KR101191700B1 - 양이온성 박테리오클로로필 유도체 및 이의 용도 - Google Patents

양이온성 박테리오클로로필 유도체 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유한 양이온성 테트라시클릭 및 펜타시클릭 박테리오클로로필 유도체 (Bchl), 바람직하게는 암모늄, 구아니디늄, 이미다졸륨, 피리디늄 등과 같은 N-함유 지방족 또는 헤테로시클릭 라디칼, 또는 포스포늄, 아르소늄, 옥소늄, 술포늄, 셀레노늄, 텔루로늄, 스티보늄, 또는 비스무토늄기로부터 유도된 오늄기, 또는 생리학적 조건 하에서 이러한 오늄기로 전환되는 염기성 기로서, 에스테르 또는 아미드 결합에 의해 Bchl 분자의 위치 173, 133 및 32 중 하나 이상에 결합되는 기를 갖는 Bchl 을 제공한다. 상기 Bchl 은 광역학 요법 및 진단에 유용하다.

Description

양이온성 박테리오클로로필 유도체 및 이의 용도 {CATIONIC BACTERIOCHLOROPHYLL DERIVATIVES AND USES THEREOF}
본 발명은 박테리오클로로필의 신규 수용성 양이온성 유도체, 이의 제조, 및 종양 및 다른 혈관 질환, 예컨대 연령-관련 황반 변성의 생체 내 광역학 요법 및 진단의 방법, 뿐만 아니라 바이러스 및 미생물의 생체 내 및 생체 외 사멸 방법에서의 이의 용도에 관한 것이다.
정의 및 약어: AMD : 연령-관련 황반 변성; Bchl : 박테리오클로로필 a (5th 이소시클릭 고리, 중심 Mg 원자, 위치 173 에서의 피틸 또는 게라닐게라닐기, 위치 132 에서의 COOCH3 기, 위치 132 에서의 H 원자, 위치 2, 7, 12, 18 에서의 메틸기, 위치 3 에서의 아세틸기, 및 위치 8 에서의 에틸기를 갖는 펜타시클릭 7,8,17,18-테트라히드로포르피린); Bchlorin : 박테리오클로린 (7,8,17,18-테트라히드로포르피린); Bphe : 박테리오페오피틴 a (중심 Mg 원자가 2 개의 H 원자로 대체된 Bchl); Bpheid: 박테리오페오포르바이드 a (Bphe 로부터 유도된 C-172-없는 카르복실산); Pd-Bpheid: Pd-박테리오페오포르바이드 a (중심 Pd 원자를 갖는 Bphe 로부터 유도된 C-172-없는 카르복실산); PDT : 광역학 요법; 로도박테리오클로린: 위치 17 에서 의 -CH2CH2COOH 기, 위치 13 에서의 COOH, 위치 2, 7, 12, 18 에서의 메틸기, 및 위치 3 및 8 에서의 에틸기를 갖는 Bchlorin.
Bchl 유도체의 IUPAC 번호매기기가 명세서 전반에서 사용된다. 이 명명법을 사용하면, 천연 Bchl 은 위치 132 및 172 에서 2 개의 카르복실산 에스테르를 지니지만, 이들은 위치 133 및 173 에서 에스테르화된다.
광역학 요법 (PDT) 은, 치료할 종양 또는 기타 조직에 섭취되어 그 안에 유지되는 무독성 감광제 (빛에 의해 활성화되는 약물) 의 투여에 이어, 원위치에서 세포독성 반응성 산소 종 (일중항 산소) 을 생성하는 특정 파장의 빛의 무해한 조사를 수행하는, 암 및 기타 질환의 치료를 위한 비-외과적 기술이다. 이 기술은 종양 조직에 대한 광활성화 가능성 화합물의 차별적인 축적 때문에, 그리고 공간적으로 한정된 광역학적 효과를 유발하는 종양을 향한 조절된 빛 전달에 기인하여, 통상의 화학요법 및 방사선요법보다 선택적이다.
임상에서는 포르피린이 주요 감광제로 이용되어 왔다. 빛에 의한 최적의 조직 침투는 외관상 650-800 nm 에서 발생하지만, 산 처리에 의해서 헤마토포르피린-IX 으로부터 수득되고, 식도 및 기관지 내 비-소세포 폐암 치료용으로 FDA 승인을 받은, 세계 최초로 승인된 광역학 요법제인 포르피머 나트륨 (Photofrin®, Axcan Pharma Inc. 의 상표) 은 약 620 nm 에서만 약하게 흡수하고, 단량체, 이량체 및 고급 올리고머의 복잡하고 분리될 수 없는 혼합물이다. 또한, Photofrin ® 및 기타 시험된 감광제는 주로 하기를 포함하는, 그들의 적용을 제한시키는 몇몇 결점을 갖고 있다: (1) 얇은 종양에 대한 치료를 제한시키는 가시 스펙트럼 범위 내에서의 상대적으로 약한 흡수; (2) 연장된 (수일 내지 수개월) 피부 광독성을 유발하는, 환자 피부에서의 감광제 축적 및 장기 체류; 및 (3) 조명된 종양 및 비-종양 조직 상 PDT 효과 사이의 작거나 심지어는 존재하지 않는 차별성. 이들 약점 및 고유의 문제점은 다수의 연구가, 장파장에서 흡수하고, 잘 확립된 구조를 가지며, 그들의 종양 세포에서의 체류와 피부 또는 기타 정상 조직에서의 체류 사이에서 보다 양호한 차별성을 나타내는 단일한 순수 화합물 - 소위 "2 세대" 감광제 - 의 합성에 전념하도록 하였다.
적당한 빛-민감성 분자, 또는 감광제에 대한 탐구에서, 박테리오클로로필이 PDT 요법에 대한 가장 일반적인 감광제인 Photofrin® 을 능가하는 일부 이점을 갖는 것으로 여겨졌다. 박테리오클로로필은 조명 시, 조직에 더 깊이 도달하는 빛을 야기시킴으로써, 보다 큰 종양에 더 효과적일 수 있다. 따라서 천연 Bchl 의 스펙트럼, 광물리학, 및 광화학은 이들이 PDT 치료에 현재 사용되거나 시험되는 다른 감광제를 능가하는 명백한 이점을 갖는 최적의 빛-수확 분자임을 나타낸다. 특히, 이들 분자는 장파장에서 매우 높은 소광 계수를 가지는데 (λmax = 760-780 nm, ε = (4-10) × 104 M-1cm-1), 여기서 빛은 조직 깊이 침투한다. 이들은 또한 반응성 산소 종 (ROS) 을 높은 양자 수율로 생성한다 (중심 금속에 의존하여).
Bchl 의 금속-없는 유도체의 생물학적 섭취 및 PDT 효능은 종양 세포 구획에 대한 감광제의 친화력을 촉진할 목적으로 연구되어 왔다. 이러한 접근에 대한 기본은, 한편으로는 종양 세포 내 약물의 축적을 증가시킬 수 있지만, 다른 한편으로는 종양 세포에 대한 그 전달을 어렵게 할 수 있는, 고도의 친유성 치환기의 사용이다. 또한, 약물 투여 후 연장된 기간 동안 비-종양 조직에서의 유의적인 광독성 약물 수준이 축적되는 것은 피해야 한다.
본 출원인의 이전 미국 특허 US 5,726,169, US 5,955,585 및 US 6,147,195 에서는, 발명자들에 의해 상이한 접근이 취해졌다. 투여 후 혈행으로부터 침출되지 않고 혈액 내 수명이 짧은, 매우 효과적인 항-혈관 감광제가 합성되었다. 정상 및 비정상 조직, 예컨대 종양 또는 신생혈관에 의존하는 기타 조직의 혈관 간 고유 차별성은 비정상 조직의 상대적으로 선택적인 파괴를 가능케 할 것으로 예상되었다. 따라서, 더 극성이어서 혈관 구획 내에 머무르며 여기서 주요한 광역학적 효과를 운반할 더 양호한 기회를 갖는 Bchl 유도체를 합성하는 것이 목적이었다. 천연 Bchl 의 17-프로피온산 잔기 부위에서의 조작은 감광제 친수성을 증진시키는, 아미노산, 펩티드 또는 단백질과 같은 다양한 잔기와의 접합체를 제공하였다. 이들 유도체 중 하나인 박테리오클로로필-세린의 혈관 표적화 활성, 뿐만 아니라 이의 혈행 및 동물 전신으로부터의 빠른 제거율, 피부 광독성의 결여 및 높은 치유 잠재성이 연구되었다 (Rosenbach-Belkin et al, 1996; Zilberstein et al., 1997; Zilberstein et al., 2001). 그러나, 이들 Mg-함유 화합물은 그들의 연장된 보관 시의 낮은 안정성에 기인하여 약학적 용도에 부적절한 것으로 밝혀졌다.
Bchl 유도체의 안정성을 증가시키기 위해서, 이후 본 출원인의 PCT 공보 WO 00/33833 및 대응하는 미국 특허 제 6,569,846 호에서는 중심 Mg 원자를 Pd 로 대체하였다. 상기 중원자는 Bchl 거대고리 (macrocycle) 의 산화 잠재성을 현저하게 증가시키고, 동시에 분자의 그 삼중항 상태에 대한 계간 교차 (ISC) 율을 크게 증진시키는 것으로 이미 나타나 있었다. 금속 대체는 WO 00/33833 에 기재된 바와 같이, Pd2 + 이온의 Bpheid 분자로의 직접 혼입에 의해서 수행되었다. 제 1 Pd-치환 Bchl 유도체인 팔라듐-박테리오페오포르바이드 또는 Pd-Bpheid (Tookad®, Steba Biotech 의 상표) 가 전-임상 연구에서 다양한 고형 종양에 대해 (Schreiber et al., 2002; Gross et al., 2003; Koudinova et al., 2003; WO 03/094695), 심지어 저항성 종양 세포를 포함하는 종양에 대해 (Preise et al., 2003) 매우 효과적인 것으로 밝혀졌다. Pd-Bpheid 의 항-혈관 활성은 개 모델에서 그들의 절제에 대한 양보 없이 전립샘 조직을 파괴하는 것을 가능케 하였다 (Chen et al., 2002). I/II 상 임상 시험은 Pd-Bpheid 가 방사선 요법에 실패한 환자에 있어서 전립선암의 광역학 요법에 사용하기에 안전하고 (Elhilali, 2004), 요법적 빛 및 약물 투여로 처리한 전립선 환자의 혈관발달 샘 조직의 괴사 및 PSA (전립선 특이 항원) 감소를 유도함 (Trachtenberg, 2003) 을 입증하였다.
수용액 중에서의 그 낮은 용해성으로 인해, Pd-Bpheid 의 임상적 사용은 높은 투여량에서 부작용을 야기할 수 있는 Cremophor 와 같은 용해제의 사용을 필요로 한다. 이는 본 발명자가 PCT/IL03/00973 (WO 2004/045492) 에 기재된, 둘 이상의 음이온성 잔기 및 2 또는 3 가 중심 금속 원자를 함유한 Bchlorin 거대고리로 이루어진 신규 부류의 Bchl 유도체를 착안하게 하였다. 이들 음이온성 Bchl 화합물은 첨가되는 부형제 없이 수용액에 용해 후 정맥 내 투여될 수 있다. 이들의 상대적으로 빠른 작용 및 매우 효과적인 항-혈관 활성과 조합된 혈행 내 짧은 수명은 항-혈관 PDT 제로서의 그 잠재성을 보여준다. 실제로, 이들 음이온성 Bchl 유도체 중 하나가 현재 연령-관련 황반 변성 (AMD) 및 간 종양, 예를 들면 헤파토마의 PDT 에 대해서 전-임상 연구 중에 있다.
DE 10154436 에는 광역학 요법에 사용하기 위한 박테리오페오포르바이드 화합물이 기재되어 있는데, 여기서 포르피린계의 위치 3a 또는 131 에서의 케토기 중 1 개 이상은 대응하는 이민으로 유도된다.
WO 03/028629 에는 광역학 요법 또는 진단을 위한, 양으로 하전된 암모늄 또는 이미늄기를 함유할 수 있는 클로로필 유도체가 기재되어 있다.
WO 03/028628 에는 광역학 요법 또는 진단을 위한, 화학식 -OCON< 또는 -OCON=C< 의 카르바메이트기를 포함하는 하나 이상의 관능기로 치환되고, 양으로 하전된 암모늄 또는 이미늄기를 임의로 함유한 테트라피롤 거대고리가 기재되어 있다. 상기 공보에 개시된 일반식은 박테리오클로로필 유도체를 포함하지만, 특정 박테리오클로로필 유도체는 개지되어 있지 않으며, 박테리오클로로필 유도체의 제조를 교시한 명세서도 존재하지 않음을 주목하여야 한다.
광역학 요법, 특히 혈관 표적화 광요법 (VTP) 에 사용하기 위한, 안정하고 내피 세포에 대한 증진된 친화성을 가지는 신규의 박테리오클로로필 유도체를 제공하는 것이 특히 바람직할 것이다.
발명의 요약
본 발명은 일 측면에서 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유한 박테리오클로로필 유도체에 관한 것인데, 단 상기 박테리오클로로필 유도체는 카르바메이트기를 포함하는 관능기를 갖지 않고, 박테리오클로로필 유도체가 피로박테리오페오포르바이드인 경우에는, 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기가 박테리오클로로필 분자의 위치 3a 또는 131 에서의 이민기가 아니다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 추가적으로 앞서 정의한 바와 같은 Bchl 유도체 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것인데, 이들 조성물은 광역학 요법 (PDT), 특히 혈관-표적화 PDT, 예를 들면 종양의 PDT 에 유용하고, 뿐만 아니라 연령-관련 황반 변성 (AMD), 심혈관 질환 및 피부 질환, 예컨대 여드름 및 건선 치료에서의 비-종양학적 용도로도 유용하다. 또한, 상기 조성물은 생체 내 및 시험관 내에서 그램-음성 또는 그램-양성 박테리아 및 바이러스를 포함하는 감염원을 사멸시키기 위해, 뿐만 아니라 진단 목적을 위해 사용될 수 있다.
본 발명은 보다 추가적으로 감광제를 사용한 광역학 요법에 대한 개선된 방법에 관한 것인데, 여기서 개선점은 본 발명의 Bchl 유도체를 감광제로서 사용하는 것으로 이루어진다. 이 측면에 따르면, 본 발명은 PDT 에 의한 치료 방법에 관한 것인데, 이는 이것이 필요한 개체에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 국소 조사하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, PDT 에 의한 치료 방법은 종양을 겪고 있는 개체에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 국소 조사하는 것을 포함한다.
또 다른 구현예에서, PDT 에 의한 치료 방법은 연령-관련 황반 변성을 겪고 있는 개체에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 국소 조사하는 것을 포함한다.
추가 구현예에서, 본 발명은 관상동맥 조영술을 받은 심혈관 질환을 겪고 있는 개체에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 국소 조사하는 것을 포함하는, 스텐트 내 재협착의 방지 또는 감소 방법을 제공한다.
본 발명은 보다 추가적으로 감광제를 사용한 종양 진단에 대한 개선된 방법을 제공하는데, 여기서 개선점은 본 발명의 Bchl 유도체를 감광제로서 사용하는 것으로 이루어진다. 이 측면에 따르면, 본 발명은 종양을 가질 것으로 의심되는 개체에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 국소 조사하는, 예를 들면 단파장 (예를 들면, X-선), 광학 주파수 방사선을 고려하기 위한 중파장 (예를 들면, UV/VIS/근-IR), 및 예를 들면, 핵 또는 전자 상자성 공명 신호를 가능케 하는 장파장 (예를 들면, 무선주파수 방사선) 을 포함하는 상이한 파장의 전자기 방사선에 의해 교란하는 것을 포함하는 종양 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명은 보다 추가적으로 감광제를 사용한, 박테리아 및 바이러스를 포함 하는 감염원 또는 세포의 사멸에 대한 개선된 방법을 제공하는데, 여기서 개선점은 본 발명의 Bchl 유도체를 감광제로서 사용하는 것으로 이루어진다. 이 측면에 따르면, 본 발명은 생물학적 생성물, 예를 들면 혈액의 멸균 방법에 관한 것인데, 이는 상기 생물학적 생성물, 예를 들면 혈액에 유효량의 본 발명의 Bchl 유도체를 투여한 후 조사하는 것을 포함한다.
시험된 상이한 화합물은 하기 도면의 설명에서 밑줄 친 굵은 숫자로 나타낸다. 그들의 완전한 정체는 이하의 실시예 중 화학 단락 도입부의 화합물 목록 및 부록에 나타낸다.
도 1 은 메탄올 중 화합물 5 의 형광 방출 스펙트럼을 나타낸다.
도 2 는 증가되는 농도의 인간 혈청 알부민 (HSA) 을 포함하는 포스페이트-완충 식염수 (PBS) 중 화합물 5 의 흡수 스펙트럼을 도시한 것이다 (λex = 520 nm).
도 3A-3C 는 H5V 내피 세포 상 화합물 5 , 7 , 9 , 및 11 의 광독성을 나타낸 그래프이다. 도 3A: 증가되는 농도의 화합물 5 및 11 과의, 세포의 90 분 인큐베이션 후의 광독성. 도 3B: 증가되는 농도의 화합물 5 , 7 및 9 와의 2 시간 인큐베이션 후의 광독성. 도 3C: 화합물 5 (50 μM) 와의 1-10 분 인큐베이션 후의 광독성. 세포는 지시된 농도의 화합물과 함께 암흑 속에서 인큐베이션하고, 세척하고, 10 분 동안 조명하거나 (도 3A-B 에서의 개방형, 도 3C 에서의 폐쇄 형) 암흑 속에 유지시킨다 (암흑 대조군, 도 3A-B 에서의 폐쇄형). 3 중 측정을 수행하여 대표적인 실험을 나타낸다.
도 4 는 Wistar 래트 혈액에서의 화합물 5 의 약물동력학을 나타낸 그래프이다. 화합물 5 의 정맥 내 (i.v.) 주사 (0.6 mg/kg) 에 이어, 동일한 래트로부터 주사 후 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45 분 및 1, 2, 6, 24 시간째에 혈액 샘플을 수집하고, 형광 방출 스펙트럼을 기록하였다. 각 시점은 3 마리 래트의 평균 ± STD 를 나타낸다.
도 5A-5B 는 Wistar 래트에서의 화합물 5 의 생체분포를 나타낸다. 래트를 화합물 5 의 i.v. 주사 (0.6 mg/kg) 후 30 분 (도 5A) 또는 24 시간 (도 5B) 째에 희생시키고, 지시된 장기 및 조직의 형광 방출 스펙트럼을 기록하고 약물동력학적 데이터로 표준화시켰다.
도 6A-6C 는 화합물 5 로 i.v. 처리한, C6 신경교종 이종이식체를 지닌 마우스에서의 PDT 의 국소 효과를 나타낸 사진이다. CD1 수컷 누드 마우스를 0.3 mg/kg 의 5 로 처리하고, 755 nm 레이저 (80 mW/cm2) 로 15 분 동안 조명하였다. 도 6A: 0, 4, 14, 21 및 32 일째의, PDT-처리 동물의 종양 부위 사진. 도 6B: 0 및 10 일째의, 암흑 대조군 마우스 ( 5 를 주사하였지만 조명하지는 않음) (n = 3) 의 종양 부위 사진; 도 6C: 0 및 10 일째의, 빛 대조군 마우스 ( 5 와 동등한 부피의 식염수를 주사하고 조명함) (n = 2) 의 종양 부위 사진.
도 7 은 화합물 5 와 함께 PDT 처리한, C6 신경교종 이종이식체를 지닌 마우 스의 생존 가능성을 나타낸다. C6 신경교종 이종이식체를 지닌 마우스 (n = 17) 에 화합물 5 (0.3 mg/g) 를 i.v. 주사하고, 바로 15 분 동안 80 mW/cm2 의 빛 세기로 조명하였다 (완전 처리군, n = 12, 정사각형). 대조군: 비처리 종양을 지닌 마우스 (n = 2, 원형), 암흑 대조군 (n = 3, 다이아몬드형), 빛 대조군 (n = 2, 삼각형). * 종양 부피 < 2 ml 의 가능성.
도 8A-8D 는 그램-양성 및 그램-음성 박테리아 상 음으로 하전된 박테리오클로로필 유도체 (실시예 22 참조) 및 화합물 5 의 광독성을 나타낸 그래프이다. 그램-양성 (St. albus, 도 8A, 8B) 및 그램-음성 (E. coli, 도 8C, 8D) 박테리아를 지시된 농도의 음으로 하전된 박테리오클로로필 유도체 (도 8A, 8C) 또는 화합물 5 (도 8B, 8D) 와 함께 1 시간 동안 인큐베이션하고, 15 분 동안 70 mW/cm2 로 조명하였다. 박테리아 생존율을 콜로니 계수에 의해서 측정하였다. 3 중 측정을 수행하여 대표적인 실험을 나타낸다.
도 9A-9E 는 각각 화합물 28 , 32 , 10 , 36 , 및 75 의, 신장 세포 암종 (RCC) 이종이식체를 지닌 누드 마우스의 몇몇 장기에서의 생체분포를 나타낸 그래프이다. 래트에 등장성 만니톨 중 시험 화합물의 용액 (1.5 mg/kg) 을 상이한 시점에 주사하였다.
본 발명은, Tookad® (Pd-Bpheid) 및 수용성 음이온성 Bchl 유도체 (WO 2004/045492 에 기재된 것) 의 전-임상 연구가 동물 모델에서 흑색종, 신경교종, 인간 전립선 이종이식체, 정상 개 전립선 및 DS 육종 같은 몇몇 고형 종양의 PDT 에서의 높은 효능을 증명하였고 (Chen et al., 2002; Schreiber et al., 2002; Gross et al., 2003; Kelleher et al., 2003; Koudinova et al., 2003; Mazor et al., 2003; Plaks et al, 2004), 내피 세포, 세포 외 매트릭스 및 가능하게는 혈소판이 주요 광역학 작용의 가능한 후보임을 지시한 본 발명자들의 관찰로부터 유도된다.
전술한 Bchl 유도체에 대해서, 종양 세포 상 조명 동안에 형성된 활성 산소 종 (ROS) 의 직접 작용에 대한 증거는 발견될 수 없었다 (Gross et al., 2003). 따라서, 관찰된 높은 치유 비율은 종양 내피의 광역학적 상해가 완전한 종양 반응을 부여하기에 충분할 수 있음을 지시하는 것으로 여겨졌다. 이러한 관찰에 따라, 본 발명자들은 종양 및 기타 혈관-의존성 질환에 특징적인 내피 세포, 특히 신생내피 세포에 대한 감광제의 친화성을 증진시키는 방법을 탐구하였다. 적절한 표적은 내피 천공, 코팅된 피트 (pit), 고유의 원형질막 (plasmalemma proper) 및 소낭 (Simionescu et al,. 1981; Ghinea and Simionescu, 1985; Hamblin et al., 1999), 섬유아세포 성장 인자 수용체 (Segev et al., 2002), 내피 글리코칼릭스 (음으로 하전된 막-결합 프로테오글리칸, 글리코사미노글리칸, 당단백질, 및 당지질의, 일부는 술폰기를 함유한 고도로 수화된 망상조직), 및 혈관신생 내피 세포 (Thurston et al., 1998; Dellian et al., 2000) 상을 포함하는 내피 상의 고도로 밀집된 음전하로 확인되었다. 또한, 최근의 공보는 종양 내피, 예를 들면, 호지킨스 임파종 (Hodgkins limphoma), 인간 비-소세포 폐 암종, 마우스 섬유육종, 인간 유방 암종 및 흑색종의 표면 상 음이온성 인지질의 증가된 노출을 지적하였다 (Ran et al., 2002). 종양 내피에서의 음이온성 부위 수 증가는 종양 요법에 매력적인 표적을 제공한다.
본 발명은 광대한 측면에서 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유한 박테리오클로로필 유도체에 관한 것인데, 단 상기 박테리오클로로필 유도체는 카르바메이트기를 포함하는 관능기를 함유하지 않고, 박테리오클로로필 유도체가 피로박테리오페오포르바이드인 경우에는, 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기가 박테리오클로로필 분자의 위치 3a 또는 131 에서의 이민기가 아니다.
일 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 하나 이상의 양으로 하전된 기, 더 바람직하게는 N-함유 기로부터 유도된 양이온을 함유한다.
바람직한 구현예에서, 하나 이상의 양으로 하전된 기는 암모늄 -N+(RR'R"), 히드라지늄 -(R)N-N+(R'R"), 암모늄옥시 O←N+(RR')-, 이미늄 >C=N+(RR'), 아미디늄 -C(=RN)-N+R'R" 또는 구아니디늄 -(R)N-C(=NR)-N+R'R" 기 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 와 같지만 이에 제한되는 것은 아닌 N-함유 기로부터 유도된 양이온이다. 양으로 하전된 N-함유 기는 Bchl 분자의 말단 기, 히드로카르빌 사슬 내 기 또는 이하에 정의되는 바와 같은, N 이 양자화된 포화 고리의 일부일 수 있음을 이해하여야 한다. 또한, 하나 이상의 양으로 하전된 기는 이하에 정의되는 바와 같은, N-함유 헤테로방향족 라디칼로부터 유도된 양이온일 수도 있다.
바람직한 일 구현예에서, 박테리오클로로필 유도체는 화학식 -N+(RR'R") [식 중 각각의 R, R' 및 R" 은 독립적으로 H, 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬, 또는 헤테로시클릴이다] 의 암모늄기를 함유한다. -N+(RR'R") 암모늄기는 2 차 암모늄기 [식 중 라디칼 R, R' 또는 R" 중 임의의 2 개는 H 이다], 3 차 암모늄기 [식 중 라디칼 R, R' 또는 R" 중 1 개만 H 이다], 또는 4 차 암모늄 [식 중 라디칼 R, R' 또는 R" 중 어느 것도 H 가 아니다] 일 수 있다. 암모늄기는 말단 기 또는 히드로카르빌, 바람직하게는 알킬 사슬 내 기일 수 있다. 바람직하게는, 암모늄기는 R, R' 및 R" 이 각각 독립적으로 C1-C6 알킬인 4 차 암모늄기이다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 박테리오클로로필 유도체는 화학식 -N+(RR'R") [식 중 R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, O, S 또는 N 원자로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 의 시클릭 암모늄기를 함유한다. 이러한 시클릭 암모늄기의 예에는 아지리디늄, 피롤리디늄, 피페리디늄, 피페라지늄, 모르폴리늄, 티오모르폴리늄, 아제피늄 등이 포함된다.
추가 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 이하에 정의되는 바와 같은, O, S 또는 부가의 N 원자를 추가로 함유할 수 있는 모노- 또는 폴리시클릭 화합물일 수 있는 N-헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온을 함유한다.
보다 또 다른 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 포스포늄 [-P+(RR'R")], 아르소늄 [-As+(RR'R")], 옥소늄 [-O+(RR')], 술포늄 [-S+(RR')], 셀레노늄 [-Se+(RR')], 텔루로늄 [-Te+(RR')], 스티보늄 [-Sb+(RR'R")], 또는 비스무토늄 [-Bi+(RR'R")] 기 [식 중 각각의 R, R' 및 R" 는 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이다] 와 같지만 이에 제한되는 것은 아닌 N 을 함유하지 않은 오늄기를 함유한다. 바람직한 구현예에서, R, R' 및 R" 은 H, C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 펜틸 또는 헥실, 아릴기, 바람직하게는, 페닐, 또는 아르알킬기, 예컨대 벤질 및 페네틸이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유한다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "생리학적 조건" 은 신체의 상이한 조직 및 세포 구획에서의 조건을 가리킨다.
일 구현예에서, 염기성 기는 화학식 -N(RR') [식 중 각각의 R 및 R' 은 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이다] 의 아미노기이다. -N(RR') 아미노기는 2 차 아미노 [식 중 R 및 R' 중 1 개만 H 이다], 또는 3 차 아미노 [식 중 R 및 R' 중 어느 것도 H 가 아니다] 일 수 있거나, 시클릭 아미노 [식 중 R 및 R' 은 N 원자와 함께, O, S 또는 N 원자로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는, 이하에 정의되는 바와 같은 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 이다. 염기성 아미노기는 분자의 말단 기, 히드로카르빌 사슬 내 기 또는 N-함유 3-7 원 포화 고리, 예컨대 아지리딘, 피롤리딘, 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, 티오모르폴린, 아제핀 등의 일부일 수 있음을 이해하여야 한다.
생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는, 본 발명에 따라 사용할 수 있는 추가 염기성 기는 명세서 내에서 이하에 정의될 것이다.
보다 또 다른 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 둘 다 함유한다.
본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 박테리오클로로필 a 또는 b 와 같은 천연 박테리오클로로필, 또는 거대고리, 중심 금속 원자 및/또는 말단부를 변형시킨 화합물을 포함하는 박테리오클로로필의 합성 비-천연 유도체로부터 유도될 수 있다. 중심 Mg 원자는 부재하거나 2 가 Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn 또는 Mn, 또는 3 가 Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb 또는 Cr 과 같은 다른 금속 원자로 대체될 수 있다. 본 발명에 따르면, 중심 금속 원자는 바람직하게는 부재하거나 Pd 이다.
바람직한 일 구현예에서, 본 발명은 화학식 I, II 또는 III 의 박테리오클로로필 유도체:
Figure 112006090541425-pct00001
[식 중
M 은 2H, Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn 및 Mn 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 가 금속 원자, 또는 Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb 및 Cr 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 3 가 금속 원자를 나타내고;
R1, R'2 및 R6 는 각각 독립적으로 Y-R8, -NR9R'9 또는 -N+R9R'9R"9A- 이고;
Y 는 O 또는 S 이고;
R2 는 H, OH 또는 COOR9 이고;
R3 는 H, OH, C1-C12 알킬 또는 C1-C12 알콕시이고;
R4 는 -CH=CR9R'9, -CH=CR9Hal, -CH=CH-CH2-NR9R'9, -CH=CH-CH2-N+R9R'9R"9A-, -CHO, -CH=NR9, -CH=N+R9R'9A-, -CH2-OR9, -CH2-SR9, -CH2-Hal, -CH2-R9, -CH2-NR9R'9, -CH2-N+R9R'9R"9A-, -CH2-CH2R9, -CH2-CH2Hal, -CH2-CH2OR9, -CH2-CH2SR9, -CH2-CH2-NR9R'9, -CH2-CH2-N+R9R'9R"9A-, -COCH3, C(CH3)=CR9R'9, -C(CH3)=CR9Hal, -C(CH3)=NR9, -CH(CH3)=N+R9R'9A-, -CH(CH3)-Hal, -CH(CH3)-OR9, -CH(CH3)-SR9, -CH(CH3)-NR9R'9, -CH(CH3)-N+R9R'9R'9A- 또는 -C≡CR9 이고;
R5 는 =O, =S, =N-R9, =N+R9R'9A-, =CR9R'9, 또는 =CR9-Hal 이고;
R7, R8, R9, R'9 및 R"9 은 각각 독립적으로
(a) H;
(b) C1-C25 히드로카르빌;
(c) 할로겐, 니트로, 옥소, OR, SR, 에폭시, 에피티오, -CONRR', -COR, COOR", -OSO3R, -SO3R", -SO2R, -NHSO2R, -SO2NRR', =N-OR, -(CH2)n-CO-NRR', -O-(CH2)n-OR, -O-(CH2)n-O-(CH2)n-R, -OPO3RR', -PO2HR, 및 -PO3R"R" (식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이고, R" 은 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이다) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬;
(d) 양으로 하전된 기, 음으로 하전된 기, 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 염기성 기, 및 생리학적 조건 하에서 음으로 하전된 기로 전환되는 산성 기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬;
(e) 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 하나 이상의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬;
(f) 상기 (c) 및 (d) 에서 정의한 바와 같은 하나 이상의 관능기로 치환되는, 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 하나 이상의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬;
(g) 아미노산, 펩티드, 단백질, 단당류, 올리고당류, 또는 다당류의 잔기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬; 또는
(h) 아미노산, 펩티드, 단백질, 단당류, 올리고당류, 또는 다당류의 잔기이고;
R1, R'2 및 R6 이 각각 독립적으로 Y-R8 인 경우 R8 은 추가로 H+ 또는 양이온 R+ 10 일 수 있고;
R+ 10 은 금속, 암모늄기 또는 유기 양이온이고;
A- 는 생리학적 허용성 음이온이고;
m 은 0 또는 1 이다]; 및
이의 약학적 허용성 염 및 광학 이성질체를 제공하는데;
단, 화학식 I 에서 R2 및 R3 가 둘 다 H 인 경우, R5 는 =N-R9 이 아니고/거나 R4 는 -C(CH3)=NR9 이 아니고; 추가로 화학식 I, II 또는 III 의 박테리오클로로필 유도체는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 가진다.
본원에 정의한 바와 같은, A- 는 생리학적 허용성 음이온, 예컨대 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 퍼클로레이트, 술페이트, 포스페이트 또는 유기 음이온, 예컨대 아세테이트, 벤조에이트, 카프릴레이트, 시트레이트, 락테이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 옥살레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 토실레이트 등이다.
"할로겐" 이라는 용어는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 아이오도를 가리킨다.
R7, R8, R9, R'9, 및 R"9 에 대해 정의한 바와 같은, "C1-C25 히드로카르빌" 이라는 용어는 탄소수 1-25, 바람직하게는 1 내지 20, 더 바람직하게는 1 내지 6 의 직쇄형 또는 분지형, 포화 또는 불포화, 비-시클릭 또는 시클릭 (방향족 포함) 의, 히드로카르빌 라디칼을 나타낸다.
바람직한 일 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌은 직쇄형 또는 분지형 C1-C25 알킬 라디칼, 바람직하게는 C1-C10, 더 바람직하게는 C1-C6 알킬, 예를 들면 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 및 헥실이다. 또 다른 구현예에서, 알킬기의 탄소수는 10 이상인데, 예를 들면 -C10H21, -C15H31, -C16H33, -C17H35, -C18H37, -C20H41 등이다. R1 이 -OR8 인 경우, R8 은 또한 천연 클로로필 또는 박테리오클로로필 화합물의 위치 173 에 존재하는 알케닐기인, 게라닐게라닐 (2,6-디메틸-2,6-옥타디에닐) 또는 피틸 (2,6,10,14-테트라메틸-헥사데크-14-엔-16-일) 라디칼일 수 있다.
또 다른 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌은 바람직하게는 탄소수 2-6 의 직쇄형 또는 분지형 C2-C25 알케닐 또는 알키닐 라디칼, 예를 들면 비닐, 프로프-2-엔-1-일, 부트-3-엔-1-일, 펜트-4-엔-1-일, 헥스-5-엔-1-일, 에티닐, 프로파르길 등이다.
보다 또 다른 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌은 C3-C25 모노시클릭 또는 폴리시클릭 시클로알킬, 바람직하게는 C3-C14, 더 바람직하게는 C3-C7 시클로알킬, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 및 시클로헵틸이다.
추가 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌은 모노시클릭 또는 폴리시클릭 아릴 라디칼, 바람직하게는 C6-C18, 더 바람직하게는 C6-C14 아릴, 예컨대 페닐, 나프틸, 카르바졸릴, 안트릴, 플루오레닐, 인다닐, 및 페난트릴이다.
보다 추가적인 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌은 아르알킬 라디칼인데, 여기서 아릴 라디칼은 바람직하게는 C6-C18, 더 바람직하게는 C6-C14 아릴, 예컨대 페닐 또는 나프틸이고, 더 바람직하게는 벤질 또는 페네틸이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "카르보시클릭 부분" 이라는 용어는 고리(들) 내에 오직 탄소 원자만을 함유한 모노시클릭 또는 폴리시클릭 화합물을 가리킨다. 카르보시클릭 부분은 포화, 즉 앞서 정의한 바와 같은 시클로알킬, 또는 불포화, 즉 시클로알케닐, 또는 방향족, 즉 앞서 정의한 바와 같은 아릴일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "알콕시" 라는 용어는 (C1-C25)알킬-O- 기 [식 중 C1-C25 알킬은 앞서 정의한 바와 같다] 를 가리킨다. 알콕시의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, 이소부톡시, tert-부톡시, 펜톡시, 헥속시, -OC15H31, -OC16H33, -OC17H35, -OC18H37 등이다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "아릴옥시" 라는 용어는 (C6-C18)아릴-O- 기 [식 중 C6-C18 아릴은 앞서 정의한 바와 같다], 예를 들면, 페녹시 및 나프톡시를 가리킨다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "헤테로아릴" 또는 "헤테로시클릭 부분" 또는 "헤테로방향족" 또는 "헤테로시클릴" 이라는 용어는, O, S 및 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 3 개의 헤테로원자를 함유한 모노- 또는 폴리-시클릭 헤테로방향족 고리로부터 유도된 라디칼을 의미한다. 특정한 예는 피롤릴, 푸릴, 티에닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 1,3,4-트리아지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐, 벤조푸릴, 이소벤조푸릴, 인돌릴, 이미다조[1,2-a]피리딜, 벤즈이미다졸릴, 벤즈티아졸릴 및 벤즈옥사졸릴이다.
임의의 "카르보시클릭", "아릴" 또는 "헤테로아릴" 은 할로겐, C6-C14 아릴, C1-C25 알킬, 니트로, OR, SR, -COR, -COOR, -SO3R, -SO2R, -NHSO2R, -NRR', -(CH2)n-NR-COR', 및 -(CH2)n-CO-NRR' 과 같은 하나 이상의 라디칼로 치환될 수 있다. 폴리시클릭 헤테로방향족 고리가 치환되는 경우, 치환기는 카르보시클릭 및/또는 헤테로시클릭 고리 중 임의의 것에 존재할 수 있음을 이해하여야 한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "양으로 하전된 기" 는 N-함유 기 또는 N 을 함유하지 않은 오늄기로부터 유도된 양이온을 표시한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "N-함유 기로부터 유도된 양이온" 은, 예를 들면, 암모늄 -N+(RR'R"), 히드라지늄 -(R)N-N+(R'R"), 암모늄옥시 O←N+(RR')-, 이미늄 >C=N+(RR'), 아미디늄 -C(=RN)-N+R'R" 또는 구아니디늄 -(R)N-C(=NR)-N+R'R" 기 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌, 바람직하게는 본원에 정의한 바와 같은 C1-C6 알킬, 페닐 또는 벤질, 또는 헤테로시클릴이거나, 암모늄기에서 R, R' 및 R" 중 1 개는 OH 일 수 있거나, 암모늄기에서의 R, R' 및 R" 중 2 개 또는 히드라지늄, 암모늄옥시, 이미늄, 아미디늄 또는 구아니디늄기에서의 R 및 R' 은 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 를 표시하지만, 이에 제한되는 것은 아니거나, 상기 양이온은 헤테로방향족 고리 내에 하나 이상의 N 원자를 함유한 화합물로부터 유도된다.
더 바람직한 일 구현예에서, 박테리오클로로필 유도체는 화학식 -N+(RR'R") [식 중 각각의 R, R' 및 R" 은 독립적으로 H 또는 앞서 정의한 바와 같은 임의 치환 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이거나, 이들 중 1 개는 OH 일 수 있다] 의 암모늄기를 함유한다. 암모늄기인 -N+(RR'R") 는 2 차 암모늄 [식 중 라디칼 R, R' 또는 R" 중 임의의 2 개는 H 이다]; 3 차 암모늄 [식 중 R, R' 또는 R" 중 1 개만 H 이다]; 또는 4 차 암모늄 [식 중 각각의 R, R' 또는 R" 은 앞서 정의한 바와 같은 임의 치환 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴기이다] 일 수 있다. R, R' 또는 R" 중 1 개가 OH 인 경우, 상기 기는 히드록실암모늄기이다. 바람직하게는, 암모늄기는 R, R' 및 R" 각각이 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 헥실인 4 차 암모늄기이다. 앞서 언급한 바와 같이, 암모늄기는 분자 내 말단 기일 수 있거나, 분자 내 알킬 사슬에서 발견될 수 있다.
히드라지늄 -(R)N-N+(R'R"), 아미디늄 -C(=NR)-N+R'R" 및 구아니디늄 -(R)N-C(=NR)-N+R'R" 기에서, R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H 또는 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴일 수 있거나, R' 및 R" 은 이들이 부착된 N 원자와 함께, 본원에 정의한 바와 같은 3-7 원 포화 고리를 형성한다. 이러한 기의 예에는 R 은 H 이고, R' 및 R" 각각은 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 헥실인 것이 포함된다.
암모늄옥시 O←N+(RR')- 및 이미늄 >C=N+(RR') 기에서, R 및 R' 은 각각 독립적으로 H 또는 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C6 알킬, 또는 헤테로시클릴이거나, R 및 R' 은 이들이 부착된 N 원자와 함께, 본원에 정의한 바와 같은 3-7 원 포화 고리를 형성한다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 박테리오클로로필 유도체는 화학식 -N+(RR'R") [식 중 R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, 이하에서 정의되는 바와 같은 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 의 시클릭 암모늄기를 함유한다.
본원에 정의한 바와 같이, R, R' 및 R" 중 2 개가 이들이 부착된 N 원자와 함께 형성한 "3-7 원 포화 고리" 는 N 만을 함유한 고리, 예컨대 아지리딘, 피롤리딘, 피페리딘, 피페라진 또는 아제핀일 수 있거나, 모르폴린 또는 티오모르폴린과 같이 O 및 S 로부터 선택되는 추가의 헤테로원자를 함유할 수 있다. 피페라진 고리 내 추가의 N 원자는 할로, OH 또는 아미노로 치환될 수 있는 알킬, 예를 들면 C1-C6 알킬로 임의 치환될 수 있다. 상기 포화 고리로부터 유도된 오늄기에는 아지리디늄, 피롤리디늄, 피페리디늄, 피페라지늄, 모르폴리늄, 티오모르폴리늄 및 아제피늄이 포함된다.
본원에 정의한 바와 같은 "N-함유 헤테로방향족 라디칼로부터 유도된 양이온" 은 O, S 또는 부가의 N 원자를 임의로 함유한 모노- 또는 폴리시클릭 화합물일 수 있는 N-헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온을 표시한다. 양이온이 유도된 고리는 하나 이상의 N 원자를 함유하여야 하고, 방향족이어야 하지만, 존재한다면, 다른 고리(들)는 부분적으로 포화될 수 있다. N-헤테로방향족 양이온의 예에는 피라졸륨, 이미다졸륨, 옥사졸륨, 티아졸륨, 피리디늄, 피리미디늄, 퀴놀리늄, 이소퀴놀리늄, 1,2,4-트리아지늄, 1,3,5-트리아지늄 및 푸리늄이 포함된다.
하나 이상의 양으로 하전된 기는 또한 포스포늄 [-P+(RR'R")], 아르소늄 [-As+(RR'R")], 옥소늄 [-O+(RR')], 술포늄 [-S+(RR')], 셀레노늄 [-Se+(RR')], 텔루로늄 [-Te+(RR')], 스티보늄 [-Sb+(RR'R")], 또는 비스무토늄 [-Bi+(RR'R")] 기 [식 중 각각의 R, R' 및 R" 은 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴, 바람직하게는 C1-C6 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실, 또는 아릴, 바람직하게는, 페닐이다] 와 같지만 이에 제한되는 것은 아닌, 질소를 함유하지 않은 오늄기일 수 있다.
화학식 -P+(RR'R") 의 포스포늄기의 예에는 R, R' 및 R" 각각이 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 페닐이거나, R 은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 헥실이고, R' 및 R" 은 둘 다 페닐인 기가 포함된다. 화학식 -As+(RR'R") 의 아르소늄기의 예에는 R, R' 및 R" 각각이 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 페닐인 기가 포함된다. 화학식 -S+(RR') 의 술포늄기의 예에는 R 및 R' 각각이 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 페닐, 벤질, 페네틸, 또는 치환 히드로카르빌기인 기가 포함된다.
본원에 정의한 바와 같은, "생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 염기성 기" 는, 적어도 이론적으로는, 생리학적 조건 하에서 본원에 정의한 바와 같은 양으로 하전된 기를 생성할 임의의 염기성 기이다. 본원에서 사용되는 바와 같은, 생리학적 조건은 단독으로 혈청을 가리키는 것이 아니라, 신체 내 상이한 조직 및 세포 구획을 가리킴에 주의한다.
이러한 N-함유 염기성 기의 예에는, 이에 제한됨 없이, 모두 본원에 정의한 바와 같은 것인, 암모늄기를 생성할 임의의 아미노기, 이미늄기를 생성할 임의의 이민기, 히드라지늄기를 생성할 임의의 히드라진기, 암모늄옥시기를 생성할 임의의 아미노옥시기, 아미디늄기를 생성할 임의의 아미딘기, 구아니디늄기를 생성할 임의의 구아니딘기가 포함된다. 다른 예에는 포스피노 및 메르캅토기가 포함된다.
따라서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기, 예컨대 -NRR', -C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", O←NR-, 또는 >C=NR [식 중 각각의 R, R' 및 R" 은 독립적으로 H, 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 또는 C1-C6 알킬, 또는 헤테로시클릴이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, O, S 또는 N 원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성하고, 또는 상기 염기성 기는 N-함유 헤테로방향족 라디칼이다] 를 함유할 수 있다.
3-7 원 포화 고리는 할로, 히드록실 또는 아미노로 임의 치환되는 C1-C6 알킬에 의해, 부가의 N 원자에서 임의 치환되는 아지리딘, 피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 티오모르폴린, 아제핀 또는 피페라진일 수 있고, N-함유 헤테로방향족 라디칼은 피라졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리미딜, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐 또는 푸리닐일 수 있다.
본원에 정의한 바와 같은, R+ 10 은 암모늄, 금속, 바람직하게는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속, 예컨대 Na, K, Li, Ca, Ba 의 양이온, 또는 "N-함유 기로부터 유도된 양이온" 에 대해 본원에 정의한 바와 같은 유기 양이온일 수 있다.
본원에 정의한 바와 같은, "음으로 하전된 기" 는 산으로부터 유도된 음이온이고, 이에는 카르복실레이트 (COO-), 티오카르복실레이트 (COS-), 술포네이트 (SO3 -), 및 포스포네이트 (PO3 2 -) 가 포함되고, "생리학적 조건 하에서 음으로 하전된 기로 전환되는 산성 기" 에는 카르복실 (-COOH), 티오-카르복실 (-COSH), 술폰 (-SO3H) 및 포스폰 (-PO3H2) 산 기가 포함된다. 이들 라디칼을 갖는 박테리오클로로필 유도체는 동일한 출원인의 WO 2004/045492 에 기재되어 있고, 이는 본원에 완전하게 개시된 것처럼 본원에 전체적으로 참조 인용된다.
본원에 정의한 바와 같은, R7, R8, R9 및 R'9 은 각각 독립적으로 하나 이상의 헤테로원자, 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 임의로 함유한 C1-C25 히드로카르빌일 수 있다. 예를 들면, C1-C25 히드로카르빌은 O, S 및/또는 N 으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자가 삽입될 수 있고/거나 하나 이상의 카르보시클릭, 예를 들면 C3-C7-시클로알킬 또는 C6-C14-아릴, 또는 앞서 정의한 바와 같은 헤테로시클릭 부분이 삽입 및/또는 치환될 수 있는 직쇄형 또는 분지형 C1-C25 알킬 또는 C2-C25 알케닐일 수 있다.
본원에 정의한 바와 같은, R7, R8, R9 및 R'9 에 대해 정의된 C1-C25 히드로카르빌은 할로겐, 니트로, 옥소, OR, SR, 에폭시, 에피티오, 아지리딘, -CONRR', -COR, COOR, -OSO3R, -SO3R, -SO2R, -NHSO2R, -SO2NRR' -NRR', =N-OR, =N-NRR', -C(=NR)-NRR', -NR-NRR', -(R)N-C(=NR)-NRR', O←NR-, >C=NR, -(CH2)n-NR-COR', -(CH2)n-CO-NRR', -O-(CH2)n-OR, -O-(CH2)n-O-(CH2)n-R, -PRR', -OPO3RR', -PO2HR, -PO3RR'; 하나 이상의 음으로 하전된 기, 예컨대 COO-, COS-, -OSO3 -, -SO3 -, -OPO3R-, -PO2H-, -PO3 2 - 및 -PO3R-; 및/또는 하나 이상의 양으로 하전된 기, 예컨대 -P+(RR'R"), -As+(RR'R"), -O+(RR'), -S+(RR'), -Se+(RR'), -Te+(RR'), -Sb+(RR'R"), -Bi+(RR'R"), O←N+(RR')-, >C=N+(RR'), N+(RR'R"), -(R)N-N+(RR'R"), -(R)N-C(=HN)-N+RR'R", -C(=NH)-N+(RR'R"), 또는 N-헤테로방향족 양이온, 예컨대 피라졸륨, 이미다졸륨, 옥사졸륨, 티아졸륨, 피리디늄, 퀴놀리늄, 피리미디늄, 1,2,4-트리아지늄, 1,3,5-트리아지늄 및 푸리늄 [식 중 n 은 1 내지 6 의 정수이고, R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 임의 치환될 수 있다. R7, R8, R9 및 R'9 에 대해 정의된 C1-C25 히드로카르빌은 또한 단당류, 올리고당류 또는 다당류, 예컨대 글리코실, 또는 아미노산, 펩티드 또는 단백질의 잔기로 치환될 수 있다. 또한, R8, R9 및 R'9 각각은 독립적으로 단당류, 올리고당류 또는 다당류, 예컨대 글리코실, 또는 아미노산, 펩티드 또는 단백질의 잔기일 수 있다.
OR 및 SR 기에서, R 이 H 인 경우에는, 각각 히드록시 및 메르캅토기가 나타나고, R 이 H 이외인 경우에는, 에테르 및 술파이드가 나타난다. -PRR' 기에서, 포스피노기는 R 및 R' 이 H 인 경우 나타난다. -COR 기에서, R 이 H 인 경우에는, 알데히드의 포르밀기 -CHO 가 나타나는 반면, R 이 H 이외인 경우에, 이것은 알킬카르보닐 및 아릴카르보닐기와 같은 케톤의 잔기이다. COOR 기에서, R 이 H 가 아닌 경우에, 이것은 알콕시카르보닐 및 아릴옥시카르보닐기와 같은 카르복실산 에스테르기이다. 유사하게, 에스테르는 -OSO3R, -SO3R, -SO2R, -OPO3RR', -PO2HR 및 -PO3RR' 기에서 R 및 R' 이 H 이외인 경우에 나타난다.
바람직한 일 구현예에서, 화학식 I 의 화합물에서의 R1, 또는 화학식 II 의 화합물에서의 R1 및 R6 는 -OR8 기 [식 중 R8 은 양으로 하전된 말단 관능기, 더 바람직하게는, -N+RR'R" 기, 가장 바람직하게는, -N+(CH3)3 로 치환되는 C1-C6 알킬이다] 이다.
본 발명의 일 구현예에서, R7, R8, R9 및/또는 R'9 은 아미노산, 펩티드 또는 단백질의 잔기일 수 있다. 바람직한 일 구현예에서, 위치 173 에서의 R1 은 -OR8 [식 중 R8 은 유리 히드록시기를 함유한 아미노산, 예컨대 세린, 트레오닌 또는 티로신, 또는 알킬, 예를 들면 메틸, 이의 에스테르, 또는 이러한 아미노산 또는 이의 유도체를 함유한 펩티드의 잔기인데, 상기 히드록실화 아미노산 또는 이의 유도체 또는 펩티드는 그의 히드록시기를 통해 Bchl 유도체의 -COO- 기에 연결된다] 이다. 이러한 아미노산 유도체 및 펩티드의 예는 L-세린 메틸 에스테르, L-티로신 메틸 에스테르, 및 세릴 세린 메틸 에스테르이다.
바람직한 또 다른 구현예에서, -NR9R'9 기는 Bchl 분자의 위치 133 및/또는 173 에서 아미드 결합을 통해 -CO 에 연결되는, 유리 아미노기를 함유한 아미노산, 예컨대 아르기닌 및 리신, 또는 이들을 함유한 펩티드, 또는 상기 아미노산 또는 펩티드의 알킬 에스테르 유도체의 잔기이다. 이들 화합물에서, -NR9R'9 기의 N 원자는 아미노산의 유리 아미노기로부터 유도된다.
추가 구현예에서, C1-C25 히드로카르빌기는 아미노산 잔기로 치환될 수 있고, 아미노산의 말단 아미노기가 유리된다면, 아미노산 잔기는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전되는 기의 근원일 수 있다.
R+ 10 은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속으로부터 유도된 1 가 또는 2 가 양이온, 예컨대 K+, Na+, Li+, NH4 +, Ca+, 더 바람직하게는 K+ 일 수 있거나; 아민으로부터 유도된 양이온이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "박테리오클로로필의 양이온성 유도체" 는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유한 박테리오클로로필을 의미한다. 박테리오클로로필 분자는 또한 중성 기 및/또는 하나 이상의 음으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 음으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 산성 기를 가질 수 있다. 박테리오클로로필 분자의 전체 전하는 중요하지 않다.
더 바람직한 구현예에서, 본 발명의 박테리오클로로필 유도체는 화학식 II 의 로도박테리오클로린:
Figure 112006090541425-pct00002
[식 중
M 은 2H, Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn 및 Mn 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 가 금속 원자, 또는 Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb 및 Cr 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 3 가 금속 원자를 나타내고;
R1, R'2 및 R6 는 각각 독립적으로 Y-R8, -NR9R'9, 또는 -N+R9R'9R"9A- 이고;
Y 는 O 또는 S 이고;
R4 는 -CH=CR9R'9, -CH=CR9Hal, -CH=CH-CH2-NR9R'9, -CH=CH-CH2-N+R9R'9R"9A-, -CHO, -CH=NR9, -CH=N+R9R'9A-, -CH2-OR9, -CH2-SR9, -CH2-Hal, -CH2-R9, -CH2-NR9R'9, -CH2-N+R9R'9R"9A-, -CH2-CH2R9, -CH2-CH2Hal, -CH2-CH2OR9, -CH2-CH2SR9, -CH2-CH2-NR9R'9, -CH2-CH2-N+R9R'9R"9A-, -COCH3, C(CH3)=CR9R'9, -C(CH3)=CR9Hal, -C(CH3)=NR9, -CH(CH3)=N+R9R'9A-, -CH(CH3)-Hal, -CH(CH3)-OR9, -CH(CH3)-SR9, -CH(CH3)-NR9R'9, -CH(CH3)-N+R9R'9R'9A- 또는 -C≡CR9 이고;
R8, R9, R'9 및 R"9 은 각각 독립적으로
(a) H;
(b) C1-C25 히드로카르빌;
(c) 할로겐, 니트로, 옥소, OR, SR, 에폭시, 에피티오, -CONRR', -COR, COOR", -OSO3R, -SO3R", -SO2R, -NHSO2R, -SO2NRR', =N-OR, -(CH2)n-CO-NRR', -O-(CH2)n-OR, -O-(CH2)n-O-(CH2)n-R, -OPO3RR', -PO2HR, 및 -PO3R"R" (식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이고, R" 은 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이다) 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌;
(d) 양으로 하전된 기, 음으로 하전된 기, 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 염기성 기, 및 생리학적 조건 하에서 음으로 하전된 기로 전환되는 산성 기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌;
(e) 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 하나 이상의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌;
(f) 상기 (c) 및 (d) 에서 정의한 바와 같은 하나 이상의 관능기로 치환되는, 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 하나 이상의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌;
(g) 아미노산, 펩티드, 단백질, 단당류, 올리고당류, 또는 다당류의 잔기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌; 또는
(h) 아미노산, 펩티드, 단백질, 단당류, 올리고당류, 또는 다당류의 잔기이고;
R1, R'2 및 R6 가 각각 독립적으로 Y-R8 인 경우, R8 은 추가로 H+ 또는 양이온 R+ 10 일 수 있고;
R+ 10 은 금속, 암모늄 또는 유기 양이온이고,
A- 는 생리학적 허용성 음이온이고;
m 은 0 또는 1 이다]; 및
이의 약학적 허용성 염 및 광학 이성질체인데;
단, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 가진다.
바람직한 일 구현예에서, 상기 (a) 에서 정의한 바와 같은 R8, R9, R'9 또는 R"9 은 치환되지 않거나 할로겐, 니트로, 옥소, OR, SR, 에폭시, 에피티오, 아지리딘, -CONRR', -COR, COOR, -COSR, -OSO3R, -SO3R, -SO2R, -NHSO2R, -SO2NRR' -NRR', =N-OR, =N-NRR', -C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", O←NR-, >C=NR, -C(=NR)-N+RR', -(R)N-C(=NR)-N+RR', -(CH2)n-NR-COR', -(CH2)n-CO-NRR', -O-(CH2)n-OR, -O-(CH2)n-O-(CH2)n-R, -PRR', -OPO3RR', -PO2HR, -PO3RR'; 음으로 하전된 기, 예컨대 COO-, COS-, -SO3 -, -OSO3 -, -PO3 2-, -OPO3R-, -PO2H- 및 -PO3R-; 양으로 하전된 기, 예컨대 -P+(RR'R"), -As+(RR'R"), -O+(RR'), -S+(RR'), -Se+(RR'), -Te+(RR'), -Sb+(RR'R"), -Bi+(RR'R"), O←N+(RR')-, >C=N+(RR'), -N+(RR'R"), -(R)N-N+(RR'), -(R)N-C(=NR)-N+RR'R", -C(=NH)-N+(RR'R"), 및 N-헤테로방향족 양이온, 예컨대 피라졸륨, 이미다졸륨, 옥사졸륨, 티아졸륨, 피리디늄, 퀴놀리늄, 이소퀴놀리늄, 피리미디늄, 1,2,4-트리아지늄, 1,3,5-트리아지늄 및 푸리늄 [식 중 n 은 1 내지 6 의 정수이고, R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C6 알킬이고; 또는 C1-C25 히드로카르빌은 단당류, 올리고당류 또는 다당류, 예컨대 글루코사민의 잔기, 또는 아미노산, 펩티드 또는 단백질의 잔기로 치환될 수 있거나, 그 자체이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R1 은 OH, -NR9R'9, 또는 -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고; R6 은 -NR9R'9 또는 -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고; R9 은 H 또는 C1-C6 알킬이고; R'9 은 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌인, 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다.
더 바람직한 구현예에서는, 상기 화합물에서 R9 은 H 이고, R'9 은 하나 이상의 양으로 하전된 기 N+RR'R" 또는 하나 이상의 염기성 기 -NRR' 으로 치환되고, -N(R")- 기가 임의 삽입되는 [식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, NR"R" 으로 임의 치환되는 C1-C6 알킬, 또는 헤테로시클릴, 예컨대 피리딜이거나, R 및 R' 은 N 원자와 함께, O, S 또는 N 원자를 추가로 함유한 6-원 고리를 형성하고, R" 은 H 또는 C1-C6 알킬이다] C1-C25 알킬, 바람직하게는 C1-C10, 더 바람직하게는 C1-C6 알킬이다.
바람직한 일 구현예에서, 본 발명은, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R1 은 OH 이고, R6 은
(i) -NH-(CH2)n-NRR' 또는 -NH-(CH2)n-N+RR'R";
(ii) -NH-(CH2)n-N(R")-(CH2)n-NRR';
(iii)
Figure 112006090541425-pct00003
(iv)
Figure 112006090541425-pct00004
및
(v)
Figure 112006090541425-pct00005
[식 중
X 는 O, S 또는 NR 이고;
R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
n 은 1 내지 10, 바람직하게는 2 내지 6 의 정수이고;
m 은 1 내지 6, 바람직하게는 1 내지 3 의 정수이다]
로 이루어진 군으로부터 선택되는 -NHR'9 기인, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체를 제공한다.
이러한 박테리오클로로필 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 12 및 24 - 32 로 나타낸다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명은, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R1 및 R6 는 둘 다 앞서 정의한 바와 같은 동일한 -NHR'9 기인, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체를 제공한다. 이러한 박테리오클로로필 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 4 - 11 및 33 - 45 로 나타낸다.
바람직한 추가 구현예에서, 본 발명은, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R1 은 -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고; R6 은 앞서 정의한 바와 같은 -NHR'9 기인, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체를 제공한다. 이러한 박테리오클로로필 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 48 , 50 , 55 , 57 , 59 - 64 , 71 및 72 로 나타낸다.
보다 또 다른 구현예에서, 본 발명은, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R6 은 -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고; R1 은 앞서 정의한 바와 같은 -NHR'9 기인, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체를 제공한다. 이러한 박테리오클로로필 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 46 , 47 , 49 , 51 - 54 , 56 , 58 , 73 및 74 로 나타낸다.
보다 바람직한 추가 구현예에서, 본 발명은, M 은 2H 또는 Pd 이고; R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고; R4 는 -COCH3 이고; R6 은 -NH-CH2-CH2-NRR' 이고;
R1 은
- NH-(CH2)n-OH;
- NH-CH(OH)-CH3;
- NH-(CH2)n-NR-(CH2)n-OH; 및
- 글리코실아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는
[식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, 메틸 또는 에틸이고; n 은 2 또는 3 이다], 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체를 제공한다.
이러한 박테리오클로로필 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 65 - 70 및 75 로 나타낸다.
염기성 기를 갖는 본 발명의 화합물 4 , 6 , 8 및 10 및 유사 화합물은, Bpheid (화합물 2 ) 또는 Pd-Bpheid (화합물 3 ) 을 DCC 존재 하에 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 와 반응시키고, 생성된 Bpheid-NHS 또는 Pd-Bpheid-NHS 를 화학식 NH2-(CH2)n-NH2 의 알킬렌디아민과 반응시키는, 반응식 I 에 도시한 바와 같은 방법으로 제조할 수 있다.
양으로 하전된 기를 갖는 본 발명의 화합물 5 , 7 , 9 , 11 및 12 및 유사 화합물은, 앞서 기재된 131,173-아미노알킬아미드와 대응하는 할라이드 R-Hal, 예를 들면 CH3I 의 반응에 의해, 반응식 I 에 도시한 바와 같은 방법으로 제조할 수 있다. 생성물의 HPLC 정제에 의해서, 용리를 위한 완충액 사용에 따라 상이한 염을 수득할 수 있다. 따라서, 시트레이트 완충액으로의 용리에 의해 시트레이트 염을 수득할 수 있고, 포스페이트 완충액으로의 용리에 의해 포스페이트 염을 수득할 수 있으며, 아세트산으로의 용리에 의해 아세테이트 염을 수득할 수 있고, 그 밖의 경우도 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 Pd 이고, R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고, R4 는 -COCH3 이고, R1 및/또는 R6 은 구아니디노 또는 구아니디늄기로 치환되는 -NR9R'9 [식 중 R9 은 H 이고, R'9 은 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 알킬이다] 인, 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, R1 및 R6 는 화학식 -NH-(CH2)n-C(=NH)-NH2 또는 -NH-(CH2)n-C(=NH)-N+(R)3A-, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-C(=NH)-N(CH3)3 +A- 의 기 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수, 바람직하게는 2, 3 또는 6 이다] 이다. 이러한 화합물의 예는 본원에서 각각 화합물 14 및 14a 로 지정된 131,173-구아니디노에틸아미드 및 131,173-트리메틸구아니디늄에틸아미드이다. 구아니딘 유도체는 131,173-아미노알킬아미드와 1-아미디노피라졸의 반응에 의해, 반응식 I 에 도시한 바와 같이 수득할 수 있고, 구아니디늄 유도체는 메틸 할라이드와의 추가 반응으로 수득할 수 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고, R4 는 -COCH3 이고, R1 및/또는 R6 은 술포늄기로 치환되는 -NR9R'9 [식 중 R9 은 H 이고, R'9 은 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 알킬이다] 인, 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, R1 및 R6 는 화학식 -NH-(CH2)n-S+(R)2A-, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-S(CH3)2 +A- 의 기 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수, 바람직하게는 2, 3 또는 6 이다] 이다. 이러한 화합물의 예는 본원에서 화합물 15 로 지정된 131,173-디메틸술포늄에틸아미드이다. 상기 술포늄 유도체는 Bpheid 또는 Pd-Bpheid 와 S,S-디메틸시스테아민 디아세테이트의 반응에 의해 수득할 수 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고, R4 는 -COCH3 이고, R1 및/또는 R6 은 포스피노 또는 포스포늄기로 치환되는 -NR9R'9 [식 중 R9 은 H 이고, R'9 은 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 알킬이다] 인, 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, R1 및 R6 는 화학식 -NH-(CH2)n-P(R)2, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-P(CH3)2, 또는 NH-(CH2)n-P+(R)3A-, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-P+(CH3)3A- 의 기 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수, 바람직하게는 2, 3 또는 6 이다] 이다. 이러한 화합물의 예는 본원에서 화합물 18 로 지정된 131,173-디메틸포스피노에틸아미드, 및 본원에서 화합물 17 로 지정된 131,173-트리메틸포스포늄에틸아미드이다. 포스피노 유도체는 Bpheid-NHS 와 (2-아미노에틸)디메틸포스핀의 반응에 의해 수득하고, 포스포늄 유도체는 포스피노 유도체와 알킬 할라이드, 예를 들면 메틸 아이오다이드의 반응에 의하거나, 131,173-히드록시에틸아미드 유도체 (화합물 16 ) 와 트리메틸포스핀의 반응에 의해 수득할 수 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고, R4 는 -COCH3 이고, R1 및/또는 R6 은 아르시노 또는 아르소늄기로 치환되는 -NR9R'9 [식 중 R9 은 H 이고, R'9 은 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 알킬이다] 인, 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, R1 및 R6 는 화학식 -NH-(CH2)n-As(R)2, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-As(CH3)2, 또는 NH-(CH2)n-As+(R)3A-, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-As+(CH3)3A- 의 기 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수, 바람직하게는 2, 3 또는 6 이다] 이다. 예는 131,173-히드록시에틸아미드 유도체 (화합물 16 ) 와 트리메틸아르신의 반응에 의해 수득하는, 본원에서 화합물 19 로 지정된 131,173-트리메틸아르소늄에틸아미드이다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 Bchl 유도체는, M 은 2H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 [식 중 R8 은 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이다] 이고, R4 는 -C(CH3)=NR9 이고, R1 및/또는 R6 은 하나 이상의 아미노 말단 기 또는 양으로 하전된 기, 더 바람직하게는 화학식 -N+(RR'R")A- [식 중 R, R' 및 R" 은 바람직하게는 동일한 C1-C6 알킬, 바람직하게는 메틸이고, A- 는 음이온이다] 의 암모늄 말단 기로 치환되는 NR'9R"9 인 [식 중 R'9 은 H 이고, R9 및 R"9 은 C1-C25 히드로카르빌, 바람직하게는 C1-C25 알킬, 더 바람직하게는 C1-C10 알킬이다], 화학식 II 의 로도박테리오클로린이다. 본 발명의 더 바람직한 구현예에서, R4 는 화학식 -C(CH3)=N-(CH2)n-NH2 또는 -C(CH3)=N-(CH2)n-N(R)3 +A 의 기이고, R1 및 R6 는 화학식 -NH-(CH2)n-NH2 또는 NH-(CH2)n-N(R)3 +A-, 더 바람직하게는, -NH-(CH2)n-N(CH3)3 +A- 의 기 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수, 바람직하게는 2, 3 또는 6 이다] 이다. 이러한 화합물의 예는 본원에 지정된 화합물 20 , 21 , 22 및 23 이다.
본 발명의 바람직한 또 다른 구현예에서, Bchl 유도체는 화학식 I 의 박테리오클로로필:
Figure 112006090541425-pct00006
[식 중
M 은 2H 또는 2 가 Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn 또는 Mn, 및 3 가 Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb 또는 Cr 으로부터 선택되는 금속 원자를 나타내고;
R1 은 -NR9R'9 또는 Y-R8 이고; Y 는 O 또는 S 이고;
R2 는 H, OH 또는 COOR9 이고;
R3 은 H, OH 또는 C1-C12 알킬 또는 알콕시이고;
R4 는 -CH=CR9R'9, -CH=CR9Hal, -CH=CH-CH2-NR9R'9, -CH=CH-CH2-N+R9R'9R"9A-, -CHO, -CH=NR9, -CH=N+R9R'9A-, -CH2-OR9, -CH2-SR9, -CH2-Hal, -CH2-R9, -CH2-NR9R'9, -CH2-N+R9R'9R"9A-, -CH2-CH2R9, -CH2-CH2Hal, -CH2-CH2OR9, -CH2-CH2SR9, -CH2-CH2-NR9R'9, -CH2-CH2-N+R9R'9R"9A-, -COCH3, C(CH3)=CR9R'9, -C(CH3)=CR9Hal, -C(CH3)=NR9, -CH(CH3)=N+R9R'9A-, -CH(CH3)-Hal, -CH(CH3)-OR9, -CH(CH3)-SR9, -CH(CH3)-NR9R'9, -CH(CH3)-N+R9R'9R'9A- 또는 -C=CR9 이고;
R5 는 =O, =S, =N-R9, =CR9R'9 또는 =CR9-Hal 이고;
R8, R9 및 R'9 은 각각 독립적으로 H 또는
(a) C1-C25 히드로카르빌; 하나 이상의 헤테로원자, 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌; 하나 이상의 양으로 하전된 기, 하나 이상의 음으로 하전된 기, 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기 또는 생리학적 조건 하에서 음으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 산성 기를 포함하는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌; 또는 앞서 정의한 바와 같은 하나 이상의 관능기로 치환되는, 하나 이상의 헤테로원자, 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분을 함유한 C1-C25 히드로카르빌;
(b) 아미노산, 펩티드, 단백질, 또는 모노- 또는 폴리-카르보히드레이트의 잔기로 이루어진 군으로부터 선택되고;
(c) R1 이 Y-R8 인 경우, R8 은 추가로 H+ 또는 양이온 R+ 10 (식 중 양이온 R+ 10 은 금속, 암모늄 또는 유기 양이온이다) 일 수 있다] 인데;
단, R2 및 R3 가 둘 다 H 인 경우, R5 는 =N-R9 이 아니고/거나 R4 는 -C(CH3)=NR9 이 아니고; 박테리오클로로필 분자는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및/또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 가진다.
더 바람직한 구현예에서, 본 발명은, M 은 Pd 이고, R2 는 -COOCH3 이고, R3 는 H 이고, R4 는 -COCH3 이고, R5 는 =O 이고, R1 은 -OR8 [식 중 R8 은 히드록시기를 함유한 아미노산, 바람직하게는 세린, 또는 이의 유도체, 바람직하게는 알킬, 더 바람직하게는 메틸, 에스테르, 또는 상기 아미노산 또는 이의 유도체를 함유한 펩티드의 잔기인데, 아미노산 잔기에서 유리 아미노기는 트리메틸암모늄기로서 4 가화될 수 있다] 인, 화학식 I 의 Bchl 유도체를 제공한다. 이러한 화학식 I 의 유도체의 예는 본원에 지정된 화합물 13 이다.
본원에서 때때로 "안료" 및 "감광제" 라는 용어로도 지칭되는 본 발명의 화합물은 수용성이어서 추가의 계면활성제 없이 수용액에 주입되기에 충분한 높은 극성을 나타낸다. 이들 화합물은 H2O/PBS 용액 중에서 소형 응집물을 형성하지만, 혈청 알부민 존재 하에서 단백질 상에 흡착됨으로써 단량체화된다 (Mazor et al, 2003). 따라서, 상이한 세포 안팎에서의 화합물의 소통은 혈청 알부민 의존성이다.
일 구현예에서는, 바람직한 화합물 5 에 대한 생체분포 및 약물동력학을 본원에 나타내고, 이를 근거로, 본 발명의 상기 및 기타 유도체가 혈행 내에, 매우 짧은 시간 동안 유지됨을 추정한다. 추가로, 본원에서 도 3C 에 나타낸 바와 같이, 화합물 5 는 내피 세포 배양물의 인큐베이션 5 분 미만에서 매우 높은 PDT 효능에 도달한다. 그러므로, 본 발명의 유도체는 혈관-표적화 PDT 에 대한 양호한 감광제이다. 본원에서 도 6 및 7 에 나타낸 바와 같이, 마우스에서의 C6 신경교종 이종이식체의 처리는, 5 가 광역학적으로 활성이고 Pd-Bpheid (WO 00/33833 에 개시된 것) 또는 음으로 하전된 Pd 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131-(2-술포에틸)아미드 디포타슘 염 (WO 2004/045492 에 개시된 것) 보다 10 배 낮은 농도에서 종양 박멸을 야기시킴을 입증한다. 화합물 5 와 함께 제안된 프로토콜은 약물의 짧은 제거 시간을 고려하였다 (도 4). 종양 혈관구조에 대한 이들의 높은 광독성 및 선택적 효과를 근거로, 이들 화합물은 종양 뿐만 아니라 신혈관형성에 의존하는 기타 조직 이상의 치료를 위해서, 및 또한 그램-양성 및 그램-음성 박테리아에 대해서 사용할 수 있다.
따라서, 또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 Bchl 유도체 또는 이의 약학적 허용성 염 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
바람직한 구현예에서, 약학적 조성물은 본원에서의 화학식 I, II 또는 III 의 Bchl 유도체, 더 바람직하게는 4 차 암모늄기를 지닌 화학식 II 의 유도체, 가장 바람직하게는 화합물 5 를 포함한다.
본 발명의 신규 Bchl 화합물은 PCT/IL03/00973 (WO 2004/045492) 에 개시된 음으로 하전된 Pd-Bchl 과 유사하고, Pd-Bpheid (WO 00/33833) 와 매우 유사한 광학적 흡수 및 광물리학적 특징을 가지므로, 일단 처리된 조직 내에 체류하게 되면, 효과적인 광역학제가 될 것으로 예상된다. 따라서, 이들은 다수의 징후에 있어서 감광제로서 및 치료 및 진단제로서 유용할 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 전암 상태 및 흑색종, 전립선, 뇌, 결장, 난소, 유방, 유방암으로부터 발생하는 흉벽 종양, 피부, 폐, 식도 및 방광암, 및 기타 호르몬 민감성 종양과 같지만 이에 제한되는 것은 아닌 몇몇 암 유형의 PDT 에 의한 치료에 대한 종양학 분야에서 유용하다. 상기 화합물은 원발성 뿐만 아니라 전이성 종양의 치료에도 유용하다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 비-종양학 영역에서 유용하다. 체내 신생물 및 종양 같은 원치 않은 세포의 PDT 에 의한 효과적인 파괴 외에도, 본 발명의 화합물은 또한 증식하는 세포 및 박테리아에 대해서도 사용될 수 있다. 증식하는 세포 및 혈관은 동맥경화증, 관절염, 건선 및 황반 변성의 주요 원인이다. 또한, 상기 화합물은 양성 전립선 비대증과 같은 비-악성 종양의 치료에 사용될 수 있다.
바람직한 일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 주로 관상 동맥 질환, 혈관내막 증식, 재협착 및 죽상경화반에서의 혈전증 및 혈관 폐색에 대한 심혈관 질환의 치료를 위한 PDT 에서 사용될 수 있다. 더 바람직한 구현예에서, 본 발명의 화합물은 관상동맥 조영술을 받은 심혈관 질환을 겪고 있는 개체에서의 스텐트 내 재협착을 방지하거나 감소시키는 데 사용된다. 바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 병든 혈관에서의 죽상판의 파괴에 의한 죽상 동맥경화증의 치료 방법에 사용될 수 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 여드름, 여드름 흉터, 건선, 무좀, 사마귀, 화학선 각질, 및 포도주색 모반 (피부 상층에 위치하는 동맥에 정맥을 연결시키는 작은 혈관 (모세혈관) 의 기형) 과 같은 피부과적 질환, 장애 및 증상의 치료를 위한 PDT 에서 사용될 수 있다.
바람직한 또 다른 구현예에서, 본 발명의 화합물은 각막 및 맥락막 신혈관형성, 더 바람직하게는, 연령-관련 황반 변성 (AMD) 과 같은 안과적 질환, 장애 및 증상의 치료를 위한 PDT 에서 사용될 수 있다.
바람직한 추가 구현예에서, 본 발명의 화합물은 샘플 및 살아있는 조직에서의 바이러스, 균류 및 박테리아를 포함하는 미생물의 사멸을 위한 PDT 에서 사용될 수 있다. 예를 들면, 이들은 수혈용 혈액 및 혈장과 같은 생물학적 생성물의 멸균에 이은 감염원의 파괴를 위한 조사에 사용될 수 있다. 본원에 나타낸 바와 같이, 화합물 5 는 그램-약성 및 그램-음성 박테리아 둘 다에 대한 활성제이다 (도 8).
본 발명에 따른 신규 수용성 Bchl 유도체는 내피 및/또는 신생 세포 또는 기타 이상 조직을 감광시키고, 적당한 파장의 빛을 사용한 생체 내 또는 생체 외 조사에 의한 이들의 파괴를 유발한다. 광활성화 에너지는 내부발생 산소로 전이되어, 이를 세포독성 효과의 원인으로 간주되는 일중항 산소 및/또는 기타 반응성 산소 종 (ROS), 예컨대 초산화물 및 히드록실 라디칼로 전환시키는 것으로 여겨진다. 또한, 이들 신규 Bchl 중 일부의 광활성화 형태는 형광을 발하는데, 이 형광은 Bchl 이 투여되는 종양 또는 기타 부위를 국소화시키는 것을 도울 수 있다.
그들의 상대적으로 짧은 혈행 내 체류 시간으로 인해, 본 발명의 화합물은 이전에 본 발명자 및 다른 이들 (WO 03/094695; Borle et al. 2003) 에 의해서 및 박테리오클로로필-세린에 대한 발명자 (Zilberstein et al., 2001) 에 의해서 Pd-Bpheid (Tookad®, Steba Biotech 의 상표) 에 대해 기재된 바와 같이, 혈관-표적화 PDT (VTP) 에 특히 적절하다. VTP 에서, 박테리오클로로필 유도체의 항-종양 활성은 개체 내피 세포의 직접적인 광중독이 아니라, VTP 상해에 대한 혈관 조직 반응에 의존한다. 따라서, Tookad 에 있어서, 본 발명자는 정맥 내 주사 직후의 광섬유 유도 경피 조명에 의한 Tookad 의 감광화가 산화 종양 혈관 손상 및 산소 고갈을 초래하여, 혈액 공급의 중단 및 종양 박멸을 유발함을 보여주었다.
이 측면에서, 이전에 기재된 바와 같은 (Kelleher et al., 2003), 종양의 치료를 위한 발열 및 PDT 병용에 본 발명의 화합물을 사용하는 것 또한 본 발명에 의해 예견되었다.
본 발명의 화합물의 양전하는 종양의 요법 또는 영상화에 사용하는 다른 양으로 하전된 약물에 대해 당업계에 공지된 바와 같이 (Dellian et al. 2000; Hashizume et al. 2000; Campbell et al. 2002), 종양 내피에 대한 신규 Bchl 의 흡수를 유의적으로 증진시킨다. 증진된 친화성은 혈관 표적화 PDT 에 요구되는 바와 같은, 매우 짧은 인큐베이션 시간에서 내피 세포 사멸을 유도하는 데 필요한 농도를 극적으로 감소시킨다. 따라서, 이들 화합물은 여기 시에, 내부 혈관에만 국한됨으로써 종양 및 연령-관련 황반 변성에 존재하는 것과 같은 이상 혈관의 선택적 반응을 야기시키는 반응성 산소 종 (ROS) 생성을 가능케 한다.
본 발명의 Bchl 유도체는 혈청 알부민에 대한 높은 친화성을 가진다. 유의적인 비율의 화합물 분자가 혈장 내 혈청 알부민에 대해 비-공유적으로 결합한다. 따라서, 정제 후 및 주사 전에, 이들은 수용액 내에서 ~1:1 의 비로 혈청 알부민과의 상호작용을 허용할 것이다.
약학적 조성물의 제조를 위해서는, 본 발명의 Bchl 을, 예를 들면, 만니톨과 함께 동결건조시킬 수 있고, 환자에게 i.v. 주사 (혈액 내에, 그 다음 화합물은 혈청 알부민에 흡수된다) 하기 위해 또는 시험관 내 표적 샘플에 적용하기 위해, 건조 분말을 식염수 또는 임의의 다른 약학적 허용성 수용액에 용해시킨다. 조성물의 제조는, 예를 들면 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., Easton, Pa, 1990] 에 정리된 바와 같은 당업계에 익히 공지된 기술에 의해 수행된다.
진단 목적으로는, Bchl 유도체를 단독으로 사용할 수도 있고, 당업계에 공지된 바와 같은, 방사성 동위원소 또는 상자성 금속과 같은 기타 검출 수단으로 표지할 수도 있다. 일 구현예에서, Bchl 유도체는 예를 들면, 67Ga, 111In, 201Tl, 99mTc 를 사용한 표준 절차에 의해서 방사성-표지되어, 바람직하게는 i.v. 주사에 의해 환자에게 투여된다. 암의 위치는 투여 후 특정 시간 간격 동안, 표준 절차에 의해서 영상화될 수 있다.
PDT 요법을 위해 투여되는 Bchl 유도체의 양은 PDT 에 사용되는 다른 Bchl 유도체로 축적된 경험에 따라 숙련된 내과의에 의해서 확립될 것이며, 활성 성분으로 사용되는 유도체의 선택, 치료할 증상, 투여 방식, 환자의 연령 및 상태, 및 내과의의 판단에 따라 달라질 것이다.
조사하는 빛의 파장은 바람직하게는 Bchl 감광제의 최대 흡광도에 맞도록 선택한다. 임의의 화합물에 적절한 파장은 그의 흡수 스펙트럼으로부터 용이하게 결정할 수 있다. 바람직한 구현예에서는, 강력한 빛 근원이 사용되고, 더 바람직하게는 720-790 nm 의 레이저가 사용된다.
본 발명에 의해 또한 예견되는 것은 종양 및 처리된 부위에서의 그들의 체류 시간을 증가시킬 목적의, 표적 세포 수용체, 특히 내피 세포 수용체 및 영양분에 특이적으로 결합하는 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 인간 혈청 알부민 및 인간 혈청 알부민의 키메릭 구조를 포함하는 재조합 혈청 알부민 (Tuan et al. 2002 에 기재된 것), 호르몬, 성장 인자 또는 이의 유도체, 항체, 펩티드, 예를 들면 티로신의 Bchl 부분에 대한 접합이다. 근적외선에서 Bchl 유도체의 최대 광학적 흡수를 갖는 것은, 천연 계의 편재성을 유지하면서 더 깊은 침투가 가능하도록 한다.
다른 금속 이온에 의한 Mg 이온의 대체는 Bchl 부분의 고유 안정성 및 대사 안정성, 및 여기된 삼중항 상태에 대한 그의 계간 교차를 최적화함으로써, 신규의 진단 절차에 대한 가능성 또한 확장시킬 것으로 예상된다.
신생-내피 세포에 대한 높은 친화성을 갖는, 양으로 하전된 말단 기 및/또는 신생-내피 세포 특이성 항체 및/또는 펩티드의 조합은 종양 또는 처리된 부위에 대해 Bchl 부분을 차별적으로 표적화할 것이다. 그 결과, 악성 조직의 혈관 구획에서의 감광제 농도는 정상 조직에서의 그 농도에 비해 극적으로 증가하고, 여기서 세포는 더 분산되며, 이로써 종양 부위에서의 PDT 효과의 증폭이 확실시될 것으로 예상된다. 이는 정상 조직의 손상 역치보다 낮은 빛 선량의 효과적인 사용을 가능케 함으로써, 공간적으로 잘 규정된 조사의 필요성을 감소시킨다.
본 발명의 가장 바람직한 일 구현예에서, 본 발명의 감광제로 치료하기 위한 표적은, 본원에 기재된 PDT 프로토콜 제안에 대한 정상 및 이상 혈관의 민감성의 고유한 차별성에 기인하여, 이상 혈관, 특히 고형 종양, 연령-관련 황반 변성, 재협착, 급성 염증 또는 죽상 동맥경화증의 혈관 (Dougherty and Levy, 2003) 이다.
본 발명의 Bchl 유도체는 질환, 장애 또는 증상의 치료를 위해 사용되는 현재의 또 다른 요법을 더 효과적으로 만드는, 이에 대한 보조제로서 광역학 요법에 추가로 사용될 수 있다. 예를 들면, 이들은 외과수술과 병행하여 수술 중에 사용됨으로써, 재발성 두부 및 경부 암종의 수술적 치료에서, 일부 유형의 암에 대해 분포되는 일반적인 부위인 늑막 (폐의 내막) 및 복막 (복부의 내막) 과 같은 넓은 표면적에서의 암의 재발 방지를 돕거나, 대퇴 동맥 혈관성형술 후 재협착을 방지한다. 상기 화합물은 또한 수술적 PDT 종양 진단, 예를 들면, 뇌 종양의 진단에 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 또 다른 가능성은, 컴퓨터화 X선 단층 촬영 (CT) 에 의해 유도되는 침을 사용하여 종양에 직접 광섬유를 공급하는 것을 포함하는 기술인 간질 내 요법에 의한 거대 고형 종양의 PDT 에 본 발명의 화합물을 사용하는 것이다. 이는 광범위한 외과수술을 필요로 하는 영역, 예컨대 두부 및 경부 종양에서 특히 유용할 수 있다.
투여되는 화합물의 양 및 투여 경로는 질환의 종류, 질환의 단계, 환자의 연령 및 건강 상태에 따라 결정될 것이지만, Photofrin II® (약 5-40 mg HpD/kg 체중) 또는 Tookad® (약 2-10 mg/kg 체중) 의 현재 사용되는 투여량보다는 훨씬 적을 것이다.
본 발명의 약학적 조성물은 PDT 에서 사용되는 표준 절차에 의해서, 예를 들면, 특히 주사, 더 바람직하게는 정맥 내 주사에 의해 전신적으로, 고형 종양 내 직접 주사에 의해 국소적으로, 또는 피부 질환 및 증상의 치료를 위해 국지적으로 환자에게 투여된다.
본 발명은 이제 하기 비-제한적 실시예에 의해서 설명될 것이다.
편의성 및 더 나은 이해를 위해서, 실시예 단락을 2 개의 하위단락으로 나눈다: (I) 양이온성 및 염기성 Bchl 유도체 및 중간체 4-75 의 합성을 기재한 화학 단락, 및 (II) 신규 Bchl 유도체의 생물학적 활성을 기재한 생물학 단락.
I 화학 단락
본원의 실시예에서, 본 발명의 유도체 ( 4 - 75 ) 및 중간체 ( 1 - 3 ) 는 하기 화합물 목록 및 부록에 따라 그들 각각의 밑줄 친 굵은 아라비아 숫자로 나타낼 것이다. 화합물 중 일부의 화학식은 반응식 1 및 2, 및 참고문헌 직전의 상세한 설명 말미의 부록에 나타낸다.
화합물 목록
1 . 박테리오클로로필 a (Bchl a)
2 . 박테리오페오포르바이드 a (Bpheid)
3 . Pd-박테리오페오포르바이드 a (Pd-Bpheid)
4 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-아미노에틸)아미드 [실시예 1]
5 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 디시트레이트 염 [실시예 2]
6 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(3-아미노프로필)아미드 [실시예 3]
7 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(3-N3-트리메틸암모늄프로필)아미드 디시트레이트 염 [실시예 4]
8 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(6-아미노헥실)아미드 [실시예 5]
9 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(6-N3-트리메틸암모늄헥실)아미드 디시트레이트 염 [실시예 6]
10 . 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-아미노에틸)아미드 [실시예 7]
11 . 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 디포스페이트 염 [실시예 8]
12 . 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131-(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 클로라이드 염 [실시예 9]
13 . O-[Pd-Bpheid]-[N3-트리메틸암모늄-2-메틸]-세린 메틸 에스테르 아이오다이드 염 [실시예 11]
14 . 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-구아니디노에틸)아미드 [실시예 12]
14a . 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸구아니디늄에틸)아미드 [실시예 12]
15 . Pd 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131-(2-S2-디메틸술포늄에틸)아미드 시트레이트 염 [실시예 13]
16 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-히드록시에틸)아미드 [실시예 14]
17 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-P3-트리메틸포스포늄에틸)아미드 디시트레이트 염 [실시예 15]
18 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-디메틸포스피노에틸)아미드 [실시예 16]
19 . 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-As3-트리메틸아르소늄에틸)아미드 디시트레이트 염 [실시예 17]
20 . 31-(아미노에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-아미노에틸)아미드
21 . 팔라듐 31-(아미노에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-아미노에틸)아미드
22 . 31-(트리메틸암모늄에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸암모늄에틸)아미드
23 . 팔라듐 31-(트리메틸암모늄에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸암모늄에틸)아미드
재료 및 방법
(i) Bpheid, 2 는 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다 (Wasielewski and Svec, 1980).
(ii) 팔라듐 박테리오페오포르바이드 (Pd-Bpheid, 3 ) 는 이전에 기재된 바와 같이 제조하거나 (WO 00/33833) Negma-Lerads, France 를 통해 Steba Biotech Ltd. 로부터 입수하였다.
(iii) 디아민 (에틸렌디아민, 1,3-프로필렌디아민, 1,6-헥실렌디아민) 및 트리메틸포스핀 (1 M 용액) 은 Aldrich (USA) 로부터 구입하였고; N-히드록시숙신이미드 (NHS) 는 Sigma (USA) 로부터 구입하였고; 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) 및 1-아미디노피라졸 히드로클로라이드는 Fluka (Switzerland) 로부터 구입하였고; 트리메틸 아르신은 Sterm 으로부터 구입하였다. (2-아미노에틸)디메틸 포스핀은 Suzuki 등 (1994) 및 Kinoshita 등 (1981) 에 따라 제조하였다. S,S-디메틸시스테아민 디아세테이트는 US 3,793,370 에 따라 제조하였다.
(iv) HPLC 수행 시, HPLC-급 용매가 적용되는 경우를 제외하고는, 통상 분석 등급의 화학약품 및 용매가 사용되었다.
(v) TLC: 실리카 플레이트 (Kieselgel-60, Merck, Germany); 클로로포름-메탄올 (4:1, v/v).
(vi) 1H 핵 자기 공명 (NMR) 스펙트럼은 Avance DPX 250 기구 (Bruker, France) 로 기록하여, 내부 표준으로서의 잔여 용매 피크와 함께, 테트라메틸실란으로부터의 ppm (δ) 다운필드로 보고하였다.
(vii) Pd-유도체의 소광 계수는 특정 파장에서 검사 용액의 광학 밀도와 Pd 농도 (표준으로서의 PdCl2 의 불꽃 광도법을 사용함) 를 관련시킴으로써 구하였다.
(viii) 전기분무 이온화 질량 스펙트럼 (ESI-MS) 은 플랫폼 LCZ 분광계 (Micromass, England) 로 기록하였다.
(ix) 유도-결합 플라즈마 질량 분광법 (ICP-MS) 은 ELAN-6000 기구 (Perkin Elmer, CT) 를 사용하여 Pd 농도 측정에 대해 수행하였다.
(x) 상이한 착물의 광학적 흡수 (UV-VIS) 스펙트럼은 Genesis-2 (Milton Roy, England) 및 V-570 (JASCO, Japan) 분광광도계로 기록하였다.
(xi) HPLC 는 UV-915 다이오드 배열 검출기가 장치된 LC-900 기구 (JASCO, Japan) 를 사용하여 수행하였다.
화학적 실시예
실시예 1. 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 4 )
반응식 I 에 도시한 바와 같이, 화합물 4 (중심 금속 원자가 없는 로도박테리오클로린 유도체) 의 합성을 위해, 먼저 Bpheid 2 를 하기와 같이 C-173 카르복실산에서 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 에 의해 활성화시켰다: 50 mg 의 Bpheid (화합물 2 ), 80 mg 의 NHS 및 65 mg 의 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) 를 메틸 클로라이드 중에 하룻밤 동안 실온에서 혼합하였다. 그 다음, 용매를 감압 하에 증발시키고, 건조된 잔여물을 클로로포름 (ca. 50 ml) 에 용해시키고, 불용성 물질로부터 여과시키고, 용매를 증발시킨 후, 생성물인 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) 를 수득하였다. 전환율은 약 95% 였다 (TLC).
8 mg 의 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) 를 클로로포름 및 메탄올 (2:1, v:v) 의 혼합물에 용해하여 Bpheid 의 이소시클릭 고리를 개환시키고, 에틸렌디아민 (1 ml) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 10 분 동안 처리하고, 실온에서 하룻밤 동안 암흑 속에 교반하여, 에틸렌디아민을 131 및 173 위치 둘 다에서 결합시켰다. 그 다음, 반응 혼합물을 진공 하에 건조 시까지 증발시키고, 클로로포름 (50 ml) 에 재용해시키고, 물 (약 50 ml) 로 1 회 세척하여, 에틸렌디아민의 흔적을 배출시켰다. 생성물을 함유한 클로로포름 용액을 수집하고 증발시킴으로써, 화합물 4 를 수득하였다.
ESI-MS (+): 713.89 (M+1), 357.56 ([M+2]/2).
클로로포름 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 753 (1.00), 522 (0.28), 354 (1.05) nm.
실시예 2. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 -로도- 박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- N 3 -트리메틸암모늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 5 )
반응식 I 에 도시한 바와 같이, 화합물 5 를 화합물 4 로부터 제조하였다. 디이소프로필에틸아민 (DIEA) (27 μl) 및 메틸 아이오다이드 (30 μl, CH3I) 를 2 ml 의 클로로포름 중 4 (3 mg) 의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 10 분 동안 처리하고, 하룻밤 동안 실온에서 암흑 속에 교반하였다. 생성물을 물 (약 50 ml) 로 2 회 추출하였다. 수성 층을 수집하고 증발시키고, 생성물을 HPLC (HPLC JASCO, Japan) 로 정제하였다. 컬럼: C-8 250×20 (YMC, Japan). 용매 A: 0.05 M 시트레이트 완충액, pH 4.0. 용매 B: 아세토니트릴. 디시트레이트 염으로서의 표제 화합물 5 의 용리 프로파일을 표 1 에 제시하였다. 메탄올 중 화합물 5 의 형광 방출 스펙트럼을 도 1 에 나타내었다.
Figure 112006090541425-pct00007
ESI-MS (+): 990.12 (M-시트레이트).
MeOH-d4 중 NMR: 9.33 (5-H, s), 8.92 (10-H, s), 8.75 (20-H, s), 5.35 및 4.95 (151-CH2, br), 4.0-4.4 (7,8,17,18-H, m), 3.80 (153-Me, br s), 3.52 (21-Me, s), 3.19 (121-Me, s), 3.09 (32-Me, s), 1.92-2.41, 1.60-1.75 (171, 172-CH2, m), 2.19 (81-CH2, m), 1.91 (71-Me, d), 1.61 (181-Me, d), 1.09 (82-Me, t), 3.62, 3.05 (NHCH2CH2NMe3 중 CH2 의 것), 3.39 및 3.02 (NHCH2CH2NMe3 중 Me 의 것).
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 753 (1.00), 519 (0.30), 354 (1.25) nm. 옥탄올/물 분배비는 40/60 이다.
실시예 3. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디( 3-아미노프로필)아미드 (화합물 6 )
1,3-프로필렌디아민과 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) 의 반응에 의해서, 상기 실시예 1 에 기재된 바와 같이 화합물 6 을 수득하였다.
ESI-MS (+): 813.86 (M+NH2CH2CH2CH2NH2), 739.74 (M).
클로로포름 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 753 (1.00), 522 (0.29), 354 (1.22) nm.
실시예 4. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디 (3-N 3 -트리메틸암모늄프로필 )아미드 디시트레이트 염 (화합물 7 )
상기 실시예 2 에 기재된 바와 같이, DIEA 및 CH3I 와의 반응에 의해서, 화합물 7 을 화합물 6 으로부터 수득하였다.
ESI-MS (+): 413.62 ([M-2×시트레이트]/2). 옥탄올/물 분배비는 50/50 이다.
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 753 (1.00), 519 (0.29), 354 (1.21) nm.
실시예 5. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(6-아미노헥실)아미드 (화합물 8 )
1,6-헥실렌디아민과 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) 의 반응에 의해서, 상기 실시예 1 에 기재된 바와 같이 화합물 8 을 수득하였다. 화합물 8 의 특징:
ESI-MS (+): 826.20 (M+2), 413.62 ([M+2]/2)
실시예 6. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(6- N 3 -트리메틸암모늄헥실)아미드 디시트레이트 염 (화합물 9 )
상기 실시예 2 에 기재된 바와 같이, DIEA 및 CH3I 와의 반응에 의해서, 화합물 9 를 화합물 8 로부터 수득하였다.
ESI-MS (+): 455.89 ([M-2×시트레이트]/2). 옥탄올/물 분배비는 75/25 이다.
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 753 (1.00), 519 (0.30), 354 (1.31) nm.
실시예 7. Pd 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- 아미노에틸)아미드 (화합물 10 )
상기 실시예 1 에 기재된 바와 같이, 에틸렌디아민과 Pd-Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) 의 반응에 의해서, 화합물 10 을 수득하였다.
ESI-MS (+): 817.59 (M+1), 409.26 ([M+2]/2)
MeOH 중의 광학적 흡수 (상대적 흡수): 747 (1.00), 516 (0.13), 384 (0.41), 330 (0.50) nm.
실시예 8. Pd 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- N 3 - 트리메틸암모늄에틸 ) 아미드 디포스페이트 염 (화합물 11 )
상기 실시예 2 에 기재된 바와 같이, DIEA 및 CH3I 와의 반응에 의해서, 그러나 HPLC 정제 단계에서 용매 A 로 포스페이트 완충액 (0.05 M, pH 5.0) 을 사용하여, 화합물 11 을 화합물 10 으로부터 수득하였다.
ESI-MS (+): 451.38 ([M-2×포스페이트]/2).
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 747 (1.00), 516 (0.13), 384 (0.41), 330 (0.50) nm.
실시예 9. Pd 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 -(2- N 3 - 트리메틸암모늄에틸 ) 아미드 클로라이드 염 (화합물 12 )
반응식 I 에 도시한 바와 같이, 화합물 3 인 Pd-Bpheid (10 mg) 를 DMF (2 ml) 중 2-N3-트리메틸암모늄-에틸아민 클로라이드 히드로클로라이드 염 (15 mg) 과 함께, 트리에틸아민 (0.5 ml) 존재 하에 아르곤 대기 하 실온에서 하룻밤 동안 교반함으로써, Bpheid 분자의 이소시클릭 고리를 개환시켰다. 그 다음 반응 혼합물을 건조 시까지 증발시키고, 생성물을 아세토니트릴로 추출하였다. 용매를 증발시킨 후, 화합물 12 를 실시예 2 에서의 5 의 정제와 유사한 조건 하에 HPLC 로 정제하였다.
ESI-MS (+): 839 (M-Cl + Na-H), 817.82 (M-Cl) m/z.
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 747 (1.00), 516 (0.13), 384 (0.41), 330 (0.50) nm.
실시예 10. O-[ Pd - Bpheid ]-세린 메틸 에스테르
상기 화합물은 하기와 같이, US 6,333,319 에 기재된 절차에 따라 합성하였다: 화합물 3 인 Pd-Bpheid (50 mg), N-트리틸-L-Ser 메틸 에스테르 (200 mg), DCC (16 mg, 0.08 mmol), 및 N-디메틸아미노피리딘 (DMAP) (10 mg) 을 20 ml 디클로로메탄에 용해시키고, 하룻밤 동안 실온에서 비활성 대기 (아르곤) 조건 하에 교반하였다. 생성된 에스테르를 용리액으로서 클로로포름을 사용하여, 실리카 상 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 1-3 분 동안 플루오로아세트산을 클로로포름 용액에 (1 부피% 의 최종 농도까지) 첨가함으로써 트리틸-보호기를 제거하고, 반응 혼합물을 물로 세척하고, 무수 황산 나트륨으로 건조시키고, 건조 시까지 증발시켰다. 탈보호화된 생성물을 하기와 같이 실리카 컬럼 상에서 정제하였다: 먼저, 주요 부산물을 클로로포름 중 5% 아세톤으로 용리시켜 제거한 다음, 생성물 O-[Pd-Bpheid]-Ser 메틸 에스테르를 클로로포름 중 2% 메탄올로 용리시켰다.
CDCl3 중 1H-NMR: 9.21 (s, 1H, H-α), 8.54 (s, 1H, H-β), 8.48 (s, 1H, H-δ), 5.93 (s, 1H, H-10), 4.37 (m, 2H, H-3,8), 4.22 (m, 1H, Ser-CH), 4.10 (m, 2H, H-4,7), 3.88 (s, 3H, CH3-10b), 3.67 (s, 3H, Ser-OCH3), 3.63 (m, 2H, Ser-CH2), 3.48 (s, 3H, CH3-1a), 3.39 (s, 3H, CH3-5a), 3.09 (s, 3H, CH3-2b), 2.48 (m, 1H, Ser-OH), 2.15-2.30 (m, 4H, CH2-7a,7b), 2.11 (m, 2H, CH2-4a), 1.78 (d, 3H, CH3-3a), 1.68 (d, 3H, CH3-8a), 1.08 (t, 3H, CH3-4b).
실시예 11. O-[ Pd - Bpheid ]-[ N 3 - 트리메틸암모늄 -2- 메틸 ]-세린 메틸 에스테르 아이오다이드 염 (화합물 13 )
상기 실시예 10 에서 수득한 O-[Pd-Bpheid]-Ser 메틸 에스테르 (4 mg) 를 클로로포름 (3 ml) 에 용해시키고, 메틸 아이오다이드 (35 μl) 및 DIEA (30 μl) 와 함께 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물의 증발 및 용리액으로서 클로로포름-메탄올 (3:1, v:v) 을 사용한 실리카 컬럼 상 정제에 의해서 생성물 13 을 수득하였다.
ESI-MS (+): 872.75 (M-I) m/z.
물 중의 광학적 흡수, λ (상대적 흡수): 747 (1.00), 516 (0.13), 384 (0.41), 330 (0.50) nm.
실시예 12. Pd 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- 구아니디노에틸 )아미드 (화합물 14 ).
반응식 I 에 도시한 바와 같이, Pd 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-아미노에틸)아미드인 화합물 10 (8 mg) 을, 클로로포름-메탄올 (1:1, 15 ml) 중 1-아미디노피라졸 (6 mg) 및 DIEA (30 μl) 와 혼합하였다. 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 증발시키고, 표제 화합물 14 를 실시예 1 에서의 화합물 4 의 정제와 유사한 조건 하에 HPLC 로 정제하였다.
ESI-MS (+): 451.69 ([M-2×시트레이트]/2).
메틸 아이오다이드와 화합물 14 의 반응에 의해서, 양으로 하전된 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸구아니디늄메틸)아미드 ( 14a ) 를 수득하였다.
실시예 13. Pd 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 -(2-S 2 -디 메틸술포 늄에틸)아미드 시트레이트 염 (화합물 15 )
Pd-Bpheid, 3 (12 mg) 을 DMF (2 ml) 중 S,S-디메틸시스테아민 디아세테이트 (20 mg) 와 함께, 트리에틸아민 (0.5 ml) 존재 하에 아르곤 대기 하에서 교반하였다. 반응 혼합물을 건조 시까지 증발시키고, 표제 화합물 15 를 실시예 2 에서 화합물 5 에 대해 기재된 바와 같은 조건 하에 HPLC 로 정제하였다.
ESI-MS (+): 844.78 (M-시트레이트+Na-H), 820.62 (M-시트레이트) m/z.
실시예 14. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- 히드록시에틸)아미드 (화합물 16 )
실시예 1 에 기재된 바와 같이 수득한 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) (10 mg) 를 클로로포름-메탄올 혼합물 (6 ml) 중 에탄올아민 (1 ml) 과 반응시켰다. 반응 혼합물을 아르곤으로 10 분 동안 처리하고, 실온에서 하룻밤 동안 암흑 속에 교반하였다. 화합물 16 을 실리카 컬럼 상 정제 및 클로로포름-메탄올 (10:1, vol/vol) 로의 용리 후에 수득하였다.
ESI-MS (+): 737.88 (M+Na), 715.42 (M+H) m/z.
실시예 15. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- P 3 -트리메틸포스포늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 17 )
화합물 16 (8 mg) 을 트리플루오로아세트산 무수물 (1 ml) 에 용해시키고, 30 분 후에 혼합물을 건조 시까지 증발시켰다. 건조된 생성물을 테트라히드로푸란 중 트리메틸포스핀의 용액 (0.5 mM, 2 ml) 에 용해시키고, 혼합물을 아르곤 대기 하 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜 초과량의 트리메틸포스핀을 제거하고, 표제 화합물 17 을 실시예 2 에서 5 의 정제에 대해 기재된 조건 하에 HPLC 로 정제한 후 수득하였다.
ESI-MS (+): 438.54 ([M-2×시트레이트]/2+Na-H), 416.46 ([M-2×시트레이트]/2) m/z.
실시예 16. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- 디메틸포스피노에틸)아미드 (화합물 18 )
실시예 1 에 기재된 바와 같이 수득한 Bpheid-173-(1-옥시-숙신이미드) (10 mg) 를 클로로포름 (5 ml) 중 (2-아미노에틸)디메틸포스핀 (200 mg) 과 실온에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 표제 화합물 18 을 실리카 컬럼 상에서 정제하고, 클로로포름-아세톤 (15:1, vol/vol) 으로 용리시켰다.
ESI-MS (+): 825.34 (M+Na), 803.88 (M+H) m/z.
DIEA 존재 하에 메틸 아이오다이드로 화합물 18 을 처리하여, 4 차 포스포늄기를 갖는 생성물을 유도하고, HPLC 정제 후, 이것이 상기 실시예 15 에서 수득한 화합물 17 과 동일함을 발견하였다.
실시예 17. 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 13 1 ,17 3 -디(2- As 3 -트리메틸아르소늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 19 )
화합물 16 (8 mg) 을 트리플루오로아세트산 무수물 (1 ml) 에 용해시키고, 30 분 후에 혼합물을 건조 시까지 증발시켰다. 건조된 생성물을 테트라히드로푸란 중 트리메틸아르신의 용액 (0.5 mM 용액, 2 ml; 순수 반응물로부터 제조한 것, Cat. No 33-3750, Strem) 에 용해시키고, 혼합물을 아르곤 대기 하 45 ℃ 에서 3 일 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 증발시켜 초과량의 트리메틸아르신을 제거하고, 표제 생성물 19 를 실시예 2 에서 5 의 정제에 대해 기재된 바와 같은 조건 하에 HPLC 로 정제하였다.
ESI-MS (+): 1133.94 ([M-시트레이트]+Na-H), 460.40 ([M-2×시트레이트]/2) m/z.
실시예 18. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 3 -트리메틸암모늄에틸)아미드 아세테이트 (염) (화합물 24 )
상기 화합물의 클로라이드 염은 실시예 9 에 기재되어 있다 (화합물 12 ).
표제 화합물의 제조를 위해, 20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol), 24 mg 의 (2-아미노에틸)-트리메틸암모늄 클로라이드 히드로클로라이드 (137 μmol) 및 아스코르브산 나트륨 (1　μmol) 을 실온에서 아르곤 대기 하에 DMF 중 트리에틸아민의 1:1 진공 탈기 혼합물 1 ml 중에서 교반하였다. 끝에는, 반응 혼합물을 실온에서 진공 중에 증발시키고, 1 ml 의 물을 첨가하고, 생성물을 Sep-Pak RP-18 컬럼 (Waters) 에 넣고, 먼저 물 20 ml 로 세척한 다음 물 중 아세토니트릴의 10% 용액 10 ml 로 세척하고, 물 중 아세토니트릴의 50% 용액으로 용리시키고, 증발시켰다. 산화를 방지하기 위해 질소 대기 하 글로브 박스 내에서 모든 마무리 작업을 수행하였다.
구조식: C40H54N6O6Pd + 1 CH3COO-
분자량: 821.3 + 59.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.05 분
M.S (+): m/z = 821
UV-Vis 스펙트럼: 756 nm, 532 nm, 386 nm, 328 nm
실시예 19. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드 (화합물 25 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (8.66 mmol) 의 N,N-디메틸 에틸렌디아민 (95%) 을 실온에서 2 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응의 끝에서, 혼합물을 3 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C39H50N6O6Pd + 1 CH3COOH
분자량: 803.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.46 분
M.S (+): m/z = 803
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 748 nm, 521 nm, 384 nm, 332 nm
실시예 20. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(3-N 2 -디메틸아미노프로필)아미드 (화합물 26 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (7.88 mmol) 의 3-디메틸아미노-1-프로필아민 (99%) 을 실온에서 2 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응의 끝에서, 혼합물을 5 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C40H52N6O6Pd + 1 CH3COOH
분자량: 817.30 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간:14.26 분
M.S (+): m/z = 817
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 749 nm, 516 nm, 380 nm, 334 nm
실시예 21. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 27 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (18.35 mmol) 의 디에틸렌트리아민 (99%) 을 실온에서 3 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 혼합물을 5 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C39H51N7O6Pd + 2 CH3COOH
분자량: 818.3 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.91 분
M.S (+): m/z = 818.
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 752 nm, 519 nm, 380 nm, 334 nm.
실시예 22. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -([2-비스(2- 아미노에틸 )아미노]에틸)아미드 (화합물 28 )
20 mg (28 μmol) 의 Pd-Bpheid, 3 을 1 ml 의 N-메틸-2-피롤리돈 중 1 ml (6.7 mmol) 의 트리스-(2-아미노에틸) 아민과 함께 실온에서 아르곤 대기 하에 90 분 동안 교반하였다. 생성물을 C-18 컬럼을 포함한 HPLC 에 주입하여 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C41H56N8O6Pd + 3 CH3COOH
분자량: 861.4 + 180.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
M.S (+): m/z = 861.
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 750 nm, 516 nm, 354 nm.
실시예 23. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2- 모르폴리노 -N-에틸)아미드 (화합물 29 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (7.5 mmol) 의 N-(2-아미노에틸)모르폴린 (98%) 을 실온에서 4 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응의 끝에서, 혼합물을 3 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C41H52N6O7Pd + 1 CH3COOH
분자량: 845.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.68 분
M.S (+): m/z = 845.
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 749 nm, 516 nm, 383 nm, 331 nm.
실시예 24. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2-피페라지노-N-에틸)아미드 (화합물 30 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 0.5 ml (3.7 mmol) 의 1-(2-아미노에틸)피페라진 (97%) 을 실온에서 19 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응의 끝에서, 혼합물을 1 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 30% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C41H53N7O6Pd + 2 CH3COOH
분자량: 844.3 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.37 분
M.S (+): m/z = 844
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 747 nm, 516 nm, 380 nm, 330 nm
실시예 25. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2-[(2-N 2 -디 에틸아미노에 틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 31 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (2.66 mmol) 의 N,N-디에틸디에틸렌트리아민 (98%) 을 실온에서 4 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응의 끝에서, 혼합물을 1 ml 의 물로 희석하고, 빙초산으로 중화시켰다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 30% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C43H59N7O6Pd + 2 CH3COOH
분자량: 874.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.77 분
M.S (+): m/z = 874
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 742 nm, 513 nm, 380 nm, 330 nm
실시예 26. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드 (화합물 32 )
Pd-Bpheid 3 (30 mg, 420 μmol) 및 비스(3-아미노프로필)아민 (3 ml, 20.61 mmol) 을 실온에서 2 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응 완료 (TLC) 후에 반응 혼합물을 물 (100 ml) 로 희석하고, 용액을 분리 깔때기 내에서 n-부탄올로 (2 회, 각각 100 및 50 ml 로) 추출하였다. 부탄올 추출물을 50 ml 물로 3 회 세척하였다. NaCl 의 25% 수용액 10-ml 부를 첨가함으로써 상 분리를 향상시켰다. 부탄올 추출물을 MgSO4 로 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 고체를 10% 수성 아세트산 (10 ml) 에 재용해시키고, 10 배 부피의 아세톤을 첨가함으로써 생성물을 침전시켰다. 침전물을 0.5% 수성 아세트산 (13 ml) 에 재용해시키고, 동결건조시켰다.
구조식: C41H53N7O6Pd + 2 CH3COOH
분자량: 846.5 +120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.63 분
M.S (+): m/z = 846
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 752 nm, 519 nm, 380 nm, 334 nm.
실시예 27. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-N 3 -트리메틸암모늄에틸)아미드 디아세테이트 염 (화합물 33 )
상기 화합물의 디포스페이트 염은 실시예 8 에 기재되어 있다 (화합물 11 ).
표제 화합물의 제조를 위해, 101 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (141 μmol) 및 10 ml 의 에틸렌디아민 (148 mmol) 을 실온에서 2 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 2.3 ml 의 클로로포름 중 659 mg 의 커플링제 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PyBroP) (1.4 mmol) 의 용액을 반응에 도입하였다. 혼합물을 추가 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 5 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 혼합물을 250 ml 의 클로로포름으로 희석하고, 200 ml 의 물로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 약 245 mg 의 화합물 10 을 수득하였다.
화합물 10 (245 mg) 을 90 ml 의 클로로포름에 용해시켰다. 반응 혼합물을 디이소프로필에틸 아민 (DIEA) (2.6 ml, 14.88 mmol) 을 도입하기 전 약 5 분 동안 아르곤으로 탈기시켰다. 5 분 교반 후, CH3I (2 ml, 31.8 mmol) 를 반응에 도입하였다. 저속 스트림의 아르곤을 추가 2 분 동안 통과시켰다. 반응을 실온에서 암흑 속에 하룻밤 동안 교반하였다.
이후에 중속 스트림의 아르곤을 반응 용액에 통과시켜, 미반응 CH3I 를 제거하였다. 용매를 증발시키고, 잔여 생성물을 350 ml 의 물에 용해시키고, 에틸 아세테이트로 세척하였다 (4 × 100 ml). 150 ml 의 최종 부피까지 물을 증발시킴으로써 수용액을 농축시켰다.
생성물을 2% 의 아세트산을 함유한 5 ml 의 아세토니트릴로 용리시킴으로써, 처음에 120 ml 의 물 및 200 ml 의 1% 수성 아세트산으로 예비 세척한 Sep-Pack 컬럼 상에서 50-ml 부의 수용액으로 정제하였다. 몇몇의 분리된 아세토니트릴 용액을 조합하고, 용매를 증발시켰다. 정제된 생성물을 3 ml 의 물에 재용해시키고, 동결건조시켰다.
화학식: C45H66N8O5Pd + 2 CH3COO-
분자량: 904.4 + 118.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 11.35 분
M.S (+): m/z = 904
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 747 nm, 514 nm, 382 nm, 330 nm
실시예 28. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디 (3-아미노프로필 )아미드 (화합물 34 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (23.7 mmol) 의 새롭게 증류된 1,3-디아미노프로판을 실온에서 75 분 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 200 μl 의 클로로포름 중 138.8 mg 의 PyBroP (297 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 30 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 혼합물을 50 ml 의 클로로포름으로 희석하고, 2 × 100 ml 의 물로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다. 최종 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C41H54N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 845.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 10.81 분
M.S (+): m/z = 845
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 745 nm, 514 nm, 380 nm, 330 nm
실시예 29. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(4-아미노부틸)아미드 (화합물 35 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (19.7 mmol) 의 1,4-디아미노부탄을 30 ℃ 에서 1 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 200 μl 의 클로로포름 중 133.4 mg 의 PyBroP (286 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 60 분 동안 30 ℃ 에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 초과량의 아민을 증발시키고, 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C43H58N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 873.2 +120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 5.11 분
M.S (+): m/z = 873
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 748 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm
실시예 30. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 10 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (29.6 mmol) 의 에틸렌디아민을 실온에서 40 분 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 200 μl 의 클로로포름 중 136.8 mg 의 PyBroP (293 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 2 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 50 ml 의 클로로포름으로 희석하고, 100 ml 의 물로 2 회 세척하였다. 용매를 증발시키고, 최종 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C39H50N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 817.3 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 10.13 분
M.S (+): m/z = 817
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 750 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm
실시예 31. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드 (화합물 36 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1.5 ml (13 mmol) 의 N,N-디메틸에틸렌디아민을 실온에서 1 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 170 μl 의 클로로포름 중 131 mg 의 PyBroP (281 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 50 ml 의 에틸 아세테이트로 희석하고, 100 ml 의 물로 2 회 세척하였다. 용매를 증발시키고, 최종 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C43H58N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 873.2 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 6.56 분
M.S (+): m/z = 873
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 748 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm
실시예 32. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(3-N 2 -디메틸아미노프로필)아미드 (화합물 37 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1.5 ml (11.8 mmol) 의 3-디메틸아미노-1-프로필아민을 실온에서 1 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 170 μl 의 클로로포름 중 130.6 mg 의 PyBroP (280 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 50 ml 의 에틸 아세테이트로 희석하고, 100 ml 의 물로 2 회 세척하였다. 수층을 100 ml 에틸 아세테이트로 세척하였다. 두 유기 층을 합하고, 증발시켰다. 최종 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C45H62N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 901.2 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.9 분
M.S (+): m/z = 901
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 746 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm
실시예 33. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디-(2-[(2- 아미노에틸 )아미노]에틸)아미드 (화합물 38 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (18.3 mmol) 의 디에틸렌트리아민을 실온에서 90 분 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 700 μl 의 클로로포름 중 130 mg 의 PyBroP (279 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 빙초산으로 중화시키고, 물로 희석하였다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C43H60N10O5Pd + 4 CH3COOH
분자량: 904.1 + 240.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 1.95 분 (응집물)
M.S (+): m/z = 904
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 745 nm, 514 nm, 382 nm, 330 nm
실시예 34. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디-(2-[(2-N 2 -디에틸아미노에틸)아미노]에틸) 아미드 (화합물 39 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (5.33 mmol) 의 N,N-디에틸-디에틸렌트리아민을 실온에서 4 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 500 μl 의 클로로포름 중 130 mg 의 PyBroP (279 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 2.5 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 빙초산으로 중화시키고, 물로 희석하였다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C51H76N10O5Pd + 4 CH3COOH
분자량: 1015.5 + 240.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 5.3-6.6 분
M.S (+): m/z = 1015
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 743 nm, 512 nm, 380 nm, 329 nm
실시예 35. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-모르폴리노-N-에틸)아미드 (화합물 40 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 2 ml (15.2 mmol) 의 N-(2-아미노에틸)모르폴린을 실온에서 2 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 700 μl 의 클로로포름 중 136 mg 의 PyBroP (291 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 빙초산으로 중화시키고, 물로 희석하였다. 혼합물을 물에 용해시키고, 클로로포름 (3 × 100 ml) 으로 세척하였다. 유기 용매 증발시키고, 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C47H62N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 958.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 11.6 분
M.S (+): m/z = 958
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 745 nm, 513 nm, 381 nm, 330 nm.
실시예 36. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-피페라지노-N-에틸)아미드 (화합물 41 )
20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 1 ml (7.4 mmol) 의 N-(2-아미노에틸)피페라진 (97%) 을 실온에서 22 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 이후, 500 μl 의 클로로포름 중 130 mg 의 PyBroP (279 μmol) 의 용액을 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 3.5 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 반응 혼합물을 빙초산으로 중화시키고, 물로 희석하였다. 생성물을 분취용 HPLC (C-18 컬럼, 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산, 구배: 40% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C47H64N10O5Pd + 4 CH3COOH
분자량: 955.5+ 240.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 11.4 분
M.S (+): m/z = 955
UV-Vis 스펙트럼 (MeOH): 744 nm, 513 nm, 380 nm, 329 nm.
실시예 37. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도박테리오클로린-13 1 ,17 3 -디-(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드 (화합물 42 )
활성 에스테르 제조- 전형적으로는, 25 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (35 μmol) 및 39.4 mg 의 N-히드록시숙신이미드 (HOSu 또는 NHS) (342 μmol) 를 1 ml 의 건조 DMF 에 아르곤 하에서 용해시켰다. 31 mg 의 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) (150 mmol) 를 500 ml 의 건조 DMF 에 첨가하였다. 반응을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 그 다음, DMF 를 증발시키고, 생성물을 용리액으로 95% CHCl3:5% EtOH 를 사용한 SiO2 액체 크로마토그래피로 정제하였다. 그 다음, 용매를 증발시켜, 55 mg 의 활성화된 에스테르를 수득하였다. 실험은 활성 에스테르를 단리하고 정제할 필요가 없음을 보여준다.
20 mg 의 Pd-Bpheid-OSu (24.7 μmol) 를 실온에서 1 ml 의 새롭게 증류된 (3-아미노프로필)아민과 함께 3 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온에서 진공 증발시켰다. 증발 후, 1 ml 의 물을 잔여물에 첨가하고, 생성물을 C-18 상 분취용 HPLC (이동상: A = 물 중 0.1% 아세트산, pH=7.2, B = 아세토니트릴 중 0.1% 아세트산, pH=7.2, 구배: 20% B (0-2 분) 에서 90% B (20-22 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C47H68N10O5Pd + 4 CH3COOH
분자량: 959.4 + 240.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.83 분
M.S (+): m/z = 959
UV-Vis 스펙트럼: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 330 nm, 268 nm
실시예 38. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 43 )
상기 실시예 38 에서 제조한 20 mg 의 Pd-Bpheid-OSu (24.7 μmol) 를 실온에서 1 ml 의 트리스(2-아미노에틸)아민과 함께 3 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 실온에서 진공 증발시켰다. 그 다음, 1 ml 의 물을 잔여물에 첨가하고, 생성물을 C-18 실리카 컬럼을 사용한 분취용 HPLC (이동상: A = 물 중 0.1% 아세트산, pH=7.2, B = 아세토니트릴 중 0.1% 아세트산, pH=7.2, 구배: 20% B (0-2 분) 에서 90% B (20-22 분), 유속: 4 ml/분) 로 정제하였다.
구조식: C47H70N12O5Pd + 6 CH3COOH
분자량: 989.4 + 360.3
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 114.15 분
M.S (+): m/z = 989
UV-Vis 스펙트럼: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm
실시예 39. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-N-( 2'-피리딜)아미노에틸)아미드 (화합물 44 )
1) 500 mg 의 2-클로로피리딘 (4.40 mmol) 을 3.0 ml 의 에틸렌디아민 (44.0 mmol) 에 용해시키고, 혼합물을 6 시간 동안 100 ℃ 에서 환류시켰다. 끝에는, 과량의 에틸렌디아민을 진공 중 실온에서 증발시켰다. 생성물 N-(2-피리딜)에틸렌디아민을 실리카 겔 60 (0.040-0.063 mm) 상에서 정제하였다. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%.
시트 실리카 겔 60 F254 상 TLC 분석. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%. 생성물 Rf = 0.43.
2) 30 mg 의 Pd-Bpheid-OSu (0.037 mmol, 실시예 38 에서 제조한 것) 를 건조 디메틸포름아미드 중 110 mg 의 N-(2-피리딜)에틸렌디아민 (0.80 mmol) 의 용액에 첨가하였다. 용액을 5 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다.
생성물을 C-18 컬럼을 사용한 분취용 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C49H56N10O5Pd + 4 CH3COOH
분자량: 971.5 + 240.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.96 분
M.S (+): m/z = 971
UV-Vis 스펙트럼: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm
실시예 40. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 ,17 3 -디(2-N 2 -디에틸아미노에틸)아미드 (화합물 45)
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 300 μl 의 2-(디에틸아미노)에틸아민 (2.11 mmol) 중에 실온에서 3 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 가아민분해 생성물을 HPLC-MS 로 분석하였다.
체류 시간: 15.49 분. M.S (+): m/z = 831
2) 200 μl 의 DMF 중 40 mg 의 PyBroP (0.086 mmol) 의 용액을 이전의 반응 혼합물에 첨가하였다. 용액을 실온에서 3 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다.
생성물을 C-18 컬럼을 사용한 분취용 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C47H66N8O5Pd + 2 CH3COOH
분자량: 931.5 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.81 분
M.S (+): m/z = 931
UV-Vis 스펙트럼: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm
실시예 41. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-N 3 -트리메틸 암모늄에 틸 )아미드 아세테이트 염 (화합물 46 )
1) Pd-Bpheid, 3 (100 mg, 0.140 mmol) 을 1.0 ml 의 N-메틸-2-피롤리돈 (NMP) 및 3-아미노-1,2-프로판디올 (405 mg, 4.45 mmol) 에 용해시켰다. 용액을 3 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 수득한 생성물 (Pd-Bpheid-아미노프로판디올 부가물) 을 실리카 겔 60 (0.040-0.063 mm) 상에서 정제하였다. 이동상: 메탄올 90% - 암모니아 용액 10%.
시트 실리카 겔 60 F254 상 TLC 분석. 이동상: 메탄올 80%, 암모니아 용액 20%. 생성물 Rf = 0.86.
생성물을 HPLC-MS 로 분석하였다. 체류 시간: 18.42 분
M.S (+): m/z = 805
2) Pd-Bpheid-아미노프로판디올 부가물 (37 mg, 0.052 mmol) 을 1.5 ml 의 NMP 에 용해시켰다. 커플링제 벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU) (200 mg, 0.52 mmol), 트리에틸아민 (110 μl, 0.78 mmol) 및 (2-아미노에틸)트리메틸암모늄 클로라이드 히드로클로라이드 (46 mg, 0.26 mmol) 를 첨가하였다. 용액을 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C43H61N7O7Pd + CH3COO-
분자량: 892.4 + 59.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.34 분
M.S (+): m/z = 892
실시예 42. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2- 아미노에틸 ) 아미드 (화합물 47 )
1) 화합물 46 에 대해 실시예 42 에 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 37 mg 의 Pd-Bpheid-아미노프로판디올 부가물 (0.052 mmol) 을 300 μl 의 NMP 에 용해시켰다. 22 mg 의 PyBroP (0.046 mmol), 10 μl 의 에틸렌디아민 (0.155 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C40H53N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 848.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.15 분
M.S (+): m/z = 848
실시예 43. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-아미노에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필) 아미드 (화합물 48 )
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 1 ml (15 mmol) 의 에틸렌디아민 중에 30 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 끝에서, 초과량의 에틸렌디아민을 진공 중 실온에서 증발시킨 다음, 용액을 액체 질소 중에서 동결시키고, 동결건조시켜, 에틸렌디아민의 흔적을 제거하였다.
2) 가아민분해 생성물을 100 μl 의 클로로포름에 용해시킨 80 mg (0.17 mmol) 의 PyBroP 및 2 ml 의 NMP 에 용해시킨 80 mg (0.88 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올과 실온에서 아르곤 대기 하에 16 시간 동안 반응시켰다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C40H53N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 848.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 8.43 분
M.S (+): m/z = 848
실시예 44. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-N 2 -디메틸 아미노 에틸 )아미드 (화합물 49 )
1) 실시예 42 에서 화합물 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) Pd-Bpheid 아미노프로판디올 부가물 (25 mg, 0.031 mmol) 을 300 μl 의 NMP 에 용해시켰다. HBTU (120 mg, 0.32 mmol), N,N-디메틸-에틸렌디아민 (14 mg, 0.16 mmol) 및 탄산 칼륨 (88 mg) 을 첨가하였다. 완충 용액을 pH=7 까지 첨가하였다. 용액을 20 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 876.3 +60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.74 분
M.S (+): m/z = 876
실시예 45. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 50 )
1) 실시예 20 에서 화합물 25 에 대해 기재된 바와 같이, N,N-디메틸 에틸렌디아민으로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 가아민분해 생성물을 100 μl 의 클로로포름에 용해시킨 80 mg (0.17 mmol) 의 PyBroP 및 2 ml 의 NMP 에 용해시킨 80 mg (0.88 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올과 실온에서 아르곤 대기 하에 16 시간 동안 반응시켰다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 876.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.31 분
M.S (+): m/z = 876
실시예 46. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-[(2- 아미노에틸 )아미노]에틸)아미드 (화합물 51 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 12 mg 의 Pd-Bpheid 아미노프로판디올 부가물 (0.015 mmol) 을 400 μl 의 DMF 에 용해시켰다. 34 mg 의 HBTU (0.64 mmol), 21 μl 의 트리에틸아민 (0.15 mmol) 및 16 μl 의 디에틸렌트리아민 (0.15 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 5 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H58N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 891.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.42 분
M.S (+): m/z = 891
실시예 47. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-[(2-N 2 -디에틸 아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 52 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 20 mg 의 Pd-Bpheid 아미노프로판디올 부가물 (0.025 mmol) 을 1.0 ml 의 NMP 에 용해시켰다. 94 mg 의 HBTU (0.25 mmol), 52 μl 의 트리에틸아민 (0.375 mmol) 및 23 μl 의 N,N-디에틸디에틸렌트리아민 (0.125 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 3 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C46H66N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 947.5 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 11.70 분
M.S (+): m/z = 947
실시예 48. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-모르폴리노-N-에틸)아미드 (화합물 53 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 50 mg 의 Pd-Bpheid 아미노프로판디올 부가물 (0.07 mmol) 을 800 μl 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 80 mg 의 HOSu (0.70 mmol) 및 216 mg 의 DCC (1.04 mmol) 를 첨가하였다. 용액을 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 에 주입하여 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
3) 7.0 mg 의 Pd-Bpheid-아미노프로판디올-OSu-활성화 화합물 (7.77 × 10-3 mmol) 을 200 μl 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 25 μl 의 건조 N-메틸-모르폴린 (0.23 mmol) 및 30 μl 의 N-(2-아미노에틸)모르폴린 (0.23 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 75 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분
구조식: C44H59N7O8Pd + CH3COOH
분자량: 918.4 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.05 분
M.S (+): m/z = 918
실시예 49. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2- 피페라지노 -N-에틸)아미드 (화합물 54 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 23 mg 의 Pd-Bpheid 아미노프로판디올 부가물 (0.032 mmol) 을 200 μl 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 5.55 mg 의 HOSu (0.048 mmol) 및 10.85 mg 의 DCC (0.048 mmol) 를 첨가하였다. 용액을 22 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다.
3) (2) 의 반응 용기에, 4 μl 의 1-(2-아미노에틸)피페라진 (0.03 mmol) 및 12 μl 의 트리에틸아민 (0.09 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 4 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분
구조식: C44H60N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 917.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.03 분
M.S (+): m/z = 917.
실시예 50. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 55 )
1) 실시예 22 에서 화합물 27 에 대해 기재된 바와 같이, 디에틸렌트리아민에 의한 Pd-Bpheid 의 가아민분해를 수행하였다. 생성물을 80% 메탄올 및 20% 암모니아 유출액을 사용하여 실리카 컬럼 상에서 정제하였다.
2) Pd-Bpheid 가아민분해 생성물을 100 μl 의 클로로포름에 용해시킨 80 mg (0.17 mmol) 의 PyBroP 및 2 ml 의 NMP 에 용해시킨 80 mg (0.88 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올과 실온에서 아르곤 대기 하에 16 시간 동안 반응시켰다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H58N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 890 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 11.90 분
M.S (+): m/z = 890
실시예 51. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(2-N-( 2'-피리딜 ) 아미노에틸 )아미드 (화합물 56 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 19 mg 의 Pd-Bpheid 가아민분해 생성물 (0.024 mmol) 을 1.0 ml 의 건조 NMP 에 용해시켰다. 실시예 40 에 기재된 바와 같이 제조한 97 mg 의 N-(2-피리딜)에틸렌디아민 (0.142 mmol), 77 mg 의 커플링제 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU) (0.24 mmol) 및 50 μl 의 트리에틸아민 (0.36 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분
구조식: C45H56N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 925.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.38 분
M.S (+): m/z = 925
실시예 52. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2-N-(2'-피리딜) 아미노에틸 )아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 57 )
1) 상기 실시예 40 에 기재된 바와 같이 제조한 N-(2-피리딜)에틸렌디아민 (200 mg) 을 40 mg 의 Pd-Bpheid 와 하룻밤 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 혼합하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
2) Pd-Bpheid-2-(디아미노에틸)-피리딘 가아민분해 생성물 (35 mg, 0.042 mmol) 을 200 μl 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 10 mg 의 HOSu (0.086 mmol) 및 22 mg 의 DCC (0.105 mmol) 를 첨가하였다. 용액을 5 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다.
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다. 체류 시간: 18.91 분.
M.S (+): m/z = 949
2) 28 mg 의 Pd-Bpheid-2-(디아미노에틸)-피리딘-OSu-활성화 에스테르 (0.03 mmol) 를 300 μl 의 건조 디메틸포름아미드에 용해시켰다. 28 mg 의 3-아미노-1,2-프로판디올 (0.31 mmol) 및 41 μl 의 트리에틸아민을 첨가하였다. 용액을 14 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C45H56N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 925.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.53 분
M.S (+): m/z = 925
실시예 53. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -([2-비스(2- 아미노에틸 )아미노]에틸)아미드 (화합물 58 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 Pd-Bpheid 를 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 모든 용매를 진공 탈기시켰다. 정제된 아미노 디올을 2 ml 의 NMP 및 200 μl 의 DMSO 에 용해시켰다. 상기 용액에, 200 μl 의 클로로포름 중 100 mg (0.21 mmol) 의 PyBroP, 및 160 μl (1 mmol) 의 액체 트리스(2-에틸아미노)아민을 첨가하였다. 화합물을 아르곤 하 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C44H63N9O7Pd + 3 CH3COOH
분자량: 933.2 + 180.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 10.86 분
M.S (+): m/z = 933.
실시예 54. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -([2-비스(2-아미노에틸)아민]에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 59 )
1) 25 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (35 μmol) 및 39.4 mg 의 HOSu (342 μmol) 를 1 ml 의 건조 DMF 에 아르곤 대기 하에서 용해시켰다. 500 μl 의 건조 DMF 에 용해시킨 31 mg 의 DCC (150 μmol) 를 도입하였다. 반응을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. DMF 를 증발시키고, 생성물을 정체 상으로서의 SO2 및 용리액으로서의 95%CHCl3:5%EtOH 를 사용하여 액체 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 4 개의 제 1 분획에 수용시켰다. 용매를 증발시키고; 55 mg 의 Pd-Bpheid-OSu 를 수용시켰다.
2) 25 mg 의 이전 생성물 Pd-Bpheid-OSu (30 μmol) 를 1 ml 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 상기 용액에 13 μl 의 N,N-디이소프로필에틸아민 (DIPEA) (74 μmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 대기 하에 2~3 분 동안 교반하였다. 1 ml DMF 중 3-아미노-1,2-프로판디올 (97 μl, 37 μmol) 을 반응 용기에 첨가하였다. 반응을 실온에서 비활성 대기 하에 5 시간 동안 교반하였다. 가아민분해 생성물은 검출되지 않았다.
3) 200 ml (1.28 mmol) 의 트리스(아미노에틸)아민을 (2) 의 반응 용기에 첨가하였다. 아르곤을 반응 용기에 통과시켰다. 혼합물을 하룻밤 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 30 ml 의 물로 희석하고 수성 층을 30 ml 의 n-부탄올로 세척함으로써 생성물을 정제하였다. 그 다음, 유기 층을 3 × 30 ml 의 물로 세척하였다. 부탄올을 증발시키고, 생성물을 1.5 ml 의 산성수 및 300 μl 의 아세토니트릴에 용해시켰다. 용액을 분취량으로 나누고 동결건조시켰다.
구조식: C44H63N9O7Pd 3 CH3COOH
분자량: 933.2 + 180.2
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.46 분
M.S (+): m/z = 934
실시예 55. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(3-아미노프로필)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 60 )
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 1 ml (11.8 mmol) 의 1,3-디아미노프로판 중에서, 60 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 초과량의 아민을 높은 진공 중에 16 시간 동안 증발시켰다.
2) 생성물을 1 ml 의 DMSO 및 1 ml 의 DMF 에 용해시키고, 500 μl 의 클로로포름 중 100 mg (0.21 mmol) 의 PyBroP 의 용액 및 100 mg 의 3-아미노-1,2-프로판디올과 함께, 실온에서 아르곤 대기 하에 16 시간 동안 교반하였다. 물에 의한 침전 후 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 정제로, 생성물의 정제를 수행하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C41H55N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 861.2 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.06 분
M.S (+): m/z = 861
실시예 56. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(4-아미노부틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필) 아미드 (화합물 61 )
1) 20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 및 0.5 ml (4.9 mmol) 의 1,4-디아미노부탄 (99%) 을 30 ℃ 에서 4 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하고, 이 때 1 ml 의 물을 반응 용기에 첨가하고 2~3 분 동안 교반하였다. 그 다음, 용액을 동결건조시켰다.
2) Pd-Bpheid 가아민분해 생성물을 2 ml 의 건조 DMF 에 용해시켰다. 400 μl 의 건조 DMF 중 414 mg (4.4 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올 (97%) 의 용액을 혼합물에 첨가하였다. 반응 용기를 아르곤으로 씻어내었다. 500 μl 의 클로로포름 중 130 mg 의 PyBroP (279 μmol) 를 반응 용기에 도입하였다. 혼합물을 추가 90 분 동안 30 ℃ 에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 반응을 냉각시키고, 1 ml 의 물을 첨가함으로써 초과량의 커플링제를 소멸시켰다. 혼합물을 100 ml 의 물로 희석하였다. 생성물을 100 ml 및 3 × 50 ml 의 클로로포름으로 4 회 추출하였다. 유기 세척물을 조합하고, 증발시켰다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = A = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 876.4 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.32 분
M.S (+): m/z = 876
실시예 57. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2- N 2 -디에틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시 프로필)아미드 (화합물 62 )
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (0.042 mmol) 을 300 μl 의 2-(디에틸아미노에틸)아민 (2.11 mmol) 에 용해시켰다. 용액을 3 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 초과량의 2-(디에틸아미노에틸)아민을 높은 진공 중에 증발시켰다.
생성물을 HPLC-MS 로 분석하였다. 체류 시간: 15.49 분.
M.S (+): m/z = 831
2) 27 mg 의 3-아미노-1,2-프로판디올 (0.3 mmol), 28 mg 의 PyBroP (0.06 mmol) 및 300 μl 의 DMF 를 단락 1 의 용액에 첨가하였다. 용액을 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C44H61N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 906.4 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.93 분
M.S (+): m/z = 904
실시예 58. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N-에틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시 프로필 )아미드 (화합물 63 )
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 1 ml (9.5 mmol) 의 N-에틸에틸렌디아민 중에서, 60 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 초과량의 아민을 높은 진공 중에 증발시켰다.
2) 그 다음, 생성물을 800 μl 의 DMF 에 용해시키고, 200 μl 의 DMF 중 70 mg (0.77 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올의 용액 및 200 μl 의 클로로포름 중 70 mg (0.15 mmol) 의 PyBroP 의 용액과 함께, 실온에서 아르곤 대기 하에 2 시간 동안 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 875.2 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.16 분
M.S (+): m/z = 875
실시예 59. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(3-N-메틸아미노프로필)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 64 )
1) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 1 ml (9.6 mmol) 의 N-메틸-1,3-프로판디아민 중에서, 120 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 그 다음, 초과량의 아민을 높은 진공 중에 증발시켰다.
2) 그 다음, 생성물을 800 μl 의 DMF 에 용해시키고, 200 μl 의 DMF 중 80 mg (0.88 mmol) 의 3-아미노-1,2-프로판디올의 용액 및 200 μl 의 클로로포름 중 75 mg (0.16 mmol) 의 PyBroP 의 용액과 함께, 실온에서 아르곤 대기 하에 2 시간 동안 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O7Pd + CH3COOH
분자량: 875.2 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 12.93 분
M.S (+): m/z = 875
실시예 60. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2-히드록시 에틸)아미드 (화합물 65 )
1) 300 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (420 μmol), 655 mg 의 PyBroP (1260 μmol), 30.78 μl 의 에탄올아민 (504 μl), 0.6 ml 의 DMF 및 0.1 ml 의 트리에틸아민을 실온에서 1 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 증발시키고, 생성물을 물 클로로포름 추출로 정제하였다. 생성물을 함유한 클로로포름 상을 무수 MgSO4 으로 건조시키고, 여과시키고, 증발시켰다.
2) 증발 후, 460 μl 의 N,N-디메틸에틸렌디아민 (4.2 mmol) 을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 물 및 n-부탄올 추출로 정제하였다. 생성물을 함유한 n-부탄올 상을 건조시키고 (MgSO4 무수물), 여과시키고, 증발시켰다.
구조식: C41H55N7O6Pd + CH3COOH
분자량: 848.2 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
M.S (+): m/z (가장 풍부) = 846
UV-Vis 스펙트럼: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm, 264 nm
실시예 61. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -(3-히드록시 프로필 )아미드 (화합물 66 )
1) 실시예 20 에 화합물 25 에 대해 기재된 바와 같이 Pd-Bpheid 의 가아민분해를 수행하였다.
2) 그 다음, 상기 단계 1 에서 수득한 전체 생성물을 6 ml 의 DMF 에 용해시켰다. 1 ml 의 상기 용액을 20 μl (0.26 mmol) 의 3-아미노-1-프로판올, 70 mg (0.15 mmol) 의 PyBroP 및 20 μl (0.18 mmol) 의 N-메틸-모르폴린과 반응시켰다. 혼합물을 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O6Pd + CH3COOH
분자량: 859.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.38 분
M.S (+): m/z = 859
실시예 62. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2-히드록시 프로필 )아미드 (화합물 67 )
1) 실시예 20 에 화합물 25 에 대해 기재된 바와 같이 Pd-Bpheid 의 가아민분해를 수행하였다.
2) 그 다음, 생성물을 6 ml 의 DMF 에 용해시켰다. 1 ml 의 상기 용액을 20 μl (0.25 mmol) 의 1-아미노-2-프로판올, 70 mg (0.15 mmol) 의 PyBroP 및 20 μl (0.18 mmol) 의 N-메틸-모르폴린과 반응시켰다. 혼합물을 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C42H57N7O6Pd + CH3COOH
분자량: 859.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 14.82 분
M.S (+): m/z = 859.
실시예 63. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -((R)-2-히드록시프로필)아미드 (화합물 68 )
화합물 68 은 아미노 알코올의 R 광학 이성질체를 사용하여, 상기 실시예 63 에 기재된 화합물 67 과 동일하게 합성하였다.
구조식: C42H57N7O6Pd + CH3COOH
분자량: 859.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.52 분
M.S (+): m/z = 859.
실시예 64. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2- N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -((S)-2-히드록시프로필)아미드 (화합물 69 )
화합물 68 은 아미노 알코올의 S 광학 이성질체를 사용하여, 상기 실시예 63 에 기재된 화합물 67 과 동일하게 합성하였다.
구조식: C42H57N7O6Pd + CH3COOH
분자량: 859.3 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.50 분
M.S (+): m/z = 859.
실시예 65. 팔라듐 3 1 -옥소-15-메톡시 카르보닐메틸 -로도 박테리오클로린 -13 1 -(2-N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -(2-(2-히드록시에틸아미노)에틸)아미드 (화합물 70 )
1) 실시예 20 에 화합물 25 에 대해 기재된 바와 같이 Pd-Bpheid 의 가아민분해를 수행하였다.
2) 그 다음, 생성물을 6 ml 의 DMF 에 용해시켰다. 1 ml 의 상기 용액을 N-(2-히드록시에틸)-에틸렌디아민 (20 μl, 0.17 mmol), 70 mg (0.15 mmol) 의 PyBroP 및 20 μl (0.18 mmol) 의 N-메틸-모르폴린과 반응시켰다. 혼합물을 90 분 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C43H60N8O6Pd + 2 CH3COOH
분자량: 889.2 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.34 분
M.S (+): m/z = 888.
실시예 66. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(3-N-(2'-피리딜)아미노프로필)아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 71 )
1) 500 mg 의 2-클로로피리딘 (8.73 mmol) 을 3.6 ml 의 1,3-디아미노프로판 (44 mmol) 에 용해시켰다. 100 mg 의 탄산 칼륨 및 200 μl 의 DMF 를 첨가하였다. 화합물을 22 시간 동안 102 ℃ 에서 환류시켰다. 생성물인 N-(2-피리딜)프로필렌디아민을 실리카 겔 60 (0.040-0.063 mm) 상에서 정제하였다. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%. 생성물은 무색 오일이었다. 시트 실리카 겔 60 F254 상 TLC 분석. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%. 생성물 Rf = 0.38.
2) 20 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (28 μmol) 을 300 μl 의 NMP 에 용해시키고, 125 mg (0.83 mmol) 의 N-(2-피리딜)프로필렌디아민을 첨가하였다. 용액을 23 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 가아민분해 생성물을 실리카 겔 60 (0.040-0.063 mm) 상에서 정제하였다. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%.
생성물을 HPLC-MS 로 분석하였다. 체류 시간: 8.02 분.
M.S (+): m/z = 864.
3) Pd-Bpheid 가아민분해 생성물 (30 mg, 0.023 mmol) 을 400 μl 의 NMP 에 용해시켰다. 90 mg 의 HBTU (0.24 mmol), 50 μl 의 트리에틸아민 (0.35 mmol) 및 20 mg 의 3-아미노-1,2-프로판디올 (0.23 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 4 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C46H58N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 941.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 18.89 분
M.S (+): m/z = 941.
실시예 67. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(4-N-(2'-피리딜) 아미노부틸 )아미드-17 3 -(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 72)
1) 0.835 ml 의 2-클로로피리딘 (8.8 mmol) 을 8.8 ml 의 1,4-디아미노부탄 (88 mmol) 에 용해시켰다. 혼합물을 4 시간 동안 128 ℃ 에서 환류시켰다. 생성물을 실리카 겔 60 (0.040-0.063 mm) 상에서 정제하였다. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%. 생성물은 무색 오일이었다. TLC 시트 실리카 겔 60 F254. 이동상: 메탄올 90%, 암모니아 용액 10%. 부틸 디아민: Rf = 0, 생성물 Rf = 0.42.
2) 30 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (42 μmol) 을 700 μl 의 NMP 에 용해시키고, 80 mg (0.48 mmol) 의 N-(2-피리딜)부틸렌디아민을 첨가하였다. 용액을 15 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 22.36 분
M.S (+): m/z = 877.
3) 17 mg 의 Pd-Bpheid 가아민분해 생성물 (0.019 mmol) 을 400 μl 의 NMP 및 100 μl 의 물에 용해시켰다. 9 mg 의 HOSu (0.077 mmol), 17 mg 의 N-(3-디메틸아미노 프로필)-N-에틸카르보디이미드 (EDC) (0.87 mmol) 및 5 μl 의 암모니아 용액을 첨가하였다. 16 시간 후, 200 mg 의 3-아미노-1,2-프로판디올 (2.2 mmol) 을 첨가하였다. 용액을 2 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 분취용 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C47H60N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 949.5 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.79 분
M.S (+): m/z = 949
실시예 68. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(3-N-(2'- 피리딜 )아미노프로필)아미드 (화합물 73 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 32 mg 의 Pd-Bpheid 가아민분해 생성물 (0.04 mmol) 을 800 μl 의 NMP 에 용해시켰다. 152 mg 의 HBTU (0.4 mmol), 56 μl 의 트리에틸아민 및 60 mg 의 N-(2-피리딜)프로필렌디아민 (화합물 72 에 대해 앞서 기재한 바와 같이 제조한 것) 을 첨가하였다. 용액을 16 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C46H58N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 939.4 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.28 분
M.S (+): m/z = 939
실시예 69. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2,3-디히드록시프로필)아미드-17 3 -(4-N-(2'- 피리딜 ) 아미노부틸 )아미드 (화합물 74 )
1) 실시예 42 에서 46 에 대해 기재된 바와 같이, 3-아미노-1,2-프로판디올로 가아민분해하고, 이어서 정제를 수행하였다.
2) 25 mg 의 Pd-Bpheid 가아민분해 생성물 (0.031 mmol) 을 600 μl 의 NMP 에 용해시켰다. 120 mg 의 HBTU (0.31 mmol), 45 μl 의 트리에틸아민 및 50 mg 의 N-(2-피리딜)부틸렌디아민 (화합물 72 에 대해 앞서 기재한 바와 같이 제조한 것) 을 첨가하였다. 용액을 20 시간 동안 실온에서 아르곤 대기 하에 교반하였다. 생성물을 RP-18 컬럼을 사용한 HPLC 로 정제하였다. 이동상: A = 물 중 0.2% 아세트산, B = 아세토니트릴 중 0.2% 아세트산. 구배: 20% B (0-6 분) 에서 95% B (30-33 분). 유속: 4 ml/분.
구조식: C47H60N8O7Pd + 2 CH3COOH
분자량: 953.5 + 120.1
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 15.43 분
M.S (+): m/z = 953
실시예 70. 팔라듐 3 1 -옥소-15- 메톡시카르보닐메틸 - 로도박테리오클로린 -13 1 -(2- N 2 -디메틸아미노에틸)아미드-17 3 -( 글리코실 ) 아미드 (화합물 75 )
1) 300 mg 의 Pd-Bpheid, 3 (420 μmol) 및 476 mg 의 HOSu (4.14 mmol) 를 4 ml 의 건조 DMF 에 아르곤 대기 하에 용해시켰다. 2 ml 의 건조 DMF 에 용해시킨 435.5 mg 의 DCC (2.1 mmol) 를 도입하였다. 반응을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. TLC (92% CHCl3:8% MeOH) 는 미반응 Pd-Bpheid 가 없음을 나타내었다.
2) 926 mg 의 글리코실아민 히드로클로라이드, 98%, (4.28 mmol) 및 2190 μl 의 DIPEA (12.6 mmol) 를 활성 에스테르인 Pd-Bpheid-OSu 를 함유한 이전의 반응 용기에 도입하였다. 반응을 아르곤 대기 하 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. TLC (8% CHCl3:92% MeOH) 는 반응 용기 내에 미반응 활성 에스테르가 남아있지 않음을 나타내었다.
3) 3 ml 의 N,N-디메틸에틸렌디아민 (26 mmol) 을 단계 (2) 의 반응 용기에 첨가하고, 하룻밤 동안 실온에서 아르곤 하에 교반하였다. HPLC-MS 는 목적한 생성물 및 이의 Schiff 염기가 주요 생성물임을 나타내었다. 반응 혼합물을 100 ml 의 물로 희석하고, 4 × 50 ml 의 n-부탄올로 세척하였다. 분리를 달성하기 위해서는, 각 세척물에 소량의 수성 포화 NaCl 을 첨가할 필요가 있었다. 유기 층을 조합하고, 50 ml 의 물로 세척하였다. 그 다음, 부탄올을 증발시키고, 묽은 아세트산을 사용하여 잔여 Schiff 염기를 가수분해하였다. 증발된 생성물을 1% 아세트산을 함유한 60 ml 의 물로 희석하였다. 산성 용액을 1 시간 동안 아르곤 대기 하 실온에서 교반하였다. HPLC-MS 는 Schiff 염기가 완전히 소멸되었음을 나타내었다.
구조식: C45H61N7O9Pd + CH3COOH
분자량: 948.4 + 60.0
생성물을 HPLC 및 MS 정체 확인으로 분석하였다.
체류 시간: 13.81 분
M.S (+): m/z = 948
실시예 71. 인간 혈청 알부민 ( HSA ) 과 2 가 양이온성 화합물 5 의 상호작용
상이한 Bchl 유도체의 광역학적 활성은 혈청 알부민에 대한 결합에 의해서 현저하게 조절될 수 있는, 그들의 단량체 (이량체) 형태의 생물학적 이용도 및 세포 간 소통 둘 다에 결정적으로 좌우된다.
PBS 중 5 의 용액 (3.2 × 10-4 M, 100 μl) 을 다양한 양의 인간 혈청 알부민 (0.1, 0.5, 1, 2, 및 5 mg) 과 혼합하였다. 수용액 중 5 의 높은 농도에서, 747 nm 에서의 본래 단량체 피크가 720 및 760 nm 에서의 새로운 2 개의 피크로 분열됨에 의해 응집이 반영되었다. 응집의 상태는 0.1 mm 큐벳 중 실온에서의 알부민 농도 범위에 분광광도법적으로 따랐다. 피크 파장에서의 흡광 강도 값은 응집의 표시로서 취해졌다.
알부민의 첨가는 PBS 중 감광제 5 의 탈응집을 야기시켰다 (도 2). 증가되는 양의 알부민을 함유한 용액의 흡수 스펙트럼은 메탄올 중 단량체 안료 5 의 스펙트럼과 유사하였다.
II 생물학 단락
재료 및 방법
( i) 세포 배양 . H5V 마우스 내피 세포를, 25 mM HEPES, pH 7.4, 10% 태송아지 혈청 (FCS), 글루타민 (2 mM), 페니실린 (0.06 mg/ml), 및 스트렙토마이신 (0.1 mg/ml) 을 함유한 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)/F12 (이하 "배지" 라 지칭함) 내에 단일층으로 배양하였다. 세포를 37 ℃ 에서 8% CO2-습윤 대기 중에 성장시켰다.
( ii ) 박테리아 배양 . St. albus 및 E. coli XL-1 박테리아를 액체 LB 배지 (12.5 μg 테트라시클린/ml 을 함유한 LB 중 E. coli) 에서 최종 밀도 OD600 nm = 0.5-0.9 (1 OD = 8 × 108 박테리아/ml) 까지 배양하였다. 박테리아를 스핀 다운 (spin down) 시키고 (4000 × g, 5 분), PBS 에 재현탁시켰다.
( iii ) 시험관 내 실험용 감광제의 제조 . 사용 전에 건조 화합물을 목적한 농도까지 배지에 직접 용해시킴으로써, 화합물 5 , 7 , 9 및 11 의 원료 용액을 제조하였다.
( iv ) 광독성 분석.
(a) 세포. 광역학적 효능을 측정하기 위해서, 세포를 96-웰 플레이트에 배양하고 (40 × 103/웰), 증가되는 농도의 5 , 7 , 9 및 11 을 함유한 배지 내에서 1 분 내지 8 시간의 기간 동안 암흑 속에 인큐베이션하였다. 세포를 신선한 배지로 1 회 세척함으로써 미결합 감광제를 제거하였다. 플레이트를 그 바닥면으로부터 10 분 동안 실온에서 조명하였다 (650<λ<800 nm, 12 J/cm2). 빛 근원은 <650 nm 절단기 및 4-cm 물 여과기가 장치된 100 W 할로겐 램프 (Osram, Germany) 였다. 배양물을 배양 인큐베이터에 넣고, 조명 24 시간 후에 Neutral Red 생존 분석으로 세포 생존율을 측정하였다. 세포 생존율은 비처리 대조군에 축적된 염료의 비율로서 계산하였다. 3 중 측정을 수행하여 대표적인 실험을 나타내었다. 3 종류의 대조군을 사용하였다: (i) 빛 대조군: 안료 부재 하에 조명된 세포; (ii) 암흑 대조군: 안료로 처리하여 암흑 속에 둔 세포; 및 (iii) 암흑 속에 둔 비처리 세포.
(b) 박테리아. 광역학적 효능을 측정하기 위해, 박테리아를 약 107 의 박테리아를 함유한 300 μl 의 분취량으로 희석하고, 플라스틱 시험관 내에서 증가되는 농도의 감광제와 함께 암흑 속에 1 시간 동안 실온에서 인큐베이션한 다음, 70 mW/cm2 에서 15 분 동안 조명하였다. 처리된 박테리아 배양물의 샘플을 이어서 LB 한천 상에 상이한 희석률 (50-200 박테리아/플레이트) 로 플레이팅하고, 24 시간 동안 37 ℃ 에서 배양하여, 콜로니 계수에 의해 박테리아 생존율을 측정하였다. 3 중 측정을 수행하여 대표적인 실험을 나타내었다.
(v) 동물. 수컷 CD1 누드 마우스 (28-32 g) 및 수컷 Wistar 래트 (250-300 g) 를 Weizmann Institute of Science (Rehovot, Israel) 의 지침에 따라 음식 및 물에 자유롭게 접근하도록 하여 각 부문의 동물 시설에 두었다.
( vi ) 마취 . 마우스는 80 μl 케타민 (100 mg/ml, Rhone-Merieux, France) 및 자일라진 (2%, Vitamed, Israel) 혼합물 (85:15, v:v) 의 i.p. 주사로 마취하였다. 래트는 가스 (98% O2 중 2% 이소플루오란) 로 마취하였다.
( vii ) 종양 이식. 배양된 C6 신경교종 세포 단일층을 식염수 중에 긁어모아서 250 g 에서 5 분 동안 원심분리하고, 식염수에 재현탁시켜 CD1 누드 마우스의 등에 피하 주사하였다 (2 × 106 세포/마우스). 종양은 2 주 내에 6-8 mm 의 처리 직경에 도달하였다. 종양이 ≥15 mm 의 직경에 도달하였을 때 마우스를 희생시켰다 (Weizmann Institute of Science 의 지침에 따라).
( viii ) 주사용 감광제의 제조 . 건조 화합물을 주사를 위해 목적한 농도까지 PBS 에 직접 용해시킴으로써, 사용 전에 화합물 5 및 11 의 원료 용액을 제조하였다.
( ix ) 약물동력학 . 마취된 Wistar 래트 (각 시점 당 n = 3) 에 본 발명의 화합물 5 (0.6 mg/kg) 를 i.v. 주사하였다. 혈액 샘플 (~100-200 μl) 을 주사 후 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 120, 360 및 480 분째에 채취하여, 10 μl 의 헤파린을 함유한 미리 무게를 단 2 ml 시험관에 이동시켜서 무게를 달고, 조심스럽게 혼합하였다. 3 마리의 비처리 래트로부터 대조군 혈액 샘플을 수집하여 그에 상응하게 처리하였다. 혈액 샘플을 함유한 시험관의 무게를 다시 달아서, 정확한 샘플 질량을 계산하였다. 그 다음, 혈액 샘플을 액체 질소 중에서 동결시키고, 동결건조시켰다. 동결건조된 샘플을 메탄올 (각 1 ml) 로 추출하고, 와동시키고, 원심분리하였다. 상등액을 수집하여 형광 측정 (분광형광계 SLM-8000, Aminco USA) 으로 분석하였다. 형광 방출 스펙트럼을 520 nm 에서의 여기와 함께, 650-850 nm 범위에서 기록하였다. 메탄올 및 비처리 혈액 추출물의 형광을 블랭크로 사용하였다. 알려진 농도의 감광제로 검량선을 제작하였다.
(x) 생체분포. Wistar 래트 (n = 2) 를 마취시키고, 본 발명의 화합물 5 (0.6 mg/kg) 를 이들의 꼬리 정맥에 주사하였다. 대조군 (n = 2) 은 감광제로 처리하지 않았다. 주사 후 30 분 및 24 시간째에, 래트 (각 시점에 대해 1 마리) 를 희생시키고, 지시된 장기 또는 조직 (심장, 간, 폐, 비장, 신장, 뇌, 정소, 피부, 근육 및 지방) 을 수집하여, 미리 무게를 단 유리병 내에서 무게를 달고, 즉시 드라이 아이스로 동결시켜서, 분석 시까지 암흑 속 -20 ℃ 에 보관하였다. 검사를 위해, 각 샘플을 해동시키고, 다시 무게를 달고, 얼음 냉수 속에서 균질화시켰다 (Polytron, Kinematica GmbH 또는 Ultra-Turrax). 그 다음, 유리병을 액체 질소 중에서 동결시키고, 동결건조시켰다. 동결건조된 샘플을 조직 무게와 동등한 양의 메탄올 (5-10 ml) 로 추출한 다음, 와동시키고, 원심분리하였다. 상기 (ix) 에 기재된 바와 같이 상등액을 수집하여 분석하고, 형광을 측정하였다. 메탄올 및 대조군 동물로부터의 조직 추출물의 형광을 블랭크로 사용하였다.
( xi ) PDT 프로토콜. C6 신경교종을 지닌 CD1 누드 마우스 (n = 17) 를 마취시키고, 화합물 5 (0.3 mg/kg) 를 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 종양 영역을 즉시 755 nm 다이오드 레이저 (CeramOptec, Germany) 를 사용하여 80 mW/cm2 의 빛 선량 (빛의 장 직경 - 14 mm) 으로 15 분 동안 경피 조명하였다 (약물-대-빛 시간 간격 (DLTI) = 0). 조명 후, 마우스 (n = 12) 를 다시 우리에 넣었다. 종양 반응 (종료점으로 PDT 후 8 일째의 국소 괴사를 사용함) 을 사진으로 기록하고, 종양 부피를 평가하였다 (Gleave et al., 1992.). 조명된 종양의 일부만 괴사된 경우에는 반응을 부분적인 것으로 간주하였다. 처리 90 일 후 종양이 없어졌으면 마우스가 치유된 것으로 간주하였다. PDT 후 종양 성장이 계속되면 반응이 없는 것으로 기록하였다. 종양 직경이 15 mm 에 도달하면 마우스를 희생시켰다. 하기 대조군을 사용하였다: (i) 암흑 대조군 (n = 3) - 감광제를 i.v. 주사하고 조명하지는 않은, 종양을 지닌 마우스; (ii) 빛 대조군 (n = 2) - 감광제를 주사하지 않고 조명한, 종양을 지닌 마우스; (iii) 비처리 대조군 (n = 2) - 감광제를 주사하지 않고 조명하지도 않은, 종양을 지닌 마우스.
실시예 72. 내피 세포 상 화합물 5 , 7 , 9 , 및 11 의 세포광독성
H5V 마우스 내피 세포 상 화합물 5 , 7 , 9 , 및 11 의 광독성을 상기 ( iv )(a) 단락에 기재된 바와 같이 측정하였다. 세포를 증가되는 농도 (0.001, 0.01, 0.1, 1, 또는 10 μM) 의 화합물과 1, 6, 60, 90, 120, 240 및 480 분 동안 인큐베이션하고, 세척한 다음, 조명하거나 암흑 속에 두었다. 결과는 도 3A-3C 에 나타내었다: 90 분 인큐베이션 후의 화합물 5 및 11 의 광독성은 도 3A 에 나타내었고; 2 시간 인큐베이션 후의 화합물 5 , 7 및 9 의 광독성은 도 3B 에 나타내었고; 1-10 분 동안 인큐베이션한 후의 화합물 5 (10 μM) 의 광독성은 도 3C 에 나타내었다. 도면에서 알 수 있는 바와 같이, 감광제는 빠르게 작용하고, 그들의 광독성은 농도 및 빛 의존성이며, 그들의 LD50 은 거의 동일하다 (각각, 프리인큐베이션 ~3 분 내지 2 시간 후 3 내지 ~0.2 μM). 시험된 농도 범위에 대해서 암흑 독성은 관찰되지 않았다.
실시예 73. 화합물 5 의 약물동력학 및 생체분포
감광제 5 의 약물동력학 및 생체분포를 상기 ( ix ) 및 (x) 단락에 기재된 바와 같이 Wistar 래트의 생체 내에서 측정하였다.
도 4 에 도시한 바와 같은 약물동력학의 결과는 약 60% 의 감광제 5 가 i.v. 주사 (0.6 mg/kg) 후 30 분 내에 제거되었음을 나타낸다. 제거 동력학은 i.v. 투여 후 24 시간째에 2 개로 나뉜 분포를 나타낸다. 도 5A-5B 에 도시한 바와 같은 생체분포의 결과는, 투여 후 30 분째에는 감광제 5 의 수준이 혈액, 신장 및 폐에서 상대적으로 높고 (도 5A), 주사 후 24 시간째에는 감광제의 수준이 혈액 내에서는 거의 바탕 수준까지 떨어지지만 신장, 간 및 비장에서는 여전히 유의적인 수준이 발견됨 (도 5B) 을 나타낸다.
실시예 74. 화합물 5 에 의한 CD1 누드 마우스 내 C6 신경교종 이종이식체의 광역학적 처리
상기 실시예 20 에 기재된 약물동력학적 데이터를 기초로, 화합물 5 의 처리 프로토콜을 5 의 피크 흡수에 맞는 의학 전용 레이저 (CeramOptec, Germany, 755 nm) 를 사용하는, 감광제 주사 직후 15 분 조명으로 설정하였다. 약물 효능을 시험하기 위해, CD1 수컷 누드 마우스 (n = 12) 를 0.3 mg/kg 화합물 5 의 투여량 및 80 mW/cm2 의 빛 강도로 처리하였다. 처리 후 1 일째에 빛-및-약물 (완전) 처리군의 모든 동물에 염증 및 부종이 발달하였다. 도 6A 는 0, 4, 14, 21 및 32 일째의 PDT-처리 마우스의 종양 부위 사진을 나타낸다. 종양 발달은 4 일째에 관찰되었고, 종양 괴사는 14 일째에 관찰되었다. 21 일째에는, 상처를 덮은 딱지와 함께 종양 편평화가 관찰되었다. 32 일째에는, 상처가 낫고 동물이 치유되었다. 도 6B-6C 는 각각, 화합물 5 를 주사하였지만 조명하지는 않은 마우스 및 식염수를 주사하고 조명한 마우스의 종양 부위 사진이다. 두 경우에서 종양의 괴사는 발생하지 않았다.
도 7 은 화합물 5 로 처리하고 조명한 마우스 (처리군, 정사각형) 에 대해 80% 생존율을 나타내는 Kaplan-Meier 생존 곡선을 도시한 것이다.
실시예 75. 그램-양성 및 그램-음성 박테리아에 대한 화합물 5 의 광독성
양으로 하전된 화합물 5 의 광독성을 그램-양성 St. albus 및 그램-음성 E. coli 박테리아 상에서 음으로 하전된 Pd 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131-(2-술포에틸)아미드 디포타슘 염 (PCT/IL03/00973 에 기재된 것) 과 비교하여 시험하였다. 박테리아를 증가되는 농도의 감광제와 함께 1 시간 동안 인큐베이션하고, 조명하거나 암흑 속에 유지시켰다. 도 8A-8D 에 도시된 결과는, 양으로 하전된 감광제 화합물 5 가 그램-양성 St. albus (도 8B) (Kd 0.02 μM) 및 그램-음성 E. coli (도 8D) (Kd 1.7 μM) 박테리아 둘 다에 대해 광독성인 반면, 종래 기술의 음으로 하전된 감광제는 그램-양성 St. albus (도 8A) (Kd 0.3 μM) 에 대해서는 효과적이지만, 그램-음성 E. coli (도 8C) 에 대해서는 그렇지 않음을 나타내었다. E. coli 의 거의 100% 사멸이 10 μM 의 화합물 5 에 대해서 관찰되었다 (도 8D). 그램-양성 박테리아 St . albus 는 화합물 5 에 대해서 그램-음성 E. coli 보다 100 배 더 민감하였다. 박테리아를 인큐베이션하여 조명 없이 동일한 감광제 농도 범위로 처리한 경우 (암흑 조건) 에는 광독성이 관찰되지 않았다.
실시예 76. 광독성 분석
재료 및 방법은 상기 생물학 단락에 기재된 바와 같다.
H5V 세포 (40 × 103/웰) 를 96-웰 플레이트에서 24 시간 동안 ~80% 콘플루언스까지 배양하였다. 광독성을 측정하기 위해서, 배지를 10-8 내지 10-6 M 감광제의 존재 또는 부재 하의 100 μl/웰 배지로 교체하고, 배양 인큐베이터 내 암흑 속에서 15 분 또는 3 시간 동안 인큐베이션하였다. 그 다음, 플레이트 (PDT 군) 를 실온에서 빛의 장에 놓고, 바닥으로부터 10 분 동안 조명하였다 (800>λ>650 nm, 12 J/cm2). 조명 후, 배지를 신선한 배지로 바꾸었다. 그 다음, 배양물을 배양 인큐베이터에 넣고, 이하에 기재된 뉴트럴 레드 생존 분석을 사용하여 24 시간 후에 세포 생존율을 측정하였다.
하기 대조군을 사용하였다:
1. 빛 대조군: 세포를 감광제 부재 하에 조명하였다.
2. 암흑 대조군: 세포를 감광제로 처리하고 암흑 속에 두었다.
비처리군: 세포를 임의의 처리 없이 암혹 속에 두었다.
PDT 24 시간 후에 웰 내 배지를 40 μg/ml 뉴트럴 레드를 함유한 100 μl 의 신선한 배지로 대체하였다. 플레이트를 암흑 배양 인큐베이터 내에서 1.5 시간 동안 인큐베이션하였다. 배지를 뽑아내고, 세포를 1% CaCl2 및 0.5% 포름알데히드를 함유한 100 μl 의 용액으로 세척하여, 미혼입된 염료를 제거하고 세포를 서브스트림에 고정시켰다. 그 다음, 50% 에탄올 중 1% 빙초산 100 μl 를 첨가하여, 염료를 세포에서 상등액으로 추출하였다. 실온에서 1-2 분 후에, 570 nm 여과기를 사용한 마이크로플레이트 분광광도계로 웰의 광학 밀도를 측정하였다. 분석 블랭크를 제한 후, 순 광학 밀도를 3 중 측정의 평균값으로서 계산하였다. 세포 생존율은 비처리 대조군에 축적된 염료의 비율로 계산하였다. 세포 생존율을 구하기 위해서, 데이터를 감광제 농도에 대해 플로팅하였다. 그 다음, 이들 곡선을 사용하여 LD50 값을 계산하였다.
합성 후, 상기 실시예 23 내지 75 에 기재된 화합물을 정제하고, 동등한 분취량으로 나누고, 보관을 위해 동결건조시켰다 (-20 ℃ 에서 건조시킴). 정확한 재료 함량은 HPLC-다이오드 분석 검출로 측정하였고, PDT 효능은 실험 단락에 기재된 바와 같은 2 회의 인큐베이션에서 평가하였다. 결과를 하기 표 1-3 에 제시하였다:
<표 1>
Figure 112006090541425-pct00008
본 발명에 따라 제조된 모든 화합물은 Pd-Bpheid, 3 에 비해 더 나은 용해성을 나타내었다. 대부분의 화합물은 2 mg/ml 에서 100% 단량체 용액을 형성하는 데 등장성 만니톨 중 낮은 비율의 Cremophor 를 필요로 하는 반면, 일부 화합물은 동일한 단량체 용액을 수득하는 데 낮은 농도의 프로필렌 글리콜 또는 PEG-400 을 필요로 하였다 (두 첨가제 다 사용하기에 매우 안전한 것으로 간주된다). 이들 화합물의 양성이온적 특성은 Cremophor 가 단량체 용액을 생성하는 데 필요한 기여 인자일 수 있다.
화합물 25 - 32 의 합성은, 참조로서 취해지고 본원에서 24 로 재생되는 본래 1 가 양이온의 것보다 훨씬 단순하다. 주목할 만한 것은 화합물 26 , 28 , 및 32 의 PDT 활성이다 (예를 들면, 32 는 2 회의 인큐베이션에서 24 보다 약 4-5 배 더 활성적이다).
Figure 112006090541425-pct00009
화합물 34 - 45 의 합성은, 참조로서 취해지고 본원에서 33 으로 재생되는 본래 2 가 양이온의 것보다 훨씬 단순하다. 주목할 만한 것은 화합물 34 , 36 , 38 및 45 의 짧은 인큐베이션 시간에서의 PDT 활성이다 (예를 들면, 36 은 15 분 인큐베이션 시간에서 더 활성적이고, 그 다음 33 은 3 시간에서이다).
Figure 112006090541425-pct00010
Figure 112006090541425-pct00011
상기 표의 모든 화합물은 Pd-Bpheid, 3 에 비해 더 나은 용해성을 나타내었다. 대부분의 화합물은 2 mg/ml 에서 100% 단량체 용액을 형성하는 데 오직 낮은 농도의 프로필렌 글리콜 또는 PEG-400 만을 필요로 하였다. 대부분의 화합물의 합성은 2 또는 3 개의 화학적 변형을 필요로 하지만, 대부분의 화합물은 최소한의 중간체 정제 및 단리와 함께 단일 반응기 반응으로 제조될 수도 있다 (본원에 나타낸 실시예에서, 분취용 HPLC 는 단순히 편의상 중간 및 최종 정제 단계 동안 다수의 반응에 사용되었다). 단순 추출 및 침전 또한 이들 화합물을 정제하는 데 성공적으로 이용됨으로써, 비싸고 장황한 대규모 HPLC 정제에 대한 요구를 우회하였다.
실시예 77. 화합물의 생체분포
동물은 RCC 이종이식체를 지닌 CD1 누드 수컷 마우스였다. 3 마리의 동물을 각 시점에 사용하였다. 화합물 28 , 32 , 10 , 36 , 및 75 를 실험에 사용하였다.
케타민:자일라진 (85:15, vol/vol) 으로 마취하였다.
마취된 동물에 등장성 만니톨 중 시험 화합물의 용액 (2　mg/ml) 을 1.5 mg/kg 의 투여량으로 주사하였다. 3 마리의 동물을 각 시점에 희생시켜, 혈액, 심장, 폐, 간, 신장, 장, 비장, 근육, 피부, 종양 및 뇌의 샘플을 수집하였다. 사용된 시점은 주사 후 5 분, 15 분, 30 분, 1 시간, 2 시간, 6 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 5 일 및 7 일이었다. 샘플의 무게를 정확히 달고, 진한 질산에 용해시키고, ICPMS 로 팔라듐에 대해서 분석하였다.
결과는 본원에 첨부한 그래프에 나타내었다 (도 9A 내지 9E).
Figure 112006090541425-pct00012
Figure 112006090541425-pct00013
부록 - 화합물 24 - 75 의 표
화합물 번호 화합물 명칭 화학 구조
24 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 아세테이트 (염)
Figure 112006090541425-pct00014
25 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00015
26 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N2-디메틸아미노프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00016
27 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00017
28 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸) 아미드
Figure 112006090541425-pct00018
29 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-모르폴리노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00019
30 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-피페라지노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00020
31 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-N2-디에틸아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00021
32 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00022
33 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸) 아미드 디아세테이트 염
Figure 112006090541425-pct00023
34 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-아미노프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00024
35 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(4-아미노부틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00025
10 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00026
36 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00027
37 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-N2-디메틸아미노프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00028
38 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00029
39 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(2-[(2-N2-디에틸아미노에틸)아미노]에틸) 아미드
Figure 112006090541425-pct00030
40 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-모르폴리노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00031
41 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-피페라지노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00032
42 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00033
43 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00034
44 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00035
45 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N2-디에틸아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00036
46 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N3-트리메틸 암모늄에틸)아미드 아세테이트 염
Figure 112006090541425-pct00037
47 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-아미노에틸) 아미드
Figure 112006090541425-pct00038
48 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필) 아미드
Figure 112006090541425-pct00039
49 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N2-디메틸 아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00040
50 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00041
51 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00042
52 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-[(2-N2-디에틸 아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00043
53 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-모르폴리노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00044
54 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-피페라지노-N-에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00045
55 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00046
56 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00047
57 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00048
58 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00049
59 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-([2-비스(2-아미노에틸)아민]에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00050
60 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00051
61 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(4-아미노부틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00052
62 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디에틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시 프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00053
63 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N-에틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시 프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00054
64 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N-메틸아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00055
65 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-히드록시 에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00056
66 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(3-히드록시 프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00057
67 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-히드록시 프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00058
68 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-((R)-2-히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00059
69 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-((S)-2-히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00060
70 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-(2-히드록시에틸아미노)에틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00061
71 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N-(2'-피리딜)아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00062
72 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(4-N-(2'-피리딜)아미노부틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00063
73 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(3-N-(2'-피리딜)아미노프로필)아미드
Figure 112006090541425-pct00064
74 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(4-N-(2'-피리딜)아미노부틸)아미드
Figure 112006090541425-pct00065
75 팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(글리코실) 아미드
Figure 112006090541425-pct00066
참고문헌
Figure 112006090541425-pct00067
Figure 112006090541425-pct00068
Figure 112006090541425-pct00069
Figure 112006090541425-pct00070

Claims (115)

  1. (i) 하나 이상의 양으로 하전된 기; (ii) 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기; 또는 (iii) 하나 이상의 양으로 하전된 기 및 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유하는 박테리오클로로필 유도체, 이의 약학적 허용성 염 또는 광학 이성질체:
    [상기 박테리오클로로필 유도체는 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체이다
    Figure 112012014250212-pct00106
    {식 중
    M 은 2H, 또는 Pd, Ni, Cu 및 Zn 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 2 가 금속 원자를 나타내고;
    R1, R'2 및 R6 는 각각 독립적으로 Y-R8, -NR9R'9, 또는 -N+R9R'9R"9A- 이고;
    Y 는 O 이고;
    R4 는 -CH=NR9, -CH=N+R9R'9A-, -COCH3, -C(CH3)=NR9 또는 -CH(CH3)=N+R9R'9A- 이고;
    R8, R9, R'9 및 R"9 은 각각 독립적으로
    (a) H;
    (b) C1-C25 히드로카르빌;
    (c) OR; COOR; (i) N-함유 기로부터 유도된 양이온; (ii) 오늄기; 또는 (iii) 하나 이상의 N 원자 및 임의로 O 또는 S 원자를 함유한 헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온으로부터 선택되는 양으로 하전된 기; 및 -NRR', -C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", O←NR-, 또는 >C=NR, PRR', 또는 N-함유 헤테로방향족 라디칼로부터 선택되는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 염기성 기 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 또는 히드로카르빌이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, O, 또는 N 원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌;
    (d) 헤테로원자, C3-C7 또는 C6-C14 원 카르보시클릭 부분 또는 5-14 원자의 헤테로시클릭 부분 중 하나 이상을 함유하고, (c) 에서 정의한 바와 같은 하나 이상의 관능기로 임의로 추가 치환되는 C1-C25 히드로카르빌; 또는
    (e) 단당류의 잔기이고;
    A- 는 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 퍼클로레이트, 술페이트, 포스페이트, 또는 아세테이트, 벤조에이트, 카프릴레이트, 시트레이트, 락테이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 옥살레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트 또는 토실레이트로부터 선택되는 유기 음이온으로부터 선택되는 생리학적 허용성 음이온이고;
    m 은 0 또는 1 이다}].
  2. 제 1 항에 있어서, (i) 상기 N-함유 기로부터 유도된 양이온이 O←N+(RR')-, >C=N+(RR'), -N+(RR'R"), -(R)N-N+(RR'R"), -(R)N-C(=NR)-N+RR'R", -SO2N+(RR'R"), -C(=NR)-N+(RR'R")로부터 선택되고; (ii) 오늄기가 -O+(RR'), -S+(RR'), -Se+(RR'), -Te+(RR'), -P+(RR'R"), -As+(RR'R"), -Sb+(RR'R"), 또는 -Bi+(RR'R")로부터 선택되고; (iii) 상기 하나 이상의 N 원자 및 임의로 O 또는 S 원자를 함유한 헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온이 피라졸륨, 이미다졸륨, 옥사졸륨, 티아졸륨, 피리디늄, 퀴놀리늄, 이소퀴놀리늄, 피리미디늄, 1,2,4-트리아지늄, 1,3,5-트리아지늄 또는 푸리늄으로부터 선택되고(식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다), 상기 양이온이 박테리오클로로필 분자의 말단 기 또는 히드로카르빌 사슬 내에 위치한 기이고, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  3. 제 1 항에 있어서, M 이 2H 인 박테리오클로로필 유도체.
  4. 제 1 항에 있어서, M 이 Pd 인 박테리오클로로필 유도체.
  5. 제 1 항에 있어서, 하나 이상의 양으로 하전된 기를 함유하는 박테리오클로로필 유도체.
  6. 제 1 항에 있어서, NRR', PRR', -C(=NR)-NR'R", 또는 피라졸릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피리딜, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 피리미딜, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐 또는 푸리닐로부터 선택되는 N-함유 헤테로방향족 라디칼 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 또는 C1-C10 알킬이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, O, 또는 N 원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 로부터 선택되는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유하는 박테리오클로로필 유도체.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 3-7 원 포화 고리가 할로, 히드록실 또는 아미노로 임의 치환되는 C1-C6 알킬에 의해, 부가의 N 원자에서 임의 치환되는 아지리딘, 피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 티오모르폴린, 아제핀 또는 피페라진으로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체.
  8. 제 1 항에 있어서, C1-C25 히드로카르빌이 직쇄형 또는 분지형 C1-C25 알킬 또는 C2-C25 알케닐 사슬이고, 상기 사슬에는 O, S 및 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 헤테로원자, 및 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분 중 하나 이상이 삽입될 수 있고, 하나 이상의 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 부분이 임의로 추가 치환될 수 있는 박테리오클로로필 유도체.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 C1-C25 히드로카르빌이 직쇄형 또는 분지형 C1-C10 알킬 또는 C1-C6 알킬인 박테리오클로로필 유도체.
  10. 제 1 항에 있어서,
    M 은 2H 또는 Pd 이고;
    R'2 는 -OR8 (식 중 R8 은 C1-C6 알킬이다) 이고;
    R4 는 -COCH3 이고;
    R1 은 OH, -NR9R'9, 또는 -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고;
    R6 은 -NR9R'9 또는 -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고;
    R9 은 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    R'9 은 하나 이상의 양으로 하전된 기 또는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기, 또는 하나 이상의 양으로 하전된 기 및 상기 하나 이상의 염기성기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌인 박테리오클로로필 유도체.
  11. 제 10 항에 있어서, R9 은 H 이고, R'9 은 하나 이상의 양으로 하전된 기 -N+RR'R" 또는 하나 이상의 염기성 기 -NRR' 으로 치환되고, -N(R")- 기가 임의 삽입되는 [식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, NR"R" 으로 임의 치환되는 C1-C6 알킬, 또는 피리딜과 같은 헤테로시클릴이거나, R 및 R' 은 N 원자와 함께, O, S 또는 N 원자를 추가로 함유한 6-원 고리를 형성하고, R" 은 H 또는 C1-C6 알킬이다] C1-C25 알킬인 박테리오클로로필 유도체.
  12. 제 10 항에 있어서,
    (a) R1 은 OH 이고, R6 은 -NHR'9 기이고;
    (b) R1 및 R6 은 둘 다 동일한 -NHR'9 기이고;
    (c) R1 은 -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고, R6 은 -NHR'9 기이거나;
    (d) R1 은 -NHR'9 이고, R6 은 -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH 이고;
    상기 -NHR'9 기는
    (i) -NH-(CH2)n-NRR' 또는 -NH-(CH2)n-N+RR'R";
    (ii) -NH-(CH2)n-N(R")-(CH2)n-NRR';
    (iii)
    Figure 112012014250212-pct00107
    (iv)
    Figure 112012014250212-pct00108
    및
    (v)
    Figure 112012014250212-pct00109
    [식 중
    X 는 O 또는 NR 이고;
    R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고;
    n 은 1 내지 10 의 정수이고;
    m 은 1 내지 6 의 정수이다]
    로 이루어진 군으로부터 선택되는 기인 박테리오클로로필 유도체.
  13. 제 12 항에 있어서, (a) 에서 본원에 하기 화합물 12 및 24-32 로 지정된 화합물로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 클로라이드 염 (화합물 12)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 아세테이트 염 (화합물 24)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드 (화합물 25)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N2-디메틸아미노프로필)아미드 (화합물 26)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 27)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 28)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-모르폴리노-N-에틸)아미드 (화합물 29)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-피페라지노-N-에틸)아미드 (화합물 30)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-N2-디에틸아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 31)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드 (화합물 32).
  14. 제 12 항에 있어서, (b) 에서 본원에 하기 화합물 4-11 및 33-45 로 지정된 화합물로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 4)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 5)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-아미노프로필)아미드 (화합물 6)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-N3-트리메틸암모늄프로필)아미드 디시트레이트 염 (화합물 7)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(6-아미노헥실)아미드 (화합물 8)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(6-N3-트리메틸암모늄헥실)아미드 디시트레이트 염 (화합물 9)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 10)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 디포스페이트 염 (화합물 11)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 디아세테이트 염 (화합물 33)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-아미노프로필)아미드 (화합물 34)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(4-아미노부틸)아미드 (화합물 35)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드 (화합물 36)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(3-N2-디메틸아미노프로필)아미드 (화합물 37)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 38)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(2-[(2-N2-디에틸아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 39)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-모르폴리노-N-에틸)아미드 (화합물 40)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-피페라지노-N-에틸)아미드 (화합물 41)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디-(3-[(3-아미노프로필)아미노]프로필)아미드 (화합물 42)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 43)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드 (화합물 44)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-N2-디에틸아미노에틸)아미드 (화합물 45).
  15. 제 12 항에 있어서, (c) 에서 본원에 하기 화합물 48, 50, 55, 57, 59-64, 71 및 72 로 지정된 화합물로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 48)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 50)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 55)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 57)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-([2-비스(2-아미노에틸)아민]에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 59)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 60)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(4-아미노부틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 61)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디에틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시 프로필)아미드 (화합물 62)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N-에틸아미노에틸)아미드-173-(2,3-디히드록시 프로필)아미드 (화합물 63)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N-메틸아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 64)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(3-N-(2'-피리딜)아미노프로필)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 71)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(4-N-(2'-피리딜)아미노부틸)아미드-173-(2,3-디히드록시프로필)아미드 (화합물 72).
  16. 제 12 항에 있어서, (d) 에서 본원에 하기 화합물 46, 47, 49, 51-54, 56, 58, 73 및 74 로 지정된 화합물로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N3-트리메틸암모늄에틸)아미드 (화합물 46)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-아미노에틸)아미드 (화합물 47)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N2-디메틸 아미노에틸)아미드 (화합물 49)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-[(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 51)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-[(2-N2-디에틸 아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 52)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-모르폴리노-N-에틸)아미드 (화합물 53)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-피페라지노-N-에틸)아미드 (화합물 54)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(2-N-(2'-피리딜)아미노에틸)아미드 (화합물 56)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-([2-비스(2-아미노에틸)아미노]에틸)아미드 (화합물 58)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(3-N-(2'-피리딜)아미노프로필)아미드 (화합물 73)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2,3-디히드록시프로필)아미드-173-(4-N-(2'-피리딜)아미노부틸)아미드 (화합물 74).
  17. 제 1 항에 있어서,
    M 은 2H 또는 Pd 이고;
    R'2 는 -OR8 (식 중 R8 은 C1-C6 알킬이다) 이고;
    R4 는 -COCH3 이고;
    R6 은 -NH-CH2-CH2-NRR' 이고;
    R1 은
    -NH-(CH2)n-OH;
    -NH-CH(OH)-CH3;
    -NH-(CH2)n-NR-(CH2)n-OH; 및
    글리코실아미노로 이루어진 군으로부터 선택되는
    [식 중 R 및 R' 은 각각 독립적으로 H, 메틸 또는 에틸이고;
    n 은 2 또는 3 이다]
    박테리오클로로필 유도체.
  18. 제 17 항에 있어서, 본원에 하기 화합물 65-70, 및 75 로 지정된 화합물로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-히드록시 에틸)아미드 (화합물 65)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(3-히드록시 프로필)아미드 (화합물 66)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-히드록시 프로필)아미드 (화합물 67)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-((R)-2-히드록시프로필)아미드 (화합물 68)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-((S)-2-히드록시프로필)아미드 (화합물 69)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(2-(2-히드록시에틸아미노)에틸)아미드 (화합물 70)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-N2-디메틸아미노에틸)아미드-173-(글리코실)아미드 (화합물 75).
  19. 제 1 항에 있어서, M 은 H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 (식 중 R8 은 C1-C6 알킬이다) 이고, R4 는 -COCH3 이고, R1 및/또는 R6 은
    (a) 구아니디노 또는 구아니디늄기;
    (b) 술포늄기;
    (c) 포스피노 또는 포스포늄기; 또는
    (d) 아르시노 또는 아르소늄기로부터 선택되는 기로 치환되는 -NR9R'9 [식 중 R9 은 H 이고, R'9 은 C1-C25 히드로카르빌이다] 이고, 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  20. 제 19 항에 있어서, (a) 에서 R1 및 R6 이 화학식 -NH-(CH2)n-C(=NH)-NH2 또는 -NH-(CH2)n-C(=NH)-N+(R)3A- 의 기 [식 중 R 은 C1-C6 알킬이고, n 은 1 내지 10 의 정수이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 인 박테리오클로로필 유도체.
  21. 제 20 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 14 및 14a 로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-구아니디노에틸)아미드 (화합물 14)
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-트리메틸구아니디늄메틸)아미드 (화합물 14a).
  22. 제 19 항에 있어서, (b) 에서 R1 및 R6 이 각각 독립적으로 화학식 -NH-(CH2)n-S+(R)2A- 의 기 [식 중 R 은 C1-C6 알킬이고, n 은 1 내지 10 의 정수이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 인 박테리오클로로필 유도체.
  23. 제 22 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 15 로 나타내는 박테리오클로로필 유도체:
    팔라듐 31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131-(2-S2-디메틸술포늄에틸)아미드 시트레이트 염 (화합물 15).
  24. 제 19 항에 있어서, (c) 에서 R1 및 R6 이 각각 독립적으로 화학식 -NH-(CH2)n-P(R)2, 또는 NH-(CH2)n-P+(R)3A- 의 기 [식 중 R 은 C1-C6 알킬이고, n 은 1 내지 10 의 정수이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 인 박테리오클로로필 유도체.
  25. 제 24 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 17 및 18 로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-P3-트리메틸포스포늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 17)
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-디메틸포스피노에틸)아미드 (화합물 18).
  26. 제 19 항에 있어서, (d) 에서 R1 및 R6 이 각각 독립적으로 화학식 -NH-(CH2)n-As(R)2, 또는 NH-(CH2)n-As+(R)3A- 의 기 [식 중 R 은 C1-C6 알킬이고, n 은 1 내지 10 의 정수이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 인 박테리오클로로필 유도체.
  27. 제 26 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 19 로 나타내는 박테리오클로로필 유도체:
    31-옥소-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-As3-트리메틸아르소늄에틸)아미드 디시트레이트 염 (화합물 19).
  28. 제 1 항에 있어서, M 은 2H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 (식 중 R8 은 C1-C6 알킬이다) 이고, R4 는 -C(CH3)=NR9 이고, R1 및/또는 R6 은 하나 이상의 아미노 말단 기로 치환되는 -NR'9R"9 이고 [식 중 R'9 은 H 이고, R9 및 R"9 은 각각 독립적으로 C1-C25 히드로카르빌이다], 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  29. 제 28 항에 있어서, R4 는 -C(CH3)=N-(CH2)n-NH2 이고, R1 및 R6 는 둘 다 -NH-(CH2)n-NH2 인 [식 중 n 은 1 내지 10 의 정수이다] 박테리오클로로필 유도체.
  30. 제 29 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 20 및 21 로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    31-(아미노에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 20)
    팔라듐 31-(아미노에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린-131,173-디(2-아미노에틸)아미드 (화합물 21).
  31. 제 1 항에 있어서, M 은 2H 또는 Pd 이고, R'2 는 -OR8 (식 중 R8 은 C1-C6 알킬이다) 이고, R4 는 -C(CH3)=NR9 이고, R1 및/또는 R6 은 하나 이상의 양으로 하전된 기로 치환되는 -NR'9R"9 이고 [식 중 R'9 은 H 이고, R9 및 R"9 은 각각 독립적으로 C1-C25 히드로카르빌이다], 화학식 II 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  32. 제 31 항에 있어서, 상기 양으로 하전된 기가 화학식 -N+(RR'R")A- [식 중 R, R' 및 R" 은 동일하거나 상이한 C1-C6 알킬이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 의 암모늄 말단 기인 박테리오클로로필 유도체.
  33. 제 32 항에 있어서, R4 는 -C(CH3)=N-(CH2)n-N(R)3 +A- 이고, R1 및 R6 은 각각 독립적으로 -NH-(CH2)n-N(R)3 +A- 인 [식 중 R 은 C1-C6 알킬이고, n 은 1 내지 10 의 정수이고, A- 는 생리학적 허용성 음이온이다] 박테리오클로로필 유도체.
  34. 제 33 항에 있어서, 본원에 지정된 하기 화합물 22 및 23 으로부터 선택되는 박테리오클로로필 유도체:
    31-(트리메틸암모늄에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸암모늄에틸)아미드 (화합물 22)
    팔라듐 31-(트리메틸암모늄에틸이미노)-15-메톡시카르보닐메틸-로도박테리오클로린 131,173-디(2-트리메틸암모늄에틸)아미드 (화합물 23).
  35. (i) 하나 이상의 양으로 하전된 기; (ii) 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기; 또는 (iii) 하나 이상의 양으로 하전된 기 및 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 하나 이상의 염기성 기를 함유하는 박테리오클로로필 유도체, 이의 약학적 허용성 염 또는 광학 이성질체:
    [상기 박테리오클로로필 유도체는 화학식 I 또는 III 의 박테리오클로로필 유도체이다
    Figure 112012014250212-pct00110
    Figure 112012014250212-pct00111
    {식 중
    M 은 2H 또는 2 가 Pd 원자를 나타내고;
    R1 은 O-R8 또는 -NR9R'9 이고;
    R2 는 H 또는 COOCH3 이고;
    R3 는 H 또는 COOCH3 이고;
    R4 는 -COCH3 이고;
    R5 는 =O 이고;
    R7, R8, R9, 및 R'9 은 각각 독립적으로
    (a) H;
    (b) COOR; (i) N-함유 기로부터 유도된 양이온; (ii) 오늄기; 또는 (iii) 하나 이상의 N 원자 및 임의로 O 또는 S 원자를 함유한 헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온으로부터 선택되는 양으로 하전된 기; -NRR', -C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", O←NR-, 또는 >C=NR, PRR', 또는 N-함유 헤테로방향족 라디칼로부터 선택되는 생리학적 조건 하에서 양으로 하전된 기로 전환되는 염기성 기 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 또는 히드로카르빌이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 N 원자와 함께, O, 또는 N 원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다] 로부터 선택되는 하나 이상의 관능기로 치환되는 C1-C25 히드로카르빌이고;
    단, 박테리오클로로필 유도체가 화학식 I 의 박테리오클로로필 유도체이고, R1 이 O-R8 이면 (식 중 R8 은 C1-C25 히드로카르빌이다), 상기 히드로카르빌은 하나 이상의 양으로 하전된 기로 본질적으로 치환된다}].
  36. 제 35 항에 있어서, (i) 상기 N-함유 기로부터 유도된 양이온이 -N+(RR'R"), -(R)N-N+(RR'R"), O←N+(RR')-, >C=N+(RR'), -C(=NR)-N+(RR'R") 및 -(R)N-C(=NR)-N+RR'R"로 이루어진 군으로부터 선택되고; (ii) 상기 오늄기가 -O+(RR'), -S+(RR'), -Se+(RR'), -Te+(RR'), -P+(RR'R"), -As+(RR'R"), -Sb+(RR'R"), 또는 -Bi+(RR'R")로부터 선택되고; (iii) 상기 하나 이상의 N 원자 및 임의로 O 또는 S 원자를 함유한 헤테로방향족 화합물로부터 유도된 양이온이 피라졸륨, 이미다졸륨, 옥사졸륨, 티아졸륨, 피리디늄, 퀴놀리늄, 이소퀴놀리늄, 피리미디늄, 1,2,4-트리아지늄, 1,3,5-트리아지늄 또는 푸리늄으로부터 선택되고 [식 중 R, R' 및 R" 은 각각 독립적으로 H, 히드로카르빌 또는 헤테로시클릴이거나, R, R' 및 R" 중 2 개는 이들이 부착된 N 원자와 함께, O, S 또는 N으로부터 선택되는 하나 이상의 헤테로원자를 임의로 함유하고, 부가의 N 원자에서 임의로 추가 치환되는 3-7 원 포화 고리를 형성한다], 상기 양이온이 박테리오클로로필 분자의 말단 기 또는 히드로카르빌 사슬 내에 위치한 기인 박테리오클로로필 유도체.
  37. 제 35 항에 있어서, M 은 Pd 이고, R2 는 H 이고, R3 는 COOCH3 이고, R1 은 O-R8 이고, 화학식 I 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  38. 제 36 항에 있어서, R8 은 기 COOR 및 암모늄기 -N+(RR'R")로 치환된 C1-C6 알킬이고 (식 중 R, R' 및 R'' 은 각각 메틸이다), 화학식 I 의 박테리오클로로필 유도체인 박테리오클로로필 유도체.
  39. 제 38 항에 있어서, 본원에 하기 화합물 13 으로 지정된 박테리오클로로필 유도체:
    O-[Pd-Bpheid]-[N3-트리메틸암모늄-2-메틸]-세린 메틸 에스테르 아이오다이드 염 (화합물 13).
  40. 광역학 요법을 위한 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항의 박테리오클로로필 유도체, 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  41. 제 40 항에 있어서, 혈관-표적화 광역학 요법 (VTP) 을 위한 약학적 조성물.
  42. 제 40 항에 있어서, (i) 흑색종, 전립선, 뇌, 두부, 경부, 결장, 난소, 유방, 유방암으로부터 발생하는 흉벽 종양, 피부, 폐, 식도 및 방광암, 및 기타 호르몬 민감성 종양으로부터 선택되는 원발성 및 전이성 종양을 포함하는 악성 종양의 광역학 요법; (ii) 양성 전립선 비대증의 광역학 요법; (iii) 관상 동맥 질환, 혈관내막 증식, 재협착 및 죽상경화반에서의 혈전증 및 혈관 폐색을 포함하는 심혈관 질환의 치료; (iv) 관상동맥 조영술 후 스텐트 내 재협착 방지 또는 감소; (v) 여드름, 여드름 흉터, 건선, 무좀, 사마귀, 화학선 각질, 및 포도주색 모반으로부터 선택되는 피부과적 질환, 장애 및 증상의 치료; 및 (vi) 각막 및 맥락막 신혈관형성 및 연령-관련 황반 변성 (AMD)으로부터 선택되는 안과적 질환, 장애 및 증상의 치료를 위한 약학적 조성물.
  43. 종양 진단을 위한, 제 1 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항의 박테리오클로로필 유도체, 및 약학적 허용성 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  44. 제 43 항에 있어서, 생물학적 생성물의 조명 시에, 상기 생성물 내 박테리아 및 바이러스를 포함하는 감염원 또는 세포를 시험관 내에서 사멸시키기 위한 약학적 조성물로, 상기 생물학적 생성물이 혈액인 약학적 조성물.
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