый белок-маркер резистентности к зеоцину (зео). Генная кассета имеет терминатор транскрипции 8У40 на ее З'-концах (ΐ). Данный бицистронный трансген транскрибируется на высоком уровне с промотора СМУ. Конструкция В получена из конструкции А, но 8ТАВ67 в данном случае клонирована слева от промотора СМУ. Конструкция С получена из конструкции В, но в данном случае два антирепрессорных элемента (в данном случае 8ТАВ7) клонированы для фланкирования полной кассеты.

Комбинация антирепрессорных последовательностей в экспрессирующей кассете.

Здесь показано, что комбинация первого антирепрессорного элемента, расположенного слева от промотора, и фланкирование экспрессирующей кассеты двумя другими антирепрессорными последовательностями обеспечивают получение очень хороших результатов. В частности, когда используется промотор 8У40 в клетках СНО, то экспрессия уже является очень высокой при отсутствии антирепрессорных последовательностей, но она существенно повышается при помещении 8ТАВ67 слева от указанного промотора и фланкировании целой экспрессирующей кассеты двумя антирепрессорными элементами, такими как δΤΑΒβ, 8ТАВ7 или 8ТАВ40.

Следовательно, целью изобретения является обеспечение молекулы рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащей экспрессирующую кассету, включающую (от 5' к 3'): антирепрессорную последовательность А - промотор - нуклеиновую кислоту, кодирующую интересующий белок - антирепрессорную последовательность В, отличающуюся тем, что указанная экспрессирующая кассета дополнительно включает антирепрессорную последовательность С, расположенную между антирепрессорными последовательностями А и В. В предпочтительном варианте осуществления указанная антирепрессорная последовательность С находится слева от указанного промотора, в конфигурации, представленной выше, под заголовком «экспрессирующая кассета». Экспрессирующая кассета между антирепрессорными последовательностями А и В может дополнительно содержать элементы, описанные выше для экспрессирующих кассет, например, последовательность терминатора транскрипции, сигнал полиаденилирования, селективный маркерный ген, энхансер и т.д., и может быть моноцистронной, бицистронной и мультицистронной, как описано выше.

Две или три антирепрессорных последовательности А, В и С могут быть одинаковыми, или все три могут быть различными. Антирепрессорные последовательности А и В могут быть одинаковыми или различными с антирепрессорной последовательностью С. В некоторых вариантах осуществления антирепрессорные последовательности А и В являются (в основном) идентичными друг другу. В одном варианте осуществления антирепрессорная последовательность С представляет собой 8ТАВ67 или ее функциональный фрагмент или производное.

Антирепрессорные последовательности А и В могут представлять любую антирепрессорную последовательность и в некоторых вариантах осуществления включают одну из последовательностей 8ЕО ГО Νο: 1-65 или их функциональных фрагментов или производных. В некоторых вариантах осуществления экспрессирующая кассета содержит мультицистронный ген, и в предпочтительных вариантах осуществления указанный мультицистронный ген включает последовательность, кодирующую интересующий белок или селективный маркерный ген. Альтернативно, селективный маркерный ген находится под контролем отдельного промотора.

В некоторых вариантах осуществления может присутствовать четвертая антирепрессорная последовательность Ό между 8ТАВ последовательностями А и В. В таком варианте осуществления указанная антирепрессорная последовательность Ό предпочтительно расположена справа от нуклеиновой кислоты, кодирующей интересующий белок. Вновь данная антирепрессорная последовательность Ό может быть той же самой или отличаться от других антирепрессорных последовательностей в молекуле рекомбинантной нуклеиновой кислоты, она может представлять любую антирепрессорную последовательность, и в некоторых вариантах осуществления она выбрана из любой последовательности 8ЕО ГО Νο: 1-65 или их функциональных фрагментов или производных.

Поскольку, по меньшей мере, некоторые антирепрессорные последовательности могут быть направленными (\УО 00/004704), то антирепрессорные последовательности, фланкирующие экспрессирующую кассету (антирепрессорные последовательности А и В), можно преимущественно расположить в противоположном направлении по отношению друг к другу так, чтобы 3'-конец каждой из данных антирепрессорных последовательностей был обращен внутрь к экспрессирующей кассете (и друг к другу). Следовательно, в предпочтительных вариантах осуществления 5'-конец антирепрессорного элемента обращен к ДНК/хроматину, в результате чего его влияние на трансген должно уменьшиться под действием указанного антирепрессорного элемента. Для антирепрессорной последовательности, расположенной слева от промотора в экспрессирующей кассете, 3'-конец обращен к промотору. Последовательности антирепрессорных элементов (8ЕО ГО Νο: 1-66) в перечне последовательностей представлены в направлении от 5' к 3', если не указано иначе.

- 8 011747

Клетки по изобретению.

Молекулы нуклеиновых кислот, содержащие последовательности 8ТАК и/или экспрессирующие кассеты по настоящему изобретению, можно использовать для повышения экспрессии нуклеиновой кислоты, предпочтительно в клетках-хозяевах. Термины «клетка 'V' клетка-хозяин» и «клеточная линия 'V' клеточная линия-хозяин» обычно определяются соответственно, как клетка и ее однородная популяция, которые можно поддерживать в клеточной культуре способами, известными в данной области, и которые обладают способностью экспрессировать гетерологичные или гомологичные белки. Предпочтительно клетка-хозяин по настоящему изобретению представляет эукариотическую клетку, более предпочтительно клетку млекопитающих, такую как клетка грызунов или человеческая клетка, или гибрид различных клеток. В некоторых неограничивающих вариантах осуществления указанная клетка-хозяин представляет клетку остеосаркомы И-2 08, СНО (клетка яичника китайского хомячка), НЕК 293, миеломы ΗπΝ8-Ι, ретинобластомы ^ЕК1-ВЬ-1, ΒΗΚ, νοΓΟ. несекретирующей мышиной миеломы 8р2/0-Ад 14, несекретирующей мышиной миеломы N80, карциномы надпочечников ЫС1-Н295К. или РЕК.С6®.

В некоторых вариантах осуществления изобретения клетка-хозяин является клеткой, экспрессирующей, по меньшей мере, Е1А и предпочтительно также Е1В аденовируса. В качестве неограничивающего примера такая клетка может быть получена, например, из человеческих клеток, например, из почек (например, клетки НЕК 293, см. Сгайат е( а1., 1977), легких (например, А549, см., например, XVО 98/39411) или сетчатки (например, промышленно доступные клетки НЕК под торговым названием РЕК.С6®, см. патент США № 5994128) или из амниоцитов (например, N52. Е6, описанные в патенте США № 6558948) и аналогично из других клеток. Способы получения таких клеток описаны, например, в патентах США № 5994128 и 6558948. Клетки РЕК.С6® для целей настоящего применения означают клетки до или после пассажа или клетки, происходящие слева или справа пассажа, депонированные под номером ЕСАСС № 96022940. Ранее было показано, что такие клетки способны экспрессировать белки на высоком уровне (например, νθ 00/63403 и 1оие8 е( а1., 2003).

Такие клетки-хозяева, экспрессирующие желаемый белок по изобретению, можно получить введением молекулы нуклеиновой кислоты, предпочтительно в форме экспрессирующей кассеты по изобретению, в клетки. В альтернативном варианте осуществления последовательность 8ТАК67 предназначена для целенаправленной интеграции в хромосомную область для повышения экспрессии интересующего гена, который уже был интегрирован в геном, например, в природный ген, необязательно под контролем гетерологичного промотора, который направлен слева от указанного гена для регуляции экспрессии указанного гена. Предпочтительно клетки-хозяева происходят из стабильного клона, который можно отобрать и размножить стандартными способами, известными специалистам в данной области. Культура такого клона способна продуцировать интересующий рекомбинантный белок. Клетки по изобретению предпочтительно способны расти в суспензионной культуре, в не содержащей сыворотку среде.

Интересующий белок по изобретению может представлять любой белок и может быть мономерным белком или мультимерным белком. Мультимерный белок содержит по меньшей мере две полипептидных цепи. Неограничивающие примеры интересующего белка по изобретению представляют ферменты, гормоны, иммуноглобулиновые цепи, терапевтические белки, такие как противоопухолевые белки, белки свертывания крови, такие как фактор VIII, многофункциональные белки, такие как эритропоэтин, диагностические белки или белки либо их фрагменты, пригодные для вакцинации, которые все известны специалистам в данной области.

В некоторых вариантах осуществления экспрессирующая кассета по изобретению кодирует тяжелую и легкую цепь иммуноглобулина или его антигенсвязывающую область, производное и/или аналог. В предпочтительном варианте осуществления обеспечивается единица для экспрессии белка по изобретению, где указанный интересующий белок представляет тяжелую цепь иммуноглобулина. В еще одном предпочтительном варианте осуществления обеспечивается единица для экспрессии белка по изобретению, где указанный интересующий белок представляет легкую цепь иммуноглобулина. В тех случаях, когда данные две единицы для экспрессии белка находятся в одной и той же клетке (хозяине), то имеет место сборка мультимерного белка и конкретнее антитела. Следовательно, в некоторых вариантах осуществления интересующий белок представляет иммуноглобулин, такой как антитело, который является мультимерным белком. Предпочтительно такое антитело является человеческим или гуманизированным антителом. В некоторых вариантах осуществления это 1дС, 1дА или 1дМ антитело. Иммуноглобулин может кодироваться по тяжелой или легкой цепям в различных экспрессирующих кассетах или в одной экспрессирующей кассете, где ген, кодирующий каждую отдельную цепь, каждый может находиться под контролем отдельного промотора в моноцистронных транскрипционных единицах, или альтернативно, обе цепи могут кодироваться мультицистронным геном.

Интересующий белок может происходить из любого источника, и в некоторых вариантах осуществления он представляет белок млекопитающих, искусственный белок (например, гибридный белок или мутантный белок), и предпочтительно он является человеческим белком.

Очевидно, что антирепрессорные последовательности и конфигурации экспрессирующих кассет по настоящему изобретению также можно использовать, когда конечной целью является не продукция бел

- 9 011747 ка, а сама РНК, например, для получения больших количеств РНК из экспрессирующей кассеты, которую можно использовать для регуляции других генов (например, иРНК, антисмысловой РНК), генной терапии, продукции белка в условиях ίη νίίτο и т.д.

Способ получения интересующего белка.

В одном аспекте изобретение относится к способу экспрессии интересующей последовательности, предпочтительно кодирующей интересующий белок, обеспечением клетки-хозяина с молекулой нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассетой по изобретению, культивированием клетки и экспрессией интересующей последовательности.

Термин «экспрессия» обычно используется по отношению к продукции специфического продукта или продуктов РНК, или специфического белка или белков, в клетке. В случае продуктов РНК он относится к способу транскрипции. В случае белковых продуктов он относится к способам транскрипции, трансляции и необязательно посттрансляционных модификаций (например, гликозилирования, образования дисульфидных связей и т.д.). В случае секретируемых белков он относится к способам транскрипции, трансляции и необязательно посттрансляционных модификаций с последующей секрецией.

Введение нуклеиновой кислоты, которая должна экспрессироваться в клетке, можно проводить одним из нескольких методов, которые известны специалистам в данной области, также зависит от формы нуклеиновой кислоты, предназначенной для введения. Указанные методы включают, но не ограничиваются трансфекцией, инфицированием, инъекцией, трансформацией и т.п.

Культивирование клетки проводят для обеспечения метаболизирования, и/или культивирования, и/или деления, и/или продукции интересующих рекомбинантных белков. Это можно осуществлять методами, хорошо известными специалистам в данной области, и это включает, но не ограничивается обеспечением питательных веществ для клетки. Методы включают культивирование при прикреплении к поверхности, культивирование в суспензии или их сочетания. Культивирование можно проводить, например, на чашках, во вращающихся сосудах или в биореакторах с использованием периодических, систем с подпиткой и непрерывных систем, таких как перфузионные системы и т.п. Для достижения крупномасштабной (непрерывной) продукции рекомбинантных белков при культивировании клеток предпочтительно в данной области иметь клетки, способные расти в суспензии, и предпочтительно иметь клетки, способные культивироваться при отсутствии сыворотки крови от животных или человека или компонентов сыворотки крови от животных или человека.

Условия для культивирования или размножения клеток (см., например, Т1ззие Си11иге, Лсабеиис Ргезз, Кгизе апб Ра1егзоп, еббогз (1973)) и условия для экспрессии рекомбинантного продукта известны специалистам в данной области. В основном принципы, протоколы и практические методики для получения максимальной продуктивности культур клеток млекопитающих можно найти в Маттайап Се11 Вю1ес1то1оду: а Ргасбса1 Лрргоасй (М. ВиНег, еб., 1КЬ Ргезз, 1991).

В предпочтительном варианте осуществления экспрессированный белок собирают (выделяют) либо из клеток, либо из культуральной среды, либо из обоих. Затем его можно дополнительно очистить с использованием известных методов, например, фильтрования, колоночной хроматографии и т.д., методами, обычно хорошо известными специалистам в данной области.

Новый способ селекции.

В настоящем изобретении раскрывается новый способ получения клеток-хозяев, экспрессирующих два интересующих полипептида, где данный способ обеспечивает удивительно хорошие результаты в том плане, что практически не появляются или отсутствуют колонии без применения антирепрессорных последовательностей, в то время как наличие антирепрессорной последовательности приводит к появлению клонов, выдерживающих отбор, и данные клоны в основном экспрессируют два интересующих полипептида на высоком уровне (пример 7, фиг. 11). Следовательно, изобретение относится к способу получения клетки-хозяина, экспрессирующей два интересующих полипептида, включающему: а) введение в клетку-хозяин одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, где молекула или молекулы нуклеиновой кислоты вместе содержат: ί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей первый интересующий полипептид и первый селектируемый маркерный ген; и ίί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей второй интересующий полипептид и второй селектируемый маркерный ген; и ίίί) по меньшей мере одну антирепрессорную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (а) любой из последовательностей 8ЕО Ш Ыо: 1-66; (Ь) фрагментов любой из последовательностей 8ЕС Ш Ыо: 1-66, где указанные фрагменты обладают антирепрессорной активностью; (с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны (а) или (Ь), и обладают антирепрессорной активностью; и (б) комплементарной последовательности к (а)-(с); Ь) селекцию клетки-хозяина, по существу, одновременным отбором на экспрессию указанного первого и второго селектируемых маркерных генов. Отобранные клетки-хозяева можно преимущественно использовать для экспрессии указанных двух полипептидов культивированием указанных отобранных клетокхозяев. В одном варианте осуществления две молекулы нуклеиновой кислоты, одну, содержащую ί), и вторую, содержащую ίί), используют для введения в клетку-хозяин. В данном варианте осуществления каждая молекула нуклеиновой кислоты предпочтительно содержит по меньшей мере одну указанную антирепрессорную последовательность. В другом варианте осуществления используют одну молекулу

- 10 011747 нуклеиновой кислоты, содержащую ί) и ίί), которая затем должна включать по меньшей мере одну указанную антирепрессорную последовательность. Одно преимущество обеспечения кодирующих последовательностей для обоих полипептидов в одной молекуле нуклеиновой кислоты заключается в том, что необходимо получение только одной нуклеиновой кислоты перед введением нуклеиновой кислоты в клетки. Кроме того, в таком варианте осуществления одного события интеграции достаточно для кодирующих последовательностей обоих пептидов, в результате чего устраняется вероятность того, что нуклеиновая кислота, кодирующая первый полипептид, интегрируется в другом положении или с другим числом копий, по сравнению с таковой, кодирующей второй полипептид. В предпочтительных вариантах осуществления указанные два полипептида могут составлять часть мультимерного белка, такого как иммуноглобулин. Следовательно, способ особенно подходит для экспрессии антител. Два промотора могут быть одинаковыми или различными и могут представлять любые промоторы, описанные выше. В тех случаях, когда используется вариант осуществления, в котором одна молекула нуклеиновой кислоты содержит и ί) и ίί), то направление двух транскрипционных единиц в одной молекуле нуклеиновой кислоты может, например, быть одинаковым или противоположным направлением при обращении друг к другу, или противоположным направлением, каждое наружу. В последнем случае антирепрессорную последовательность можно поместить между двумя промоторами (см., например, фиг. 11В). Одной подходящей антирепрессорной последовательностью для данного аспекта изобретения является последовательность 8ЕО ΙΌ Νο: 66 (см. пример 7), но также могут функционировать другие антирепрессорные последовательности. Это могут легко проверить специалисты в данной области с использованием данного раскрытия и, следовательно, также применение других антирепрессорных последовательностей по данному аспекту изобретения включается в объем изобретения. Кроме того, антирепрессорные последовательности можно добавить для фланкирования одной или обоих транскрипционных единиц. Каждый из маркерных генов должен быть различным, и может, например, быть выбран из маркерных генов, описанных выше. В некоторых вариантах осуществления одним селектируемым маркером является зеоцин, и другой селектируемый маркер представляет, например, пуромицин. Однако ясно, что можно использовать другие комбинации, и все они находятся в объеме данного аспекта изобретения. Экспрессия маркеров предпочтительно должна зависеть от экспрессии интересующих полипептидов. Этого можно достичь связыванием экспрессии маркерных генов с таковой у интересующих полипептидов, например, при использовании мультицистронных генов, например, последовательностей ΙΚΕ8, как уже обсуждалось выше. «По существу, одновременный» отбор означает, что по меньшей мере часть времени, предпочтительно по меньшей мере в течение 1 суток, более предпочтительно по меньшей мере 2 суток, еще более предпочтительно по меньшей мере 5 суток присутствуют оба агента селекции, чего можно достичь обеспечением обоих агентов селекции, добавленных в культуральную среду в одно и то же время или добавлением культуральной среды, содержащей оба агента селекции (в частности, пример 7). Очевидно понятно, что добавление второго агента селекции только через несколько часов или суток в среду, в которой уже находится первый агент селекции, также будет приводить к «по существу, одновременному» отбору в значении изобретения. Данная ситуация отличается от ситуации, при которой клетки вначале отбираются с помощью первого агента селекции, и при образовании колоний клетки отбираются на новой среде, в которую внесен второй агент селекции и не добавлен первый агент селекции (последовательный отбор, в частности, пример 5 и АО 03/106684). При селекции на оба селектируемых маркера, по существу, одновременно здесь с удивлением раскрывается, что достигается быстрый и эффективный отбор, посредством чего удаляются многие клоны с низкой продуктивностью, приводя к существенному снижению рабочей нагрузки для поиска клона с желаемыми экспрессирующими характеристиками. Это является особенно преимущественным для биотехнологической промышленности, когда необходимо подвергнуть скринингу многие, обычно сотни или даже тысячи колоний, прежде чем будет идентифицирован желаемый клон, обладающий экспрессией на высоком уровне.

Кроме того, система обеспечивает возможность тестировать фрагменты антирепрессорных элементов, по меньшей мере, 8ТЛК67, но также и других антирепрессорных последовательностей, когда они функционируют в данном режиме, на функциональность. Следовательно, данный простой скрининг, который обеспечивает почти или даже все черные и белые различия во многих случаях, будет вносить свой вклад в идентификацию функциональных фрагментов или производных антирепрессорных последовательностей и/или способствовать характеристике новых антирепрессорных последовательностей. Скрининг даже можно использовать для поиска новых антирепрессорных и/или повышающих экспрессию последовательностей (поскольку данный тип скрининга в буквальном смысле не предназначен для выявления антирепрессорной активности, а в большей степени повышающей экспрессию активности, также является возможным, что будет установлена последовательность с последней, но не первой активностью). Следовательно, другой аспект настоящего изобретения относится к способу идентификации антирепрессорных и/или повышающих экспрессию последовательностей, или их функционального фрагмента или производного, включающему: а) введение в клетку-хозяин одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, где молекула или молекулы нуклеиновой кислоты вместе содержат: ί) промотор, функционально связанный с первым селектируемым маркерным геном; и ίί) промотор, функционально связанный со вторым селектируемым маркерным геном; и ίίί) по меньшей мере одну последовательность

- 11 011747 для тестирования на антирепрессорную и/или повышающую экспрессию активность; Ь) селекцию клетки-хозяина, по существу, одновременным отбором на экспрессию указанного первого и второго селектируемых маркерных генов. Клетки-хозяева, которые проходят данный скрининг, вероятно, содержат функциональный антирепрессорный и/или повышающий экспрессию элемент. Затем это можно легко анализировать дополнительно, например, определив его последовательность и/или подвергнув его другим функциональным тестам на антирепрессорную активность, как описано выше. В одном варианте осуществления как ί), так и ίί) находятся в одной молекуле нуклеиновой кислоты, например, с расходящимися промоторами (первый и второй селектируемые маркерные гены обращены наружу), между которыми можно клонировать тестируемую последовательность для анализа. Предпочтительно указанные селектируемые маркерные гены не экспрессируются на высоком уровне, например, при использовании относительно слабых промоторов, регулирующих селектируемые маркерные гены, такие относительно слабые промоторы известны, и/или их могут идентифицировать с использованием обычных методов специалисты в данной области, или, например, при использовании сильного промотора для транскрипции и 1КЕБ, предпочтительно относительно слабой 1КЕБ, как описано выше, для трансляции генамаркера. Маркерные гены также можно преимущественно поместить справа от нуклеиново-кислотных последовательностей, кодирующих полипептид и связанных с его экспрессией, в мультицистронном гене, например, с помощью 1КЕБ (в частности, пример 7, фиг. 11 для возможной конфигурации). Вновь такие полипептиды могут представлять интересующие полипептиды, так что получают непосредственно пригодные клоны для экспрессии указанных интересующих полипептидов, но также в целях скрининга можно легко количественно определить экспрессию маркеров, например, СЕР или его производного, БЕАР, ΙποΖ, люциферазы и т.д. В такой комбинации можно непосредственно количественно определить экспрессию полипептидов для отбора антирепрессорных и/или повышающих экспрессию элементов или их фрагментов, которые обеспечивают достаточное количество колоний во время одновременного отбора, и также обеспечивают транскрипцию на высоком уровне. Когда «произвольная» нуклеиновая кислота (т.е. нуклеиновая кислота, о которой еще не известно, что она обладает антирепрессорной или повышающей экспрессию активностью), например, в форме фрагментов генома, используется в качестве последовательности для тестирования на антирепрессорную или повышающую экспрессию активность, то можно найти новые антирепрессорные и/или повышающие экспрессию последовательности. В тех случаях, когда тестируют известные антирепрессорные последовательности, то данный тест можно использовать для их дополнительной характеристики. Когда тестированию подвергаются фрагменты известных антирепрессорных последовательностей, то тест будет обеспечивать функциональные фрагменты таких известных антирепрессорных последовательностей.

В практике данного изобретения будут применяться, если не указано иначе, обычные методы иммунологии, молекулярной биологии, микробиологии, клеточной биологии и рекомбинантной ДНК, которые знакомы специалистам в данной области. См., например, БатЬгоок, ΕγιΙκοΠ апб Машабк, Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога1огу Мапиа1, 2^пб ебйюп, 1989; СиггеШ РгоЮсоЕ ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Аи8иЬе1 ЕМ, е1 а1., еб§, 1987; Не кепек МеШобк ш Епхуто1оду (Асабетк Ргекк, 1пс.); РСК2: А ргасПса! Арртоасй, МасРйегаоп МЕ Напъ ΒΌ, Тау1ог СК, еб§, 1995; Ап11Ьоб1е§: А ЬаЬога1огу Мапиа1, Наботе апб Ьапе, еб§, 1988.

Изобретение дополнительно поясняется в последующих примерах. Примеры никоим образом не ограничивают изобретение. Они только служат для пояснения изобретения.

Примеры.

Пример 1. Конструирование векторов БТАК67.

Выделяли новую антирепрессорную последовательность с использованием генетического скрининга, как описано в заявке XVО 03/004704, и данную новую последовательность обозначали как БТАК67 (БЕО ГО Ыо: 66). Анализировали влияние БТАК67 на экспрессию трансгенов в клеточных линиях млекопитающих. Авторы описывают конструирование различных конструкций.

Материалы и методы.

Получали три плазмиды (фиг. 1):

A) СМУ-б2ЕСЕР-пе8^ео (СМУ контроль),

B) БТАК67-СМУ-б2ЕСЕР-пе8^ео (СМУ-БТАК67),

C) БТАК7-БТАК67-СМУ-б2ЕСЕР-1ге8^ео-БТАЯ7 (СМУ-БТАК67 7/7).

Конструирование конструкции А описано ниже. Плазмиду рб2ЕСЕР (ОоШесй 6010-1) модифицировали вставкой линкера в сайт Βδίνΐ с получением рб2ЕСЕР-йпк. Линкер, полученный отжигом олигонуклеотидов СТАСССАТАТСАСАТСТТТААТТААС (БЕО ГО Ыо: 67) и СТАССТТААТТАААСАТСТСАТАТ (БЕО ГО Ыо: 68), давал сайты для рестриктаз Раб, Вд111 и ВсоКУ. Это приводило к получению сайта множественного клонирования МСБ11 для вставки элементов БТАК. Затем использовали праймеры САТСАСАТСТССССССССАТТАААТССТСТССССССТТТСССТСАТСАССС (БЕО ГО Ыо: 69) и АСССССАТСССААТСТАТТТАСАААААТАААСАААТАСССС (БЕО ГО Ыо: 70) для амплификации области размером 0,37 т.п.н. из рб2ЕСЕР, которую вставляли в сайт ВдШ плазмиды р1КЕБ (С1оп1есН 6028-1) с получением р1КЕБ-81иЕ. Это приводило к введению сайтов для рестриктаз А§с1 и Бтеа1 в МСБ1, и действует в качестве «лишнего фрагмента» для того, чтобы избежать потенциального взаимодействия

- 12 011747 между элементами 8ТАВ и смежными промоторами. рГВЕЗ-зШГ расщепляли с помощью ВдШ и Езр1 для высвобождения фрагмента ДНК, состоящего из «лишнего» фрагмента, промотора СМУ, элемента ГВЕ8 (фланкированного сайтами множественного клонирования МС8 А и МС8 В) и сигнала полиаденилирования 8У40. Данный фрагмент лигировали с остовом вектора рб2Е0ЕР-йпк, полученного расщеплением ВашК1 и 81и1 с получением р1ВЕ8-йпк.

Открытую рамку считывания гена резистентности к зеоцину вставляли в сайты ВатА1/ЫоН справа от рГВЕ8 следующим образом: ОВР гена резистентности к зеоцину амплифицировали ПЦР с использованием праймеров 0АТС66АТССТТС6АААТ66ССАА6ТТ6АССА6Т0С (8ЕО ΙΌ Νο: 71) и А06С6С66СС6СААТТСТСА6ТССТ0СТССТС (8ЕО ΙΌ Νο: 72) из плазмиды рСМУ//со Дпуйгодеп, номер по каталогу У50120), расщепленной Ваш\У1 и Νοΐ1, и лигировали с ΒαΜΗ/ΝοΙΙ-расщепленной р1ВЕ8-йпк с получением р1ВЕ8-йпк-хео. ОВР репортера б2ЕСЕР вводили в р1ВЕ8-йпк-хео амплификацией рб2ЕСЕР (С1оп1есй 6010-1) с использованием праймеров 0АТС6ААТТСТС6С6ААТ66Т6А6САА6СА6АТССТ6АА0 (8ЕО ΙΌ №: 73) и А06С6ААТТСАСС66Т6ТТТАААСТТАСАСССАСТС6Т6СА66СТ6СССА60 (8ЕО ΙΌ №: 74) и вставляли ЕсоВБрасщепленную кассету б2ЕСЕР в сайт ΕсοВI в плазмиде рIВΕ8-йηк-ζеο. Это давало конструкцию А, СМУ-б2ЕСЕР-[РЕ8-2ео (СМУ контроль).

8ТАВ67 клонировали слева от промотора СМУ в сайт Азе1 (примерно 15 н.т., остающихся между 8ТАВ67 и промотором). Это давало конструкцию В, 8ΤАВ67-СМУ-б2Ε6ЕР-IВΕ8-Ζеο (СМУ-8ТАВ67).

8ТАВ67 также тестировали в условиях кассеты, которая также содержит 8ТАВ7 (8ЕЦ ΙΌ №: Ι)₁, клонированную непосредственно в 5'-сайты 8ай и ХЬа1 и З'-сайты ВдШ и Раб для фланкирования полной кассеты со 8ТАВ7. Это была конструкция С (СМУ-8ТАВ67 7/7).

Пример 2. 8ТАВ67 повышает уровень экспрессии с промоторов СМУ, ЕГ1ос и ИВ6 в стабильно трансфицированных клетках β6 СНО.

Авторы тестировали, насколько присутствие 8ТАВ67, смежной с промоторами СМУ, ЕГ1а и ИВ6, оказывает влияние на уровень экспрессии данных промоторов в клетках СНО. Для данной цели использовали конструкции А и В (фиг. 1), описанные в примере 1, модифицированные для соответствующих промоторов:

1) СМУ-б2ЕСЕР-йе5^ео (СМУ контроль),

2) 8ТАВ67-СМУ-б2Е6ЕР-1гез-2ео (СМУ-8ТАВ67),

3) ЕЕЕ/.-б2ЕСЕР-йе5^ео (ЕЕ1а контроль),

4) 8ТАВ67-ЕЕ110С-б2ЕОЕР-пе5-2ео (ЕЕ110С-8ТАВ67),

5) иВ6-б2Е6ЕР-1ге5-2ео (ИВ6 контроль),

6) 8ТАВ67-иВ6-б2ЕОГР-1ге5-2ео (ИВ6-8ТАВ67).

Материалы и методы.

Промоторы ИВ6 и ЕЕ1а заменяли на промотор СМУ в плазмидах, представленных на фиг. 1. Промотор ИВ6 клонировали следующим образом. «Лишний» фрагмент ДНК размером 0,37 т.п.н. из плазмиды рб2Е0ЕР амплифицировали ПЦР, как описано в примере 1, с использованием праймеров с последовательностями 8ЕО ΙΌ №: 69 и 70. Полученный «лишний» фрагмент ДНК клонировали в сайт ВдШ плазмиды риВ6/У5-Н1з [Шуйгодеп У250-20] с получением риВ6-51иГ. Из риВ6-йиГ фрагмент Азс1-8ас1 клонировали в СМУ-б2Ε6ЕР-IВΕ8-Ζеο, из которой вырезали промотор СМУ.

Промотор ЕЕ1а амплифицировали ПЦР с рЕЕЕ/./У5-НБ [Шуйгодеп У920-20] в качестве матрицы с использованием праймеров 0АТС66С6С6ССАТТТАААТСС6АААА6Т6ССАССТ6АС0 (8ЕО ΙΌ №: 79) и А06С666АСССССТСАС6АСАССТ6АААТ66АА0 (8ЕО ΙΌ №: 80). Фрагмент ПЦР клонировали в сайты Азс1 и РриМI СМУ-б2ЕОЕР-1ге5-2ео, из которой удаляли промотор СМУ.

Линию клеток яичника китайского хомячка СНО-К1 (АТСС ССЬ-61) культивировали в среде НАМ8-Е12 + 10% фетальной бычьей сыворотки, содержащей 2 мМ глютамина, 100 Е/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°С/5% СО₂. Клетки трансфицировали плазмидами с использованием реагента 8ирегЕес1 (Ц^ОЕЩ, как описано производителем. Кратко, клетки высевали в сосуды для культивирования и культивировали в течение ночи до 70-90% слияния. Реагент 8ирегЕес1 объединяли с плазмидной ДНК в соотношении 6 мкл на мкг (например, на чашку Петри диаметром 10 см 20 мкг ДНК и 120 мкл 8ирегЕес1) и добавляли к клеткам. После инкубации в течение ночи смесь для трансфекции заменяли на новую порцию среды и трансфицированные клетки инкубировали дополнительно. После культивирования в течение ночи клетки обрабатывали трипсином и высевали в новые сосуды для культивирования с новой порцией среды. После инкубации еще в течение ночи добавляли зеоцин в концентрации 50 мкг/мл и клетки дополнительно культивировали. Еще через 3 суток среду заменяли на новую порцию среды, содержащую зеоцин (100 мкг/мл) и культивировали дополнительно. Когда отдельные колонии становились видимыми (примерно через 10 суток после трансфекции) среду удаляли и заменяли новой порцией среды без зеоцина. Отдельные клоны выделяли и переносили в 24-луночные планшеты в среду без зеоциона. Через 1 сутки после выделения колоний в среду добавляли зеоцин. Экспрессию генарепортера б2ЕОЕР оценивали примерно через 3 недели после трансфекции.

Уровень экспрессии б2ЕОЕР в колониях определяли через 2-недельные периоды времени. Через

- 13 011747 первые 2 недели после трансфекции, когда проводили первое определение Й2ЕСЕР, колонии культивировали в среде без зеоцина или других антибиотиков. Таким образом, продолжали в оставшееся время опыта.

Результаты.

На фиг. 2 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержит 8ТАВ67, клонированную слева от промотора СМУ, приводила к появлению ряда колоний, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка Й2ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без 8ТАВ67, СМУ контроль. Среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных СМУ контрольной плазмидой, составляло 34 при определении через 25 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в данных 10 колониях снижалось до 13, указывая на то, что экспрессия не является стабильной в течение времени. Для сравнения среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой 8ТЛВ67-СМУ, равнялось 42 при определении через 25 суток и 32 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, через 60 суток после трансфекции конструкция 8ТЛВ67, содержащая СМУ, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором СМУ, в 2,5 раза выше в стабильно трансфицированных клонах. Важно, что через 25 суток после трансфекции, после первого определения, давление селекции устраняли культивированием колоний в среде без зеоцина. Следовательно, колонии, содержащие конструкцию 8ТЛР67. являются более стабильными в течение времени при отсутствии давления селекции, по сравнению с колониями, которые не включают конструкцию 8ТЛР67.

На фиг. 3 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержит 8ТЛВ67, клонированную слева от ЕЕ1СС-промотора, приводила к появлению ряда колоний СНО, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка Й2ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без 8ТЛВ67, ЕЕ1а контроль. Среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных контрольной плазмидой ЕЕ1а, составляло 31 при определении через 25 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в данных 10 колониях составляло 26. Для сравнения среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой ЕЕ1а-8ТЛВ67, равнялось 60 при определении через 25 суток и 76 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, в обоих случаях через 25 и 60 суток после трансфекции конструкция 8ТЛВ67, содержащая ЕЕ1а, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором ЕЕ1а, в 2,9 раза выше в стабильно трансфицированных клонах.

На фиг. 4 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержит 8ТЛВ67, клонированную слева от иВ6-промотора, приводила к появлению ряда колоний СНО, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка Й2ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без 8ТЛВ67, ИВ6 контроль. Среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных ИВ6 контрольной плазмидой, составляло 51 при определении через 25 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в данных 10 колониях составляло 29, указывая на то, что экспрессия не была стабильной в течение времени. Для сравнения среднее значение сигнала Й2ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой ИВ6-8ТАК67, равнялось 218 при определении через 25 суток и 224 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, через 25 суток после трансфекции конструкция 8ТЛВ67, содержащая ИВ6, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором ИВ6, в 4,3 раза выше в стабильно трансфицированных клонах. Через 60 суток данный коэффициент составлял 7,7 за счет нестабильности экспрессии в контрольных колониях и стабильности экспрессии в колониях ИВ6-8ТАК67. Важно, что через 25 суток после трансфекции, после первого определения, давление селекции устраняли культивированием колоний в среде без зеоцина. Следовательно, колонии, содержащие конструкцию 8ТЛВ67, являются более стабильными в течение времени при отсутствии давления селекции, по сравнению с колониями, которые не включают конструкцию 8ТЛВ67.

В заключение, 8ТЛР67 повышает экспрессию с трех различных несвязанных промоторов.

Пример 3. 8ТЛР67 повышает уровень экспрессии с промоторов СМУ, ЕГ1а и ИВ6 в стабильно трансфицированных клетках РЕР.С6.

Авторы тестировали, насколько присутствие 8ТАВ67, смежной с промоторами СМУ, ЕГ1а и ИВ6, оказывает влияние на уровень экспрессии данных промоторов в другом типе клеток, чем СНО, а именно клетках РЕР.С6. Использовали те же конструкции, что в примере 1.

Материалы и методы.

Трансфекция, культивирование и анализ клеток РЕР.С6.

Клетки РЕР.С’в® культивировали в среде ИМЕМ + пиридоксин + 9% фетальной бычьей сыворотки (без инактивации тепловой обработкой), 8,9 мМ МдС1₂, 100 Е/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина при 37°С/СО₂. Клетки трансфицировали плазмидами с использованием реагента Ь1роГес1атше 2000 (1иуйгодеи), как описано производителем. Кратко, клетки высевали в 6-луночные планшеты и культивировали в течение ночи до 70-90% слияния. Реагент ЫроГес1атше объединяли с плазмидной ДНК при соотношении 15 мкл на 3 мкг (например, на чашку Петри диаметром 10 см 20 мкг ДНК и 120 мкл Ь1

- 14 011747 роГесЕшипе) и добавляли через 30 мин инкубации при 25°С к клеткам. После инкубации в течение ночи смесь для трансфекции заменяли новой порцией среды и трансфицированные клетки инкубировали дополнительно. После культивирования в течение ночи клетки обрабатывали трипсином и высевали (в разведениях 1:15, 1:30, 1:60, 1:120) на новые чашки Петри (90 мм) с новой порцией среды с добавлением зеоцина в концентрации 100 мкг/мл и клетки дополнительно культивировали. Когда отдельные колонии становились видимыми, отдельные клоны выделяли соскабливанием и переносили в 24-луночные планшеты в среду с зеоцином. Когда рост достигал ~70% слияния, то клетки переносили в 6-луночные планшеты. Стабильные колонии культивировали в течение 2 недель в 6-луночных планшетах перед определением сигнала 62ЕСЕР на флоуцитометре ХЬ-МСЬ Весктап СоиИет. Среднее значение сигнала принимали в качестве показателя уровня экспрессии 62ЕСЕР. Второй раз колонии оценивали через 2 недели. Затем колонии дополнительно культивировали в отсутствие антибиотика.

Результаты.

На фиг. 5 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержала 8ТАК.67, клонированную слева от промотора СМУ, приводила к появлению ряда колоний РЕК..С6, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка 62ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без БТЛР67. СМУ контроль. Среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных контрольной плазмидой СМУ, составляло 37 при определении через 30 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала 62ЕСЕР в данных 10 колониях снижалось до 14, указывая на то, что экспрессия не была стабильной в течение времени. Для сравнения среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой 8ТАК.67-СМУ, равнялось 101 при определении через 30 суток и 45 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, через 60 суток после трансфекции конструкция 8ТАК.67, содержащая СМУ, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором СМУ, в 3,2 раза выше в стабильно трансфицированных клонах.

На фиг. 6 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержала 8ТАК.67, клонированную слева от промотора ЕЕ1ОС, приводила к появлению ряда колоний РЕВ..С6, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка 62ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без 8ТАЕ67, ЕЕ1а контроль. Среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных контрольной плазмидой ЕЕ1а, составляло 5 при определении через 30 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала 62ЕСЕР в данных 10 колониях равнялось 6. Для сравнения среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой ЕЕ1С!-8ТАЕ67, равнялось 25 при определении через 30 суток и 20 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, в обоих случаях через 30 и 60 суток после трансфекции конструкция 8ТАЕ67, содержащая ЕЕ1а, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором ЕЕ1а, в 4 раза выше в стабильно трансфицированных клонах.

На фиг. 7 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержала 8ТАК.67, клонированную слева от промотора ИВ6, приводила к появлению ряда колоний РЕР.С6, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка 62ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без 8ТАВ.67, ИВ6 контроль. Среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных ИВ6 контрольной плазмидой, составляло 4 при определении через 30 суток после трансфекции. Через 60 суток после трансфекции среднее значение сигнала 62 ЕС ЕР в данных 10 колониях равнялось 2. Для сравнения среднее значение сигнала 62ЕСЕР в 10 колониях, трансфицированных плазмидой ИВ6-8ТАВ.67, равнялось 27 при определении через 30 суток и 18 при определении через 60 суток после трансфекции. Следовательно, в обоих случаях через 30 и 60 суток после трансфекции конструкция 8ТАК.67, содержащая ИВ6, обеспечивала уровень экспрессии репортерного белка, регулируемой промотором ИВ6, в 7-9 раза выше в стабильно трансфицированных клонах.

Следовательно, помещение 8ТАР67 слева от промотора приводит к достоверно более высоким уровням экспрессии белка, по сравнению с конструкциями без 8ТАР67 также и в клетках РЕР.С6. Следовательно, 8ТАР67 функционирует в различных несвязанных типах клеток.

Пример 4. Новая конфигурация 8ТАР67 в комбинации с другими антирепрессорными элементами для усиления промотора 8У40 в клетках СНО.

Авторы тестировали, насколько присутствие 8ТАВ.67, смежной с промотором 8У40, оказывает влияние на уровень экспрессии данного промотора, одной или в комбинации с другим антирепрессорным элементом, в данном примере 8ТАВ.7. Для этой цели используемыми конструкциями (см. фиг. 8) являются:

1) 8У40-62ЕСЕР-1ге5-2ео (8У40 контроль),

2) 8ТАВ67-8У40-62ЕСЕР-1ге5-2ео (8У40-8ТАЕ67),

3) 8ТАВ7-8У40-62ЕСЕР-1ге5-2ео-8ТАВ7 (8У40-8ТАЕ7/7),

4) 8ТАВ7-8ТАВ67-8У40-62ЕСЕР-1ге5-2ео-8ТАВ7 (8У40-8ТАЕ67 7/7).

Материалы и методы.

Промотор 8У40 амплифицировали ПЦР с р1РЕ8 в качестве матрицы с использованием праймеров ТТССТТССССССССССССАССАССАТССССТСАААТААССТСТСАААСАСС (8ЕО ГО \о: 81) и

- 15 011747

ТТССТТСССАССТСААССТТТТТССААААСССТАССССТССААААААСССТССТС (8ЕС) ΙΌ Νο: 82). Фрагмент ПЦР клонировали в сайты А§с1 и 8аб плазмиды СМУ-б2Е6ЕР-1КЕ8-2ео, из которой удаляли промотор СМУ.

Клетки СНО трансфицировали, выделяли колонии, размножали и анализировали, как описано в примере 2.

Результаты.

На фиг. 8 показано, что трансфекция конструкцией, которая содержала 8ТАК67, клонированную слева от промотора 8У40 (8У40-8ТАК67) или 8ТАК7, клонированную для фланкирования полной конструкции (8У40-8ТАК 7/7), не приводила к появлению колоний СНО, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни белка б2ЕСЕР, по сравнению с «пустым» контролем без антирепрессорных элементов (8У40 контроль). Среднее значение сигнала б2ЕСЕР в 18 колониях, трансфицированных контрольной плазмидой 8У40, составляло 86 при определении через 40 суток после трансфекции. Для сравнения среднее значение сигнала б2ЕСЕР в 18 колониях, трансфицированных плазмидой 8У40-8ТАК67, равнялось 82 при определении через 40 суток и среднее значение сигнала б2ЕСЕР в 18 колониях, трансфицированных плазмидой 8У40-8ТАК 7/7, равнялось 91 при определении через 40 суток. Следовательно, не наблюдали достоверного эффекта данных антирепрессорных элементов в отношении промотора 8У40 в клетках СНО.

Оказалось, что уровень экспрессии с промотора 8У40 в данных клетках уже было довольно высоким, и даже более высоким, по сравнению с наблюдаемым с промотором СМУ, который считается очень сильным промотором. Данная высокая фоновая экспрессия при отсутствии антирепрессорного элемента с использованием промотора 8У40 в клетках СНО может объяснить тот факт, что отсутствовал достоверный эффект одной 8ТАР67 или 8ТАК7, фланкирующей трансген.

Однако среднее значение сигнала б2ЕСЕР в 18 колониях, трансфицированных плазмидой 8У408ТАР67 7/7, составляло 209 при оценке колоний через 40 суток, что соответствует коэффициенту в 2,4 раза выше, по сравнению со средним значением для 18 контрольных колоний (86). Следовательно, когда элемент 8ТАК67 использовали в комбинации с другим антирепрессорным элементом, то это приводило к появлению ряда стабильно трансфицированных колоний СНО, которые показывали достоверно более высокие уровни экспрессии б2Е6ЕР.

Следовательно, в данной новой конфигурации (5' - последовательность 8ТАР А - последовательность 8ТАК С промотор - нуклеиновая кислота, кодирующая интересующий белок - последовательность 8ТАК В - 3', где в данном примере последовательности 8ТАК А и В представляют последовательность 8ТАК 7, и последовательность С является 8ТАК67), оказалось, что элементы 8ТАК функционируют даже лучше, чем раскрытые к настоящему времени конфигурации.

Авторы проводили опыты, в которых фланкирующие элементы 8ТАК7 заменяли на фланкирующие элементы 8ТАР6 (8ЕЦ ΙΌ Νο: 6) или на фланкирующие элементы 8ТАР4 (8ЕЦ ΙΌ Νο: 4) в комбинации со 8ТАК67, расположенной слева от промотора 8У40 (соответственно 8У40-8ТАК67 6/6 и 8У40-8ТАК.67 4/4 при использовании той же номенклатуры, представленной выше), и также наблюдали повышенную экспрессию с данными комбинациями. Это доказывает, что фланкирующие элементы 8ТАК7 можно заменять на другие последовательности 8ТАК, и при этом по-прежнему наблюдают улучшение новых экспрессирующих кассет с последовательностями 8ТАК.

Пример 5. Комбинация 8ТАК67 и 8ТАР7 повышает уровни регулируемой ИВ6 экспрессии антител в стабильно трансфицированных клетках СНО.

В примере 4 авторы показали, что комбинация 8ТАК67 и 8ТАК7 повышала уровни экспрессии белка б2ЕСЕР в клетках СНО. В данном случае авторы исследовали, насколько комбинацию 8ТАР67 и 8ТАК7 можно использовать для получения антител. Авторы выбрали антитела против молекулы ЕрСАМ (НиН е! а1., 1999) в качестве тестируемого белка и использовали промотор ИВ6.

Материалы и методы.

Плазмиды.

кДНК тяжелой цепи (НС-ЕрСАМ) клонировали в конструкцию, включающую промотор ИВ6. НСЕрСАМ сочетали с геном резистентности к зеоцину с помощью последовательности 1РЕ8. кДНК легкой цепи (ЬС-ЕрСАМ) также клонировали в конструкцию, включающую промотор ИВ6. ЬС-ЕрСАМ сочетали с геном резистентности к пуромицину с помощью последовательности 1РЕ8. Вместе данные две плазмиды представляли контроль ИВ6 (НС+ЬС) (фиг. 9).

Для анализа эффектов 8ТАР67 и 8ТАК.7, 8ТАР67 клонировали в обе конструкции НС+ЬС слева от промотора ИВ6. 8ТАК7 клонировали с фланкированием полной кассеты на обоих 5'- и 3'-концах (фиг. 9). Данные две плазмиды представляли 8ТАК7-8ТАК67-иВ6 (НС+ЬС) 8ТАР7.

Трансфекция и культивирование клеток СНО.

Линию клеток яичника китайского хомячка СНО-К1 (АТТС ССЬ-61) трансфицировали и культивировали, как описано в примере 2, с использованием зеоцина (100 мкг/мл) и пуромицина (2,5 мкг/мл) для селекции. Через 1 сутки после трансфекции в культуральную среду добавляли зеоцин. Когда первые колонии становились видимыми (примерно через 7 суток после добавления зеоцина) культуральную среду удаляли и заменяли на культуральную среду, содержащую пуромицин. Примерно через 7 суток колонии

- 16 011747 выделяли и переносили в 24-луночные планшеты в культуральную среду только с зеомицином.

Результаты.

На фиг. 9 показано, что трансфекция конструкциями антител, которые содержат 8ТАК67, клонированную слева от промотора ИВ6, и два элемента 8ТАК67, клонированные для фланкирования полных кассет, приводила к появлению ряда колоний СНО, которые экспрессируют достоверно более высокие уровни антитела ЕрСАМ (по данным ЕЫ8А с использованием античеловеческого ΙβΟ антитела), по сравнению с «пустым» контролем без 8ТАК.67 и 8ТАК.7. ИВ6 (НС+ЬС) контроль. Среднее значение продукции ЕрСАМ в 18 колониях, трансфицированных контрольной плазмидой ИВ6 (НС+ЬС), составляло 2,7 пкг/клетку/сутки при определении через 25 суток после трансфекции. Селективные агенты, зеоцин и пуромицин, удаляли через 25 суток. Через 45 суток после трансфекции среднее значение продукции ЕрСАМ в данных 18 колониях равнялось 2,7 пкг/клетку/сутки. Для сравнения среднее значение сигнала продукции ЕрСАМ в 18 колониях, трансфицированных плазмидой 8ТАК.7-8ТАК.67-ЬВ6 (НС+ЬС8ТАК.7), равнялось 6,7 при определении через 25 суток и 7,7 пкг/клетку/сутки при определении через 45 суток после трансфекции. Следовательно, в обоих случаях через 30 и 45 суток после трансфекции конструкция 8ТАВ67/8ТАЕ7, содержащая ИВ6, обеспечивала уровень экспрессии ЕрСАМ, регулируемой промотором ИВ6, в 2,5-2,9 раза выше в стабильно трансфицированных клонах СНО.

Следовательно, помещение 8ТАК.67 слева от промотора и двух элементов 8ТАК7 с фланкированием кассет приводило к достоверно более высокому уровню экспрессии антитела ЕрСАМ в клетках СНО, по сравнению с конструкциями без 8ТАК.67/8ТАК.7.

Пример 6. 8ТАК67 не является блокатором энхансера, в то время как 8ТАК6 и 8ТАК7 - являются.

Все известные к настоящему времени элементы 8ТАК, которые были тестированы на данное свойство, включая 8ТАВ6 и 8ТАЕ7, являются блокаторами энхансеров (АО 03/004704, К^акк с1 а1., 2003). Блокирующую энхансер активность тестировали, поместив элемент 8ТАК между сильным энхансером и промотором. В данном случае авторы тестировали, насколько также 8ТАК.67 является блокатором энхансера.

Материалы и методы.

Ген 62ЕСЕР амплифицировали ПЦР с использованием праймеров ТТ66ТТ66ТСАТ6ААТ66Т6А6САА666С6А66А6СТ6ТТС (8ЕС) ΙΌ Νο: 75) и АТТСТСТА6АСТАСАСАТТ6АТССТА6СА6АА6САС (8 ЕС) ΙΌ Νο: 76) и клонировали в плазмиду р6Ь3-промотор (Рготеда) с использованием сайтов рестрикции Ναοί и ХЬа1 для замены гена люциферазы с получением плазмиды рСЬ3-промотор-СЕР. Линкер, полученный отжигом олигонуклеотидов С6АТАТСТТ66А6АТСТАСТА6Т66С6С6ССТТ666СТА6СТ (8ЕС) ΙΌ Νο: 77) и 6АТСА6СТА6СССАА66С6С6ССАСТА6ТА6АТСТССАА6АТАТС6А6СТ (8 ЕС) ΙΌ Νο: 78), клонировали в сайты 8аб и ВдШ для получения сайтов множественного клонирования. Первоначальный сайт ВдШ разрушали при лигировании линкера с получением нового уникального сайта ВдШ внутри ДНКлинкера. 8У40-энхансер вырезали из плазмиды р6Ь3-Ьаяс (Рготеда) с использованием ВкаЫ и ВатШ и клонировали в рСЬ3-линкер-промотор-СЕР с использованием сайтов ЕотРУ и ВдШ с получением плазмиды р6Ь3-энхансер-промотор-6ЕР. Элемент 8ТАЕ40 (8ЕЦ ΙΌ Νο: 40) помещали слева от 8У40энхансера с использованием сайтов Крп1 и 8аб для предупреждения воздействия энхансера на последовательности, находящиеся слева. Наконец, антирепрессорные элементы 8ТАК6, 8ТАК7 и 8ТАК67 помещали между 8У40-энхансером и минимальным 8У40-промотором с использованием сайтов рестрикции 8ре1 и Акс1.

Трансфекция и культивирование клеток СНО.

Линию клеток яичника китайского хомячка СНО-К1 (АТСС ССЬ-61) трансфицировали, как описано в примере 2. Через 1 сутки после трансфекции определяли уровни 62ЕСЕР на флоуцитометре Еркк ХЬ (Весктап СонИе!·).

Результаты.

На фиг. 10 показано, что 8ТАК67 не является блокатором энхансера, в то время как 8ТАК.6 и 8ТАК.7 действуют в качестве блокаторов энхансера в том же тесте. 8ТАК.6, 8ТАК7 и 8ТАК67 клонировали между 8У40-энхансером и минимальным 8У40-промотором слева от гена 62ЕСЕР. В том случае, когда не клонировали элемента 8ТАВ между энхансером и промотором, то имела место сильная активация транскрипции (произвольно оцененная как 100%). Когда 8ТАК6 или 8ТАК7 помещали между энхансером и промотором, то транскрипция снижалась до фонового уровня, указывая на то, что 8ТАК6 и 8ТАК.7 являются сильными блокаторами энхансеров. В противоположность, когда клонировали 8ТАК.67 между энхансером и промотором, то относительный уровень транскрипции составлял по-прежнему 80% от контроля, указывая на то, что 8ТАК67 не является эффективным блокатором энхансера в противоположность 8ТАК6 и 8ТАК7, а также другим антирепрессорным элементам, описанным ранее (АО 03/004704, К^акк е! а1., 2003).

Пример 7. 8ТАК67 повышает уровень экспрессии антитела, регулируемой ИВ6 и СМУ, в стабильно трансфицированных клетках СНО.

В примере 5 авторы показали, что комбинация 8ТАК.67 и 8ТАК.7 повышала уровень экспрессии антитела ЕрСАМ в клетках СНО, в условиях двух различных плазмид, которые содержали тяжелую и лег

- 17 011747 кую цепи. В данном примере авторы тестировали, насколько 8ТАК67 можно использовать для продукции антитела ЕрСАМ, когда обе, тяжелую и легкую, цепи помещают в одну плазмиду. Авторы использовали одновременную селекцию для каждого селектируемого маркера.

Материалы и методы.

Плазмиды.

кДНК тяжелой цепи (НС-ЕрСАМ) находилась под контролем промотора ИВ6, и ее сочетали с геном устойчивости к зеоцину с помощью последовательности 1КЕ8. кДНК легкой цепи (ЬС-ЕрСАМ) находилась под контролем промотора СМV, и ее сочетали с геном устойчивости к пуромицину с помощью последовательности 1КЕ8. По существу, эти конструкции представляют таковые, использованные в примере 5. Данные две экспрессирующие кассеты помещали в одну плазмиду таким образом, что транскрипция двух экспрессирующих единиц шла в противоположных направлениях. В контрольной плазмиде промоторы иВ6 и СМV были разделены «лишним фрагментом» размером 500 п.н. (ЕрСАМ контроль) (фиг. 10). В другой плазмиде 8ТАК.67 помещали между промоторами ИВР и СМV (ЕрСАМ 8ТАК67) (фиг. 10).

Трансфекция и культивирование клеток СНО.

Линию клеток яичника китайского хомячка СНО-ΚΙ (АТСС ССЬ-61) трансфицировали и культивировали, как описано в примере 2, с использованием зеоцина (100 мкг/мл) и пуромицина (2,5 мкг/мл) для селекции. В примере 5 использовали последовательную селекцию для обоих селективных маркеров. В противоположность в данном случае оба селективных маркера присутствовали в культуральной среде одновременно. Через 1 сутки после трансфекции зеоцин и пуромицин вносили в культуральную среду. Селективная среда присутствовала до выделения колоний (примерно через 14 суток после трансфекции). Затем колонии выделяли и переносили в 24-луночные планшеты, клетки культивировали в присутствии зеоцина и пуромицина.

Результаты.

На фиг. 11 показано, что трансфекция конструкцией антитела, которая содержит 8ТАК67, клонированную между промоторами υΒβ и СМV, приводила к появлению ряда колоний СНО, которые экспрессируют антитело ЕрСАМ (по данным ЕЬ18А с использованием человеческого 1дС антитела). Среднее значение продукции ЕрСАМ в 19 колониях, трансфицированных плазмидой ЕрСАМ 8ТАК67, составляло 9,8 пкг/клетку/сутки при определении через 25 суток после трансфекции.

В противоположность с удивлением было установлено, что колонии не выдерживали трансфекцию контрольной плазмидой ЕрСАМ. Когда проводили селекцию с одним зеоцином или пуромицином, то контрольные колонии ЕрСАМ выживали. Однако когда давление селекции увеличивали при помещении давления селекции на обе тяжелую и легкую цепи, то в данных условиях выживали только колонии, которые содержали 8ТАК67 в трансфицированной плазмиде.

Результаты также показывают, что включение 8ТАК67 оказывает положительное действие на два промотора, промотора υΒ6 и СМV, которые помещают слева и справа от одного элемента 8ТАК67. Это указывает на то, что 8ТАК67 может функционировать в двух направлениях.

Различие между контрольной плазмидой ЕрСАМ и плазмидой ЕрСАМ 8ТАК67 является чернымбелым в том плане, что только трансфекция ЕрСАМ 8ТАК.67 приводит к появлению колоний при высоком давлении селекции. Это открывает возможность для применения данной плазмидной конфигурации для идентификации области в 8ТАК67, которая является ответственной за опосредование данного эффекта. Более мелкие, перекрывающиеся участки 8ТАК67 помещают между промоторами υΒ6 и СМV, регулирующими молекулу ЕрСАМ. Когда участок 8ТАК67 является функциональным, то колонии будут выживать, когда оба, зеоцин и пуромицин, одновременно используются в качестве селективного агента. Когда участок 8ТАК67 не является функциональным, то колонии не будут выживать в аналогичных условиях селекции.

Следовательно, помещение 8ТАК67 слева от промотора приводит к достоверно более высокому уровню экспрессии антитела ЕрСАМ в клетках СНО, по сравнению с конструкциями без таких антирепрессорных элементов. Аналогичный опыт проводили с промотором 8ν40 для регуляции экспрессии тяжелой и легкой цепей анти-ЕрСАМ-антитела. В других опытах 8ТАК67 заменяли на другие последовательности 8ТАК. В дополнительных опытах поменяли ориентацию двух экспрессирующих единиц, кодирующих тяжелую и легкую цепи, таким образом, что обе находились в одном направлении. В другом опыте экспрессирующие единицы для тяжелой и легкой цепей помещают соответственно в различных молекулах нуклеиновой кислоты (как представлено в примере 5) и полученные клоны одновременно отбирают на оба селектируемых маркера. В еще одном опыте варьировал тип клетки-хозяина. Сделаны комбинации данных вариаций.

Описание фигур

Фиг. 1. Схема изобретения.

А) Бицистронный ген, содержащий (в направлении от 5' к 3') трансген (кодирующий, например, ген 62ЕСБР), 1КЕ8 и селектируемый маркер (зео, придающий резистентность к зеоцину) под контролем промотора СМV. Экспрессирующая единица содержит терминатор транскрипции 8ν40 на ее 3'-конце (ΐ). Конструкция названа СМV-ά2ЕСΕР-^^е5-Ζео (ί,’Μν контроль).

- 18 011747

B) Конструкция, как на А, но последовательность БТАК67 клонирована слева от промотора СМУ. Конструкция названа БТАК67-СМУ-й2Е6РР-1тек-2ео (СМУ-БТАК67).

C) Конструкция, как на В, но слева и справа элементы БТАК.67 клонированы для фланкирования полной конструкции. Конструкция названа БТАК7-БТАК67-СМУ-й2Е6РР-1тек-2ео-БТАК7 (СМУБТАК67 7/7).

Фиг. 2. БТАК.67 повышает регулируемую СМУ экспрессию й2Е6РР в клетках СНО. Построен график зависимости среднего значения сигнала й2Е6РР для 10 независимых стабильных колоний для указанных конструкций в клетках СНО. А) СМУ контроль; В) БТАК67-СМУ. Х(10): средние значения уровня экспрессии й2Е6РР для 10 колоний. Подробности см. в примере 2.

Фиг. 3. БТАК67 повышает регулируемую ЕР1а экспрессию й2Е6РР в клетках СНО. То же самое, что на фиг. 2, но с промотором ЕР1а. А) ЕР1а контроль; В) БТАК67-ЕР1а.

Фиг. 4. БТАК67 повышает регулируемую ИВ6 экспрессию й2Е6РР в клетках СНО. То же самое, что на фиг. 2 и 3, но с промотором ИВ6. А) ИВ6 контроль; В) БТАК67-ИВ6.

Фиг. 5. БТАК67 повышает регулируемую СМУ экспрессию й2Е6РР в клетках РЕК.С6. То же самое, что на фиг. 2, но в клетках РЕК.С6. А) СМУ контроль; В) БТАК67-СМУ.

Фиг. 6. БТАК67 повышает регулируемую ЕР1а экспрессию й2Е6РР в клетках РЕК.С6. То же самое, что на фиг. 3, но в клетках РЕК.С6. А) ЕР1а контроль; В) БТАК67-ЕР1а.

Фиг. 7. БТАК67 повышает регулируемую ИВ6 экспрессию й2Е6РР в клетках РЕК.С’в. То же самое, что на фиг. 4, но в клетках РЕК.С6. А) υΚβ контроль; В) БТАК67-ИВ6.

Фиг. 8. БТАК67 повышает регулируемую БУ40 экспрессию й2Е6РР в клетках СНО-К1 в комбинации с другим элементом БТАК. То же самое, что на фиг. 2, но с использованием промотора БУ40 в клетках СНО и указанных конструкций. Построен график зависимости среднего значения сигнала й2Е6РР для 18-20 независимых стабильных колоний через 60 суток после трансфекции. А) БУ40 контроль, БУ40БТАК67, БУ40-БТАК7/7; В) БУ40 контроль и БУ40-БТАК67 7/7. Подробности см. в примере 4.

Фиг. 9. БТАК67 повышает регулируемую ИВ6 экспрессию антитела ЕрСАМ в клетках СНО-К1. Подробности см. в примере 5. А) Конструкции без элементов БТАК; В) конструкции со БТАК67 слева от промотора и фланкирующими элементами БТАК7. Концентрация анти-ЕрСАМ-антитела представлена в виде пкг/клетку/сутки. Х(18): среднее значение уровня продукции для 18 колоний.

Фиг. 10. БТАК67 не является блокатором энхансера, в то время как БТАК6 и БТАК7 являются. Подробности см. в примере 6.

Фиг. 11. БТАК67 повышает регулируемую ИВ6 и СМУ экспрессию антитела в стабильно трансфицированных клетках СНО. Подробности см. в примере 7. А) Одна молекула ДНК, содержащая тяжелую цепь (НС) и легкую цепь (ЕС) анти-ЕрСАМ-антитела, каждая за промотором, и каждая связанная с различным селектируемым маркерным геном (использовали одновременную селекцию на оба маркера): конструкция без элементов БТАК. Колонии не обнаружены. В) Та же конструкция со БТАК67 между двумя промоторами. Концентрация анти-ЕрСАМ-антитела в пкг/клетку/сутки. Х(19): среднее значение уровня продукции для 19 колоний.

Источники литературы

ВокРаП, М., VеЬе^, Р., 1аРп, 6., ПотксР-Нак1ет, К., Р1ескепк(ет, В., апй БсРаГГпег, ν. (1985) А уету к(гопд епРапсег 1к 1оса(ей иркРеат оГ ап 1ттей1а(е еаг1у депе оГ Ритап су(отеда1оу1гик Се11 41, 521-530.

СРипд кН., νΗίΝΒν М., апй Ре1кепГе1й 6. (1993) А 5' е1етеп( оГ (Ре сРккеп Ье(а-д1оЬт йотат кегуек ак ап тки1а(от ш Ритап егу(Рто1й се11к апй рго1ес1к адатк( рок1Роп еГГес( ίπ ЭгокорРИа. Се11 74: 505-514.

СРипд кН., Ве11 А.С., Ре1кепГе1й 6. (1997). СРагасЮпхаРоп оГ (Ре сЫскеп Ье(а-д1оЬт тки1а(от. Ргос №аР Асай Бс1 ИБА 94: 575-580.

Иак, 6.С., №уодГ Б.К., апй Ба1хтап, №.Р. (1985) БУ40 ргото(егк апй (Реи геди1аРоп Ргод №ис1ею Ас1й Кек Мо1 Бю1 32, 217-236.

6111 И.К., Бту(Р Б.Е., боййагй С.А., РРРд1е 1.А., Шддтк С.Р., Со11ейде ν.Η., апй Нуйе Б.С. (2001) 1псгеакей регкМепсе оГ 1ипд депе ехргеккюп иктд р1акт1йк соп(шшпд (Ре иЫдшРп С ог е1опдаРоп ГасЮг 1а ргото1ег. 6епе ТРегару 8: 1539-1546.

боккеп М., апй Вщагй Н. (1992) Т1дР1 соп(го1 оГ депе ехргеккюп т таттаРап се11к Ьу (еРасусРпетекропыуе ртото(етк. Ргос №111 Асай Бс1 ИБА 89: 5547-5551.

бгаРат Р.О., БтПеу Р, Кикке11 ν. апй №аип К. (1977). СРагас(ег1к(1ск оГ а Ритап се11 Рпе (гапкГогтей Ьу Э№А Ггот Ритап айепоуиик 1уре 5. Г 6еп. У1го1. 36, 59-72.

Ни1к 6.А., Неупеп 1.А.Р.М., Сиото М.Е., КошпдкЬетдег РС., V^едтаπ Ь., Вое1 Е., уап йег УииткЕйе УРек А-К, Ьоукоп Б.А.Р, Не1ГРсР ν., уап Вегде Непедои^еп 6.Р., уап Меует М., йе КгшГ Р, ЬодГепЬетд Т. (1999). А тесотЬтапр Ги11у Ритап топос1опа1 апРЬойу \\'РР апШитог асруру сопк1гис1ей Ггот рРадей1кр1ауей апРЬойу Ггадтеп(к. №11 Вю(есРпо1. 17, 27 6-281.

1опек Ό., Кгоок Ν., Апета К., Уап МопКой В., Уооук А., Уап Эег Ктаа(к Б., Уап Эег Не1т Е., БтРк Б., БсРоШеп Р, Втои^ег К., ЬадеттеегГ Р., Уап Вегке1 Р., Орк(е1(еп Ό.-Ρ, ЬодГепЬетд Т., Вой! А. (2003) Н1дР1еуе1 ехргеккюп оГ тесотЫпап! 1д6 т(Ре Ритап се11 Рпе РЕК.С6. Вю(есРпо1. Ргод. 19: 163-168.

- 19 011747

КаиГтап, ВЛ. (2000) ОуеМете оГ уес(ог бек1дп Гог таттаНап депе ехргеккюп Мо1 Вю!есНпо1 16, 151160.

КаиГтап, В.Е. апб 8Нагр, Р.А. (1982) Сопк!гисйоп оГ а тоби1аг бЛубгоГо1а!е гебис!аке с^NΑ депе: апа1ук1к оГ к1дпа1к ий^еб Гог еГйаеп! ехргекк1оп Мо1 Се11 Вю1 2, 1304-1319.

Ке11ит В., апб 8сНеб1 Р. (1991) А рок1йоп-еГГес! аккау Гог Ьоипбапек оГ Ыдйег огбег сНготокота1 ботатк. Се11 64: 941-950.

Ктеакк Т.Н., Вате!! Р., Нетпка ^., 81егкта Т., 8етеа11 В.С., 8а!уп Ό.Ρ., Вгопк ЕЕ., уап В1ок1апб В., Ктеактап Р., КгискеЬегд А.Ь., Ке1бег А., О11е А.Р. (2003) 1бепййсайоп оГ апй-гергекког е1етепГк Ла! сопГег 1пд11 апб к!аЬ1е рго!ет ргобисйоп т таттайап се11к. №! Вю!есНпо1 21, 553-558. Егга!ит ш: №! В1о!есНпо1 21, 822 (2003).

РЫ-Уап Ь., Уоп Кге1к ЕР., Ок!ег!ад ^., апб 8!га!1тд \У.Н. (1990) ТНе сЫскеп 1укοζуте 5' тайгх а!!асНтеп! гедюп тсгеакек !гапкспр!юп Ггот а Не!его1одоик ргото!ег т Йе!его1одоик се11к апб батрепк рок1Йоп еГГес!к оп (Не ехргеккюп оГ !гапкГес!еб депек. Мо1. Се11. Вю1. 10: 2302-2307.

^οреζ бе ОитЮ, 8., апб Ма^!^пеζ-8а1ак, Е. (1998) Рагате!егк тПиепстд !гапк1а!юпа1 еГйаепсу ш арН!коу1гик 1ВЕ8-Ьакеб Ыакйошс ехргеккюп уес!огк Сепе 217, 51-56.

Магйп, Ό.Ι., апб ^Н1!е1ате, Е. (1996) ТНе уадапек оГ уапедайпд !гапкдепек Вюеккаук 18, 919-923.

Ма^!^пеζ-8а1ак, Е. (1999) 1п!ета1 пЬокоте еп!гу кНе Ью1оду апб 1!к ике т ехргеккюп уес!огк Сигг Орт Вю!есНпо1 10, 458-464.

МсВитеу, М.^., Ма1, Т., Уапд, X., апб .Тагбте, К. (2002) Еу1бепсе Гог гереа!-тбисеб депе кбепстд т си1!игеб Маттайап се11к: тасйуайоп оГ !апбет гереа!к оГ !гапкГес!еб депек Ехр Се11 Век 274, 1-8.

М1д11ассю, А.В., Вепдга, С., Ьтд, I., Р1, ^., Ь1, С., 2епд, 8., Кеккт!ере, М., ^Нйпеу, В., 83110^, М., М1д11ассю, С., апб Тиап, Ό. (2000) 8!аЬ1е апб ипк!аЬ1е !гапкдепе т!едга!юп кйек т !Не Нитап депоте: ехйпс!юп оГ (Не Сгееп Е1иогексеп! Рго!ет !гапкдепе т К562 се11к Сепе 256, 197-214.

М^ζидисН^. Н., Хи, Ζ., 1кНл-^а!аЬе, А., исН1ба, Е., апб Науакатеа, Т. (2000) 1ВЕ8-берепбеп! кесопб депе ехргеккюп 1к к1дтйсап!1у 1отеег !Нап сар-берепбеп! йгк! депе ехргеккюп т а Ыс1к!гошс уес!ог Мо1 ТНег 1, 376-382.

Веек, 8., Соо!е, 1., 8!аЬ1ек, 1., Сообкоп, 8., Натк, 8., апб Ьее, М.С. (1996) ВШкВошс уес!ог Гог !Не сгеайоп оГ к!аЬ1е таттайап се11 йпек, !На! ргеб1крокек а11 апйЬюйс-гек1к!ап! се11к !о ехргекк гесотЬтап! рго!ет Вю!есНтдиек 20, 102-104, 106, 108-110.

8сйогрр, М., 1адег, В., 8сйе11апбег, К., 8сНепкеГ 1., ^адпег, Е.Е., ХУеШеи Н., апб Апде1, Р. (1996) ТНе Нитап υΗίςυίΙίπ С ргото!ег б1гес!к ЫдН иМцийоик ехргеккюп оГ !гапкдепек т писе ШОею Ас1бк Век 24, 1787-8.

8!гиЛепЬегдег, К., Вог!й, Ν., Кипег!, В., 8!е1пЕе11пег, ^., апб Кайпдег, Н. (1999) СНапдек биппд киЬс1опе беуе1ортеп! апб адетд оГ Нитап апйЬобу-ргобистд гесотЬтап! СНО се11к 1 Вю!есНпо1 69, 215-26.

Уап бег У1ад, 1., беп В1ааитееп, ЕЬ., 8етеа1!, В.С., уап ОпеГ В., апб О!!е, А.Р. (2000) Тгапкспрйопа1 гергеккюп теб1а!еб Ьу ро1усотЬ дгоир рго!етк апб о!Нег сНготайп-аккос1а!еб гергеккогк 1к ке1есйуе1у Ь1оскеб Ьу тки1а!огк 1 Вю1 СНет 215, 697-704.

^Нйе1ате, Е., 8и!Нег1апб, Н., Кеагпк, М., Могдап, Н., ХУеаутд, Ь., апб Сатск, Ό. (2001) Ер1депейс еГГес!к оп !гапкдепе ехргеккюп МеЛобк Мо1 Вю1 158, 351-68.

- 20 011747

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Скготабепьсз Β.ν.

Οίΐβ, Ατϊβ Р.

Киакз, ТЪеойогиз Н.Л.

ЗеиаАЛ, КгсЬагЦ С.А.В.

дап В1ок1апс1, Кьк <120> Новая последовательность для повышения экспрессии нуклеиновой кислоты <130> 0111 ИО 00 ОЯО <150> РСТ/ЕР2004/051405 <151> 2004-07-08 <160 82 <170> Ра6еп61п легзьоп 3.2 <210> 1 <2И> 749 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еакиге <223> последовательность ЗТАК1 <400> 1

а1:дсдд6ддд	ддсдсдссад	адасбсд^дд	дабссббддс	Ъбддабдббб	дда+сЪСЬсб	60
дадСбдссбд	бдссдсдааа	дасаддсаса	ЛЫсСдакСа	ддссбд^даа	дссСссЬдда	120
ддассабсбс	аббаадасда	Ьддбаббдда	дддададбса	садааадаас	бдбддссссг	180
сссбсасСдс	аааасддаад	кдакббЬакб	ГЪаакдддад	1кддаа1.а1д	£дадддс1дс	240
аддаассадб	сЪсссбссЧ:	с£5дд£Ъдда	ааадсбдддд	сбддсск.сад	адасаддк-Ц	300
£111:ддссссд	скдддскддд	садбсбадбс	дасссбббдб	адаскдкдса	сассссбада	360
ададсаасГа	сссс£а£аса	ссаддсГддс	гсаадрдааа	ддддсгскдд	дсЬссадСсО	420
ддаааа£с£д	дкдкссбддд	дасс£с0дд!	сОГдсЮскс	бссбссссОд	сасбддсОск	480
дддбдсбба*:	сбсОдсадаа	дс£кс1сдс1	адсааассса	саббсадсдс	ссОдбадсОд	540
аасасадсас	ааааадссс£	адада11сааа	адсаЪЪадка	1дддсад1Лд	адсдддаддв	600
даа1а66£аа	сдсб£к1дб£	саисаакаас	ксдЫддсП	£дасс1дбск	даасаадюд	660
адсаабаадд	бдааабдсад	дЬсасадсдЪ	сбаасаааба	бдаааабдбд	бабаббсасс	720
ссддксксса	дссддсдсдс	саддсбссс				749

- 21 011747 <210> 2 <211> 883 <212> ДНК <213> Ното зараепз <220>

<221> т1зс_£еа£иге <223> последовательность 3ΤΆΡ.2.

<400> 2

дддДдсДДсс	ДдааДДсДДс	ссДдадаадд	аДддДддссд	дДааддДссд	ДдДаддДддд	60
дДдсддсДсс	ссаддссссд	дсссдДддДд	дДддссдсДд	сссадсддсс	сддсассссс	120
аДадДссаДд	дсдсссдадд	садсдДдддд	даддДдадДД	адассааада	дддсДддссс	180
ддадДДдсДс	аДдддсДсса	саДадсДдсс	ссссасдаад	асддддсДДс	ссДдДаДдДд	240
ДддддДссса	ДадсДдссдД	ДдсссДдсад	дссаДдадсд	ДдсдддДсаД	адДсдддддД	300
дсссссДдсд	сссдссссДд	ссдссдДдДа	дсдсДДсДдД	дддддДддсд	ддддДдсдса	360
дсДдддсадд	дасдсадддД	аддаддсддд	дддсадсссд	ДаддДасссД	дддддддсДД	420
ддадаадддс	дддддсдасД	ддддсДсаДа	сдддасдсДд	ДДдассадсд	аа^дса^ада	480
дДДсадаДад	ссассддсДс	сддддддсас	ддддсДдсда	сДДддадасД	ддссссссда	540
ДдасдДДадс	аДдсссДддс	ссДДсДдаДс	сДДДДДдДас	ДДсаДдсддс	да££сСддаа	600
ссадаДсДДд	аДсДддсдсД	садДдаддДД	садсадаДДд	дссаДсДсса	сссддсдсдд	660
ссддсасадд	ДадсддДдда	адДддаасДс	ДДДсДссадс	ДссассадсД	дсдсдсГсд£	720
дДаддссдДд	сдсдсдсдсД	Дддасдаадс	сДдссссддс	дддсДсДДдД	сдссадсдса	780
дсДДДсдссД	дсдаддасад	адададдаад	адсддсдДса	ддддсДдссд	сддссссдсс	840
садссссДда	сссадсссдд	ссссДссДДс	сассаддссс	саа		883

<210> 3 <211> 2126 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еа£иге <223> последовательность ЗТАВЗ <400>3 аДсДсдадДа сДдаааДадд ад£ааа£с£д аададсаааД аадаДдадсс адаааасса£60 даааадааса дддасДасса дДДдаДДсса сааддасаДД сссааддДда дааддссаДа120

ДассДссасД ассДдаасса аДДсДсДдДа ДдсадаДДДа дсааддДДаД ааддДадсаа180

- 22 011747

аадаРСадас	ссаадааааР	ададаасРРс	сааРссадРа	ааааРсаРад	саааРРРаТР	240
даРдаРааса	аРРдРсРсса	ааддаасаад	дсададРсдР	дсРадсадад	даадсасд1д	300
адсРдаааас	адссаааРср	дсРРРдРРРР	саРдасасад	дадсарааад	Расасассас	360
саасРдасск	аРРааддсРд	РддРааассд	аРРсаРадад	ададдРРсРа	ааРасаРРдд	420
РсссРсасад	дсааасРдса	дррсдсрссд	аасдРадРас	сРддаааРРР	даРдРссадР	480
аРадаааадс	ададсадРса	аааааРаРад	аРааадсРда	ассадаРдРР	дссрдддсаа	540
рдррадсадс	ассасасРРа	адаРаРаасс	РсаддсРдРд	дасРсссрсс	сРддддадсд	600
дрдсРдссдд	сддсдддсдд	дсРссдсаас	РссссддсРс	РсРсдсссдс	ссРсссдРбс	660
рссРсдддсд	дсддсддддд	ссдддасРдс	дссдсРсаса	дсддсддсРс	бРсРдсдссс	720
ддссРсддад	дсадрддсдд	РддсддссаР	ддссРссРдс	дРРсдссдаР	дРсадсаРСР	730
сдаасРдадд	дРсарсРссР	РдддасРддр	РадасадРдд	дрдсадссса	сддадддсда	840
дррдаадсад	дд^дддд^д!	сассрссссс	аддаадРсса	дрдддрсадд	даасРсссСс	900
сссРадссаа	дддаддссдр	дадддасРдР	дсссддрдад	адасрдрдсс	сРдаддааад	960
дРдсасРсРд	дсссадарас	РасасРРРРс	ссасддРсРР	саааасссдс	адассаддад	1020
	Л /·*		,-«+ + *			т лол
		СЗССЗууаОС	^’-УУУ ь ь '-'-а	аССсгСНоЗ а С	сдддссаис.1-	X с М V
дддсадасас	ссадсРадсР	дсаададРРд	РРРРРРРРРР	РаРасРссРд	РддсассЬдд	1140
аасдссадсд	адададсасс	РРРсасРссс	сРддаааддд	ддсРдааддс	адддассСРР	1200
адсРдсдддс	Радддддррр	ддддррдадр	дддддадддд	ададддаааа	ддссРсдРса	1260
РРддсдРсдР	сРдсадссаа	РааддсРасд	сРссРсРдсР	дсдадРадас	ссааРссРРР	1320
ссРададдрд	дадддддсдд	драддрддаа	дрададдрдд	сдсддРаРсР	аддададада	1380
аааадддсРд	дассааРадд	Рдсссддаад	аддсддассс	адсддРсРдР	РдаРРддРаР	1440
тддсадрдда	сссРсссссд	дддрддрдсс	ддаддддддд	аРдаРдддРс	даддддрд^д	1500
рррардрдда	адсдадаРда	ссддсаддаа	ссРдссссаа	РдддсРдсад	адрддррадр	1560
дадрдддрда	садасадасс	сдраддссаа	сдддрддсср	РаадрдРсРР	РддРсРсс±с	1620
сааРддадса	дсддсддддс	дддассдсда	сРсдддРРРа	аРдадасРсс	аррдддсрдр	1660
ааРсадРдРс	аРдРсддаРР	саРдРсаасд	асаасаасад	ддддасасаа	ааРддсддсд	1740
дсРРадРссР	ассссРддсд	дсддсддсад	сддРддсдда	ддсдасддса	сРссРссадд	1800
сддсадссдс	адрррсрсад	дсадсддсад	сдсссссддс	аддсдсддрд	даддрддсдс	1860
дсадссаддр	сРдРсассса	ссссдсдсдр	Ьсссаддддд	аддадасРдд	дсдддадддд	1920

- 23 011747

ддаасадасд	дддддддаръ	саддддс££д	сдасдсссс5	сссасаддсс	£с£дсдсдад	1980
дд^сассдсд	дддссдсЕсд	ддд£саддс£	дссссРдадс	д£дасдд£ад	ддддсддддд	2040
аааддддадд	адддасаддс	сссдссссбс	ддсадддсс!;	с£адддсаад	ддддсддддс	2100
1:сдаддадсд	даддддддсд	дддсдд				2126

<210> 4 <211> 1625 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>

<221> т1зс_£еа£иге <223> последовательность 3ΤΆΚ4 <400> 4

да^сбдад^с	а11д££5£аад	дддаддаМс	Ь6£Сддс£дс	^дадббдада	съадд^бдад	60
ддРадСдаад	д-саааддсад	чдадассасд	Ьаддддбса):	£дсад£аа£с	саддсРддад	120
абдаСддГдд	1Ссад££дда	аЪадсад1;дс	а£д£дс£д£а	асаассЬсад	сРдддаадса	180
д5а£а£дЪдд	сд££а£дасс	ксадс£ддаа	садсааЕдса	£д£дд£дд1:д	£аа£дасссс	240
адс£ддд£ад	дд£дса£д£д	д£д£аасдас	с£садсСддд	ЪадсадЕд£д	ЬдбдабдЪаа	300
саасс£садс	ЪдддЪадсад	Ьд£ас££да£	аааа£д££дд	са5ас£с£ад	а££Сд££а£д	360
адддбадбдс	са££ааа£££	сСссасааа£	£дд££д5сас	дба^дад^да	ааададдаад	420
5да£ддаада	с£Ъсад£дс£	ИЪ^ддссИда	а£ааа1:адаа	дасдЪса££Ъ	ссад'Ь'ЬааЪд	480
дадасаддда	адасЪааадд	£аддд£ддда	££сад£адад	саддбдгсса	д£Ъ££даа£а	540
ЬдаЬдаасЪс	Ьдадададда	аааас£££££	СРасс£с££а	дИЪЬЬдЬда	с^ддасМаа	600
даа££ааад£	даса£аадас	ададЪаасаа	дасаааааГа	£дсдадд£'Ьа	ССЬааСаЪбЬ	660
££асС£дсад	аддддааНс!	£саааадааа	аа^даадасс	сааадаадсс	аШзаддд'Сса	720
ааадс£са£а	^дссЬРЪШа	адЬадаааа!:	даЪаааРРЫ:	аасааРдСда	даадасааад	780
дбдрррдадс	СдадддсааР	ааабрдрддд	асадРдаСРа	адаааЪаСаР	дцдддааабд	840
аааРдаРаад	СРаТ^РРадР	ада£5£аГ1:с	ГЪсаРаРсРа	£££11ддс£Ъс	аас££ссади	900
сгсгадъдар	аадаардехс	И£с1с££ссХ / д^адаааддд	ддрасадада	дадсасс1Х£	сРсаРдддаа	960
а££££а+дас	сЛЬдс£дЪаа	даадаРсда!	с£ссРд1Ы:с	ссадсаРсад	1020
да1;дсаааса	СРСсссРсса	Сссс-адЕ^сС	саасссса1:д	дсСдддсс1:с	аСддса£1:сс	1080
адса£сдс£а	£дад£дсасс	£££сс£дсад	дс!дсс£сдд	д£адс£дд£д	сас1дс£адд	1140
£сад£сЬа£д	£дассаддад	с£дддсс£с£	дддсааЪдсс	ад^гддсадс	сссса£сссР	1200

- 24 011747

есассдсбдд	дддсскзсба	бссадааддд	сббддбдбдс	адаасдабдд	бдсассабса	1260
бсаббсссса	сббдссабсб	ббсаддддас	адссадсбдс	Цббдддсдсд	дсааааааса	1320
сссаасЬсас	ЬссЬсИсад	дддссбсбдд	бсбдаЦдсса	ссасаддаса	ЬссббдадЪд	1380
с!дддсад+с	бдаддасадд	дааддад^да	1:дассасааа	асаддаа!дд	садсадсадб	1440
дасаддадда	адбсаааддс	ббдбдбдбсс	Ьддсссбдс!	дадддсбддс	дадддсссЬд	1500
ддабддсдсг	садсдссбдд	бсддсбдсаа	даддссадсс	сбсбдсссаб	даддддадсб	1560
ддсадбдасс	аадсбдсасб	дсссбддбдд	ЬдсабЫссб	дссссасбс!	ббссббсбаа	1620

дабсс 1625

<210> <211> <212> <213>	5 1571 ДНК Ното	зар1епз
<220>
<221>	тхзс	£еа£иге
<223>	последовательность ЗТАВ5
<400>	5

сассбдабм	ааабдагсбд	бсбддбдадс	бсасбдддбс	Ъббасбсдса	Сдсбдддбсс	60
асадсбссас	ЪдЬссбдсад	ддбссдбдад	бдбдддсссс	ббабсбабб-Ц	саСсабсаба	120
асссбдсдбд	ЪссСсаасбс	сбддсасага	ббдддбддсс	ссабссасас	асддИдббд	180
адбдаабсса	Ъдадабдаса	ааддсбабда	бдбадасбаб	аксабдадсс	адаассаддс	240
бббссбассб	ссадасаабс	аадддссббд	абббдддабб	дадддадааа	ддадГадаад	300
ссаддаадда	даададабьд	аддббСасса	адддбдсааа	дСссЬддссс	сбдасбдСад	360
дсбдаааасб	абадааабда	бадаасаабб	ббдсаабдаа	абдсадаада	сссбдсабса	420
ас!ЬЪаддЬд	ддасибсддд	ЕаИСЫабд	дссасадаас	асосгссоаь	СГассСдса1:	480
ддсссадаса	садасббсаа	аасадЫдад	дссадсаддс	бссаддЕаад	ГддЬаддаЫ	540
ссадаабдсс	сбсададбдб	бдбдддаддс	адсаддсдаб	Сббссбддас	ССсбдадббб	600
абдадаассс	сааассссаа	ббддсаббаа	саббдаддбс	бсаабдСабс	абддсаддаа	660
дсббссдади	ддбдаааадд	ааадбдааса	1сааадсбсд	даадасаада	дддСддадбд	720
абддсаасса	ададсаадас	ссббсссбсб	ссбдбдабдд	ддбддсбсба	бдбдаадссс	730
ссааасбдда	сасаддбсид	дсадааГдад	даасссасбд	адаСССадсд	ссаасабсса	840
дсабаааадд	дадасбдаса	бадааШда	дббадббааа	аабааддсас	аабдссбббс	900

- 25 011747

аЬдЪаЪТссЕ	дад^ЪЪСдЪд	дас£дд£д££ сааЕТ'Сдсад	саРЪсбЬадб	£да!Хааа1:с	960
ЪдадаТдаад	ааададСдЪс	саасасС£Ъс	ассбЬддааа	дсЪсСддааа	адсааааддд	1020
ададасаа££	адс££са£сс	а££аас£сас	Г£ад£саГ£а	£дса£Л.са£Е	са£д£аас£а	1080
ссааасасдб	асбдадбдсс	баасасбссб	дадасасбда	даадЁНЕсбС	дддаабасаа	1140
адабдаабаа	ааассасдсс	аддсаддад-Ь	бддаддаадд	ббс+ддабдс	сассасдсЬс	1200
£асс£сс£дд	сдддасасса	ддсаабдббд	дбаассббсб	дссбссаабб	бс+дсаааба	1260
сабааб+аа!:	ааасасаадд	ЪЪаЬоЫ: с£а	аасадМсМ	аааа+дадЪс	аасЫ^дСЫ:	1320
ааасббдббс	-гЬГТадада	ааааГд-ба^-б	Тббдааадад	ббддббадбд	сбаддддааа	1380
£д£с£дддса	садсбсадбс	£дд£д£дада	дсаддаадса	дсЕсбд^дЪд	ЕсЪддддЕдд	1440
дбасдба+дб	аддассбдбд	ддадассадд	££дддддаад	дссссЬссЪс	аЬсаадддсС	1500
ссбС1:дс£££	дд££Едс1:1:1	ддсдсдддад	дкдс^дбдсс	асаадддааб	асдддааа^а	1560
ада+с1:с£дс	ί					1571

<210> 6 <211> 1173 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> т1зс_£еа1:иге <223> последовательность 5ТАН6 <400> 6

бдасссасса	садаса+ссс	сбсЬддссбс	сЬдадЬддЫ:	ссП.садсас	адсЬЬссада	60
дссааа£+аа	асд£6сас£с	£а£д£с£аСа	дасааааадд	дЪСЕЕдасЪа	аасбсбдбдб	120
ЪЪЪадададд	дадЬЪааа+д	сЪдЬСаас!:!.	ь^Садддд'Ъд	ддсдададдд	аЬдасаааЬа	180
асаас££д+с	1даа£дМ:1:11	аса£££с1;сс	ссасЕдссЕс	аадааддр+с	асаасдаддб	240
сабсса'Ьда'С	ааддадЪаад	ассъсссадс	сддас+д+сс	с+сддссссс	ададдасасб	300
ссасададаР	а+дс+аас+д	дасб+ддада	с+ддсбсаса	сбссададаа	аадсабддад	360
сасдадсдса	сададсаддд	ссааддСссс	адддасадаа	1д£с£аддад	ддада£1ддд	420
д£даддд£аа	+сСда£дсаа	Ы:ас£д£ддс	адсЪсаасаТ	Рсаадддадд	дддаадааад	480
ааасадбссс	бдбсаадеаа	дббдбдсадс	ададабддРа	адсх.ссаааа	Ьбгсааасбг	540
£ддс£дс£дд	ааад££££ад	ддддсадада	Таадаадаса	Таададас1:(:	£даддд6££а	600
сЕасасасЪа	дасдсбсбаб	дса£г1:аЪ1:£	аМ:£а6£а£с	£сС£ аГТЪа!:	£ас£ЬЬд,Ьа’Ь	660
аасбсЫзаТа	а^аа£с1;£аЁ	даааасддаа	асссЬса^а!:	асссаГЛЬЁа	сада£дадаа	720

- 26 011747

аадЕдасааЕ	ЕЕЕдададса	ЕадсЕаадаа	ЕадсЕадЕаа	дЕаааддадс	ЕдддассЕаа	790
ассааасссЕ	аЕсЕсассад	адЕасасасЕ	СЕЕЕЕЕЕЕЕЕ	ЕЕссадЕдЕа	аίЕЕΕΕύЕЕа	840
аЕЕЕЕЕаЕЕЕ	ЕасЕЕЕаадЕ	ЕсЕдддаЕас	аЕдрдсадаа	ддЕаЕддЕЕЕ	дЕЕасаЕадд	900
ЕаЕаЕдЕдЕд	ссаЕадЕдда	ЕЕдсЕдсасс	ЕаЕсаасссд	ЕсаЕсЕаддЕ	ЕЕаадсссса	960
саЕдсаЕЕад	сЕаЕЕЕдЕсс	ЕдаЕдсЕсЕс	ссЕссссЕсс	ссасассада	саддссЕЕдд	1020
ЕдЕдЕдаЕдЕ	ЕссссЕсссЕ	дЕдЕссаЕдЕ	дЕЕсЕсасЕд	ЕЕсадсЕссс	асЕЕаЕдадЕ	1080
дадаасдЕдЕ	ддЕаЕЕЕддЕ	ЕЕЕсЕдЕЕсс	ЕдЕдЕЕадЕЕ	ЕдсЕдаддаЕ	даЕддсЕЕсс	1140
адсЕЕсаЕсс	аЕдЕсссЕдс	аааддасасд	аЕс			1173

<210> 7 <211> 2101 <212> ДНК <213> Ното зар1епз <220>

<221> т1зс_£еаЕиге <223> последовательность ЗТАВ7 <400> 7

аддЕдддЕдд	аЕсасссдад	дЕсаддадЕЕ	саадассадс	сЕддссааса	ЕддЕаааасс	60
ЕсдЕсЕсЕас	ЕааааааЕас	даааааЕЕад	сЕддЕЕдЕдд	ЕддЕдсдЕдс	ЕЕдЕааЕссс	120
адсЕасЕсдд	даддсЕдадд	саддадааЕс	асЕЕдааЕсЕ	дддаддсада	ддЕЕдсадЕд	180
адсЕдадаЕа	дЕдссаЕЕдс	асЕссадссЕ	дддсаасада	сддадасЕсЕ	дЕсЕссаааа	240
аааааааааа	аааЕсЕЕада	ддасаадааЕ	ддсЕсЕсЕса	аасЕЕЕЕдаа	дааадааЕаа	300
аЕаааЕЕаЕд	садЕЕсЕада	адаадЕааЕд	дддаЕаЕадд	ЕдсадсЕсаЕ	даЕдаддаад	360
асЕЕадсЕЕа	асЕЕЕсаЕаа	ЕдсаЕсЕдЕс	ЕддссЕаада	сдЕддЕдадс	ЕЕЕЕЕаЕдЕс	420
ЕдаааасаЕЕ	ссааЕаЕада	аЕдаЕааЕаа	ЕааЕсасЕЕс	ЕдассссссЕ	ЕЕЕЕЕЕЕссЕ	480
сЕсссЕадас	ЕдЕдаадсад	ааассссаЕа	ЕЕЕЕЕсЕЕад	ддаадЕддсЕ	асдсасЕЕЕд	540
ЕаЕЕЕаЕаЕЕ	аасаасЕасс	ЕЕаЕсаддаа	аЕЕсаЕаЕЕд	ЕЕдсссЕЕЕЕ	аЕддаЕдддд	600
ааасЕддаса	адЕдасадад	сааааЕссаа	асасадсЕдд	ддаЕЕЕсссЕ	сЕЕЕЕадаЕд	660
аЕдаЕЕЕЕаа	аадааЕдсЕд	ссадададаЕ	ЕсЕЕдсадЕд	ЕЕддаддаса	ЕаЕаЕдассЕ	720
ЕЕаадаЕаЕЕ	ЕЕссадсЕса	дадаЕдсЕаЕ	дааЕдЕаЕсс	ЕдадЕдсаЕд	даЕддассЕс	780
адЕЕЕЕдсад	аЕЕсЕдЕадс	ЕЕаЕасааЕЕ	ЕддЕддЕЕЕЕ	сЕЕЕадаада	аааЕаасаса	840
ЕЕЕаЕаааЕа	ЕЕааааЕадд	сссаадассЕ	Еасаадддса	ЕЕсаЕасааа	ЕдададдсЕс	900

- 27 011747

ЪдаадШда	дб511д1;Ъсас	ШсггдШ	аМаЪсЪсс!	дссЪдгт^дЪ	са!ааа!дсд	960
М1ад1аддд	адс1дс!аа6	дасаддббсс	Иссаасадад	сдгддаадаа	ддадагдаса	1020
дсСддсССсс	ссбсбдддас	адссбсадад	сТад^дддда	аасСабдМа	дсададбда!	1080
дсадбдасса	адааааСадс	асбаддадаа	адсбддЪсса	£дадсадс£д	дЪдадаааад	1140
ддд'Ьдд^ааЪ	са6д!а!дсс	с1Ы:сссдг1:	НаПИНа	ггдддмгсс	^«дсс1с!	1200
саа11сс11с	ЪдасааЪаса	ааабдИддб	£ддаасаЪдд	адсассбдда	аддс+ддббс	1260
а1111сбс1с	ад!с!с^да	6д16с1с1сд	ддбСсасСдс	сСаСбдтбсС	сад^сбаса	1320
сИдадсаа!	с!сс1саа1а	дс^ааадсГС	ссасаа!дса	даббИЪд+да	1дасаза11с	1380
адсабсассс	адсадаас!С	адд111111:1	с5дГсс!ссд	Ибссбдасс	¢¢¢¢¢£¢¢01	1440
дадЪдсС5Ьа	1д1сасс1сд	Ьдаассабсс	бСЕсс^бадЪ	са!с1асс1а	дсад¢сс¢да	1500
11с11^дас	ЬСд^сГсссГ	асассасаа!	аааИсас1:аа	11асъа1дда	11сааСссс1	1560
ааааСИдса	сааасИдса	аабадаИас	дддИдааас	1аадада:11	сааасббдад	1620
аааааад!!!	аааЬсаадаа	ааабдасс!±	СассЫдада	д1ададдсаа	1д1са^1сс	1680
аддаабааС!:	аСааСаабаС	сд1.<:1Ы.за1	а111д!а5д1	аасабббдаа	Ъасс^саа!	1740
дПЛЬаШ	дЪдИаШИ:	аа!с1с11да	•ЬдЪСасеаас	ЬсаСЬ^ддба	дддаадаааа	1800
са!дс6аааа	баддса^дад	1д1с11а11з	аа1:д1:дасаа	д!даа1ада!	ддсадаадд!	1860
дда!1са1а1	Ссадиисс	а!сассс1дд	аааЪсабдсд	дадаЬдабЬЬ	с+доГЛдсаа	1920
а-ЬаааасСаа	сссаа!дадд	ддаасадсЬд	Т1с1+адд5д	аааасаааас	ааасасдсса	1980
аааассбгба	1Г.с1с111а1	1а1дааТсаа	З11.1г.1сс1с	бсада1аа(;б	дбШаШа	2040
66£а111«а	СЪа^бабЪдЬ	1аССабдбсс	ад!с1сас1с	бдбсдссбаа	дс¢ддса¢да	2100

ΐ 2101

<210>	8
<211>	1821
<212>	ДНК
<213>	Ното зар1епз
<220>
<221>	тазе £еа!иге
<223>	последовательность ЗТАК8
<400>	8
дадаИсасс! сдаададад!	сбаасдбссд	1аддаасдс6	с!сддд11са	сааддаИда	60
ссдаасссса дда¢асд¢сд	с6с6сса!с1	даддеббдеб	ссааа¢ддсс	О1ссас1а61	120
ссаддсасд! ддд¢д¢с¢сс	ссбаасЕ^с	сс1дс1с1сс	1дадссса1д	с1дсс1а£са	180

- 28 011747

ссса1:сдд1:д	саддг. с.сЛ1Г_	скдаададс!	сддд-ЬддаИ	с1с£ сс.а^сс	сасМссМХ	240
сссаадааад	аадссассд!	Сссаадасас	ссаа+дддас	айсссс11с	сассЪссИс	300
1ссааад11д	сссаддСд^Ъ	саЪсасаддЪ	Еадддадада	адсссссадд	ЫЕсадМас	360
ааддса1адд	асдсЕддсаЕ	даасасасас	асасасасас	асасасасас	асасасасас	420
асасдасЪсд	аададдЪадс	сасааддд^с	аНааасас!	^дасдасГдг	гыссааааа	480
сдЪддаЬдса	дЫсабссас	дссааадсса	адддЬдсааа	дсааасасдд	ааЪддЬддад	540
адаИссада	ддсЬсассаа	асссьс+сад	дааСаЫТГ.с	с!дассс1дд	дддсададд!	600
1ддаааса11.	даддасаШ	сЪгдддасае	асддадаадс	ΐ-дассдасса	ддса1^11сс	660
Шссас+дс	ааа!дасс!а	Еддсдддддс	аЪИсас! ΐΐ.	ссссЕдсааа	£сасс1а!дд	720
сдадд1асс!	ссссаадссс	ссасссссас	Ыссдсдаа!	сддсаЕддсЪ	сддссЬсТа!:	780
ссдддЪдЪса	с1ссадд!ад	дсЫсЬсаас	дс1сЬсддс!	сааадаадда	саа!сасадд	840
Ьссаадссса	аадсссасас	сЕсИссЬЕС	ГдЫаЬассс	асадаадМа	дадаааасдс	900
сасасИСЕда	дасаааМаа	дад-ЬссЪИа	Исаадссдд	сддссааада	да!ддс!аас	960
дсЬсааааН	с1с!дддссс	сдаддааддд	дсПдасЕаа	сГЮЕаЕасс	Мдд'Мадд	1020
ааддддаддд	даасЬсааа^	дсдд^ааМс	^асадаадЕа	ааааса^дса	ддааЕсаааа	1080
даадсааа^д	д!1а1адада	даЪааасадЬ	Шааааддс	аааЬддЫас	ааааддсаас	1140
ддгассадди	дсддддсЪс!	ааа’ЕссЬ'Ьса	Ьдасасгиад	аЕагаддЕдс	1а1дс£ддас	1200
асдаасСсаа	ддсиъагд!	сдь+асссс!	Исдадааааа	ЪссЪдддаас	ИсаЬдсас!	1260
дШдЬдсса	дЬа1с11а1с	адЫдаПдд	дс1ссс11да	ааСдс^дадЕ	а+сЬдсИас	1320
асаддбсаас	Ессыдсдда	адддддидд	д^ааддадсс	сП сдЕ д^с!	сдбаааСбаа	1380
дддд'ЬсдаЫ	ддадШд^с	садсаМссс	адсйасадад	адссИа-Ы!	асаЪдадаад	1440
сааддсЬадд	ЬдаСЪааада	дассаасадд	даадаИсаа	адСадсдас!	ЬададЪаааа	1500
асааддтЪад	дсаШсас!	Псссадада	асдсдсааас	а16саа6ддд	адададдбсс	1560
сдад!сд1са	аадЬсссада	1д1ддсдадс	ссссдддадд	ааааассд+д	СсПссИад	1620
да!дсссдда	асаададс!а	ддсИссдда	дсгаддсадс	сагсЪаЕдгс	сд1дадссдд	1680
сдддадддад	ассдссддда	ддсдаад!дд	ддсддддсса	1сс11с11:1:с	Ъдсбс+дсПд	1740
сйдссдддда	дс1сс1ддс1	ддсд£ссаад	сддсаддадд	ссдссд^ссЪ	дсадддсдсс	1800
д^ададЫЪд	сдд!дсадад	ί				1821

<210> 9

- 29 011747 <211> 1929 <212> ДНК <213> Нойю зараепз <220>

<221> т!зс_£еакиге <223> последовательность 2ТАК9 <400> 9

саскксскдд	дадкддадса	даддскскдс	дкддадсакс	сакдкдсадк	асксккаддк	60
асддааддда	кедддскааа	ссакддакдд	дадскдддаа	дддаадддас	сааскксадд	120
ссссаскддд	асаскддадс	кдссассскк	кададссскс	скаассскас	ассададдск	180
дадддддасс	ксадасакса	сасасакдск	кксссакдкк	кксадааакс	кддаааедка	240
дааскксадд	ддкдададкд	сскадакакк	даакасаадд	скадаккддд	сккскдкаак	300
аксссааадд	ассскссадс	ккккксасса	дсасскаакд	сссаксадак	ассааадаса	360
садсккадда	даддкксасс	скдаадскда	ддаддаддса	дееддаккад	адккдаскда	420
дсааддакда	скдссккскс	сасскдасда	ккксадскдс	кдсссккккс	кккксскддд	480
аакдсскдкс	дссакддсск	кскдкдксса	саддададкк	кдасссадак	асксакддас	540
саддсааадд	кдскдкксск	сссадсссад	ддсссассак	даадсакдсс	кдддадсскд	600
дкааддассс	адссасксск	дддскдккда	саккддсккс	ксккдсссад	саккдкадсс	660
асдссаскдс	аккдкаскдк	дадакаадке	ааддкдддск	сассаддасс	кдсаскааак	720
кдкдаааккс	адскссааад	ааекккддаа	аккасссакд	сакккаадса	ааакдаакда	780
касскдадса	аассскккса	саккддсаса	адккасаакс	скдксксакс	сксккдакка	Θ40
саааккссак	ссаддсаада	дскдкаксас	сскдаддкск	ссссакксак	дккккддкеа	900
акаакаккка	дккксскккк	даааакадак	ккккдкдкка	скссаккакд	акдддсадад	960
дссадакдск	какаккскак	ккааакдаск	акдкккккск	акскдкааск	дддкккдкдк	1020
ксаддкддка	аакдеккккк	ккккдеадке	адаадакксс	кддааддсда	ссадааакка	1080
дскддссдск	дксадасскд	аадккаекке	кааадддсск	ккадааакда	аккекккккк	1140
акдссккскс	кдааккскда	даадкаддск	кдаскксссс	каадкдкдда	дккдддадке	1200
аасксккскд	аааадааадк	кксададсак	кккссааадс	сакддксадс	кдкдддаадд	1260
даадасдакд	дакадкасад	ккдееддааа	асаскдакдд	аддеддакде	кссадсксад	1320
ссааадасск	ккдккскдсс	сассссадаа	акдссссккс	сксааксдса	даааедккде	1330
сссакддскс	скдакаскса	даакдсадсс	кскдассадд	ассакскдса	ксскссадда	1440
декедкаада	аакдсадсак	сдкдддасск	дскддсасск	ддкдаассса	аасскдсадд	1500

- 30 011747

дсРссРдддР	дрдсррдддд	сддсрдсадд	ддаададдда	дрсадсадсс	РссРссРдас	1560
сИсссддсд	дсРдсРРРРс	Рдаддддсса	даардсассд	дРРдассРРд	ЕРдсаРсасР	1620
ддсссаРдас	рддсРдсРРР	ддрсаддрдр	аааааддрдр	РРссададдд	РсРдсЕссРс	1680
ЕсасРаРсдд	ассаддрррс	саРддададс	РсадссРссс	адсааддаРа	дадаасРРса	1740
ааРддсРсаа	адаасРдада	ддссасасаР	дрдрдассрд	ааРадР.сР ср	дсРдсаааас	1800
ааадддРРРс	РРааРдРааа	асдРРсРсРР	ссРсасадад	дддррессад	срдсРадЕдд	1860
дсаРдРРдса	ддсаРРРссР	дддсРдсаРс	аддРРдРсар	аадссададд	аЕсаГ.ЕГ.Г.Г.д	1920
ддддсРсаР						1929

<210>	10
<211>	1167
<212>	ДНК
<213>	Ното зартепз
<220>
<221>	тазе Геариге
<223>	последовательность	5ТАК10
<220>
<221>	ттзс ЕеаРиге
<222>	(452)..(1143)
<223>	η является а, с, д	или Р в различных положениях
<400>	10

аддРсаддад	РРсаадасса	дссЕддссаа	сарддрдааа	сссрдрссср	асааааааРа	60
саааааРРад	ссдддсдРдд	Еддддддсдс	сРаРааРссс	адсРасРсад	даРдеРдада	120
саддадаарр	дрррдаассс	дддаддрдда	ддррдсадрд	аасРдадаРс	дсдссасРдс	180
асРссадссР	ддрдасадад	ададасРссд	РсРсаасаас	адасааасаа	асааасааас	240
аасаасаааа	аРдРРРасРд	асадсРЕРаЕ	ЕдадаЕаааа	РРсасаРдсс	аРаааддРса	300
ссРЕсРасад	ЕаЕасааРРс	адРддаРРЕа	дРаРдРРсас	ааадРРдРас	дРРдРРсасс	360
аРссасРсса	даасаРРЕас	арсассссЕа	ааадаадсРс	рррадсадрс	асРРсРсаРР	420
сСссссадсс	ссРдссаасс	асдааРсРас	РпРсРдРсРс	РаРРсРдааР	аРРРсаРаРа	480
ааддадРссР	арсарарддд	ссррррасдЕ	сРассРРсРЬ	РсасРРадса	РсаРдРРРРР	540
аадаРРсаРс	сасадрдрад	сасдрдрсад	РРааРРсарР	РеаРеРРаРд	деРддаРаар	600
дсРсРаРРдр	аРдсаРаРсс	сРсасРРРдс	РРаРссаРРс	аРсаасРдаР	РдасаРРРдд	660
дРРаЕЕРсЕа	сРЕРРРдасР	аЕРаРдадРа	аРдсРдсРа!	даасаР РссР	дРассааРсд	720
РРасдРддас	аРаРдсРРРс	ааРЕсРссЕд	адРаРдРаас	РадддРРдда	дРРдеРдддЕ	780

- 31 011747

саЕаЕдЕЕаа	сЕсадЕдЕЕЕ	саШННд	аадаасЕасс	аааЕддЕЕЕЕ	ссааадЕдда	840
ЕдсаасасЕЕ	18031:1:0003	ссадсаадаЕ	аЕдааддЕЕс	сааЕдЕсЕсЕ	асаЕЕЕЕЕдс	900
саасасЕЕдЕ	даН 110111	ЕаЕЕЕаЕЕЕа	ЕЕЕаЕЕЕаЕЕ	ЕаЕЕЕЕЕдад	аЕддадЕсЕс	960
асЕсЕдЕсас	ссаддс!дда	дЕдсадЕддс	асааЕЕЕсад	сЕсасЕдсаа	ЕсЕссассЕс	1020
ЕсдддсЕсаа	дсдаЕасЕсс	1дсс1саасс	ЕсссдадЕаа	сЕдддаЕЕас	аддсдсссас	1080
сассасасса	адсЕааЕЕЕЕ	11д1аН1Е1	адЕададасд	дддЕЕЕсаЕс	аЕдЕсддсса	1140
ддпЕдЕасЕс	даасЕсЕдас	сЕсаадЕ				1167

<210> 11 <211> 1377 <212> ДНК <213> Ното зарьепз <220>

<221> т1зс_£еа1иге <223> последовательность ЗТАК11 <400> 11

аддаЕсасЕЕ	дадсссадда	дЕЕсаадасс	адссЕдддса	асаЕадсдад	аасаЕдЕсЕс	60
аааааддааа	ааааЕддддд	аааааасссЕ	сссадддаса	даЕаЕссаса	дссадЕсЕЕд	120
аЕаадсЕсса	ЕсаЕЕЕЕааа	дЕдсааддсд	дЕдссЕссса	ЕдЕддаЕдаЕ	ЕаЕЕЕааЕсс	180
ЕсЕЕдЕасЕЕ	ЕдЕЕЕадЕсс	ЕЕЕдЕддааа	ЕдсссаЕсЕЕ	аЕаааЕЕааЕ	адааЕЕсЕад	240
ааЕсЕааЕЕа	аааЕддЕЕса	асЕсЕасаЕЕ	ЕЕасЕЕЕадд	аЕааЕаЕсад	дассаЕсаса	300
дааЕдЕсЕда	даЕдЕддаЕЕ	ЕасосЕаЕсЕ	дЕадсЕсас!	ЕсЕЕсаасса	ЕЕсЕЕЕЕадс	360
ааддсЕадЕЕ	аосЕЕсадЕд	асаассссЕЕ	дсЕдсссЕсЕ	асЕаЕсЕссЕ	сссЕсадаЕд	420
дасЕасЕсЕд	аЕЕаадсЕЕд	адсЕадааЕа	адсаЕдЕЕаЕ	сссдддаЕЕЕ	саЕаЕддааЕ	480
аЕЕЕЕаЕаса	ЕдадЕдадсс	аЕЕаЕдадЕЕ	дЕЕЕдааааЕ	ЕЕаЕЕаЕдЕЕ	дадддадддЕ	540
аассдсЕдЕа	асаассаЕса	ссаааЕсЕаа	ЕсдасЕдааЕ	асаЕЕЕдасд	ЕЕЕаЕЕЕсЕЕ	600
дЕЕсассЕда	садЕЕсадЕд	ЕЕассЕаааЕ	ЕЕасаЕдаад	асссададдс	ссасдсЕссЕ	660
ЕсаЕЕЕЕддд	сЕссассдас	сЕссааддЕЕ	ЕсадддсссЕ	сЕдссссдсс	ЕЕсЕдсассс	720
асаддддаад	ададЕддадд	аЕдсасасдс	ссаддссЕдд	аадЕдасдса	ЕдЕддсЕЕсс	780
ссдЕссасад	асЕЕсассса	садЕссаЕЕд	дссЕЕсЕЕаа	дЕсаЕддасЕ	ссЕдсЕдадс	840
ЕдссадддЕд	саЕдддаааЕ	ссаЕдЕдасЕ	дЕдЕдсссЕд	даддаадддд	адсдЕЕЕсдд	900
Едадсасаса	ддадЕсЕЕЕд	ссасЕадасд	сЕдаЕдадда	ЕЕссссасад	дсдаЕдаадс	960

- 32 011747

а£.ддадас£с	аЕсЕЕдЕаас	ааасадаъда	дд£д«даса	£с£с£С.аад£	ТЛасГЕСдЕд	1020
£дсад1:Е££Л	акксадакад	даааддсЕдЪ	Еаааа£с££а	асассЪаасЪ	ддаадааддд	1080
ЬЕЕ^ададаа	д£д£дд££££	садЕаадсса	д££с£££:сса	сааЕссаада	аасдааакаа	1140
а£Л£ссадса	ЕддадсадЕЪ	ддсаддкаад	д£ХЪ££д££д	ЕддЕсксдсс	саддсЕЬдад	1200
ЕдЪаассддС	дЕддСсаСад	сЕсасЪасаб	ЕсЕсааасСс	с£ддсс£Ъаа	дСсаЕссСсс	1260
ЕдссЕсадсс	Рсссаааддс	аад£аадд£Е	аадаакаддд	даааддЕдаа	дМЕсасадс	1320
ίΛΕίοϊβςδθ	ЬДсЕДЬЕ-ЬаД	£саадддас£	с£сада£са£	сааасссасс	садаа£с	1377

<210> 12 <211> 1051 <212> ДНК <213> Ното заръепз <220>

<221> т±зс__£еаЬиге <223> последовательность 5ТАВ12 <400> 12

аСсс+дсИс	Едддаадада	д£ддсс£ссс	££д£дсадд£	дасНЕЕддса	ддассадсад	60
ааасссаддЪ	££сс£д£сад	даддаад£дс	ЪсадсМаЕс	£с£д£даадд	д£сд£да£аа	120
ддсасдадда	ддсаддддсЕ	£дссадда£д	££дсс£1:£с£	дЪдссайа+д	ддаса£с£са	1Θ0
дс££асд££д	Ъ+аадаааЕа	£Д£ддсаада	адаЪдсасас	адаа£££сЬд	Еаасдаакад	240
даСддадфЕЕ	ЕаадддСЕас	Еасдаааааа	адаааасЪас	Еддадаадад	ддаадссааа	300
сассассаад	Шдааассд	аЪ£Е£а££дд	асдаа£д£с£	сасЕЕЕаааС	ЕЕаааЕддад	360
СссаасЕЕсс	ЕЕ££с£сасс	садасдксда	дааддфддса	££саааа£д£	££асас££д£	420
ЪЪсаЬсЬдсс	££££Ъдс£аа	д£сс£дд£сс	ссЪассЪсск	^Ьсссс сасб	£саса£££д£	480
сд£££са£сд	сасаса£а£д	сИса+сЬСИа	£а£££аса£а	Ъа£а£аа£1:1	££а£а£а£дд	540
с££д£дааа£	акдссадасд	адддасдааа	£ад£сс£даа	аасадскдда	ааа£1:а£дса	600
асадЕдддда	даИдддсас	а£д£аса££с	£д£ас£дсаа	ад££дсасаа	садассаадр	660
££д££а£аад	ЕдаддсСддд	£дд££Ъ££а£	£Ё1:££:с£с£а	ддасаасадс	ЕЕдсскддкд	720
дадЕаддссЪ	ссЕдсадаад	дса£££Ес££	аддадсс£са	ас££ссссаа	даададдада	780
дддсдадасЕ	ддад£1д£дс	Сддсадсаса	дадасааддд	ддсасддсад	дасДдсадсс	840
гдсададддд	сДддадаадс	ддаддсЕддс	асссадЕддс	садсдаддсс	саддЪссаад	900
Ессадсдадд	£сдадд£с£а	дадЕасадса	аддссаадд£	ссааддксад	£дад£с£аад	960
дЕссаЪддЬс	адЪдаддсЕд	адасссаддд	ЕссааЬдадд	ссааддксса	дадЪссадЕа	1020

- 33 011747 аддссдадаб ссадддбсса дддаддбсаа д

1051 <210> 13 <211> 1291 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> гп1гс6еа6иге <223> последовательность 5ΤΆΚ13 <400> 13

адссасбдад	дбссбаасбд	садссааддд	дссдббсбдс	асабдбсдсб	сасссбсбдб	60
дсбсбдббсс	ссасададса	аасдсасабд	дсаасдббдд	бссдсбсадс	сасбддббсб	120
дбддбддаас	ддбддабдбс	Ъдсасбдбда	сабсадсбда	дбаадбааса	асдасбдадд	180
абдссдсбда	сссадддсбд	дддаадддда	сбсссадсбс	адасаддсбб	ддсбдбддбб	240
бдсбббддда	ддададбдаа	сабсасаддд	аабддсбсаб	дбсадсссса	ддадддбддд	300
сбддссссбд	дбссссдддс	бссббсбддс	ссбдсаддсд	абадададсс	бсаассбдсб	360
дссдсббсбс	сббддсссдд	дбдабддссд	бсбддаадад	ссбдсадбад	аддбдсасад	420
ссадсддада	дбсдбсаббд	ссдддбасад	ддбаддбдаб	даддсадддд	ббдсадббдд	480
бдбссасдаб	дсссасбдбд	дддабдббса	бсббддсбдс	дбсбсбсасд	дссасдбдбд	540
дсбсааадаб	дббдббдадс	дбдбдсадда	адабдабдад	дбссддсадд	сддассдбдд	600
ддссааадад	даддсдсдсд	ббддбсадса	бдссдссссб	даадбадсда	дбдбдддсдб	660
асбсдссаса	дбсасдддсс	абдббсбсаа	бсаддбасда	даасбдссдд	ббдсддсбба	720
бааасаадаб	дабдсссббд	сддбаддсса	бдбдддсддб	даадббсаад	дссадсбдда	780
ддбдсдбддс	бдбсбдббсс	аддбсдабда	¢960969910	саддсддсбс	ссааадабдб	840
асддсбссаб	ааассбдсса	дадассссас	сааддсаадд	дддабдадад	ббсасддддс	900
сабсбссасб	ддсбссббдс	аддаасасад	асдсссасса	дддасбсссд	ддсбссбсбд	960
бдддддсасб	абдддсбддд	аадсасаабб	бдсаасдсбс	сссдбдбдса	бддасадсад	1020
бдсадассса	бссаддссас	сссбсбдсаб	дссбсдбсбс	дбддсббаас	сссбссбасс	1080
сбсбассбсб	бсссдаадда	абссбаабад	аасбдасссс	абабддабдб	дбддасабсс	1140
аасабдасдс	сааааддаса	ббсбдссссд	бдсадсбсас	адддсадссд	ссбссдбсас	1200
бдбссбсббс	ссдаддсббб	дсддабдадд	ссссбсбддд	дббддасбба	дсддддбдсб	1260
сбдддссааа	адсаббаадд	дабсадддса	д			1291

- 34 011747 <210> 14 <211> 711 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т1зс_£еаДиге <223> последовательность ЗТАК14 <400> 14

сссдддасса	дддДссдДдд	ДсДДддДддд	сасДддсдДс	ДДсДДдсДдд	дДдДДДДссД	60
дДдддДсДсД	ддсааддсас	ДДДДДдДддс	дсДдсДДдДд	сДдДдДдсдд	даддддсадд	120
ДдсДсДДДсс	ДсДДддадсД	ддасссДсДд	дддсдддДсс	ссдДсддссД	ссДДдДдДдД	180
ДДДсДдсасс	ДддДасадсД	ддаДддссДс	сДсааДдссд	ДсдДсдсДдс	ДддадДсдда	240
сдссДсдддс	дссДдДасдд	сдсДсдДдас	ДсдсДДДссс	сДссДДдсдд	ддсдддсддд	300
ссДДДДааДс	ссасДДДДаД	ДсДдДасДдо	ДДсДдааддд	сддДдддддД	ДдсДддсДДД	360
дДдсДдсссД	ссДДсДссДд	сдДддДсдДд	дДсдДдассД	ДддассДдад	дсДДсДдддс	420
ДдсасдДДДд	ДсДДДдсДаа	ссдддддадд	ДсДдсадаад	дсдаасДссД	ДсДддасдсс	480
садсаддссс	ДдссддДдса	ссассддддд	адссддсДсД	ДддДдддаДД	ДсдададДда	540
сДДсдссдаа	ДДДДсаДдДд	ДдДсДддДДД	сДДсДссасД	дасссаДсас	аДДДДДдддД	600
сДсаДдсДдД	сДДДДсДсаД	ДсадааасДд	ДДсДаДДДсД	дсссДдаДдс	ДсДдсДсааа	660
ддадДсДдсД	сДдсДсаДдс	ДдасДдддда	ддсададссс	ДддДссДДдс	£	711

<210> 15 <211> 1876

<212> <213>	ДНК Ното зардепз
<220> <221> <223>	т1зс_£еаДиге последовательность 5ТАК15
<400>	15
дадДссаада	ДсааддДдсс	адсаДсДДдД	дадддссДДс	ДДдДДасдДс	асДсссДадс	60
дааадддсаа	адададдддд	адсаададаа	аддддддсдд	аасДсдДссД	ДдДадаадад	120
дсссаДДссс	дадасааДдд	саДДсаДсса	ДДсасДссас	ссДсаДддсс	ДсассассДс	180
ДсаДдаддсД	ссассДссса	дсссДддДДД	дДДддддаДД	аааДДДссаа	сасаДдссДД	240
ДДдддддаса	ДдДДааааДД	аДадсасссс	аааДдДДаса	сДаДсДДДДд	аДдадсддДа	300
дДДсДдаДДД	ДаадДсДадс	ДддссДасДД	ДДДсДДдсас	дДдддаДдсД	ДДсДдссДдД	360

- 35 011747

Ессадддсад	дсадсЕсЕЕс	ЕсЕдЕсссЕс	ЕдсЕддсссс	ассЕсаЕссЕ	сЕдЕЕдЕссЕ	420
СЕЕСССЕССЕ	ЕсЕдЕдсссЕ	ддддЕссЕдд	ЕдддддЕдЕд	асЕдЕсаасЕ	дсдЕЕдддсЕ	480
аасЕЕЕЕЕЕс	ссЕдсЕддЕд	дсссдЕааЕд	ааадааадсЕ	ЕсЕЕдсЕссс	аадЕЕссЕЕа	540
ааЕссаадсЕ	саЕадасаас	дсддЕсЕсас	адсаддссЕд	дддссадссб	сасдЕдадсс	600
ссЕЕсссЕдд	ЕдЕадЕсасЕ	ддсаЕддддд	ааЕдддаЕЕЕ	СсЕдЕЕдссс	ЕасЕдЕдЕдд	660
сЕдаддЕддд	ддЕЕдсЕЕсс	Еддадссадд	ссЕЕдЕддаа	дддсадЕдсс	сасЕдсадЕд	720
даЕдсЕдддс	ссЕдааЕсЕд	ассссадЕдЕ	ЕсаЕЕддсЕс	ЕдЕдадассс	адЕдадддса	780
дддадддаад	ЕддадсЕддд	дкдадаадЕа	даддсссЕдс	адддсссасд	Едссадссас	840
саддссЕсад	асЕаддсЕса	даЕдасддад	адсЕдсасас	сЕдсссаасс	саддсссЕдс	900
адЕдсссаса	Едссадссдс	Еддддсссад	асЕЕдсЕсса	дадддсддад	адсЕЕЕасас	960
сддсссаасс	саддссаЕдд	сЕссаааЕдс	дЕдасадЕЕЕ	ЕдсЕдЕЕдсЕ	ЕсЕЕЕЕадЕс	1020
аЕЕдЕсаадЕ	ЕдаЕдсЕЕдЕ	ЕЕЕдсададд	ассааддсЕЕ	ЕаЕдаасоЕа	ЕЕасссЕдЕд	1080
ЕдаададЕЕЕ	сассаддЕба	ЕддаааЕЕЕс	ЕЕЕаааасса	ЕассасадЕЕ	ЕЕЕЕсаЕЕаЕ	1140
ЕсаЕдЕаЕаЕ	ЕЕЕЕаааааб	ааЕЕасЕдса	сЕсадЕадаа	ЕаасаЕдааа	аЕдЕЕдссЕд	1200
ЕЕадсссЕЕЕ	ЕссадЕЕЕдс	сссдадааЕа	сЕдддддсас	ЕЕдЕддсЕдс	ааЕдЕЕЕаЕс	1260
сЕдсддсадс	ЕЕЕдссаЕда	адЕаЕсЕсас	ЕЕЕЕаЕЕаЕЕ	аЕЕЕЕЕдсаЕ	ЕдсЕсдадЕа	1320
ЕаЕЕдасЕЕЕ	ддааасаааа	дасаЕсаЕЕс	ЕаЕЕЕаЕадс	аЕЕаЕдЕЕЕЕ	ЕадЕадЕддЕ	1380
аЕЕЕссаЕаЕ	асаадаЕаса	дЕааЕЕЕЕсс	дЕсааЕдааа	аЕдЕсаааЕЕ	сЕадааааЕд	1440
ЕаасаЕЕссЕ	аЕдсдЕддЕд	ЕЕаасаЕсдЕ	ЕсЕсЕаасад	ЕЕдЕЕддссд	аадаЕЕсдЕЕ	1500
ЕдаЕдааЕсс	даЕЕЕЕЕсса	аааЕадссда	ЕЕсЕдаЕдас	ЕсадасдаЕЕ	СЕдаЕдЕЕсЕ	1560
дЕЕЕадаааЕ	ааЕЕссаада	асадЕЕЕЕЕа	саЕЕЕЕаЕЕЕ	ЕсасаЕЕдаа	ааЕсадЕсад	1620
аЕЕЕдскЕса	дссЕсааада	дсасдЕЕЕаЕ	дЕааааЕЕаа	аЕдадЕдсЕд	дсадссадсЕ	1680
дсдсЕЕЕдЕЕ	ЕЕЕсЕаааЕд	ддаааадддЕ	ЕаааЕЕЕсас	ЕсадсЕЕЕЕа	ааЕдасадсд	1740
сасадссЕдЕ	дЕсаЕададд	дЕЕддаддад	аЕдасЕЕЕаа	сЕдссЕдЕдд	ЕЕаддаЕссс	1800
ЕЕЕсссссад	дааЕдЕсЕдд	дадсссасЕд	ссдддЕЕЕдс	ЕдЕссдЕсЕс	дЕЕЕддасЕс	1860
адЕЕсЕдсаЕ	дЕасЕд					1876

<210> 16 <211> 1282 <212> ДНК <213> Ното зарЁепз

- 36 011747 <220>

<221> тазс/еакиге <223> последовательность ЗТАК16 <400>16

сдсссасскс	ддскккссаа	адкдскддда	ккасаддсак	дадксаскдс	дсссаксскд	60
аккссаадкс	кккадакаак	аасккааскк	ккксдассаа	ккдссаакса	ддсааксккк	120
даакскдсск	акдасскадд	асакссскск	ссскасаадк	кдссссдсдк	ккссадасса	180
аассаакдка	саксккасак	дкаккдаккд	аадккккаса	кскссскааа	асакакаааа	240
ссаадскака	дкскдассас	сксаддсасд	кдкксксадд	асскссскдд	ддскакддса	300
кдддксскдд	кссксадакк	кддсксадаа	кааакскскк	сааакакккк	ссадаакккк	360
асксккккса	ксассаккас	скаксассса	каадксадад	ккккссасаа	сссскксскс	420
адакксадка	акккдскада	акддссасс^	аасксаддаа	адкаккккас	ккасааккас	480
саакккакка	кдаадааскс	аааксаддаа	кадссааакд	даададдсак	адддаааддк	540
акддаддаад	дддсасааад	сккссакдсс	скдкдкдсас	ассассскск	садсаксккс	600
акдкдкксас	саасксадаа	дскскксааа	скккдксакк	каддддкккк	какддсадкк	660
ссаскакдка	ддсакддккд	акаааксаск	ддксаксддк	дакадааскс	кдкскссадс	720
ксскскскск	скссксссса	даадксскда	ддкддддскд	ааадккксас	ааддккадкк	780
дскскдасаа	ссадсссска	ксскдаадск	аккдаддддк	сссссаааад	ккассккадк	840
акддккддаа	даддсккйкк	акдаакааса	ааадакдскс	скакккккас	саскадддад	900
сакакссаад	ксккдсддда	асааадсакд	ккаскддкад	сааакксака	саддкадака	960
дсааксксаа	кксккдсскк	сксадаадаа	адаакккдас	саадддддса	кааддсадад	1020
кдадддасса	адакаадккк	кададсадда	дкдааадккк	аккааааадк	кккаддсадд	1080
аакдааадаа	адкааадкас	акккддаада	дддссаадкд	ддсдасакда	дададксааа	1140
сассакдссс	кдкккдакдк	ккддсккддд	дксккакакд	акдасакдск	кскдадддкк	1200
дсакссккск	сссскдаккс	кксссккддд	дкдддскдкс	сдсакдсаса	акддсскдсс	1260
адсадкаддд	аддддссдса					1282

<210>17 <211>793 <212> ДНК <213> Нолю зартепз <220>

<221> т1зс_кеакиге <223> последовательность ЗТАК17

- 37 011747 <400> 17

аЕссдадддд	аддаддадаа	даддааддсд	адсадддсдс	сддадсссда	ддЕдЕсЕдсд	60
адаасЕдЕЕЕ	ЕаааЕддЕЕд	дсЕЕдааааЕ	дЕсасЕадЕд	с^аад^^ддс^	ЕЕЕсддаЕЕд	120
ЕсЕЕаЕЕЕаЕ	ЕасЕЕЕдЕса	ддЕЕЕссЕЕа	аддададддЕ	дЕдЕЕддддд	Едддддадда	180
ддЕддасЕдд	ддааассЕсЕ	дсдЕЕЕсЕсс	ЕссЕсддсЕд	сасадддЕда	дЕаддааасд	240
ссЕсдсЕдсс	асЕЕаасааЕ	сссЕсЕаЕЕа	дЕаааЕсЕас	дсддадасЕс	ЕаЕдддаадс	300
сдадаассад	ЕдЕсЕЕсЕЕс	садддсадаа	дЕсассЕдЕЕ	дддаасддсс	сссдддЕссс	360
ссЕдсЕдддс	ЕЕЕссддсЕс	ЕЕсЕаддсдд	СсЕдаЕЕЕсЕ	ссЕсадссс!	ссасссадсд	420
ЕсссЕсаддд	асКЫсаса	ссЕссссасс	сссаЕЕЕсса	сЕасадЕсЕс	ссадддсаса	480
дсасЕЕсаЕЕ	дасадссаса	сдадссЕЕсЕ	сдЕЕсЕсЕЕс	ЕссЕсЕдЕЕс	сЕЕсЕсЕЕЕс	540
ЕсЕЕсЕссЕс	ЕдЕЕссЕЕсЕ	сЕЕЕсксЕд!	саЕааЕЕЕсс	ЕЕддЕдсЕЕЕ	сдссассЕЕа	600
аасаааааад	адаааааааЕ	ааааЕааааа	ааасссаЕЕс	Едадссааад	ЕаЕЕЕЕаада	660
ЕдааЕссаад	ааадсдассс	асаЕадсссЕ	ссссасссас	ддадЕдсдсс	аадасдсасс	720
саддсЕссаЕ	сасадддссд	ададсадсдс	сасЕсЕддЕс	дЕасЕЕЕЕдд	дЕсаададаЕ	780
сЕЕдсаааад	адд					793

<210> 18 <211> 492 <212> ДНК <213> Нолю зараепз <220>

<221> т1зс_£еаЕиге <223> последовательность 5ТАК18 <400> 18

аЕСЕЕЕЕЕдс	ЕсЕсЕаааЕд	ЕаЕЕдаЕддд	ЕЕдЕдЕЕЕЕЕ	ЕЕЕсссассЕ	дсЕааЕаааЕ	60
аЕЕасаЕЕдс	аасаЕЕсЕЕс	ссЕсаасЕЮ	аааасЕдсЕд	аасЕдаааоа	аЕаЕдсаЕаа	120
аадааааЕсс	ЕЕЕдсадаад	ааааааадсЕ	аЕЕЕЕсЕссс	асЕдаЕЕЕЕд	ааЕддсасЕЕ	180
дсддаЕдсад	ЕЕсдсаааЕс	сЕаЕЕдсска	ЕЕсссЕсаЕд	аасаЕЕдЕда	ааЕдааассЕ	240
ЕЕддасадЕс	ЕдссдсаЕЕд	сдсаЕдадас	ЕдссЕдсдса	аддсаадддЕ	аЕддЕЕссса	300
аадсасссад	ЕддЕаааЕсс	ЕаасЕЕаЕЕа	ЕЕсссЕЕааа	аЕЕссааЕдЕ	аасаасдЕдд	360
дссаЕаааад	адЕЕЕсЕдаа	саааасаЕдЕ	саЕсЕЕЕдЕд	даааддЕдЕЕ	ЕЕЕсдЕааЕЕ	420
ааЕдаЕддаа	ЕсаЕдсЕсаЕ	ЕЕсааааЕдд	аддЕссасда	ЕЕЕдЕддсса	дсЕдаЕдссЕ	480

- 38 011747 дсаааРРаРс ср

92 <210> 19 <211> 1840 <212> ДНК <213> Ното 5ар1еП5 <220>

<221> т±зс_£еаРиге <223> последовательность ЗТАК19 <400> 19

РсасРРссРд	аРаРРРРаса	РРсааддсРа	дсРРРаРдса	рардсаасср	дрдсадррдс	60
асадддсРРР	дрдррсадаа	адасрадсрс	ррддррраар	асРсРдРРдР	рдссарсррд	120
адаРРсаРРа	РааРаРаарр	РРРдааРРРд	рдррррдаас	дРдаРдРсса	аРдддасааЕ	180
ддаасаррса	сараасадад	дадасаддрс	аддРддсадс	сРсаарРсср	ЕдссасссРР	240
РРсасаРаса	дсаРРддсаа	рдссссарда	дсасааааРР	рдддддаасс	аРдаРдсРаа	300
дасРсааадс	асаРаРааас	аРдРРассРс	РдРдасРааа	адаадРддад	дрдсрдасад	360
сссссададд	ссасадррра	РдРРсааасс	аааасРРдсР	радддрдсад	ааадааддса	420
аРддсадддР	сРаадаааса	дсссаРсаРа	РссРРдРРРа	РРсаРдРРас	дрсссрдсар	480
даасРааРса	сРРасасРда	аааРаРРдас	ададдаддаа	аРддааадаР	адддсаассс	540
аРадРРсРРР	РРссРРРРад	РсРРРссРРа	РсадРааасс	ааадаРадРа	РРддРааааР	600
дрдрдрдадр	РааРРааРда	дРРадРРРРа	ддсадРдРРР	ссасРдРРдд	ддраадааса	660
аааРаРаРад	дсРРдРаРРд	адсРаРРааа	РдРаааРРдР	ддааРдРсад	РдаРРссаад	720
РаРдааРРаа	аРаРссРРдР	аРРРдсаРРР	ааааррддса	сРдаасааса	аадаРРааса	780
дРааааРРаа	СааРдРаааа	дРРРааРРРР	РасРРадааР	дасаРоаааР	адсааарааа	840
адсассаРда	РаааРсаада	дададасРдР	ддааадаадд	аааасдРРРР	РаРРРРадРа	900
РаРРРаардд	дасРРРсРРс	сРдаРдРРРР	дррРРдРРРР	дададададд	дардрддддд	960
садддаддРс	ссаррррдрр	дсссаддсРд	дасррдаасР	ссРдддсРсс	адсРаРссрд	1020
ссРРадсРРс	РРдадРадсР	дддасРасад	дсасасасса	садрдрсрда	саРРРРсРдд	1080
аРРРРРРРРР	РРРРРРРаРР	РРРРРРдРда	дасаддРРсЕ	ддсРсРдРРа	сРсаддРРдс	1140
адрдсадрдд	саРдаРадсд	дсРсасРдса	дссРсаассР	ссРсадсРРа	адсРасРсРс	1200
ссасРРсадс	сРссРдадРа	дссаддасРа	садррдрдрд	ссассасасс	РдРддсРааР	1260
РРРРдРадад	акддддРсРс	РссасдРРдс	сдаддсРддР	сРссаасРсс	РддРсРсаад	1320
сдаассРссР	дасррддсср	сссдаадРдс	РдддарРаса	ддсррдадсс	асРдсаРсса	1380

- 39 011747

дссЕдСссРс	СдЕдЕСааас	съасъссааС	СГдСспсса	бсСс!аса1а	аасддсбсМ;	14 4 0
ПсааадНс	ссакадассЪ	сас1д11дс1.	ааЪсЕаакаа	6ааа16а1:с6	сссГЪГГсЫ:	1500
асаРддббса	Рсад£адсад	саРбадаПд	ддсРдсРсаа	глсгиичд	РаРабРисср	1560
ОсаПЪддсЬ	^сЬддддсаС	сасасЪсГсЬ	ЬсдадЬ!ас1	саСЪссСса!	1да5адсНс	1620
ббссРад^сС	-спгасСдд		^сЪсссбдас	бссНааГаб	ЕдСПЛСсСс	1680
сссаддсСИ	адИсПадс	ссссЫсГдг	1а1сЬа£Па	сасссааИс	ШсададЪс	1740
СсаЬссадад	'Ьса'СдаасСР	ааассбдбМ:	с£д£дсада£	ааЬРсасаЬЬ	аСЪабабсбс	1800
садсссадас	ЪсЬсссдсаа	асЪдсадаск	даЕссЕасЕд			1840

<210> <211> <212> <213>

20 780 ДНК Ното заргепэ

<220> <221> <223>	т±зс £еа!иге последовательность 8ТАК20
<400>	20

даГсРсаад!	ПсааЪа1:са	РдННддса	ааасаНсда	^дсРсссаса	сссИассЬа	60
аадс£ассад	аааддсСНд	ддаасЕдЕса	асададсбас	адаааад£са	двааадасса	120
а1ддасссс€	сааасааааа	садссаадсР	ЬИсЬдссаа	ааада£дас£	дадаадас^д	180
Пааадсааа	ааас£с£дН	сс£дсс£сад	аЕдаЬддсСа	£ссадааа1:а	даааааНаС	240
Песен саа	£сс£с£аддс	Исдадад££	1£.дасс1дсс	Ьдаададсас	садаПдсас	300
а! с! ссс сП	дадСдаадкд	ссЪсРсаЕда	ЕасНдаЬда	ддадададад	сПдаааадс	360
гдМПсадс£	дддссссссЪ	1сассГ_Ида	ада£дссс£с	ЕссассаРдд	аааЪссааЕс	420
ГдИдсад^с	СссМПаадс	аИсСдИда	сссЕддаъдЬ	ЕдааН.дсса	ссг.дШдс:	480
сЪдасабада	иШаааЫ.	1α£ίадЬдс!	НададЪПд	ЬдЪабаНИс	5а11ааСааа	540
дсаПаНбд	Пбаасадаа	ааааадабаР	аСасНаааб	ссваааабаа	аа^аассаН	600
ааааддаааа	асаддадлда	Саас1аа£аа	дддаасааад	дасаРаааа!;	ддда£аа£аа	660
ЬдсПааЕсс	ааааЬааадс	адааааРдаа	даааааЪдаа	а£даадааса	даЛааэкада	720
ааасааа^ад	сааГаСдааа	дасааасПд	ассддд£д£д	д£ддс£да£д	сс£дЬаа£сс	780

<210> 21 <211> 607 <212> ДНК

- 40 011747 <213> Ното зараепз <220>

<221> т!зс_Геабиге <223> последовательность ЗТАК21 <400> 21

дабсаабааб	ббдбаабадб	садбдаабас	аааддддбаб	абасбааабд	сбасадаааб	60
бссаббссбд	ддбабааабс	сбадасабаб	ббабдсабаб	дбасассаад	абабабсбдс	120
аадаабдббс	асадсааабс	бсбббдбадб	адсааааддс	сааааддбс1	абсаасаада	180
аааббаабас	аббдбддсас	абаабддсаб	ссббабдсса	абааааабдд	абдаааббаб	240
адббаддббс	ааааддсаад	ссбссадаба	абббабабса	бабааббсса	бдбасаасаб	300
бсаасаасаа	дсаааасбаа	асабабасаа	абдбсаддда	ааабдабдаа	сааддббада	360
ааабдаббаа	бабаааааба	сбдсасадбд	абаасаббба	абдадааааа	аадааддаад	420
ддсббаддда	дддассбаса	дддаасбсса	аадббсабдд	баадбасбаа	абасабаабс	480
ааадсасбса	ааабадаааа	баббббадба	абдббббадс	бадббаабаб	сббасббааа	540
асааддбсба	ддссаддсас	ддбддсбсас	ассбдбаабс	ссадсасббб	дддаддсбда	600

ддсдддб 607

<210>	22
<211>	1380
<212>	ДНК
<213>	Ното	зархепз
<220>
<221>	тазе	£еа£иге
<223>	последовательность ЗТАК22
<400>	22

сссббдбдаб	ссасссдссб	бддссбссса	аадбдебддд	аббасаддсд	бдадбсасба	60
сдсссддсса	сссбсссбдб	абаббабббс	баадбабасб	аббабдббаа	ааааадббба	120
аааабаббда	бббаабдааб	бсссадааас	баддабббба	сабдбсасдб	бббеббабба	180
бааааабааа	аабсаасааб	ааабабабдд	баааадбааа	аадаааааса	аааасааааа	240
дбдааааааа	бааасаасас	бссбдбсааа	ааасаасадб	бдбдабаааа	сббаадбдсс	300
бдааааббба	дааасабссб	бсбааадаад	ббебдаабаа	аабааддааб	аааабаабса	360
сабадббббд	дбеаббддбб	ебдбббабдб	дабддаббаб	дбббаббдаб	ббдбдбабдб	420
бдаасббабс	бсаабадабд	садасааддс	еббдабаааа	дбббббааса	ссббббсабд	480
ббдаааасбс	бсаабадасб	аддбаббдаб	дааасабабс	бсаааабааб	адаадсбабб	540

- 41 011747

раРдаРааас	ссаРадссаа	РаРсаРасРд	адрдддсааа	адсРддаадс	аРРсссРРЕд	600
аааасРддса	саадасаадд	аРдсссРсРс	РсассасРсс	РаРРааардР	адРаРРддаа	660
дРРсРддсса	дадсааРсад	дсаддадааа	дааааддРаР	РааааРадда	адададдаад	720
РсаааРЕдРс	РсРдРРРдса	дРааасаРда	ррдрараррр	адаааасссс	аРРдРсРсаР	730
ссРааааасР	ссРРаадсРд	аРааасаасР	РсадсааадР	сРсаддаРас	ааааРсааРд	340
РдсаааааРс	асаадсаРРс	сРаРасассд	аРааРадаса	дсадададсс	аааРсаРдад	900
рдаадрссса	РРсасааРРд	сРРсааадаа	ааРааааРас	РРаддааРас	аасРРРсасд	960
ддасаРдаад	дасаррррса	аддасаасРа	аааассасРд	сРсааддааа	Рдадададда	1020
сасааадааа	Рддаааааса	РРссаРдсРс	аРддаадааР	сааРаРсаРд	аааарддсса	1080
РасРдсссаа	адРааРРРаР	адаРРсааРд	сРаассссаР	саадссасса	РРдасРРРсР	1140
РсасадаасР	адааааааас	РаРРРРаааа	сРсаРаРдРа	дРсааааада	дРсддРаРад	1200
ссаадасааР	ссРаадсаРа	аадаасааад	сРддаРдсаР	сасдсрдасР	рсааассаРа	1260
сРасааддсР	асадРаасса	ааасадсаРд	драсрддрас	саааасадаР	адаРадассд	1320
аРадаасада	асададдссР	сддаааРаас	ассасасаРс	РасаасссРР	РдаРсРРсаа	1380

<210> 23 <211> 1246 <212> ДНК <213> Ното зар1епз <220>

<221> т1зс_£еаРиге <223> последовательность 5ТАК23 <400> 23

аРссссЬсаР	ссРРсадддс	адсРдадсад	ддссРсдадс	адсРддддда	дссРсасРРа	60
аРдсРссРдд	дадддсадсс	адддадсаРд	дддРсРдсад	дсаРддРсса	дддРссРдса	120
ддсддсасдс	ассардрдса	дссдссссса	ссРдРРдсРс	РдссРссдсс	ассРддссаР	180
дддсРРсадс	адссадссас	ааадРсРдса	дсРдсРдРас	аРддасаада	адсссасаад	240
садсРададд	ассРРдРдРР	ссасдрдссс	адддадсаРд	дсссасадсс	сааадассад	300
Рсаддадсад	дсаддддсРР	сРддсаддсс	садсРсРасс	РсРдРсРРса	сасадаРддд	360
адаРРРсРдр	РдрдаРРРРд	адрдардрдс	сссРРРддРд	асаРссаада	РадРРдсРда	420
адсассдсРс	РаасааРдРд	РдРдРаРРсР	даааасдада	асРРсРРРаР	РсРдаааРаа	480
ррдардсааа	аРаааРРадР	ррддарррда	ааррсраррс	аРдРаддсаР	дсасасаааа	540

- 42 011747

дЕссаасаРЕ	дсаЕаРдаса	сааадаааад	ааааадсЕЕд	саррссЕраа	аРасаааЕаР	600
сЕдРЕаасЕа	ЕаЕЕЕдсааа	ЕаЕаЕЕРдаа	ЕасасЕЕсЕа	ЕЕаРдЕЕаса	ЕаРааЕаРРа	660
ЕаРдРаЕаРд	ЕаРаРаРааЕ	аРасаЕаРаР	аЕдРЕасаРа	ЕааЕаРасРЕ	сЕаРЕаРдРЕ	720
асаЕаЕааРа	ЕЕЕаЕсЕаРа	адЕаааЕаса	ЕаааЕаРааа	даЕЕЕдадРа	дсЕдРадаас	780
аГЕдРсЕЕаЕ	дЕдРЕаРсад	сЕасЕасЕас	аааааЕаРсЕ	сЕЕссасЕЕа	ЕдссадрЕЕд	840
ссаРаЕаааЕ	аРдаРсРЕсЕ	саРРдаЕддс	ссадддсаад	адРдсадЕдд	дРасЕРаРРс	900
ЕсЕдрдадда	дддаддадаа	аадддаасаа	ддадааадЕс	асааадддаа	аасЕсРддРд	960
ЕЕдссааааЕ	дЕсаадРЕЕс	асаРаЕЕссд	адасддаааа	ЕдасаРдЕсс	сасадаадда	1020
сссЕдсссад	сЕааРдРдЕс	асадаРаРсЕ	саддаадсЕЕ	аааРдаЕЕЕЕ	РРРаааадаа	1080
аададаЕддс	аСЕдРсасЕЕ	дЕРРсРЕдРа	дсЕдаддсЕд	ЕдддаРдагд	садаРЕГсРд	1140
дааддсааад	адсЕссЕдсЕ	ЕРЕРСсасас	сдадддасЕЕ	Есаддаасда	ддссадддрд	1200
сЕдадсасЕа	сассаддааа	ЕсссСддада	дРдЕЕРЕЕсЕ	ЕасЕЕа		1246

<210> 24 <211> 939 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еаЕите <223> последовательность 5ТАН24 <400> 24

асдаддРсас	дадЕЕсдада	ссадссЕддс	саадаЕддЕд	аадсссЕдЕс	ЕсрасЕаааа	60
аРасаасаад	Еадссдддсд	сддрдасддд	сдссЕдЕааЕ	сссадсРасЕ	саддаддсЕд	120
аадсаддада	аЕсЕсЕадаа	сссаддаддс	ддаддрдсад	ЕдадсЕдада	сЕдссссдсЕ	180
дсасЕсЕадс	сРдддсааса	садсаадасЕ	сЕдЕсЕсааа	ЕаааЕаааЕа	ааЕаааЕааа	240
РаааРааара	ааЕаааРааа	Радаааддда	дадррддаад	ЕадаЕдааад	адаадаааад	300
аааЕссРада	ЕЕЕССЕаРсЕ	дааддсасса	Едаадардаа	ддссассЕсЕ	ЕсЕдддссад	360
дЕссЕсссдР	ЕдсаддЕдаа	ссдадЕЕсЕд	дссЕссаЕРд	дадассааад	дадаЕдасЕЕ	420
РддссЕддсЕ	ссЕадЕдадд	аадссаЕдсс	ЕадЕссЕдЬЕ	сЕдЕЕЕдддс	ЕРдаЕссЕдР	480
аРсасЕЕдаР	ЕдЕсЕсЕссЕ	ддасЕЕЕсса	ЕддаЕЕссад	ддаЕдсаасЕ	дадаадЕЕРа	540
ЕЕЕЕЕааРдс	асЕЕасЕЕда	адРаададЕЕ	аРЕЕЕаааас	аРЕЕЕадсаа	аддаааЕдаа	600
ЕЕсЕдасадд	ЕЕЕЕдсасРд	аадасаЕЕса	саЕдЕдадда	ааасаддааа	ассасЕаРдс	660
Еадааааадс	аааЕдсЕдРЕ	дадаЕРдРсР	сасааасаса	ааЕЕдсдрдс	садсаддрад	720

- 43 011747

дбббдадссб	саддРЪдддс	асаРРРРасс	РРаадсдсас	ЪдбОддбдда	асббааддбд	7Э0
асСдеаддас	б+абаЪабас	абасабасаб	аРаабабаба	Расабаббба	бдбдбабаба	840
сасасасаса	сасасасаса	сасасадддб	сббдсбабсб	рдсссадддб	ддбсбссаас	900
РсСдддбсбс	аадсдабсср	сЪдссЪсссс	РРсссааад			939

<210> 25 <211> 1067 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т!зс_£еа6иге <223> последовательность 5ΤΆΒ.25 <400> 25

садссссбсб	РдбдРЪРбСс	бббабббсбс	дбасасасас	дсадббб+аа	дддбдабдбд	60
бдбабаабба	аааддасссб	Рддсссабас	бббссбаабЛ	сбббадддас	бдддаббддд	120
бРОдасбдаа	абабдЪбЪбд	дбддддабдд	дасддбддас	ббссабЪзбс	ссбааасбдд	180
адббббддбс	ддбааесааа	асбаааадаа	ассбсбддда	дасбддааас	сбдаббддад	240
сасбдаддаа	саадддаабд	ааааддсада	сбсбсбдаас	дбРРдабдаа	абддасбсбб	300
дбдаааабба	асадбдааба	РбсасРдббд	сасбдбасда	адбсбсбдаа	абдбааббаа	360
аадЪббОРаб	Ъдадсссссд	адсбббддсб	рдсдсдбарр	бббссддбсд	сддасабссс	420
ассдсдсада	дссбсдссбс	сссдсбдссс	РсадссЪссд	аРдасббссс	сдсссссдсс	480
сбдсбсддбд	асадасдббс	басбдсббсс	аабсддаддс	асссббсдсд	ддадсддсса	540
абсдддадсб	ссддсаддсд	дддаддссдд	дссадббада	бббддаддбР	саасббсаас	600
абддссдаад	саадбадсдс	саабсбаддс	адсддсбдбд	аддаааааад	дсардадддд	660
Рсд+сббсдд	аабсрдрдсс	асссддсасб	ассабббсда	дддбдаадсб	ссбсдасасс	720
абддбддаса	сРРбРсббса	даадсбддбс	дссдссддса	ддбааадбдд	асдсадссдс	760
ддбдддадрд	бббдббддса	ссдаадсбса	аабсссдсда	ддбсаддасд	дссдсаддсб	840
ддсдсдсддр	дасдбдддбс	сдсдббдддд	дсддддсадб	сддасдаддс	дасссадбса	900
аабссбдадс	сббаддадбс	адддбаббса	сдсасбдаба	ассбдбадсд	дассдддара	960
дсбадсбасб	ссббссбаса	ддаадссссд	ббббсасбаа	аабббсаддр	ддрбдддадд	1020
ааадабадад	ссРРбдсааа	ббададсадд	д666666а66	РбРРбаб		1067

<210> 26

- 44 011747 <211> 540 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>

<221> т1зс_£еаЕиге <223> последовательность 8ТАН.26 <400>26

сссссЕдаса	адссссадЕд	ЕдЕдаЕдЕЕс	сссасЕсЕдЕ	дЕссаЕдсаЕ	ЕсЕсаЕЕдЕЕ	60
саасЕсссаЕ	сЕдЕдадЕда	даасаЕдсад	ЕдЕЕЕддЕЕЕ	ЕсЕдЕссЕЕд	адаЕадЕЕЕд	120
сЕдадааЕда	ЕддЕЕЕссад	сЕЕсаЕссаЕ	дЕссЕЕдсаа	аддаадЕдаа	сЕЕаЕссЕЕЕ	180
ЕЕЕаЕддсЕЕ	саЕадЕаЕЕс	саЕддсасаЕ	аЕдЕдссаса	ЕЕЕЕЕЕЕааЕ	ссадЕсЕаЕс	240
аЕЕдаЕддас	аНЕдддЕЕд	дЕЕссаадЕс	ЕЕЕдсЕаЕЕд	ЕдааЕадсас	сасааЕЕаас	300
аЕаЕдЕдЕдс	аЕдЕаЕасаЕ	сЕЕЕаЕадЕа	дсаЕдаЕЕЕа	ЕааЕссЕЕсд	ддЕаЕаЕасс	360
сЕдЕааЕддд	аЕсдсЕдддЕ	саааЕддЕаЕ	ЕЕсЕадЕЕсЕ	адаЕссЕЕда	ддааЕсасса	420
сасЕдсЕЕЕс	сасааЕддЕЕ	даасЕааЕЕЕ	асдсЕсссас	садсадЕдЕа	ааадсаЕЕсс	480
ЕаЕЕЕсЕсса	сдЕссЕсЕсс	адЕаЕсЕдЕЕ	дЕЕЕссЕдас	ЕЕЕЕЕааЕда	ЕсаЕсаЕЕсЕ	540

<210>27 <211>1520 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еаЕиге <223> последовательность 8ТАК27 <400> 27

сЕЕддсссЕс	асааадссЕд	Еддссаддда	асааЕЕадсд	адсЕдсЕоаЕ	ЕЕЕдсЕЕЕдЕ	60
аЕссссааЕд	сЕдддсаЕаа	ЕдссЕдссаЕ	ЕаЕдадЕааЕ	дссддЕадаа	дЕаЕдЕдЕЕс	120
ааддассааа	дЕЕдаЕаааЕ	ассааадааЕ	ссададаадд	дададаасаЕ	ЕдадЕададд	180
аЕадЕдасад	аададаЕддд	аасЕЕсЕдас	аададЕЕдЕд	аадаЕдЕасЕ	аддсаддддд	240
аасадсЕЕаа	ддададЕсас	асаддассда	дсЕсЕЕдЕса	адссддсЕдс	саЕддаддсЕ	300
дддЕддддсс	аЕддЪадсЕЕ	ЕсссЕЕссЕЕ	сЕсаддЕЕса	дадЕдЕсадс	сЕЕдаасЕЕс	360
ЕааЕЕсссад	аддсаЕЕЕаЕ	ЕсааЕдЕЕЕЕ	сЕЕсЕадддд	саЕассЕдсс	сЕдсЕдЕдда	420
адасЕЕЕсЕЕ	сссЕдЕдддЕ	сдссссадЕс	сссадаЕдад	асддСЕЕддд	Есадддссад	480
дЕдсассдЕЕ	дддЕдЕдЕдс	ЕЕаЕдЕсЕда	ЕдасадЕЕад	ЕЕасЕсадЕс	аЕЕадЕсаЕЕ	540
дадддаддЕд	ЕддЕааадаЕ	ддадаЕдсЕд	ддЕсасаЕсс	сгадададдЕ	дЕЕссадЕаЕ	600

- 45 011747

дддсасакдд	дадддскдда	аддакаддкк	аскдскадас	дкададаадс	сасакссккк	660
аасассскдд	скккксссас	кдссаадакс	садааадксс	ккдкддкккс	дскдскккск	720
сскккккккк	кккккккккк	кккскдадак	ддадкскддс	кскдксдссс	аддскддадк	780
дсадкддсас	даккксддск	саскдсаадк	кссдссксск	аддкксакас	саккскссса	840
ссксадсскс	ссдадкадск	дддаскасад	дсдссассас	асссадскаа	ккккккдкак	900
ккккадкада	дасддсдккк	сассакдкка	дссаддакдд	ксккдакссд	сскдссксад	960
ссксссааад	кдскдддакк	асаддсдкда	дссассдсдс	ссддсскдск	кксккскккс	1020
акдаадсакк	садскддкда	аааадсксад	ссаддскддк	скддааскск	кдассксаад	1080
кдакскдсск	дссксадсск	сссааадкдс	кдадаккаса	ддсакдадсс	адкссдаакд	1140
кддскккккк	кдккккдккк	кдааасаадд	ксксаскдкк	дсссаддскд	садкдсадкд	1200
дсакасскса	дскссаскдс	адссксдасс	ксскдддскс	аадсааксск	сссааскдад	1260
сскссссадк	адскддддск	асаадсдсак	дссассасдс	скддскаккк	кккккккккк	1320
кккккккккк	дадааддадк	кксакксккд	ккдсссаддс	кддадкдсаа	кддсасадкс	1380
ксадсксаск	дсадсскссд	ссксскдддк	ксаадсдакк	сксскдсскс	адссксссда	1440
Γί ΛιΚ/Ύ/ЧСГ				4- 4, ч- 4. 4, 4. 4. „4_	Ч—1- Ч- Ч— +- еь ζ*τ4— гл	Л СПЛ
	ι. »— α ι_α^ Чж	сс^ссассах.		к- и ν к. и усу са	ц ц. у. ошу цау	4. _/V V
ддакддддкк	Ьсассаъд1?11					1520

<210>	28
<211>	961
<212>	ДНК
<213>	Ното	зархепз
<220>
<221>	тазе	£еаЪиге
<223>	последовательность 5ТАК28
<400>	28

аддаддккак	ксскдадсаа	акддссадсс	кадкдааскд	дакааакдсс	сакдкаадак	60
скдкккассс	кдадаадддс	аккксскаас	кскссскака	ааакдссаад	кддадсассс	120
садакдааак	адскдакакд	скккскакас	аадссакска	ддаскддскк	каксакдасс	180
аддакаккса	сссаскдаак	акддскакка	сссаадккак	ддкааакдек	дкадккаадд	240
дддксссккс	сасакддаса	ссссаддкка	каассадааа	дддкксссаа	кскадасксс	300
аадададддк	ксккадасск	сакдсаадаа	адааеккддд	дсаадкасак	ааадкдааад	360
саадкккакк	аадааадкаа	адааасаааа	ааакддскас	кссакаадса	аадккакккс	420

- 46 011747

ЕсасИаЬа!	даЫааЕаад	адаЕддаИа	ИсаЕдадЫ	ИсЕдддааа	ддддбдддса	480
а£1сс1ддаа	с-.садддиг. с	сЕсссасШ	1адасса1а1	адддъаюн	сс1да1а1сд	540
ссаЬддсабб	ЕдбааасЕдЪ	са1ддсас1д	абдддадбдб	сЫИадса!	1с1аа1дса1:	600
ЕаЕааНада	аЕабааЪдад	садбдаддаЕ	дассададд!	сасЕЪсбдИ	дссабаббдд	660
ШзсадЕддд	дИбддЫдд		ЬШЕаасса	саассТдГ.М	ИШИаП	720
1аШа111а	Ша111а1Ь	1а1аШШ	абМШШ	адаЕддадбс	61дс1сЬд1с	780
асссаддИа	дадбдсадОд	дсассаЮОс	ддсЕсасбдс	аадсбсбдсс	ОссИддИс	840
асдссаИс!	дсбдссбсад	сс1сссдад£	адсбдддас!	асаддбдсс!	дссасса!ас	900
ссддсбааМ		66сад1адад	асддддббЛс	ассд!д1Уад	ссаддаЪддб	960

С 961

<210> <211> <212> <213>	29 2233 ДНК Ното	5ар1епз
<220>
<221>	т±зс	Геариге
<223>	последовательность ЗТАК29
< 4 00>	29

адсИддаса	сИдсЕдаЕд	ссасЫЪдда	Едббдааддд	ссдсссбсТс	ссасассдсб	60
ддссасМП	аааОаЕдЕсс	ссЬсЬдссса	даадддсссс	ададдадддд	сСддОдаддд	120
Ьдасаддад!	бдасбдсбсЁ	сасадсаддд	ддМссддад	ддассШбс	1ссссаМдд	180
дсадсабада	аддассЕада	адддсссссЬ	ссаадсссад	сЕдддсдбдс	адддссадсд	240
аИсдабдсс	МссссЕдас	6садд1ддсд	сбдбссбааа	дд!д1д6с;1д	Ιίί ЬсЪдИс	300
дссаддддд!	ддсддаЪаса	дЕддадсаЕс	дбдсссдаад	Ед1с1дадсс	сдбддЕаадб	360
ссс^ддаддд	бдсасддЪс!	ссбссдасбд	Гсбссаисас	дгсаддссЕс	асадссбдСа	420
ддсассдсбс	ддддаадсс!	сЕдда^дадд	сса1д!дд1с	а1ссссс1дд	ад'Ьссбддсс	480
Еддссбдаад	аддаддддад	даддаддсса	дссссЬсссб	адссссаадд	сс!дсдаддс	540
бдсаадсссд	дссссасаЕЪ	сбадСссадд	сОгддсЪдлд	саадаадсад	аИдссЁддс	600
ссЬддссадд	с1!сссадсЕ	аддаЪдЕдд!	аЕддсадддд	Едддддаса!	ЕдаддддсЬд	660
сЪдбадсссс	сасаассЕсс	ссадд1аддд	1дд1:даасад	Еаддсбддас	аадТддасс!	720
дИссса^с!	дадагхсаад	адсссассЪс	Ъсддаддыд	садкдадссд	ада1ссс1сс	780
асТдсасбсс	адссбдддса	асададсаад	асбсбдбсЕс	ааааааасад	аасаасдаса	840

- 47 011747

асаааааасс	сассДсДддс	ссасДдссДа	асДДДдДааа	ДааадДДсДа	ДДддсасаДа	900
дасасассса	ДДсаДДДаса	ДасДдсДдсд	дсДдсДДДДд	саДДасссДД	дадДадасда	960
садассасдД	ддссаДддаа	дссааааада	ДДДасДдДсд	ддсссдддас	адаадДсДдс	1020
ДсДададдда	дассссддсс	саДддддсад	дассасДддд	сдДдддсада	адддаддссД	1080
сддДдссДсс	асдддссДад	ДДдддДаДсД	садДдссДдД	ДДсДДдсаДд	дадсассадд	1140
ддДсадддса	адДассДдда	ддаддсаддс	ДдДДдсссдс	ссадсасДдд	дасссаддад	1200
ассДДдадад	дсДсДДаасд	ааДдддадас	аадсаддасс	адддсДссса	ДДддсДдддс	1260
сДсадДДДсс	сДдссДдДаа	дДдадддадд	дсадсДдДда	аддДдаасДд	Ддаддсадад	1320
ссДсДдсДса	дссаДДдсад	дддсддсДсД	дссссасДсс	ДдДДдДдсас	ссададДдад	1380
дддсасдддд	ДдадаДдДса	ссаДсадссс	аДаддддДдД	ссДссДддДд	ссаддДсссс	1440
аадддаДдДс	ссаДсссссс	ДддсДдДдДд	дддасадсад	адДсссДддд	дсДдддаддд	1500
сДссасасДд	ДДДДдДсадД	ддДДДДДсДд	аасДдДДааа	ДДДсадДдда	аааДДсДсДД	1560
ДссссДДДДа	сДдааддаас	сДссааадда	адассДдасД	дДдДсДдада	адДДссадсД	1620
ддДдсДддас	дДсдсссада	аадсссаддД	асДдссасдд	дсдссддсса	ддддДдДдДс	1680
Ддсдссадсс	аДдддсасса	дссаддддДд	ДдДсДасдсс	ддссаддддД	аддДсДссдс	1740
сддссДссдс	ДдсДдссДдд	ддадддссдД	дссДдасасД	дсаддсссдд	ДДДдДссдсд	1800
дДсадсДдас	ДДдДадДсас	ссДдсссДДд	даддддсддд	асадсаасДс	ДддДддДДдд	1860
ддааддддсс	ДссДдаДДса	дссДсДдсдд	асддДдсдсд	адддДддадс	ДссссдсссД	1920
ссссассдсс	ссДддссадд	дДДдаасдсс	ссДдддаадд	асДсаддссс	дддДсДдсДд	1980
ДДдсДдДдад	сдДддссасс	ДсДдсссДад	ассададсДд	ддссДДсссс	ддссДаддад	2040
садссдддса	ддассасадд	дсдссдадДд	ассДсадддс	ДдсссдассД	ддаддсссдс	2100
сДддсдДсдс	ддДдДдасДд	асадсссадд	адсдддддсД	дДДдДааДДд	сДдддДсДсс	2160
ДДсасасада	ассДДДДсдд	даадаДддсД	дасаДссДдд	адаадаДсаа	даадДаадДс	2220
ссдсссссса	ссс					2233

<210> 30 <211> 1851 <212> ДНК <213> Ното зарДепз <220>

<221> тхзс_£еаДиге <223> последовательность ЗТАНЗО

- 48 011747 <400> 30

дддбдсаббб	ссасссаддд	дасасббддс	аабддбддда	дасаббдсбб	дббдбсасаа	60
сбдддсабдд	дадбдсбдсб	дсдбсбадбд	ддбададдсс	ададабдсбс	сбаабабссб	120
асааддсаса	даасадсссс	ссасаасада	да а 66. а беса	деебдааааб	дбссасадбд	180
сбдаддббдд	дааасссбаб	бсбададсса	асаддсбдбд	аадеббдаеб	сабддббсса	240
бсассаабад	сбдсдбдасс	ббддбдадбб	ссббадсбдс	бсбдбдссбс	ддаббсабдд	300
баддббббсс	ббдббаддбб	бааабдадбд	аадббабаса	дадддссбда	адбсбсабдд	360
баббббасба	дадссбсабб	дбдббббадб	бабааббада	ааббдддбаа	ддбааддаса	420
садаадаадс	сабсбдабаб	дддддсббса	сасббадаад	бдассбсдда	дсааббдбаб	480
бддддбддаа	адддасбаас	адссаддадс	ададддсаса	ббддааббдд	ддссададдд	540
сасадасбдс	сббдбссабс	аддсабадса	абддасадад	дааддддааб	дасбадббаб	600
ддсбдсаадд	ссаадбасад	дддасббабб	бсбсабабсб	абсбабсбаб	сбассбассд	660
бсбаб+бабс	бабсабсбаб	сбасббаббб	абсбабсбаб	ббабдеабдб	дбассаассд	720
ааадббббад	бааабдсаса	аасбдсдаба	баабдааааб	ддаааббббс	аааадаадад	780
ааабсассбд	ссассбдасб	ассббаасаа	абдадбддбб	ббсабсбсбс	сббссаддсс	840
бдбсаббббб	асадбдсббб	адбсабаааа	саддбссбсб	аббсбаббдб	бббабдбсас	900
абдаааббдб	ассабаадса	ббббссабда	бдбдасбсса	сбдбббсабб	ббссаббббб	960
ббссадаабд	аадабаассб	саббдббббб	ббссбдаббд	бааааабдеб	ебдбдебебб	1020
6666666666	Шаасаабд	саддсадбас	сааааадбаб	даадаадааб	дбаабадббс	1080
ссабббссса	бсбсасбсбб	бааддссадс	аббббддбда	асабссабсс	даасааабсб	1140
ссасдсд+66	абсаабббдб	бдасббасбс	еббеббббаб	дбааабабда	асабдаббба	1200
асбдссадбс	сабббддаас	сббааадбда	аддбббббба	ббдббддддб	ббдебабддб	1260
сбдаабабдб	дбдбсссссс	аааабббабд	ббдаабссба	асдсссаабд	сдаббаддад	1320
дбддддссаб	баддаддбда	ббаадбсабд	аадбсабсад	сссбаабдаа	бдддабббдб	1380
ддссббдааа	адддасссса	дададсбдсс	ббдссссббс	бдссабдбаа	ддасасадбд	1440
аддадсбадд	аадддддссб	садсададас	сааабдбдаб	ддбдссбсда	баббддаебб	1500
сссадссбсс	адаабдбдад	ааабдааббб	ебдббдббба	баадбсассс	адбебабадб	1560
аббббдббсб	адсадсссаа	асадасбаад	бсадддббдб	бдббббадда	адбддддааб	1620
ддддссабдс	абдддбдбас	дссадаасаа	аддаадссад	саадбссбда	аадабаебдд	1680
аааадддааб	адбдддсасд	бдсадбдбдб	бадбббссбд	аддебдебаб	аасааадсас	1740

- 49 011747 сасаддЕЕдд дЕддсЕЕааа ЕаасадаааЕ

ЕсаЕЕсЕссс аЕсаЕЕсЕдд ддассадасд

1300

ЕсЕдаааЕса адасЕссЕаЕ дссаЕдсЕсс

ЕЕсЕдааддс

Ессаддддад

1851 <210> 31 <211> 1701 <212> ДНК <213> Ното зараепз <220>

<221> т1зс_£еаЕиге <223> последовательность 3ΤΑΒ31 <220>

<221> т1зс_£еабиге <222> (159)..(1696) <223> η является а, с, д или £ в различных положениях <400> 31

сасссдссЕЕ	ддссссссад	адЕдсбддда	ЕЕасаадЕдЕ	ааассассаЕ	ЕссЕддсЕад	60
аЕЕЕааЕЕЕЕ	ЕЕааааааЕа	аададаадЕа	ддааЕадЕЕс	аЕЕЕЕаддда	дадссссСЕа	120
асЕдддасад	дддсаддаса	ддддЪдаддс	ЕЕсссЕЕапЕ	ЕсаадсЕсас	сЕсааассса	180
сссаддасбд	ЕдЕдЕсасаЕ	ЕсЕссааЕаа	аддаааддЕЕ	дсЕдсссссд	ссЕдбдадЕд	240
сЕдсадЕдда	дддЕададдд	ссдЕдддсад	адЕдсЕЕсаЕ	ддасЕдсбса	Есаадааадд	300
сЕЕсаЕдаса	аЕсддсссад	сбдсЕдЕсаЕ	сссасаЕЕсЕ	асЕЕссадсЕ	аддадааддс	360
ддсЕЕдссса	садЕсассса	дссддсаадЕ	дЕсассссЕд	ддЕЕддассс	ададсЕаЕда	420
ЕссЕдсссад	дддЕссадсЕ	дадааЕсадд	сссасдЕЕсЕ	аддсададдд	дсбсассЕас	480
ЕдддасЕсса	дЕадсЕдЕад	ЕдсаЕддадд	саЕсаЕддсЕ	дсадсадссЕ	ддассЕддбс	540
ЕсасасЕддс	ЕдбсссЕдЕд	ддсаддссаЕ	ссЕсааЕдсс	аддЕсаддсс	саадсаЕдЕа	600
Есссадасаа	ЕдасааЕддд	дЕддааЕссЕ	сЕсЕЕдЕссс	адаадссасЕ	ссЕсасЕдЕЕ	660
сЕассЕдадд	ааддсадддд	саЕддЕддаа	ЕссЕдаадсс	ЕдсЕдЕдадд	дЕсЕссадсд	720
аасЕбдсаса	ЕддЕсадссс	ЕдссЕЕсбсс	ЕсссЕдаасб	адаббдадсд	ададсаадаа	730
ддасаЕЕдаа	ссадсассса	аадааЕЕЕЕд	дддаасддсс	ЕсЕсаЕссад	дЕсаддсЕса	840
ссЕссЕЕЕЕЕ	ааааЕЕЕааЕ	ЕааЕЕааЕЕа	аЕЕааЕЕЕЕЕ	ЕЕЕЕададас	ададЕсЕЕас	900
ЕдЕдЕддссс	аддсЕдЕадЕ	дсадбддсас	ааЕсаЕадЕЕ	сасЕдсадсс	ЕсааасЕссс	960
сассЕсадсс	ЕсЕддаЕЕад	сЕдадасЕас	аддЕдсасса	ссассасасс	садсЕааЕаЕ	1020
ЕЕЕЕаЕЕЕЕЕ	дбадададад	ддЕЕЕсасса	ЕсЕЕдсссад	дсЕддЕсЕса	аасЕссЕддд	1080
сбсаадЕдаЕ	сссдсссадд	ЕсЕдааадсс	сссаддс£дд	ссЕсадасЕд	ЕддддЕЕЕЕс	1140

- 50 011747

саРдсадсса	сссдадддсд	сссссаадсс	адРРсаРсРс	ддадРссадд	ссрддсссрд	1200
ддадасадад	рдааассадр	ддРРРРРаРд	аасРРаасРР	ададРРРааа	адаРРРсРас	1260
РсдаРсасРР	дРсаадаРдс	дсссРсРсРд	дддадааддд	аасдрдасрд	даРРсссРса	1320
сРдРРдРаРс	ррдаарааас	дсрдсрдсрр	сарссрдрдд	дддссдрддс	ссрдрсссрд	1380
рдрдддрддд	дссРсРРсса	РРРсссРдас	РРадааасса	садРссассР	адаасадддР	1440
РРдададдсР	РадРсадсас	РдддРадсдР	РРРдасРсса	РРсРсддсРР	РсРРсРРЫР	1500
сРРРссадда	РРРРРдРдса	дааарддЕРс	ррррдррдсс	дрдррадрсс	РссРРддаад	1560
дсадсРсада	аддсссдрда	аардрсдддд	дасаддассс	ссадддаддд	аассссаддс	1620
РасдсасРРР	адддРРсдРР	сРссадддад	ддсдассРда	сссссдпаРс	сдРсддпдсд	1680
сдппдппасп	ааппппРРсс	с				1701

<210> 32 <211> 771 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> т1зс_£еаРиге <223> последовательность ΞΤΑΚ32 <400> 32

даРсасасад	сРРдРаРдРд	ддадсрадда	РРддаасссс	адаадрсрдд	ссссаддРРс	60
аРдсРсРсас	ссасРдсаРа	сааРддссРс	рсаРаааРса	аРссадРаРа	ааасаРРада	120
аРсРдсРРРа	ааассаРада	аРРадрадсд	РаадРааРаа	аРдсададас	сардсадрда	180
аРддсаРРсс	Рддааааадс	ссссадаадд	ааРРРРаааР	садсРРРсдР	сРааРсРРда	240
дсадсРадРР	адсаааРаРд	адаакасадр	РдРРсссада	РааРдсРРРа	РдРсРдасса	300
РсРРааасРд	дсдсРдРРРР	РсааааасРР	ааааасаааа	РссаРдасРс	ЕРРРааРРаР	360
аааадРдаРа	саРдРсРасР	РдддаддсРд	аддрддрддд	аддаРддсРР	дадРРРдадд	420
сРдсадраРд	срасрарсар	дссРаРаааР	адссдсРдса	РРссадсРРд	ддсаасаРас	480
ссаддсссРа	РсРсаааааа	аРааааадРа	аРасаРсРас	аРРдаадааа	аРРааРРРРа	540
РРдддРРРРР	РРдсаРРРРР	аЕРаРасаса	дсасасасад	сасаРаРдаа	ааааРдддРа	600
рдаасРсадд	саРРсаасРд	даадаасадр	асРаааРсаа	РдРссаРдРа	дРсадсдРда	660
срдаддррдд	рррдрррррр	СРРРРРРсРР	СРСРРСРСРР	сРсРРРРсРР	рррррррдад	720
асддадсРРР	дсРсРРРРРд	сссаддсРРд	аРРдсааРдд	сдРдаРсРса	д	771

- 51 011747 <210> 33 <211> 1368 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т1ас_£еаЕиге <223> последовательность ЗТАКЗЗ <400> 33

дсЕЕЕЕабсс	ЕссаЕЕсаса	дсЕадссЕдд	сссссададЕ	асссааЕЕс!	сссЕаааааа	60
сддЕсаЕдсЕ	дЕаЕадаЕдЕ	дЕдЕддсЕЕд	дЕадЕдсЕаа	адбддссаса	ЕасададсЕс	120
Едасассааа	ссЕсаддасс	аЕдЕЕсаЕдс	сЕЕсЕсасЕд	адЕЕсЕддсЕ	ЕдЕЕсдЕдас	180
асаЕЕаЕдас	аЕЕаЕдаЕЕа	ЕдаЕдасЕЕд	ЕдададссЕс	адЕсЕЕсЕаЕ	адсасЕЕЕЕа	240
дааЕдсЕЕЕа	ЕааааассаЕ	ддддаЕдЕса	ЕЕаЕаЕЕсЕа	ассЕдЕЕадс	асЕЕсЕдЕЕс	300
дЕаЕЕассса	ЕсасаЕссса	асаЕсааЕЕс	ЕсаЕаЕаЕдс	аддЕассЕсЕ	ЕдЕсасдсдс	360
дЕссаЕдЕаа	ддадассаса	ааасаддсЕЕ	ЕдЕЕЕдадса	асааддЕЕЕЕ	ЕаЕЕЕсассЕ	420
дддЕдсаддб	дддсЕдадЕс	Едаааадада	дЕсадЕдаад	ддадасаддд	дЕдддЕссас	480
ЕЕЕаЕаадаЕ	ЕЕдддЕаддЕ	адЕддааааЕ	ЕасааЕсааа	дддддЕЕдЕЕ	сЕсЕддсЕдд	540
ссадддбддд	ддЕсасаадд	ЕдсЕсадЕдд	дададссЕЕЕ	дадссаддаЕ	дадссадаад	600
дааЕЕЕсаса	аддЕааЕдЕс	аЕсадЕЕаад	дсадддасЕд	дссаЕЕЕЕса	сЕЕСЕЕЕЕдЕ	660
ддбддаабдб	саЕсадЕЕаа	ддсаддаасс	ддссаЕЕЕЕс	асЕЕсЕЕЕЕд	ЕдаЕЕсЕЕса	720
сЕЕдсЕЕсад	дссаЕсЕдда	сдЕаЕаддЕд	саддЕсасад	Есасадддда	ЕаадаЕддса	780
аЕддсаЕадс	ЕЕдддсЕсад	аддссЕдаса	ссЕсЕдадаа	асЕааадаЕЕ	аЕаааааЕда	840
ЕддЕсдсЕЕс	ЕаЕЕдсаааЕ	сЕдЕдЕЕЕаЕ	ЕдЕсаададд	сасЕЕаЕсЕд	ЕсааЕЕаада	900
асссадЕддЕ	адааЕсдааЕ	дЕссдааЕдЕ	аааасааааЕ	асаааассЕс	ЕдЕдЕдЕдЕд	960
ЕдЕдЕдЕдад	ЕдЕдЕдЕдЕа	ЕдЕдЕдЕдЕд	ЕдЕдЕаЕЕад	ададдаааад	ссЕдЕаЕЕЕд	1020
даддЕдЕдаб	ЕсЕЕадаЕЕс	ЕаддЕЕсЕЕЕ	ссЕдсссасс	ссаЕаЕдсас	ссассссаса	1080
ааадаасааа	саасаааЕсс	саддасаЕсЕ	Еадсдсааса	ЕЕЕсадЕЕЕд	саЕаЕЕЕЕас	1140
аЕаЕЕЕасЕЕ	ЕЕсЕЕасаЕа	ЕЕаааааасЕ	дааааЕЕЕЕа	ЕдаасасдсЕ	аадЕЕадаЕЕ	1200
ЕЕаааЕЕаад	ЕЕЕдЕЕЕЕЕа	сасЕдааааЕ	ааЕЕЕааЕаЕ	ЕЕдЕдаадаа	ЕасЕааЕаса	1260
ЕЕддЕаЕаЕЕ	ЕсаЕЕЕЕсЕЕ	ааааЕЕсЕда	ассссЕсЕЕс	ссЕЕаЕЕЕсс	ЕЕЕЕдасссд	1320
аЕЕддЕдЕаЕ	ЕддЕсаЕдЕд	асЕсаЕддаЕ	ЕЕдссЕЕаад	дсаддадд		1368

- 52 011747 <210> 34 <211> 755 <212> ДНК <213> Ното зар1еп5 <220>

<221> т1зс_£еа1:иге <223> последовательность 5ТАН34 <400>34

асЕдддсасс	с£сс£аддса	ддддаа+д+д	адаасДдссд	ссдссс1ддд	дсЕдддсдсс	60
аЕд+сасадс	аддадддадд	асдд+дЪСас	ассасдбддд	ааддасЬсад	дд+ддксадс	120
сасааадс+д	с£дд£даЕда	ссаддддс££	д£д£сС1сас	СсЕдсадссс	Ъаасасссад	180
дсСдддССсд	сЕаддсЬсса	ЕссСддддд!:	дсадасссСд	адад+дасдс	сад£дддадс	240
сЕсссдсссс	Ссссс££сс£	сдааддссса	ддддСсааас	ад£д£адас£	сададдсс£д	300
адддсасаЕд	ШаНЬадс	адасааддЕд	дддсЬссакс	адсдддд-дд	сскддддадс	360
адс+дсаГдд	дкддсасСдЕ	ддддадддСс	ЕсссадсЕсс	сСсааЕддкд	ЛЛсдддсЕдд	420
ЕдсддсадсЕ	ддсддсассс	Еддасададд	ЬддаЕаЕдад	дд£да£ддд£	ддддаааЕдд	480
даддсасссд	адаЛддддас	адсадааЕаа	адасадсадс	ад+дс+дддд	ддсаддддда	540
Едадсааадд	саддсссаад	асссссадсс	сасЕдсассс	ЕддссЬссса	саадсссссЕ	600
сдсадссдсс	садссасасЕ	сас+дСдсас	Есадссдксд	аСасасСддЕ	сЕдПЕаддда	660
дааадЕссди	садаасаддс	адскдЕдЕдЕ	д£д1:дСдсд£	дсаГдад+дЛ	дрдЬдгдгда	720
Ьссс+дас+д	ссаддЬссЬс	ЕдсасЬдссс	с+ддд			755

<210>35 <211>1193 <212> ДНК <213> Ното эаргепз <220>

<221> т12с_£еа£иге <223> последовательность 3ΤΑΚ35 <220>

<221> πιΪ50_ίβ3·(:ιΐΓβ <222> (312)..(1191) <223> η является а, с, д или £ в различных положениях <400>35 сдасСЕдд+д а+дсдддсСс £££1:!:Лдд1:+ сса1;аЬдаас ^рЕааадСад СстЪссаа60

Ь£сЬд£даад ааадЪсаЬЕд д£адд££да£ ддддаЪддса 1:£даа£с1:д£ аааЪЕассЕЕ120 дддсадЕаЕд дсса£1£Еса сааЛдЕЛдаЕ ЕсСЕссЕа^с са£да£да£д дазЕдЕЛсЕ!:180

- 53 011747

ссаЕЕадЕЕЕ	дЕаЕссЕсЕЕ	ЕЕаЕЕЕссЕЕ	дадсадЕддЕ	ЕЕдЕадЕЕсЕ	ссЕЕдаадад	240
дЕссЕЕсаса	ЕсссЕЕдЕаа	дЕЕддаЕЕсс	ЕаддЕаЕЕЕЕ	аЕЕсЕсЕЕЕд	аадсаааЕЕд	300
ЕдааЕдддад	ЕпсасЕсасд	аЕЕЕддсЕсЕ	сЕдЕЕЕдЕсЕ	дсЕдддЕдЕа	ЕааапааЕдЕ	360
пдЕдаЕпЕЕп	дЕасаЕЕдаЕ	ЕЕпдЕаЕссп	ЕдадасЕЕпд	сЕдааЕЕЕдс	ЕЕпаЕспдсЕ	420
Еппдддаасс	ЕЕЕЕдддсЕд	аааспаЕддд	аЕЕЕЕсЕааа	ЕаЕасааЕса	ЕдЕсдЕсЕдс	480
ааасадддаа	сааЕЕЕдасЕ	ЕссЕсЕЕЕЕс	сЕааЕЕдааЕ	асасЕЕЕаЕс	ЕссЕЕсЕссЕ	540
дссЕааЕЕдс	ссЕдддсааа	асЕЕссааса	сЕаЕдпЕпдп	ааЕаддадпЕ	ддЕдададад	600
ддсаЕсссЕд	ЕЕсЕЕдЕЕдс	садпЕЕЕЕса	аадддааЕдс	ЕЕссадЕЕЕЕ	ддсссаЕЕса	660
дЕаЕдаЕаЕд	ддсЕдЕдддЕ	пдЕдЕсаЕаа	аЕадсЕсЕЕа	ЕпаЕЕЕЕдаа	аЕдЕдЕссса	720
ЕсааЕассЕа	аЕЕЕаЕЕдаа	адЕЕЕЕЕадс	аЕдаапдсаЕ	пдЕЕдааЕЕЕ	ддЕсаааддс	780
ЕЕЕЕЕсЕдса	ЕсЕаЕддааа	ЕааЕсаЕдЕд	дЕЕЕЕЕдЕсЕ	ЕЕддсЕспЕд	ЕЕЕаЕаЕдсЕ	840
ддаЕпасаЕЕ	ЕаЕЕдаЕЕЕд	ЕдЕаЕаЕпда	асссадссЕп	псаЕсссадд	даЕдаадссс	900
асЕЕдаЕсса	адсЕЕддсдс	дспдпсЕадс	Есдаддсадд	саааадЕаЕд	сааадсаЕдс	960
аЕсЕсааЕЕа	дЕсадсассс	аЕадЕссдсс	ссЕассЕссд	сссаЕссдсс	ссЕаасЕспд	1020
V> к-» (“> · 4— + ,ι— .к—1	—к 4- 4- 1-9 -¼ 1-9 л—		-¼ —, —к Ь Г к + Ь + +	—»—к «-к —к и ,1^ ,—к -г, г.		1 лол
11 *— и·у и иг— у-и	и-а и и*— ии>^ и·и	’-а'-уу-.уаь	иаслинииии и	синю и*—+а еду	сддпдссдсс	X V У V
сЕдсЕЕдапс	аЕЕсададЕп	пададппЕЕд	даддсспадс	сЕЕдсаааас	гссддаспдп	1140
ЕЕсЕппддаЕ	ЕдассссппЕ	ЕаааЕаЕЕЕд		ЕЕЕЕсаппдд	пда	1193

<210> 36 <211> 1712 <212> ДНК <213> Ното зараепз <220>

<221> т1зс_1еаЕиге <223> последовательность 3ΤΑΚ36 <400> 36

даЕсссаЕсс	ЕЕадссЕсаЕ	сдаЕассЕсс	ЕдсЕсассЕд	ЕсадЕдссЕс	ЕддадЕдЕдЕ	60
дЕсЕадссса	ддсссаЕссс	сЕддаасЕса	ддддасЕсад	дасЕадЕддд	саЕдЕасасЕ	120
ЕддссЕсадд	ддасЕсадда	ЕЕадЕдадсс	ссасаЕдЕас	асЕЕддссЕс	адЕддасЕса	180
ддасЕадЕда	дссссасаЕд	ЕасасЕЕддс	сЕсаддддас	ЕсаддаЕЕад	Едадссссса	240
саЕдЕасасЕ	ЕддссЕсадд	ддасЕсадда	ЕЕадЕдадсс	ссасаЕдЕас	асЕЕддссЕс	300
аддддасЕса	ддасЕадЕда	дссссасаЕд	ЕасасЕЕддс	сЕсаддддас	ЕсадаасЕад	360

- 54 011747

1дадссссас	аЬдЬасасЪЬ	ддсМсаддд	дасРсаддак	ЕадЬдадссс	сасаРдкаса	420
сИддасасд	РдаассасаЕ	сдаРдСдсРд	сададсРсад	сссРсРдсад	ардааардрд	480
дРсаРддса!	ЕссМсасад	1ддсасссс1	сдРРсссЕсс	ссассРсаРс	РсссаРРсРР	540
дЕсРдСссдс	адсассРдсс	аРдРссадсс	ддсадапсс	ассдсадсаР	сРРсРдсадс	600
асссссдасс	асасассЬсс	ссадсдссЬд	с+ДддсссРс	садсссадсР	сссдссРРРс	660
ИссЫдддд	аадсРсссРд	дасадасасс	сссРссРссс	адссаРддсР	РРРРссРдсР	720
сЬдссссасд	сдддасссЪд	сссЪддаЕдЕ	дсРасааРад	асасаксада	РасадсссРР	780
ссРсадсадс	сддсадассс	аддд£ддас1	дсРсддддсс	РдссРдРдад	дрсасасадд	840
ТдЕсдЕЕаас	ΊΐдссаЬскс	адсаасРад!	дааРаЬдддс	адаРдсРасс	РРссРР ссдд	900
РРсссгддЬд	ададдЬасгд	д1дда£д1сс	рдрдррдссд	дссассРРРР	дРсссРддаР	960
дссаШа:!:	ШЛВсаса	аагай+ссс	аддРсРсРРс	рдрдрдсаад	дРаРРадддс	1020
Ддсадсдддд	дссаддссас	адаРсРсРдР	ссРдадаада	сРРддаРРсР	адрдсаддад	1080
асРдаадРдД	аЕсасассаа	1садЬд1ааа	РРдЕРаасРд	ссасааддад	аааддссадд	1140
ааддадЕддд	дсаДддРддЕ	дРРсЕадРд!	гасаадаада	адссадддад	ддсррссрдд	1200
ардаадрддс	аСсЬдассЬд	ддаРсРддад	даддадаааа	ардрсссааа	ададсадада	1260
дсссасссТа	ддсРсЬдсас	саддаддсаа	сИдсСдддс	РРаРддааРР	сададддсаа	1320
дРдаЬаадса	дааадИссЫ	дддддссаса	аЫаддаМИ:	сРдРсРЕсРа	аадддссРсР	1380
дсссЬсРдсс	дЕдЕдассМ	дддсаадРРа	сМсассРсР	адРдсРРРдд	ЕРдссРсаРс	1440
ЕдРааадЕдд	РдаддаРаа!	дсЬа!сасас	РддЕРдадав	РРдаадРааР	РаРРдсРдса	1500
аадддсиа!	аадддРдРсР	аарасрадра	сРадРаддРа	сррсардрдр	сррдасаарр	1560
Маабсабба	ПаНИдЬс	абсассдРса	сЪсб.ссадд	ддасРааРдР	сссрдсрдрр	1620
сЬдЮсааар	РааасаРРдР	РЕаРсссРдГ	дддсаРсРдд	сдаддЕддсР	аддааадссР	1680
ддадсГдИс	ссРдРРдасд	РдссадасРа	д*			1712

<210> 37 <211> 1321 <212> ДНК <213> Ното зарлепз <220>

<221> т1зс_£еа1:иге <223> последовательность 5ТАК37 <400> 37 аддаРсаса! Нааддаад! дСдРддддЕс ссЕддаРдас ассадсассс ад1дсддс1с 60

- 55 011747

РдРсРддсаа	ссдсРсссаа	ддрддсадда	дрдддрдрсс	ссрдрдрдрс	адрдддсадс	120
РссРдсРдад	ссРасадсРс	асРддддадс	сРдасадсдд	ддссардрдс	сРдасасРсс	160
рсрсрдсррд	РддассРддс	ааддсаддда	дсадааааса	дадссасРРд	ааддсРРСсР	240
дРсРдсдРсР	дрдрдсадрд	РддаРРРадР	РдРдсРРРРР	ЪсРРдсРддд	ададсасадс	300
сассаРРРас	аадсадРдРс	асссРсаРдд	дрддсдадда	садаасадда	дссРсРдсРс	360
РсРдРассРа	Рсрдддсссд	дрдддсРссс	РРдРссРддс	РРссаРсРсР	дРсРсадсда	420
ссаРРсадсс	сРдсдсадда	асасардррд	сРРадаааад	ссаааРРсад	сссРРдРсРс	480
РдссРссРсР	ддрсРсаРда	рдрдсарсрд	РРассРРдаа	асРддааасс	адРсРаРсаа	540
РдРсРдРдсс	ааРРРРРРаР	РсссРсссса	ассРссРРсс	ссаРасдасР	РРРРаРРРар	600
дРаддаРдРд	РдсРдРсРаа	РдаРдддаРд	ассасаРРРР	ЕссаРдРРсР	аааадрдсрс	660
сРсРсссдса	дддрсссадд	дсРддРддРР	дсРРРдддРс	РасадсРасд	РсРРасссдс	720
сРссРдссРс	аасадссРдР	дрддрддсаа	адссддрдрд	дддсРдддда	асдсадсдРР	780
сРссаддадд	дддасссддс	РсРссРРсРд	садрдсаддс	дааддссрад	ардссадрдр	840
дассРсссас	ааддсдрддс	РРссадасРс	сссддсрдда	адрдардсРР	ррррдссрсс	900
ддсссРдддР	Ррдаадсадс	сРддсРРРсР	сррддраадр	ддсРддРдРс	РРадсадсРд	960
саарсрдадс	РсадссассР	асасассасс	дрддссдаса	сРРРсаРРаа	ааадРРРссР	1020
дадасдасрр	дсдРдсаРдР	РдасРРсаРд	аРсадсдссд	сРдддаадаа	ссссРдадсс	1080
ддрддддрдд	ддсРддаадс	адсаддрдса	дРдаРддддс	рдддрдссса	ддаддссРса	1140
дРдсРсааРс	аддссааддр	ддссаадссс	аддсрдсадд	дааддссддс	срдддддррд	1200
рдддрдадса	саддсаддса	ссадсРдддс	адрдррадда	рдсрддадса	дсаРссдРаа	1260
ссссасРдад	РддддРадРс	РддРРддддс	адддассдсР	дРРдсРРРдд	садададада	1320

Р 1321 <210> 38 <211> 1445 <212> ДНК <213> Ното зар+елз <220>

<221> т1зс_£еарцге <223> последовательность 5ΤΑΡ38 <220>

<221> Ш15с_£еаРиге <222> (348)..(949} <223> η является а, с, д или £ в различных положениях

- 56 011747 <400>38

даЕсЕаРддд	адЕадсЕЕсс	ЕРадЕдадсЕ	ЕРсссЕЕсаа	аРасЕЕЕдса	ассаддЕада	60
дааРЕЕЕдда	дрдааддРЕЕ	ЕдЕЕсЕЕсдЕ	ЕЕсЕЕсасаа	ЕаРддаЕаРд	саРсРРсЕРЕ	120
ЕдааааРдРЕ	ааадЕаааРЕ	ассЕсЕсЕЕЕ	ЕсадаЕасРд	ЕсЕРсаРдсд	аасРРддРаЕ	180
ссЕдЕЕЕсса	ЕсссадссЕЕ	сЕаЕаассса	дРаасаЕсЕЕ	ЕЕЕЕдааасс	адрдддрдад	240
ааадасассЕ	ддЕсаддаас	дсддассаса	ддасаасгса	ддсЕсассса	сддсаРсада	300
сЕаааддсаа	асааддасЕс	ЕдРаЕааадЕ	ассддрддса	ЕдЕдРаРпад	ЕддадаЕдса	360
дссЕдЕдсЕс	Едсадасадд	дадЕсасаса	дасасЕЕЕЕс	ЕаРааРЕтсЕ	ЕаадРдсРРЕ	420
дааЕдРЕсаа	дЕадааадЕс	РаасаРЕааа	ЕЕЕдаЕЕдаа	сааЕРдЕаРа	РРсаРддааЕ	480
аЕЕЕЕддаас	ддааЕассаа	ааааЕддсаа	ЕадрддРЕсЕ	РЕсРддаРдд	аадасааасР	540
ЕЕЕсЕЕдЕЕЕ	ааааЕаааРЕ	РЕаРРРРаРа	ЕаРЕЕдаддР	ЕдассасаРд	ассРРаадда	600
ЕасаЕаРада	садЕааасЕд	дРРасЕасад	ЕдаадсаааЕ	ЕаасаРаРсР	ассаРсдЕас	660
аЕадрЕасар	ЕРЕЕЕЕдЕдР	дасаддааса	дсрааааРсЕ	асдРаРРРаа	саааааЕссЕ	720
ааадасааЕа	саЕЕЕРЕаРЕ	аасЕаЕадсс	сЕсаЕдаРдЕ	асаРЕадаЕс	дЕдРддРЕдЕ	780
ЕЕсЕЕссдЕс	сссдссасдс	сРРссЕссРд	ддаЕддддаЕ	рсаРРсссЕа	дсаддрдрсд	840
дадаасЕддс	дсссЕЕдсад	ддраддрдсс	ссддадссЕд	аддсдддпас	ЕЕЕаапаРса	900
дасдсррддд	ддссддсЕдд	дааааасЕдд	сддааааЕаЕ	ЕаРаасЕдпа	сЕсЕсааРдс	960
садсЕдРЕдР	адаадсЕссЕ	дддасаадсс	дЕддаадЕсс	ссРсаддадд	сЕЕссдсдаЕ	1020
дЕссЕаддЕд	дсЕдсЕссдс	ссдссасддр	саЕЕЕссаРЕ	дасрсасасд	сдссдссЕдд	1080
аддаддаддс	ЕдсдсЕддас	асдссддЕдд	сдссЕЕЕдсс	Едддддадсд	садссЕддад	1140
сЕсЕддсддс	адсдсЕддда	дсддддссрс	ддаддсЕддд	ссЕддддасс	сааддррддд	1200
сддддсдсад	даддЕдддсЕ	садддРРсРс	сададааЕсс	ссардадсЕд	асссдсаддд	1260
сддссдддсс	адЕаддсасс	дддсссссдс	ддрдассЕдс	ддасссдаад	сЕддадсадс	1320
сасЕдсаааЕ	дсЕдсдсЕда	ссссаааРдс	ЕдЕдЕссЕЕЕ	ааардЕЕР.Еа	аЕЕаадаара	1380
аРЕааРаддЕ	ссдддЕдЕдд	аддсЕсаадс	сЕЕааЕсссс	адсассРддс	даддссдадд	1440

аддда1445 <210>39 <211>2331 <212> ДНК <213> Ното заргепз

- 57 011747 <220>

<221> ιηί 5С_геа1:иге <223> последовательность 5ТА8.39 <400> 39

дЕдаааЕада	ЕсасЕааадс	ЕдаЕЕссЕсЕ	ЕдЕсЕаааЕд	ааасЕЕЕсЕа	сссЕЕЕдаЕд	60
дасадсЕаЕд	сЕЕЕссссаЕ	ссЕсЕсссдЕ	сссссадссс	ЕЕддЕаасса	ЕсаЕссЕасЕ	120
сЕсЕасЕЕдЕ	аддадЕЕсаа	сЕЕдЕЕЕада	ЕЕЕЕдЕдадЕ	дадаасаЕдЕ	ддЕаЕЕЕдсс	180
ЕЕЕасадЕсс	ЕсЕаддЕЕЕа	ЕссаЕаЕЕдЕ	дЕЕаааЕдас	аддаЕЕсссЕ	дссЕЕЕЕЕаа	240
ддсЕдааЕад	ЕаЕЕЕсаЕЕд	ЕааЕаЕаЕаЕ	асаЕасасас	асасаЕаЕас	асасасаЕаЕ	300
аЕаЕасаЕаЕ	аЕасаЕаЕаЕ	дЕасаЕадаЕ	асаЕаЕаЕаЕ	дЕасаЕаЕаЕ	асасасасаЕ	360
аЕасасасаЕ	аЕаЕасасаЕ	аЕаЕасаЕаЕ	асаЕаЕаЕас	асаЕаЕаЕдЕ	асаЕаЕаЕаЕ	420
аасЕЕЕЕЕЕЕ	саНЕаЬсса	ЕЕсасЕЕааЕ	асаЕаЕдаЕд	дадддсЕЕЕа	ЕаЕаЕдссад	480
дсЕсЕдЕдаЕ	дааЕдсЕдда	ааЕЕсааЕад	Едадааадас	ЕсадЕсЕсЕд	ссЕссааада	540
дсаЕсаЕддд	сЕаддЕдсЕд	саасдаддаа	ЕЕдссаасЕд	ЕЕдЕсаЕдад	адсасадада	600
адддасЕсаа	ссадссЕЕда	адааЕсаддд	даддсЕЕсЕа	адсЕааЕддг	дЕдЕдссЕдд	660
ддаЕсасаЕЕ	дЕЕЕсаадса	дсадЕаасад	даЕдЕдсЕса	ддЕссадаЕд	Едадададад	720
адададсаЕа	ЕдЕсЕЕсаад	ааасЕаасад	ЕадсЕсссЕа	ЕадсЕдаадс	аддадЕасаа	780
ааЕадЕдадЕ	ЕЕаадЕдаЕд	аддсаадада	ЕаЕдаадаад	сЕЕдассаЕд	садсЕасасс	840
дддсадсаЕд	сссЕсЕдада	саЕсЕсаЕдд	аадссддааа	ЕдддадЕдсс	ЕЕдаЕассаа	900
дссададааа	ЕЕаЕааЕасЕ	аадЕадаЕад	асЕдадсадс	асЕссЕссЕд	ддаадааЕда	960
дасаадсссЕ	дааЕЕЕддад	дЕаадЕЕдЕд	даЕЕддЕдаЕ	Еададдадад	дЕаасаддса	1020
ссааадсаад	аааЕадЕаЕЕ	даЕдсааадс	ЕдаддЕЕааЕ	ЕддаЕдасаа	ааЕдаададс	1080
аЕааддддсЕ	садасасада	сЕдадсадаа	аасдадЕадс	аЕсЕдаассЕ	адаЕЕдадЕЕ	1140
асЕааЕддаЕ	дадааададЕ	ЕсЕЕааадЕЕ	даЕдассасд	ддаЕссаЕаЕ	аЕаадааЕдЕ	1200
ссааЕсЕссс	саааЕЕдаЕс	сасдадЕЕса	дЕдсааЕдсс	ааЕсааааЕс	ссасЕаасаа	1260
дЕЕЕаЕЕЕЕа	аааЕдЕаааЕ	дааааЕасаа	ааЕЕЕЕЕааа	аадсааадса	аЕаЕЕдаааа	1320
сссаддаааа	аЕЕаддадда	сЕЕасасаас	сЕдаЕсЕсаа	аасЕЕассаЕ	ЕаЕсаадаса	1380
дадЕдЕЕаЕЕ	дасасаадда	дадасаааЕа	даЕааасдда	аЕдЕддЕадЕ	сЕддадаЕдс	1440
асссасаЕдЕ	аЕдЕддЕсаа	ЕЕдаЕЕЕЕЕд	дссааддсас	саадЕсааЕЕ	саааддадса	1500
аддааадЕад	Еасадаааса	ассаааЕаЕЕ	дЕЕЕЕддааа	аЕааЕдасаа	адддсЕЕаЕа	1560
ассадааЕаЕ	аадсаЕаЕаа	аЕаЕааЕЕсЕ	ЕЕсаааЕсаа	ЕааЕаадаад	дсаааЕаЕсЕ	1620

- 58 011747

ааРааааард	адсааадаср	РдаааадРса	сРРааааадд	сРРаРРааРР	адаааЕаРдс	1680
ааардррарр	адЬсРРсадр	ддааРРРаса	РРааассаса	адддаРасРа	РРаРарсРРа	1740
РдсссасРад	ааРаассааа	ддаааааада	садасаааас	ааааРдсрдд	РдаддаРдРд	1800
аадсаасРдд	аасРсРсаРа	сарраррддр	ддРааРдРаа	ааРРРаРаса	ассаРРаРда	1860
аРаааддРРР	ддсадРРбсР	РасааадРРд	ааСдсасррс	РссасдаРда	сРаддсРРРР	1920
сасРсаРадд	сдРсРддсРс	ссРадаасРд	аааасаРаРд	РРсасаадаа	дасРЬдсааа	1980
РаРаРаРРсР	сссасдРсад	дадаРаРРРд	сРаРдсаРРР	аасРдасаРа	адаррадрдс	2040
РададРРРар	ааРдаддРРс	РРсаааРсРа	ааадааааРд	сааадсаРаР	ааРадРаадд	2100
ддрдсаддсс	аддсдсадРд	дсРсасРсРд	РааРсссадс	асрррдддад	дссдаддРдд	2160
дсддаРсаса	аддЕсаддад	РРсдадасса	ассРддссаа	саРадРдааа	сссРдРсРсР	2220
асРаааааРа	сааааасРад	ссаддрдсдд	рдрсардсас	сРдРадРссс	адсРасРсдд	2280
даддссдадд	саддадаарс	асррдаасср	дддаддрдда	ддРРдсадРд	а	2331

<210>	40
<211>	1071
<212>	ДНК
<213>	Ното	зархепз
<220>
<221>	т±зс	£еаЪиге
<223>	последовательность ЗТАВ40
<400>	40

дсРдЕдаРРс	ааасРдРсад	сдадаРаадд	садсадаРса	адааадсаср	ссдддсРсса	60
дааддадссР	рссаддссад	сРРРдадсаР	аадсРдсРда	РдадсадРда	дрдрсррдад	120
РадРдРРсад	ддсадсаРдР	РассаРРсаР	дсррдасррс	РадссадсдР	дасдададдс	180
РддадРсадд	РсРсРадада	дррдадсадс	РссадссРРа	даРсРсссад	РсРРаРдсдд	240
РдРдсссаРР	сдсРРРдРдР	сРдсадРссс	сРддссасас	ссадРаасад	РРсРдддаРс	300
РаРдддадРа	дсРРссРРад	РдадсРРРсс	сРРсаааРас	РРРдсаасса	ддРададааР	360
РРРддадРда	аддРРРРдРР	сРРсдРРРсР	РсасааРаРд	дарардсарс	РРсРРРРдаа	420
ааРдРРааад	РаааРРассР	сРсРРРРсад	аРасРдРсРР	саРдсдаас!	РддСаРссрд	480
РРРссаРссс	адссРРсРаР	аасссадРаа	саРсРРРРРР	дааассадРд	ддрдадааад	540
асассРддРс	аддаасдсдд	ассасаддас	аасРсаддсР	сасссасддс	аРсадасРаа	600
аддсааасаа	ддасРсРдРа	Рааадрассд	дрддсардрд	РаРРадРдда	даРдсадссР	660

- 59 011747

дЕдсЕсЕдса	дасадддадЕ	сасасадаса	сЕЕЕЕсЕаЕа	аЕЕЕсЕЕаад	ЕдсЕЕЕдааЕ	720
дЕЕсаадЕад	ааадЕсЕаас	аЕЕаааЕЕЕд	аЕЕдаасааЕ	ЕдЕаЕаЕЕса	ЕддааЕаЕЕЕ	780
Еддаасддаа	Еассаааааа	ЕддсааЕадЕ	ддЕЕсЕЕЕсЕ	ддаЕддаада	сааасЕЕЕЕс	840
ЕЕдЕЕЕаааа	ЕаааЕЕЕЕаЕ	ЕЕЕаЕаЕаЕЕ	ЕдаддЕЕдас	сасагдассЕ	ЕааддаЕаса	900
ЕаЕадасадг	ааасЕддЕЕа	сЕасадЕдаа	дсаааЕЕаас	аЕаЕсЕасса	ЕсдЕасаЕад	960
ЕЕасаЕЕЕЕЕ	ЕЕдЕдЕдаса	ддаасадсЕа	аааЕсЕасдЕ	аЕЕЕаасааа	ааЕссЕааад	1020
асааЕасаЕЕ	ЕЕЕаЕЕаасЕ	аЕадсссЕса	ЕдаЕдЕасаЕ	ЕадаЕсЕсЕа	а	1071

<210> 41 <211> 1135 <212> ДНК <213> Ното 5ар1еП5 <220>

<221> га1ас_£еа£иге <223> последовательность ΞΤΑΡ.41 <400> 41

сдЕдЕдсадЕ	ссасддадад	ЕдЕдЕЕсЕсс	ЕсаЕссЕсдЕ	ЕссддЕддЕЕ	дЕддсдддаа	60
асдЕддсдсЕ	дсаддасасс	аасаЕсадЕс	асдЕаЕЕЕса	ЕЕсЕддаааа	аааадЕадса	120
саадссЕсдд	сЕддЕЕсссЕ	ссадсЕсЕЕа	ссаддсадсс	ЕаадссЕадд	СЕссаЕЕСсс	180
дсЕсааддсс	ЕЕссбсаддд	дссЕдсЕсас	сасаддадсЕ	дЕЕсссаЕдс	адддасбаад	240
дасаЕдсадс	сЕдсаЕадаа	ассаадсасс	саддааааса	ЕдаЕЕддаЕд	дадсдддддд	300
дЕдЕддЕсЕс	ЕадссЕЕдЕс	сассЕссддЕ	ссбсаЕдддЕ	сЕсасассЕс	сЕдадааЕдд	360
дсассдсада	ддссасадсс	саЕасадсса	адаЕдасада	сЕссдЕаадЕ	дасадддаЕс	420
сасадсадад	ЕдддЕдаааЕ	дЕЕсссЕаЕа	аасЕЕЕасаа	ааЕЕааЕдад	ддсаддддда	480
ддддадаааЕ	дааааЕдаас	ссадсЕсдса	дсасаЕсадс	аЕсадЕсасЕ	аддЕсддсдЕ	540
дсЕсЕсЕдас	ЕдсЕЕссЕсд	ЕадсЕдсЕЕд	дЕдЕсЕсаЕЕ	дссЕсадаад	саЕдЕадасс	600
сЕдЕсасаад	аЕЕдЕадЕЕс	сссЕаасбдс	ЕссдЕадаЕс	асаасЕЕдаа	ссЕЕаддааа	660
ЕдсЕдЕЕЕЕс	ссЕЕЕдадаЕ	аЕЕссЕЕЕдд	дЕссЕдгаЕа	сЕдаЕддадс	ЕасЕдасгда	720
дсЕдсгссда	аддассссас	даддадсЕда	сЕааассаад	адЕдсадЕЕЕ	дЕасасссЕд	780
аЕдаЕЕасаг	сссссЕЕдсс	ссассааЕса	асбсЕсссаа	ЕЕЕЕссадсс	ссгсасссЕс	840
садЕссссЕЕ	аааадсссса	дсссаддссд	ддсасадЕдд	сЕсаЕдссЕд	ЕааЕсссадс	900
асЕЕЕдддад	дссааддЕдд	дсадаЕсасс	Едадддсадд	ааЕЕЕдадас	садссЕдасс	960
аасаЕдаада	аассссдЕсЕ	сЕаЕЕасааа	ЕасааааЕЕа	дссдддсдЕд	ЕЕдсЕдсаЕа	1020

- 60 011747 скддкааксс садскасккд ддадддкдад дсаддадаак сасккдаакс кдддаддсдд1080 аддккдсдак дадссдадас адсдссаккд саскдсадсс кдддсаасаа дадса1135 <210>42 <211>735 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> тхзс_£еакиге <223> последовательность ЗТАК42 <400>42

аадддкдада	ксаскаддда	дддаддаадд адскакаааа	дааададдкс	асксаксаса	60
ксккасасас	кккккаааас	сккддккккк	каакдкссдк	дккссксакк	адсадкаадс	120
сскдкддаад	саддадкскк	ксксаккдас	сассакдаса	адассскакк	какдааасак	1Θ0
аакадасаса	сааакдккйа	ксддакаЕЕЕ	аЕЕдааакак	аддааккккк	ссссксасас	240
сксакдасса	сакйскддка	саккдкакда	акдаакакас	сакаакккка	сскакддскд	300
какакккадд	кскккксдкд	саддскакаа	ааакакдкак	дддссддкса	садкдаскка	360
сдсссдкадк	сссадааскк	кдддаддссд	аддсдддкдд	аксасскдад	дксдддадкк	420
саааассадс	скдассааса	кддадааасс	ссдкскскдс	кааааакаса	ааааккааск	480
ддасасддкд	дсдкакдсск	дкааксссад	скасксддда	адскдаддса	ддадааскдс	540
ккдаасссад	даддсддадд	кйдкддйдад	ксдадаккдс	дссакйдсас	кссадсскдд	600
дсаасаадад	сдааакксса	ксксаааааа	аадаааааад	какдаскдка	кккадад£ад	660
какдкддайк	кдааааакйа	акаадкдккд	ссаасккасс	ккадддйкка	кассакккак	720
дадддкдксд	дкккс					735

<210>43 <211>1227 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> тхзс_£еакиге <223> последовательность 8ТАВ.43 <400>43 сааакадакс касасаааас аадайаакдк скдсссакйк ккссааадак аакдкддЬда60 адкдддкада дадааакдса кссакксйсс ссасссаасс гскдскааак кдкссакдкс120

- 61 011747

асадрасрда	дассаддддд	сЕЕаЕЕссса	дсдддсадаа	ЕдЕдсассаа	дсассЕсЕРд	180
ЕсЕсааРЕРд	садРсРаддс	ссЕдсЕаЕЕЕ	даЕддЕдЕда	аддсЕЕдсас	сЕддсаЕдда	240
аддРссдРРР	РдРасРРсЕР	дсЕЕЕадсад	ЕЕсааададс	адддададсЕ	дсдадддссЕ	300
сЕдсадсЕРс	адаРддаРдР	ддЕсадсЕЕд	ЕЕддаддсдс	сЕЕсЕдЕддр	ссаРЕаЕсбс	360
садссссссР	дсддЕдРРдс	ЕдЕЕЕдсЕЕд	дсЕЕдЕсЕдд	сЕсЕссаЕдс	сЕЕдЕЕддсЕ	420
ссааааРдЕс	аРсаРдсРдс	ассссаддаа	дааЕдЕдсад	дсссаЕсЕсЕ	ЕЕЕаЕдЕдсЕ	480
РРдддсРаРР	РРдаРРсссс	дЕЕдддЕаЕа	ЕЕсссЕаддЕ	аадасссада	адасасадда	540
ддРадРРдсР	РРдддададР	ЕЕддассЕаЕ	дддЕаЕдадд	ЕааЕадасас	адЕаЕсЕЕсЕ	600
сЕРРсаРРРд	дрдадасрдр	ЕадсЕсЕддс	сдсддасЕда	аЕЕссасаса	дсЕсасЕЕдд	660
даааасЕЕРа	РЕссааааса	ЕадЕсасаРЕ	даасаЕЕдрд	дадааЕдадд	дасададаад	720
аддсссРада	РРЕдЕасаРс	ЕдддЕдЕЕаР	дЕсЕаЕаааЕ	адааЕдсЕЕЕ	ддЕддЕсаас	780
РадасРРдРЕ	саРдРЕдаса	ЕЕЕадЕсЕЕд	ссЕЕЕЕсддЕ	ддЕдаЕЕЕаа	аааЕЕаЕдЕа	840
РаЕсЕЕдРРР	ддааЕаЕадЕ	ддадсЕаЕдд	ЕдЕддсаЕЕЕ	ЕсаРсЕддсЕ	ЕЕЕЕдЕЕЕад	900
сЕсадсссдР	ссЕдЕЕаЕдд	дсадссЕЕда	адсрсадЕад	сЕааЕдаада	ддЕаЕссЕса	960
сРсссРссад	ададсддЕсс	ссЕсасддсЕ	саЕЕдададЕ	ЕЕдЕсадсас	сЕЕдаааЕда	1020
дРЕЕааасРР	дЕЕЕаРЕЕЕЕ	аааасаЕЕсЕ	ЕддЕЕаЕдаа	ЕдЕдссЕаЕа	ЕЕдааЕЕасЕ	1080
даасаассРР	аЕддЕЕдЕда	адааЕЕдаЕЕ	ЕддЕдсЕаад	дЕдЕаЕаааЕ	ЕЕсаддасса	1140
дРдРсРсРда	ададЕЕсаЕЕ	ЕадсаЕдаад	Есадссрдрд	дсаддЕЕддд	Еддадссадд	1200
даасааРдда	даадсЕЕЕса	ЕдддЕдд				1227

<210> 44 <211> 1586 <212> ДНК <213> Ното зараепз <220>

<221> т!зс_£еаРиге <223> последовательность 5ТАК44 <400> 44

сассЕдссЕс	адссЕсссаа	адЕдсЕдада	ЕЕсааадааа	РРЕЕсаРдда	даддддасад	60
аЕддадЕсаа	ЕЕсЕЕдЕддд	дЕдаасаЕда	дЕассасадЕ	ЕадасРдадд	РЕдддааада	120
ЕЕЕЕссадас	ааЕЕддаада	дсаЕдЕдааа	дасасадаЕЕ	ррдадааард	РЕаадЕсРад	180
ддаасЕдсаа	ддсЕЕЕЕддс	асаадааадс	сасЕдЕадас	ЕаЕададдса	ддаРдссбад	240
аЕЕсаааЕсс	саасЕдсЕас	асЕЕсЕаадс	ЕРРдЕааРРР	РддсаадРРр	ЕЕасссЕсЕа	300

- 62 011747

РРРРсРРаРс	РаРааааРаР	адаРРРРаРа	РаРаРадаРа	РадаРаРаРа	даРадаРаар	360
ааррдрдсар	дссрааРааа	дррдрсааад	аррааардрр	аРаРдРдаад	РаРРРРдРас	420
ддрдаРадда	асссаддаад	ддсРсРаРда	аРаРРаРдРа	РРаРРаРРаР	РсРааадРад	480
сЕддааСаса	аРдРРсааад	дадаРадРдд	саддадаРаа	дРРРдааРРд	ааадаРРдад	540
дссадаасаР	ааадРдссРс	сРаРаРРаРа	СРРРасаРаа	РРддаасаРс	аРРдаааааР	600
РРаадРаРРа	РРРаРдРдРд	РаРдРдРдРР	РРаРаРааРР	ааРРсРадРР	саРсаРРРРа	660
аааРаРсРРР	сРдаРдРсас	РдРдаасаас	адаРдадаад	аадрдааРсс	РдадрРаадд	720
адассадсрс	РсрдаРРасР	дссаРааРсс	адддадддРа	ссаРааддаР	РРсаасРдда	780
адРдааРсса	РсаРдаРдда	даддааддас	адддсРдааа	ааРасРРадд	аадРадРаРс	840
адРаддасРд	дРРаададад	адсададдса	ддсРасаддд	дррддаддрд	РсааРсасад	900
адарадддаа	ааРдддадда	даадсаддсР	РЕдааааадР	ддсРРдРсРР	дРааааРРаР	960
дрдсрдрраа	аасадрасаа	дааарраара	СаРРсааРсс	сааааРасад	ддасааРРсР	1020
ррррдааада	дРРасссада	РадРсРРссР	РдаадРРРРс	адРРааадаа	аРРРсРРдРР	1080
аасаааРааР	дРадРсаРад	аадаааасас	РРаааасРРР	аРРдааРааа	дсРааРаааР	1140
	йМ· + я Ь й гтп	аядк-ЕдкЬй д			К + 1- 1- гтг' Ή я а - * - *	1200
адРаРаааРР	ааРддаадда	дадсасдсас	асададдРРд	ааРРаРдРРР	аРдасСРРаР	1260
РадРсаадаа	РасааааРРд	адРадсРаса	рсаадсадаа	дсасаРдсРР	РасааСссад	1320
сасадааРсс	сРРдасаРсс	ааасРсссда	аасадасаРд	Рааарасада	РдасаРРдРс	1380
адаасааааР	адддРсРсас	ссдассРаРа	аРдРРсРРРР	сРРдаРаЪаа	аРаРдсасаР	1440
дааррдсаРа	сддРсаРаРд	дСРссааРРа	ссаРРаРРРс	сРсРдддсРР	адсРаРссаР	1500
сРааддддаа	РРРасассаа	сасРдРасРР	сРасРРдсаа	дааРаРаРда	аадсаРадРР	1560
аасРРсРддс	РРаддасссс	аасРса				1586

<210> 45 <211> 1981 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т1зс_£еариге <223> последовательность ЗТАВ45 <400> 45 аРддаРсаРа дддРаааРаа аРРРаРааРР РсРРдадааа дсРРсдРасР дРРРРссаад 60

- 63 011747

аЕддсЕдЕас	ЕааЕЕЕссаЕ	ЕссЕассаас	адЕдЕасадд	дЕЕЕсЕЕЕЕЕ	сЕссасаЕсс	120
Есассаасас	ЕЕаЕсЕЕсса	ЕсЕЕЕЕЕЕЕа	ЕааЕадсссЕ	адЕааааЕдЕ	дЕдаддЕдаЕ	180
аЕсСсаЕЕдЕ	ддсаЕЕдаЕЕ	ЕдсасЕЕсЕс	ЕдаЕааЕЕад	дааЕдЕЕЕаЕ	даЕЕЕЕЕЕса	240
ЕдЕассЕддЕ	ЕддссЕЕЕЕд	ЕаЕдаЕдЕад	даааЕдЕсЕа	ЕЕсЕдаЕЕсЕ	ЕЕдсЕЕаЕЕЕ	300
ЕЕЕааЕаадс	аЕадЕЕЕЕЕЕ	ЕсЕЕаЕЕЕЕЕ	дадЕаддЕЕд	адЕЕдсЕЕаЕ	аЕаЕЕаЕЕаЕ	360
аЕдадссссЕ	ЕассЕдаЕдЕ	аЕддЕЕЕааа	аабаЕЕаЕсс	саЕЕЕдЕддд	ЕЕсЕсЕЕааЕ	420
ЕсЕаЕсаЕЕд	сЕЕсЕЕЕЕсс	ЕдЕддаааад	ЕЕЕЕаадЕЕЕ	ЕаЕдсадЕсЕ	саЕЕЕдЕдЕд	480
ЕЕЕЕдсЕЕЕЕ	дЕЕдссЕЕЕЕ	ддааЕааЕсЕ	асадааааЕс	аЕадсЕсадд	ссааЕдЕсаЕ	540
асадЕсЕссЕ	ЕсЕабаЕЕЕс	сЕЕдЕадбад	ЕЕЕЕасаЕЕЕ	ааасЕЕЕааЕ	ЕЕЕдаЕЕЕда	600
ЕдсЕЕдЕаЕа	аададсаааа	ЕаааадЕсаа	аЕЕЕЕаЕЕсЕ	ЕсЕдЕаЕдЕд	даЕадЕсадЕ	660
ЕЕЕдЕсЕаса	ссаЕЕЕаЕЕд	ааааЕааЕЕЕ	ЕсЕЕЕсЕЕса	сЕдЕдЕаЕЕЕ	ЕЕадЕЕаЕЕЕ	720
ЕаЕсаааааа	ЕсааЕЕдасс	асадасасас	ддаЕЕЕаЕЕЕ	асаддЕЕсЕа	ЕаЕсссЕЕЕд	780
ЕасЕдЕЕЕЕа	саЕдбсЕдЕЕ	ЕЕЕаЕдссаЕ	ЕдсбаЕдсЕд	ЕЕЕЕааЕЕсс	ЕаЕадсЕЕЕд	840
ЕааЕададЕЕ	ЕддадЕсадд	ЕадЕсЕдаЕд	ссЕссадсЕЕ	ЕдЕЕсЕЕЕЕЕ	дЕЕсаадаЕЕ	900
дсЕЕЕддЕЕд	дЕссаддЕсЕ	ЕЕЕдЕддЕЕс	саЕасааабЕ	ЕЕадсадбаа	ЕЕЕЕЕСЕаЕЕ	960
ЕсЕдЕдаада	абдасаЕЕдд	ааЕЕЕдабад	ЕддЕЕдсаЕЕ	ЕааЕсЕдЕад	аЕЕдсЕЕЕдд	1020
дЕадсаЕЕда	сасЕЕЕЕаса	аЕасЕааЕЕЕ	ЕЕдааЕссаЕ	сааЕдаадда	ЕдЕЕЕсЕсса	1080
ЕЕЕаЕЕЕаЕд	ссаЕЕЕЕааЕ	ЕЕЕЕЕЕсаЕс	ааЕдЕдсбаЕ	адЕЕЕЕсадЕ	аЕдЕаааЕсЕ	1140
ЕЕЕаЕддЕЕЕ	ЕдаЕЕаааЕЕ	ЕасЕссЕдЕс	ЕЕЕЕаЕаЕаЕ	ЕЕаЕаЕаЕсЕ	дЕЕЕЕдаЕЕс	1200
ЕаЕЕаЕаааЕ	ЕдааЕЕдссЕ	ЕЕаЕЕЕЕЕса	ддЕааЕадЕЕ	ЕдЕсаЕЕадЕ	ЕааЕадааас	1260
ааЕааЕдаЕа	ЕЕЕдЕаЕдЕЕ	даЕЕЕЕдЕаа	сЕаЕЕаасЕЕ	ЕаЕЕдааЕЕЕ	сЕЕсаЕсадс	1320
ЕаЕаассаЕЕ	ЕаЕЕЕЕддЕд	дааЕсЕЕЕаа	даЕЕЕЕсЕсЕ	агсЕЕаадаЕ	ЕаЕаЕЕЕЕса	1380
ааааасадаа	асааЕсЕЕас	сЕсЕЕссЕЕс	ссЕаЕдЕдда	ЕЕЕсЕЕЕЕас	дЕсЕЕЕдЕсЕ	1440
ЕдЕдЕаасЕд	ЕЕсЕддсЕад	дсааЕЕасас	аЕааЕдЕЕЕЕ	саЕсаЕЕЕаЕ	ааЕЕЕЕасаЕ	1500
сасаЕссаЕс	ЕаЕЕдЕддса	саЕЕдаЕЕдс	ЕасЕЕЕЕсаа	дЕЕдЕааасс	ЕддасаЕЕЕа	1560
ЕсасЕасЕсЕ	ЕссЕссааЕа	саддадЕсса	ЕддсдЕддЕд	ЕдддсссЕас	Едбдссасад	1620
Ессадддсас	ддсЕдддсЕд	аддЕбсЕсЕЕ	дЕдсаададЕ	ссдЕддсЕсЕ	дсддадсаад	1680
адЕЕсЕссад	ЕдссЕЕадЕс	садддЕЕадд	саддддЕддд	дсбссЕЕсад	ЕадсЕЕадЕс	1740
садЕдсдссд	сссЕдсдадд	дЕссЕссЕда	дсаддадЕас	асдаЕдаддс	адддЕссЕас	1800
ЕдЕдссЕЕад	сссаддаадс	ддддддсЕдд	дЕссЕсЕддЕ	дссаЕадЕсс	аддсЕдссдд	1860

- 64 011747 дадсПдддНс сНсНддНдсс аНадсНсадд ссддсдддад сНдддНссНс НддНдссдПа1920 дНссадддНд садсадааса ддадНссНдс ддадсадНад Нссадддсас дсНддддсдН1980

1981 <210>46 <211>1859 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еаНиге <223> последовательность 5ТАН46 <400> 46

анндпн.нпнс	ПсдсссННсП	дсаррРРсНд	саааРРсРдР	РдааРсаРРд	садНРасРра	60
ддННПдсНПс	дПсПссссса	НРасааасНа	ерраердддр	РРРРсаассс	ПадННсссПс	120
аННППНаПда	ННсаНдсНса	РРЬсНРРдНа	сасРРсдНсН	НдсРссаРсН	сссаасРсаН	180
ддссссНддс	ПННддаНПаН	рдррррддрс	ННППаННННН	НдреРРеНРе	ПассПсааса	240
сиаЛЫсс	НсНсссадНс	РссддРассс	РаРсассаад	дРРдРсаНРа	ассРРРсаРа	300
ННаННссНса	ННаНссаНдН	аНРсаНРНдс	аааРаадсдН	аРаРРаасаа	ааРсасаддР	360
ННаНддадаН	аНааННсаса	НассННаааа	НРеаддеРНР	РааадНдНас	сРРРсаРдРд	420
дНсНННддНа	НаННсасааа	дНРардсаНН	даНсассасс	аРсНдаРНсс	аНаасаНдНП	480
саапасспса	аааадаадпс	£драенсанС	адРадРсаРР	рсасаррсас	сасРсссНсР	540
ддсПсНдддс	адНсасНдаН	сНРРдРдНсР	сНаНддаННП	дссНадНсРа	ддНаНПННЕа	600
НдНаааНддс	аНсаНасаас	ардРдассРН	РРдРРРддсН	НННННсаННН	адсааааНдН	660
НаНсааддНс	НдРсссРдРР	дНадсаНдНа	РРадсасРРс	аРРРерраНа	НдеНдааПда	720
НаНасНННаН	ННдНссаНса	дРРдРРсаНд	еРРНаРррдН	ссаРсадРНд	ардаасаррр	780
дсдннППНдс	сасРНРдддс	НаНпаадааН	ааПдснасПд	НдаасаадНд	НдНасаадРР	840
ссНсНасааа	НННННдНдРд	дасаРаРссР	РРсадРНсРс	РсаддНдРар	ареРдддааР	900
НдааППдсНд	ддРсдРдНад	РадсРаРдРР	ааасасНРРд	адаааеРдеН	аРааРдНРеН	960
ссададсПдН	ассаРРРРаа	аНРсРдРдНа	НдаддаННсс	асдНРсРсса	сННссНсасс	1020
адНдНаНдда	НРРдддддРа	ПасНННННаа	ааадНдддаН	Наддсрдддс	асадРддсРс	1080
асассНдНаа	Рсссаасаср	Нсаддаадсв	даддрдддад	дансасррда	дссРадНадН	1140
ННдадассад	ссНдддсаас	аНадддадас	ссРдРсРсРа	сааааааПаа	РНРааааРаа	1200

- 65 011747

аДДадсДддд	сдДДдДддса	сасассДдДа	дДсссадсДа	саДдддаддс	ДдаддДддаа	1260
ддаДДсссДд	адсссадаад	ДДДдаддДДд	садДдадсса	ДдаДддсадс	асДаДасДдД	1320
адссдддддд	Дсададсаад	асДссдДДДс	адддаадааа	ааааааадДд	ддаДдаДаДД	1380
ДДДдасасдД	ддсддсдддд	дддсддаадд	ДсаДасДДсД	ддаааДДсса	ДДаааДДадс	14 40
ДддДассасД	сдаасДсаДД	дДдДДДсадд	дсДдсаДадД	ааДаДДдсаД	ааДаДаааДа	1500
ДассаДДсаД	ДсаДсааадД	ДадсадаДаД	ДдасДдДДад	дДдссаддса	сДдсДсДаад	1560
сдДДааадаа	ааасасасаа	ааасДДДДдс	аДДсДДадад	ДДДаДДДДсс	ааДддадддд	1620
дДддадддад	дДаадааДДД	аддаааДааа	ДДааДДасаД	аДаДадсаДа	дддДДДсасс	1680
адДдадДдса	дсДДдааДсд	ДДддсадсДД	ДсДДадДадД	аДаааДасад	ДасДааадаД	1740
даааДДасДс	ДаааДддДдД	ДасДДаааДД	асДддааДад	дДаДДасДаД	ДадДсасДДД	1800
дсаддДдааа	дДддааасас	саДсдДаааа	ДдДааааДад	дааасадсДд	дДДааДдДД	1859

<210> 47 <211> 1082 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т1зс_£еаДиге <223> последовательность 5ТАВ47 <400> 47

аДсаДДадДс	аДДадддааа	ДдсаааДдаа	ааасасаадс	адссассааД	аДасассДас	60
ДаддаДдаДД	Даааддаааа	ДаадДдДдаа	дааддасдДа	аадаааДДдД	аасссДдаДа	120
саДДдаДддД	адаааДддаД	ааадДДдсад	ссасДдДдаа	ааасадДсДд	садДддсДса	180
дааддДДааа	ДаДадаассс	сДдДДддасс	саддаасДсД	асДсДДаддс	ассссааада	240
аДададааса	даааДсааас	адаДдДДДдД	аДасДааДдД	ДДдДадсаДс	асДДДДсаса	300
ддадссаааа	ддДддаааДа	аДссаассаД	садДдаасаа	аДдааДдДаа	Даааадсаад	360
дДддДсДдса	ДдсааДдсДа	саДсаДссаД	сДдДаааааа	сдаасаДсаД	ДДДдаДадаД	420
даДасаасаД	дддДддасаД	ДдадаасаДД	аДдсДДадДд	аааДаадсса	дасасаааад	480
дааДаДаДДд	ДаДааДДдДа	аДДасаДдаа	дДдссДадаа	дадДсааадд	саДасаадад	540
ааадДдддаД	аддааДсасс	аДдддсДдда	ааДаддддда	аддДдсДаДа	сДдсДДаДДд	600
ДддасааддД	ДДсдДаадаа	аДсаДсаааа	ДДдДдддДдД	адаДадДддД	дДДддДДаДд	660
саасссДдДд	ааДаДаДДда	аДдссаДдда	дДдсасасдд	ДддДДаааад	дд ДсаааДда	720
ДаааДаДДдД	дДДаДаДаДа	ДДДссссасд	аДадааааса	сдсасадсса	адсссасаДд	780

- 66 011747

ссадюид!	ЕадсЬдссгъ	ссШассН	саадад^ддд	с1даадсггд	1ссаа1с1Е1:	840
сааддИдсЪ	даадасбдка	ЬдаЬддаад!:	сабсЬдсаЫ	дддааадааа	Ыаабддада	900
даддадаааа	сИдадааЕс	сасасЕасЪс	асссЪдсадд	дссаадаасЕ	сЕдЕсЪссса	960
ЕдсШдсЪд	ЪссЕдЕсЕса	д^аШссЕд	ЕдассассЪс	сШЫсаас	Ъдаадас'Ь'Е'Ь	1020
дЕассЕдзад	дддМсссад	дНИксасс	ЬсддсссЪЬд	ЪсаддасЕда	1сс1сЪсаас	1080
1а						1082

<210>	48
<211>	1242
<212>	ДНК
<213>	Ното	5ар1епз
<220>
<221>	тазе	£еа£иге
<223>	последовательность ЗТАК48
<400>	48

а1са1д1аМ	1д11С1с1да	а(:1ааг:сЫ	адабаса+Га	аГдММаСд	МассаЕдаа	60
кдЪдаБаМа	ЕааЕаЕааЪа	ЙШааНд	дМдсЬасЕд	ШаЕаадаа	ШзсаЪШс	120
ЬдШасОЕЕ	дссИсабаЕ	сЕдаааасс!	ЕдебдаШд	ΗΐΙθςΙςοΒΐ	ссасаааШ	180
ТсМддаШ	ЕсЕаЕдддЪа	аМасааабс	Ессасасаа!	даддМдеад	Едадссаада	240
Есасассас!	д1ас!ссадс	сСдддсдаса	дадЕдадаса	ссаЕсЕсаса	аааасасаба	300
аасааасааа	садааасЬсс	асасааСдас	аасд1а1д1д	σϋΐϊσϊΐΐΜ:	МсЕЕсс^сЪ	360
ИсОабааЕа	МзЕсШдЕс	сЕаЕсССаас	1даас1ддсс	адааасссса	ддасаабда!	420
ааабасдадс	адйдЕсааса	дасаюъса!	есссшсс!	адс1М1а1а	ааааЕаасда	480
НаГдсСЬса	асаЕЕасаЪа	ЬддЕддЕдбе	даИддЪШд	ИаЬадаЕаа	дсЕЬа!садд	540
Ыаадааа! 1	ОдТс^дсдЫ:	ЪссЪадШд	дбаБааэдаЕ	ШаабаДаа	аЪдаа!дЫ:д	600
гаШШса	ктаинь	ЫссОасаОс	Одскааддба	аЪссОдЕдИ	НссссИИ	660
саабсессОа	абдЕддбдаа	ЪдасаЪЪааа	а1асс11с1а	ЫдЫааааО	аЫсЕ.дсаа	720
сдс0д!а1:ад	аассаакдсс	ЫЕаЪЮЕдб	аМдеЕдабд	даиШдаа	аааЕабдЕад	780
дЪддасЕСад	ОШсУаадд	ддааЕадааЕ	ЕЪекаабаба	ШааааС.аЬ	ШдсаЪдба	840
ЕдДЕсЕдаад	дасаЕЪддЕд	ЕдЕсаШсЕ	аЪассабсЪд	дс!ас!адад	дадссдасбд	900
ааадЬсасас	кдееддадда	ддддададд!	дсЪсЕгссдЬ	ЫсЕддЕдЬс	ЕдЪадссабс	960
ίссадЕддба	дебдеадбда	1аа£аа(:дс1	дсад!дссда	садббсбдда	аддадсааса	1020

- 67 011747

асадЪдаШ	садсадсадс	адбаббдсдд	дабссссасд	абддадсаад	ддааабааМ	1090
сбддаадсаа	бдасаабабс	адсбдбддсб	абадсадсбд	адабдбсгадб	бсбсасддбд	1140
дсадскбсаа	ддасадбадб	дабддбссаа	Дддсдсссад	ассбадааа!	дсасаЕМсс	1200
бсадсассдд	сбссадабдс	бдадсббдда	садсбдасдс	сб		1242

<210> 49 <211> 1015 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

<221> т1зс_£еа6иге <223> последовательность ЗТАК49 <400>49

ааассадааа	сссаааасаа	бдддадбдас	абдсбаааас	садааассса	ааасаабддд	60
адддбссбдс	Ъааассадаа	асссааааса	абдддадбда	адбдсбаааа	ссадааассс	120
аааасаабдд	дадбдЬссбд	сбасассада	аасссаааас	дабдддадбд	асдбдабааа	180
ассадасасс	саааасаабд	ддадбдасдб	дсбааассад	ааасссаааа	саабдддадб	240
дасдбдсбаа	аассбддааа	ссбаааасаа	бдсдадбдад	дбдсбаасас	садаабссаб	300
аасаабдбда	дбдасдбдсб	ааассадаас	ссаааасааб	дддадбдасд	бдсбааааса	360
ддаасссааа	асаабдадад	бдасдбдсба	аассадааас	ссаааасааб	дддаабдасд	420
бдсбаааасс	ддаасссааа	асаабдддад	Сдабдбдсба	аассадааас	ссаааасааб	480
дддаабдаса	бдсбаааас!	ддаасссааа	асаабддбаа	сбаададбда	бдсбааддсс	540
сбасаЪЫЪд	дбсасасбсб	сааскаадбд	адаасббдас	бдааааддад	да6£666666	600
бсбаадасад	адб+.Мддбс	бдбсссссад	адбддадбдс	адбддса+да	Ьсбсддсбса	660
сбдсаадсбс	бдссбсссдд	дИсаддсса	Ъбсбссбдсс	бсадссбссб	дадбадсбдд	720
даабасаддс	асссдссасс	асасббддсб	ааииид!	абббббадба	дадабддддб	780
ббсассаба!	Ъадсааддаб	ддбсбсаабс	бссбдассбс	дбдабсбдсс	сассбсаддс	840
бсссааадбд	сбдддаббас	аддбдбдадс	сассасассс	адсааааадд	аддааббббб	900
ааадсааааб	бабдддаддс	сабвдббббд	аассаадсбс	абдсаабадд	бсссаасада	960
ссааассааа	ссааассааа	аЕддадбсас	Ъсабдсбааа	Ъдбадсабаа	бсааа	1015

<210>50 <211>2355 <212> ДНК <213> Ното зартепз

- 68 011747 <220>

<221> ш1зс_£еаЕиге <223> последовательность 5ТАК50 <400> 50

саассаЕсдЕ	Ессдсаадад	сддсЕЕдЕЕР	аррааасаЕд	аааЕдаддда	ааадссРадЕ	60
адсЕссаЕЕд	даЕЕдддаад	ааЕддсааад	ададасаддс	дРсаРЕЕЕсЕ	адааадсааЕ	120
сРЕсасассЕ	дррддЕссЕс	асссаррдаа	ЕдРссЕсасс	сааЕсЕссаа	сасадааард	180
адЕдасЕдРд	ЕдЕдсасаЕд	сдЕдЕдсаЕд	ЕдРдааадЕа	ЕдадЕдЕдаа	ЕдЕдРсЕаРа	240
РдддаасаРа	ЕаЕдЕдаЕЕд	ЕаЕдЕдЕдЕа	асЕаРдЕдРд	асЕддсадсд	ЕддддадЕдс	300
ЕддЕЕддадЕ	дЕддЕдЕдаЕ	дЕдадЕардс	аЕдадРддсЕ	дрдрдрарда	сгдрддсддд	360
аддсддаадд	ддадаадсад	саддсЕсадд	ЕдЕсдссада	даддсЕддда	ддааасРаРа	420
аассЕдддса	аЕЕСссЕссЕ	саЕсадсдад	ссЕЕЕсЕЕдд	дсааЕадддд	сададсЕсаа	480
адРЕсасада	даЕадЕдссР	дддаддсаЕд	аддсааддсд	даадЕасЕдс	даддаддддс	540
ададддЕсЕд	асасЕЕдадд	ддРЕсЕаард	ддаааддааа	дасссасасЕ	дааРЕссасЕ	600
Еадссссада	сссЕдддссс	адсддЕдссд	дсЕЕссаасс	аЕассаасса	ЕЕРссаадЕд	660
Ь ηπππγιγ·λπ			г' згг1 + I-		Ь лгглэггаялк	720
			ч» Ч_ ννν,'-
аассаадсЕЕ	ассЕЕсссдд	садЕдЕдЕда	ддаЕдаааад	адсЕаРдЕас	дЕдаРдсасЕ	780
Еадаадаадд	ЕсЕадддЕдЕ	дадЕддЕасЕ	сдЕсЕддрдд	дрдрддадаа	дасаЕЕсРад	840
дсаардадда	сЕддддадад	ссЕддсссаЕ	ддсЕЕссасЕ	садсааддЕс	адРсЕсЕЕдГ	900
ссЕсЕдсасЕ	сссадссЕЕс	садададдас	сЕЕсссаасс	адсасЕсссс	асдсЕдссад	960
ЕсасасаЕад	ЕрасасасаЕ	асааЕсасаЕ	аРаЕдРЕссс	аРаЕадасас	аЕрсасасЕс	1020
арассЕЕсас	асаЕдсасас	дсаЕдЕдсас	асасадЕсас	ЕсаРЕЕсЕдр	дЕЕддадаРЕ	1080
дддгдаддас	аЕЕсааЕддд	Едаддассаа	саддЕдЕдаа	даРЕдсЕЕЕс	ЕадааааЕда	1140
сЕссЕдЕсЕс	ЕсЕЕЕдссаЕ	ЕсЕЕсссааЕ	ссдаЕддадс	ЕасЕаддсЕЕ	РЕсссРсаЕЕ	1200
ЕсаЕдЕЕЕаа	ЕааассЕЕсс	сааЕддсдаа	аЕдддсЕЕЕс	ЕсаадаадЕд	дЕдадЕдРсс	1260
саЕсссЕдсд	дрддддасад	дддрддсадс	ддасаадссР	дссрддаддд	аасРдРсадд	1320
сЕдаррссса	дРссаасЕсс	адсЕЕссаас	ассЕсаЕссЕ	ссаддсадЕс	ЕРсаЕРсРЕд	1380
дсЕсЕааЕЕЕ	сдсЕсЕЕдЕЕ	ЕЕсЕЕЕЕЕЕа	ЕЕЕЕЕаЕсда	даасЕдддЕд	дададсЕЕРЕ	1440
ддЕдРсаРРд	дддаЕЕдсЕЕ	ЕдааасссЕЕ	сЕсЕдссЕса	сасЕдддадс	РддсЕЕдадЕ	1500
саасЕддрсЕ	ссаЕддааЕЕ	ЕсЕЕЕЕЕЕЕа	дрдрдрааас	адсЕаадРЕЕ	Еаддсадсрд	1560

- 69 011747

ккдкдссдкс	садддкддаа	адсадсскдк	кдакдкддаа	скдсккддск	садакккскк	1620
дддсааасад	акдссдкдкс	ксксааскса	ссааккаада	адсссадааа	акдкддсккд	1680
дадассасак	дкскддккак	дкскадкаак.	ксадакддск	ксасскддда	адссскккск	1740
даакдксааа	дссакдадак	аааддасака	какакадкад	скадддкддк	ссасккскка	1800
ддддссакск	ссддаддкдд	кдадсаскаа	дкдссаддаа	дададдааас	кскдккккдд	1860
адссааадса	кааааааасс	ккадссасаа	ассаскдаас	акккдкхккд	кдсаддккск	1920
дадкссаддд	адддсккскд	аддададддд	садскддадс	кддкаддадк	какдкдадак	1980
ддадсааддд	ссскккаада	ддкдддадса	дсакдадсаа	аддсададад	дкддкаакдк	2040
акааддкакд	ксакдддааа	дадкккддск	ддаасададк	ккасадаака	даааааккса	2100
асаскаккаа	ккдадсскск	аскасдкдск	сдасаккдкк	скадксаскд	адакаддккк	2160
ддкакасааа	асааааксса	ксскскакдд	асаккккадк	даскаасаас	аакакааака	2220
акаааадкда	асаааадскс	аааасакдсс	аддсаскакк	акккакккак	ккакккаккк	2280
акккакккак	кккккдааас	ададксксдс	кскдккдссс	аддскддадк	дкадкддкдс	2340
даксксддск	саскд					2355

<210> 51 <211> 2289 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> тхзс_£еакиге <223> последовательность 8ТАВ51 <400> 51

ксасаддкда	сассаакссс	скдасаасдс	кккдадаадс	аскдкаскад	аккдаскккс	60
каакдксадк	скксаккккс	кадскскдкк	асадссакдд	кскссакакк	акскадкаса	120
асасасакас	ааакакдкдк	дакасадкак	даакакаака	кааааакакд	кдккакаака	180
кааакакаак	аккаааакак	дкскккакас	кадакаакаа	касккаакаа	сдккдадкдк	240
ккааскдскс	каадсасккк	асскдсадда	аасадккккк	кккккак.ккк	ддкдааакас	300
ааскаасака	аакккаккка	сааккккаад	сакккккаад	кдкакадккк	адкддадкка	360
акакакксаа	аакдккдкдс	адссдксасс	аксаксадкс	кксакааскс	кккксакакк	420
дкааааккаа	аадкккакдс	ксакккаааа	акдаскссса	аккксссссс	кссксаасск	480
скддаааска	ссаккскакк	ккскдссксс	дкадккккдс	ссаскскаад	кассксасак	540
аадкддаакк	кдксккаккк	дсскдкккдк	дассддскда	ккксакккад	какаакдксс	600

- 70 011747

РсаадРРРРа	РРсасдРРаР	аРадсаРаРд	РсаРааРРРР	сРРсасРРРР	аадсррдадр	660
ааРаРРРса!	сдРаРдРаРс	РсасаРРРРд	сРРаРссаРР	саРсРсРсад	РддасасРРд	720
адррдсррср	асаРРРРадс	РдРРдРдааР	асрдсрдсра	РдаасаЕддд	РдРаРаааРа	780
Рсрсаадасс	РРРРРаРсад	РРРРРРаааа	РаРаРасРса	дРадРааРрР	адсрддаРРа	840
РаРддРааРР	РРаРРРРРаа	РРРРРдадда	асРдРссРас	ссРРРРзРРс	ааРадРадсР	900
аРассааРРд	асааРРддса	РРссРассаа	садддсаРаа	дддРРсРсаа	ЕРсрссасаР	960
аРРсссРдаР	асРРдРРаРР	РРсаддРдРР	РРРРРРРРРР	РРРРРРРРРР	аРдддадсса	1020
РдРРааРддд	РдРааддРда	РаРРРсаРРа	РадСРРРдаР	РРдсаРРРсс	сРааРдаРРа	1080
дРдаРдРРаа	дсаРсРсРРс	аРдРдссРаР	РддссаРРРд	РаРаРсРРсР	РРаааааРаР	1140
аРаРаРасРс	аРРссРРРдс	ссаРРРРРда	аРРаРдРРРа	РРРРРРдРРа	РРдадРРРса	1200
аРасРрРРсР	аРаРаассРа	ддРаРРаарс	сРРРарсада	сРРаадаРРР	дсаааРаРРс	1260
рсрррсаррс	сасаддррдс	рааРРсРсРс	рдррддрааР	аРсРРРРдаР	дсРдРРдРдР	1320
ссадааРРда	ррсаррссрд	рдддррсррд	дРсРсасрда	сРРсаадааР	ааадсРдсдд	1380
асссРадРдд	РдадРдРРас	асррсрРаРа	дарддрдррр	ссддадРРРд	РРссРРсада	1440
рдрдрссада	дРРРсРРссР	рссаардддр	РсаРддРсРР	асРаасРРса	ддааРдаадс	1500
сдсадассРР	сдсадрдадд	РРРасадсРс	РРаааддРдд	сдрдрссада	дррдрррдрр	1560
сссссрддрд	ддррсдрддр	сРРдсРдасР	РсаддааРда	адссдсадас	ссрсдсадрд	1620
адРдРРасад	сРсаРааадд	радрдсддас	асададрдад	сРдсадсаад	аРРРасРдРд	1680
аададсаааа	даасааадсР	РссасадсаР	адааддасас	сссадсдддр	РссРдсРдсР	1740
ддсрсаддрд	дссадРРаРР	аРРсссрРаР	ррдсссрдсс	сасаРссРдс	рдаррддрсс	1800
аРРРРасада	дРасРдаРРд	дРссаРРРРа	сададРдсРд	аРРддРдсаР	РРасааРссР	1860
РРадсРадас	асададрдсР	даРРдсРдса	РРсрРасада	дРдсРдаРРд	дрдсарррас	1920
адРссРРРад	сРадаРасад	аасдсрдарр	дсРдсдРРРР	РРасададРд	сРдаРРддРд	1980
саРРРасааР	ссРРРадсРа	дасасадрдс	рдаррддрдд	дРРРРРасад	адрдсрдарр	2040
ддРдсдРсРР	РасададРдс	РдаРРддРдс	аРРРасааРс	сРРРадсРад	асасададрд	2100
сРдаРРддРд	сдРРРаРааР	ссРсРадсРа	дасадаааад	РРРРссаадР	ссссассРда	2160
ссдадаадсс	ссасрддсрр	сассРсРсас	РдРРаРасРР	РддасаРРРд	Рссссссааа	2220
аРсРсаРдРР	даааРдРаас	сссРааРдРР	ддаасРдадд	ссадасРдда	РдРддсРддд	2280

ссаРдддда 2289

- 71 011747 <210> 52 <211> 1184 <212> ДНК <213> Ното зар!епз <220>

<221> т!зс_£еаЕиге <223> последовательность 5ТАК52 <400>52

сЕсЕЕсЕЕЕд	ЕЕЕЕЕЕЕаЕЕ	ЕЕддддЕдЕд	ЕдддЕасдЕд	ЕаадаЕдада	ааЕдЕасааа	60
сасаадЕаЕЕ	ЕсадааасЕс	саадЕааЕаЕ	ЕсЕдЕсЕдЕд	адЕЕсасддЕ	аааЕаааЕаа	120
ааадддсааа	дЕдасадааа	ЕасаддаЕЕа	ЕЕаааадсаа	ааЕааЕдЕЕс	ЕЕЕдаааЕсс	180
сссссЕЕддЕ	дЕаЕЕЕЕЕЕа	ЕсЕЕаддаЕд	садсасЕЕЕс	адсаЕдссса	адЕаЕЕдааа	240
дсадЕдЕЕЕЕ	ЕасдсЕасса	сддЕааЕЕЕЕ	аЕЕЕадааас	сссаЕдЕЕса	сЕЕЕЕадЕЕЕ	300
ЕааааЕддЕс	ЕЕЕаЕдасаЕ	ааааЕЕаЕса	дсаЕЕсаЕаЕ	ЕЕЕЕдЕдЕЕЕ	ЕааЕаЕЕссЕ	360
ЕЕддсЕасЕЕ	аЕЕдааасад	ЕааасаЕЕас	дааааЕЕадЕ	ааасаааЕсЕ	ЕЕдаЕадЕЕд	420
сИасй.ид	ЕЕЕааЕЕдаа	ЕдЕЕЕаЕЕЕЕ	аЕЕаддЕааа	ЕаЕасааЕса	ааЕЕЕаЕЕЕа	480
ааааЕааЕда	ддаааадааЕ	асЕЕЕЕсЕЕЕ	сдсЕЕЕдсда	аадсааадЕд	аЕЕЕЕЕсаЕЕ	540
сЕЕсЕссдЕс	сдаЕЕссЕЕс	ЕсЕЕссадсЕ	дссасадссд	асЕдасаддс	Есссддсддс	600
сЕдаддадЕа	дЕаЕдсаааЕ	ЕЕЕддаЕдаЕ	ЕдасассЕас	адЕадаадсс	ааЕсасдЕса	660
аадЕаддаЕд	сЕдаЕЕддЕЕ	дасаасааЕа	ддсдЕааасс	ЕЕдасдЕЕЕЕ	ааааассЕда	720
сасссааЕсс	аддсдаЕЕса	ЕдсаааЕааа	ддаадддадЕ	сасаЕЕасса	ддддссадад	780
адасЕЕдадЕ	асдассЕсас	дЕдЕЕсадЕд	дЕддаЕаЕЕд	сасадасдЕс	ЕдсааддЕсЕ	840
аЕаЕааасдс	ЕасаЕааЕдЕ	ЕсаасЕсааЕ	ЕдсЕЕдссЕЕ	ддссЕЕЕссс	ааасЕЕдЕса	900
сЕддааЕаЕа	ааЕЕаЕсссЕ	ЕЕЕЕЕааааа	ЕаааааааЕа	адааЕЕаЕдЕ	адЕдсасаЕа	960
ЕаЕдаЕддЕЕ	саЕдЕадааа	ЕсЕаааЕдда	сЕЕссаасдс	аЕддааЕЕЕЕ	ссЕаЕЕЕссс	1020
ссЕЕЕсЕЕЕа	ааЕЕааЕссЕ	садЕдаадда	ддсЕдЕЕЕЕс	сссЕадаЕЕЕ	сааааддасд	1080
адаЕЕЕасад	адссЕЕЕссЕ	Еддадааасс	сдсЕсЕаддс	асадаЕддЕс	адЕаааЕЕЕа	1140
дсЕЕсЕЕсад	сдаадЕЕсса	саЕддсассд	ссадаЕддса	Еаад		1184

<210>53 <211>1431 <212> ДНК <213> Ното зартепз <220>

- 72 011747 <221> гм.5с_£еаРиге <223> последовательность 8ТАК53 <400>53

сссрдаддаа	дардасдадр	аасРссдРаа	дадаассррс	сасРсаРссс	ссасаРсссР	60
дсадасдрдс	раррсрдрра	рдарасрддр	аРсссаРсРд	РсасРРдсРс	сссаааРсаР	120
РсссРРсРРа	сааРРРРсра	сРдРасадса	РРдаддсрда	асдаРдадад	а+РРсссаРд	180
сРсРРРсРас	РсссРдсссР	дРаРаРаРсс	ддддаРссРс	ссРасссадд	аРдсРдРддд	240
дРсссааасс	ссаадраадс	ссРдаРаРдс	дддссасасс	РРРсРсРадс	с+аддааррд	300
аРаасссадд	сдаддаадрс	асрдрддсар	даасадаРдд	РРсасРРсда	ддаассдрдд	360
ааддсдрдрд	саддРссРда	даРадддсад	ааРсддадрд	рдсаддаРсР	дсаддрсадд	420
аддадРЪдад	аррдсдРОдс	сасдРддРдд	даасРсасРд	ссасРРаРРР	ссРРсРсРсР	480
РсРРдссРса	дссРсаддда	РасдасасаР	дсссаРдаРд	адаадсадаа	сдрддрдасс	540
рррсасдаас	ардддсардд	сРдсддассс	срсдрсарса	ддРдсаРадс	аадрдааадс	600
аадРдРРсас	аасадрдааа	адррдадсдр	саРРРРРсРР	адрдрдссаа	дадРРсдаСд	660
РРадсдРРРа	сдррдраррр	РсРРасасРд	РдРсаРРсРд	РРадаРасРа	асаРРРРсаР	720
рдардадсаа	дасаРасРЪа	ардсараррр	РддРРРдРдР	аРссаРдсас	сРассРРада	780
ааасаадрар	РдРсддРРас	сРсрдсаРдд	аасадсаРРа	сссРссРсРс	РссссадаРд	840
рдасрасрда	дддсадРРсР	дадРдРРРаа	рррсадаррр	РРРссРсРдс	аРРРасасас	900
асасдсасас	ааассасасс	асасасасас	асасасасас	асасасасас	асасасасас	960
асасассаад	РассадРаРа	адсаРсРдсс	арсрдсрррр	сссаРРдсса	РдсдРссРдд	1020
РсаадсРссс	сРсасрсЪдР	РРссРддРса	дсардрасрс	сссРсаРссд	аРРссссРдр	1080
адсадРсасР	дасадРРааР	ааассРРРдс	ааасдРРссс	садРРдРРРд	с+сдРдссаР	1140
РаРРдРдсас	асадсРсЕдР	дсасдРдРдР	дсаРаРРРсР	РРаддааада	РРсРРадаад	1200
РддааРРдсР	дрдрсааадд	адРсаРРРаР	Рсаасаааас	асРааРдадр	дсдРссРсдр	1260
дсРдадсдсР	дРРсРаддРд	срддадсдас	дРсадддаас	ааддсадаса	ддадРРссед	1320
асссссдРРс	Рададдадда	РдРРРссадР	рдррдддррр	РдРРРдРРРд	РРРсРРсРад	1380
адаРддРддР	сРРдсРсРдР	ссаддсРада	дрдсадрддс	ардарсарад	с	1431

<210>54 <211>975 <212> ДНК <213> Ното зартепз

- 73 011747 <220>

<221> ш1зс_£еаЕиге <223> последовательность ЗТАВ.54 <400>54

ссаЕаааадЕ	дЕЕЕсЕааас	Едсадааааа	ЕсссссЕаса	дЕсЕЕасадЕ	ЕсаадааЕЕЕ	60
ЕсадсаЕдаа	аЕдссЕддЕа	даЕЕассЕда	сЕЕЕЕЕЕЕдс	саааааЕаад	дсасадсадс	120
ЕсЕсЕссЕда	сЕсЕдасЕЕЕ	СЕаЕадЕссЕ	ЕасЕдааЕЕа	ЕадЕссЕЕас	ЕдааЕЕсаЕЕ	180
сЕЕсадЕдЕЕ	дсадЕсЕдаа	ддасасссас	аЕЕЕЕсЕсЕЕ	ЕдЕсЕЕЕдЕс	ааЕЕсЕЕЕдЕ	240
дЕЕдЕааддд	саддаЕдЕЕЕ	аааадЕЕдаа	дЕсаЕЕдасЕ	ЕдсааааЕда	даааЕЕЕсад	300
адддсаЕЕЕЕ	дЕЕсЕсЕада	ссаЕдЕадсЕ	ЕададсадЕд	ЕЕсасасЕда	ддЕЕдсЕдсЕ	360
ааЕдЕЕЕсЕд	садЕЕсЕЕас	сааЕадЕаЕс	аЕЕЕасссад	саасаддаЕа	ЕдаЕададда	420
сЕЕсдаааас	сссадааааЕ	дЕЕЕЕдссаЕ	аЕаЕссааад	сссЕЕЕддда	ааЕддааадд	480
ааЕЕдсдддс	ЕсссаЕЕЕЕЕ	аЕаСаЕддаЕ	адаЕададас	саадааадас	сааддсаасЕ	54 0
ссаЕдЕдсЕЕ	ЕасаЕЕааЕа	аадЕасаааа	ЕдЕЕаасаЕд	ЕаддаадЕсЕ	аддсдаадЕЕ	600
ЕаЕдЕдадаа	ЕЕсЕЕЕасас	ЕааЕЕЕЕдса	асаЕЕЕЕааЕ	дсаадЕсЕда	ааЕЕаЕдЕса	660
аааЕаадЕаа	аааЕЕЕЕЕас	аадСЕаадса	дадааЕааоа	аЕдаЕЕадЕс	ададаааЕаа	720
дЕадсааааЕ	сЕЕсЕЕсЕса	дЕаЕЕдасЕЕ	ддЕЕдсЕЕЕЕ	сааЕсЕсЕда	ддасасадса	780
дЕсЕЕсдсЕЕ	ссаааЕссас	аадЕсасаЕс	адЕдаддада	сЕсадсЕдад	асЕЕЕддсЕа	840
аЕдЕЕддддд	дЕсссЕссЕд	ЕдЕсЕсссса	ддсдсадЕда	дссЕдсаддс	сдассЕсасЕ	900
сдЕддсасас	аасЕаааЕсЕ	ддддадаадс	аасссдаЕдс	садсаЕдаЕд	садаЕаЕсЕс	960
адддЕаЕдаЕ	сддсс					975

<210>55 <211>501 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т!зс_£еаЕиге <223> последовательность ЗТАЕ55 <400> 55

сс^даасЪса	ЕдаЕссдссс	ассЕсадссЕ	ссЕдаадЕдс	ЕдддаЕЕаса	ддЕдЕдадсс	60
ассасассса	дссдсаасас	асЕсЕЕдадс	аассааЕдЕд	ЕсаЕаааада	ааЕааааЕдд	120
аааЪсадааа	дЕаЕсЕЕдад	асадасаааа	аЕддааасас	аасаЕассаа	ааЕЕЕаЕддд	180
асасадсааа	адсадЕЕЕЕа	ддадддаадЕ	ЕЕаЕадЕдаЕ	дааЕассЕас	сЕсааааЕса	240

- 74 011747

ЕЕадссЕдаЕ	ЕддаЕдасас	ЕасадЕдЕаЕ	аааЕдааЕЕд	аааассасаЕ	’ЕдЪдссссаЪ	300
асаЕаЕаЕас	ааЕЕЕЕЕаЕЕ	ЕдЕЕааЕЕаа	аааЕааааЕа	ааасЕЕЕааа	ааадаадааа	360
дадсЕсаааЕ	ааасаассЕа	асЕЕЕаЕасс	ЕсааддаааЕ	адаададсса	дс^аадссса	420
аадЕРдасад	ааддаааааа	аЕаЕЕддсад	ааадаааЕда	аасададасЕ	адааадасаа	4Θ0
ЕЕдаададаЕ	садсаааасЕ	а				501

<210> 56 <211> 741 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1бС_£еаРиге <223> последовательность 5ТАК56 <400>56

асасаддааа	адаЕсдсааЕ	ЕдЕРсадсад	адсРРРдаас	сддддаРдас	ддЕсРсссРс	60
дЕЕдсссддс	аасаЕддЕдЕ	адсадссадс	садЕЕаЕЕЕс	ЕсРддсдРаа	дсааРассад	120
дааддаадЕс	ЕЕасЕдсЕдЕ	сдссдссдда	даасаддЕЕд	РЕссЕдссЕс	ЕдаасРЕдсЕ	180
дссдссаЕда	адсадаЕЕаа	адаасРссад	сдссРдсРсд	дсаадаааас	даЕддааааЕ	240
даасЕссЕса	аадаадссдЕ	ЕдааЕаЕдда	сдддсааааа	адЕддаЕадс	дсасдсдссс	300
ЕРаЕЕдсссд	дддардддда	дРаадсррад	РсадссдРРд	РсрссдддРд	РсдсдЕдсдс	360
адЕЕдсасдЕ	саЕЕсЕсада	сдаассдаРд	асРддаРдда	рддссдссдс	адРсдРсаса	420
сЕдаЕдаЕас	ддаЕдЕдсЕЕ	сЕссдЕаЕас	ассаРдРРаР	сддададсрд	ссаасдРаЕд	480
дЕЕаЕсдЕсд	ддЕаЕдддсд	сЕдсРЕсдса	дасаддсада	асЕЕдаРддР	аРдссЕдсда	540
ЕсааЕдссаа	асдЕдЕЕЕас	сддаЕсаЕдс	дссадаардс	дсЕдРЕдсРЕ	дадсдаааас	600
сЕдсЕдЕасс	дссаЕсдааа	сдддсасаЕа	саддсададр	ддссдЕдааа	дааадсааЕс	660
адсдаЕддЕд	сЕсЕдасддд	РЕсдадЕРсЕ	дсЕдЕдаЕаа	сддададада	сЕдсдЕдЕса	720
сдЕРсдсдсЕ	ддасЕдсЕдЕ	д				741

<210>57 <211>1365 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>

<221> т13С_£еаЕиге <223> последовательность ΞΤΑΚ57

- 75 011747 <400> 57

ЕссЕЕсЕдЕа	ааЕаддсааа	аЕдЕаЕЕЕЕа	дЕЕЕссасса	сасаЕдЕЕсЕ	ЕЕЕсЕдЕадд	60
дсЕЕдбаЕдб	ЕддаааЕЕЕЕ	аЕссааЕЕаЕ	ЕсааЕЕааса	сЕаЕассаас	ааЕсЕдсЕаа	120
ЕЕсЕддадаЕ	дЕддсадЕда	аЕаааааадЕ	ЕаЕадЕЕЕсЕ	даЕЕЕЕдЕдд	адсЕЕддасб	180
ЕЕааЕдаЕдд	асаааасаас	асаЕЕсЕЕаа	аЕаЕаЕаЕЕЕ	саЕсааааЕЕ	аЕадЕдддЕд	240
ааЕЕаЕЕЕаЕ	аЕдЕдсаЕЕЕ	асаЕдЕдЕаЕ	дЕаЕасаЕаа	аЕдддсддЕЕ	асЕддсЕдса	300
сгдадааЕдЕ	асасдЕддсд	сдаасдаддс	ЕдддсддЕса	дадааддссЕ	сссааддадд	360
ЕддсЕЕЕдаа	дсЕдадЕддЕ	дсЕЕссасдЕ	дааааддсЕд	дааадддсаЕ	Ессаадаааа	4 20
ддсбдаддсс	адсдддааад	аддЕЕссадб	дсдсбсЕддд	аасддааадс	дсассЕдссЕ	480
дааасдаааа	ЕдадЕдЕдсЕ	дааабаддас	дсЕадааадд	даддсааадд	сЕддсаааад	540
сдассдадда	ддадсЕсааа	ддадсдадсд	дддааддссд	сЕдЕддадсс	Еддаддаадс	600
асЕЕсддаад	сдсЕЕсЕдад	сдддЕааддс	сдсЕдддадс	аЕдаасЕдсЕ	дадсаддЕдЕ	660
дбссадааЕЕ	сдЕдддЕЕсЕ	ЕддЕсЕсасЕ	дасЕЕсаада	аЕдаададдд	ассдсддасс	720
сЕсдсддбда	дбдЕЕасадс	ЕсЕЕааддЕд	дсдсдЕсЕдд	адЕЕЕдЕЕсс	ЕЕсЕдаЕдЕЕ	780
сддаЕдЕдЕЕ	сададЕЕЕсЕ	ЕссЕЕсЕддЕ	дддЕЕсдЕдд	ЕсЕсдсЕддс	ЕсаддадЕда	840
адсЕдсадас	сЕЕсдсддЕд	адЕдЕЕасад	сЕсаЕаааад	садддЕддас	ЕсааададЕд	900
адсадсадса	адаЕЕЕаЕЕд	сааадааЕда	аадаасааад	сЕЕссасасЕ	дСддаадддд	960
ассссадсдд	дЕЕдссасЕд	сЕддсЕссдс	адссЕдсЕЕЕ	ЕаЕЕсЕсЕЕа	ЕсЕддсссса	1020
сссасаЕссЕ	дсЕдаЕЕддЕ	ададссдааЕ	ддЕсЕдЕЕЕЕ	дасддсдсЕд	аЕЕддЕдсдЕ	1080
ЕЕасааЕссс	ЕдсдсЕадаЕ	асаааддЕЕс	ЕссасдЕссс	сассадаЕЕа	дсЕадаЕада	1140
дЕсЕссасас	аааддббсЕс	сааддсссса	ссададЕадс	ЕадаЕасада	дЕдЕЕдаЕЕд	1200
дЕдсаЕЕсас	ааасссЕдад	сЕадасасад	ддЕдаЕдасЕ	ддЕдЕдЕЕЕа	сааассЕЕдс	1260
ддЕадаЕаса	дадЕаЕсааЕ	ЕддсдЕаЕЕЕ	асааЕсасЕд	адсЕаддсаЕ	аааддЕЕсбс	1320
саддЕсссса	ссадасЕсад	дадсссадсЕ	ддсЕЕсассс	адЕдд		1365

<210> 58 <211> 1401 <212> ДНК <213> Ното еархепз <220>

<221> т1зс_£еа£иге <223> последовательность 5ТАК58 <400> 58

- 76 011747

аадРРРассР	радсссрааа	РРаРРРсаРР	дРдаРРддса	РРРРаддааа	РаРдРаРРаа	60
ддааРдРсРс	РРаддадаРа	аддаРаасаР	аРдРсРаада	аааРРаРаРР	даааРаРРаЬ	120
РасардаасР	ааааРдРРад	аасРдааааа	ааарраррдр	аасРссРРсс	адсдраддса	180
ддадРаРсРа	даРассаасР	РРаасаасРс	аасРРРааса	асРРсдаасс	аассадаРдд	240
сРаддадаРР	сассРаРРРа	дсаРдаРаРс	РРРРаРРдаР	аааааааРаР	аааасРРсса	300
РраааРРРРР	аадсРасРас	аарссРаРРа	ааРРРРаасР	РассадРдРР	сРсааРдсРа	360
саРааРРРаа	ааРсаРРдаа	аРсРРсРдаР	РРРаасРссР	садрсррдаа	аРсРасРРаР	420
РЕРРадРРас	аРараРаРсс	аарсРасРдс	сдсРадРада	адаадсррдд	ааРРРдадаа	480
аааааРсада	сдРРРРдРар	аРрсРсаРаР	РсасрааРРР	аРРРРРРааа	РдадРРРсРд	54 0
сааРдсаРса	адсадРддса	ааасаддада	ааааРРаааа	РСддРРдааа	адаРаРдРдЕ	600
дссааасааР	сссРРдаааР	ррдардаадр	дасРааРсср	дадРРаРРдР	РРсаааРдРд	660
РассРдРРРа	РасаадддРа	РсассРРРда	ааРсРсааса	РРаааРдааа	РРРРаРаадс	720
ааРРРдРРдР	аасаРдаРРа	РРаРааааРР	срдаРаРаас	аРРРРРРаРР	ассРдЪРРад	780
адРРРааада	дадаааадда	дРРаадааРа	аРРасаРРРР	саРРадсаРР	дрссдддрдс	840
ааааасЕРсР	аасасРаРсР	РсаааРсРРР	РРсРссаРРд	ссРРсРдаас	аРасссасРР	900
дддРаРсРса	РРадсасрдс	аааРРсааса	РРРРсдаРРд	сРааРРРРРс	РсссРаааРа	960
рррарррдрр	РРсрсадсРР	РадссааРдР	ррсасРаРРд	ассарррдср	саадРаРадР	1020
дасдсРРсаа	рдассррсад	ададсРдРРР	садрссррсс	рддасРасРР	дсаРдсРРсс	1080
аасааааРда	адсасРсрРд	ардрсадрса	сРсаааРааа	рддааарддд	сссаррРасР	1140
аддааРдРРа	асадаарааа	аадарадасд	РдасассадР	РдсРРсадРс	саРсРссаРР	1200
РасРРдсРРа	аддссРддсс	аРаРРРсРса	садРРдаРаР	ддсдсадддс	асаЕдРРРаа	1260
аРддсРдРРс	РРдРаддаРд	дрррдасрдр	рддаРРссРс	аРсРРсссРс	РссРРаддаа	1320
ддааддРРас	адРадРасРд	РРддсРссРд	дааРаРадаР	РсаРааадаа	сРааРддадЕ	1380
аРсаРсРссс	асРдсРсРРд	Р				1401

<210>	59
<211>	866
<212>	ДНК
<213>	Ното	заръепз
<220>
<221>	тайс	£еа£иге
<223>	последовательность ЗТАК59

- 77 011747 <400> 59

дадаксасдс	саскдсаскс	садсскдддд	дасададсаа	даскссакск	садааасааа	60
сааасасаса	аадссадкса	аддкдкккаа	кксдасддкд	ксаддсксад	дксксккдас	120
аддакасакс	садсасссдд	дддааасдкс	дакдддкддд	дкддаакска	ккккдкддсс	180
ксаадддадд	дкккдададд	кадксссдса	адсддкдакд	дсскааддаа	дсссскссдс	240
ссаадаадсд	акакксаккк	скадсскдка	дссасссаад	адддадаакс	дддсксдсса	300
садассссас	аасссссаас	ссассссасс	сссасссскс	ссассксдкд	ааакдддскс	360
ксдскссдкс	аддскскадк	сасассдкдк	ддккккддаа	сскссадсдк	дкдкдсдкдд	420
дккдсдкддк	ддддкддддс	сддскдкдда	сададдаддд	дакааадсдд	сддкдксссд	480
сдддкдсссд	ддасдкдддд	сдкддддсдк	дддкддддкд	дссададсск	кдддаасксд	540
ксдсскдксд	ддасдксксс	ссксскддкс	ссскскскда	сскасдсксс	асакскксдс	600
сдкксадкдд	ддассккдкд	ддкддаадко	ассакссскк	кддаскккад	ссдасдаадд	660
ссдддскссс	аададкскос	ссддаддсдд	ддссккдддс	аддсксасаа	ддакдскдас	720
ддкдасддкк	ддкдасддкд	акдкаскксд	даддссксдд	дссаакдсад	аддкакссак	780
ккдассксдд	кдддасаддк	садскккдсд	дадксссдкд	сдкссккоса	дадасксакс	840
садсдскадс	аадсакддкс	ссдадд				866

<210> <211> <212> <213>	60 2067 ДНК Ното зархепз
<220> <221> <223>	т!зс_£еакиге последовательность 5ТАВ60

<220>

<221> ги1зс_£еакиге <222> (92)..(1777) <223> η является а, с, д или к в различных положениях <400> 60

адсадкдсад	ааскддддаа	даадаададк	ссскасасса	сккаакаскс	аааадкаскс	60
дсаааааака	асасссскса	ссаддкддса	кпаккаскск	сскксаккда	дааааккадд	120
аааскддаск	ксдкадаадс	кааккдсккк	акссададсс	асскдсакас	ааасскдсад	180
сдссасскдс	акасааасск	дксадссдас	сссааадссс	ксадксдсас	саадсскскд	240
скдсасассс	ксдкдссккс	асаскддссд	ккссссаадс	скддддсака	скпсссадск	300

- 78 011747

сДдадаааДд	ДаДДсаДссД	ДсааадсссД	дсДсаДдДдД	ссДппДсаас	аддааааДсД	360
сссаДдадаД	дсДсДдсДаД	ссссаДсДсД	ссДдссссаД	адсДДаддса	пасДДсДдДд	420
дДддДдадДс	сДдддсДдДд	сДдДдаДдДд	ДДсдссДдсп	аДдДпДдДДс	ДДссссасаа	480
ДдаДдддссс	сДдааДДсДс	ДаДсДсДадс	ассДдДдсДс	адДаааддсД	Ддддааасса	540
ддсДсааадс	сДддсссада	ДдссассДДД	ДссадддДдс	ДДссдддддс	сассаассад	600
адДдсадссД	ДсДссДссас	саддаасДсД	Ддсадсссса	ссссДдадса	ссДдсасссс	660
аДДасссаДс	ДДДдДДДсДс	сдДдДдаДсд	ДаДДаДДаса	дааДДаДаДа	сДдДаДДсДД	720
ааДасадДаД	аДааДДдДаД	ааДДаДДсДД	ааДасадДаД	аДааДДаДас	аааДасаааа	780
ДаДдДдДДаа	ДддассдДДД	аДдДДасДдд	ДааадсДДДа	адДсаасадД	дддасаДДад	840
ддаддДДДДД	ддсдааддса	ааадДДаДаД	дДдсаДДДДс	аасддсддда	ддддДсддДа	900
спДсДпассс	ссаДдДДдДД	саапддДсаа	сддДсДасас	ададсададс	дааДДсасда	960
садаааДдДД	адсДДдДдДс	асДадДаДсД	ссссддсдса	ДаадсДДаад	асасаДассД	1020
ДдадададсД	сДДддссаДс	ДсДасДааДд	асДдаадддД	ддадддадда	дадаДдДсаД	1080
ааДаддсаДа	ааасДасаДД	асаДсаДДсд	адДдссааДД	ДДдссассДД	дасссдсддд	1140
Ддсаааасас	саасдДсадД	асасаДаДда	ададдааасД	дсссдадаас	ДдаадДДссД	1200
дадассадда	дсДдсаддсд	ДДадаДадаа	ДаДддДдасд	ададДДасда	ддаДдасдад	1260
адДаааДасД	ДсаДасДсад	ДасдДдссаа	дсасДдсДаД	аадсдсДсДд	ДаДдДдДдаа	1320
дДсаДДДааД	ссДсасадса	ДсссасддДд	ДааДДаДДДД	саДДаДсссс	аДдадддаас	1380
адааасДсад	аасддДДсаа	сасаДаДдсд	адааддсдса	дссддДсадД	дадададсад	1440
дДДсссдДсс	аадсадДсад	ассссдадДд	сасасДсДсд	ассссДдДсс	адсадасДса	1500
сДсдДсаДаа	ддсддддадД	дпДсДдДДДс	адссадаДдс	ДДДаДдсаДс	ДсададДасс	1560
сааассаДда	аадааДдадд	садДаДДсап	дадсадаДдд	пдсДдддсад	ДааддсДддд	1620
сДДсадааДа	дсДддааадс	ДсаадДпаДд	ддассДдсаа	даааааДсса	ДДдДДДпдаД	1680
аааДадссаа	адДсссДадд	сДдДаадддд	ааддДдДдсс	аддДдсаадД	ддадсДсДаа	1740
ДдДааааДсд	сассДдадДс	ДссДддДсДД	аДдадДпсДд	ддДдДасссс	адДдаааддД	1Θ00
ссДдсДдсса	ссаадДдддс	саДддДДсад	сДдДдДаадД	дсДдадсддс	адссддассд	1860
сддссдсдаа	сДДсассДсс	аааддсасад	ДдсассДддД	ДссДссадса	сДсадсДдсд	1920
аддссссдад	ссаддддссс	ддсссссддс	ссссддсадс	ДдсДссадсД	ДссДДсссса	1980
садсаДДсад	даДддДсДдс	дДДсаДдДад	ассДДДдДДД	ДсадДсДдДд	сДссдаддДс	2040
аседдсадса	сДадссссдд	сДссДдД				2067

- 79 011747 <210> 61 <211> 1470 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еаРиге <223> последовательность ЗТАК61 <220>

<221> тпРзс_Ееа£иге <222> (130)..(976} <223> η является а, с, д или р в различных положениях <400> 61

садсссссас	аЕдсссадсс	сРдРдсРсад	сРсРдсадсд	дддсаРддРд	ддсададаса	60
сададдссаа	ддсссРдсЕР	сддддасддЕ	дддссРддда	РдадсаЕддс	сРРддссРРс	120
дссдададРп	сЕсЕЕдЕдаа	ддаддддЕса	ддаддддсРд	срдсадсрдд	ддаддадддс	180
даЕддсасРд	Еддсапдаад	РдаапРадЕд	ЕдддрдссРп	дсассссадд	сасддссадс	240
сЕддддЕаЕд	дасссддддс	СПРсРдРЕсР	ададсаддаа	ддРаРддРда	ддассРсааа	300
аддасадсса	сЕддададсЕ	ссаддсадад	дпасРРдада	ддсссРдддд	ссаРссРдРс	360
ЕсЕЕЕЕсЕдд	дрсрдрдрдс	ЕсЕдддссЕд	ддсссРРссР	сРдсРссссс	дддсРРддад	420
адддсЕддсс	ЕЕдссЕсдЕд	саааддасса	сРсЕадасРд	дРассаадРс	ЕддсссаЕдд	480
ссРссЕдРдд	дРдсаддссЕ	дрдсдддрда	ссрдададсс	адддсЕддса	ддРсададбс	540
аддададдда	ЕддсадЕдда	ЕдсссЕдЕдс	аддаРсЕдсс	ЕааРсаРддР	даддсРддад	600
дааЕссааад	ЕдддсаЕдса	сЕсЕдсасЕс	аРЕРсРРРаР	ЕсаРдЕдЕдс	ссаРсссаас	660
аадсадддад	ссбддссадд	адддссссбд	ддадааддса	сЕдаРдддоР	дрдррссарр	720
ЕаддааддаЕ	ддасддРЕдР	дадасдддЕа	адРсадаасд	ддсЕдсссас	сЕсддссдад	780
адддссссдр	ддрдддррдд	сассаРсРдд	дссрддадад	сРдсРсадда	ддсРсРсрад	840
ддсЕдддЕда	ссаддпсрдд	ддРасадЕад	ссардддадс	аддрдсЕРас	срддддсрдр	900
сссЕдадсад	дддсЕдсаЕЕ	дддЕдсЕсЕд	Рдадсасаса	сРРсЕсРаРР	сассРдадРс	960
сспсЕдадЕд	аЕдадпасас	ссРРдРРРРд	садардаарс	ЕдадсаРдда	дардрраадр	1020
ддсЕРдссЕд	адссасасад	садаРддаРд	дрдрадсрдд	дассрдаддд	саддсадРсс	1080
садсссдадд	асРЕсссаад	дррдрддсаа	асРсРдасад	саРдасссса	дддаасассс	1140
аЕсРсадсЕс	ЕддЕсадаса	сРдсддадРР	дРдРРдЕаас	ссасасадсР	ддадасадсс	1200
асссРадссс	сасссЕЕаЕс	срсрсссааа	ддаассРдсс	СЕРЕСССРРС	аррррссрср	1260

- 80 011747

РасРдсаРРд	адддассаса	садрдрддса	дааддаасаР	дддррсадда	сссадаРдда	1320
с!1дс'Лсас	адрдсадссс	РссРдРссРс	РРдсададРд	сдрсррссас	рдРдаадНРд	1380
ддасадРсас	ассаасрсаа	РасРдсРддд	сссдрсасас	ддрдддсадд	саасддаРдд	1440
садНсасрдд	сРдРдддРсН	дсададдрдд				1470

<210> 62 <211> 1011 <212> ДНК <213> Ното заргепз <220>

<221> т15с_£еа£иге <223> последовательность ΞΤΑΚ62 <400>62

адРдРсаааР	адаРсРасас	аааасаадаР	ааРдРсРдсс	саРРРРРсса	аадаРааРдР	60
ддрдаадрдд	дРадададаа	аРдсаРссаР	РсРссссасс	саассРсРдс	РаааРРдРсс	120
аНдРсасадР	асРдадасса	дддддсННаР	Рсссадсддд	садааРдНдс	ассаадсасс	180
РсРРдРсРса	аРНРдсадРс	РаддсссРдс	РаРРРдаРдд	РдрдааддсН	РдсассНддс	240
аРддааддРс	сдНРРРдРас	РРсРРдсРРР	адсадРРсаа	ададсаддда	дадсРдсдад	300
ддссРсРдса	дсРРсадаРд	даРдРддРса	дсРРдРРдда	ддсдссРРсР	дРддРссаРР	360
аРсРссадсс	ссссрдсддр	дРРдсРдРРР	дсРРддсРРд	НсрддсРсНс	саНдссРРдР	420
РддсРссааа	аРдРсаРсаР	дсРдсасссс	аддаадааРд	Ндсаддссса	РсРсРРРРаР	480
дРдсРРРддд	сНаРРНРдаН	РссссдРРдд	дНаРаРРссс	РаддРаадас	ссадаадаса	540
саддаддРад	РРдсРРРддд	ададРРРдда	ссРаРдддРа	РдаддРааРа	дасасадРаН	600
сРНсРсРРНс	аРРРддРдад	асРдРРадсР	сРддссдсдд	асРдааРРсс	асасадсРса	660
сРРдддаааа	СРРНаРРСса	ааасаНадРс	асаРРдааса	РРдРддадаа	Рдадддасад	720
адаададдсс	срадаРНРдН	асаРсРдддР	дррардрсра	РаааРадааР	дсРРНддРдд	780
НсаасРадас	РРдРРсаРдР	РдасаРРРад	РсРРдссРРР	РсддРддРда	РРРаааааРР	840
аРдРаРаРсР	РдНРРддааР	аРадРддадс	РарддрдНдд	сарРРНсаНс	РддсРРРРРд	900
РРРадсРсад	сссдРссРдР	РаРдддсадс	сРРдаадсРс	адРадсРааР	даададдРаР	960
ссРсасНссс	Рссадададс	ддРссссРса	сддсРсаРРд	ададрРРдрс	а	1011

<210>63 <211>1410 <212> ДНК

- 81 011747 <213> Ното заргепз <220>

<221> πιί зс_£еабиге <223> последовательность 5ТАК63 <400>63

ссасадссбд	абсдбдсбдб	сдабдададд	аабсбдсбсб	аадддбсбда	дсддадддад	60
абдссдаадс	бббдадсббб	ббдбббсбдд	сббаассббд	дбддаббббс	асссбсбддд	120
саббассбсб	бдбссадддд	аддддсбддд	ддадбдссбд	дадсбдбадд	дасададддс	180
бдадбддддд	ддасбдсббд	ддсбдассас	абаабаббсб	дсбдсдбабб	аабббббббб	240
бдадасадбс	бббсбсбдбб	дсссаддсбд	дадбдбаабд	дсббдабадс	бсасбдссас	300
сбссдссбсс	бдддббсаад	бдаббсбссб	дсббсадсбб	ссддадбадс	бдддасбдса	360
ддбдсссдсс	ассабддсбд	дсбааббббб	дбабббббаб	бадсаабддд	дббббдсбаб	420
дббдсссадд	ссддбсссда	асбссбдссс	бсаадбдаба	сассбдссбс	ддссбсссаа	480
адбдсбддда	ббададдсбб	дадссасбдс	дссбддссад	сбдсабаббд	ббааббадас	540
абаааабдса	ааабаадабд	абабааасас	аааддбдбда	аабаадабдд	асассбдсбд	600
адсдсдссбд	бссбдаадса	бсдссссбсб	дсаааадсад	дддбсадсаб	дбдббсбссд	660
дбссббдсбс	ббасададда	дбдадсбдсс	бабдсдбсбб	ссадссасбб	ссбдддсбдс	720
бсададдссб	сбсасдддбд	ббсбдддббд	сбдссасббд	саддддбдсб	даддсддддс	780
бссбсссдбд	сддддсабдб	ссаддссдсс	сбсбсбдаад	дсббддсадд	басаддбддд	840
адбдддддбс	бсбдддсбдс	бдбддддасб	дддсаддсбс	сбддаадасс	бсссбдбдбб	900
бдддсбдааа	дсдсадсссд	аддддаддбс	сссадддадд	ссдсбдбсдд	дддбдддддс	960
ббддаддадд	даддддссда	ддадссддсд	асасбссдбд	асддсссадд	аасдЕсссба	1020
аасааддсдс	сдсдббсбсд	абддддбддд	дбссдсбббс	ббббсбсааа	адсбдсадбб	1080
асбссабдсб	сддаддасбд	дсдбссдсдс	ссбдббссаа	бдсбдссссд	дддсссбддс	1140
сббддддааб	сддддссббд	дасбддассс	бдддддсббс	дсддадссдд	дссбддсддд	1200
дсдадсддад	сададдсбдд	дсадссссдд	ддаадсдсбс	дссааадссд	ддсдсбдсбс	1260
ссададсдсд	аддбдсадаа	ссададдсбд	дбсссдсддс	дсбаасдада	даададдаад	1320
сдсдсбдбдб	ададддсдсс	сассссдбдд	ддсдаасссс	сббссбсаас	бссабддасд	1380
дддсбсабдд	дббсссадсд	дсбсадасдс				1410

<210>64 <211>1414

- 82 011747 <212> ДНК <213> Ното зархепз <220>

<221> т1зс_£еаРиге <223> последовательность 2ТАЕ64 <400> 64

РддаРсадаР	РРдРРРРаРа	сссРсссРРс	РасРдсРсРд	ададРРдРас	аРсасадРср	60
асРдРаРсРд	ЫРсссаРЬа	РРарааРРРР	РРРдсасРдР	дсррдссрда	адддадссРс	120
аадРРсаРда	дРсРсссРас	ссРссРссса	ааРдадасар	ддассРРРда	аРдсРРРсср	180
дддассасса	ссссассРРР	саРдсРдсРд	РРаРссадда	РРРРадРРса	асадРдРРРР	240
аассссссаа	аРдадРсаРР	РРРаРРдРРР	сдРаРадРда	аРдРдРаРРР	дддРРРдсРР	300
аРаРддРдас	сРдРРРаРРР	дсРссРсаРР	дРассРсаРд	сРсРдсРсРР	РссРРсРада	360
РРсадРсРсР	РРссРааРда	ддРдРсРсдс	адсааРРсРР	Расаадасад	ссаадаРадд	420
ссадсРсРса	дадсасРРдР	РдРсРдаааа	адРсРРдРсР	РаРРРааРРР	сРРРРРсРРа	480
дадаРддддР	срсаРРаРдР	РасссасасР	ддРсРсааас	РРсрддсРРа	аадсддрсср	540
сссассРРдд	ссРсссааад	РдсРаддаРР	асаддсдрда	дсдассРсдР	ссадссРдРс	600
.'тэгта я	4--И-г<4-4-И-,т<-		ЯГГЭ Лп	ггллгга± я л	Λη<-ι+·	660
	- - - г> - -- ---3-		*-4·-Т’-'-’-'-'У *-
ддасддРРРР	РРбссРрсад	сссРРРдаад	адрсрдрарр	РРсаРРаРсР	сссРдсаРРа	720
даРд£Рс£РР	РдсаадРаас	дРдРсРСРРс	РсРсРдддРа	РРсРРааддР	РРРсРсРРРд	780
ссРРРддРда	дсрдсадрдд	аРРРдсРРРР	РРсаададдР	саададааад	дааадрдрда	840
ддРРРсРдРР	РРРРасРдас	ааРРРдРРРд	РРдаРРРдРР	РРсссассса	даддррссрр	900
дссасРРРдс	саддсРддаа	ддсадасРРс	РРсРддРдРс	сРдРРсасад	асддддсадс	960
сРдсддаадд	сссрдссаса	рдсадддссР	сддРссРсаР	РсссРРдсаР	дрддасссдд	1020
дсдРдасРсс	РдРРсаддсР	ддсасРРссс	ададсРдадс	сссадссРда	ссРРссРссс	1080
аРасРдРсРР	сасасссссР	ссРРРсРРсР	дарассрдда	ддррррссрр	РсРРРссРдР	1140
сассрссаср	рддарррраа	арссрсрдрс	РдРддааРРд	РарРсддсас	аддаадаРдс	1200
ррдсаадддс	саддсРсаРс	адсссРдРсс	сРдсрдсРдд	аадсадсаса	дсададссЬс	1260
аРдсРсаддс	РдадаРддад	сададдссрд	садасдадса	сссадсРсад	сРддддРРдд	1320
сдссдарддр	ддадддРссР	сдааадсРсР	ддддасдаРд	дсададсРаР	Рддсадддда	1380
дссдсадддР	сРРЬРдадсс	сРРаааадаР	сРсР			1414

<210> 65

- 83 011747 <211> 1310 <212> ДНК <213> Ното зардепз <220>

<221> т1зс_£еабдге <223> последовательность ЗТАК65 <400> 65

дбдаабдббд	абддабсааа	Сабсбббсбд	бдббдбббаб	сааадббааа	абааабдбдд	60
бсабббааад	дасаааадаб	даддддббдд	адбсбдббса	адсааадддб	абаббаддад	120
аааадсадаа	ббсбсбсссб	дбдаадддас	адбдасбссб	аббббссасс	бсабббббас	180
баасбсбссб	аасбабсбдс	ббаддбадад	абабабссаб	дбасабббаб	ааассасадб	240
даабсабббд	аббббддааб	ааадабадба	баааабдбдб	сссадбдббд	абабасабса	300
басаббаааб	абдбсбддса	дбдббсбааб	бббасадббд	бссааадаба	абдббадддс	360
абасбддсба	бддабдаадс	бссаабдббс	адаббдсааа	дааасббада	аббббасбаа	420
бдааассааа	басабсссаа	дааа66666с	адаадааааа	аададааасб	адбадсааад	480
бааадаабса	ссасаабабс	абсадабббб	ббббабабдб	адаабаббба	ббсадббсбб	540
ббббсаадба	сассббдбсб	бсаббсаббд	басбббаббб	бббдбдаадд	бббаааббба	600
бббсббсбаб	дбдбббадбд	абабббаааа	бббббаббба	абсаадббба	бсадааадбб	660
сбдббадааа	абабдасдад	дсбббааббс	сдссабсбаб	аббббссдсб	аббабабааа	720
дабааббдбб	ббсбсббббб	аааасаасбб	дааббдддаб	бббабабсаб	ааббббббаа	780
бдбсбббббб	баббабасбб	баадббсбдд	дабасабдбд	садаасдбдс	аддбдбдбба	840
сабадабаба	сасдбдссаб	ддбддбббдс	бдсасссасб	аассбдббаб	сдасаббадд	900
барИскссб	аа!:дс1:аЪса	οσοαοΐβΐΧΐ	ссссассссс	сдададдссо	садбд+дбда	960
бдббсбссбс	ссбдбдбсса	бдбдббсбса	ббдббсабсб	сссасббабд	дбабсбасса	1020
баассббдаа	аббдбсббаб	дсаббсасбб	дбббддббдб	бабабадссб	ссабсаддас	1080
адддабаббб	дсбдсбдсбб	С666666666	бсбббббдад	асадбсббдс	бссдбсабсс	1140
аддсбддадб	дсббсбсддс	бсаабдсаас	сбссассбсс	саддбббаад	сдаббсбсса	1200
асббсадссб	сссааабддс	бдддасбдса	ддсабдсасс	асбасассбд	дсбааббббб	1260
дбабббдбаа	бададасааб	дбббсассаб	дббддссадд	сбддбсбсда		1310

<210> 66 <211> 1917 <212> ДНК <213> Ното зархепз

- 84 011747 <220>

<221> пи зс_£еаЕиге <223> последовательность 5ТАК67 <400 66

аддаЕссЕаа	ааВЕЕЕдЕда	сссЕададса	адЕасЕаасЕ	аВдааадЕда	ааЕададааЕ	60
дааддааЕЕа	ЕЕЕааЕЕаад	Ессадсаааа	сссаассааа	ЕсаЕсЕдВаа	ааВаВаЕЕЕд	120
ЕЕЕЕсаасаЕ	ссаддВаЕЕЕ	ЕсЕдЕдВааа	аддВЕдадЕЕ	дВаЕдсЕдас	ЕЕаЕЕдддаа	180
ааабааВЕда	дВЕЕЕссссЕ	ЕсасВЕЕдсс	адЕдададда	ааВсадЕасЕ	дВааВЕдЕЕа	240
ааддЕЕассс	аЕассЕассЕ	сЕасЕассдЕ	сЕадсаЕадд	ЕааадВааЕд	ЕасасЕдЕда	300
адВЕЕссЕдс	ЕЕдасЕдВаа	ЕдЕЕЕЕсадВ	ЕЕсаВсссаЕ	ЕдаЕВсааса	дсЕаВЕВаВЕ	360
садсасЕЕас	ЕасаассаЕд	сЕддааассс	аададЕаааЕ	аддсЕдЕдВЕ	асЕсаасадд	420
асЕдаддЕас	адссдаасЕд	Есаддсаадд	ЕЕдсЕдЕссЕ	ЕЕддасЕЕдс	сЕдсЕЕЕсЕс	480
ЕсЕаЕдЕадд	аадаадаааЕ	ддасаЕассд	ЕссаддаааЕ	адаВаВаВдЕ	ЕасаЕЕЕссЕ	540
ЕаЕЕссаЕаа	ЕЕааВаЕЕаа	ЕаасссЕдда	садааасЕас	саадЕЕЕсЕа	дасссЕЕаВа	600
дЕассассЕЕ	асссЕЕЕсЕд	даЕдааВссЕ	ЕсасаВдЕЕд	аВасаВЕЕЕа	ЕссаааВдаа	660
ааЕЕВЕддЕа	сЕдВаддВаЕ	аасадасааа	дададаасад	аааасЕадад	аВдаадЕЕЕд	720
ддааааддЕс	аадааадЕаа	аВааЕдсЕЕс	Еадаадасас	ааааадаааа	авдааавддв	780
ааВдЕЕддда	аадЕЕЕВааВ	асаВЕЕЕдсс	сЕааддаааа	ааасЕасЕЕд	ВЕдаааЕЕсЕ	840
асЕЕаадасЕ	ддассЕЕЕЕс	ЕсваааааЕЕ	дЕдсЕЕдаВд	ЕдааЕЕааад	саасасаддд	900
аааВЕЕаЕдд	дсЕссЕЕсЕа	адЕЕсВассс	аасЕсассдс	аааасвдЕЕс	сЕадваддЕд	960
ЕддВаЕасЕс	ЕЕЕсадаЕЕс	ЕЕЕдвдВдЕа	ЕдВаВаЕдЕд	ЕдЕдЕдЕдЕд	ЕдЕдВЕЕдВа	1020
ЕдЕдЕасадВ	сЕававасаЕ	аВдЕдВассЕ	асаВдВдВдЕ	аЕаВаВаааЕ	аВаВаЕЕЕас	1080
сЕддаЕдааа	ЕадсаЕаВЕа	ЕадааВаЕЕс	ЕЕЕЕЕЕсЕЕЕ	аааВаЕаВаЕ	дЕдсаВасаВ	1140
авдЕаВаЕдс	асаВаЕаЕас	аВаааЕдЕад	аВаЕадсЕад	дВаддсаЕВс	аВдЕдаааса	1200
аадаадссВа	ЕЕасЕЕЕЕЕа	аЕддВЕдсаВ	даВаВЕссаЕ	саЕаддадЕа	ЕадЕасаасЕ	1260
ЕаЕдВаасас	асаВЕЕддсЕ	ЕдЕЕдВаааа	ЕЕЕЕддВаЕЕ	ааЕааааЕад	сасаВаЕсаЕ	1320
дсааадасас	ссЕЕдсаЕад	дВсЕаВЕсаВ	ЕсЕЕЕдаВЕЕ	ЕЕассЕЕадд	асааааЕЕЕа	1380
ааадЕадааЕ	ЕЕсЕдддЕса	адсадВаЕдс	ЕсаЕЕЕаааа	ЕдЕсаВЕдса	ЕаЕЕЕссааа	1440
ЕЕдЕссЕсса	даааадЕадЕ	аасадЕааса	аВЕдаЕддас	ЕдсдВдЕЕЕЕ	сЕаааасЕЕд	1500
саВЕЕЕЕЕЕс	сЕЕаВЕддЕд	аддЕЕЕддса	ЕЕЕЕссаВаЕ	дЕЕВаВЕсдс	аВЕЕВааВЕЕ	1560

- 85 011747

ЕЕЕЕЕддЕЕс	аЕдЕсЕЕЕЕа	ЕЕсссЕЕссЕ	дсаааЕЕЕдЕ	ддЕдЕдЕсЕс	аасЕЕЕаЕЕЕ	1620
аЕасЕсЕсаЕ	ЕЕЕсаЕааЕЕ	ЕЕсЕааадда	аЕЕЕдасЕЕЕ	аааааааЕаа	дасадссааЕ	1680
дсЕЕЕддЕЕЕ	ааЕЕЕсаЕЕд	сЕдсЕЕЕЕЕд	аадЕдасЕдс	ЕдЕдЕЕЕЕЕа	ЕаЕасЕЕЕЕа	1740
ЕаЕЕЕЕдЕЕд	ЕЕЕЕадсааа	ЕЕсЕЕсЕаЕа	ЕЕаЕааЕЕдЕ	дЕаЕдсЕдда	асааааадЕЕ	1800
аЕаЕЕЕсЕЕа	аЕсЕадаЕаа	ааЕаЕЕЕсаа	даЕдЕЕдЕаа	ЕЕасадЕссс	сЕсЕааааЕс	1860
аЕаЕаааЕад	асдсаЕадсЕ	дЕдЕдаЕЕЕд	ЕааЕЕадЕЕа	ЕдЕссаЕЕда	ЕадаЕсс	1917

<210> 67 <211> 26 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Олигонуклеотид для получения линкера, содержащего МС311 рсСЕСРР11пк <400>67 дЕасддаЕаЕ садаЕсЕНа аЕЕаад26 <210> 68 <211>24 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Олигонуклеотид для получения линкера, содержащего МСЗII р<32ЕСРРИпк <400>68 дЕассЕЕааЕ ЕааадаЕсЕд аЕаЕ24 <210>69 <211>52 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации фрагмента размером 0,37 т.п.н. из рд2ЕСРР <400>69 даЕсадаЕсЕ ддсдсдссаЕ ЕЕаааЕсдЕс ЕсдсдсдЕЕЕ сддЕдаЕдас дд52 <210>70 <211>41 <212> ДНК <213> Искусственная

- 86 011747 <220>

<223> Праймер для амплификации фрагмента размером 0,37 т.п.н. из рс12ЕСГР <400>70 аддсддаЕсс дааЕдЕаЕЕЕ адаааааЕаа асаааЕаддд д41 <210>71 <211>36 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации ОГК гена резистентности к зеоцину <400>71 даЕсддаЕсс ЕЕсдаааЕдд ссаадЕЬдас садЕдс36 <210>72 <211>32 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации ОГК гена резистентности к зеоцину <400>72 аддсдсддсс дсааЕЕсЕса дЕссЕдсЕсс Ес32 <210>73 <211>40 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации ОГК Ц2ЕСГР <400>73 даЕсдааЕЕс ЕсдсдааЕдд Едадсаадса даЕссЕдаад40 <210>74 <211>52 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации ОГК ά2Ε6ΓΡ <400> 74 аддсдааЕЕс ассддЕдЕЕЕ ааасЕЕасас ссасЕсдЕдс аддсЕдссса дд 52

- 87 011747 <210> 75 <211> 41 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации гена 62Е6ГР <400>75 ккддккддкс акдаакддкд адсаадддсд аддадскдкк с41 <210>76 <211>36 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации гена 62ЕСЕР <400>76 аккскскада скасасаккд аксскадсад аадсас36 <210>77 <211>42 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Олигонуклеотид для получения линкера для создания МСЗ в рСЪЗпромотор-СГР <400>77 сдакаксккд дадакскаск адкддсдсдс сккдддскад ск42 <210>78 <211>50 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Олигонуклеотид для получения линкера для создания МСЗ в рбЬЗпромотор-СЕР <400>78 даксадскад сссааддсдс дссаскадка дакскссаад акаксдадск50 <210>79 <211>40 <212> ДНК <213> Искусственная

- 88 011747 <220>

<223> Праймер для амплификации промотора ЕР-1альфа <400>79 даЕсддсдсд ссаШааа! ссдаааадЕд ссасс£дасд40 <210> 80 <211>34 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации промотора ЕР-1альфа <400>80 аддсдддасс сссЕсасдас ассЕдаааЕд даад34 <210> 81 <211>51 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации промотора 3Ϋ40 <400>81

ИддРИдддд сдсдссдсад сассарддсс ЕдаааЕаасс ЕсЕдааадад д51 <210> 82 <211>55 <212> ДНК <213> Искусственная <220>

<223> Праймер для амплификации промотора 5У40 <400> 82

Иддмддда дсдсаадси ЕЫдсаааад сс1аддсс!с саааааадсс ЕссЕс 55

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая экспрессирующую кассету, включающую гетерологичный промотор, связанный с представляющей интерес нуклеиновой кислотой, причем указанная нуклеиновая кислота предпочтительно кодирует представляющий интерес белок или его фрагмент; и нуклеотидную последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, включающей:

   a) последовательность 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66;

   b) фрагменты последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66, которые обладают антирепрессорной активностью;

   c) последовательности, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и

   6) последовательность, которая комплементарна любой из последовательностей а)-с).
2. 2. Молекула по п.1, в которой указанная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, расположена слева от промотора в экспрессирующей кассете.
3. 3. Молекула по п.2, в которой указанная последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, и промотор разделены менее чем 2 т. п. н.
4. 4. Молекула по любому из предшествующих пунктов, в которой указанная нуклеиновая кислота, кодирующая представляющий интерес белок, находится в мультицистронном гене, дополнительно кодирующем селектируемый маркерный ген.
5. 5. Молекула по любому из предшествующих пунктов, дополнительно содержащая по меньшей мере

   - 89 011747 одну другую последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, включающей:

   a) любую из последовательностей 8ЕЦ ΙΌ Νο: 1-65;

   b) фрагменты любой из последовательностей 8ЕЦ ΙΌ Νο: 1-65, которые обладают антирепрессорной активностью; и

   c) последовательности, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и

   б) последовательность, которая комплементарна любой из последовательностей а)-с).
6. 6. Молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты, содержащая экспрессирующую кассету, включающую 5' - антирепрессорную последовательность А - промотор - нуклеиновую кислоту, кодирующую представляющий интерес белок или его фрагмент - антирепрессорную последовательность В - 3', где антирепрессорные последовательности А и В могут быть одинаковыми или различными и выбраны из группы, состоящей из:

   ί) любой из последовательностей 8ЕЦ ΙΌ Νο: 1-65;

   ίί) фрагментов любой из последовательностей 8ЕЦ ΙΌ Νο: 1-65, которые обладают антирепрессорной активностью;

   ϊϊΐ) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и ίν) последовательности, комплементарной любой из последовательностей ί)-ίίί), причем указанная молекула нуклеиновой кислоты дополнительно включает между указанной антирепрессорной последовательностью А и промотором последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из:

   a) последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66;

   b) фрагментов последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66, которые обладают антирепрессорной активностью;

   c) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и

   б) последовательности, комплементарной любой из последовательностей а)-с).
7. 7. Клетка, включающая молекулу по любому из пп.1-6.
8. 8. Клетка по п.7, которая является клеткой млекопитающего.
9. 9. Клетка по п.8, которая является клеткой СНО.
10. 10. Способ получения представляющего интерес белка, включающий культивирование клетки, содержащей молекулу рекомбинантной нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный белок, для экспрессии указанной нуклеиновой кислоты, кодирующей интересующий белок, в указанной клетке, отличающийся тем, что указанная молекула рекомбинантной нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из:

    a) последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66;

    b) фрагментов последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66, которые обладают антирепрессорной активностью;

    c) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и

    б) последовательности, комплементарной любой из последовательностей а)-с).
11. 11. Способ по п.10, дополнительно включающий выделение белка.
12. 12. Способ по п.10 или 11, в котором последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, расположена слева от промотора, который контролирует экспрессию представляющего интерес белка.
13. 13. Способ по п.12, в котором последовательность, обладающая антирепрессорной активностью, и промотор разделены менее чем 2 т.п.н.
14. 14. Способ по любому из пп.10-13, в котором нуклеиновая кислота, кодирующая представляющий интерес белок, находится в мультицистронном гене, дополнительно кодирующем селектируемый маркерный ген.
15. 15. Способ по любому из пп.10-14, в котором указанная клетка является клеткой млекопитающего.
16. 16. Способ по п.15, в котором указанная клетка является клеткой СНО.
17. 17. Применение нуклеотидной последовательности, обладающей антирепрессорной активностью, выбранной из группы, состоящей из:

    a) последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66;

    b) фрагментов последовательности 8ЕЦ ΙΌ Νο: 66, которые обладают антирепрессорной активностью;

    c) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и

    б) последовательности, комплементарной любой из последовательностей а)-с), для увеличения экспрессии представляющей интерес нуклеиновой кислоты.

    - 90 011747
18. 18. Способ получения клетки-хозяина, экспрессирующей два представляющих интерес полипептида, включающий:

    a) введение в клетку-хозяин одной или нескольких молекул нуклеиновой кислоты, содержащих:

    ί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей первый представляющий интерес полипептид и первый селектируемый маркерный ген; и ίί) промотор, функционально связанный с последовательностью, кодирующей второй представляющий интерес полипептид и второй селектируемый маркерный ген; и ϊϊΐ) по меньшей мере одну последовательность, обладающую антирепрессорной активностью, выбранную из группы, состоящей из: а) последовательности 8Е0 Ш Νο: 66; Ь) фрагментов последовательности 8Е0 Ш Νο: 66, которые обладают антирепрессорной активностью; с) последовательностей, которые по меньшей мере на 70% идентичны последовательности а) или Ь), которые обладают антирепрессорной активностью; и б) последовательности, комплементарной любой из последовательностей а)-с);

    b) селекцию клетки-хозяина одновременным отбором по экспрессии указанных первого и второго селектируемых маркерных генов.
19. 19. Способ экспрессии двух представляющих интерес полипептидов, включающий культивирование клетки-хозяина, полученной способом по п.18, для экспрессии указанных первого и второго полипептидов, и при необходимости выделение указанных полипептидов.
20. 20. Способ по п.18 или 19, в котором указанные полипептиды входят в состав мультимерного белка.