CN1980661B

CN1980661B - 阳离子细菌叶绿素衍生物及其用途

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Publication number: CN1980661B
Application number: CN2005800185365A
Authority: CN
Inventors: A·舍尔茨; A·布兰迪斯; Y·萨洛蒙; D·埃伦; A·科亨
Original assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Current assignee: Yeda Research and Development Co Ltd
Priority date: 2004-06-07
Filing date: 2005-06-07
Publication date: 2011-09-28
Anticipated expiration: 2025-06-07
Also published as: EP1753457A2; PT1753457T; ES2602460T3; MXPA06014326A; HUE030586T2; ZA200700169B; NZ551845A; RU2006146677A; AU2005251556A1; DK2322173T3; WO2005120573A3; BRPI0511909A; HUE031075T2; WO2005120573A2; DK1753457T3; EP1753457B8; CY1118203T1; AU2005251556B2; JP5372371B2; JP2008501780A

Abstract

本发明提供了一种阳离子四环和五环细菌叶绿素衍生物(Bchls)，其含有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团，优选地Bchls具有由含N脂肪族或杂环基得到的鎓基，例如铵、胍鎓、咪唑鎓、吡啶鎓等，或者磷鎓、砷鎓、氧鎓、锍、硒鎓、碲鎓、锑鎓或铋鎓基团，或者在生理条件下转化成该鎓基的碱性基团，所述基团通过酯或酰胺键与Bchl分子17³、13³和3²的一个或多个位置结合。该Bchl可用于光动力学治疗和诊断。

Description

阳离子细菌叶绿素衍生物及其用途

发明领域

本发明涉及新型水溶性阳离子细菌叶绿素衍生物，其制备及其在肿瘤和不同的血管疾病例如年龄相关性黄斑退行性改变的体内光动力学治疗和诊断的方法、以及体内和离体杀灭病毒和微生物的方法中的用途。

定义与缩写：AMD：年龄相关性黄斑退行性改变；Bchl：细菌叶绿素(具有5^th同素环、中心镁原子、17位叶绿基或二香叶基、13位COOCH₃基团、13位H原子、2，7，12，18位甲基、3位乙酰基、8位乙基的五环7，8，17，18-四氢卟啉)；Bchlorin：菌绿素(7，8，17，18-四氢卟啉)；Bphe：细菌脱镁叶绿素(中心镁原子被2个氢原子取代的Bchl)；Bpheid：细菌脱镁叶绿甲酯一酸(由Bphe衍生的C-17²游离羧酸)；Pd-Bpheid：Pd-细菌脱镁叶绿甲酯一酸(由具有中心Pd原子的Bphe衍生的C-17²游离羧酸)；PDT：光动力学治疗；玫瑰红菌绿素：具有17位-CH₂CH₂COOH基、13位COOH、2，7，12，18位甲基、3和8位乙基的Bchlorin)。

Bchl衍生物的IUPAC号在整个说明书中使用。然而，使用该术语，在13²和17²位含有两个羧酸酯的天然Bchl，它们是在13³和17³位被酯化。

发明背景

光动力学治疗(PDT)是治疗癌症和其它疾病的非外科技术，其施用无毒光敏化剂(一种由光激活的药物)，被肿瘤或其它被治疗的组织吸收并保留在其中，接着用特定波长的光作无害辐射，在原位产生细胞毒素的活性氧簇(单线态氧)。该技术比传统的化学疗法和放射疗法更具有选择性，因为光敏化合物对肿瘤组织优选积蓄，而且由于控制光直接指向肿瘤组织从而导致光动力效应限制在一定空间。

卟啉在临床上主要用作光敏化剂。光线的最佳组织穿透力显然是在650-800nm之间，但是卟菲尔钠(Photofrin Axcan Pharma Inc.的商标)，世界上第一个被批准的光动力学治疗剂，其由血卟啉经酸-IX 处理产生，而具经FDA批准接受用于食道和支气管非小细胞肺癌，仅在约620nm处有弱吸收，是一种合成的并且是单体、二聚体和更高的低聚物的不可分离的混合物。此外，Photofrin 及其它已试验的光敏化剂有多种不足，这限制了它们的应用，主要包括：(1)在可见光区相对弱的吸收，限制了其对浅表肿瘤的治疗；(2)致敏剂在患者皮肤中蓄积和长期滞留，导致皮肤光毒性延长(数天至数月)；以及(3)PDT对肿瘤和非肿瘤组织显示的效果低或甚至没有差异。这些缺点和固有的问题造成在合成单一纯化合物方面付出进行了大量的工作，该化合物——所谓“第二代”致敏剂——在长波长处有吸收，具有非常确定的结构，并且在它们滞留在肿瘤细胞以及滞留在皮肤和其它正常组织方面显示更好的差异。

在寻找合适的光敏分子或光敏物质中，细菌叶绿素显示具有一些超出Photofrin

的优点，PDT治疗最普通的光敏物质。当照射时，细菌叶绿素能使光线到达组织深部，从而对大肿瘤更有效。具有这种光谱、光物理、光化学的天然Bchl使它们成为最佳的集光分子，具有超过目前在PDT治疗中应用或试验其它光敏化剂的明显优点。特别是这些分子在长波长处具有非常高的吸光系数(λ_max＝760-780nm，ε＝(4-10)×10⁴M^-1cm^-1)，光线可深深地渗透到组织中。它们还产生高量子产率(取决于中心原子)的活性氧簇(ROS)。

Bchl的无金属衍生物的生物吸收和PDT效应，已以致敏剂对肿瘤细胞腔隙的亲和性操作为目标进行了研究。该方法主要是使用高度亲脂性取代物，一方面，药物在肿瘤细胞的蓄积可能增加，但另一方面，传送到肿瘤细胞可能是困难的。此外，在给药后的长时间内，应当避免光毒性药物水平在非肿瘤组织的显著蓄积。

在申请人以前的美国专利US5726169、US5955585和US6147195中，发明人采用了不同的方法。在给药后不会从循环中外渗并且在血中寿命短的高效抗血管性致敏物质已被合成。人们期望正常血管与异常组织例如肿瘤或其它依赖于新血管的组织间的内在差异将能够相对选择性的破坏异常组织。从而，目的是合成Bchl衍生物，其具有更大极性和因此具有更好的置于血管腔隙的可能性，在此它们传送初步的光动力效应。在天然Bchl的17-丙酸残基位置处理，提供与各种残基例如氨酸酸、肽或蛋白质的共轭体，这增加了致敏物质的亲水性。这些衍生物之一细菌叶绿素-丝氨酸的血管靶向活性，以及其从循环和整个动物体中快速清除，皮肤光毒性和高治愈可能性已作了研究(RosenbachBelkin et al，1996；Zilberstein et al.，1997；Zilberstein et al.，2001)。然而，由于在贮藏期间的低稳定性，发现这些包含Mg的化合物不适宜药用。

为增加Bchl衍生物的稳定性，在后面申请的PCT公布WO00/33833和相应的美国专利第6569846号中，用Pd取代中心镁原子。该重原子业已显示显著地增加Bchl大环的氧化势能，而且，同时，大大增加了分子向其三重线态的系间窜越(ISC)率。通过将Pd²⁺离子直接掺合到Bpheid分子而执行金属取代，如WO 00/33833所述。第一个Pd取代Bchl衍生物，钯-细菌脱镁叶绿甲酯一酸或Pd-Bpheid(Tookad

，Steba Biotech的商标)，在临床前研究中发现其对不同实体瘤高效性(Schreiber et al.，2002；Gross et al.，2003；Koudinova et al.，2003；WO 03/094695)，甚至对包含耐受肿瘤细胞的肿瘤(Preise et al.，2003)。在狗模型中，Pd-Bpheid的抗血管活性能破坏修复的腺体组织而不危害其贞操(Chen et al.，2002).。I/II期临床试验证实，Pd-Bpheid在放射治疗失败的患者中用于前列腺癌的光动力学治疗是安全的(Elhilali，2004)，并且诱导用治疗光和药物剂量治疗的前列腺患者血管腺组织的坏死和PSA(前列腺特异性抗原)减少(Trachtenberg，2003)。

由于其在水溶液中的低溶解性，Pd-Bpheid在临床应用中要求使用增溶剂例如Cremophor，其在高剂量下可造成副作用。这导致发明人构思一种新的Bchl衍生物族，描述在PCT/IL 03/00973(WO2004/045492)中，包括含有二或三价中心金属原子和至少两个阴离子残基的Bchlorin大环。这些阴离子Bchl化合物可以在不加辅料而溶于水溶液中后，经静脉内施用。它们在循环中短的寿命，以及它们相对快的作用和高效抗血管活性，显示它们作为抗血管PDT剂的潜力。事实上，这些阴离子Bchl衍生物之一目前处于年龄相关性黄斑退行性改变(AMD)的PDT和肝肿瘤例如肝癌的临床前研究中。

DE 10154436描述了焦细菌脱镁叶绿甲酯一酸化合物用于光动力学治疗，其中卟啉系统3a或13¹位的至少一个酮基衍生成相应的亚胺。

WO 03/028629描述了叶绿素衍生物，其可包含用于光动力学治疗或诊断的正电荷铵或亚胺鎓基。

WO 03/028628描述了四吡咯大环，其由至少一个用于光动力学治疗或诊断的、包括式-OCON＜或-OCON＝C＜的氨基甲酸酯基和任选项包括正电荷铵或亚胺鎓基的官能团取代。尽管通式在所述的出版物中公开，包括细菌叶绿素衍生物，应当指出，特定的细菌叶绿素衍生物尚未公开，说明书也未教导细菌叶绿素衍生物的制备。

人们非常期望提供一种新的稳定的细菌叶绿素衍生物，且在用于光动力学治疗和，特别是在血管靶向光线疗法(VTP)中，能增强对上皮细胞的亲和力。

发明简述

一方面，本发明涉及一种含有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团的细菌叶绿素衍生物，条件是所述的细菌叶绿素衍生物没有包含氨基甲酸酯的官能团以及，当细菌叶绿素衍生物是焦细菌脱镁叶绿甲酯一酸时，至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团不是细菌叶绿素分子的3a或13¹位亚胺基。

另一方面，本发明进一步涉及包含如上所述的Bchl衍生物和可药用的载体的药物组合物，这些组合物可用于光动力学治疗(PDT)，特别是血管靶向性PDT，例如用于肿瘤PDT，以及在治疗年龄相关性黄斑退行性改变(AMD)、心血管疾病和皮肤病如痤疮和牛皮癣中的非肿瘤学的用途。此外该组合物可用于体内或体外杀灭包含革兰氏阴性或革兰氏阳性细菌和病毒的病原体，以及用于诊断的目的。

本发明还进一步涉及用光敏物质进行光动力学治疗的改进的方法，其中该改进包括使用本发明的Bchl衍生物作为光敏物质。根据这一方面，本发明涉及一种通过PDT的治疗方法，其包括给予需要的个体本发明的有效量的Bchl衍生物，接着局部辐射。

在一个实施方案中，通过PDT治疗的方法包括给予遭受肿瘤痛苦的个体本发明的有效量的Bchl衍生物，接着局部辐射。

在另一实施方案中，通过PDT治疗的方法包括给予遭受年龄相关性黄斑退行性改变痛苦的个体本发明的有效量的Bchl衍生物，接着局部辐射。

在一个进一步的实施方案中，本发明提供了一种预防或减轻支架内再狭窄的方法，包括给予遭受经冠状动脉造影术的心血管疾病痛苦的个体本发明的有效量的Bchl衍生物，接着局部辐射。

本发明还进一步提供了一种使用光敏物质诊断肿瘤的改进方法，其中该改进包括使用本发明的Bchl衍生物作为光敏物质。根据这一方面，本发明涉及一种肿瘤诊断方法，其包括给予肿瘤可疑的个体本发明的有效量的Bchl衍生物，接着局部辐射，例如用不同波长的电磁辐射干扰，包括短波(例如X-光)、中波(例如UV/VIS/近红外)以考虑光频辐射、以及可能的长波(例如射频辐射)，例如核或电子顺磁共振信号。

本发明仍还进一步提供了一种使用光敏物质以杀灭细胞或包括细菌和病毒的病原体的改进方法，其中该项改进包括使用本发明的Bchl衍生物作为光敏物质。根据这一方面，本发明涉及一种生物制品例如血液的灭菌方法，其包括加入所述的生物制品例如血液，本发明的有效量的Bchl衍生物，接着辐射。

附图简要说明

不同的试验化合物，通过黑体和下划线数字表示在以下附图说明中。其全部识别可在化学部分开始处的化合物列表、实施例以及此后的附件中找到。

图1表示化合物5在甲醇中的荧光发射光谱。

图2描述了化合物5在磷酸盐缓冲液(PBS)并渐增人血清白蛋白(HSA)浓度的吸收光谱。(λ_ex＝520nm)

图3A-3C是显示化合物5、7、9和11对H5V上皮细胞的光毒性。图3A：化合物5和11渐增浓度细胞孵育90min后的光毒性。图3B：化合物5、7和9渐增浓度孵育2小时后的光毒性。图3C：化合物5(50μM)孵育1-10min后的光毒性。细胞在暗处并在指定化合物浓度中孵育，冲洗和光照10min(图3A-B中的开放型，图3C中的封闭型)或保持在暗处(暗处对照，图3A-B中的封闭型)。一式三份测定并显示代表性的试验。

图4是显示化合物5在Wistar大鼠血中的药物动力学。在化合物5静脉注射(i.v.)(0.6mg/kg)后，自同一大鼠分别在注射后的0、5、10、15、20、30、45min和1、2、6、24h收集血样，并记录荧光发射光谱。每一时间点表示3只大鼠的平均值±STD。

图5A-5B是显示化合物5在Wistar大鼠中的生物分布。在化合物 5静脉注(0.6mg/kg)后30min(图5A)或24小时(图5B)后处死大鼠，记录指定器官和组织的荧光发射光谱并对药动学数据标准化。

图6A-6C为显示的照片是在接种C6神经胶质瘤移植物以及静脉注射化合物5后PDT对小鼠的局部作用。CD1雄性裸鼠用0.3mg/kg的5治疗并用755nm激光照射(80mW/cm²)15min。图6A为PDT治疗动物0、4、14、21和32天后肿瘤部位的照片。图6B为暗对照小鼠(注射5但未照射)(n＝3)于0天和10天肿瘤部位的照片。图6C为光对照小鼠(注射与化合物5等容量的盐水并照射)(n＝2)于0天和10天肿瘤部位的照片。

图7为接种C6神经胶质瘤移植物小鼠用化合物5经PDT治疗的存活概率。接种C6神经胶质瘤移植物小鼠(n＝17)静脉注射化合物5(0.3mg/g)并立即用80mW/cm²(完全治疗组，n＝12，方格)光强度照射15min。对照组：未处理荷瘤小鼠(n＝2，圆圈)，暗对照(n＝3，菱形)，光对照(n＝2，三角)。^＊肿瘤体积＜2ml的概率。

图8A-8D显示负电荷细菌叶绿素衍生物(见实施例22)和化合物5 对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的光毒性。革兰氏阳性(白色葡萄球菌，图8A、8B)和革兰氏阴性(大肠杆菌，图8C、8D)菌，在规定负电荷细菌叶绿素衍生物(图8A、8C)浓度或在化合物5(图8B、8D)中孵育1小时，并用70mW/cm²照射15min。菌落计数测定细菌存活率。一式三份测定并显示代表性的试验。

图9A-9E分别表示化合物28、32、10、36和75在荷肾细胞癌(RCC)移植物裸鼠的多个器官中的生物分布。在不同时间点向鼠注射试验化合物的等渗甘露醇溶液(1.5mg/kg)。

发明详述

本发明源于本发明人的观察，即以Tookad (Pd-Bpheid)和水溶性

阴离子衍生物(在WO2004/045492中描述)进行的临床前试验表明PDT在多种实体瘤中的高效性，例如动物模型的黑色素瘤、神经胶质瘤、人前列腺移植、正常犬前列腺和DS肉瘤(Chen et al.，2002；Schreiberet al.，2002；Gross et al.，2003；Kelleher et al.，2003；Koudinova et al.，2003；Mazor et al.，2003；Plaks et al，2004)，并显示上皮细胞、细胞外基质和可能的血小板是可能候选用于初步的光动力作用。

上述的Bchl衍生物，没有迹象显示在对肿瘤细胞照射期间活性氧簇(ROS)产生直接作用(Gross et al.，2003)。这样，观察到的高治愈率似乎显示，肿瘤内皮的光动力损伤可以充分加强完整的肿瘤应答。接着该观察，发明人调查到如何增强光敏物质对上皮细胞以及，特别是对肿瘤和其它血管依赖性疾病具有特异性的新内皮细胞的亲和性。适宜的靶作为高密度负电荷在内皮组织被识别，包括在内皮窗、内陷小窝、质膜本身和小囊泡(Simionescu et al，.1981；Ghinea andSimionescu，1985；Hamblin et al.，1999)、纤维母细胞生长因子受体(Segev et al.，2002)、内皮多糖包被(高度水化的膜结合网状负电荷蛋白聚糖、氨基葡聚糖、和糖脂、少量含有酸性硫酸基)、以及血管原性上皮细胞(Thurston et al.，1998；Dellian et al.，2000)。此外，最近的出版物指出，肿瘤内皮组织表面的阴离子磷脂增加，例如，何杰金淋巴瘤、人非小细胞肺癌、鼠纤维肉瘤、人乳腺癌和黑素瘤(Ran et al.，2002)。肿瘤内皮阴离子部位的量增加为肿瘤治疗提供了有吸引力的靶位。

广义地，本发明涉及一种细菌叶绿素衍生物，含有至少一种正电荷基团和/或至少一种在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团，提供所述的细菌叶绿素衍生物没有包括氨基甲酸酯的官能团以及，当细菌叶绿素衍生物是焦细菌脱镁叶绿甲酯一酸时，至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团不是细菌叶绿素分子的3a或13¹位亚胺基。

在一个实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物包括至少一个正电荷基团，更优选一个由含N基团衍生的阳离子。

在一个优选的实施方案中，至少一个正电荷基团是一个由含N基团衍生的阳离子，例如，但不限于，铵-N⁺(RR′R″)、肼鎓-(R)N-N⁺(RR′R″)、铵氧O←N⁺(RR′)-、亚胺鎓＞C＝N⁺(RR′)、脒鎓-C(＝RN)-N⁺(RR′R″)或胍鎓-(R)N-C(＝NR)-N⁺(RR′R″)基，其中R、R′和R″各自独立地是H、烃基或杂环基，或R、R′和R″中二者共同和其依附的N原子形成3-7元饱和环，任选含有一个或多个选自O、S或N的杂原子，并任意地进一步在附加的N原子上取代。应当理解为，含N正电荷基团可以是一个末端基团、Bchl分子的烃基链内部的基团或N被质子化的饱和环的一部分，如下文所确定的。此外，至少一个正电荷基团也可以是衍生自含N杂芳基的阳离子，如下文所确定的。

在一个优选的实施方案中，细菌叶绿素衍生物包含式-N⁺(RR′R″)的铵基，其中R、R′和R″各自独立地是H、烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，或杂环基。-N⁺(RR′R″)铵基可以是仲铵基，其中R、R′或R″的任意两个是H，叔铵基，其中R、R′或R″仅一个是H；或季铵，其中R、R′或R″的任意一个均不是H。铵基可以是末端基团或内部有一烃基的基团，优选烷基，链式。优选的，铵基为季铵基，其中R、R′或R″各自独立地是C₁-C₆烷基。

在另一个优选的实施方案中，细菌叶绿素衍生物包含式-N⁺(RR′R″)的环状铵基，其中R、R′和R″中的两者与N原子共同形成3-7元饱和环，任选含有更多的选自O、S或N的杂原子，并任选的进一步在附加的N原子上取代，如下文所确定的。该环铵基举例包括氮丙啶鎓、吡咯烷鎓、哌啶鎓、哌嗪鎓、吗啉鎓、硫吗啉鎓、氮杂卓鎓等。

在进一步的实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物含有衍生自N杂芳基化合物的阳离子，该化合物可以是进一步包含O、S或附加的N原子的单或多环化合物，如下文所确定的。

仍然在另一个实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物含有不包含N的鎓基，例如，但不限于，磷鎓[-P⁺(RR′R″)]、砷鎓[-As⁺(RR′R″)]、氧鎓[-O⁺(RR′)]、锍[-S⁺(RR′)]、硒鎓[-Se⁺(RR′)]、碲鎓[-Te⁺(RR′)]、锑鎓[-Sb⁺(RR′R″)]或铋鎓[-Bi⁺(RR′R″)]基团，其中R、R′或R″的各自独立地是H、烃基或杂环基。在优选的实施方案中，R、R′或R″是H，C₁-C₆烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲-丁基、戊基或己基，芳基，优选地苯基，或芳烷基，例如苯甲基和苯乙基。

在另一实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物包含至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团。在此使用的“生理条件”指在身体的不同组织和细胞区域的条件。

在一个实施方案中，碱性基团是式-N(RR′)的氨基，其中R和R′各自独立地为H、烃基或杂环基。-N(RR′)氨基可以是仲氨，其中R和R′仅一个为H；或叔氨，其中R和R′均不是H；或环氨，其中R和R′与N原子共同形成3-7元饱和环，任意地进一步含有选自O、S或N 原子的杂原子，以及任意地进一步在附加N原子上被取代，如下文所确定的。应当理解为，碱性氨基可以是一个末端基团、分子的烃基链内部的基团或含N的3-7元饱和环部分，如氮丙啶、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、硫吗啉、氮杂卓等。

在生理条件下转化成正电荷基团以及可根据本发明使用的更多的碱性基团将在本说明书的下文确定。

仍然在另一个实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物既包含至少一个正电荷基团和至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团。

本发明的细菌叶绿素衍生物可衍生自天然细菌叶绿素例如细菌叶绿素a或b，或衍生自合成的非天然的细菌叶绿素衍生物，包括在大环、中心金属和/或外围已作修饰的化合物。中心镁原子可以不存在或被其它金属原子取代，例如二价Pd、Pt、Co、Sn、Ni、Cu、Zn或Mn，或三价Fe、Mn、Co、Au、Al、Gd、Er、Yb或Cr。根据本发明，中心原子优选是不存在或者是Pd。

在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种式I、II或III的细菌叶绿素衍生物：

其中

M表示2H，选自Pd、Pt、Co、Sn、Ni、Cu、Zn和Mn的二价金属原子，或选自Fe、Mn、Co、Au、Al、Gd、Er、Yb和Cr的三价金属原子；

R₁、R′₂和R₆各自独立地为Y-R₈、-NR₉R′₉或-N⁺R₉R′₉R″₉A^-；

Y为O或S；

R₂为H、OH或COOR₉；

R₃为H、OH、C₁-C₁₂烷基或C₁-C₁₂烷氧基；

R₄为-CH＝CR₉R′₉、-CH＝CR₉卤素、-CH＝CH-CH₂-NR₉R′₉、-CH＝CH-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CHO、-CH＝NR₉、-CH＝N⁺R₉R′₉ A^-、-CH₂-OR₉、-CH₂-SR₉、-CH₂-卤素、-CH₂-R₉、-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CH₂-CH₂R₉、-CH₂-CH₂卤素、-CH₂-CH₂OR₉、-CH₂-CH₂SR₉、-CH₂-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-COCH₃、C(CH₃)＝CR₉R′₉、-C(CH₃)＝CR₉卤素、-C(CH₃)＝NR₉、-CH(CH₃)＝N⁺R₉R′₉A^-、-CH(CH₃)-卤素、-CH(CH₃)-OR₉、-CH(CH₃)-SR₉、-CH(CH₃)-NR₉R′₉、-CH(CH₃)-N⁺R₉R′₉R″₉A^-或-C≡CR₉；

R₅为＝O、＝S、＝N-R₉、＝N⁺R₉R′₉A^-、＝CR₉R′₉或＝CR₉-卤素；

R₇、R₈、R₉、R′₉和R″₉各自独立地为：

(a)H；

(b)C₁-C₂₅烃基；

(c)C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，被选自下列官能团的一个或多个基团取代：卤素、硝基、氧代、OR、SR、环氧、环硫、-CONRR′、-COR、COOR、-OSO₃R、-SO₃R、-SO₂R、-NHSO₂R、-SO₂NRR′、＝N-OR、-(CH₂)_n-CO-NRR′、-O-(CH₂)_n-OR、-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-R、-OPO₃RR′、-PO₂HR和-PO₃RR′，其中R和R′各自独立地为H、烃基或杂环基，且R″为烃基或杂环基；

(d)C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，被选自下列官能团的一个或多个基团取代：正电荷基团、负电荷基团、在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团、以及在生理条件下转变成负电荷基团的酸性基团；

(e)C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，包含一个或多个杂原子和/或一个或多个碳环或杂环部分；

(f)C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，包含一个或多个杂原子和/或一个或多个碳环或杂环部分并被一个或多个如上述(c)和(d)定义的官能团取代；

(g)C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆烷基，被氨基酸、肽、蛋白质、单糖、低聚糖或多糖的残基取代；或

(h)氨基酸、肽、蛋白质、单糖、低聚糖或多糖的残基；

当R₁、R′₂和R₆各自独立地为Y-R₈时，R₈可进一步地为H⁺或阳离子R⁺ ₁₀；

R⁺ ₁₀为金属、铵基或有机阳离子；

A^-为生理学可接受的阴离子；

m为0或1；以及

其可药用盐和旋光异构体；

条件是，当式I中R₂和R₃均为H，R₅不是＝N-R₉和/或R₄不是-C(CH₃)＝NR₉；且进一步地条件是式I、II或IH的细菌叶绿素衍生物具有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团。

此处所定义的，A^-是生理学可接受的阴离子如氯化物、溴化物、碘化物、高氯酸盐、硫酸盐、磷酸盐或有机阴离子如醋酸盐、苯甲酸盐、辛酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、草酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、甲苯磺酸盐等。

术语“卤素”指氟代、氯代、溴代或碘代。

术语“C₁-C₂₅烃基”，如R₇、R₈、R₉、R′₉和R″₉所定义，表示直链或支链、饱和或不饱和、非环状或环状，包括芳香族、1-25碳原子的烃基，优选1-20，更优选1-6个碳原子。

在一个优选的实施方案中，C₁-C₂₅烃基是直链或支链C₁-C₂₅烷基，优选C₁-C₁₀，以及更优选C₁-C₆烷基，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。

在另一个实施方案中，烷基具有10个碳原子或更多，例如-C₁₀H₂₁、-C₁₅H₃₁、-C₁₆H₃₃、-C₁₇H₃₅、-C₁₈H₃₇、-C₂₀H₄₁等。当R₁为-OR₈时，那么R₈也可以是二香叶基(2，6-二甲基-2，6-辛二烯基)或叶绿基(2，6，10，14-四甲基-十六-14-烯-16-基)，存在于天然叶绿素或细菌叶绿素化合物的17³位的链烯基。

在另一个实施方案中，C₁-C₂₅烃基是直链或支链C₂-C₂₅烯基或炔基，优选2-6个碳原子，例如乙烯基、丙-2-烯-1-基、丁-3-烯-1-基、戊-4-烯-1-基，己-5-烯-1-基、乙炔基、炔丙基等。

仍然在另一个实施方案中，C₁-C₂₅烃基是C₃-C₂₅单环的或多环的环烷基，优选C₃-C₁₄，更优选C₃-C₇环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

在进一步的实施方案中，C₁-C₂₅烃基是单环的或多环的芳基，优选C₆-C₁₈，更优选C₆-C₁₄芳基，例如苯基、萘基、咔唑基、蒽基、芴基、茚满基和菲基。

在仍然进一步的实施方案中，C₁-C₂₅烃基是芳烷基，其中所述的芳基优选C₆-C₁₈，更优选C₆-C₁₄芳基，例如苯基或萘基，并且更优选苯甲基或苯乙基。

此处使用的，术语″碳环部分″指在环中仅含有碳原子的单环或多环化合物。碳环部分可以是饱和的，即如前面定义的环烷基，或不饱和的，即环烯基或芳香族的，即如前面定义的芳基。

此处使用的术语″烷氧基″指基团(C₁-C₂₅)烷基-O-，其中C₁-C₂₅烷基是如前面所定义的。烷氧基的实例是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、-OC₁₅H₃₁、-OC₁₆H₃₃、-OC₁₇H₃₅、-OC₁₈H₃₇等。此处使用的术语″芳氧基″指基团(C₆-C₁₈)芳基-O-，其中C₆-C₁₈芳基是如前面所定义的，例如苯氧基和萘氧基

如此处使用的，术语“杂芳基”或“杂环部分”或“杂芳基”或“杂环基”，意为衍生自含有1-3个选自包括O、S和N的杂原子的单-或多-环状杂芳环基团。特别的实例是吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、嘧啶基、1，3，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，5-三嗪基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、吲哚基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并咪唑基、苯并噻唑基和苯并噁唑基。

任一″碳环″，″芳基″或″杂芳基″可以被一个或多个基团取代，例如卤素、C₆-C₁₄芳基、C₁-C₂₅烷基、硝基、OR、SR、-COR、-COOR、-SO₃R、-SO₂R、-NHSO₂R、-NRR′、-(CH₂)_n-NR-COR′和-(CH₂)_n-CO-NRR′。应当理解，当多环杂芳环被取代时，可以在任一的碳环和/或杂环上取代。

此处使用的“正电荷基团”表示含N基团或不含N的鎓基衍生得到的阳离子。

此处使用的“含N基团衍生得到的阳离子”表示，例如，但不限于，铵-N⁺(RR′R″)、肼鎓-(R)N-N⁺(RR′R″)、铵氧O←N⁺(RR′)-、亚胺鎓＞C＝N⁺(RR′)、脒鎓-C(＝RN)-N⁺RR′R″或胍鎓-(R)N-C(＝NR)-N⁺R′R″基，其中R、R′和R″各自独立地是H、烃基，优选如前述定义的C₁-C₆烷基、苯基或苯甲基、或杂环基，或者铵基中R、R′和R″之一可以是OH，或者在铵基R、R′和R″中的二者或在肼鎓、铵氧、亚胺鎓、脒鎓或胍鎓基中的R和R′一同与所附N原子形成3-7元饱和环，任选含有一个或多个选自包括O、S或N的杂原子以及任选地进一步在附加的N原子上取代，或者所述的阳离子是由含有一个或多个在杂芳环上的N原子衍生而来。

在一个更优选的实施方案中，细菌叶绿素衍生物含有一个式-N⁺(RR′R″)的铵基基团，其中，R、R′和R″各自独立地为H或任选被如前述定义的烃基或杂环基取代，或者其中之一可以是OH。铵基-N⁺(RR′R″)可以是仲铵，其中R、R′和R″基团的任意二者为H；叔铵，其中R、R′和R″仅一个为H；或季铵，其中R、R′和R″各自任选是如前述定义的被取代的烃基或杂环基。当R、R′和R″之一为OH，该基团为羟铵基团。优选的铵基是季铵基团，其中R、R′和R″各自为C₁-C₆烷基如甲基、乙基、丙基、丁基、己基。如前所述，铵基在分子中可以是末端基团或它可以出现在分子的烷基链中。

在肼鎓-(R)N-N⁺(RR′R″)、脒鎓-C(＝NR)-N⁺RR′R″和胍鎓-(R)N-C(＝NR)-N⁺RR′R″基中，R、R′和R″可以各自独立地为H或烃基或杂环基，或者R′和R″共同与所依附的N原子形成3-7元饱和环，如此处所定义的。这些基团的实例包括那些基团，其中R为H，以及R′和R″各自为C₁-C₆烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、己基。

在铵氧O←N⁺(RR′)-和亚胺鎓＞C＝N⁺(RR′)基中，其中R和R′可以各自独立地为H或烃基，优选C₁-C₆烷基或杂环基，或者R和R′共同和其依附的N原子形成3-7元饱和环，如此处所定义的。

在另一优选的实施方案中，细菌叶绿素衍生物含有式-N⁺(RR′R″)的环状铵基，其中R、R′和R″中的二者共同和其依附的N原子形成以下定义的3-7元饱和环。

此处所定义的，“3-7元饱和环”是由R、R′和R″中的二者共同和其依附的N原子形成，可以是仅包含N的环，氮丙啶，吡咯烷，哌啶，哌嗪或氮杂卓，或者其可以包含另外的选自O和S的杂原子如吗啉或硫吗啉。哌嗪环中的另外的N原子可任选被烷基取代，例如C₁-C₆烷基，其可被卤素、OH或氨基取代。衍生自所述饱和环的鎓基包括氮丙啶鎓、吡咯烷鎓、哌啶鎓、哌嗪鎓、吗啉鎓、硫吗啉鎓和氮杂卓鎓。

此处所定义的“由含N杂芳基得到的阳离子”表示由N-杂芳化合物得到的阳离子，该化合物可以是任选地含有O、S或附加的N原子的单环或多环化合物。产生阳离子的环应当含有至少一个N原子并且是芳香族的，但任何其它的环，可以部分是饱和的。N-杂芳阳离子的实例包括吡唑鎓、咪唑鎓、噁唑鎓、噻唑鎓、吡啶鎓、喹啉鎓、异喹啉鎓、嘧啶鎓、1，2，4-三嗪鎓、1，3，5-三嗪鎓和嘌呤鎓。

至少一个正电荷基团也可以是不包含氮的鎓基例如但不限于，磷鎓[-P⁺(RR′R″)]、砷鎓[-As⁺(RR′R″)]、氧鎓[-O⁺(RR′)]、锍[-S⁺(RR′)]、硒鎓[-Se⁺(RR′)]、碲鎓[-Te⁺(RR′)]、锑鎓[-Sb⁺(RR′R″)]或铋鎓[-Bi⁺(RR′R″)]基团，其中R、R′或R″各自独立地是H、烃基或杂环基，优选C₁-C₆烷基例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或己基，或者芳基，优选苯基。

式-P⁺(RR′R″)的磷鎓基实例包括的基团，其中R、R′和R″各自为甲基、乙基、丙基、丁基或苯基，或R为甲基、乙基、丙基、丁基或己基且R′和R″都是苯基。式-As⁺(RR′R″)的砷基实例包括的基团，其中R、R′和R″各自为甲基、乙基、丙基、丁基或苯基。式-S⁺(RR′)的锍基实例包括的基团，其中R和R′各自为甲基、乙基、丙基、丁基、苯基、苯甲基、苯乙基或取代的烃基。

此处所定义的“在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团”是，至少理论上是，在生理条件下会产生此处所定义的正电荷基团的任何碱性基团。应当指出，此处使用的生理条件不单单指血清，还指体内的不同组织和细胞区域。

该含N碱基的实例包括，不限于，会产生铵基的任何氨基，会产生亚胺鎓基的任何亚胺，会产生肼鎓基的任何肼基，会产生铵氧基的任何氨氧基，会产生脒鎓基的任何脒基，会产生胍鎓基的任何胍基，均如此处定义。其它实例包括膦基和巯基。

这样，本发明的细菌叶绿素衍生物可含有至少一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团，例如-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″、-NR-NR′R″、-(R)N-C(＝NR)-NR′R″、O←NR^-、或＞C＝NR，其中R、R′和R″各自独立地为H、烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀或C₁-C₆ 烷基或杂环基，或者R、R′和R″中的二者共同与N原子形成3-7元饱和环，任选含有一个O、S或N原子，并任选进一步在附加的N原子上被取代，或碱性基团为含N的杂芳基。

3-7元饱和环可以是氮丙啶、吡咯烷、哌啶、吗啉、硫吗啉、氮杂卓或哌嗪，任选地在附加的N原子上被任选被卤素、羟基或氨基取代的C₁-C₆烷基取代，以及含N杂芳基可以是吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、嘧啶基、1，2，4-三嗪基、1，3，5-三嗪基或嘌呤基。

如此处所定义的，R⁺ ₁₀可以是铵，金属阳离子，优选碱或碱土金属例如Na、K、Li、Ca、Ba，或如此处所定义的“由含N基团得到的阳离子”的有机阳离子。

如此处所定义的，“负电荷基团”是一个由酸衍生的阴离子，并且包括羧酸盐(COO^-)、硫羧酸盐(COS^-)、磺酸盐(SO₃ ^-)和膦酸盐(PO₃ ^2-)，以及“在生理条件下转变为负电荷基团的酸性基团”包括羧酸(-COOH)、硫代羧酸(-COSH)、磺酸(-SO₃H)和膦(-PO3H2)酸基团。含有这些基团的细菌叶绿素衍生物已描述在同一申请人的WO2004/045492中，在此作为参考整体并入说明书，如同完全在此公开。

如此处所定义的，R₇、R₈、R₉和R′₉各自独立地可以是任选含有一个可多个杂原子、碳环或杂环部分的C₁-C₂₅烃基。例如，C₁-C₂₅烃基可以是直链或支链的C₁-C₂₅烷基或C₂-C₂₅烯基，其可被一个或多个选自O、S和/或N的杂原子中断，和/或可被一个可多个碳环例如C₃-C₇环烷基或C₆-C₁₄-芳基、如前述定义的杂环部分中断和/或取代。

如此处所定义的，C₁-C₂₅烃基确定的R₇、R₈、R₉和R′₉可以任选被选自下列官能团的一个或多个基团取代：卤素、硝基、氧代、OR、SR、环氧、环硫、氮丙啶、-CONRR′、-COR、COOR、-OSO₃R、-SO₃R、-SO₂R、-NHSO₂R、-SO₂NRR′-NRR′、＝N-OR、＝N-NRR′、-C(＝NR)-NRR′、-NR-NRR′、-(R)N-C(＝NR)-NRR′、O←-NR-、＞C＝NR、-(CH₂)_n-NR-COR′、-(CH₂)_n-CO-NRR′、-O-(CH₂)_n-OR、-O-(CH₂)_n-O- (CH₂)n-R、-PRR′、-OPO₃RR′、-PO₂HR、-PO₃RR′；一个或多个负电荷基团例如COO^-、COS^-、-OSO₃ ^-、-SO₃ ^-、-OPO₃R^-、-PO₂H^-、-PO₃ ^2- 和-PO₃R^-；和/或一个或多个正电荷基团例如-P⁺(RR′R″)、-As⁺(RR′R″)、-O⁺(RR′)、-S⁺(RR′)、-Se⁺(RR′)、-Te⁺(RR′)、-Sb⁺(RR′R″)、-Bi⁺(RR′R″)、O←N⁺(RR′)-、＞C＝N⁺(RR′)、-N⁺(RR′R″)、-(R)N-N⁺(RR′R″)、-(R)N-C(＝RN)-N⁺RR′R″、-C(＝NR)-N⁺(RR′R″)、或SO₂N⁺(RR′R″)，或N-杂芳阳离子例如吡唑鎓、咪唑鎓、噁唑鎓、噻唑鎓、吡啶鎓、喹啉鎓、异喹啉鎓、嘧啶鎓、1，2，4-三嗪鎓、1，3，5-三嗪鎓和嘌呤鎓；其中n为1-6的整数，R、R′和R″各自独立地为H、烃基或杂环基，或R、R′和R″中的二者共同和其依附的N原子形成3-7元饱和环，任选地含有一或多个选自O、S或N的杂原子或任选地进一步地在附加的N原子上取代。C₁-C₂₅烃基确定的R₇、R₈、R₉和R′₉也可以被如下基团的残基取代：单-、寡-或多糖例如糖基，或氨基酸、肽或蛋白质。

在基团OR和SR中，当R为H时，其分别表示羟基或巯基，以及当R不是H时，其分别表示醚或硫化物。在基团-PRR′中，当R和R′是H时，其表示膦基。在基团-COR中，当R为H时，表示的甲酰基为醛-CHO，而当R不是H时，它是酮的残基，例如烷羰基和芳羰基。在基团COOR中，当R不是H时，其是羧酸酯基团例如烷氧羰基和芳氧羰基。同样地，在基团-OSO₃R、-SO₃R、-SO₂R、-OPO₃RR′、-PO₂HR和-PO₃RR′中当R和R′不是H时，它们表示酯。

在一个优选的实施方案中，式I化合物的R₁，或者式II化合物的R₁和R₆，是基团-OR₈，其中R₈为被正电荷末端官能团取代的C₁-C₆ 烷基，更优选基团-N⁺RR′R″，最优选-N⁺(CH₃)₃。

在本发明的一个实施方案中，R₇、R₈、R₉和/或R′₉可以是氨基酸、肽或蛋白质的残基。在一个优选的实施方案中，在17³位的R₁为-OR₈，其中R₈为一个含有游离羟基的氨基酸残基例如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸，或一个烷基，例如甲基、其酯，或一个含有该氨基酸或其衍生物的肽，所述的羟化氨基酸或其衍生物或肽与Bchl衍生物的-COO^-基通过其羟基相连。该氨基酸衍生物和肽的实例是-L-丝氨酸甲酯、L-酪氨酸甲酯和丝氨酰丝氨酸甲酯。

在另一优选的实施方案中，基团-NR₉R′₉为一个含有游离氨基的氨基酸残基例如精氨酸和赖氨酸，或一个含有它们的肽，或一个所述氨酸酸或肽的烷基酯的衍生物，在Bchl分子的13³和/或17³位通过酰胺结合与-CO相连。在这些化合物中，-NR₉R′₉基团的N原子衍生自氨基酸的游离氨基。

在进一步的实施方案中，C₁-C₂₅烃基基团可被氨基酸残基取代并且，如果氨基酸的末端氨基为游离的，氨基酸残基可以是生理条件下正电荷基团的来源物。

R⁺ ₁₀可以是单价或二价阳离子，衍生自碱或碱土金属例如K⁺、Na⁺、Li⁺、NH₄ ⁺、Ca⁺，更优选K⁺；或者衍生自氨的阳离子。

此处使用的，术语“细菌叶绿素的阳离子衍生物”意为细菌叶绿素，其含有一个或多个正电荷基团，和/或一个或多个在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团。细菌叶绿素分子还可以有中性基团，和/或一个或多个负电荷基团，和/或一个或多个在生理条件下转变成负电荷基团的酸性基团。细菌叶绿素分子的全部电荷是不重要的。

在一个优选的实施方案中，本发明的细菌叶绿素衍生物为式II的玫瑰红菌绿素：

Figure DEST_PATH_S05818536520070727D000111

其中

M表示2H，一个选自Pd、Pt、Co、Sn、Ni、Cu、Zn和Mn的二价金属原子，或一个选自Fe、Mn、Co、Au、Al、Gd、Er、Yb和Cr的三价金属原子；

Y为O或S；

R₄为-CH＝CR₉R′₉、-CH＝CR₉卤素、-CH＝CH-CH₂-NR₉R′₉、-CH＝CH-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CH_O、-CH＝NR₉、-CH＝N⁺R₉R′₉A^-、-CH₂-OR₉、-CH₂-SR₉、-CH₂-卤素、-CH₂-R₉、-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CH₂-CH₂R₉、-CH₂-CH₂卤素、-CH₂-CH₂OR₉、-CH₂-CH₂SR₉、-CH₂-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-COCH₃、C(CH₃)＝CR₉R′₉、-C(CH₃)＝CR₉卤素、-C(CH₃)＝NR₉、-CH(CH₃)＝N⁺R₉R′₉A^-、-CH(CH₃)-卤素、-CH(CH₃)-OR₉、-CH(CH₃)-SR₉、-CH(CH₃)-NR₉R′₉、-CH(CH₃)N⁺R₉R′₉R″₉A^-或-C≡CR₉；

R₈、R₉、R′₉和R″₉各自独立地为：

(a)H；

(b)C₁-C₂₅烃基；

(c)C₁-C₂₅烃基，其被选自下列官能团的一个或多个基团取代：卤素、硝基、氧代、OR、SR、环氧、环硫、-CONRR′、-COR、COOR、-OSO₃R、-SO₃R、-SO₂R、-NHSO₂R、-SO₂NRR′、＝N-OR、-(CH₂)_n-CO-NRR′、-O-(CH₂)_n-OR、-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-R、-OPO₃RR′、-PO₂HR和-PO₃RR′，其中R和R′各自独立地为H、烃基或杂环基以及R″为烃基或杂环基；

(d)C₁-C₂₅烃基，其被选自下列官能团的一个或多个基团取代：正电荷基团、负电荷基团、在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团、以及在生理条件下转变成负电荷基团的酸性基团；

(e)C₁-C₂₅烃基，其含有一个或多个杂原子，和/或一个或多个碳环或杂环部分；

(f)C₁-C₂₅烃基，其含有一个或多个杂原子，和/或一个或多个碳环或杂环部分并被一个或多个如上述(c)和(d)中所定义的官能团取代；

(g)C₁-C₂₅烃基，其被一个氨基酸、肽、蛋白质、单糖、寡糖或多糖的残基取代；或

(h)氨基酸、肽、蛋白质、单糖、寡糖或多糖的残基；

R₈可以进一步地为H⁺或R⁺ ₁₀阳离子，当R₁、R′₂和R₆各自独立地为Y-R₈时；

R⁺ ₁₀为金属、铵或有机阳离子，

A^-为生理可接受的阴离子；

m为0或1；以及

可药用盐和其旋光异构体；

条件是式II的细菌叶绿素衍生物具有至少一个正电荷基团和/或一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团。

在一个优选的实施方案中，R₈、R₉、R′₉或R″₉如前面(a)所定义的，为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₆烷基，未取代或被选自下列官能团的一个或多个基团取代：卤素、硝基、氧代、OR、SR、环氧、环硫、氮丙啶、-CONRR′、-COR、COOR、-COSR、-OSO₃R、-SO₃R、-SO₂R、-NHSO₂R、-SO₂NRR′、-NRR′、＝N-OR、＝N-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″、-NR-NR′R″、O←NR-、＞C＝NR、-C(＝NR)-NRR′、-(R)N-C(＝NR)-NRR′、-(CH₂)_n-NR-COR′、-(CH₂)_n-CO-NRR′、-O-(CH₂)_n-OR、-O-(CH₂)_n-O-(CH₂)_n-R、-PRR′、-OPO₃RR′、-PO₂HR、-PO₃RR′；一个负电荷基团例如COO^-、COS^-、-SO₃ ^-、-OSO₃ ^-、-PO₃₂ ^-、-OPO₃R^-、-PO₂H^-和-PO₃R^-；一个正电荷基团如-P⁺(RR′R″)、-As⁺(RR′R″)、-O⁺(RR′)、-S⁺(RR′)、-Se⁺(RR′)、-Te⁺(RR′)、-Sb⁺(RR′R″)、-Bi⁺(RR′R″)、O←N⁺(RR′)-、＞C＝N⁺(RR′)、-N⁺(RR′R″)、-(R)N-N⁺(RR′R″)、-(R)N-C(＝NR)-N⁺RR′R″、-C(＝NR)-N⁺(RR′R″)，和一个N-杂芳阳离子例如吡唑鎓、咪唑鎓、噁唑鎓、噻唑鎓、吡啶鎓、喹啉鎓、异喹啉鎓、嘧啶鎓、1，2，4-三嗪鎓、1，3，5-三嗪鎓和嘌呤鎓；其中n为1-6的整数，R、R′和R″各自独立地为H、烃基或杂环基，或者R、R′和R″中的两者共同与所依附的N原子形成3-7元饱和环，任选地含有一个或多个选自O、S或N的杂原子以及任选地进一步在附加的N原子上被取代；或者C₁-C₂₅烃基可以，或为其本身，被单-、寡-或多糖例如氨基葡萄糖的残基，或氨基酸、肽或蛋白质的残基所取代。

在优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物为式II的玫瑰红菌绿素，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；R₁为OH、-NR₉R′₉或-NR₉-CH₂-CH(OH)-CH₂OH；R₆ 为-NR₉R′₉或-NR₉-CH₂-CH(OH)-CH₂OH；R₉为H或C₁-C₆烷基；以及R′₉为被至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团所取代的C₁-C₂₅烃基。

在更优选的实施方案中，在上述化合物中R₉为H并且R′₉为C₁-C₂₅烷基，优选C₁-C₁₀，更优选C₁-C₆烷基，被至少一个正电荷基团- N⁺RR′R″或被至少一个碱性基团-NRR′所取代，以及任选地被-N(R″)-基团所中断，其中R和R′各自独立地为H、任选地被NR″R″取代的C₁-C₆烷基或杂环基例如吡啶基，或者R和R′与N原子共同形成进一步含有O、S或N原子的6元环，并且R″为H或C₁-C₆烷基。

在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；R₁为OH并且R₆为-NHR′₉基团，选自：

(i)-NH-(CH₂)_n-NRR′或-NH-(CH₂)_n-N⁺RR′R″；

(ii)-NH-(CH₂)_n-N(R″)-(CH₂)_n-NRR′；

Figure DEST_PATH_S05818536520070727D000141

Figure DEST_PATH_S05818536520070727D000142

和

Figure DEST_PATH_S05818536520070727D000143

其中

X为O、S或NR；

R、R′和R″各自独立地为H或C₁-C₆烷基；

n为1-10的整数，优选2-6；且

m为1-6的整数，优选1-3。

该细菌叶绿素衍生物的实例由命名的化合物12和24-32代表。

在另一优选的实施方案中，本发明提供了式H细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；并且R₁和R₆均与前面定义的-NHR′₉基团相同。该细菌叶绿素衍生物的实例由在此指明的化合物4-11和33-45表示。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了式II细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；R₁为-NH-CH₂-CH(OH)-CH₂OH并且R₆为如前面定义的-NHR′₉基团。该细菌叶绿素衍生物的实例由在此指明的化合物48、 50、55、57、59-64、71和72表示。

仍然在另一优选的实施方案中，本发明提供了式II细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；R₆为-NH-CH₂-CH(OH)-CH₂OH并且R₁为如前面定义的-NHR′₉基团。该细菌叶绿素衍生物的实例由在此指明的化合物 46、47、49、51-54、56、58、73和74表示。

仍然在进一步优选的实施方案中，本发明提供了式II细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃；R₆为-NH-CH₂-CH₂-NRR′；并且R₁选自：

-NH-(CH₂)_n-OH；

-NH-CH(OH)-CH₃；

-NH-(CH₂)_n-NR-(CH₂)_n-OH；和

-糖基氨基；

其中R和R′各自独立地为H、甲基或乙基；并且n为2或3。

该细菌叶绿素衍生物的实例由在此指明的化合物65-70和75表示。

化合物4、6、8和10以及具有碱性基团本发明的类似化合物可通过如图解I中描述的方法制备，其中Bpheid(化合2)或Pd-Bpheid(化合物3)与羟基琥珀酰亚胺(NHS)在DCC存在下进行反应，并且所得产物Bpheid-NHS或Pd-Bpheid-NHS与式NH₂-(CH₂)_n-NH₂的烯基二氨反应。

化合物5、7、9、11和12以及具有正电荷基团本发明的类似化合物，其可通过如图解I中描述的方法，通过前述的13¹、17³-氨基烷基酰胺与相应的卤化物R-卤素，例如CH₃I而制备。产物通过HPLC纯化，依据所使用的洗脱缓冲盐可以获得不同的盐。因此，使用枸橼酸缓冲液洗脱可获得枸橼酸盐，使用磷酸盐缓冲液洗脱可获得磷酸盐，使用乙酸缓冲液洗脱可获得乙酸盐等。

在另一优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物为式II的玫瑰红菌绿素，其中M为Pd；R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H以及R′₉为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀烷基，被胍基或胍鎓基取代。在本发明更优选的实施方案中，R₁和R₆为式-NH-(CH₂)_n-C(＝NH)-NH₂或-NH-(CH₂)_n-C(＝NH)-N⁺(R)₃A^-的基团，更优选-NH-(CH₂)_n-C(＝NH)-N(CH₃)₃ ⁺A^-，其中n为1-10的整数，优选2、3或6。该化合物的实例为13¹，17³-胍基乙基酰胺和13¹，17³-三甲基胍基乙基酰胺，此处分别以化合物14和14a命名。胍基衍生物可如图解I所述获得，通过13¹，17³-胺基烷基酰胺与1-脒基吡唑反应，并且胍鎓衍生物可通过进一步与甲基卤化物反应获得。

在另一优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物为式II的玫瑰红菌绿素，其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H以及R′₉为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀烷基，被锍基取代。在本发明更优选的实施方案中，R₁和R₆为式-NH-(CH₂)_n-S⁺(R)₂A^-的基团，更优选，-NH-(CH₂)_n-S(CH₃)₂ ⁺A^-，其中n为1-10的整数，优选2、3或6。该化合物的实例为13¹，17³-二甲基锍基乙基酰胺，此处命名化合物15。该锍衍生物可通过Bpheid或Pd-Bpheid与S，S-二甲基半胱胺二乙酸盐反应获得。

在另一优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物为式II的玫瑰红菌绿素其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基；R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H以及R′₉ 为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀烷基，被膦基或磷鎓基取代。在本发明更优选的实施方案中，R₁和R₆为式-NH-(CH₂)_n-P(R)₂ 的基团，更优选-NH-(CH₂)_n-P(CH₃)₂或NH-(CH₂)_n-P⁺(R)₃A^-，更优选-NH-(CH₂)_n-P⁺(CH₃)₃A^-，其中n为1-10的整数，优选2、3或6。该化合物的实例为13¹，17³-二甲基膦基乙基酰胺，此处命名化合物18，以及13¹，17³-三甲基磷鎓基乙基酰胺，此处命名化合物17。膦基衍生物可通过Bpheid-NHS与(2-氨乙基)二甲基膦反应获得，以及磷鎓基衍生物可通过膦基衍生物与烷基卤化物反应获得，例如甲基碘化物，或者通过13¹，17³-羟基乙基酰胺衍生物(化合物16)与三甲基膦反应获得。

在另一优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物式II的玫瑰红菌绿素，其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基，R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H以及R′₉ 为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀烷基，被胂基或砷鎓基取代。在本发明更优选的实施方案中，R₁和R₆为式-NH-(CH₂)_n-A_s(R)₂ 的基团，更优选-NH-(CH₂)_n-As(CH₃)₂或NH-(CH₂)_n-As⁺(R)₃A^-，更优选-NH-(CH₂)ⁿ-As⁺(CH₃)₃A^-，其中n为1-10的整数，优选2、3或6。实例为13¹，17³-三甲基砷鎓基乙基酰胺，此处命名化合物19，其可通过13¹，17³-羟基乙基酰胺衍生物(化合物16)与三甲基砷化三氢反应获得。

在另一优选的实施方案中，本发明的Bchl衍生物为式II的玫瑰红菌绿素其中M为2H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，优选甲基，R₄为-C(CH₃)＝NR₉并且R₁和/或R₆为-NR′₉R″₉，其中R′₉为H并且R₉和R″₉为C₁-C₂₅烃基，优选C₁-C₂₅烷基，更优选C₁-C₁₀烷基，被至少一个末端氨基或一个正电荷基团取代，更优选一个式-N⁺(RR′R″)A^-的末端氨基，其中R、R′和R″优选相同的C₁-C₆烷基，优选甲基，并且A^-为阴离子。在本发明更优选的实施方案中，R₄为式-C(CH₃)＝N-(CH₂)_n-NH₂或-C(CH₃)＝N-(CH₂)_n-N(R)₃ ⁺A的基团并且R₁和R₆为式-NH-(CH₂)_n-NH₂或NH-(CH₂)_n-N(R)₃ ⁺A^-的基团，更优选-NH-(CH₂)_n-N(CH₃)₃ ⁺A^-，其中n为1-10的整数，优选2、3或6。该化合物的实例此处命名化合物20、21、22和23。

在本发明另一优选的实施方案中，Bchl衍生物为式I的细菌叶绿素：

其中

M表示2H或选自二价的Pd、Pt、Co、Sn、Ni、Cu、Zn或Mn以及三价的Fe、Mn、Co、Au、Al、Gd、Er、Yb或Cr的金属原子；

R₁为-NR₉R′₉或Y-R₈；Y为O或S；

R₂为H、OH或COOR₉；

R₃为H、OH或C₁-C₁₂烷基或烷氧基；

R₄为-CH＝CR₉R′₉、-CH＝CR₉卤素、-CH＝CH-CH₂-NR₉R′₉、-CH＝CH-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CHO、-CH＝NR₉、-CH＝N⁺R₉R′₉A^-、-CH₂-OR₉、-CH₂-SR₉、-CH₂-卤素、-CH₂-R₉、-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-CH₂-CH₂R₉、-CH₂-CH₂卤素、-CH₂-CH₂OR₉、-CH₂-CH₂SR₉、-CH₂-CH₂-NR₉R′₉、-CH₂-CH₂-N⁺R₉R′₉R″₉A^-、-COCH₃、C(CH₃)＝CR₉R′₉、-C(CH₃)＝CR₉卤素、-C(CH₃)＝NR₉、-CH(CH₃)＝N⁺R₉R′₉A^-、-CH(CH₃)-卤素、-CH(CH₃)-OR₉、-CH(CH₃)-SR₉、-CH(CH₃)-NR₉R′₉、-CH(CH₃)-N⁺R₉R′₉R′₉A^-或-C≡CR₉；

R₅为＝O、＝S、＝N-R₉、＝CR₉R′₉或＝CR₉-卤素；

R₈、R₉和R′₉各自独立地为H或选自：

(a)C₁-C₂₅烃基；包含一个或多个杂原子、碳环或杂环部分的C₁-C₂₅烃基；，被下列官能团取代的C₁-C₂₅烃基：一个或多个包括一个或多个正电荷基团、一个或多个负电荷基团、一个或多个在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团、或者一个或多个在生理条件下转变成负电荷基团的酸性基团；或包含一个或多个杂原子、碳环或杂环部分并且被一个或多个如前述定义的官能团取代的C₁-C₂₅烃基；

(b)氨基酸、肽、蛋白质、或单-或多-糖的残基；

(c)当R₁为Y-R₈时，R₈可以进一步地为H⁺或阳离子R⁺ ₁₀，其中阳离子R⁺ ₁₀为金属、铵或有机阳离子；

条件是当R₂和R₃均为H，R₅不是＝N-R₉和/或R₄不是-C(CH₃)＝NR₉；并且细菌叶绿素分子具有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团。

在更优选的实施方案中，本发明提供了式I的Bchl衍生物其中M为Pd，R₂为-COOCH₃，R₃为H，R₄为-COCH₃，R₅为＝O，以及R₁ 为-OR₈，其中R₈为含有羟基的氨基酸残基，优选丝氨酸或其衍生物，优选烷基，更优选甲基、酯或含有所说氨基酸的肽或其衍生物，在该氨基酸残基中游离氨基可被季铵化为三甲基铵基。式I的该衍生物的实例在此命名化合物13。

本发明的化合物，在此有时还指术语“色素”和“致敏物质”，显示足够高的极性，可水溶解并且能注入水溶液中而不必加表面活性剂。这些化合物在H₂O/PBS溶液中形成少量聚集物，但在血清白蛋白的存在下通过吸附在蛋白质上而被单体化(Mazor et al，2003)。因此，进出不同细胞化合物的运输是血清白蛋白依赖型的。

在一个实施方案中，对优选化合物5的生物分布和药物动力学在此显示并基于前述，条件是该化合物和本发明的其它衍生物保留在循环中，并且时间非常短。此外，如此处图3C所示，化合物5在用上皮细胞培养孵育低于5分钟后达到非常高的PDT效应。因此，本发明的衍生物对于血管靶向PDT是优良的致敏物质。小鼠C6神经胶质瘤移植物的治疗在此如图6和图7所示，显示5具有光动力活性，并在比Pd-Bpheid(在WO00/33833中公开)或负电荷Pd3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-磺乙基)酰胺盐(在WO2004/045492中公开)低10倍的浓度下引起肿瘤根除。显示试验化合物5应考虑为短清除时间的药物(图4)。基于它们的对肿瘤脉管系统的高度的光毒性和选择性的作用，这些化合物可用于治疗肿瘤和其它依赖新血管形成的组织异常，并且还抑制革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌。

因此，另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包括本发明的BChl衍生物或其可药用盐以及可药用载体。

在一个优选的实施方案中，药物组合物包括此处的式I、II或III的Bchl衍生物，更优选产生季铵基团的式II衍生物，最优选化合物5。

本发明新的Bchl化合物具有如公布在PCT/IL03/00973(WO2004/045492)中负电荷Pd-Bchl相似的光吸收和光物理性质，并与Pd-Bpheid(WO00/33833)的非常相似以及，因此，一旦滞留在治疗组织，它们是预期的有效的光动力剂。因此它们能够在许多适应症中作为光敏物质以及治疗和诊断剂。

在一个实施方案中，本发明的化合物可用于肿瘤学领域以治疗癌前状态的PDT以及多种癌症例如，但不限于，黑色素瘤、前列腺、脑、结肠、卵巢、乳房、起于乳房癌的胸壁肿瘤、皮肤、肺、食道和膀胱癌以及其它激素敏感性肿瘤。该化合物可用于治疗原发性及转移性肿瘤。

在另一实施方案中，本发明的化合物可用于非肿瘤领域。除了通过PDT有效破坏不必要的细胞，如赘生物和肿瘤，本发明的化合物还可用于抑制增殖细胞和细菌。增殖细胞和血管是动脉硬化、关节炎、牛皮癣和黄斑变性的主要起因。此外，化合物可用于治疗良性肿瘤例如良性前列腺肥大。

在一个优选的实施方案中，本发明的化合物在PDT中用于治疗心血管疾病，主要用于冠状动脉疾病中的血管闭合和血栓症、内膜增生、再狭窄和动脉粥样硬化斑块。在更优选的实施方案中，本发明的化合物可在遭受心血管疾病的个体经历冠状动脉造影术的后用于预防和减轻支架内再狭窄。在另一优选的实施方案中，本发明的化合物可用于通过破坏患病血管中的动脉粥样化斑块以治疗动脉粥样硬化的方法。

在另一优选的实施方案中，本发明的化合物可在PDT中用于治疗皮肤疾病、紊乱和症状例如痤疮、痤疮瘢痕化、牛皮癣、脚癣、肉赘、光化性角化病和葡萄酒色斑(连接静脉到动脉(毛细管)的位于皮肤较上层的小血管畸形)。

在另一优选的实施方案中，本发明的化合物可在PDT中用于治疗眼科疾病、紊乱和症状例如角膜和脉络膜新生血管以及，更优选年龄相关性黄斑退行性改变(AMD)。

在进一步优选的实施方案中，本发明的化合物可在PDT用于杀灭微生物，包括样品和活体组织中的病毒、真菌、和细菌。例如，它们可用于生物制品的灭菌，例如用于输血的血和血浆，接着通过辐射破坏病原体。如此处所示的，化合物5对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌均具有抑制活性(图8)。

根据本发明的新型水溶性Bchl衍生物对内皮和/或赘生细胞或其它异常组织敏感，并通过使用适宜波长的光辐射导致它们破坏。可以相信光活化能量传递到内源性氧并将其转化为单线态氧和/或其它活性氧簇(ROS)例如过氧化物和羟基，这被认为是细胞毒效应的结果。此外，某些新型的BChl的光敏化形态可发荧光，该荧光能够帮助集中于肿瘤或其它施用BChl的部位。

由于它们在循环中相对较短的滞留时间，本发明的化合物特别适宜血管靶向PDT(VTP)，如前面由本发明人或其它人(WO 03/094695；Borle et al.2003)描述的Pd-Bpheid(Tookad

，Steba Biotech的商标)以及由本发明人描述的细菌叶绿素-丝氨酸(Zilberstein et al.，2001)。在VTP中，细菌叶绿素衍生物的抗肿瘤活性不依赖于个体上皮细胞的直接光中毒，而是依赖于血管组织对VTP损伤的响应。这样，使用Tookad，发明人已揭示，在静脉注射后立即通过纤维-光学-引导的透皮照射，Tookad的光敏作用导致肿瘤血管氧化性损伤及氧衰竭，造成血供应终止并且肿瘤根除。

这方面，本发明面临的也是使用本发明的化合物与过热和PDT结合用于治疗如前述的肿瘤(Kelleher et al.，2003)。

本发明的化合物的正电荷显著地增强了新型Bchl向肿瘤内皮的吸收，如本领域已知的其它用于肿瘤治疗或成像的正电荷药物(Dellian etal.2000；Hashizume et al.2000；Campbell et al.2002)。增强的亲和力戏剧性地减小了在孵育的极短时间内诱导内皮细胞死亡所需要的浓度，如所需要的血管靶向PDT。这样，这些化合物使活性氧簇(ROS)能够产生兴奋，这限于内部血管并且，从而，造成选择性的对例如存在于肿瘤和年龄相关性黄斑退行性改变的异常血管应答。

本发明的Bchl衍生物对血清白蛋白具有高度亲和力。化合物分子的有效部分是在血浆中与血清白蛋白非共价结合。这样，在纯化后和注射前，它们在水溶液中获得与血清白蛋白以1∶1的比率相互作用。

对于药物组合物的制备，本发明的Bchl可以是冻干的，例如，与甘露醇，并且干粉溶于盐水或任意其它可药用用于患者的静脉注射用水溶液(在血液中，化合物吸附于血清白蛋白)，或者用于离体目标的样品。组合物的制备是通过本领域公知的技术进行的，例如在Remington概述的：The Science and Practice of Pharmacy，Mack Publishing Co.，Easton，Pa，1990。

对于诊断目的，Bchl衍生物可以单独使用或用放射性同位素标记或其它检测方式例如顺磁金属，如本领域已知的。在一个实施方案中，Bchl衍生物是通过标准程序放射性标记的，例如，使用⁶⁷Ga、¹¹¹In、 ²⁰¹T1、⁹⁹mTc，并给予患者，优选通过静脉注射。癌症部位可以在给药后的一定时间间隔内通过标准程序显影。

用于PDT治疗的Bchl衍生物量将通过熟练的医生根据用于PDT的其它Bchl衍生物所积累的经验确定，并将根据所选择的用作活性成分的衍生物、治疗状态、给药方法、年龄和患者症状和医生的判断而改变。

照射光的波长优选与Bchl光敏物质的最大吸收相匹配。任一化合物的适宜波长可以通过其吸收光谱容易地确定。在一个优选的实施方案中，使用强光源，更优选720-790nm激光。

本发明还面临的是蛋白例如血清白蛋白、血清白蛋白重组体包括人血清白蛋白和人血清白蛋白嵌合体结构(如Tuan et al.2002所述)、激素类、生长因子或其衍生物、抗体、与靶细胞受体特别是上皮细胞受体特异性结合的肽和营养素例如酪氨酸，与Bchl部分的结合物，以增加其在肿瘤和治疗部位的滞留时间为目的。在近红外具有最大光吸收的Bchl衍生物得到更大的渗透深度，同时保持普遍存在的自然系统。

Mg离子被其它金属离子取代有希望优化Bchl部分的固有的和代谢的稳定性并且其系间窜越到受激的三线态，这样也扩展到新的诊断操作的可能性。，

正电荷表面基团和/或表-内皮特异性抗体和/或对表-内皮细胞具有高亲和力的肽的组合物将优先地使Bchl部分靶向肿瘤或治疗部位。结果，在恶性组织的血管腔隙内光敏物质的浓度相对于正常组织中的浓度是所期望的戏剧性地增加，在此细胞更弥散，因而保证在肿瘤部位的PDT效应放大。这使光于低于正常组织的损伤极限的剂量有效使用，从而减少对明确定义的照射的使用空间。

在本发明的最优选的实施例中，用本发明致敏物质治疗目标为异常血管，特别是实体瘤、年龄相关性黄斑退行性改变、再狭窄、急性炎症或动脉粥样硬化的血管(Dougherty and Levy，2003)，归功于在此所提出的PDT方案对正常和异常血管的敏感度的内在差异。

本发明的Bchl衍生物可进一步作为辅助剂用于光动力学治疗，使另一个目前用于疾病、紊乱或症状的治疗更有效。例如，它们可与手术结合用于手术期间，以帮助预防在大表面积上癌症的复发，例如胸膜(肺部的内层)和腹膜(腹部的内层)、对某些种类癌症扩散的普通部位，手术期间复发性头和颈癌的治疗，或随后的股动脉血管成形术以预防再狭窄。化合物还可用于手术期间PDT肿瘤诊断，例如，脑肿瘤。

根据本发明的另一可能是，将本发明的化合物用于通过组织间治疗的大实体瘤的PDT，该技术包括通过计算机断层摄影术(CT)，使用导针直接向肿瘤输送光导纤维。这在需要扩大手术例如在头和颈肿瘤的领域可能特别有用。

化合物的给药量以及给药途径将根据疾病种类、疾病阶段、患者的年龄和健康状况确定，但将更低于目前使用的Photofrin II

(约5-40 mg HpD/kg体重)和Tookad (约2-10mg/kg体重)的剂量。

本发明的药物组合物通过在PDT中使用的标准程序给予患者，例如，全身地，特别是通过注射，更优选通过静脉注射，通过直接注射到实体瘤局部给药，或局部用于治疗皮肤疾病和症状。

本发明现将通过以下非限制性的实施例说明。

实施例

为了方便及易于理解，实施例部分分为两个小部分：(I)化学部分，描述阳离子和碱性Bchl衍生物以及中间体4-75的合成，和(II)生物学部分，描述新Bchl衍生物的生物活性。

I化学部分

在此处的实施例中，本发明的衍生物(4-75)和中间体(1-3)将根据以下化合物列表和附件，分别由各自的阿拉伯数字以黑体和下划线表示。一些化合物的化学式出现在图解1和2，以及说明书末尾、参考文献之前的附件中。

化合物目录

1.细菌叶绿素a(Bchl a)

2.细菌脱镁叶绿甲酯一酸a(Bpheid)

3.Pd-细菌脱镁叶绿甲酯一酸a(Pd-Bpheid)

4.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺[实施例1]

5.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二枸橼酸盐[实施例2]

6.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(3-氨基-丙基)酰胺[实施例3]

7.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(3-N³-三甲基铵丙基)酰胺二枸橼酸盐[实施例4]

8.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(6-氨基己基)酰胺[实施例5]

9.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(6-N³-三甲基铵己基)酰胺二枸橼酸盐[实施例6]

10.钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺[实施例7]

11.钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二磷酸盐[实施例8]

12.钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺盐酸盐[实施例9]

13.O-[Pd-Bpheid]-[N³-三甲基铵-2-甲基]-丝氨酸甲基酯碘化盐[实施例11]

14.钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-胍基乙基)酰胺[实施例12]

14a.钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基胍鎓乙基)酰胺[实施例12]

15.Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-S²-二甲基锍乙基)酰胺枸橼酸盐[实施例13]

16.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-羟基乙基)酰胺[实施例14]

17.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-P³-三甲基磷鎓乙基)酰胺二枸橼酸盐[实施例15]

18.31-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-二甲基膦基乙基)酰胺[实施例16]

19.3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-As³-三甲基砷鎓乙基)酰胺二枸橼酸盐[实施例17]

20.3¹-(氨基乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺

21.钯3¹-(氨基乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺

22.3¹-(三甲基铵乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基铵乙基)酰胺

23.钯3¹-(三甲基铵乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基铵乙基)酰胺

材料和方法

(i)Bpheid，2，如以前所述制备(Wasielewski and Svec，1980)。

(ii)钯细菌脱镁叶绿甲酯一酸(Pd-Bpheid，3)如以前所述制备(WO 00/33833)或可通过Negma-Lerads，法国，从Steba Biotech Ltd获得。

(iii)Diamines(乙二胺、1，3-丙亚胺、1，6-己烯-二氨)和三甲基膦(1M溶液)购自Aldrich(USA)；N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)购自Sigma(USA)；1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)和1-脒基吡唑盐酸购自Fluka(Switzerland)；三甲基胂购自Sterm。(2-氨基乙基)二甲基膦根据Suzuki et al(1994)和Kinoshita et al(1981)制备。S，S-二甲基半胱胺二乙酸盐根据US3,793,370制备。

(iv)分析级的化学试剂和溶剂除进行HPLC使用HPLC级外均为常用的。

(v)TLC：硅胶板(Kieselgel-60，Merck，德国)，氯仿-甲醇(4∶1，v/v)。

(vi)¹H核磁共振(NMR)光谱在Avance DPX 250仪器(Bruker，法国)上记录，并以ppm(δ)报告从四甲基甲硅烷的低磁场，残留溶剂峰作为内标。

(vii)Pd-衍生物的吸光系数通过Pd浓度与测试溶液在特定波长处光密度的相关性测定(以为PdCl₂为标准使用火焰光度测定法)。

(viii)电喷射离子化质谱(ESI-MS)在平台LCZ分光计(Micromass，英国)上记录。

(ix)电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)通过使用ELAN-6000仪(Perkin Elmer，CT)测定Pd浓度完成。

(x)不同合成物的光吸收(UV-VIS)光谱用Genesis-2(Milton Roy，英国)和V-570(JASCO，日本)分光光度计记录。

(xi)HPLC使用配备UV-915二极管阵列检测器的LC-900仪(JASCO，日本)完成。

化学实施例

实施例1、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物4)

如图解I所述，对于化合物4(无中心原子的玫瑰红菌绿素衍生物)的合成，Bpheid 2首先通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)在C-17³羧酸处按如下活化：将50mg Bpheid(化合物2)、80mg NHS和65mg 1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)于室温下在甲基氯化物中混合过夜。然后减压蒸发溶剂，干燥的残留物溶于氯仿(约50ml)，滤除不溶物，并且，蒸发溶剂后，获得产物Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)。转化率约95％(TLC)。

将8mg Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)溶于氯仿和甲醇的混合物(2∶1，v∶v)中，为了使Bpheid的同素环能够打开，并加入乙二胺(1ml)。将反应混合物用氩气处理10min，并在室温下暗处搅拌过夜，使乙二胺在13¹和17³位结合。然后将反应混合物在真空下蒸发干燥，用氯仿(50ml)复溶，并用水(约50ml)洗一次以除去痕量的乙二胺。收集含有产物的氯仿溶液并蒸发，从而获得化合物4。

ESI-MS(+)：713.89(M+1)，357.56([M+2]/2)。

氯仿中的光吸收度，λ(相对吸收)：753(1.00)，522(0.28)，354(1.05)nm。

实施例2、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红-菌绿素13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物5)

如图解I所述，化合物5由化合物4制备。将二异丙基乙胺(DIEA)(27μl)和甲基碘化物(30μl，CH₃I)加至含4(3mg)的2ml氯仿溶液。将反应混合物用氩气处理10min，并在室温下暗处搅拌过夜。产物用水(约50ml)萃取2次。收集水层、干燥，产物以HPLC(HPLCJASCO，日本)纯化。色谱柱：C-8250×20(YMC，日本)。溶剂A：0.05M枸橼酸缓冲液，pH4.0。溶剂B：乙腈。标题化合物5二枸橼酸盐的洗脱图形如表1所述。化合物5在甲醇中的荧光发射光谱见图1。

表1.化合物5纯化的梯度图形

时间(min)	流速(ml/min)	A％	B％
				0	5	100	0
15	5	0	100
				17	5	0	100
22	5	100	0
				30	0.2	100	0

ESI-MS(+)：990.12(M-枸橼酸盐)。

甲醇-d₄中的NMR：9.33(5-H，s)，8.92(10-H，s)，8.75(20-H，s)，5.35和4.95(151-CH₂，br)，4.0-4.4(7，8，17，18-H，m)，3.80(15³-Me，br s)，3.52(2¹-Me，s)，3.19(12¹-Me，s)，3.09(3²-Me，s)，1.92-2.41，1.60-1.75(17¹，17²-CH₂，m)，2.19(8¹-CH₂，m)，1.91(7¹-Me，d)，1.61(18¹-Me，d)，1.09(8²-Me，t)，3.62，3.05(NHCH₂CH₂NMe₃的CH₂′s)，3.39和3.02(NHCH₂CH₂NMe₃的Me′s)。

水中的光吸收度，λ(相对吸收)：753(1.00)，519(0.30)，354(1.25)nm。辛醇/水分配比率为40/60。

实施例3、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(3-氨基丙基)酰胺(化合物6)

化合物6如上述实施例1通过Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)与1，3-丙亚胺反应获得。

ESI-MS(+)：813.86(M+NH₂CH₂CH₂CH₂NH₂)，739.74(M)。

氯仿中的光吸收度，λ(相对吸收)：753(1.00)，522(0.29)，354(1.22)nm.

实施例4、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17²-二(3-N³-三甲基铵丙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物7)

化合物7如上述实施例2由化合物6通过与DIEA和CH₃I反应获得。

ESI-MS(+)：413.62([M-2×枸橼酸盐]/2).辛醇/水分配比率为50/50。

水中的光吸收度，λ(相对吸收)：753(1.00)，519(0.29)，354(1.21)nm。

实施例5、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(6-氨基己基)酰胺(化合物8)

化合物8是如上述实施例1通过Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)与1，6-己烯二氨反应获得。化合物8的性质：

ESI-MS(+)：826.20(M+2)，413.62([M+2]/2)

实施例6、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(6-N³- 三甲基铵己基)酰胺二枸橼酸盐(化合物9)

化合物9是如上述实施例2由化合物8通过与DIEA和CH₃I反应获得。

ESI-MS(+)：455.89([M-2×枸橼酸盐]/2)。辛醇/水分配比率为75/25。

水中的光吸收度，λ(相对吸收)：753(1.00)，519(0.30)，354(1.31)nm.

实施例7、Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物10)

化合物10是如上述实施例1通过Pd-Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)与乙二胺反应获得。

ESI-MS(+)：817.59(M+1)，409.26([M+2]/2)

甲醇中的光吸收度(相对吸收)：747(1.00)，516(0.13)，384(0.41)，330(0.50)nm。

实施例8、Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二磷酸盐(化合物11)

化合物11是如上述实施例2由化合物10通过与DIEA和CH₃I反应获得，但在HPLC纯化步骤中使用磷酸盐缓冲液(0.05M，pH5.0)作为溶剂A。

ESI-MS(+)：451.38([M-2×磷酸盐]/2)。

水中的光吸收度，λ(相对吸收)：747(1.00)，516(0.13)，384(0.41)，330(0.50)nm。

实施例9、Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺氯化物盐(化合物12)

如图解I所述，在三乙胺(0.5ml)存在下，氩气氛下将化合物3 Pd-Bpheid(10mg)与2-N³-三甲基铵-乙基胺基氯化物盐酸盐(15mg)在DMF(2ml)中室温搅拌过夜，从而打开Bpheid分子的同素环。然后将反应蒸发至干燥，产物用乙腈萃取。将溶剂蒸发后，化合物12在与实施例2中纯化5相似的条件下通过HPLC纯化。

ESI-MS(+)：839(M-Cl+Na-H)，817.82(M-Cl)m/z。

水中的光吸收度，λ(相对吸收)：747(1.00)，516(0.13)，384(0.41)， 330(0.50)nm。

实施例10、O-[Pd-Bpheid]-丝氨酸甲基酯

该化合物根据US6,333,319在所述方法制备，如下：将化合物3 Pd-Bpheid(50mg)、N-三苯甲基-L-丝氨酸甲基酯(200mg)、DCC(16mg，0.08mmol)和N-二甲基氨基吡啶(DMAP)(10mg)溶于20ml二氯甲烷中并在惰性气体(氩气)下室温搅拌过夜。得到的酯通过硅胶柱色谱以为洗脱液纯化。通过向氯仿溶液中加入三氟乙酸(至1％vol的终浓度)将三苯甲基-保护基团除去，用水洗反应混合物，用无水硫酸钠干燥并蒸发干燥。脱保护产物在硅胶柱上如下纯化：首先，通过用5％丙酮氯仿溶液洗脱除去大部分副产物，然后产物O-[Pd-Bpheid]-丝氨酸甲酯用2％甲醇氯仿溶液洗脱。

CDCl₃中的¹H-NMR：9.21(s，1H，H-α)，8.54(s，1H，H-β)，8.48(s，1H，H-δ)，5.93(s，1H，H-10)，4.37(m，2H，H-3，8)，4.22(m，1H，Ser-CH)，4.10(m，2H，H-4，7)，3.88(s，3H，CH₃-10b)，3.67(s，3H，Ser-OCH₃)，3.63(m，2H，Ser-CH₂)，3.48(s，3H，CH3-la)，3.39(s，3H，CH₃-5a)，3.09(s，3H，CH₃-2b)，2.48(m，1H，Ser-OH)，2.15-2.30(m，4H，CH₂-7a，7b)，2.11(m，2H，CH₂-4a)，1.78(d，3H，CH₃-3a)，1.68(d，3H，CH₃-8a)，1.08(t，3H，CH₃-4b)。

实施例11、O-[Pd-Bpheid]-[N³-三甲基铵-2-甲基]-丝氨酸甲酯碘化盐(化合物13)

将上述实施例10中获得的O-[Pd-Bpheid]-丝氨酸甲酯(4mg)溶于氯仿(3ml)中，并与甲基碘化物(35μl)和DIEA(30μl)于室温下搅拌过夜。通过蒸发混合物并在硅胶柱上以氯仿-甲醇(3∶1，v∶v)为洗脱液纯化以获得产物13。

ESI-MS(+)：872.75(M-I)m/z。

实施例12、Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二2-胍基乙基)酰胺(化合物14)

如图解I所述，将Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺化合物10(8mg)与DIEA(30l)和1-脒基吡唑(6mg)在氯仿-甲醇(1∶1，15ml)中混合。室温下搅拌20h，将反应混合物蒸发，标题化合物14在与实施例1中纯化4相似的条件下通过HPLC纯化。

ESI-MS(+)：451.69([M-2×枸橼酸盐]/2).

通过化合物14与甲基碘化物反应，获得正电荷钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基胍鎓乙基)酰胺(14a)。

实施例13、Pd 3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-S²-二甲基锍乙基)酰胺枸橼酸盐(化合物15)

在三乙胺(0.5ml)存在下及氩气下，将Pd-Bpheid，3(12mg)与S，S-二甲基半胱胺二乙酸盐(20mg)在DMF(2ml)中搅拌。将反应混合物蒸发至干燥，标题化合物15如实施例2化合物5所述条件下通过HPLC纯化。

ESI-MS(+)：844.78(M-枸橼酸盐+Na-H)，820.62(M-枸橼酸盐)m/z。

实施例14、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-羟基乙基)酰胺(化合物16)

在氯仿-甲醇混合物(6ml)中，将如实施例1获得的Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)(10mg)与乙醇胺(1ml)反应。反应混合物用氩气处理10min，并在室温下于暗处搅拌过夜。在硅胶柱上以氯仿-甲醇(10∶1，vol/vol)洗脱纯化以获得化合物16。

ESI-MS(+)：737.88(M+Na)，715.42(M+H)m/z。

实施例15、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-P³-三甲基磷鎓乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物17)

将化合物16(8mg)溶于三氟醋酐(1ml)中，混合物蒸发至干燥后30min。将干燥产物溶于三甲基膦的四氢呋喃溶液(0.5mM，2ml)，再将混合物在氩气下于室温搅拌24h。蒸发反应混合物以除去过量的三甲基膦，标题化合物17如实施例2化合物5所述条件下通过HPLC纯化获得。

ESI-MS(+)：438.54([M-2×枸橼酸盐]/2+Na-H)，416.46([M-2×枸橼酸盐]/2)m/z。

实施例16、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-二甲基膦基乙基)酰胺(化合物18)

将如实施例1获得的Bpheid-17³-(1-氧-琥珀酰亚胺)(10mg)与(2-氨基乙基)二甲基膦(200mg)在氯仿(5ml)中于室温下反应过夜。在硅胶柱上并以氯仿-丙酮(15∶1，vo1/vol)洗脱纯化以获得化合物18。

ESI-MS(+)：825.34(M+Na)，803.88(M+H)m/z。

在DIEA存在下将化合物18与甲基碘化物处理，形成具有四价的磷鎓基团，在HPLC纯化后，其与上述实施例15获得的化合物17同样获得。

实施例17、3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-As³-三甲基砷鎓乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物19)

将化合物16(8mg)溶于三氟醋酐(1ml)中，混合物蒸发至干燥后30min。将干燥产物溶于三甲基胂的四氢呋喃溶液(0.5mM，2ml；纯净试剂制备，Cat.No 33-3750，Strem)，再将混合物在氩气下于45℃搅拌3天。然后蒸发反应混合物以除去过量的三甲基胂，如实施例2中5纯化所述条件下，标题化合物19通过HPLC纯化。

ESI-MS(+)：1133.94([M-枸橼酸盐]+Na-H)，460.40([M-2×枸橼酸盐]/2)m/z。

实施例18、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺乙酸(盐)(化合物24)

该化合物的盐酸盐如实施例9所述(化合物12)。

对于制备标题化合物，在氩气下，在1ml三乙胺与DMF 1∶1的真空除气混合物中将20mg Pd-Bpheid3(28μmol)、24mg(2-氨基乙基)三甲基铵氯化盐酸(137μmol)和抗坏血酸钠(1mol)于室温下搅拌。最后于室温下真空中蒸发反应混合物，加入1ml水并将产物装入Sep-PakRP-18柱(Waters)，先用20ml水洗，然后用10ml10％乙腈水溶液，再用50％乙腈水溶液洗，随后蒸发。所有操作均在充氮气的手套箱中进行以避免氧化。

结构式：C₄₀H₅₄N₆O₆Pd+1CH₃COO^-

分子量：821.3+59.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.05min。

M.S(+)：m/z＝821

UV-Vis光谱：756nm，532nm，386nm，328nm

实施例19、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物25)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(8.66mmol)N，N-二甲基乙二胺(95％)在氩气下室温搅拌2小时。反应结束后，将混合物用3ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₃₉H₅₀N₆o₆Pd+1CH₃COOH

分子量：803.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.46min。

M.S(+)：m/z＝803

UV-Vis光谱(MeOH)：748nm，521-nm，384nm，332nm

实施例20、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-N²-二甲基氨基丙基)酰胺(化合物26)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(7.88mmol)3-二甲基氨基-1-丙基胺(99％)在氩气下室温搅拌2小时。反应结束后，将混合物用5ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₀H₅₂N₆o₆Pd+1CH₃COOH

分子量：817.30+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.26min。

M.S(+)：m/z＝817

UV-Vis光谱(MeOH)：749nm，516nm，380nm，334nm

实施例21、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物27)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(18.35mmol)二亚乙基三胺(99％)在氩气下室温搅拌3小时。将混合物用5ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₃₉H₅₁N₇O₆Pd+2CH₃COOH

分子量：818.3+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.91min。

M.S(+)：m/z＝818。

UV-Vis光谱(MeOH)：752nm，519nm，380nm，334nm.。

实施例22、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-([2-双(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物28)

将20mg(28μmol)Pd-Bpheid，3与1ml(6.7mmol)的三-(2-氨基乙基)胺在1ml N-甲基-2-吡咯烷酮中，在氩气下室温搅拌90分钟。产物通过注入包括C-18柱的HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₁H₅₆N₈O₆Pd+3CH₃COOH

分子量：861.4+180.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

M.S(+)：m/z＝861。

UV-Vis光谱(MeOH)：750nm，516nm，354nm。

实施例23、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物29)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(7.5mmol)N-(2氨基乙基)吗啉(98％)在氩气下室温搅拌4小时。反应结束后，将混合物用3ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₁H₅₂N₆O₇Pd+1CH₃COOH

分子量：845.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.68min。

M.S(+)：m/z＝845。

UV-Vis光谱(MeOH)：749nm，516nm，383nm，331nm

实施例24、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物30)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和0.5ml(3.7mmol)1-(2-氨基乙基)哌嗪(97％)在氩气下室温搅拌19小时。反应结束后，将混合物用1ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：30％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₁H₅₃N₇O₆Pd+2CH₃COOH

分子量：844.3+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.37min。

M.S(+)：m/z＝844

UV-Vis光谱(MeOH)：747nm，516nm，380nm，330nm

实施例25、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物31)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(2.66mmol)N，N-二乙基二亚乙基三胺(98％)在氩气下室温搅拌4小时。反应结束后，将混合物用 1ml水稀释，并用冰乙酸中和。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：30％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₅₉N₇O₆Pd+2CH₃COOH

分子量：874.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.77min。

M.S(+)：m/z＝874

UV-Vis光谱(MeOH)：742nm，513nm，380nm，330nm

实施例26、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基)酰胺(化合物32)

将Pd-Bpheid 3(30mg，420μmol)和双(3-氨基丙基)胺(3ml，20.61mmol)在氩气下室温搅拌2小时。反应完成后(TLC)，将混合物用水(100ml)稀释，并将溶液在分液漏斗中用正丁醇(两次，分别用100和50ml)萃取。丁醇提取物用50ml水洗三次。通过加入10-ml份的25％氯化钠水溶液以改善相分离。丁醇提取物用MgSO₄干燥，并减压蒸发。将固体在10％乙酸水溶液(10ml)中复溶，通过加入10倍体积的丙酮使产物沉淀。沉淀在0.5％乙酸水溶液(13ml)中复溶，冻干。

结构式：C₄₁H₅₃N₇O₆Pd+2CH₃COOH

分子量：846.5+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.63min。

M.S(+)：m/z＝846

UV-Vis光谱(MeOH)：752nm，519nm，380nm，334nm。

实施例27、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二乙酸盐(化合物33)

该化合物的二磷酸盐如实施例8(化合物11)所述。

为制备标题化合物，将101mg Pd-Bpheid，3(141μmol)和10ml乙二胺(148mmol)在氩气下室温搅拌2小时。然后将659mg偶合试剂溴-三-吡咯烷代-磷鎓六氟磷酸(PyBroP)(1.4mmol)溶于2.3ml氯仿中的溶液导入反应中。混合物再在氩气下室温搅拌2小时。然后将反应冷却，并通过加入5ml水将过量的偶合剂破坏。混合物用250ml氯仿稀释，并用200ml水洗。有机相用MgSO₄干燥，过滤、蒸发。得到约245mg化合物10。

将化合物10(245mg)溶于90ml氯仿中。在导入二异丙基乙基胺(DIEA)(2.6ml，14.88mmol)之前通过氩气将反应混合物脱气5min。搅拌5min后，将CH₃I(2ml，31.8mmol)导入反应中。缓慢的氩气流再通过达2min。反应在室温下暗处搅拌过夜。

此后中速的氩气流再通过反应溶液，以除去未反应的CH₃I。蒸发溶剂，剩余产物溶于350ml水，并用乙酸乙酯洗(4×100ml)。通过蒸发水份至终体积150ml以浓缩水溶液。

产物通过50-ml份水溶液在SepPack柱上纯化，开始以120ml水和200ml1％乙酸水溶液预洗脱，通过含有2％乙酸的5ml乙腈洗脱。合并各次分离的乙腈溶液，蒸发溶剂。纯化产物重新溶解在3ml水中，并冷冻干燥。

式：C₄₅H₆₆N₈O₅Pd+2CH₃COO^-

分子量：904.4+118.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：11.35min。

M.S(+)：m/z＝904

UV-Vis光谱(MeOH)：747nm，514nm，382nm，330nm

实施例28、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-氨基丙基)酰胺(化合物34)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(23.7mmol)新蒸馏的1，3-二氨基丙烷在氩气下室温搅拌75min。随后将138.8mg PyBroP(297μmol)溶于200μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌30min。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。

混合物用50ml氯仿稀释，并用2×100ml水洗。有机相用MgSO₄ 干燥，过滤、蒸发。终产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₁H₅₄N₈O₅Pd+2CH₃COOH

分子量：845.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：10.81min。

M.S(+)：m/Z＝845

UV-Vis光谱(MeOH)：745nm，514nm，380nm，330nm

实施例29、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(4-氨基丁基)酰胺(化合物35)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(19。7mmol)1，4-二氨基丁烷在氩气下30℃搅拌1小时。随后将133.4mg PyBroP(286μmol)溶于200μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下30℃搅拌60min。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。将过量的胺蒸发，产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₅₈N₈O₅Pd+₂CH₃COOH

分子量：873.2+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：5.11min。

M.S(+)：m/z＝873

UV-Vis光谱(MeOH)：748nm，516nm，384nm，332nm

实施例30、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物10)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(29.6mmol)乙二胺在氩气下室温搅拌40min。随后将136.8mg PyBroP(293μmol)溶于200μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌2小时。然后冷却反应，并通过加入2ml水将过量的偶合剂破坏。反应混合物用50ml氯仿稀释，并用100ml水洗两次。将溶剂蒸发，终产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₃₉H₅₀N₈O₅Pd+2CH₃COOH

分子量：817.3+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别。

保留时间：10.13min。

M.S(+)：m/z＝817

UV-Vis光谱(MeOH)：750nm，516nm，384nm，332nm

实施例31、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物36)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1.5ml(13mmol)N，N-二甲基乙二胺在氩气下室温搅拌1小时。随后将131mg PyBroP(281μmol)溶于170μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌2小时。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。反应混合物用50ml乙酸乙酯稀释，并用100ml水洗两次。将溶剂蒸发，终产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₅₈N₈O₅Pd+2CH₃COOH

分子量：873.2+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：6.56min。

M.S(+)：m/z＝873

UV-Vis光谱(MeOH)：748nm，516nm，384nm，332nm

实施例32、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-N³-二甲基氨基丙基)酰胺(化合物37)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1.5ml(11.8mmol)3-二甲基氨基-l-丙基胺在氩气下室温搅拌1小时。随后将130.6mg PyBroP(280μmol)溶于170μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌2小时。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。反应混合物用50ml乙酸乙酯稀释，并用100ml水洗两次。水层用100ml乙酸乙酯洗。将份有机层混合并蒸发。终产物通过预备HPLC纯化， C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₅H₆₂N₈O₅Pd+2CH₃COOH

分子量：901.2+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.9min

M.S(+)：m/z＝901

UV-Vis光谱(MeOH)：746nm，516nm，384nm，332nm

实施例33、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物38)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(18.3mmol)二亚乙基三胺在氩气下室温搅拌90分钟。随后将130mg PyBroP(279μmol)溶于170μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌90min。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。将反应混合物冰乙酸中和并用水稀释。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₆₀N₁₀O₅Pd+4CH₃COOH

分子量：904.1+240.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认

保留时间：1.95min(聚集(aggregate))

M.S(+)：m/z＝904

UV-Vis光谱(MeOH)：745nm，514nm，382nm，330nm

实施例34、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物39)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(5.33mmol)N，N-二乙基二亚乙基三胺在氩气下室温搅拌4小时。随后将130mg PyBroP(279μmol)溶于500μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌2.5小时。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。将反应混合物冰乙酸中和并用水稀释。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₅₁H₇₆N₁₀O₅Pd+4CH₃COOH

分子量：1015.5+240.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认.

保留时间：5.3-6.6min

M.S(+)：m/z＝1015

UV-Vis光谱(MeOH)：743nm，512nm，380nm，329nm

实施例35、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物40)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和2ml(15.2mmol)N-(2-氨基乙基)吗啉在氩气下室温搅拌2小时。随后将136mg PyBroP(291μmol)溶于700μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌2小时。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。将反应混合物冰乙酸中和并用水稀释。将混合物溶于水中并用氯仿洗3×100ml。蒸发有机溶剂，产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₂N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：958.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：11.6min.

M.S(+)：m/z＝958

UV-Vis光谱(MeOH)：745nm，513nm，381nm，330nm。

实施例36、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物41)

将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和1ml(7.4mmol)N-(2-氨基乙基)哌嗪(97％)在氩气下室温搅拌22小时。随后将130mg PyBroP(279μmol)溶于500μl氯仿的溶液导入反应器中。混合物再在氩气下室温搅拌3.5小时。然后冷却反应，并通过加入1ml水将过量的偶合剂破坏。将反应混合物冰乙酸中和并用水稀释。产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：40％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₄N₁₀O₅Pd+4CH₃COOH

分子量：955.5+240.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：11.4min.

M.S(+)：m/z＝955

UV-Vis光谱(MeOH)：744nm，513nm，380nm，329nm.

实施例37、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基)酰胺(化合物42)

活性酯制备——典型地，在氩气下将25mg Pd-Bpheid，3(35μmol)和39.4mg N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu或NHS)(342μmol)溶于1ml无水DMF中。将31mg 1，3-二环己基碳二亚胺(DCC)(150μmol)加至500μl无水DMF中。反应在室温下搅拌过夜。然后将DMF蒸发，产物通过SiO₂液相色谱以95％CHCl₃∶5％EtOH为洗脱液纯化。然后将溶剂蒸发，产生55mg活性酯。试验表明不必分离和纯化活性酯。

将20mg Pd-Bpheid-OSu(24.7μmol)和1ml新蒸馏的双(3-氨基丙基)胺在氩气下室温搅拌3小时。然后将反应物在室温下真空蒸发。蒸发后，向残渣中加入1ml水，产物通过预备HPLC纯化，C-18柱，流动相：A＝0.1％乙酸水溶液，pH＝7.2，B＝0.1％乙酸乙腈溶液液，pH＝7.2。梯度：20％B(0-6min)至90％B(20-22min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₈N₁₀O₅Pd+4CH₃COOH

分子量：959.4+240.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.83min.

M.S(+)：m/z＝959

UV-Vis光谱：750nm，516nm，386nm，330nm，268nm

实施例38、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二([2-双(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物43)

将上述实施例38中制备的20mg Pd-Bpheid-OSu(24.7μmol)和三(2-氨基乙基)胺在氩气下室温搅拌3小时。然后将反应物在室温下真空蒸发。随后向残渣中加入1ml水，产物通过预备HPLC纯化，C-18二氧化硅柱，流动相：A＝0.1％乙酸水溶液，pH＝7.2，B＝0.1％乙酸乙腈溶液液，pH＝7.2。梯度：20％B(0-6min)至90％B(20-22min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₇0N₁₂O₅Pd+6CH₃COOH

分子量：989.4+360.3

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：114.15min.

M.S(+)：m/z＝989

UV-Vis光谱：750nm，516nm，386nm，332nm

实施例39、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺(化合物44)

1)将500mg 2-氯吡啶(4.40mmol)溶于3.0ml乙二胺(44.0mmol)中，并将混合物在100℃下回流6小时。最后将过量的乙二胺在室温下真空蒸发。产物N-(2-吡啶基)乙二胺)在硅胶60(0.040-0.063mm)上纯化。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。

TLC分析在硅胶60 F₂₅₄板上，流动相：甲醇90％，氨溶液10％。产物Rf＝0.43。

2)将30mg Pd-Bpheid-Osu(0.037 mmol，实施例38中制备)加至含110mg N-(2-吡啶基)乙二胺(0.80mmol)的无水二甲基甲酰胺溶液中。溶液在氩气下室温搅拌5小时。产物通过预备HPLC纯化，使用C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₉H₅₆N₁₀O₅Pd+4CH₃COOH

分子量：971.5+240.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.96min

M.S(+)：m/z＝971

UV-Vis光谱：750nm，516nm，386nm，332nm

实施例40、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N²-二乙基氨基乙基)酰胺(化合物45)

1)将30mg Pd-Bpheid，3(42μmol)在300μl 2-(二乙基氨基)乙基胺(2.11mmol)中于氩气下室温搅拌3小时。氨基分解产物采用HPLC-MS分析。

保留时间：15.49min。M.S(+)：m/z＝831

2)将40mg PyBroP(0.086mmol)在200μl DMF中的溶液加入前面的反应混合物中。溶液在氩气下室温搅拌3小时。产物通过预备HPLC纯化，使用C-18柱，流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₆N₈O₅Pd+2CH₃COOH

分子量：931.5+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.81min

M.S(+)：m/z＝931

UV-Vis光谱：750nm，516nm，386nm，332nm

实施例41、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺乙酸盐(化合物46)

1)将Pd-Bpheid，3(100mg，0.140mmol)溶于1.0ml N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)和3-氨基-1，2-丙二醇(405mg，4.45mmol)中。溶液在氩气下室温搅拌3小时。所得产物在硅胶60(0.040-0.063mm)上纯化。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。

TLC分析在硅胶60F₂₅₄板上，流动相：甲醇80％，氨溶液20％。产物Rf＝0.86。

产物通过HPLC-MS分析。保留时间：18.42min。

M.S(+)：m/z＝805

2)将Pd-Bpheid-氨基丙二醇加合物(37mg，0.052mmol)溶于1.5mlNMP中。加入偶合试剂苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐-(HBTU)(200mg，0.52mmol)、三乙胺(110μl，0.78mmol)和氯化(2-氨基乙基)三甲基铵盐酸盐(46mg，0.26mmol)。溶液在氩气下室温搅拌2小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₆₁N₇O₇Pd+CH₃COO^-

分子量：892.4+59.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.34min

M.S(+)：m/z＝892

实施例42、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-氨基乙基)酰胺(化合物47)

1)Pd-Bpheid与3-氨基-1，2-丙二醇的氨基分解以及随后的纯化如实施例42针对化合物46所述进行。

2)将37mg Pd-Bpheid-氨基丙二醇加合物(0.052mmol)溶于300μlNMP中。加入22mg PyBroP(0.046mmol)、10μl乙二胺(0.155mmol)。溶液在氩气下室温搅拌1小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₀H₅₃N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：848.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.15min

M.S(+)：m/z＝848

实施例43、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物48)

1)将30mg Pd-Bpheid，3(42μmol)在1ml(15mmol)乙二胺中于氩气下室温搅拌30分钟。最后在室温真空下将过量乙二胺蒸发，然后将溶液在液氮中冷冻并低压冻干以除去痕量的乙二胺。

2)氨基分解产物与溶于100μl氯仿的80mg(0.17mmol)PyBroP和溶于2ml NMP的80mg(0.88mmol)3-氨基-1，2-丙二醇于氩气下室温搅拌16小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33 min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₀H₅₃N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：848.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：8.43min

M.S(+)：m/z＝848

实施例44、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物49)

2)将Pd-Bpheid-氨基丙二醇加合物(25mg，0.031mmol)溶于300μlNMP中。加入HBTU(120mg，0.32mmol)，N，N-二甲基-乙二胺(14mg，0.16mmol)和碳酸钾(88mg)。加入缓冲溶液至pH＝7。溶液在氩气下室温搅拌20小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：876.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.74min

M.S(+)：m/z＝876

实施例45、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物50)

1)Pd-Bpheid与N，N-二甲基乙二胺的氨基分解以及随后的纯化如实施例20针对化合物25所述进行。

2)氨基分解产物与溶于100μl氯仿的80mg(0.17mmol)PyBroP和溶于2ml NMP的80mg(0.88mmol)3-氨基-1，2-丙二醇于氩气下室温搅拌16小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：876.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.31min

M.S(+)：m/z＝876

实施例46、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物51)

2)将12mg Pd-Bpheid氨基丙二醇加合物(0.015mmol)溶于400μlDMF中。加入34mg HBTU(0.64mmol)、21μl of三乙胺(0.15mmol)和16μl二亚乙基三胺(0.15mmol)。溶液在氩气下室温搅拌5小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₈N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：891.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.42min

M.S(+)：m/z＝891

实施例47、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物 52)

2)将20mg Pd-Bpheid氨基丙二醇加合物(0.025mmol)溶于1.0mlNMP中。加入94mg HBTU(0.25mmol)、52μl三乙胺(0.375mmol)和23μlN，N-二乙基二亚乙基三胺(0.125mmol)。溶液在氩气下室温搅拌3小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。

流速：4ml/min。

结构式：C₄₆H₆₆N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：947.5+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：11.70min

M.S(+)：m/z＝947

实施例48、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物53)

2)将50mg Pd-Bpheid氨基丙二醇加合物(0.07mmol)溶于800μl无水DMF中。加入80mg HOSu(0.70mmol)和216mg DCC(1.04mmol)。溶液在氩气下室温搅拌90分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

3)将7.0mg Pd-Bpheid-氨基丙二醇-OSu-活性化合物(7.77×10³ mmol)溶于200μl无水DMF中。加入25μl无水N-甲基-吗啉(0.23mmol)和30μl N-(2-氨基乙基)吗啉。溶液在氩气下室温搅拌75分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₄H₅₉N₇O₈Pd+CH₃COOH

分子量：918.4+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.05min

M.S(+)：m/z＝918

实施例49、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物54)

2)将23mg Pd-Bpheid氨基丙二醇加合物(0.032mmol)溶于200μl无水DMF中。加入5.55mg HOSu(0.048mmol)和10.85mg DCC(0.048mmol)。溶液在氩气下室温搅拌22小时。

3)向2)反应器中，加入4μl1-(2-氨基乙基)哌嗪(0.03mmol)和12μl三乙胺(0.09mmol)。溶液在氩气下室温搅拌4小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₄H₆₀N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：917.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.03min

M.S(+)：m/z＝917。

实施例50、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物55)

1)Pd-Bpheid与二亚乙基三胺的氨基分解如实施例22针对化合物 27所述进行。产物在硅胶柱上以80％甲醇和20％铵的展开溶液纯化。

2)Pd-Bpheid氨基分解产物与溶于100μl氯仿的80mg(0.17mmol)PyBroP和溶于2ml NMP的80mg(0.88mmol)3-氨基-1，2-丙二醇于氩气下室温搅拌16小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₈N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：890+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：11.90min

M.S(+)：m/z＝890

实施例51、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺(化合物56)

2)将19mg Pd-Bpheid氨基丙二醇加合物(0.024mmol)溶于1.0ml无水NMP中。加入如实施例40制备的97mg N-(2-吡啶基)乙二胺(0.142mmol)、77mg偶合试剂O-(苯并三唑-l-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)(0.24mmol)和50μl三乙胺(0.36mmol)。溶液在氩气下室温搅拌90分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₅H₅₆N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：925.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.38min

M.S(+)：m/z＝925

实施例52、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物57)

1)如上述实施例40的N-(2-吡啶基)乙二胺(200mg)与40mg Pd-Bpheid在氩气下室温搅拌过夜。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

2)Pd-Bpheid-2-(二氨基乙基)-吡啶产物(35mg，0.042mmol)溶于200μl无水DMF中。溶液在氩气下室温搅拌5小时。

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。保留时间：18.91min。

M.S(+)：m/z＝949

3)将28mg Pd-Bpheid-2-(二氨基乙基)-吡啶-OSu-活化酯(0.03mmol)溶于300μl无水二甲基甲酰胺中。加入28mg 3-氨基-1，2-丙二醇(0.31mmol)和41μl三乙胺。溶液在氩气下室温搅拌14小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₅H₅₆N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：925.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.53min

M.S(+)：m/z＝925

实施例53、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-([2-双(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物58)

2)所有溶剂真空脱气。将纯化的氨基二醇溶于2ml NMP和200μlDMSO中。向溶液中加入溶于200μl氯仿的100mg(0.21mmol)PyBroP和160μl(1mmol)液态三(2-乙基氨基)胺。化合物在氩气下室温搅拌16小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₄H₆₃N₉O₇Pd+3CH₃COOH

分子量：933.2+180.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：10.86min

M.S(+)：m/z＝933。

实施例54、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-([2-双(2-氨基乙基)胺]乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物59)

1)将25mg Pd-Bpheid，3(35μmol)和39.4mg HOSu(342μmol)在氩气下溶于1ml无水DMF中。导入溶于500μl无水DMF的31mgDCC(150mol)。溶液在室温下搅拌过夜。蒸发DMF，产物使用液相色谱纯化，以SiO₂为固定相，95％CHCl₃∶5％EtOH为洗脱液。产物在前四份中接取。蒸发溶剂，得到55mg Pd-Bpheid-OSu。

2)将25mg前述产物Pd-Bpheid-Osu(30mol)溶于1ml无水DMF中。向该溶液中加入13μl N，N-二异丙基乙基胺(DIPEA)(74mol)。反应混合物在氩气下搅拌数分钟。将溶于1ml DMF的3-氨基-1，2-丙二醇(97μl，37μmol)加至反应器中。反应在惰性气体下室温搅拌5小时。未检测到氨基分解产物。

3)将200ml(1.28mmol)三(氨基乙基)胺加到2)的反应器中。向反应器中充入氩气。混合物在室温下搅拌过夜。通过以30ml水稀释反应混合物并用30ml正丁醇洗水层以纯化产物。然后用3×30ml水洗有机层。蒸发丁醇并将产物溶于1.5ml酸性水和300μl乙腈中。将溶液分成等份并冷冻干燥。

结构式：C₄₄H₆₃N₉O₇Pd+3CH₃COOH

分子量：933.2+180.2

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.46min

M.S(+)：m/z＝934

实施例55、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物60)

1)在氩气下将30mg Pd-Bpheid，3(42μmol)在1ml(11.8mmol)的1，3-二氨基丙烷中于室温下搅拌60分钟。然后将过量的胺在高真空下蒸发16小时。

2)产物溶于1ml DMSO和1ml DMF中，再与100mg(0.21mmol)PyBroP在500μl氯仿中的溶液和100mg 3-氨基-1，2-丙二醇在氩气下室温搅拌16小时。产物纯化通过与水沉淀，继而使用RP-18柱通过HPLC进行。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₁H₅₅N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：861.2+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.06min

M.S(+)：m/z＝861

实施例56、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(4-氨基丁基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物61)

1)将20mg Pd-Bpheid，3(28μmol)和0.5ml(4.9mmol)1，4-二氨基丁烷(99％)在氩气下于30℃搅拌4小时，此时向反应器中加入1ml水并搅拌数分钟。然后将溶冷冻干燥。

2)将Pd-Bpheid氨基分解产物溶于2ml无水DMF中。414mg(4.4 mmol)3-氨基-1，2-丙二醇(97％)在400μl无水DMF中的溶液加至混合物中。反应器中充入氩气。将130mg PyBroP(279μmol)在500μl氯仿中的溶导入反应器中。混合物在氩气下于30℃再搅拌90min。然后将反应冷却，过量的偶合试验通过加入1ml水破坏。混合物用100ml水稀释。

产物用氯仿提取4将，100ml和3×50ml。合并有机洗涤液并蒸发。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：876.4+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.32min

M.S(+)：m/z＝876

实施例57、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二乙基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物62)

1)将30mg Pd-Bpheid，3(0.042mmol)溶于300μl 2-(二乙基氨基乙基)胺(2.11mmol)。溶液在氩气下室温搅拌3小时。过量的2-(二乙基氨基乙基)胺在高真空下蒸发。

产物通过HPLC-MS分析。保留时间：15.49min。

M.S(+)：m/z＝831

2)将27mg 3-氨基-1，2-丙二醇(0.3mmol)、28mg PyBroP(0.06mmol)和300μlDMF加至第1部分的溶液中。溶液在氩气下室温搅拌2小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₄H₆₁N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：906.4+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.93min。

M.S(+)：m/z＝904

实施例58、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N-乙基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物63)

1)将30mg Pd-Bpheid，3(42μmol)在1ml(9.5mmol)的N-乙基乙二胺中在氩气下室温搅拌60分钟。然后将过量的胺在高真空下蒸发。

2)然后将产物溶于800μl DMF中并与70mg(0.77mmol)3-氨基-1，2-丙二醇在200μl DMF中的溶液和70mg(0.15mmol)PyBroP在200μl氯仿中的溶液在氩气下室温搅拌2小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：875.2+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.16min。

M.S(+)：m/z＝875

实施例59、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-N-甲基氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物64)

1)将30mg Pd-Bpheid，3(42μmol)在1ml(9.6mmol)的N-甲基-1，3-丙烷二胺中在氩气下室温搅拌120分钟。然后将过量的胺在高真空下蒸发。

2)然后将产物溶于800μl DMF中并与80mg(0.88mmol)3-氨基-1，2-丙二醇在200μl DMF中的溶液和75mg(0.16mmol)PyBroP在200μl氯仿中的溶液在氩气下室温搅拌2小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₇Pd+CH₃COOH

分子量：875.2+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：12.93min。

M.S(+)：m/z＝875

实施例60、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²- 二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-羟基乙基)酰胺(化合物65)

1)将300mg Pd-Bpheid，3(420μmol)、655mg PyBroP(1260μmol)、30.78μl乙醇胺(504μl)、0.6ml DMF和0.1ml三乙胺在氩气下室温搅拌1小时。蒸发反应混合物，产物通过水氯仿提取。用无水MgSO4干燥含有产物的氯仿相，过滤，蒸发。

2)蒸发后加入460μl N，N-二甲基乙二胺(4.2mmol)并且反应混合物在氩气下室温搅拌1小时。产物通过水和正丁醇提取纯化。将含有产物的正丁醇相干燥(无水MgSO₄)，过滤，蒸发。

结构式：C₄₁H₅₅N₇O₆Pd+CH₃COOH

分子量：848.2+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

M.S(+)：m/z(most abundant)＝846

UV-Vis光谱：750nm，516nm，386nm，332nm，264nm

实施例61、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(3-羟基丙基)酰胺(化合物66)

1)Pd-Bpheid氨基分解如实施例20针对化合物25所述进行。

2)随后将上述步骤1获得的全部产物溶于6ml DMF中。将1ml溶液与20μl(0.26mmol)3-氨基-l-丙醇、70mg(0.15mmol)PyBroP和20μl(0.18mmol)-甲基-吗啉反应。混合物在氩气下室温搅拌90分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₆Pd+CH₃COOH

分子量：859.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.38min。

M.S(+)：m/z＝859

实施例62、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-羟基丙基)酰胺(化合物67)

1)Pd-Bpheid氨基分解如实施例20针对化合物25所述进行。

2)随后将产物溶于6ml DMF中。将1ml溶液与20μl(0.25mmol)1-氨基-2-丙醇、70mg(0.15mmol)PyBroP和20μl(0.18mmol)N-甲基-吗啉反应。混合物在氩气下室温搅拌90分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₆Pd+CH₃COOH

分子量：859.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：14.82min。

M.S(+)：m/z＝859。

实施例63、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-((R)-2-羟基丙基)酰胺(化合物68)

化合物68的合成与前述实施例63所述化合物67相同，使用氨基乙醇的R旋光异构体。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₆Pd+CH₃COOH

分子量：859.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.52min。

M.S(+)：m/z＝859。

实施例64、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-((S)-2-羟基丙基)酰胺(化合物69)

化合物68的合成与前述实施例63所述化合物67相同，使用氨基乙醇的S旋光异构体。

结构式：C₄₂H₅₇N₇O₆Pd+CH₃COOH

分子量：859.3+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.50min。

M.S(+)：m/z＝859

实施例65、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²- 二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-(2-羟基乙基氨基)乙基)酰胺(化合物70)

1)Pd-Bpheid氨基分解如实施例20针对化合物25所述进行。

2)随后将产物溶于6ml DMF中。将1ml溶液与N-(2-羟基乙基)-乙二胺(20μl，0.17mmol)、70mg(0.15mmol)PyBroP和20μl(0.18mmol)N-甲基-吗啉反应。混合物在氩气下室温搅拌90分钟。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₃H₆₀N₈O₆Pd+2CH₃COOH

分子量：889.2+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.34min。

M.S(+)：m/z＝888

实施例66、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-N-(2′-吡啶基)氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物71)

1)将500mg 2-氯吡啶(8.73mmol)溶于3.6ml1，3-二氨基丙烷(44mmol)中。加入100mg碳酸钾和200μl DMF。化合物于102℃下回流22小时。产物N-(2-吡啶基)丙烯二胺在硅胶60(0.040-0.063mm)上纯化。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。产物为无色油状物。在硅胶60F₂₅₄板上进行TLC分析。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。产物Rf＝0.38。

2)将20mg Pd-Bpheid，3(28mol)溶于300μl NMP中，并加入125mg(0.83mmol)N-(2-吡啶基)丙烯二胺。溶液在氩气下室温搅拌23小时。氨基分解产物在硅胶60(0.040-0.063mm)上纯化。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。

产物使用HPLC-MS分析。保留时间：8.02min。

M.S(+)：m/z＝864。

3)Pd-Bpheid氨基分解产物(30mg，0.023mmol)溶于400μl NMP中。加入90mg HBTU(0.24mmol)、50μl三乙胺(0.35mmol)和20mg 3-氨基-1，2-丙二醇(0.23mmol)。溶液在氩气下室温搅拌4小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₆H₅₈N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：941.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：18.89min

M.S(+)：m/z＝941

实施例67、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(4-N-(2′-吡啶基)氨基丁基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物72)

1)将0.835ml 2-氯吡啶(8.8mmol)溶于8.8ml 1，4-二氨基丁烷(88mmol)中。混合物在128℃下回流4小时。产物在硅胶60(0.040-0.063mm)上纯化。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。产物为无色油状物。TLC薄板用硅胶60F₂₅₄板。流动相：甲醇90％，氨溶液10％。丁基二氨：Rf＝0，产物Rf＝0.42。

2)将30mg Pd-Bpheid，3(42mol)溶于700μl NMP中，并加入80mg(0.48mmol)N-(2-吡啶基)丁烯二胺。溶液在氩气下室温搅拌15小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：22.36min。

M.S(+)：m/z＝877。

3)将17mg Pd-Bpheid氨基分解产物(0.019mmol)溶于400μlNMP和100μl水中。加入9mg HOSu(0.077mmol)、17mg N-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺(EDC)(0.87mmol)和5μl氨溶液。16小时后，加入200mg 3-氨基-1，2-丙二醇(2.2mmol)。溶液在氩气下室温搅拌2小时。产物使用RP-18柱通过预备HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₀N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：949.5+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.79min。

M.S(+)：m/z＝949

实施例68、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(3-N-(2’-吡啶基)氨基丙基)酰胺(化合物73)

1)与3-氨基-1，2-丙二醇的氨基分解以及随后的纯化如实施例42针对化合物46所述进行。

2)将32mg Pd-Bpheid氨基分解产物(0.04mmol)溶于800μlNMP。加入152mg HBTU(0.4mmol)、56μl三乙胺和60mg N-(2-吡啶基)丙烯二胺(如上述化合物72制备)。溶液在氩气下室温搅拌16小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₆H₅₈N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：939.4+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.28min。

M.S(+)：m/z＝939

实施例69、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(4-N-(2′-吡啶基)氨基丁基)酰胺(化合物74)

2)将25mg Pd-Bpheid氨基分解产物(0.031mmol)溶于600μlNMP。加入120mg HBTU(0.31mmol)、45μl三乙胺和50mg N-(2-吡啶基)丁烯二胺(如上述化合物72制备)。溶液在氩气下室温搅拌20小时。产物使用RP-18柱通过HPLC纯化。流动相：A＝0.2％乙酸水溶液，B＝0.2％乙酸乙腈溶液。梯度：20％B(0-6min)至95％B(30-33min)。流速：4ml/min。

结构式：C₄₇H₆₀N₈O₇Pd+2CH₃COOH

分子量：953.5+120.1

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：15.43min。

M.S(+)：m/z＝953

实施例70、钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(糖基)酰胺(化合物75)

1)在氩气下将300mg Pd-Bpheid，3(420μmol)和476mgHOSu(4.14mmol)溶于4ml无水的DMF中。将溶于2ml无水DMF中的435.5mg DCC(2.1mmol)导入。反应在室温下搅拌过夜。TLC(92％CHCl₃∶8％MeOH)显示没有未反应的Pd-Bpheid。

2)将926mg盐酸糖基胺，98％，(4.28mmol)和2190μl DIPEA(12.6mmol)导入前述含有活性酯Pd-Bpheid-OSu的反应器中。反应在氩气下室温搅拌24小时。TLC(8％CHCl₃∶92％MeOH)显示在反应器中没有未反应的活性酯残留。

3)将3ml N，N-二甲基乙二胺(26mmol)加至步骤的反应器中并在氩气下室温搅拌过夜。HPLC-MS显示所需产物及其席夫碱(Schiff base)产为主要产物。反应混合物用100ml水稀释，并用4×50ml正丁醇洗涤。为了完成分离必需在每次洗涤中加入小容量的饱和NaCl水溶液。合并有机层并用50ml水洗。随后蒸发丁醇，并用稀乙酸水解残留的席夫碱。蒸发的产物用含有1％乙酸的60ml水稀释。酸性溶液在氩气下室温搅拌1小时。HPLC-MS显示席夫碱完全破坏。

结构式：C₄₅H₆₁N₇O₉Pd+CH₃COOH

分子量：948.4+60.0

产物经HPLC分析并且MS鉴别确认。

保留时间：13.81min。

M.S(+)：m/z 948

实施例71、二阳离子化合物5与人血清白蛋白(HSA)的相互作用

不同的Bchl衍生物的光动力学活性严格地依赖于它们的单晶体(二聚体)型的生物利用度和跨细胞的运输，其可通过与血清白蛋白结合显著地调节。

将PBS(3.2×10^-4M，100μl)溶液与不同量的人血清白蛋白(0.1，0.5，1，2和5mg)混合。5水溶液在高浓度下聚集是通过747nm处的有机单体峰分裂成2个在720和760nm处的峰而反映的。聚集态继之以在白蛋白浓度的范围内在0.1mm比色杯内于室温下进行分光光度计测量。以峰波长处的吸收强度值作为聚集指标。

白蛋白的附件在PBS中会引起致敏物质5解聚(图2)。含有渐增量白蛋白的溶液的吸收光谱类似于单体色素5在甲醇中的光谱。

II、生物学部分

材料和方法

(i)细胞培养。H5V小鼠上皮细胞在含有25mM HEPES、pH7.4、10％胎牛血清(FCS)、谷氨酰胺(2mM)、青霉素(0.06mg/ml)和链霉素(0.1mg/ml)的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco′s modified Eagle′smedium，DMEM)/F12(以下指“培养基”)中进行单细胞层培养。细胞在8％CO₂-增湿空气中于37℃生长。

(ii)细菌培养。白色葡萄球菌和大肠杆菌XL-1菌株在液体LB培养基(大肠杆菌在含有12.5μg四环素/ml的LB中)中培养至终密度OD₆₀₀nm＝0.5-0.9(1OD＝8×10⁸细菌/ml)。将细菌离心沉降(4000×g，5min)并重新混悬在PBS中。

(iii)体外试验中的致敏物质的制备。化合物5、7、9和11的贮备液是在使用前，通过将干燥化合物直接溶解在培养基中至所需浓度而制得。

(iv)光毒性测定。

(a)细胞。为测定光动力学效应，细胞在96-孔板中(40×10³/孔)培养，并在含有渐增浓度致敏物质5、7、9和11的培养基中于暗处孵育1min至8h。通过用新鲜培养基冲洗一次细胞以除去未结合的致敏物质。板于室温下从其底部照射10min(650＜λ＜800nm，12J/cm²)。光源为10 0W卤素灯(Osram，德国)，其配有＜650nm截断和4-cm水滤器。将培养物置于培养箱中，并在照射后通过中性红存活力测定法测定细胞存活率。以未处理对照组中的染料累积百分率计算细胞存活率。一式三份进行测定并以代表性试验表示。使用三种对照：(i)光对照：无染料时照射细胞；(ii)暗对照：细胞以染料处理，但置于暗处；和(iii)置于暗处的未处理细胞。

(b)细菌。为测定光动力学效应，将细菌稀释成含有约10⁷细菌的300μl等份，并与在塑料试管中的渐增浓度致敏物质于室温下暗处孵育 1h，然后以70mW/cm²照射15min。接着将处理细菌培养物的样品以不同稀释度(50-200细菌/皿)加在LB琼脂上，并在37℃培养24h，以通过菌落计数测定细菌存活率。一式三份进行测定并以代表性试验表示。

(v)动物。根据以色列Rehovot的Weizmann科学研究所的指导原则，在分类设施中，雄性CD1裸鼠(28-32g)和雄性Wistar大鼠(250-300g)自由饮水和饮食。

(vi)麻醉。通过i.p.注射80μl氯胺酮(100mg/ml，Rhone-Merieux，法国)和赛拉嗪(2％，Vitamed，以色列)的混合物(85∶15，v∶v)以麻醉小鼠。大鼠以气体麻醉(2％异氟烷在98％O₂中)。

(vii)肿瘤移植。培养的C6神经胶质瘤细胞单层刮入生理盐水中，250g离心5min，重新混悬在生理盐水中并皮下注射(2×10⁶细胞/鼠)到CD1裸鼠的背部。在2周内肿瘤达到6-8mm的处理直径。当肿瘤达到直径≥15mm时处死小鼠(根据Weizmann科学研究所的指导原则)。

(viii)注射用致敏物质的制备。临用前，通过直接在PBS中溶解干燥化合物以达到注射所需浓度来制备化合物5和11和贮备溶液。

(ix)药物动力学。麻醉Wistar大鼠(每时间点n＝3)静脉注射本发明的化合物5(0.6mg/kg)。在注射后0、5、10、15、20、30、45、60、120、360和480min取血样(～100-200μl)。转移到经预先称重的含有10μl肝素的2ml试管中，并小心混合。从3只未处理大鼠收集对照血样并作相应处理。含有血样的试验管再次称重，以便计算准确的样品重量。然后将血样在液氮中冷冻并冷冻干燥。冷冻干燥样品用甲醇(每样1ml)提取，涡旋、离心。收集上清液，以荧光测定(荧光分光光度计SLM-8000，Aminco USA)分析。以520nm为激发波长，在650-850nm范围内记录荧光发射光谱。以甲醇和未处理血液提取物的荧光值为空白。以已知浓度的致敏物质制备标准曲线。

(x)生物分布。麻醉Wistar大鼠(n＝2)，并将本发明的化合物5(0.6mg/kg)注入其尾静脉。对照组(n＝2)不用致敏物质处理。注射后30min和24h，处死大鼠(每时间点一只)，将指定器官和组织(心脏、肝、肺、脾、肾、脑、睾丸、皮肤、肌肉和脂肪)的样品收集到预先称重的管形瓶中，立即用干冰冷冻并在暗处-20℃下贮存直至分析。为检查，各样品融化、再次称重，以及在冰水中匀化处理(Polytron，Kinematica GmbH or Ultra-Turrax)。然后将管形瓶在液氮中冷冻并冷冻干燥。冷冻干燥样品用与组织相同重量的甲醇(5-10ml)提取，然后涡旋和离心。收集上清液，分析并如上(ix)所述测定荧光值。以甲醇和对照动物组织提取物作为空白。

(xi)PDT实验设计。将荷C6神经胶质瘤的CD1裸鼠(n＝17)麻醉，并将本发明的化合物5(0.3mg/kg)注入其尾静脉。用755nm二极管激光器(CeramOptec，德国)以光照剂量80mW/cm²(光照射野直径-14mm)，立即经皮照射肿瘤区域(药-光时间间隔(DLTI)＝0)15min。随后将照射的小鼠(n＝12)置于笼子后部。照相记录肿瘤应答(使用在PDT后第8天作为终点的局部坏死)，并评估肿瘤体积(Gleave et al.，1992)。当仅有部分照射肿瘤坏死时应当认为是局部应答。如果治疗90天后无肿瘤时应认为小鼠治愈。DPT后肿瘤持续生长记为无应答。当肿瘤直径达15mm时处死小鼠。使用如下对照：(i)暗对照(n＝3)-荷瘤小鼠i.v.注射致敏物质但未照射；(ii)光对照(n＝2)-荷瘤小鼠未注射致敏物质但照射；(iii)未处理对照(n＝2)一荷瘤小鼠未注射致敏物质亦未照射。

实施例72、化合物5、7、9和11在内皮细胞上的细胞光毒性

化合物5、7、9和11对H5V鼠上皮细胞的光毒性如前述(iv)(a)部分测定。细胞与递增浓度(0.001、0.01、0.1、1或10μM)的化合物孵育1、6、60、90、120、240和480min，清洗，然后照射或保持在暗处。结果如图3A-3C：化合物5和11孵育90min后的光毒性见图3A；化合物5、7和9孵育2小时后的光毒性见图3B；并且化合物5(10μM)孵育1-10min后的光毒性见图3C。如图中可见，致敏物质快速作用，它们的光毒性是浓度-和光-依赖性的，并且它们的LD₅₀大约一样(在开始孵育后～3min和2h分别为3和～0.2μM)。测定浓度范围内未观察到暗毒性。

实施例73、化合物5的药物动力学和生物分布

致敏物质5的药物动力学和生物分布是如前述(ix)和(x)部分在Wistar大鼠体内测定。

药物动力学结果如图4所述，表明致敏物质5在i.v.注射(0.6mg/kg)后30min内清除约60％。清除动力学表明i.v.给药后24h呈二室分布。生物分布结果如图5A-5B所示，表明注射后30min，致敏物质5的浓度在血、肾和肺中相对较高(图5A)，并且注射后24h致敏物质浓度下降至几乎为血中背景浓度，但在肾、肝和脾仍可见明显的浓度(图5B)。

实施例74、化合物光动力学治疗CD1裸鼠中的C6神经胶质瘤移植物

在前述实施例20中的药代动力学数据基础上，化合物5的治疗试验设计安排了在注射致敏物质后，使用与5吸收峰匹配的专用医用激光器(CeramOptec，德国，755nm)立即光照15-min。为了测试药物的效力，CD1雄性裸鼠(n＝12)用化合物5以0.3mg/kg的剂量以及光强度80mW/cm²治疗。所有动物在光-和药(全部)治疗组在治疗后第1天发生炎症和水肿。图6A表明PDT治疗小鼠在第0、4、14天肿瘤部位的照片。在第4天观察到肿瘤生长，并在第14天观察到肿瘤坏死。到21天，观察到肿瘤变平，结痂覆盖伤口。到32天，伤口愈合，动物治愈。图6B-6C分别为小鼠注射化合物5但未光照、以及小鼠注射盐水并光照的肿瘤部位的照片。两种情况下均未发生肿瘤坏死。

图7描述卡普兰-迈耶存活曲线(Kaplan-Meier survival curve)，表明用化合物5和光照小鼠80％治愈率(治疗，方块)。

实施例75、化合物5对革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的光毒性

正电荷化合物5的光毒性与负电荷Pd3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹-(2-磺乙基)酰胺二钾盐(描述在PCT/IL 03/00973中)对照，以革兰氏阳性白色葡萄球菌和革兰氏阴性大肠杆菌测定。

细菌与递增浓度的致敏物质孵育1h并光照或保持在暗处。结果如图8A-8D所述，表明正电荷致敏物质化合物5对革兰氏阳性白色葡萄球菌(图8B)(K_d 0.02μM)和革兰氏阴性大肠杆菌(图8D)(K_d 1.7μM)均有光毒性，而现有技术的负电荷致敏物质对革兰氏阳性白色葡萄球菌(图8A)(K_d 0.3μM)有效，但对革兰氏阴性大肠杆菌(图8C)无效。观察到以10μM浓度的化合物5对大肠杆菌几乎100％死亡(图8D)。革兰氏阳性菌白色葡萄球菌比之于革兰氏阴性大肠杆菌，对化合物5的敏感度在100倍以上。当细菌孵育并以同样浓度范围的致敏物质但无光照(暗对照)治疗时，未观察到光毒性。

实施例76、光毒性分析

材料和方法如前面生物学部分所述

H5V细胞(40×10³/孔)在96-孔板中培养24小时至80％融合。为测定光毒性，将培养基以100μl/孔的不含有或含有10^-8-10^-6μM致敏物质的介质替换，并在培养箱中于暗处孵育15min或3h。然后将板(PDT组)置于室温下亮处，并从底部照射10min(800＞λ＞650nm，12J/cm²)。照射后将介质换成培养基。然后将培养物置于培养箱，并在24小时后使用前述的中性红存活率测定法测定细胞存活率。

使用以下对照：

1、光对照：细胞光照，没有致敏物质

2、暗对照：细胞以致敏物质处理但置于暗处。

未处理：细胞置于暗处无任何处理。

PDT 24小时后，孔中的培养基以100μl含有40μg/ml中性红的新鲜介质替换。将板在暗培养箱中孵育1.5h。吸出介质，用100μl含有1％CaCl₂和0.5％甲醛的溶液洗细胞，以除去未结合的染料，并将细胞固定于底层。然后以另外的含有1％冰乙酸的100μl 50％乙醇将染料从细胞萃取到上清液。室温下1-2min后，在微量培养板分光光度计上使用570nm滤光片，测定细胞的光密度。扣除测定空白，以三次测定的平均值计算净光密度。以未处理对照染料累积百分率计算细胞存活率。以测定的细胞存活率对致敏物质浓度绘图。然后将这些曲线用于计算LD₅₀值。

合成后，将描述于实施例23～75化合物的合成物纯化，分成等分并冷冻干燥贮存(-20℃下干贮)。确切的物质浓度通过HPLC-二极管阵列检测器测定，PDT效应以如实验部分所述的两个孵育时间计算。结果如下表1-3：

表1

化合物	IC₅₀(μM)3小时	IC₅₀(μM)15min
			24	1.2	2.4
25	0.75	1.1
			26	0.45	1.0
27	0.45	1.5
			28	0.38	1.3
29	1.9	1.9
			30	0.61	1.7
31	0.60	2.6

32

0.25

0.60

根据本发明制备的所有化合物与Pd-Bpheid，3相比显示出更好的溶解度。大多数化合物在等渗甘露醇中需要低百分率的克列莫佛(Cremophor)以形成100％的2mg/ml单体溶液，而一些化合物需要低浓度的丙二醇或PEG-400以获得同样的单体溶液(两添加物均认为使用非常安全)。这些化合物的两性离子性质可能是对需要克列莫佛以形成单体溶液的贡献因素。

化合物25-32的合成比作为参考并在此如24复制的最初的单-阳离子更简单。值得注意的是，化合物26、28和32的PDT活性(例如在两者孵育时间32的活性比24的高4-5倍)。

表2

化合物	IC₅₀(μM)3小时	IC₅₀(μM)15min
			33^＊	0.45	0.75
34	0.20	0.48
			35	0.21	1.23
10	0.24	0.74
			36	0.15	0.37
37	0.21	0.75
			38	0.16	0.44
39	0.10	2.44
			40	0.35	0.70
41	0.46	1.13
			42	0.28	0.68
43	0.18	0.60
			44	0.17	1.41
45	0.18	0.20

化合物34-45的合成比作为参考并在此如33复制的最初的二-阳离子更简单。值得注意的是，化合物34、36、38和45在短孵育时间的PDT活性(例如，36在15min孵育时间比33在3小时具有更高活性)。

表3

化合物	IC₅₀(μM)3小时	IC₅₀(μM)15min
			46	0.6	1.33
47	0.25	0.45
			48	0.20	0.60
49	0.57	1.15
			50	0.17	0.47
51	0.40	0.78
			52	0.89	0.83
53	0.90	2.00
			54	0.27	0.75
55	0.43	1.07
			56	0.32	0.79
57	0.60	1.33
			58	0.37	0.64
59	0.19	0.45
			60	0.24	0.62

61	0.21	0.69
			62	0.19	0.63
63	0.21	0.66
			64	0.17	0.56
65	0.22	0.43
			66	0.20	0.55
67	0.18	0.50
			68(R)	0.16	0.50
69(S)	0.16	0.50
			70	0.16	0.55
73	0.30	0.38
			74	0.29	0.74
75	0.16	0.50

上表中的所有化合物与Pd-Bpheid，3相比显示出更好的溶解度。大多数化合物仅需要低百分率的丙二醇或PEG-400以形成100％的2mg/ml单体溶液。尽管大多数化合物的合成需要二至三个化学转化，大多数化合物可以以一锅反应法制备，以最低限度的中间体纯化和分离(在此实施例中，在许多反应中，在中间的和最终的纯化步骤中，使用预备HPLC，简单方便)。简单的提取和沉淀也可以成功地应用于纯化这些化合物，由此避免需要昂贵的和烦琐的大规模HPLC纯化。

实施例77、化合物的生物分布

动物为荷有RCC接种物的CD1雄性裸鼠。每个时间点使用3只动物。在本试验中使用化合物28、32、10、36和75。

以氯胺酮∶赛拉嗪(85∶15，vol/vol)进行麻醉。

给麻醉动物以1.5mg/kg的剂量注射试验化合物等渗甘露醇溶液(2mg/ml)。每一时间点处死3只动物，收集血、心、肺、肝、肾、肠、脾、肌肉、皮肤、肿瘤和脑的样品。使用的时间点为注射后5min、15min、30min、1h、2h、6h、24h、48h、72h、5天和7天。样品精密称重，溶于浓硝酸，并通过ICPMS分析钯。

结果在随同的附图中表示(图9A至9E)。

图解2

附件——化合物24-75的列表

参考文献

Borle，F，Radu A，Monnier P，van den Bergh H，Wagnieres，G.(2003).Evaluation of the photosensitizer tookad for photodynamictherapy on the syrian golden hamster cheek pouch model：Light dose，drug dose and drug-light interval effects.Photochem Photobiol，78(4)：377-383.

Campbell RB，Fukumura D，Brown EB，Mazzola LM，Izumi Y，Jain RK，Torchilin VP，Munn LL.(2002).Cationic charge determinesthe distribution of liposomes between the vascular and extravascularcompartments of tumors.Cancer Res 62(23)：6831-6836.

Chen，Q，Huang，Z，Luck，D，Beckers，J，Brun，PH，Wilson，BC，Scherz，A，Salomon，Y，and Hetzel，FW.(2002)Preclinical studiesin normal canine prostate of a novel palladium-bacteriopheophorbide(WST09)photosensitizer for photodynamictherapy of prostate cancers.Photochem Photobiol，76：438-445.

Dellian M，Yuan F，Trubetskoy VS，Torchilin VP，Jain RK.(2000).Vascular permeability in a human tumor xenografts；molecular chargedependence.Br J Cancer 82：1513-1518.

Dougherty，T.J.and J.G.Levy(2003).Photodynamictherapy(PDT)and clinical applications.Biomedical Photonics Handbook.V.Tuan.Boca Raton，CRC Press LLC.38：1-38.

Elhilali，M.(2004).Results of a phase I/II trial of WST09-mediated photodynamic therapy(WST09-PDT)for recurrent localizedprostate cancer following failed external beam radiation therapy(EBRT).XIXth EAU CONGRESS，Workshop 1 ″Vascular targetedphotodynamic therapy for the treatment of prostate cancer：first clinicalresults with palladium bacteriopheophorbide(WST09)″，VIENNA.

Ghinea，N.and N.Simionescu(1985).Anionized and cationizedhemeundecapeptides as probes for cell-surface charge and permeabilitystudies-differentiated labeling of endothelial plasmalemmal vesicles.JCell Biol 100(2)：606-612.

Gleave ME，Hsieh JT，Wu HC，von Eschenbach AC，Chung LW.(1992).Serum prostate specific antigen levels in mice bearinghuman prostate LNCaP tumors are determined by tumor volume andendocrine and growth factors.Cancer Res.52：1598-1605.

Gross，S.，Gilead，A.，Scherz，A.，Neeman，M.，and Salomon，Y.(2003)Monitoring photodynamic therapy of solid tumors online byBOLD-contrast MRI.Nat Med，9：1327-1331.

Hamblin MR，Rajadhyaksha M，Momma T，Soukos NS，HasanT.(1999).In vivo fluorescence imaging of the transport of chargedchlorin e6 conjugates in a rat orthotopic prostate tumour.Br JCancer_81(2)：261-268.

Hashizume H，Baluk P，Morikawa S，McLean JW，Thurston G，Roberge S，Jain RK，McDonald DM.(2000).Openings between defectiveeudothelial cells explain tumor vessel leakiness. Am JPathol156(4)：1363-1380.

Kelleher，DK，Thews，0，Scherz，A，Salomon，Y，and Vaupel，P.(2003)Combined hyperthermia and chlorophyll-based photodynamictherapy：tumour growth and metabolic microenvironment.Br JCancer，89：2333-2339.

Kinoshita，I，Kashiwabara，K，Fujita，J，Matsumoto，K，andOoi，S.(1981).Preparation，resolution，and adsorption and circulardichroism spectra of[Co(en)_n{NH₂CH₂CH₂P(CH₃)₂}_3-n]³⁺ and the relatedcomplexes，and the absolute configuration of(+)₅₈₉-fac-[Co{NH₂CH₂CH₂P(CH₃)₂}³⁺ determined by X-Ray analysis.″Bull.Chem.Soc.Jpn.54：2683-2690.

Koudinova，N.V.，Pinthus，J.H.，Brandis，A.，Brenner，0.，Bendel，P.，Ramon，J.，Eshhar，Z.，Scherz，A.，and Salomon，Y.(2003)Photodynamic therapy with Pd-bacteriopheophorbide(TOOKAD)：Successful in vivo treatment ofhuman prostatic small cell carcinoma xenografts.Int J Cancer，104：782-789.

Krammer B.(2001)Vascular effects of photodynamic therapyAnticancer Res.21(6B)：4271-7

Mazor，0，Kostenich，G，Brandis，A，Orenstein，A，Salomon，Y，and Scherz，A.(2003)Selective tumor vascular destruction of coloncarcinoma xenografts by the hydrophilic Pd-bacteriochlorophyllderivative，WST11 9th International Photodynamic Association，May20-23，Miyazaki，Japan，Book of Abstracts，p.19.

Plaks，V，Koudinova，N，Nevo，U，Pinthus，JH，Kanety，H，Eshhar，Z，Ramon，J，Scherz，A，Neeman，M，and Salomon，Y.(2004)Photodynamic Therapy of Established ProstaticAdenocarcinoma with TOOKAD：A Biphasic Apparent DiffusionCoefficient Change as Potential Early MRI Response Marker.Neoplasia，In press.

Preise D，Mazor 0，Koudinova N，Liscovitch M，Scherz A，SalomonY.(2003).Bypass of tumor drug resistance by antivascular therapy.Neoplasia 5(6)：475-480.

Ran S，Downes A，Thorpe PE.(2002).Increased exposure of anionicphospholipids on the surface of tumor blood vessels. Cancer Res62：6132-6140.

Rosenbach-Belkin V，Chen L，Fiedor L，Tregub I，Paviotsky F，Brumfeld V，Salomon Y，Scherz A.(1996).Serine conjugates ofchlorophyll and bacteriochlorophyll：photocytotoxicity in vitro andtissue distribution in mice bearing melanoma tumors.PhotochemPhotobiol 64：174-181.

Schreiber，S.，Gross，S.，Brandis，A.，Harmelin，A.，Rosenbach-Belkin，V.，Scherz，A：，and Salomon，Y.-(2002)-Localphotodynamic therapy(PDT)of rat C6 glioma xenografts with Pd-bacteriopheophorbide leads to decreased metastases and increase ofanimal cure compared with surgery.Int J Cancer，99：279-285.

Segev A，Aviezer D，Safran M，Gross Z，Yayon A.(2002).Inhibitionof vascular smooth muscle cell proliferation by a novel fibroblast growthfactor receptor antagonist.Cardiovasc Res 53(1)：232-241.

Simionescu，N，Simionescu M，Palade GE.(1981).Differentiatedmicrodomains on the luminal surface of the cappilary endothelium.I. Preferential distribution of anionic sites.J Cell Biol 90(3)：605-613.

Suzuki，T.，Rude，M.，Simonsen，K.P.，Morooka，M.，Tanaka，H.，Ohba，S.，Galsbol，F.，and Fujita，J.(1994).Preparation andcharacterization of Iridium(III)complexes containing(2-aminoethyl)dimethylphosphine(edmp).Structures of fac-[Ir(edmp)₃]Cl₃.5H₂O and trans(Cl，Cl)，cis(P，P)-[IrCl₂(edpp)₂]BF₄ andcomparisons of their properties with those of the Cobalt(III)andRhodium(III)analogs.″Bull.Chem.Soc.Jpn.67：1013-1023.

Thurston G，McLean JW，Rizen M，Baluk P，Haskell A，MurphyTJ，Hanahan D，McDonald DM..(1998).Cationic liposomes targetangiogenic endothelial cells in tumors and chronic inflammation in mice.J Clin Invest 101：1401-1413.

Trachtenberg，J.(2003).Initial Phase I/II Trial of WST09-PDTPhotodynamic Therapy Following Failed External Beam for ProstateCancer.CapCure Retreat，Washington DC.

Tuan，V.et al.(2002).Pharmaceutical strategies utilizingrecombinant human serum albumin.Pharm Res 19：569-577.

Wasielewski M.R.and Svec，W.A.(1980).″Synthesis of CovalentlyLinked Dimeric Derivatives of Chlorophyll a，Pyrochlorophyll a，Chlorophyll b，and Bacteriochlorophyll a.″J Org.Chem.45：1969-1974.

Zilberstein J，Bromberg A，Frantz A，Rosenbach-Belkin V，Kritzmann A，Pfefermann R，Salomon Y，Scherz A.(1997).Light-dependent oxygen consumption in bacteriochlorophyll-serine-treatedmelanoma tumors：on-line determination using a tissue-inserted oxygenmicrosensor.Photochem Photobiol 65(6)：1012-1019.

Zilberstein J，Schreiber S，Bloemers MC，Bendel P，Neeman M，Schechtman E，Kohen F，Scherz A，Salomon Y.(2001).Antivasculartreatment of solid melanoma tumors with bacteriochlorophyll-serine-based photodynamic therapy.Photochem Photobiol 73(3)：257-266.

Claims

1.一种式I、II或III的细菌叶绿素衍生物：

其中

M为2H或Pd；

Y为O；

R₂为H或COOR₉；

R₃为H或C₁-C₁₂烷氧基；

R₄为-COCH₃、-C(CH₃)＝NR₉或-CH(CH₃)＝N⁺R₉R′₉A^-；

R₅为＝O；

R₇、R₈、R₉、R′₉和R″₉各自独立地为：

(a)H；

(b)C₁-C₂₅烃基；

(c)C₁-C₁₀烷基，其被选自下列的一个或多个基团取代：

OR、COOR，

正电荷基团，选自：

(i)由含N基团衍生的阳离子，选自：-N⁺(RR′R″)、-(R)N-N⁺(RR′R″)、O←N⁺(RR′)-、＞C＝N⁺(RR′)、-C(＝NR)-N⁺RR′R″或-(R)N-C(＝NR)-N⁺RR′R″；

(ii)由含有一个或多个N原子和任选O或S原子的杂芳香化合物衍生的阳离子，选自：吡唑咪唑

唑噻唑

吡啶喹啉

异喹啉

嘧啶1，2，4-三嗪

1，3，5-三嗪

或嘌呤或

(iii)选自下列基团的基：-O⁺(RR′)、-S⁺(RR′)、-Se⁺(RR′)、-Te⁺(RR′)、-P⁺(RR′R″)、-As⁺(RR′R″)、-Sb⁺(RR′R″)或-Bi⁺(RR′R″)；在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团，选自：-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″、PRR′、-NR-NR′R″、-(R)N-C(＝NR)-NR′R″、O←NR^-、＞C＝NR或含N杂芳基；

其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₆烷基或杂环基；或者R、R′和R″中的二者共同与N原子形成任选含有O或N原子的3-7元饱和环；

(d)C₁-C₁₀烷基，包含一个或多个杂原子和/或一个或多个碳环或杂环部分；

(e)C₁-C₁₀烷基，包含一个或多个杂原子和/或一个或多个碳环或杂环部分并被一个或多个如上述(c)定义的官能团取代；

(f)氨基酸残基或单糖残基；

A^-为生理学可接受的阴离子；

m为0或1；和

其可药用盐；

条件是，当式I中R₂和R₃均为H时，R₄不是-C(CH₃)＝NR₉；以及进一步条件是，式I、II或III的细菌叶绿素衍生物具有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转变为正电荷基团的碱性基团。

2.根据权利要求1的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物，包含至少一个正电荷基团。

3.根据权利要求2的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个正电荷基团是由含N基团得到的阳离子。

4.根据权利要求3的细菌叶绿素衍生物，其中所述的由含N基团衍生的阳离子是-N⁺(RR′R″)或-C(＝NR)-N⁺RR′R″，其中R、R′和R″各自独立地为H、C_1-6烷基或杂环基，或者R、R′和R″中的二者共同与其连接的N原子形成3-7元饱和环，任选含有一个或多个选自O、S或N的杂原子。

5.根据权利要求4的细菌叶绿素衍生物，其中所述的阳离子是一个末端基团。

6.根据权利要求3的细菌叶绿素衍生物，其中所述的阳离子是得自含有一个或多个N原子和任选O或S原子的杂芳香化合物。

7.根据权利要求2的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个正电荷基团是选自下列的

基：-S⁺(RR′)、-P⁺(RR′R″)或-As⁺(RR′R″)，其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₆烷基或杂环基。

8.根据权利要求1的细菌叶绿素衍生物，包含至少一个在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团。

9.根据权利要求8的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团是-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″或P R′R″，其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₆烷基或杂环基，或者R、R′和R″中的二者共同与N原子形成3-7元饱和环，任选含有O、S或N原子；或者该碱性基团为含N杂芳基，选自：吡唑基、咪唑基、

唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、嘧啶基、1，2，4-三嗪基、1，3，5-三嗪基或嘌呤基。

10.根据权利要求1，4或9任一项的细菌叶绿素衍生物，其中所述的3-7元饱和环选自：氮丙啶、吡咯烷、哌啶、吗啉、硫吗啉、氮杂卓或哌嗪，上述基团任选在附加的N原子上被C₁-C₆烷基取代，该C₁-C₆烷基任选被卤素、羟基或氨基取代。

11.根据权利要求1～10任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物，其中R₇、R₈、R₉、R′₉和R″₉各自独立地为直链或支链C₁-C₆烷基，其任选包含一个或多个选自N或O的杂原子或者一个或多个碳环或杂环部分。

12.式II的细菌叶绿素衍生物：

其中

M表示2H或Pd；

Y为O；

R₄为-COCH₃、-C(CH₃)＝NR₉或-CH(CH₃)＝N⁺R₉R′₉A^-；

R₈、R₉、R′₉和R″₉各自独立地为：

(a)H；

(b)C₁-C₂₅烃基；

(c)被选自下列的一个或多个基团取代的C₁-C₁₀烷基：

OR、COOR，

正电荷基团，选自：

(ii)由含有一个或多个N原子和任选O或S原子的杂芳香化合物衍生的阳离子，选自：吡唑咪唑唑

噻唑

吡啶喹啉异喹啉嘧啶1，2，4-三嗪

1，3，5-三嗪

或嘌呤或

(iii)选自下列基团的

基：-O⁺(RR′)、-S⁺(RR′)、-Se⁺(RR′)、-Te⁺(RR′)、-P⁺(RR′R″)、-As⁺(RR′R″)、-Sb⁺(RR′R″)或-Bi⁺(RR′R″)；在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团，选自：-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″、PRR′、-NR-NR′R″、-(R)N-C(＝NR)-NR′R″、O←NR^-、＞C＝NR或含N杂芳基；

其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₁₀烷基或杂环基；或者R、R′和R″中的二者共同与N原子形成任选含有O或N原子的3-7元饱和环；

(f)氨基酸残基或单糖残基；

A^-为生理学可接受的阴离子；

m为0或1；和

其可药用盐；

条件是式II的细菌叶绿素衍生物具有至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团。

13.根据权利要求12的细菌叶绿素衍生物，其中M为2H。

14.根据权利要求12的细菌叶绿素衍生物，其中M为Pd。

15.根据权利要求12-14任一项的细菌叶绿素衍生物，其包含至少一个正电荷基团。

16.根据权利要求15的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个正电荷基团是由含N基团衍生的阳离子。

17.根据权利要求16的细菌叶绿素衍生物，其中所述的由含N基团衍生的阳离子是-N⁺(RR′R″)、或-C(＝NR)-N⁺RR′R″，其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₆烷基或杂环基，或者R、R′和R″中的二者共同和其连接的N原子形成3-7元饱和环，该环任选含有一个或多个选自O、S或N的杂原子。

18.根据权利要求17的细菌叶绿素衍生物，其中所述的阳离子是末端基团。

19.根据权利要求16的细菌叶绿素衍生物，其中所述的阳离子是由含有一个或多个N原子和任选O或S原子的杂芳香化合物衍生得到的。

20.根据权利要求12的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个正电荷基团是选自下列的

21.根据权利要求12-14任一项的细菌叶绿素衍生物，包含至少一个在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团。

22.根据权利要求21的细菌叶绿素衍生物，其中所述的至少一个在生理条件下转变成正电荷基团的碱性基团为-NRR′、-C(＝NR)-NR′R″或PRR″，其中R、R′和R″各自独立地为H、C₁-C₆烷基或杂环基，或者R、R′和R″中的二者共同与N原子形成3-7元饱和环，该环任选含有O、S或N原子；或者该碱性基团为一个含N杂芳香基，选自吡唑基、咪唑基、

23.根据权利要求12，17或22任一项的细菌叶绿素衍生物，其中所述的3-7元饱和环选自氮丙啶、吡咯烷、哌啶、吗啉、硫吗啉、氮杂卓或哌嗪，上述基团任选在另外的N原子上被C₁-C₆烷基取代，该C₁-C₆烷基任选被卤素、羟基或氨基取代。

24.根据权利要求12的细菌叶绿素衍生物，其中：

M为2H或Pd；

R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基；

R₄为-COCH₃；

R₁为OH、-NR₉R′₉或-NR₉-CH₂-CH(OH)-CH₂OH；

R₆为-NR₉R′₉或-NR₉-CH₂-CH(OH)-CH₂OH；

R₉为H或C₁-C₆烷基；和

R′₉为被至少一个正电荷基团和/或至少一个在生理条件下转化成正电荷基团的碱性基团取代的C₁-C₁₀烷基。

25.根据权利要求24的细菌叶绿素衍生物，其中R₉为H且R′₉为C₁-C₆烷基，其被至少一个正电荷基团-N⁺RR′R″或被至少一个碱性基团-NRR′取代，并且其任选被-N(R″)-基团中断；其中R和R′各自独立地为H、任选被NR″R″取代的C₁-C₆烷基、或吡啶基，或者R和R′共同与N原子形成进一步含有一个O、S或N原子的6元环，并且R″为H或C₁-C₆烷基。

26.根据权利要求24或25的细菌叶绿素衍生物，其中R₁为OH并且R₆为选自下列基团的-NHR′₉基：

(i)-NH-(CH₂)_n-NRR′或-NH-(CH₂)_n-N⁺RR′R″；

(ii)-NH-(CH₂)_n-N(R″)-(CH₂)_n-NRR′；

其中

X为O、S或NR；

R、R′和R″各自独立地为H或C₁-C₆烷基；

n为2-6的整数；和

m为1-3的整数。

27.根据权利要求26的细菌叶绿素衍生物，其选自化合物12和24-32：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺盐酸盐(化合物12)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N³-(三甲基铵乙基)酰胺乙酸盐(化合物24)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物25)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(-3-N²-二甲基氨基丙基)酰胺(化合物26)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物27)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-([2-二(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物28)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物29)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物30)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物31)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基)酰胺(化合物32)。

28.根据权利要求24或25的细菌叶绿素衍生物，其中R₁和R₆均为同样的基团-NHR′9，选自：

(i)-NH-(CH₂)_n-NRR′或-NH-(CH₂)_n-N⁺RR′R″；

(ii)-NH-(CH₂)_n-N(R″)-(CH₂)_n-NRR′；

其中

X为O、S或NR；

R、R′和R″各自独立地为H或C₁-C₆烷基；

n为2-6的整数；和

m为1-3的整数。

29.根据权利要求28的细菌叶绿素衍生物，其选自化合物4-11和33-45：

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物4)

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物5)

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-氨基丙基)酰胺(化合物6)

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-N³-三甲基铵丙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物7)

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(6-氨基己基)酰胺(化合物8)

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(6-N³-三甲基铵己基)酰胺二枸橼酸盐(化合物9)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物10)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二磷酸盐(化合物11)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N³-三甲基铵乙基)酰胺二乙酸盐(化合物33)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-氨基丙基)酰胺(化合物34)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(4-氨基丁基)酰胺(化合物35)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物36)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(3-N²-二甲基氨基丙基)酰胺(化合物37)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物38)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物39)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物40)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物41)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二-(3-[(3-氨基丙基)氨基]丙基)酰胺(化合物42)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二([2-二(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物43)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺(化合物44)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-N²-二乙基氨基乙基)酰胺(化合物45)。

30.根据权利要求24或25的细菌叶绿素衍生物，其中R₁为-NH-CH₂-CH(OH)-CH₂OH，并且R₆为基团-NHR′₉，选自：

(i)-NH-(CH₂)_n-NRR′或-NH-(CH₂)_n-N⁺RR′R″；

(ii)-NH-(CH₂)_n-N(R″)-(CH₂)_n-NRR′；

其中

X为O、S或NR；

R、R′和R″各自独立地为H或C₁-C₆烷基；

n为2-6的整数；和

m为1-3的整数。

31.根据权利要求39的细菌叶绿素衍生物，其选自化合物48、50、55、57、59-64、71和72：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物48)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物50)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物55)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物57)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-([2-二(2-氨基乙基)胺]乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物59)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物60)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(4-氨基丁基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物61)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二乙基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物62)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N-乙基氨基乙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物63)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-N-甲基氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物64)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(3-N-(2′-吡啶基)氨基丙基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物71)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(4-N-(2′-吡啶基)氨基丁基)酰胺-17³-(2，3-二羟基丙基)酰胺(化合物72)。

32.根据权利要求24或25的细菌叶绿素衍生物，其中R₆为-NH-CH₂-CH(OH)-CH₂OH，并且R₁为基团-NHR′₉，选自：

(i)-NH′-(CH₂)_n-NRR′或-NH-(CH₂)_n-N⁺RR′R″；

(ii)-NH-(CH₂)_n-N(R″)-(CH₂)_n-NRR′；

其中

X为O、S或NR；

R、R′和R″各自独立地为H或C₁-C₆烷基；

n为2-6的整数；和

m为1-3的整数。

33.根据权利要求32的细菌叶绿素衍生物，其选自化合物46、47、49、51-54、56、58、73和74：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-三甲基铵乙基)酰胺(化合物46)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-氨基乙基)酰胺(化合物47)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺(化合物49)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-[(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物51)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-[(2-N²-二乙基氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物52)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-吗啉代-N-乙基)酰胺(化合物53)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-哌嗪代-N-乙基)酰胺(化合物54)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(2-N-(2′-吡啶基)氨基乙基)酰胺(化合物56)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-([2-二(2-氨基乙基)氨基]乙基)酰胺(化合物58)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(3-N-(2′-吡啶基)氨基丙基)酰胺(化合物73)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2，3-二羟基丙基)酰胺-17³-(4-N-(2′-吡啶基)氨基丁基)酰胺(化合物74)。

34.根据权利要求12的细菌叶绿素衍生物，其中：

M为2H或Pd；

R′₂为OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基；

R₄为-COCH₃；

R₆为-NH-CH₂-CH₂-NRR′；和

R₁选自

-NH-(CH₂)_n-OH；

-NH-CH(OH)-CH₃；

-NH-(CH₂)_n-NR-(CH₂)_n-OH；或

-糖基氨基；

其中R和R′各自独立地为H、甲基或乙基；

并且n为2或3。

35.根据权利要求34的细菌叶绿素衍生物，其选自下列化合物65-70和75：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-羟基乙基)酰胺(化合物65)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(3-羟基丙基)酰胺(化合物66)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-羟基丙基)酰胺(化合物67)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-((R)-2-羟基丙基)酰胺(化合物68)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-((S)-2-羟基丙基)酰胺(化合物69)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(2-(2-羟基乙基氨基)乙基)酰胺(化合物70)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-N²-二甲基氨基乙基)酰胺-17³-(糖基)酰胺(化合物75)。

36.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H并且R′₉为被胍基或胍

基取代的C₁-C₆烷基。

37.根据权利要求36的细菌叶绿素衍生物，其中R₁和R₆是式-NH-(CH₂)_n-C(＝NH)-NH₂或-NH-(CH₂)_n-C(＝NH)N⁺(R)₃A^-的基团，其中R为C₁-C₆烷基，n为2、3或6，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

38.根据权利要求37的细菌叶绿素衍生物，其是下列化合物14和14a：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-胍基乙基)酰胺(化合物14)

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基胍乙基)酰胺(化合物14a)。

39.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-COCH₃；并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H并且R′₉为被锍基取代的C₁-C₆烷基。

40.根据权利要求48的细菌叶绿素衍生物，其中R₁和R₆独立地为式-NH-(CH₂)_n-S⁺(R)₂A^-的基团，其中n为2、3或6，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

41.根据权利要求35的细菌叶绿素衍生物，其是化合物15：

钯3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹-(2-S²-二甲基锍乙基)酰胺枸橼酸盐(化合物15)。

42.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H并且R′₉为被膦基或磷

基取代的C₁-C₆烷基。

43.根据权利要求42的细菌叶绿素衍生物，其中R₁和R₆独立地为式-NH-(CH₂)_n-P(R′₉)₂或-NH-(CH₂)_n-P⁺(R′₉)₃A^-的基团，其中R′₉是C_1-6烷基，n为2、3或6，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

44.根据权利要求43的细菌叶绿素衍生物，其是化合物17和18：

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-P³-三甲基磷基乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物17)，

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-二甲基膦基乙基)酰胺(化合物18)。

45.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-COCH₃，并且R₁和/或R₆为-NR₉R′₉，其中R₉为H并且R′₉为被砷

基团取代的C₁-C₆烷基。

46.根据权利要求45的细菌叶绿素衍生物，其中R₁和R₆独立地为式NH-(CH₂)_n-As⁺(R′₉)₃A^-的基团，其中R′₉是C_1-6烷基，n为2、3或6，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

47.根据权利要求46的细菌叶绿素衍生物，其是化合物19：

3¹-氧代-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-As³-三甲基砷乙基)酰胺二枸橼酸盐(化合物19)。

48.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-C(CH₃)＝NR₉，并且R₁和/或R₆为-NR′₉R″₉，其中R′₉为H并且R₉和R″₉各自独立地为被至少一个末端氨基取代的C₁-C₆烷基。

49.根据权利要求48的细菌叶绿素衍生物，其中R₄为-C(CH₃)＝N-(CH₂)_n-NH₂，R₁和R₆均为-NH-(CH₂)_n-NH₂，并且n为2、3或6。

50.根据权利要求49的细菌叶绿素衍生物，其是化合物20和21：

3¹-(氨基乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素-13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物20)

钯3¹-(氨基乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-氨基乙基)酰胺(化合物21)。

51.根据权利要求12的式II的细菌叶绿素衍生物，其中M为2H或Pd，R′₂为-OR₈其中R₈为C₁-C₆烷基，R₄为-C(CH₃)＝NR₉，R₁和/或R₆为-NR′₉R″₉，其中R′₉为H并且R₉和R″₉各自独立地为被至少一个正电荷基团取代的C₁-C₆烷基。

52.根据权利要求51的细菌叶绿素衍生物，其中所述的正电荷基团为式-N⁺(RR′R″)A^-的末端铵基，其中R、R′和R″各自独立地为C₁-C₆烷基，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

53.根据权利要求52的细菌叶绿素衍生物，其中R₄为-C(CH₃)＝N-(CH₂)_n-N(R)₃ ⁺A^-，R₁和R₆各自独立地为-NH-(CH₂)_n-N(C₁-C₆烷基)₃ ⁺A^-，其中R为C_1-6烷基，n为2、3或6，并且A^-为生理学可接受的阴离子。

54.根据权利要求53的细菌叶绿素衍生物，其是化合物22或23：

3¹-(三甲基铵乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基铵乙基)酰胺(化合物22)

钯3¹-(三甲基铵乙基亚胺基)-15-甲氧羰基甲基-玫瑰红菌绿素13¹，17³-二(2-三甲基铵乙基)酰胺(化合物23)。

55.根据权利要求1的细菌叶绿素衍生物，其是式I化合物。

56.根据权利要求1的细菌叶绿素衍生物，其是式III化合物。

57.一种药物组合物，其包含权利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物和药用载体。

58.一种药物组合物，其包含权利要求1-11任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物和药用载体。

59.一种药物组合物，其包含权利要求12-54任一项的式II的细菌叶绿素衍生物和药用载体。

60.根据权利要求58或59的药物组合物，其用于光动力学治疗。

61.根据权利要求60的药物组合物，其用于血管-靶向光动力学治疗(VTP)。

62.根据权利要求60的药物组合物，其用于肿瘤的光动力学治疗。

63.根据权利要求62的药物组合物，其用于恶性肿瘤的光动力学治疗，选自原发性和转移性肿瘤。

64.根据权利要求63的药物组合物，其用于黑色素瘤、前列腺、脑、头、颈、结肠、卵巢、乳房、起于乳腺癌的胸壁瘤、皮肤、肺、食道和膀胱癌的光动力学治疗。

65.根据权利要求62的药物组合物，其用于良性前列腺肥大的光动力学治疗。

66.根据权利要求60的药物组合物，其用于心血管疾病的治疗，选自冠状动脉疾病中的血管闭塞和血栓症、内膜增生、再狭窄和动脉粥样硬化斑块。

67.根据权利要求66的药物组合物，其用于预防或减轻冠状动脉造影术后的支架内再狭窄。

68.根据权利要求60的药物组合物，其用于皮肤疾病、紊乱和症状，选自痤疮、痤疮瘢痕化、牛皮癣、脚癣、肉赘、光化性角化病和葡萄酒色斑的治疗。

69.根据权利要求60的药物组合物，其用于眼科疾病、紊乱和症状，选自角膜和脉络膜新生血管以及年龄相关性黄斑退行性改变(AMD)的治疗。

70.根据权利要求60的药物组合物，其用于肿瘤诊断。

71.根据权利要求60的药物组合物，其用于杀灭细胞或者包括细菌和病毒的病原体。

72.根据权利要求71的药物组合物，其用于体外杀灭细胞，或者当照射生物制品时，用于体外杀灭在生物制品中的细菌和病毒的病原体。

73.根据权利要求72的药物组合物，其中所述的生物制品是血液。

74.权利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物在制备用于肿瘤光动力学治疗的药物组合物中的用途。

75.权利要求1-11任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物在制备用于肿瘤光动力学治疗的药物组合物中的用途。

76.权利要求12-54任一项的式II的细菌叶绿素衍生物在制备用于肿瘤光动力学治疗的药物组合物中的用途。

77.权利要求74的用途，其中所述药物组合物用于黑色素瘤、前列腺、脑、头、颈、结肠、卵巢、乳房、起于乳腺癌的胸壁瘤、皮肤、肺、食道或膀胱癌的光动力学治疗。

78.权利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物在制备用于年龄相关性黄斑退行性改变的光动力学治疗的药物组合物中的用途。

79.权利要求1-11任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物在制备用于年龄相关性黄斑退行性改变的光动力学治疗的药物组合物中的用途。

80.权利要求12-54任一项的式II的细菌叶绿素衍生物在制备用于年龄相关性黄斑退行性改变的光动力学治疗的药物组合物中的用途。

81.权利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物在制备用于预防或减轻冠状动脉造影术后心血管病人的支架内再狭窄的药物组合物中的用途。

82.权利要求81的用途，其中所述细菌叶绿素衍生物是权利要求1-11任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物。

83.权利要求81的用途，其中所述细菌叶绿素衍生物是权利要求12-54任一项的式II的细菌叶绿素衍生物。

84.利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物在制备用于治疗动脉粥样硬化症的药物组合物中的用途。

85.权利要求84的用途，其中所述细菌叶绿素衍生物是权利要求1-11任一项的式I、II或III的细菌叶绿素衍生物。

86.权利要求84的用途，其中所述细菌叶绿素衍生物是权利要求12-54任一项式II的细菌叶绿素衍生物。

87.权利要求1-56任一项的细菌叶绿素衍生物在制备用于肿瘤诊断的药物组合物中的用途。