NO339304B1

NO339304B1 - Kationiske bakterieklorofyllderivater, farmasøytiske sammensetninger inneholdende slike, og anvendelse derav.

Info

Publication number: NO339304B1
Application number: NO20070083A
Authority: NO
Inventors: Avraham Cohen; Avigdor Scherz; Yoram Salomon; Alexander Brandis; Doron Eren
Original assignee: Yeda Res And Development Company Ltd
Priority date: 2004-06-07
Filing date: 2007-01-05
Publication date: 2016-11-21
Also published as: EP2322173A1; WO2005120573A3; HUE031075T2; EP1753457B1; KR20070026563A; EP1753457B8; RU2006146677A; MXPA06014326A; BRPI0511909A; CN1980661A; PT1753457T; DK1753457T3; CA2569675A1; JP5372371B2; WO2005120573A2; RU2397172C2; PT2322173T; ES2602460T3; US8207154B2; CY1118203T1

Description

Den foreliggende oppfinnelse vedrører nye vannløselige kationiske derivater av bakterieklorofyll, farmasøytiske sammensetninger inneholdende slike, og anvendelse derav. Deres fremstilling og deres anvendelse i fremgangsmåter av in vivo fotodynamisk terapi og diagnostikk av tumorer og ulike vaskulære sykdommer slik som aldersrelatert makuladegenerasjon, så vel som in vivo- og eks vzvo-fremgangsmåter for å drepe virus og mikroorganismer er også beskrevet.

Definisjoner og forkortelser: AMD: aldersrelatert makuladegenerasjon; Bchl: bakterieklorofyll a (pentacyklisk 7,8,17,18-tetrahydroporfyrin med en 5. isocyklisk ring, et sentralt Mg-atom, en fytyl- eller geranylgeranylgruppe ved posisjon 17 , en COOCH3-gruppe ved en posisjon 13 2 , et H-atom ved posi* sj* on 13 2, metylgrupper ved posisjoner 2, 7, 12, 18, en acetylgruppe ved posisjon 3, og en etylgruppe ved posisjon 8); B klor in: (bakterieklorin (7,8,17,18-tetrahydroporfyrin); Bphe: bakteriefeofytin a (Bchl hvor det sentrale Mg-atomet er erstattet ved to H-atomer); Bpheid: bakteriefeoforbid a (C-17 -fri karboksylsyre avledet fra Bphe); Pd-Bpheid: Pd-bakteriefeoforbid a (den C-17 -frie karboksylsyren avledet fra Bphe med et sentralt Pd-atom); PDT: fotodynamisk terapi; Rodobakterieklorin: Bklorin som har en -CH2CH2COOH-gruppe ved posisjon 17, en COOH ved posisjon 13, metylgrupper ved posisjonene 2, 7, 12, 18 og etylgrupper ved posisjoner 3 og 8.

IUPAC-nummerering av Bchl-derivatene er benyttet gjennom spesifikasjonen. Ved å benytte denne nomenklaturen bærer de naturlige Bchl'ene to karboksylsyreestere ved posisjoner 13 2 og 17 2 , imidlertid er de esterifisert ved posisjoner 13 3 og 17 3.

Fotodynamisk terapi (PDT) er en ikke-kirurgisk teknikk for behandling av cancere og andre sykdommer hvor administrasjon av et ikke-toksisk fotosensibiliserende middel (et middel som er aktivert ved lys), som er tatt opp ved og beholdt i en tumor eller annet vev som skal bli behandlet, er etterfulgt ved en ikke-skadelig bestråling med lys av en bestemt bølgelengde som genererer cytotoksiske reaktive oksygenarter (singlettoksygen) in situ. Denne teknikken er mer selektiv enn konvensjonell kjemoterapi og radiote-rapi p.g.a. fortrinnsberettiget akkumulering av fotoaktiverbare forbindelser som tumorvev og p.g.a. kontrollert levering av lys rettet mot tumoren som fører til rommessige begrensende fotodynamiske effekter.

Porfyriner har blitt benyttet som de primære fotosensibiliserende midlene i klinikker. Optimal vevspenetrering ved lys foregår tilsynelatende mellom 650-800 nm, men por- fimer natrium (Photofrin®, et varemerke fra Axcan Pharma Inc.), verdens første god-kjente fotodynamiske terapimiddel som er oppnådd fra hematoporfyrin-EX ved behandling med syrer, og har mottatt FDA-godkjenning for behandling av esofageale og en-dobronkiale ikke-småcellelungecancere absorberes bare svakt ved omkring 620 nm, og er en kompleks og useparerbar blanding av monomerer, dimerer og høyere oligomerer. I tillegg lider Photofrin® og andre testede fotosensibiliserende midler fra flere mangler som begrenser deres anvendelse, som hovedsakelig inkluderer: (1) relativ svak absorpsjon i den synlige spektrale området som begrenser behandlingen av overfladiske tumorer; (2) akkumulering av lang retensjon av det sensibiliserende midlet i pasientens hud, som fører til forlenget (dager til måneder) hudfototoksisitet; og (3) liten eller til og med ingen differensiering mellom PDT-effekten på bestrålt tumor og ikke-tumorvev. Disse ulempene og iboende problemer har resultert i større mengder av arbeid viet til syntesen av enkle rene forbindelser - såkalte "annengenerasjons" sensibiliserende midler - som absorberer ved lang bølgelengde, har godt etablerte strukturer og viser bedre differensiering mellom deres retensjon i tumorceller og deres retensjon i hud eller andre normale vev.

I søkingen for hensiktsmessige lyssensitive molekyler, eller fotosensibiliserende midler, viser bakterieklorofyll seg å ha noen fordeler over Photofrin®, det mest alminnelige

fotosensibiliserende midlet for PDT-terapi. Bakteriekloroform, når bestrålt, kan forårsake lyset og nå dypere inn i hud, som dermed er mer effektiv for større tumorer. Spektre-ne, fotofysikk og fotokjemi av naturlige Bchl'er har derfor gjort til optimale lyshøstende molekyler med klare fordeler over andre fotosensibiliserende midler nå benyttet eller testet i PDT-behandling. Spesielt har disse molekylene en veldig høy ekstinksjonskoef-fisient ved lange bølgelengder (Xmaks= 760-780 nm,8= (4-10)xl0<4>M"1 cm"1), hvor lys penetrerer dypt inn i vev. De genererer også aktive oksygenarter (ROS) ved et høyt kvantum utbytte (avhengig av det sentrale metallet).

Det biologiske opptaket og virkeevne av PDT av metallfrie derivater av Bchl har blitt studert med objektivet å manipulere affiniteten av sensibilisatorene til den cellulære avdelingen av tumor. Viktigst for denne fremgangsmåten er anvendelsen av sterkt lipo-file substituenter, som på den ene siden kan øke akkumuleringen av medikamentet i tumorcellene, men på den andre siden kan vanskeliggjøre dets levering til tumorcellene. I tillegg, burde man unngå akkumulering av signifikante fototoksiske medikamentnivåer i ikke-tumorvev over forlengede perioder etter administrasjon av medikamentet.

I søkernes tidligere US patenter US 5,726,169, US 5,955,585 og US 6,147,195, ble en

annen fremgangsmåte benyttet av oppfinnerne. Sterkt effektive anti-vaskulære sensibilisatorer, som ikke siver ut fra sirkulasjonen etter administrasjon og har kort halveringstid i blodet, ble syntetisert. Det ble forventet at den iboende forskjellen mellom blodkar av normale og unormale vev slik som tumorer eller andre vev som beror på neoblodkar, vil muliggjøre relativt selektiv destruksjon av det unormale vevet. Det ble derfor strebet

etter å syntetisere Bchl-derivater som er mer polare og har derfor bedre sjanse for å for-bli i den vaskulære avdelingen, hvor de gir den primære fotodynamiske effekten. Mani-pulasjon av 17-propionsyrerestsetet av naturlig Bchl tilveiebragte konjugater med ulike rester slik som aminosyrer, peptider eller proteiner, som forsterker hydrofilisiteten av sensibilisator. Den vaskulære målsøkende aktiviteten av disse derivatene, bakterieklorofyllserin, ble studert så vel som dets raske fjerning fra sirkulasjonen og hele dyrets kropp, mangel på hudfototoksisitet og sterkt kurerende potensiale (Rosenbach-Belkin et al., 1996; Zilberstein et al., 1997; Zilberstein et al., 2001). Disse Mg-inneholdende forbindelsene ble likevel funnet uegnet for farmasøytisk anvendelse p.g.a. deres lave stabi-litet ved forlenget lagring.

For å øke stabiliteten av Bchl-derivatene ble det sentrale Mg-atomet erstattet ved Pd i søkernes siste PCT-publikasjon WO 00/33833 og korresponderende til US patent nr. 6,596,846. Dette tunge atomet ble tidligere vist til å markert øke oksidasjonspotensialet av Bchl-makrosyklus og samtidig å sterkt forsterke intersystemkryssings (ISC) -hastigheten av molekylet til dets triplettilstand. Metallerstatningen ble utført ved direkte inkorporering av Pd 2_|_-ion til et Bheid-molekyl, som beskrevet i WO 00/33833. Det første Pd-substituerte Bchl-derivatet, palladiumbakteriefeoforbid eller Pd-Bpheid (Tookad®, et varenavn av Steba Biotech), ble funnet sterkt effektiv mot ulike faste tumorer i prekliniske studier (Schreiber et al., 2002, Gross et al., 2003; Koudinova et al., 2003; WO 03/094695) til og med tumorer omfattende resistente tumorceller (Preise et al., 2003). Den antivaskulære aktiviteten av Pd-Bpheid muliggjorde destruksjon av det prostetiske glandulare vevet i hundemodeller uten å kompromitere deres kontinens

(Chen et al., 2002). Fase I/II-kliniske forsøk beviste at Pd-Bpheid er trygg for anvendelse i den fotodynamiske terapien av prostatacancer i pasienter som sviktet i strålingstera-pi (Elhilali, 2004) og induserer nekrose og PS A (prostataspesifikt antigen) reduksjon av vaskularisert glandulart vev i prostatapasienter behandlet med terapeutisk lys og medi-kamentdoser (Trachtenberg, 2003).

På grunn av dets lave løselighet i vannholdige løsninger, krever den kliniske anvendelsen av Pd-Bpheid anvendelsen av løselighetsgjørende midler slik som Cremophor som kan forårsake bieffekter ved høye doser. Dette førte oppfinnerne til å tenke ut en ny fa-milie av Bchl-derivater, beskrevet i PCT/IL03/00973 (WO 2004/045492), bestående av Bklorin-makrocyklus inneholdende et di- eller trivalent sentralt metallatom og minst to anioniske rester. Disse anioniske Bchl-forbindelsene kan bli administrert intravenøst etter oppløsning i vannholdige løsninger uten tilsatte bindemidler. Deres korte levetid i sirkulasjonen, kombinert med deres relativt raske virkning og sterkt effektive antivaskulære aktivitet, viser deres potensiale som antivaskulære PDT-midler. Et av disse anioniske Bchl-derivatene er nå i prekliniske studier for PDT av aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD) og levertumorer, f. eks. hepatom.

DE 10154436 beskriver pyrobakteriefeoforbidforbindelser for anvendelse i fotodynamisk terapi, hvor minst en av ketogruppene ved posisjon 3a eller 131 av porfyringsys-temet er derivatisert til et korresponderende imin.

WO 03/028629 beskriver klorofyllderivater som kan inneholde positivt ladede ammonium- eller iminiumgrupper for fotodynamisk terapi eller diagnostikk.

WO 03/028628 beskriver tetrapyrroliske makrocykluser som er substituert ved minst en funksjonell gruppe som omfatter en karbamatgruppe med formelen -OCON<

ler -OCON=C< og inneholder eventuelt positivt ladede ammonium- eller iminiumgrupper, for fotodynamisk terapi eller diagnose. Selv om de generelle formlene angitt i nevnte publikasjon inkluderer bakterieklorofyllderivater, må det bemerkes at spesifikke bakterieklorofyllderivater ikke har blitt angitt og heller ikke instruerer spesifikasjonen fremstillingen av bakterieklorofyllderivater.

US 2003/020388 beskriver porfyrin og porfyrinbaserte kromoforer slik som klorin og bakterieklorin. WO 03/055887 beskriver porfyrin, klorin eller bakterieklorin som inneholder konjugerende meso-substituenter. US 5,744,598 beskriver iminer eller porfyriner. US 5,864,035 beskriver isoimidderivater av kloriner og bakteriekloriner. US 2003/0050296 beskriver positivt ladede porfyriner med kvartærniserte nitrogener. WO 01/40232 beskriver klorofyll- og bakterieklorofyllderivater. WO 97/19081 beskriver metallert bakterieklorofyll.

Det vil være sterkt ønskelig å tilveiebringe nye bakterieklorofyllderivater som vil være stabile og vi ha forsterket affinitet til endotelceller for anvendelse i fotodynamisk terapi, og spesielt i vaskulær målrettet fototerapi (VTP).

Foreliggende oppfinnelse vedrører et bakterieklorofyllderivat inneholdende minst en positivt ladet gruppe og/eller minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold, forutsatt at nevnte bakterieklorofyllderivat ikke har en funksjonell gruppe som omfatter en karbamatgruppe, og når bakterieklorofyllderivatet er et pyrobakteriefeoforbid, er den minst ene basiske gruppen som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold ikke en imingruppe ved posisjon 3 a eller 131 av bakterieklorofyllmolekylet.

Bakterieklorofyllderivatet ifølge foreliggende oppfinnelse er en forbindelse med formel II som beskrevet i det etterfølgende.

Den foreliggende oppfinnelsen videre relatert til farmasøytiske sammensetninger som omfatter et Bchl-derivat med formel II og en farmasøytisk akseptabel bærer, disse sammensetningene blir nyttige for fotodynamisk terapi (PDT), spesielt for vaskulært målrettet PDT, f. eks. for PDT av tumorer så vel som for ikke-onkologiske anvendelser i behandlingen av aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD), kardiovaskulære sykdommer og hudsykdommer slik som akne og psoriasis. I tillegg kan sammensetningene bli benyttet for å drepe infeksiøse midler inneholdende gram-negative eller gram-positive bakterier og virus in vivo eller in vitro, så vel som for diagnostiske formål.

Den foreliggende oppfinnelse er videre relatert til en forbedret fremgangsmåte for fotodynamisk terapi ved å benytte et fotosensibiliserende middel, hvor forbedringen består av å benytte et fotosensibiliserende Bchl-derivat med formel II ifølge oppfinnelsen. I henhold til dette aspektet beskrives en fremgangsmåte for behandling ved PDT, som omfatter å administrere til et individ med behov en effektiv mengde av et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved lokal bestråling.

I en utførelsesform, kan fremgangsmåten for behandling ved PDT omfatte å administrere til et individ som lider av en tumor en effektiv mengde av et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved lokal bestråling.

I et annet aspekt kan fremgangsmåten for behandling ved PDT omfatte å administrere til et individ som lider av aldersrelatert makuladegenerasjon en effektiv mengde av et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved lokal bestråling.

I en ytterligere utførelsesform kan en fremgangsmåte for å forebygge eller redusere in-stent restenose omfatte å administrere til et individ som lider av en kardiovaskulær sykdom som gjennomgikk koronar angiografi en effektiv mengde av et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved lokal bestråling.

Oppfinnelsen vedrører videre en forbedret fremgangsmåte for diagnose av tumorer ved å benytte som fotosensibiliserende middel et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen. I henhold til dette aspektet, kan en fremgangsmåte for diagnose av tumorer omfatte å administrere til et individ mistenkt for å ha en tumor en effektiv mengde av et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved lokal bestråling, f.eks. perturbasjon med elektromagnetisk stråling av ulike bølgelengder som inkluderer korte (f. eks. røntgenstråler), middels (f.eks. UV/VIS/nær-IR) for å tillate optisk frekvensstråling, og lange (f.eks. radiofre-kvensstråling) for å muliggjøre f.eks. nukleære eller elektronparamagnetiske resonans-signaler.

Oppfinnelsen tilveiebringer videre en forbedret fremgangsmåte for å drepe celler eller infeksiøse midler som omfatter bakterier og virus, ved å benytte som fotosensibiliserende middel et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen. I henhold til dette aspektet, er oppfinnelsen relatert til en fremgangsmåte for å sterilisere biologiske produkter, f.eks. blod, som omfatter å tilsette til nevnte biologiske produkt, f.eks. blod, en effektiv mengde av Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen, etterfulgt ved bestråling.

De forskjellige forbindelsene testet er representert i den følgende beskrivelsen av figurene ved et uthevet og understreket tallord. Deres fullstendige identifikasjon er funnet i listen av forbindelser ved starten av den kjemiske delen, i eksemplene og i tilføyelsene heretter.

Fig. 1 viser fluorescensemisjonsspektrumet av forbindelse 5 i metanol.

Fig. 2 avbilder absorpsjonsspektrene av forbindelsene 5 i fosfatbufret saltoppløsning (PBS) ved økende konsentrasjoner av human serumalbumin (HSA). (Xeks= 520 nm). Fig. 3A-3C er grafer som viser fototoksisiteten av forbindelser 5, 7, og 11, på H5V-endotelceller. Fig. 3A: fototoksisitet etter 90 min. inkubasjon av cellene med økende konsentrasjoner av forbindelser 5 og 11. Fig. 3B: fototoksisitet etter 2 timers inkubasjon med økende konsentrasjoner av forbindelser 5, 7 og 9. Fig. 3C: fototoksisitet etter 1-10 min. inkubasjon med forbindelse 5 (50 uM). Celler ble inkubert i mørke med de indikerte konsentrasjonene av forbindelsene, vasket og belyst i 10 min. (åpne former i fig. 3 A-B, lukket form i fig. 3C) eller holdt i mørke (mørk kontroll, lukkede former i fig.

3 A-B). Triplikate bestemmelser ble utført og representative eksperimenter er vist.

Fig. 4 er en graf som viser farmakokinetikken av forbindelse 5 i blod fra Wistar-rotter. Etter intravenøs (i.v.) injeksjon av forbindelse 5 (0,6 mg/kg), ble blodprøver samlet fra den samme rotten ved 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45 min. og 1, 2, 6, 24 timer etter injeksjon, og fluorescensemissjonsspektere ble registrert. Hvert tidspunkt representerer gjennomsnitt av tre rotter ± STD. Fig. 5A-5B viser biodistribusjon av forbindelse 5 i Wistar-rotte. Rotter ble avlivet 30 min. (fig. 5A) eller 24 timer (fig. 5B) etter i.v. av forbindelse 5 (0,6 mg/kg), og fluorescensemissjonsspektere av de indikerte organene og vevene ble registrert og normali-sert til de farmakokinetiske data. Fig. 6A-6C er fotografier som viser den lokale effekten av PDT i mus som bærer C6-gliomxenograft og behandlet i.v. med forbindelse 5. Hanner av CD1 nakenmus ble behandlet med 0,3 mg/kg av 5 og belyst med 755 nm laser (80 mW/cm ) i 15 min. Fig. 6A: fotografier av tumorsetet i et PDT-behandlet dyr ved dager 0, 4,14, 21 og 32. Fig. 6B: fotografier av tumorsetet av mørk kontrollmus (injisert med 5, men ikke belyst) (n=3) ved dager 0 og 10; fig. 6C: fotografier av tumorsetet av lyskontrollmus (injisert med saltoppløsning av et volum ekvivalent til 5-løsningen og belyst) (n=2) ved dager 0 og 10. Fig. 7 viser overlevelsessansynligheten av mus som bærer C6-gliomxenografter behandlet ved PDT med forbindelse 5. Mus som bærer C6-gliomxenografer (n=17) ble i.v. injisert med forbindelse 5 (0,3 mg/g) og øyeblikkelig belyst i 15 min. med lysintensitet på 80 mW/cm<2>(fullstendig behandlet gruppe, n=12, kvadrater). Kontrollgrupper: ubehandlede tumorbærende mus (n=2, sirkler), mørk kontroll (n=3, diamanter), lys kontroll (n=2, triangler).<*>sannsynlighet av tumorvolum <2 ml. Fig. 8A-8D er grafer som viser fototoksisiteten av et negativt ladet bakterieklorofyllderivat (se eksempel 22) og forbindelse 5 på gram-positive og gram-negative bakterier. Gram-positive (St. albus, fig. 8A, 8B) og gram-negative (E. coli, fig. 8C, 8D) bakterier ble inkubert i 1 time med de indikerte konsentrasjonene av det negativt ladede bakterieklorofyllderivatet (fig. 8A, 8C) eller med forbindelse 5 (fig. 8B, 8D), og belyst i 15 min. med 70 mW/cm . Bakteriell overlevelse ble bestemt ved kolonitelling. Triplikate bestemmelser ble utført og representative eksperimenter er vist. Fig. 9A-9E er grafer som viser biodistribusjonen av hhv. forbindelsene 28, 32,10, 36 og 75, i flere organer av nakenmus som bærer nyrecellekarcinom (RCC) xenograft. Rot-tene ble injisert med en løsning av testforbindelsen i isoton mannitol (1,5 mg/kg) ved ulike tidspunkter.

Den foreliggende oppfinnelse er avledet fra observasjonen ved de foreliggende oppfinnerne at prekliniske studier med Tookad® (Pd-Bpheid) og med det vannløselige anioniske Bchl-derivatet (beskrevet i WO 2004/045492) demonstrerte høy virkeevne i PDT i flere solide tumorer slik som melanom, gliom, humane prostataxenografter, normale hundeprostata og DS sarkom i dyremodeller (Chen et al., 2002; Schreiber et al., 2002; Gross et al., 2003; Kelleher et al, 2003; Koudinova et al., 2003; Mazor et al., 2003; Plaks et al., 2004) og indikerte at endotelcellene, den ekstracellulære matrisen og muli-gens blodplater er mulige kandidater for den primære fotodynamiske virkningen.

Med de ovenfor nevnte Bchl-derivatene, kunne ikke noe bevis bli funnet for en direkte virkning av de relative oksygenartene (ROS) dannet under belysning på tumorcellene

(Gross et al., 2003). Den observerte høye kureringshastigheten så derfor ut til å indikere at fotodynamisk krenking av tumorendoteliumet kan være tilstrekkelig for å pålegge en fullstendig tumorrespons. Etter denne observasjonen, søkte oppfinnerne etter hvordan å forsterke fotosensibilisatorens affinitet til endotelceller, og spesielt til neoendotelceller, som er karakteristiske for tumor og andre vaskulært avhengige sykdommer. De egnede målene ble identifisert som sterkt tette negative ladninger på endoteliumet, som inkluderer endotelfenestrene, belagte fordypninger, plasmalemma proper og vesikler (Simionescu et al., 1981; Ghinea og Simionescu, 1985; Hamblin et al., 1999), fibroblastvekst-faktorreseptorer (Segev et al., 2002), endeotelglykokalyks (et sterkt hydratisert nettverk av membranbundede negativt ladede proteoglykaner, glykosaminoglykaner, glykopro-teiner og glykolipider, noen inneholdende sulfoniske grupper) og angiogene endotelceller (Thurston et al., 1998; Dellian et al., 2000). I tillegg, pekte nyere publikasjoner ut

den økende eksponeringen av anioniske fosfolipider på overflaten av tumorendotelium, f.eks. Hodgkins lymfom, human ikke-smålcellelungekarcinom, musefibrosarkom, human brystkarcinom og melanom (Ran et al., 2002). Det økende antallet av anioniske seter i tumorendotelium tilveiebringer et attraktivt mål for tumorterapi.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et bakterieklorofyllderivat med formel II:

hvor

M representerer 2H, et divalent metallatom valgt fra Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn eller Mn, eller et trivalent metallatom valgt fra Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb eller Cr;

Ri, R'2og R6 er hver uavhengig Y-R8, -NR9R9eller -N^R^R^A";

Y er O eller S;

R4er -CH=CR9R'9, -CH=CR9Hal, -CH=CH-CH2-NR9R9, -CH<:H-CH2-N^9R'9R''9A\

-CHO, -CH=NR9, -CH=N<+>R9R9A", -CH2-OR9, -CH2-SR9, -CH2-Hal, -CH2-R9, -CH2-NR9R 9, -C^-N^R^R^A", -CH2-CH2R9, -CH2-CH2Hal, -CH2-CH2OR9, -CH2-CH2SR9, -CH2-CH2-NR9R'9, -CH2-CH2-N+-R9R 9R"9A", -COCH3, C(CH3)=CR9R9, -C(CH3)=CR9Hal, -C(CH3)=NR9, -CH(CH3)=N%R 9A\ -CH(CH3)-Hal, -CH(CH3)-OR<9>, -CH(CH3)-SR9, -CH(CH3)-NR9R9, -CH(CH3)-N%R 9R 9A, eller -C = CR9;

Rg, R9, R 9 og R"9er hver uavhengig:

(a) H; (b) C1-C25hydrokarbyl; (c) C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en eller flere funksjonelle grupper valgt fra halogen, nitro, okso, OR, SR, epoksy, epitio, -CONRR', -COR, -COOR", -OSO3R, -S03R", -S02R, - NHSO2R, -SO2NRR',=N-OR, -(CH2)„-CO-NRR', -0-(CH2)„-OR, -0-(CH2)n-0-(CH2)„-R, -OPO3RR', -PO2HR, -P03R"R", eller hvor n er et heltall fra 1 til 6, R, R' og R" er hver uavhengig H, hydrokarbyl eller heterocyklyl eller to av R, R' og R" sammen med N-atomet som de er festet til danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et eller flere heteroatomer valgt fra O, S eller N, og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet med alkyl eventuelt substituert ved halogen, hydroksyl eller amino; (d) C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en eller flere funksjonelle grupper valgt fra positivt ladede grupper, valgt fra: (i) en oniumgruppe som ikke inneholder N; (ii) et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe; eller (iii) et kation avledet fra en heteroaromatisk forbindelse inneholdende en eller flere nitrogenatomer og eventuelt O- eller S-atomer; negativt ladede grupper slik som COO", COS", -S03",-OS03", -PO3"<2>", -OPO3R", -P02H", eller -P03R"; basiske grupper som konverteres til positivt ladede grupper under fysiologiske forhold valgt fra -NRR', -C(=NR)-NR'R", -PRR', -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", 0<-NR-, >C=NR, eller et N-inneholdende heteroaromatisk radikal hvor R, R' og R" er som definert i (c) ovenfor; eller en sur gruppe som konverteres til en negativt ladet gruppe under fysiologiske forhold slik som -COOH, -COSH, -SO3H or -P03H2; (e) C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, inneholdende et eller flere heteroatomer og/eller en eller flere karbocykliske eller heterocykliske halvdeler; (f) C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, inneholdende et eller flere heteroatomer og/eller en eller flere karbocykliske eller heterocykliske halvdeler og substituert ved en eller flere funksjonelle grupper som definert i (c) og (d) ovenfor; (g) C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en rest av en aminosyre, et peptid, et protein, et monosakkarid, et oligosakkarid eller et polysakkarid; eller (h) en rest av en aminosyre, et peptid, et protein, et monosakkarid, et oligosakkarid eller et polysakkarid;

R%kan videre være H+ eller et kation R<+>ionår Ri, R2og Re hver uavhengig er Y-R«;

R<+>ioer et metall, ammonium eller et organisk kation;

A" er et fysiologisk akseptabelt anion;

m er 0 eller 1; og

farmasøytisk akseptable salter og optiske isomerer derav;

forutsatt at bakterieklorofyllderivatet med formel II in har minst en positivt ladet gruppe og/eller minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold.

Som definert her, er A" et fysiologisk akseptabelt anion slik som klorid, bromid, jodid, perklorat, sulfat, fosfat eller et organisk anion slik som acetat, benzoat, kaprylat, sitrat, laktat, malonat, mandelat, mesylat, oksalat, propionat, suksinat, tosylat og lignende.

Betegnelsen "halogen" refererer til fluor, klor, brom eller jod.

Betegnelsen "C1-C25hydrokarbyl", som definert for R8, R9, R9og R"9, representerer en rett eller forgrenet, mettet eller umettet, acyklisk eller cyklisk, som inkluderer aromatisk, hydrokarbylradikal av en 1-25 karbonatomer, fortrinnsvis av 1 til 20, mer foretrukket av 1 til 6 karbonatomer.

I en foretrukket utførelsesform er C1-C25hydrokarbylet en rett eller forgrenet C1-C25alkylradikal, fortrinnsvis C1-C10og mer foretrukket C1-C6alkyl, f.eks. metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl og heksyl. I en annen utførelsesform har alkylgruppen 10 karbonatomer eller mer, f.eks. -C10H21, -C15H31, -Ci6H33, -

C17H35, -C18H37, -C20H41og lignende. Når Ri er - OR», så kan Rs også være geranylger-anyl (2,6-dimetyl-2,6-oktadienyl) eller fytyl (2,6,10,14-tetrametyl-heksadek-14-en-16-yl)radikalet, alkenylgrupper som er til stede ved posisjonen 17<3>av naturlig klorofyll eller bakterieklorofyllforbindelse.

C1-C25hydrokarbylet kan også være en rett eller forgrenet C2-C25alkenyl- eller alkynyl-radikal, fortrinnsvis av 2-6 karbonatomer, f.eks. vinyl, prop-2-en-l-yl, but-3-en-l-yl, pent-4-en-l-yl, heks-5-en-l-yl, etynyl, propargyl og lignende.

C1-C25hydrokarbylet kan videre være et C3-C25monocyklisk eller polycyklisk cykloalkyl, fortrinnsvis C3-C14, mer foretrukket C3-C7cykloalkyl, slik som cyklopropyl, cyklo-butyl, cyklopentyl, cykloheksyl og cykloheptyl;

et monocyklisk eller polycyklisk arylradikal, fortrinnsvis et C6-C18, mer foretrukket et C6-C14aryl, slik fenyl, naftyl, karbazolyl, antryl, fluorenyl, indanyl og fenantryl; eller

et aralkylradikal, hvor arylradikalet fortrinnsvis et C6-C18, mer foretrukket et C6-C14aryl, slik som en fenyl eller naftyl, og er mer foretrukket benzyl eller fenetyl.

Som benyttet her, refererer betegnelsen "karbocyklisk halvdel" til en monocyklisk eller polycyklisk forbindelse som inneholder bare karbonatomer i ringen(e). Den karbocykliske halvdelen kan være mettet, dvs. et cykloalkyl som definert ovenfor, eller umettet, dvs. cykloalkenyl, eller aromatisk, dvs. et aryl som definert ovenfor.

Betegnelsen "alkoksy" som benyttet her, refererer til en gruppe (Ci-C25)alkyl-0-, hvori C1-C25alkyl er som definert ovenfor. Eksempler på alkoksy er metoksy, etoksy, n-propoksy, isopropoksy, butoksy, isobutoksy, tert-butoksy, pentoksy,

soksy, -OC15H31, -OC16H33, -OC17H35, -OC18H37og lignende. Betegnelsen "aryloksy" som benyttet her, referer til en gruppe (C6-Ci8)aryl-0-, hvori C6-C18aryl er som definert ovenfor, for eksempel fenoksy og naftoksy.

Betegnelsene "heteroaryl" eller "heterocyklisk halvdel" eller "heteroaromatisk" eller "heterocyklyl", som benyttet her, betyr et radikal avledet fra en mono- eller polycyklisk heteroaromatisk ring inneholdende 1 til 3 heteroatomer valgt fra gruppen bestående av O, S og N. Bestemte eksempler er pyrrolyl, furyl, tienyl, pyrazolyl, imidazolyl, oksazolyl, tiazolyl, pyridyl, quinolinyl, pyrimidinyl, 1,3,4-triazinyl, 1,2,3-triazinyl, 1,3,5-triazinyl, benzofuryl, isobenzofuryl, indolyl, imidazo[l,2-a]pyridyl, benzimi-dazolyl, benztiazolyl og benzoksazolyl.

En hver "karbocyklisk", "aryl" eller "heteroaryl" kan bli substituert ved en eller flere radikaler slik som halogen, C6-C14aryl, C1-C25alkyl, nitro, OR, SR, -COR, -

COOR, -SO3R, -SO2R, -NHSO2R, -NRR', -(CH2)„-NR-COR', og -(CH2)„-CO-NRR'. Det må bli forstått at når en polycyklisk heteroaromatisk ring er substituert, kan substi-tusjonene være i enhver av de karbocykliske og/eller heterocykliske ringene.

En "positivt ladet gruppe" som benyttet her, angir et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe eller fra en oniumgruppe ikke inneholdende N.

Et "kation avledet fra en N-inneholdende gruppe" som benyttet her, angir f.eks., men er ikke begrenset til, en ammonium -N<+>(RR'R"), hydrazinium -(R)-N-N<+>(R'R"), ammoniumoksy O <- N<+>(RR'), iminium >C=N<+>(RR'), amidinium -C(=RN)-N<+>R'R" eller guanidinium -(R)-N-C(=NR)-N+R.'R"-gruppe, hvor R, R' og R" hver uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C6alkyl, som definert her, fenyl eller benzyl, eller heterocyklyl, eller i ammoniumgruppen kan en av R, R' og R" være OH, eller to av R, R' og R" i ammoniumgruppen eller R og R' i hydrazinium-, ammoniumoksy-, iminium-, amidinium- eller guanidiniumgruppene, sammen med N-atomet som de er festet til, danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, som eventuelt inneholder et eller flere heteroatomer valgt fra gruppen bestående av O, S eller N og eventuelt videre substituert ved det ytterligere N-atomet, eller nevnte kation er avledet fra en forbindelse inneholdende et eller flere N-atomer i en heteroaromatisk ring.

I en foretrukket utførelsesform, inneholder bakterieklorofyllderivatet en ammoniumgruppe med formelen -N<+>(RR'R"), hvor hver av R, R' og R" uavhengig er H eller eventuelt substituert hydrokarbyl eller heterocyklyl, som definert her, eller en av dem kan være OH. -N<+>(RR'R"), ammoniumgruppen, kan være en sekundær ammonium, hvor hvilke som helst to av radikalene R, R' eller R" er H; en tertiær ammonium, hvor bare en av R, R' eller R" er H; eller en kvaternær ammonium, hvor hver av R, R' eller R" er en eventuelt substituert hydrokarbyl eller heterocyklylgruppe som definert her. Når en av R, R' eller R" er OH, er gruppen en hydroksylammoniumgruppe. Fortrinnsvis er ammoniumgruppen en kvaternær ammoniumgruppe hvor R, R' og R" hver er C1-C6alkyl slik som metyl, etyl, propyl, butyl, heksyl. Som nevnt her ovenfor, kan ammo niumgruppen være en endegruppe i molekylet, eller den kan bli funnet i en alkylkjede i molekylet.

I hydrazinium -(RJN-N^R"), amidinium -C(=NR)-N<+>R'R" og guanidinium -(R)-N-C(=NR)-N<+>R'R"-gruppene, kan R, R' og R" hver uavhengig hver H eller hydrokarbyl eller heterocyklyl, eller R' og R" sammen med N-atomet som de er festet til, danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, som definert her. Eksempler på slike grupper inkluderer dem hvor R er H, og R' og R" hver er C1-C6alkyl slik som metyl, etyl, propyl, butyl, heksyl.

I ammoniumoksy O <- N<+>(RR')- og iminium >C=N<+>(RR')-gruppene, kan R og R' hver uavhengig være H eller hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C6alkyl, eller heterocyklyl, eller R og R' sammen med N-atomet som de er festet til danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, som definert her.

I en annen foretrukket utførelsesform, inneholder bakterieklorofyllderivatet en cyklisk ammoniumgruppe med formelen -^(RR^"), hvor to av R, R' og R" sammen med N-atomet danner en mettet ring med 3-7 medlemmer som definert her nedenfor.

Som definert her, kan "en mettet ring med 3-7 medlemmer" dannet ved to av R, R' og R" sammen med N-atomet som de er festet til, være en ring inneholdende bare N slik som aziridin, pyrrolidin, piperidin, piperazin eller azepin, eller den kan inneholde et ytterligere heteroatom valgt fra O og S slik som morfolin eller tiomorfolin. Det ytterligere N-atomet i piperazinringen kan eventuelt være substituert ved alkyl, f.eks. C1-C6alkyl, som kan være substituert ved halo, OH eller amino. Oniumgruppene avledet fra nevnte naturlige ringer inkluderer aziridinium, pyrrolidinium, piperidinium, piperazi-nium, morfolinium, tiomorfolinium og azepinium.

Som definert her, angir "et kation avledet fra en N-inneholdende heteroaromatisk radikal" et kation avledet fra en N-heteroaromatisk forbindelse som kan være en mono-eller polycyklisk forbindelse eventuelt inneholdende O-, S- eller ytterligere N-atomer. Ringen som kationet er avledet fra, burde inneholde minst et N-atom og være aromatisk, men den andre ringen(e), om noen, kan være delvis mettet. Eksempler på N-heteroaromatiske kationer inkluderer pyrazolium, imidazolium, oksazolium, tiazolium, pyridinium, pyrimidinium, quinolinium, isoquinolinium, 1,2,4-triazinium, 1,3,5-triazinium og purinium.

Den minst ene positivt ladede gruppen kan også være en oniumgruppe ikke inneholdende nitrogen slik som, men ikke begrenset til, fosfonium [-P<+>(RR'R")], arsonium [-As<+>(RR'R")], oksonium [-0<+>(RR')], sulfonium [-S<+>(RR')], selenonium [-Se<+>(RR')], telluronium [-Te<+>(RR')], stibonium [-Sb<+>(RR'R")], eller vismutonium (-Bi<+>(RR'R")]-gruppe, hvor hver av R, R' og R", uavhengig, er H, hydrokarbyl eller heterocyklyl, fortrinnsvis C1-C6alkyl slik som metyl, etyl, propyl, butyl, pentyl eller heksyl, eller aryl, fortrinnsvis fenyl.

Eksempler på fosfoniumgrupper med formelen -P<+>(RR'R") inkluderer grupper hvor R, R' og R" hver er metyl, etyl, propyl, butyl, eller fenyl, eller R er metyl, etyl, propyl, butyl eller heksyl og R' og R" begge er fenyl. Eksempler på arsoniumgrupper med formelen -As<+>(RR'R") inkluderer grupper hvor R, R' og R" hver er metyl, etyl, propyl, butyl eller fenyl. Eksempler på sulfoniumgrupper med formelen -S<+>(RR') inkluderer grupper hvor R og R' hver er metyl, etyl, propyl, butyl, fenyl, benzyl, fenetyl, eller en substituert hydrokarbylgruppe.

Som definert her, er "en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold", minst teoretisk, en hver basisk gruppe som vil generere under fysiologiske forhold en positivt ladet gruppe som definert her. Det må bemerkes at de fysiologiske forholdene, som benyttet her, refererer ikke bare til serumet, men til forskjellige vev og celleavdelinger i kroppen.

Eksempler på slike N-inneholdende basiske grupper inkluderer, uten å være begrenset til, en hver aminogruppe som vil generere en ammoniumgruppe, en hver imingruppe som vil generere en iminiumgruppe, en hver hydrazingruppe som vil generere en hydra-ziniumgruppe, en hver aminooksygruppe som vil generere en aminiumoksygruppe, en hver amidingruppe som vil generere en amidiniumgruppe, en hver guanidingruppe som vil generere en guanidinumgruppe, alle som definert her. Andre eksempler inkluderer fosfino og merkaptogrupper.

Bakterieklorofyllderivatet ifølge oppfinnelsen kan derfor inneholde minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold slik som -NRR', -C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", O <- NR-, eller >C=NR, hvor hver av R, R' og R" uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, eller heterocyklyl, eller to av R, R' og R" sammen med N-atomet danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et O, S eller N-atom og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet, eller den basiske gruppen er en N-inneholdende heteroaromatisk radikal.

Den mettede ringen med 3-7 medlemmer kan være aziridin, pyrrolidin, piperidin, morfolin, tiomorfolin, azepin eller piperazin eventuelt substituert ved det ytterligere N-atomet ved C1-C6alkyl eventuelt substituert ved halo, hydroksyl eller amino, og det N-inneholdende heteroaromatiske radikalet kan være pyrazolyl, imidazolyl, oksazolyl, tiazolyl, pyridyl, quinolinyl, isoquinolinyl, pyrimidyl, 1,2,4-triazinyl, 1,3,5-triazinyl eller purinyl.

Som definert her, kan R<+>i0være ammonium, et kation av et metall, fortrinnsvis av et alkali- eller j ordalkalimetall slik som Na, K, Li, Ca, Ba eller et organisk kation slik som definert her for "et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe".

Som definert her er, "en negativt ladet gruppe" et anion avledet fra en syre og inkluderer karboksylat (COO"), tiokarboksylat (COS"), sulfonat (S03"), og fosfonat (P03<2>"), og den "sure gruppen som er omdannet til en negativt ladet gruppe under fysiologiske forhold" inkluderer karboksyl (-COOH)-, tiokarboksyl (-COSH)-, sulfon (-SO3H)- og fosfon (-P03H2)-syregruppene. Bakterieklorofyllderivater med disse radikalene har blitt beskrevet i WO 2004/045492 av den samme søkeren.

Som definert her, kan R8, R9og R9hver uavhengig være et C1-C25hydrokarbyl eventuelt inneholdende et eller flere heteroatomer, karbocykliske eller heterocykliske halvdeler. For eksempel kan C1-C25hydrokarbylet være et rett eller forgrenet C1-C25alkyl eller C2-C25alkenyl som kan være avbrutt ved et eller flere heteroatomer valgt fra O, S og/eller N, og/eller kan være avbrutt og/eller substituert ved en eller flere karbocykliske, f.eks. C3-C7cykloalkyl eller C6-C14aryl, eller heterocykliske halvdeler som definert ovenfor.

Som definert her, kan C1-C25hydrokarbylet definert for Rg, R9og R9eventuelt være substituert ved en eller flere funksjonelle grupper valgt fra halogen, nitro, okso, OR, SR, epoksy, epitio, aziridin, -CONRR', -COR, -COOR, -OSO3R, -SO3R, -

S02R, -NHSO2R, -S02NRR'-NRR', =N-OR, =N-NRR', -C(=NR)-NRR', -NR-NRR', -

(R)N-C(=NR)-NRR\ O <- NR-, >C=NR, -(CH2)„-NR-COR\ -(CH2)„-CO-NRR', -O-(CH2)„-OR, -0-(CH2)n-0-(CH2)n-R, -PRR', -OPO3RR', -P02HR, -PO3RR'; en eller

flere negativt ladede grupper slik som COO", COS", -OS03", -S03", -OP03R", -P02H", - P03" og -P03R"; og/eller en eller flere positivt ladede grupper slik som -

P<+>(Rr'R"), -As<+>(RR'R"), -0<+>(RR'), -S<+>(RR'), -Se<+>(RR'), -Te<+>(RR'), -Sb+(RR'R"), -

Bi<+>(RR'R"), 0<-N<+>(RR')-, >C=N<+>(RR'), -N<+>(RR'R"), -(R)-N-N<+>(RR'R"), -(R)N-C(=HN)-N<+>RR'R", -C(=NH)-N<+>(RR'R"), eller et heteroaromatisk kation slik som pyrazolium, imidazolium, oksazolium, tiazolium, pyridinium, quinolinium, pyrimidinium, 1,2,4-triazinium, 1,3,5-triazinium og purinium; hvor n er et heltall fra 1 til 6, R, R' og R" er hver uavhengig H, hydrokarbyl eller heterocyklyl, eller to av R, R' og R" sammen med N-atomet som de er festet til, danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et eller flere heteroatomer valgt fra gruppen bestående av O, S eller N, og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet. C1-C25hydrokarbylet definert for R8, R9og R9kan også være substituert ved resten av et mono-, oligo- eller polysakkarid slik som glykosyl, eller av en aminosyre, peptid eller protein. I tillegg kan Rg, R9og R9hver uavhengig være en rest av et mono-, oligo- eller polysakkarid slik som glykosyl, eller av en aminosyre, et peptid eller protein.

I gruppene OR og SR, når R er H, er gruppene hydroksy og merkapto hhv. representert, og når R er andre enn H, er etere og sulfider representert. I gruppen -PRR', er fos-finogruppen representert når R og R' er H. I gruppen -COR, når R er H, er formylgrup-pen -CHO av et aldehyd representert, mens når R er andre enn H, er dette resten av et keton slik som alkylkarbonyl og arylkarbonylgrupper. I gruppen COOR, når R ikke er H, er dette en karboksylsyreestergruppe slik som alkoksykarbonyl og aryloksykarbo-nylgruppene. På lignende måte, er estere representert i gruppene -OS03R, -S03R, - S02, -OP03RR', -P02HR og -P03RR', når R og R' er andre enn H.

I en foretrukket utførelsesform, er Ri og R$i en forbindelse med formel II, en gruppe - ORg, hvor Rg er en C1-C6alkyl substituert med en positivt ladet endefunksjonell gruppe, mer foretrukket en gruppe -N^RIfR", mest foretrukket -N<+>(CH3)3.

I en utførelsesform av oppfinnelsen, kan Rg, R9og/eller R9være resten av en aminosyre, et peptid eller et protein. I en foretrukket utførelsesform, er Ri ved posisjon 17<3>-ORg, hvor Rg er resten av en aminosyre inneholdende en fri hydroksygruppe slik som serin, treonin, tyrosin eller et alkyl, f.eks. metyl, ester derav, eller et peptid inneholdende slik aminosyre eller derivat derav, nevnte hydroksylerte aminosyre eller derivater derav, eller peptid som er forbundet til -COO"-gruppen av Bchl-derivatet gjennom dets hydroksygruppe. Eksempler på slike aminosyrederivater og peptider er L-serinmetylester, L-tyrosinmetylester og serylserinmetylester.

I en annen foretrukket utførelsesform er gruppen -NR9R 9, resten av en aminosyre inneholdende en fri aminogruppe slik som arginin og lysin, eller et peptid inneholdende dem, eller et alkylesterderivat av nevnte aminosyre eller peptid, forbundet til -CO ved posisjon 133 og/eller 173 av Bchl-molekylet gjennom en amidbinding. I disse forbindelsene er N-atomet av -NR9R 9-gruppen avledet fra den frie aminogruppen av aminosyren.

I en ytterligere utførelsesform, kan C1-C25hydrokarbylgruppen være substituert ved en aminosyrerest og, om den terminale aminogruppen av aminosyren er fri, kan aminosyre-resten være kilden for den positivt ladede gruppen under fysiologiske forhold.

R<+>iokan være et monovalent eller divalent kation avledet fra et alkali- eller jordalkali-metall slik som K<7>, Na<+>, Li, NH4 , Ca' , mer foretrukket K ; eller det er et kation avledet fra et amin.

Som benyttet her, betyr betegnelsen "kationisk derivat av bakterieklorofyll" et bakterieklorofyll inneholdende en eller flere positivt ladede grupper og/eller en eller flere basiske grupper som er omdannet til positivt ladede grupper under fysiologiske forhold. Bakterieklorofyllmolekylet kan også ha nøytrale grupper og/eller en eller flere negativt ladede grupper og/eller en eller flere sure grupper som er omdannet til negativt ladede grupper under fysiologiske forhold. Den totale ladningen av bakterieklorofyllmolekylet er ikke viktig.

I bakterieklorofyllderivatet med formel II ifølge oppfinnelsen er M fortrinnsvis 2H eller Pd.

I en foretrukket utførelsesform, inneholder bakterieklorofyllderivatet ifølge oppfinnelsen minst en positivt ladet gruppe som kan være et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe valgt fra -N<+>CR^R"), -(R)N-N<+>(RR'R"), O <- ^(RR')-,

>C=N+(RR'), -C(=RN)-N^RR'R" eller -(R)N-C(=HN)-N<+>RR'R"-gruppe,

nevnte kation er en endegruppe eller en gruppe lokalisert i hydrokarbylkjeden av bakterieklorofyllmolekylet. Fortrinnsvis er nevnte kation en ammoniumgruppe av formel - N<+>(RR'R"), hvor hver av R, R' og R" uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, eller heterocyklyl, eller to av R, R' og

R" sammen med N-atomet danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et O-, S- eller N-atom og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet. Den mettede ring med 3-7 medlemmer kan være valgt fra aziridin, pyrrolidin, piperidin, morfolin, tiomorfolin, azepin eller piperazin eventuelt substituert ved det ytterligere N-atomet ved C1-C6alkyl eventuelt substituert med halo, hydroksyl eller amino.

Den positivt ladede gruppen kan også være et kation avledet fra en heteroaromatisk forbindelse inneholdende et eller flere N-atomer og eventuelt O- eller S-atomer valgt fra pyrazolium, imidazolium, oksazolium, tiazolium, pyridinium, quinolinium, isoquinolinium, pyrimidinium, 1,2,4-triazinium, 1,3,5-triazinium eller purinium.

Den positivt ladede gruppen kan også være en oniumgruppe valgt -0<+>(RR'), -S<+>(RR'), - Se<+>(RR'), -Te<+>(RR'), -P<+>(RR'R"), -As<+>(RR'R"), -Sb<+>(RR'R"), eller -Bi<+>(RR'R"), hvor R, R' og R" hver uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, eller heterocyklyl.

I en annen utførelsesform, inneholder bakterieklorofyllderivatet ifølge oppfinnelsen minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold. Den minst ene basiske gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold kan være et N-inneholdende aromatiske radikal utvalgt fra pyrazolyl, imidazolyl, oksazolyl, tiazolyl, pyridyl, quinolinyl, isoquinolinyl, pyrimidyl, 1,2,4-triazinyl, 1,3,5-triazinyl eller purinyl.

I en foretrukket utførelsesform, tilveiebringer oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel II hvor Rg, R^R'9og R"9er hver uavhengig C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis en rettkjedet eller forgrenet C1-C25alkyl- eller C2-C25alkenylkjede, helst C1-C10eller C1-C6alkyl, eventuelt inneholdende en eller flere heteroatomer utvalgt fra O, S eller N, og/eller avbrutt og/eller substituert med en eller flere karbocykliske eller heterocykliske grupper.

I foretrukkede utførelsesformer er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobakterieklorin med formelen n, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Ri er OH, -NR9R9eller -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH; Rs er -NR9R 9 eller -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH; R9er H eller Ci-C6alkyl; og R9er Ci- C25hydrokarbyl substituert ved minst en positivt ladet gruppe og/eller minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold.

I mer foretrukkede utførelsesformer, i forbindelsene ovenfor, er R9H og R9er C1-C25alkyl, fortrinnsvis C1-C10, mer foretrukket C1-C6alkyl, substituert ved minst en positivt ladet gruppe -ISTRR^" eller ved minst en basisk gruppe -NRR' og eventuelt avbrutt ved en -N(R")-gruppe, hvor R og R' hver uavhengig er H, C1-C6alkyl eventuelt substituert ved NR"R", eller heterocyklyl slik som pyridyl, eller R og R' sammen med N-atomet danner en ring med 6-medlemmer som ytterligere inneholder et O-, S- eller N-atom, og R" er H eller Ci-C6alkyl.

I en foretrukket utførelsesform tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel n, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Ri er OH, -NHR'9eller -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH, og R6er en -NHR 9-gruppe valgt fra gruppen bestående av: (i) -NH-(CH2)„NRR' eller -NH-CCHDn-Nltfl/R''; (ii) -NH-(CH2)„-N(R")-(CH2)„-NRR';

hvor

X er O, S eller NR;

R, R' og R" er hver uavhengig H eller d-C6alkyl;

n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2 til 6; og

m er et heltall fra 1 til 6, fortrinnsvis 1 til 3.

Eksempler på slike bakterieklorofyllderivater der Ri er OH er representert ved de her angitte forbindelsene 12 og 24-32.

I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel n, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; og Ri og R$er begge den

me -NHR 9-gruppen som definert ovenfor. Eksempler på slike bakterieklorofyllderivater er representert ved de her angitte forbindelsene 4-11 og 33-45.

I en ytterligere foretrukket utførelsesform, tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel n, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg, hvor Rg er Ci-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Ri er -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH og Re er en -NHR 9-gruppe som definert ovenfor. Eksempler på slike bakterieklorofyllderivater er representert ved de her angitte forbindelsene 48, 50, 55, 57, 59-64, 71 og 72.

I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel II, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg, hvor Rg er Ci-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Re er -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH og Ri er en -NHR 9-gruppe som definert ovenfor. Eksempler på slike bakterieklorofyllderivater er representert ved de her angitte forbindelsene 46, 47, 49, 51-54, 56, 58, 73 og 74.

I en ytterligere foretrukket utførelsesform tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen et bakterieklorofyllderivat med formel II, hvor M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg, hvor Rg er Ci-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Re er -NH-CH2-CH2-NRR'; og

Ri er valgt fra gruppen bestående av

-NH-(CH2)n-OH; -NH-CH(OH)-CH3;

-NH-(CH2)n-NR-(CH2)„-OH; og

glykosylamino;

hvor R og R' hver uavhengig er H, metyl eller etyl; og n er 2 eller 3.

Eksempler på slike bakterieklorofyllderivater er representert ved de her angitte forbindelsene 65-70 og 75

Forbindelsene 4, 6, 8 og 10 og lignende forbindelser ifølge oppfinnelsen som har en basisk gruppe kan bli preparert ved en fremgangsmåte som avbildet i skjema I, hvor Bpeid (forbindelse 2) eller Pd-Bpheid (forbindelse 3) er reagert med N-hydroksysuksinimid (NHS) i nærvær av DCC, og resulterende Bpheid-NHS eller Pd-Bpheid-NHS er reagert med et alkylendiamin med formelen NH2-(CH2)n-NH2.

Forbindelsene 5, 7, 9, 11 og 12 og lignende forbindelser ifølge oppfinnelsen som har en positivt ladet gruppe kan bli preparert ved en fremgangsmåte som avbildet i skjema I ved å reagere et 13<1>,17<3->aminoalkylamid beskrevet ovenfor med det korresponderende halidet R-Hal, f.eks. CH3I. Ved HPLC-rensing av produktet kan ulike salter bli oppnådd avhengig av bufferen benyttet for eluering. Sitratsalter kan på denne måten bli oppnådd ved eluering med sitratbuffer. Fosfatsalter kan bli oppnådd ved eluering med fosfatbuffer, acetatsalter kan bli oppnådd ved eluering med eddiksyre osv.

I en annen foretrukket utførelsesform, er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobak-terieklorin med formelen II, hvor M er Pd, R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -COCH3, og Ri og/eller R^er -NR9R 9, hvor R9er H og R'9er Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10alkyl, substituert ved en guanidino eller guanidiniumgruppe. I en mer foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er Ri og Re en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-C(=NH)-NH2eller -NH-(CH2)„-C(=NH)-N+(R)3A-, mer foretrukket -NH-(CH2)„-C(=NH)-N(CH3)3<+>A<->, hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6. Eksempler på slike forbindelser er 13<1>,17<3->guanidinoetylamidet og 13 1 ,17 3-trimetylguanidiniummety lami det her angitt hhv. forbindelser 14 og 14a. Guanidinderivatene kan bli oppnådd som avbildet i skjema I ved reaksjon av 13<1>,17<3->aminoalkylamidet med 1-amidinopyrazol, og guanidiniumderivatet ved ytterligere reaksjon med et metylhalid.

I en annen foretrukket utførelsesform er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobak-terieklorin med formelen II, hvor M er H eller Pd; R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -COCH3, og Ri og/eller R6er -NR9R 9, hvor R9er H og R9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10alkyl, substituert ved en sulfoniumgruppe. I en mer foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen, er Ri og R6en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-S<+>(R)2A", mer foretrukket -NH-(CH2)n- S(CH3)2<+>A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6. Et eksempel på slike forbindelser er 13 1 ,17 3-dimetylsulfoniumetylamidet her betegnet forbindelse 15. Dette sulfoniumderivatet kan bli oppnådd ved reaksjon av Bpheid eller Pd-Bpheid med S,S-dimetylcysteamindiacetat.

I en annen foretrukket utførelsesform er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobakterieklorin med formelen II, hvor M er H eller Pd, R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -COCH3og Ri og/eller Re er -NR9R 9, hvor R9er H og R9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10alkyl, substituert ved en fosfino eller fosfoniumgruppe. I en mer foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er Ri og R6en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-P(R)2, mer foretrukket -NH-(CH2)n-P(CH3)2, eller NH-(CH2)„-P<+>(R)3A<->, mer foretrukket -NH-(CH2)n-P<+>(CH3)3A<->, hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et motanion. Eksempler på slike forbindelser er 13<1>,17<3->dimetylfosfinoetylamidet, her betegnet forbindelse 18, og 13 1 ,17 3-trimetylfosfoniummetylamidet, her betegnet forbindelse 17. Fosfinoderivatet er oppnådd ved å reagere Bpheid-NHS med (2-aminoetyl)dimetylfosfin og fosfonium-derivatet kan bli oppnådd enten ved å reagere fosfinoderivatet med alkylhalid, f.eks.

o 13

metyljodid, eller ved å reagere et 13 ,17 -hydroksyetylamidderivat (forbindelse 16) med trimetylfosfin.

I en annen foretrukket utførelsesform er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobak-terieklorin med formelen II, hvor M er H eller Pd, R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -COCH3og Ri og/eller R<5er -NR9R 9, hvor R9er H og R9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10alkyl, substituert ved en arsino- eller arsoniumgruppe. I en mer foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er Ri og R5en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-As(R)2, mer ket -NH-(CH2)„-As(CH3)2, eller NH-(CH2)„-As<+>(R)3A", mer foretrukket -NH-(CH2)„-As<+>(CH3)3A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et motanion. Et eksempel er 13 1 ,17 3-trimetylarsoniummetylamidet, her betegnet forbindelse

o 13

19, som er oppnådd ved reaksjon av et 13 ,17 -hydroksyetylamidderivat (forbindelse 16) med trimetylarsin.

I en annen foretrukket utførelsesform er Bchl-derivatet ifølge oppfinnelsen et rodobak-terieklorin med formelen II, hvor M er 2H eller Pd, R 2 er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -C(CH3)=NR9og Ri og/eller Re er -NR^R 9, hvor R'9er H og R9og R"9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10al kyl, substituert ved minst en aminoendegruppe eller en positivt ladet gruppe, mer foretrukket en ammoniumendegruppe med formelen -N^WfR^A", hvor R, R' og R" fortrinnsvis er det samme C1-C6alkylet, fortrinnsvis metyl, og A" er et anion. I en mer foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen er R4er gruppe med formelen -C(CH3)=N-(CH2)„-NH2eller -C(CH3)=N-(CH2)„-N(R)3<+>A og Ri og R6er en gruppe med formelen -NH-(CH2)„-NH2eller NH-(CH2)n-N(R)3<+>A", mer foretrukket -NH-(CH2)n-N(CH3)3<+>A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6. Eksempler på slike forbindelser er de her angitte forbindelsene 20, 21, 22 og 23.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen, her også noen ganger referert til ved betegnelsene "pigmenter" og "sensibilisatorer", presenterer tilstrekkelig høy polaritet til å være vann-løselige og injisert i vannholdige løsninger uten tilsatte overflateaktive stoffer. Disse forbindelsene danner små aggregater i H20/PBS-løsning, men gjennomgår monomerise-ring i nærvær av serumalbuminet ved å bli adsorbert på proteinet (Mazor et al, 2003). Trafikkeringen av forbindelsene inn og ut av forskjellige celler er derfor avhengig av serumalbumin.

I en utførelsesform, er biodistribusjonen og farmakokinetikken for den foretrakkede forbindelsen 5 vist her og, basert på dette, er det antatt at dette og andre derivater ifølge oppfinnelsen forblir i sirkulasjonen, for en veldig kort tid. Videre, som vist i fig. 3C her, når forbindelse 5 en veldig høy PDT-effektivitet på mindre enn 5 minutter av inkubasjon med endotelcellekulturer. Derfor er derivatene ifølge oppfinnelsen gode sensibilisatorer for vaskulært målrettet PDT. Behandling av C6-gliomxenografter i mus, som vist her i fig. 6 og 7, demonstrerer at 5 er fotodynamisk aktiv og forårsaker tumoratryddelse ved 10 ganger lavere konsentrasjoner enn Pd-Bpeid (angitt i WO 00/33833) eller det negativt ladede Pd S^okso-lS-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-sulfoetyl)amid dikaliumsaltet (angitt i WO 2004/045492). Den foreslåtte protokollen med forbindelse 5 betraktet den korte fjerningstiden av medikamentet (fig. 4). Basert på deres høye fototoksisitet og selektive effekt på tumorvaskulaturen, kan disse forbindelsene bli benyttet for behandlingen av tumor så vel som andre vevsabnormiteter som avhenger av neovaskularisering, og også mot gram-positive og gram-negative bakterier.

I et annet aspekt, tilveiebringer derfor den foreliggende oppfinnelse en farmasøytisk sammensetning som omfatter et Bchl-derivat ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer.

I en foretrukket utførelsesform, omfatter den farmasøytiske sammensetningen et Bchl-derivat med formel II som bærer en kvaternær ammoniumgruppe, mest foretrukket forbindelse 5.

De nye Bchl-forbindelsene ifølge oppfinnelsen har lignende optiske absorbsjons- og fotofysikalske egenskaper som de negativt ladede Pd-Bchl'ene angitt i PCTÆL03/00973 (WO 2004/045492) og svært lignende dem av Pd-Bpheid (WO 00/33833) og, derfor, med en gang de oppholder seg i de behandlede vevet, er de forventet å være effektive fotodynamiske midler. De kan derfor også være nyttige som fotosensibiliserende midler og som terapeutiske og diagnostiske midler i mange indikasjoner.

I en utførelsesform, er forbindelsene ifølge oppfinnelsen nyttige i det onkologiske feltet for behandling ved PDT av precancertilstander og flere cancertyper slik som, men ikke begrenset til, melanom, prostata, hjerne, kolon, ovarie, bryst, brystveggstumorer som oppstår fra brystcancer, hud, lunge, øsofagus og blærecancer og andre hormonsensitive tumorer. Forbindelsene er nyttige for behandling av primære så vel som metastatiske tumorer.

I en annen utførelsesform er forbindelsene ifølge oppfinnelsen nyttige i ikke-onkologiske områder. I tillegg til den effektive destruksjonen av uønskede celler, slik som neoplasmer og tumorer, ved PDT, kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen også bli benyttet mot prolifererende celler og bakterier. Prolifererende celler og blodårer er den viktigste årsaken for arteriosklerose, artritt, psoriasis og makuladegenerasjon. I tillegg, kan forbindelsene bli benyttet i behandlingen av ikke-maligne tumorer, slik som godartet prostatahypertrofi.

I en foretrukket utførelsesform, kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli benyttet i PDT for behandling av kardiovaskulære sykdommer hovedsakelig for blodkarokklusjon og trombose i koronare arteriesykdommer, intimal hyperplasi, restenose og aterosklerotiske plaque. I en mer foretrukket utførelsesform, er forbindelsene ifølge oppfinnelsen benyttet for å forebygge eller redusere in-stent restenose hos et individ som lider av en kardiovaskulær sykdom som gjennomgikk koronar angiografi. I en annen foretrukket utfø-relsesform kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli benyttet i en fremgangsmåte for behandlingen av aterosklerose ved destruksjon av ateromatøse plaque i et sykt blodkar.

I en annen foretrukket utførelsesform, kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli benyttet i PDT for behandling av dermatologiske sykdommer, lidelser og tilstander slik som ak-ne, aknearrdannelse, psoriasis, fotsopp, vorter, aktinisk keratose og portvinsfarger (mis-dannelser av små blodkar som forbinder venene til arteriene (kapillærer) lokalisert i de øvre nivåene av huden).

I en annen foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli benyttet i PDT for behandling av øyesykdommer, lidelser og tilstander slik som korneal og koroidal neovaskularisering, og mer foretrukket, aldersrelatert makuladegenerasjon

(AMD).

I en ytterligere foretrukket utførelsesform kan forbindelsen ifølge oppfinnelsen bli benyttet i PDT for å drepe mikroorganismer som inkluderer virus, sopp og bakterier i prø-ver av levende vev. For eksempel kan de bli benyttet for sterilisering av biologiske produkter slik som blod og blodplasma for transfusjon, etterfulgt ved bestråling for destruksjon av infeksiøse midler. Som vist her, er forbindelse 5 aktiv mot gram-positive og gram-negative bakterier (fig. 8).

De nye vannløselige Bchl-derivatene i henhold til oppfinnelsen sensibiliserer endotel og/eller neoplastiske celler eller andre unormale vev og fører til deres destruksjon ved bestråling enten in vivo eller eks vivo ved å benytte lys av hensiktsmessig bølgelengde. Det er trodd at fotoaktiveringsenergien er overført til endogent oksygen og omdannes til singlettoksygen og/eller andre reaktive oksygenarter (ROS) slik som superoksid og hy-droksylradikaler, som er betraktet til å være ansvarlige for den cytotoksiske effekten. I tillegg fluorescerer de fotoaktiverte formene av noen av disse nye Bchl'ene, hvis fluorescens kan bistå i å lokalisere tumorer eller andre steder hvortil Bchl'ene er administrert.

På grunn av deres relative korte retensjonstid i sirkulasjonen, er forbindelsene ifølge oppfinnelsen spesielt egnet for vaskulært målrettet PDT (VTP), som beskrevet tidligere for Pd-Bphdi (Tookad®, et varenavn av Steba Biotech) ved oppfinnerne og ved andre (WO 03/094695; Borle et al., 2003) og ved oppfinnerne for bakterieklorofyllserin (Zilberstein et al., 2001). I VTP, er antitumoraktiviteten av bakterieklorofyllderivatet ikke avhengig av direkte fotoforgiftningen av individuelle endotelceller, men av den vaskulære vevsresponsen til VTP-krenkingen. Med Tookad har derfor oppfinnerne vist at fotosensibilisering av Tookad ved fiberoptikkguidet transkutan illuminasjon kort tid etter intravenøs injeksjon resulterer i oksidativ tumorvaskulær skade og utarming av oksygen, som fører til terminering av blodtilførsel og tumorutrydning.

I dette aspektet, er det forestilt seg ifølge oppfinneren å også benytte forbindelsene iføl-ge oppfinnelsen i kombinert hypertermi og PDT for behandling av tumorer som tidligere beskrevet (Kelleher et al., 2003).

De positive ladningene av forbindelsene ifølge oppfinnelsen forsterker signifikant absorpsjonen av de nye Bchl'ene til tumorendotelium som kjent i fagfeltet for andre positivt ladede medikamenter som er benyttet for terapi eller for avbildning av tumorer (Dellian et al., 2000; Hashizume et al, 2000; Campell et al., 2002). Den forsterkede affiniteten reduserer dramatisk konsentrasjonen nødvendig for induksjon av endotelcel-ledød ved svært korte tider av inkubasjon, som krevd for vaskulær målrettet PDT. Disse forbindelsene muliggjør derfor generering av reaktive oksygenarter (ROS) ved eksitasjon som er begrenset til de innvendige blodkarene, og forårsaker derfor selektiv respons av unormale blodkar slik som dem til stede i tumorer og aldersrelatert makuladegenerasjon.

Bchl-derivatene av den foreliggende oppfinnelsen har høy affinitet til serumalbumin. En signifikant prosentandel av forbindelsesmolekylene er ikke-kovalent bundet til serumalbumin i plasma. Etter rensing og før injeksjon, tillater de derfor å interagere med serumalbumin ved et forhold på~1:1 i vannholdig løsning.

For fremstillingen av de farmasøytiske sammensetningene, kan Bchl'ene ifølge oppfinnelsen bli lyofilisert, f.eks. med mannitol, og det tørre pulveret er oppløst i saltoppløs-ning eller en hver annen farmasøytisk akseptabel vannholdig løsning for injeksjon i.v. til en pasient (i blodet, forbindelsen er så adsorbert til serumalbuminet) eller for påfø-ring til et prøve-mål in vitro. Fremstillingen av sammensetningene er utført ved teknik-ker godt kjent i fagfeltet, f.eks. som oppsummert i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Co., Easton, Pa, 1990.

For diagnostiske formål, kan Bchl-derivatene bli benyttet alene eller kan bli merket med en radioisotop eller annet detekterbart middel slik som paramagnetiske metaller, som kjent i fagfeltet. I en utførelsesform, er Bchl-derivatet radioaktivt merket ved standard prosedyrer, f.eks. ved å benytte<67>Ga,<ni>In,20<1>T1, "mTc, og er administrert til pasien ten, fortrinnsvis ved i.v. injeksjon. Stedet av canceren kan bli avbildet ved standard prosedyrer, i løpet av et bestemt tidsintervall etter administrasjonen.

Mengden av Bchl-derivat som skal bli administrert for PDT-terapi, vil bli etablert ved den øvede legen i henhold til erfaringen akkumulert med andre Bchl-derivater benyttet i PDT, og vil variere avhengig av valget av derivatet benyttet som aktiv ingrediens, tilstanden som skal bli behandlet, måten for administrasjon, alderen og tilstanden til pasienten, og bedømmelsen av legen.

Bølgelengden for det bestrålende lyset er fortrinnsvis valgt for å passe til den maksimale absorbansen av Bchl-fotosensibilisatoren. Den egnede bølgelengden for enhver av forbindelsene kan enkelt bli bestemt fra dets absorpsjonsspektrum. I en foretrukket utførel-sesform, er en sterk lyskilde benyttet, mer foretrukket laseres ved 720-790 nm.

Også betraktet ved den foreliggende oppfinnelse er konjugering av proteiner slik som serumalbumin, rekombinant serumalbumin som inkluderer humant serumalbumin og kimere strukturer av humant serumalbumin (som beskrevet i Tuan et al., 2002), hormo-ner, vekstfaktorer og deres derivater, antistoffer, peptider som binder spesifikt til målret-tede cellers reseptorer, spesielt endotelcellereseptorer og næringsstoffer, f.eks. tyrosin, til Bchl-halvdelen, med formålet av å øke deres retensjonstider i tumor og behandlings-steder. Å ha den maksimale optiske absorpsjonen av Bchl-derivatene i det nære infrarø-de tillater for en større dybde av penetrering, mens det beholder ubikviteten av det naturlige systemet.

Erstatning av Mg-ionet ved andre metallioner er forventet til å optimalisere den indre og metabolske stabiliteten av Bchl-halvdelen og dets intersystemkryssing til den eksiterte trippeltilstanden, som derfor også utvider muligheter for nye diagnostiske prosedyrer.

Kombinasjonen av positivt ladede perifere grupper og/eller neoendoteliumspesifikke antistoffer og/eller peptider som har høy affinitet for neoendotelceller, vil fortrinnsvis målrette Bchl-halvdelene til tumoren eller behandlingsstedet. Som et resultat, er konsentrasjonen av fotosensibilisatoren i den vaskulære avdelingen av det maligne vevet forventet til å øke dramatisk relativt til dets konsentrasjon i det normale vevet, hvor celler er mer dispergert, som derfor sikrer amplifisering av PDT-effekten til tumorstedet. Dette muliggjør effektiv anvendelse av lysdoser, lavere enn den skadende terskelverdien for det normale vevet, som derfor reduserer behovet for romlig veldefinert bestråling.

I en mest foretrukket utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er målet for behandling med sensibilisatorene ifølge oppfinnelsen unormale blodkar, spesielt blodkar av solide tumorer, aldersrelatert makuladegenerasjon, restenose, akutt inflammasjon eller aterosklerose (Dougherty og Levy, 2003), på grunn av den iboende forskjellen av sensitivitet av normale og unormale blodkar til de foreslåtte PDT-protokollene beskrevet her.

Bchl-derivatene ifølge oppfinnelsen kan videre bli benyttet i fotodynamisk terapi som en adjuvant til en annen nåværende terapi benyttet for behandlingen av en sykdom, li-delse eller tilstand, for å gjøre den mer effektiv. For eksempel kan de bli benyttet intra-operativt i kombinasjon med kirurgi, for å hjelpe og hindre tilbakefallet av cancer på store overflateområder slik som pleura (kledning av lungen) og peritoneum (kledning av abdomen), alminnelige steder for spredning for noen typer av cancer, i intraoperativ behandling av tilbakefallende hode- og halskarcinomer, eller etter femoral arterieangio-plasi for å hindre restenose. Forbindelsene kan også bli benyttet i intraoperativ PDT-tumordiagnose, f.eks. av hjernetumorer.

En annen mulighet i henhold til oppfinnelsen er å benytte forbindelsene ifølge oppfinnelsen i PDT av store solide tumorer ved mellomliggende terapi, en teknikk som invol-verer å mate fiberoptikk direkte inn i tumorer ved å benytte nåler guidet ved computer-tomografi (CT). Dette kan være spesielt nyttig i områder som krever omfattende kirurgi slik som i hode- og halstumorer.

Mengden av forbindelse som skal bli administrert og ruten for administrasjon vil bli bestemt i henhold til typen av sykdom, tilstand av sykdommen, alder og helsetilstander av pasienten, men vil være mye lavere enn den nå benyttede doseringen av Photofrin II® (omkring 5-40 mg HpD/kg kroppsvekt) eller Tookad® (omkring 2-10 mg/kg kroppsvekt).

De farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan administreres til pasienten med standard prosedyrer benyttet i PDT, f.eks. systemisk, spesielt ved injeksjon, mer foretrukket ved intravenøs injeksjon, lokalt ved direkte injeksjon inn i den solide tumoren, eller topikalt for behandling av hudsykdommer og tilstander.

Oppfinnelsen vil nå bli illustrert ved de følgende ikke-begrensende eksemplene.

EKSEMPLER

For bekvemmelighet og bedre forståelse, er delen av eksemplene inndelt i to underav-snitt: (I) den kjemiske delen, som beskriver syntesen av de kationiske og basiske Bchl-derivatene og intermediatene 4-75, og (II) den biologiske delen, som beskriver den biologiske aktiviteten av de nye Bchl-derivatene.

I KJEMISK DEL

I eksemplene her, vil derivatene ifølge oppfinnelsen (4-75) og intermediatene (l-3<_>) bli presentert ved deres respektive arabiske nummere uthevet og understreket i henhold til den følgende listen av forbindelser og tilføyelsene. Formelen av noen av forbindelsene viser seg i skjemaene 1 og 2 og i tilføyelsen ved slutten av beskrivelsen, rett før referan-sene.

Liste av forbindelser

1. Bakterieklorofyll a (Bchl a)

2. Bakteriefeoforbid a (Bpheid)

3. Pd-bakteriefeoforbid a (Pd-Bpheid)

1 13 4. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid [eksempel 1] 1 13 3 5. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorfin 13 ,17 -di(2-N " trimetylammoniummetyl)amid disitratsalt [eksempel 2] 1 13 6. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(3-aminopropyl)amid [eksempel 3] 1 13 3 7. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(3-N - trimetylammoniumpropyl)amid disitratsalt [eksempel 4] 1 13 8. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(6-aminoheksyl)amid [eksempel 5] 1 13 3 9. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 -17 -di(6-N - trimetylammoniumheksyl)amid disitratsalt [eksempel 6] 1 13 10. Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid [eksempel 7] 1 13 3 11. Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-N - trimetylammoniumetyl)amid difosfatsalt [eksempel 8] 1 13 12. Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 -(2-N - trimetylammoniumetyl)amid kloridsalt [eksempel 9] 13. 0-[Pd-Bpheid]-[N -trimetylammonium-2-metyl]-serinmetylesterjodidsalt [eksempel 11] 14. Palladium S^okso-lS-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-guanidinoetyl)amid [eksempel 12] 1 13 14a. Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2- trimetylguanidiniumetyl)amid [eksempel 12] 15. Pd S^okso-lS-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-S<2->dimetylsulfoniumetyl)amid sitratsalt [eksempel 13] 1 13 16. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-hydroksyetyl)amid [eksempel 14] 17. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-P - trimetylfosfoniumetyl)amid disitratsalt [eksempel 15] 1 13 18. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 -17 -di(2-dimetylfosfinoetyl)amid [eksempel 16] 1 13 3 19. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-As - trimetylarsoniumetyl)amid disitratsalt [eksempel 17] 1 13 20. 3 -(aminoetylimino)-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid 21. Palladium 31-(aminoetylimino)-l 5-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1,173-di(2-aminoetyl)amid 22. 3^(trimetylammoniumetylimino)-! 5-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin

13 1 ,17 3-di(2-trimetylammoniumetyl)amid

23. Palladium S^trimetylammoniumetylimino)-! 5-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1,173-di(2-trimetylammoniumetyl)amid

Materialer og fremgangsmåter

(i) Bpheid, 2, ble preparert som tidligere beskrevet (Wasielewski og Svec, 1980).

(ii) Palladiumbakteriefeoforbid (Pd-Bpheid, 3J ble enten preparert som tidligere beskrevet (WO 00/33833) eller det ble oppnådd fra Steba Biotech Ltd. gjennom

Negma-Lerads, Frankrike.

(iii) Diaminer (etylendiamin, 1,3-propylendiamin, 1,6-heksylendiamin) og trimetylfosfin (IM løsning) ble innkjøpt fra Aldrich (USA); N-hydroksysuksinimid (NHS) ble innkjøpt fra Sigma (USA); 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (DCC) og 1-amidinopyrazolhydroklorid ble innkjøpt fra Fluka (Sveits); trimetylarsin ble inn-kjøpt fra Sterm. (2-aminoetyl)dimetylfosfin ble fremstilt i henhold til Suzuki et al.

(1994) og Kinoshita et al. (1981). S,S-dimetylcysteamindiacetat ble fremstilt i henhold til US 3,793,370. (iv) Kjemikalier og løsningsmidler av analytisk grad ble generelt benyttet med unntak når det ble utført HPLC, hvor HPLC-gradløsningsmidler ble benyttet. (v) TLC: silikaplater (Kieselgel-60, Merck, Tyskland); kloroform-metanol (4:1, v/v). (vi)<*>H nukleær magnetisk resonans (NMR) spektra ble registrert på Avance DPX 250-instrument (Bruker, Frankrike) og rapportert i ppm (5) nedfelt fra tetrametylsilan,

med gjenværende løsningsmiddeltopper som de interne standardene.

(vii) Ekstinksjonskoeffisientene av Pd-derivatene ble bestemt ved å korrelere Pd-konsentrasjonen (ved å benytte flammefotometri ved PdCb som en standard) med

den optiske tettheten av den undersøkte løsningen ved den bestemte bølgelengden. (viii) Elektrosprayioniserende massespektre (ESI-MS) ble registrert på en plattform LCZ-spektrometer (Micromass, England).

(ix) Induktivt-koblet plasmamassespektrometri (ICP-MS) ble utført for bestemmelse av Pd-konsentrasjoner ved å benytte et ELAN-6000-instrument (Perkin Eimer, CT).

(x) Optiske absorpsjons- (UV-VIS) spektre av forskjellige komplekser ble registrert med Genesis-2 (Milton Roy, England) og V-570 (JASCO, Japan) spektrofotomete-re.

(xi) HPLC ble utført ved å benytte et LC-900-instrument (JASCO, Japan) utstyrt med enUV-915 diodefeltdetektor.

KJEMISKE EKSEMPLER

Eksempel 1. 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 4)

Som avbildet i skjema I, for syntesen av forbindelse 4 (et rodobakterieklorinderivat hvor det sentrale metallatomet er fraværende), ble Bpheid 2 først aktivert ved C-17 karboksylsyren ved N-hydroksysuksinimid (NHS) som følger: 50 mg av Bpheid (forbindelse 2), 80 mg av NHS og 65 mg av 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (DCC) ble blandet i me-tylklorid over natt ved romtemperatur. Så ble løsningen fordampet under redusert trykk, den tørre konsentrasjonsresten ble oppløst i kloroform (ca. 50 ml), filtrert fra uløselig materiale, og etter fordamping av løsningsmidlet ble produktet, Bpheid-17 -(1-oksy-suksinimid), oppnådd. Omdannelsen var omkring 95% (TLC).

Åtte mg (8 mg) av Bpheid- 173-(l-oksy-suksinimid) ble oppløst i en blanding av kloroform og metanol (2:1, v:v), for å muliggjøre åpningen av den isocykliske ringen av Bpheid, og etylendiamin (1 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble behandlet med ar-

gon i 10 min. og omrørt ved romtemperatur over natt i mørke, for å muliggjøre binding av etylendiamin med både 13<1->og 173-posisj onene. Reaksjonsblandingen ble så fordampet til tørrhet under vakuum, gjenoppløst i kloroform (50 ml) og vasket en gang med vann (omkring 50 ml) for å fjerne spor av etylendiamin. Kloroformløsningen inneholdende produktet ble samlet og fordampet, som på denne måten oppnår forbindelsen 4.

ESI-MS (+): 713,89 (M+l), 357,56 ([M+2]/2).

Optisk absorpsjon i kloroform, X (relativ absorpsjon): 753 (1,00), 522 (0,28), 354 (1,05) nm.

Eksempel 2. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodo-bakterieklorin 13 ,17 -di(2-N<3->trimetylammoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse

Forbindelse 5 ble preparert fra forbindelse 4, som avbildet i skjema I. Diisopropyletylamin (DIEA) (27 ul) og metyljodid (30 ul, CH3I) ble tilsatt til en løsning av 4 (3 mg) i 2 ml kloroform. Reaksjonsblandingen ble behandlet med argon i 10 min. og omrørt over natt ved romtemperatur i mørke. Produktet ble ekstrahert to ganger med vann (omkring

50 ml). Det vannholdige laget ble samlet og fordampet og produktet ble renset ved HPLC (HPLC JASCO, Japan). Kolonne: C-8 250x20 (YMC, Japan). Løsningsmiddel A: 0,05M sitratbuffer, pH 4,0. Løsningsmiddel B: acetonitril. Elueringsprofilen av tittel-forbindelse 5 som disitratsaltet er beskrevet i tabell 1. Fluorescensemissjonsspektrumet av forbindelse 5 i metanol er vist i fig. 1.

ESI-MS (+): 990,12 (M-sitrat).

NMR i MeOH-d4: 9,33 (5-H, s), 8,92 (10-H, s), 8,75 (20-H, s), 5,35 og 4,95 (151-CH2, br), 4,0-4,4 (7,8,17,18-H, m), 3,80 (15<3->Me, br s), 3,52 (2<1->Me, s), 3,19 (^-Me, s), 3,09 (32-Me, s), 1,92-2,41, 1,60-1,75 (\ l\\ l2- CR2, m), 2,19 (&- CH. 2, m), 1,91 (7<1->Me, d), 1,61 (^-Me, d), 1,09 (8<2->Me, t), 3,62 (3,05 (CH2'er av NHCH2CH2NMe3), 3,39 og 3,02 (Me'er av NHCH2CH2NMe3).

Optisk absorpsjon i vann, X (relativ absorpsjon): 753 (1,00), 519 (0,30), 3,54 (1,25) nm. Oktanol/vann-delingsforhold er 40/60.

Eksempel 3. 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(3-aminopropyl)amid (forbindelse 6)

Forbindelse 6 ble oppnådd som beskrevet i eksempel 1 ovenfor ved å reagere Bpheid-17 -(1-oksy-suksinimid) med 1,3-propylendiamin.

ESI-MS (+): 813,86 (M+NH2CH2CH2CH2NH2), 739,74 (M).

Optisk absorpsjon i kloroform, X (relativ absorpsjon): 753 (1,00), 522 (0,29), 354 (1,22) nm.

1 13 3 Eksempel 4. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 , 17 -di(3-N - trimetylammoniumpropyl)amid disitratsalt (forbindelse 7)

Forbindelse 7 ble oppnådd fra forbindelse 6 ved reaksjon med DIEA og CH3I som beskrevet i eksempel 2 ovenfor.

ESI-MS (+): 413,62 ([M-2 x sitrat]/2). Oktanol/vannfordelingsforhold er 50/50.

Optisk absorpsjon i vann, X (relativ absorpsjon): 753 (1,00), 519 (0,29), 354 (1,21) nm.

Eksempel 5. 31-okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(6-aminoheksyl)amid (forbindelse 8)

Forbindelse 8 ble oppnådd som beskrevet i eksempel 1 ovenfor ved å reagere Bpheid-17<3->(l-oksy-suksinimid) med 1,6-heksylendiamin. Egenskaper av forbindelse 8: ESI-MS (+): 826,20 (M+2), 413,62 ([M+2]/2).

Eksempel 6. 31-okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(6-N<3->trimetylammoniumheksyl)amid disitratsalt (forbindelse 9)

Forbindelse 9 ble oppnådd fra forbindelse 8 ved reaksjon med DIEA og CH3I som beskrevet i eksempel 2 ovenfor.

ESI-MS (+): 455,89 ([M-2 x sitrat]/2). Oktanol/vannfordelingsforhold er 75/25.

Optisk absorpsjon i vann, X (relativ absorpsjon): 753 (1,00), 519 (0,30), 354 (1,31) nm.

Eksempel 7. Pd 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 10)

Forbindelse 10 ble oppnådd ved å reagere Pd-Bpheid-17<3->(l-oksy-suksinimid) med etylendiamin som beskrevet i eksempel 1 ovenfor.

ESI-MS (+): 817,59 (M+l), 409,26 ([M+2]/2)

Optisk absorpsjon i MeOH (relativ absorpsjon): 747 (1,00), 516 (0,13), 384 (0,41), 330 (0,50) nm.

1 13 Eksempel 8. Pd 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 , 17 - di(2-N<3->trimetylammoniumetyl)amid difosfatsalt (forbindelse 11)

Forbindelse 11 ble oppnådd fra forbindelse 10 ved reaksjon med DIEA og CH3I som beskrevet i eksempel 2 ovenfor, men ved å benytte fosfatbuffer (0,05M, pH 5,0) som løsningsmiddel A i HPLC-rensetrinnet.

ESI-MS (+): 451,38 ([M-2 x fosfat]/2).

Optisk absorpsjon i vann, X (relativ absorpsjon): 747 (1,00), 516 (0,13), 384 (0,41), 330 (0,50) nm.

Eksempel 9. Pd 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 -(2-N - trimetylammoniumetyl)amid kloridsalt (forbindelse 12)

Som avbildet i skjema I, ble forbindelse 3, Pd-Bpheid (10 mg) omrørt med 2-N - trimetylammoniumetylaminklorid hydrokloridsalt (15 mg) i DMF (2 ml) i nærvær av trietylamin (0,5 ml) under argonatmosfære ved romtemperatur over natt, som på denne måten åpner den isocykliske ringen av Bpheid-molekylet. Reaksjonsblandingen ble så fordampet til tørrhet, og produktet ble ekstrahert med acetonitril. Etter fordamping av løsningsmidlet, ble forbindelse 12 renset ved HPLC under forhold lignende rensingen av 5 i eksempel 2.

ESI-MS (+): 839 (M-Cl + Na-H), 817,82 (M-Cl) m/z.

Eksempel 10. 0-[Pd-Bpheid]-serinmetylester

Denne forbindelsen ble syntetisert i henhold til fremgangsmåten beskrevet i US 6,333,319 som følger: Forbindelse 3: Pd-Bpheid (50 mg), N-trityl-L-ser metylester (200 mg), DCC (16 mg, 0,08 mmol), og N-dimetylaminopyridin (DMAP) (10 mg) ble opp-løst i 20 ml diklormetan og omrørt over natt ved romtemperatur under inerte atmosfæ-riske (argon) forhold. Den resulterende esteren ble renset ved kolonnekromatografi på silika, med kloroform som elueringsmiddel. Den tritylbeskyttende gruppen ble fjernet ved å tilsette trifluoreddiksyre til kloroformløsningen (til en endelig konsentrasjon på 1% volum) i 1-3 min., reaksjonsblandingen ble vasket med vann, tørket over vannfri natriumsulfat og fordampet til tørrhet. Det avbeskyttede produktet ble renset på en silikakolonne som følger: først ble det viktigste biproduktet fjernet ved eluering med 5% aceton i kloroform, og så ble produktet, 0-[Pd-Bpheid]-Ser metylester, eluert med 2% metanol i kloroform.

'H-NMR i CDC13: 9,21 (s, 1H, H-a), 8,54 (s, 1H, H-p), 8,48 (s, 1H, H-8), 5,93 (s, 1H, H-10), 4,37 (m, 2H, H-3,8), 4,22 (m, 1H, Ser-CH), 4,10 (m, 2H, H-4,7), 3,88 (s, 3H, CH3-10b), 3,67 (s, 3H, Ser-OCH3), 3,63 (m, 2H, Ser-CH2), 3,48 (s, 3H, CH3-la), 3,39 (s, 3H, CH3-5a), 3,09 (s, 3H, CH3-2b), 2,48 (m, 1H, Ser-OH), 2,15-2,30 (m, 4H, CH2-7a,7b), 2,11 (m, 2H, CH2-4a), 1,78 (d, 3H, CH3-3a), 1,68 (d, 3H, CH3-8a), 1,08 (t, 3H, CH3-4b).

Eksempel 11. 0-[Pd-Bpheid]-[N<3->trimetylammonium-2-metyl]serin metylester-jodidsalt (forbindelse 13)

0-[Pd-Bpheid]-Ser metylesteren oppnådd i eksempel 10 ovenfor (4 mg) ble oppløst i kloroform (3 ml) og omrørt med metyljodid (35 ul) og DIEA (30 ul) over natt ved romtemperatur. Produktet 13 ble oppnådd ved å fordampe reaksjonsblandingen og rensing på silikakolonne med kloroform-metanol (3:1, v:v) som elueringsmiddel.

ESI-MS (+): 872,75 (M-I) m/z.

Eksempel 12. Pd. 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-guanidinoetyl)amid (forbindelse 14)

Som avbildet i skjema I, ble Pd S^okso-lS-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-aminoetyl)amid, forbindelse 10 (8 mg), blandet med DIEA (30 ul) og 1-amidinopyrazol (6 mg) i kloroform-metanol (1:1, 15 ml). Etter omrøring ved romtemperatur i 20 timer, ble reaksjonsblandingen fordampet, og tittelforbindelsen 14 ble renset ved HPLC under forhold lignende rensingen av forbindelse 4 i eksempel 1.

ESI-MS (+): 451,69 ([M-2 x sitrat]/2).

Ved reaksjon av forbindelse 14 med metyljodid, er det positivt ladede palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1 ,17 3-di(2-trimetylguanidiniumetyl)amidet ( 14a) oppnådd.

Eksempel 13. Pd 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-S<2->dimetylsulfoniumetyl)amid sitratsalt (forbindelse 15)

Pd-Bpheid, 3(12 mg) ble omrørt med S,S-dimetylcysteamindiacetat (20 mg) i DMF (2 ml), i nærvær av trietylamin (0,5 ml) og under argonatmosfære. Reaksjonsblandingen ble fordampet til tørrhet, og tittelforbindelsen 15 ble renset ved HPLC under forhold som beskrevet for forbindelse 5 i eksempel 2.

ESI-MS (+): 844,78 (M - sitrat + Na - H), 820,62 (M - sitrat) m/z.

1 13 Eksempel 14. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-hydroksyetyl)amid (forbindelse 16)

Bpheid-17<3->(l-oksy-suksinimid) (10 mg) oppnådd som beskrevet i eksempel 1, ble reagert med etanolamin (1 ml) i en kloroform-metanolblanding (6 ml). Reaksjonsblandingen ble behandlet med argon i 10 min. og omrørt ved romtemperatur over natt i mørke. Forbindelse 16 ble oppnådd etter rensing på silikakolonne og eluering med kloroform-metanol (10:1, vol/vol).

ESI-MS (+): 737,88 (M+Na), 715,42 (M+H) m/z.

Eksempel 15. 31-okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-P<3->trimetylfosfoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse 17)

Forbindelse 16 (8 mg) ble oppløst i trifluoreddiksyreanhydrid (1 ml) og blandingen ble fordampet til tørrhet etter 30 min. Det tørre produktet ble oppløst i en løsning av trimetylfosfin i tetrahydrofuran (0,5 mM, 2 ml) og blandingen ble omrørt under argonatmosfære ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble fordampet for å fjerne overskudd av trimetylfosfin, og tittelforbindelsen 17 ble oppnådd etter rensing ved HPLC, under forhold beskrevet for rensing av 5 i eksempel 2.

ESI-MS (+): 438,54 ([M-2 x sitrat]/2 + Na-H), 416,46 ([M-2 x sitrat]/2) m/z.

Eksempel 16. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di(2-dimetylfosfinoetyl)amid (forbindelse 18)

Bpheid-17 3 -(1-oksy-suksinimid) (10 mg), oppnåodd som beskrevet i eksempel 3, ble reagert med (2-aminoetyl)dimetylfosfin (200 mg) i kloroform (5 ml) ved romtemperatur over natt. Tittelforbindelsen 18 ble renset på silikakolonne og eluert med kloroform-aceton (15:1, vol/vol).

ESI-MS (+): 825,34 (M+Na), 803,88 (M+H) m/z.

Behandling av forbindelse 18 med metyljodid i nærvær av DIEA førte til et produkt som har kvaternær fosfoniumgruppe som, etter HPLC-rensing, ble funnet identisk med forbindelse 17 oppnådd i eksempel 15 ovenfor.

Eksempel 17. 31-okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-As<3->trimetylarsoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse 19)

Forbindelse 16 (8 mg) ble oppløst i trifluoreddiksyreanhydrid (1 ml) og blandingen ble fordampet til tørrhet i 30 min. Det tørre produktet ble oppløst i en løsning av trimetylarsin i tetrahydrofuran (0,5 mM oppløsning, 2 ml; fremstilt fra ren reagens, kat. nr. 33-3750, Strem), og blandingen ble omrørt under argonatmosfære ved 45°C i 3 dager. Deretter ble blandingen ble fordampet for å fjerne overskudd av trimetylarsin og tittel-produktet 19 ble renset ved HPLC under forhold som beskrevet for rensing av 5 i eksempel 2.

ESI-MS (+): 1133,94 ([M-sitrat]+Na-H), 460,40 ([M-2 x sitrat]/2) m/z.

Eksempel 18. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<3->trimetylammoniumetyl)amidacetat (salt) (forbindelse 24)

Kloridsaltet av denne forbindelsen er beskrevet i eksempel 9 (forbindelse 12).

For fremstillingen av tittelforbindelsen, ble 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol), 24 mg av (2-aminoetyl)trimetylammoniumklorid hydroklorid (137 umol), og natriumaskorbat (1 umol) omrørt ved romtemperatur i 1 ml av en vakuumavgasset blanding av 1:1 av trietylamin i DMF under argonatmosfære. Ved slutten ble reaksjonsblandingen fordampet i vakuum ved romtemperatur, 1 ml vann ble tilsatt og produktet ble lastet på en Sep-Pak RP-18 kolonne (Waters) vasket først med 20 ml vann, så med 10 ml av 10% løsning av acetonitril i vann, så eluert med 50% løsning av acetonitril i vann og fordampet. Alt arbeidet ble gjort i hanskeesken under nitrogenatmosfære for å unngå oksidering.

Formelstruktur: C^Hj^C^Pd + 1 CH3COO"

Molekylær vekt: 821,3 + 59,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS identitetsbekreftelse

Retensjonstid: 13,05 min.

M.S. (+): m/z = 821

UV-Vis-spektrum: 756 nm, 532 nm, 836 nm, 328 nm.

Eksempel 19. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 25) 20 mg Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (8,66 mmol) N,N-dimetyletylendiamin (95%), ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer under argonatmosfære. Ved slutten av reaksjonen, ble blandingen fortynnet med 3 ml vann og nøytralisert med iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: CsgHjo^C^Pd + 1 CH3COOH

Molekylær vekt: 803,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,46 min.

M.S. (+): m/z = 803

UV-Vis-spektrum (MeOH): 748 nm, 521 nm, 384 nm, 332 nm.

Eksempel 20. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1 -(3-N 2-dimetylaminopropyl)amid (forbindelse 26) 20 mg Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (7,88 mmol) 3-dimetylamino-l-propylamin (99%), ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer under argonatmosfære. Ved slutten av reaksjonen ble blandingen fortynnet med 5 ml vann og nøytralisert ved iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C4oH52N606Pd + 1 CH3COOH

Molekylær vekt: 817,30 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,26 min.

M.S. (+): m/z = 817

UV-Vis-spektrum (MeOH): 749 nm, 516 nm, 380 nm, 334 nm.

Eksempel 21. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 27) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (18,35 mmol) av dietylentriamin (99%) ble omrørt ved omrørt ved romtemperatur i 3 timer under argonatmosfære. Blandingen ble fortynnet med 5 ml vann og nøytralisert ved iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshas-tighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: CsgHsiNyC^Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 818,3 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse

Retensjonstid: 12,91 min.

M.S. (+): m/z = 818.

UV-Vis-spektrum (MeOH): 752 nm, 519 nm, 380 nm, 334 nm.

Eksempel 22. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 28) 20 mg (28 umol) Pd-Bpheid, 3, ble omrørt med 1 ml (6,7 mmol) tris-(2-aminoetyl)amin i 1 ml N-metyl-2-pyrrolidon ved romtemperatur under argonatmosfære i løpet av 90 minutter. Produktet ble renset ved injeksjon til HPLC, inneholdende en C-18-kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C4iH56N806Pd + 3 CH3COOH

Molekylær vekt: 861,4+ 180,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

M.S. (+): m/z = 861.

UV-Vis-spektrum (MeOH): 750 nm, 516 nm, 354 nm.

Eksempel 23. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 29) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (7,5 mmol) av N-(2-aminoetyl)morfolin (98%) ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer under argonatmosfære. Ved slutten av reaksjonen, ble blandingen fortynnet med 3 ml vann og nøytralisert med iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C^^^OyPd + 1 CH3COOH

Molekylær vekt: 845,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,68 min.

M.S. (+): m/z = 845.

UV-Vis-spektrum (MeOH): 749 nm, 516 nm, 383 nm, 331 nm.

Eksempel 24. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 30) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 0,5 ml (3,7 mmol) l-(2-aminoetyl)piperazin (97%), ble omrørt ved romtemperatur i 19 timer under argonatmosfære. Ved slutten av reaksjonen, ble blandingen fortynnet med 1 ml vann og nøytralisert med iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 30% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C^HssNyC^Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 844,3 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,37 min.

M.S. (+): m/z = 844

UV-Vis-spektrum (MeOH): 747 nm, 516 nm, 380 nm, 330 nm.

Eksempel 25. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-[(2-N<2->dietylaminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 31) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (2,66 mmol) av N,N-dietyldietylentriamin (98%), ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer under argonatmosfære. Ved slutten av reaksjonen, ble blandingen fortynnet med 1 ml vann og nøytralisert med iseddiksyre. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 30% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H59N706Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 874,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,77 min.

M.S. (+): m/z = 874

UV-Vis-spektrum (MeOH): 742 nm, 513 nm, 380 nm, 330 nm.

Eksempel 26. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(3-[(3-aminopropyl)amino]propyl)amid (forbindelse 32)

Pd-Bpheid 3 (30 mg, 420 umol) og bis(3-aminopropyl)amin (3 ml, 20,61 mmol) ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer under argonatmosfære. Etter fullføring av reaksjon (TLC) ble reaksjonsblandingen fortynnet med vann (100 ml), og løsningen ble ekstrahert med n-butanol (to ganger, med hhv. 100 og 50 ml) i en separasjonstrakt. Butanhol- dig ekstrakt ble vasket tre ganger med 50 ml vann. Faseseparasjonen ble forbedret ved å tilsette 10 ml deler av 25% vannholdig løsning av NaCl. Det butanolholdige ekstraktet ble tørket med MgSC>4 og fordampet under redusert trykk. Det faste stoffet ble igjen oppløst i 10% vannholdig eddiksyre (10 ml), og produktet ble presipitert ved å tilsette et tidobbelt volum av aceton. Presipitatet ble igjen oppløst i 0,5% vannholdig eddiksyre (13 ml) og lyofilisert.

Formelstruktur: C^HssNyC^Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 846,5 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,63 min.

M.S. (+): m/z = 846

UV-Vis-spektrum (MeOH): 752 nm, 519 nm, 380 nm, 334 nm.

Eksempel 27. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 3 13 , 17 -di(2-N -trimetylammoniumetyl)amid diacetatsalt (forbindelse 33) Difosfatsaltet av denne forbindelsen er beskrevet i eksempel 8 (forbindelse 11).

For fremstillingen av tittelforbindelsen ble 101 mg av Pd-Bpheid, 3 (141 umol) og 10 ml etylendiamin (148 mmol), omrørt ved romtemperatur i 2 timer under argonatmosfære. Deretter ble en løsning av 659 mg av koblingsreagens brom-tris-pyrrolidino-fosfoniumheksafluorfosfat (PyBroP) (1,4 mmol) i 2,3 ml kloroform introdusert til reaksjonen. Blandingen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Reaksjonen ble så avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved tilsetning av 5 ml vann. Blandingen ble fortynnet med 250 ml kloroform og vasket med 200 ml vann. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Om-trentlig 245 mg av forbindelse 10 ble oppnådd.

Forbindelse 10 (245 mg) ble oppløst i 90 ml kloroform. Reaksjonsblandingen ble avgas-set ved argon i omkring 5 min. før introduksjon av diisopropyletylamin (DIEA) (2,6 ml, 14,88 mmol). Etter 5 minutters omrøring ble CH3I (2 ml, 31,8 mmol) introdusert til reaksjonen. En sakte strøm av argon ble passert i ytterligere 2 min. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur i mørke over natt.

Etter denne tiden ble en moderat strøm av argon passert gjennom reaksjonsløsningen for å fjerne ureagert CH3I. Løsningsmidlet ble fordampet og det gjenværende produktet ble oppløst i 350 ml vann og vasket (4x100 ml) med etylacetat. Den vannholdige løsningen ble konsentrert ved fordampning av vann til et sluttvolum på 150 ml.

Produktet ble renset ved 50 ml porsjoner av vannholdig løsning på en Sep-Pack-kolonne, på forhånd vasket med 120 ml vann og 200 ml av 1% vannholdig eddiksyre, ved å eluere med 5 ml av acetonitril, inneholdende 2% eddiksyre. Acetonitrilløsninger av flere separasjoner ble kombinert, og løsningsmidlet ble fordampet. Det rensede produktet ble igjen oppløst i 3 ml vann og lyofilisert.

Formel: C45H66N805Pd + 2 CH3COO"

Molekylær vekt: 904,4 + 118,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 11,35 min.

M.S. (+): m/z = 904

UV-Vis-spektrum (MeOH): 747 nm, 514 nm, 382 nm, 330 nm.

Eksempel 28. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(3-aminopropyl)amid (forbindelse 34) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (23,7 mmol) av nylig destillert 1, 3-diaminopropan, ble omrørt ved romtemperatur i 75 min. under argonatmosfære. Ved dette tidspunktet ble en løsning av 138,8 mg av PyBroP (297 umol) i 200 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 30 min. ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble reaksjonen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved tilsetning av 1 ml vann. Blandingen ble fortynnet med 50 ml kloroform og vasket med 2x100 ml vann. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Det endelige produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C^Hs+NgOsPd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 845,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse

Retensjonstid: 10,81 min.

M.S. (+): m/z = 845

UV-Vis-spektrum (MeOH): 745 nm, 514 nm, 380 nm, 330 nm.

Eksempel 29. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(4-aminobutyl)amid (forbindelse 35) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (19,7 mmol) 1,4-diaminobutan, ble omrørt ved 30°C i 1 time under argonatmosfære. Ved dette tidspunktet ble en løsning av 133,4 mg av PyBroP (286 umol) i 200 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 60 min. ved 30°C under argonatmosfære. Så ble reaksjonsblandingen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Overskuddet av amin ble fordampet og produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H58N805Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 873,2 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 5,11 min.

M.S. (+): m/z = 873

UV-Vis-spektrum (MeOH): 748 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm.

Eksempel 30. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13\l7<3->di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 10) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (29,6 mmol) etylendiamin, ble omrørt ved romtemperatur i 40 min. under argonatmosfære. Etter dette tidspunktet ble en løsning av 136,8 mg PyBroP (293 umol) i 200 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Deretter ble reaksjonen avkjølt og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved tilsetning av 2 ml vann. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml kloroform og vasket to ganger med 100 ml vann. Løsningsmidlet ble fordampet og det endelige produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømnings-hastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: CsgHsoNgOsPd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 817,3 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 10,13 min.

M.S. (+): m/z = 817

UV-Vis-spektrum (MeOH): 750 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm.

Eksempel 31. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 36J 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1,5 ml (13 mmol) N,N-dimetyletylendiamin, ble omrørt ved romtemperatur i 1 time under argonatmosfære. Etter denne tiden, ble en løs-ning av 131 mg PyBroP (281 umol) i 170 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Reaksjonen ble avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket to ganger med 100 ml vann. Løsningsmidlet ble fordampet og det endelige produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømnings-hastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H58N805Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 873,2 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 6,56 min.

M.S. (+): m/z = 873

UV-Vis-spektrum (MeOH): 748 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm.

Eksempel 32. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(3-N<2->dimetylaminopropyl)amid (forbindelse 37) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1,5 ml (11,8 mmol) 3-dimetylamino-l-propylamin, ble omrørt ved romtemperatur i 1 time under argonatmosfære. Etter denne tiden ble en løsning av 130,6 mg av PyBroP (280 umol) i 170 jil kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble reaksjonen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 50 ml etylacetat og vasket to ganger med 100 ml vann. Vannlagene ble vasket med 100 ml etylacetat. Begge organiske lag ble sammenføyd og fordampet. Det endelige produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C45H62N805Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 901,2 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,9 min.

M.S. (+): m/z = 901.

UV-Vis-spektrum (MeOH): 746 nm, 516 nm, 384 nm, 332 nm.

Eksempel 33. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di-(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 38J 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (18,3 mmol) dietylentriamin, ble omrørt ved romtemperatur i 90 minutter under argonatmosfære. Etter denne tiden, ble en løsning av 130 mg PyBroP (279 umol) i 700 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 90 min. ved romtemperatur under argonatmosfære. Reaksjonen ble så avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved iseddiksyre og fortynnet med vann. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H6oNio05Pd + 4 CH3COOH

Molekylær vekt: 904,1 +240,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 1,95 min. (aggregat)

M.S. (+): m/z = 904

UV-Vis-spektrum (MeOH): 745 nm, 514 nm, 382 nm, 330 nm

1 13 Eksempel 34. 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 -di-(2-[(2-N<2->dietylaminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 39) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (5,33 mmol) N,N-dietyldietylentriamin, ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer under argonatmosfære. Etter denne tiden, ble en

løsning av 130 mg PyBroP (279 umol) i 500 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 2,5 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble reaksjonsblandingen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved iseddiksyre og fortynnet i vann.

Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: CsiHyeN^OsPd + 4 CH3COOH

Molekylær vekt: 1015,5+240,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 5,3-6,6 min.

M.S. (+): m/z = 1015

UV-Vis-spektrum (MeOH): 743 nm, 512 nm, 380 nm, 329 nm.

Eksempel 35. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 40) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 2 ml (15,2 mmol) N-(2-aminoetyl)morfolin, ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer under argonatmosfære. Etter denne tiden ble en løsning av 136 mg PyBroP (291 umol) i 700 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Reaksjonen ble så avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved iseddiksyre og fortynnet i vann. Blandingen ble oppløst i vann og vasket med kloroform, 3x100 ml. Det organiske løsnings-midlet ble fordampet og produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H62N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 958,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 11,6 min.

M.S. (+): m/z = 958

UV-Vis-spektrum (MeOH): 745 nm, 513 nm, 381 nm, 330 nm.

Eksempel 36. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 41) 20 mg av Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 1 ml (7,4 mmol) N-(2-aminoetyl)piperazin (97%) ble omrørt ved romtemperatur i 22 timer under argonatmosfære. Etter denne tiden ble en løsning av 130 mg PyBroP (279 umol) i 500 ul kloroform introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 3,5 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble blandingen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved iseddiksyre og fortynnet i vann. Produktet ble renset ved preparativ HPLC, C-18-kolonne, mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 40% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H64Nio05Pd + 4 CH3COOH

Molekylær vekt: 955,5 + 240,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 11,4 min.

M.S. (+): m/z = 955

UV-Vis-spektrum (MeOH): 744 nm, 513 nm, 380 nm, 329 nm.

Eksempel 37. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1 , 17 3-di-(3-[(3-aminopropyl)amino]propyl)amid (forbindelse 42)

Aktiv esterfremstilling - Vanligvis ble 25 mg Pd-Bpheid, 3 (35 umol) og 39,4 mg N-hydroksysuksinimid (HOSu eller NHS) (342 umol) oppløst i 1 ml tørr DMF under argon. 31 mg 1,3-dicykloheksylkarbodiimid (DCC) (150 umol) ble tilsatt i 500 ul av tørr DMF. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur over natt. DMF ble så fordampet og produktet ble renset ved Si02-væskekromatografi med 95% CHCl3:5% EtOH som elueringsmiddel. Løsningsmidlet ble så fordampet for å gi 55 mg av aktivert ester. Eksperimenter viser at det ikke er nødvendig å isolere og rense den aktive esteren. 20 mg av Pd-Bpheid-OSu (24,7 umol) ble omrørt ved romtemperatur med 1 ml nylig destillert bis(3-aminopropyl)amin i 3 timer under argonatmosfære. Reaksjonsblandingen ble så vakuumfordampet ved romtemperatur. Etter fordamping ble 1 ml vann tilsatt til konsentrasjonsresten og produktet ble renset ved preparativ HPLC på en C-18, mobil fase: A = 0,1% eddiksyre, pH = 7,2, i vann. B = 0,1% eddiksyre, pH = 7,2, i acetonitril. Gradient: 20% B (0-2 min.) til 90% B (20-22 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H68Nio05Pd + 4 CH3COOH

Molekylær vekt: 959,4 + 240,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,83 min.

M.S. (+): m/z = 959

UV-Vis-spektrum: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 330 nm, 268 nm.

Eksempel 38. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di([2-bis(2-aminoetyl)amino]eytl)amid (forbindelse

20 mg av Pd-Bpheid-OSu (24,7 umol) fremstilt i eksempel 38 ovenfor, ble omrørt i romtemperatur med 1 ml tris(2-aminoetyl)amin i 3 timer under argonatmosfære. Reaksjonsblandingen ble så vakuumfordampet ved romtemperatur. Så ble 1 ml vann tilsatt til konsentrasjonsresten og produktet ble renset ved preparativ HPLC med C-18-silikakolonne, mobil fase: A = 0,1% eddiksyre, pH 7,2, i vann. B = 0,1% eddiksyre, pH 7,2, i acetonitril. Gradient: 20% B (0-2 min.) til 90% B (20-22 min.). Strømningshastig-het: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H7oNi205Pd + 6 CH3C00H

Molekylær vekt: 989,4 + 360,3

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 114,15 min.

M.S. (+)=: m/z = 989.

UV-Vis-spektrum: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm.

Eksempel 39. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid (forbindelse 44) 1) 500 mg 2-klorpyridin (4,40 mmol) ble oppløst i 3,0 ml etylendiamin (44,0 mmol) og blandingen ble tilbakestrømmet i 6 timer ved 100°C. Ved slutten, ble overskuddet av etylendiamin fordampet i vakuum ved romtemperatur. Produktet N-(2-pyridyl)etylendiamin) ble renset på silikagel 60 (0,040-0,063 mm). Mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%.

TLC-analyse på ark silikagel 60 F254mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%. Produkt Rf =0,43. 2) 30 mg Pd-Bpheid-OSu (0,037 mmol, fremstilt i eksempel 38) ble tilsatt til en løsning av 110 mg av N-(2-pyridyl)etylendiamin (0,80 mmol) i tørr dimetylformamid. Løsning-en ble omrørt i løpet av 5 timer ved romtemperatur under argonatmosfære.

Produktet ble renset ved preparativ HPLC, ved å benytte en C-18-kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C49H56Nio05Pd + 4 CH3COOH

Molekylær vekt: 971,5 + 240,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,96 min.

M.S. (+): m/z = 971

UV-Vis-spektrum: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm.

Eksempel 40. 31-okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1>,17<3->di(2-N<2->dietylaminoetyl)amid (forbindelse 45<_>) 1) 30 mg av Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble omrørt i 300 ul av 2-(dietylamino)etylamin (2,11 mmol) ved romtemperatur i 3 timer under argonatmosfære. Aminolyseproduktet ble analysert ved HPLC-MS.

Retensjonstid: 15,49 min.

M.S. (+): m/z = 831.

2) En løsning av 40 mg PyBroP (0,086 mmol) i 200 ul DMF ble tilsatt til den forrige reaksjonsblandingen. Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer under argonatmosfære.

Formelstruktur: C47H66N805Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 931,5 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,81 min.

M.S. (+): m/z = 931

UV-Vis-spektrum: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm.

Eksempel 41. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-N<3->trimetylammoniumetyl)amid acetatsalt

(forbindelse 46)

1) Pd-Bpheid, 3 (100 mg, 0,140 mmol) ble oppløst i 1,0 ml N-metyl-2-pyrrolidon (NMP) og 3-amino-l,2-propandiol (405 mg, 4,45 mmol). Løsningen ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur under en argonatmosfære. Det oppnådde produktet (Pd-Bpheid-aminopropandioladdukt) ble renset på silikagel 60 (0,040-0,063 mm). Mobil fase: metanol 90% - ammoniakkløsning 10%.

TLC-analyse på ark silikagel 60 F254mobil fase: metanol 80%, ammoniakkløsning 20%. Produkt RF = 0,86.

Produktet ble analysert ved HPLC-MS.

Retensjonstid: 18,42 min.

M.S. (+): m/z = 805.

2) Pd-Bpheid-aminopropandioladduktet (37 mg, 0,052 mmol) ble oppløst i 1,5 ml NMP. Koblingsreagensen benzotriazol-N,N,N' ,N' -tetrametyluroniumheksafluorfosfat (HBTU)

(200 mg, 0,52 mmol), trietylamin (110 ul, 0,78 mmol) og (2-aminoetyl)trimetylammoniumklorid hydroklorid (46 mg, 0,26 mmol) ble tilsatt. Løs-ningen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC, ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H6iN707Pd + CH3COO"

Molekylær vekt: 892,4 + 59,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,34 min.

M.S. (+): m/z = 892

Eksempel 42. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-aminoetyl)amid (forbindelse 47) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet i eksempel 42 for forbindelse 46. 2) 37 mg av Pd-Bpheid-aminopropandioladduktet (0,052 mmol) ble oppløst i 300 ul NMP. 22 mg PyBroP (0,046 mmol), 10 ul etylendiamin (0,155 mmol) ble tilsatt. Løs-ningen ble omrørt i 1 time ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C4oH53N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 848,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,15 min.

M.S. (+): m/z = 848

Eksempel 43. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-aminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 48J

1) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble omrørt i 1 ml (15 mmol) etylendiamin, i løpet av 30 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Ved slutten, ble overskudd av etylendiamin fordampet i vakuum ved romtemperatur, og så ble løsningen frosset i flytende nitrogen og lyofilisert for å eliminere spor av etylendiamin. 2) Aminolyseproduktet ble reagert med 80 mg (0,17 mmol) av PyBroP oppløst i 100 n-1 kloroform og 80 mg (0,88 mmol) 3-amino-l,2-propandiol oppløst i 2 ml NMP ved romtemperatur, under argonatmosfære i løpet av 16 timer. Produktet ble renset ved HPLC, ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømnings-hastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C^HssNyOyPd + CH3COOH

Molekylær vekt: 848,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 8,43 min.

M.S. (+): m/z = 848.

Eksempel 44. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 49) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for forbindelse 46 i eksempel 42. 2) Pd-Bpheid aminopropandioladduktet (25 mg, 0,031 mmol) ble oppløst i 300 ul NMP. HBTU (120 mg, 0,32 mmol), N,N-dimetyletylendiamin (14 mg, 0,16 mmol) og kaliumkarbonat (88 mg) ble tilsatt. Bufferløsning ble tilsatt til pH = 7. Løsningen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastig-het: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 876,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,74 min.

M.S. (+): m/z = 876

Eksempel 45. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 50) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med N,N-dimetyletylendiamin og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for forbindelse 25 i eksempel 20. 2) Aminolyseproduktet ble reagert med 80 mg (0,17 mmol) PyBroP oppløst i 100 ul kloroform og 80 mg (0,88 mmol) 3-amino-l,2-propandiol oppløst i 2 ml NMP ved romtemperatur under argonatmosfære i løpet av 16 timer. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømnings-hastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 876,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,31 min.

M.S. (+): m/z = 876

Eksempel 46. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 5D 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) 12 mg av Pd-Bpheid aminopropandioladduktet (0,015 mmol) ble oppløst i 400 ul DMF. 34 mg HB TU (0,64 mmol), 21 ul trietylamin (0,15 mmol) og 16 ul dietylentriamin (0,15 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 5 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H58N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 891,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,42 min.

M.S. (+): m/z = 891

Eksempel 47. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-[(2-N<2->dietylaminoetyl)amino]etyl)amid

(forbindelse 52)

1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) 20 mg Pd-Bpheid aminopropandioladduktet (0,025 mmol) ble oppløst i 1,0 ml NMP. 94 mg HB TU (0,25 mmol), 52 ul trietylamin (0,375 mmol) og 23 ul N,N-dietyldietylentriamin (0,125 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C46H66N807Pd + 2 CH3COOH

Molekyær vekt: 947,5 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 11,70 min.

M.S. (+): m/z = 947

Eksempel 48. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 53)

1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) 50 mg av Pd-Bpheid aminopropandioladduktet (0,07 mmol) ble oppløst i 800 ul av tørr DMF. 80 mg av HOSu (0,70 mmol) og 216 mg DCC (1,04 mmol) ble tilsatt. Løs-ningen ble omrørt i 90 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved injeksjon til HPLC, ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min. 3) 7,0 mg av den Pd-Bpheid-aminopropandiol-OSu-aktiverte forbindelsen (7,77x10"<3>mmol) ble oppløst i 200 ul tørr DMF. 25 ul av tørr N-metyl-morfolin (0,23 mmol) og 30 ul N-(2-aminoetyl)morfolin (0,23 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 75 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C44H59N708Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 918,4 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse

Retensjonstid: 13,05 min.

M.S. (+): m/z = 918

Eksempel 49. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 54)

1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) 23 mg av Pd-Bpheid-aminopropandioladduktet (0,032 mmol) ble oppløst i 200 ul tørr DMF. 5,55 mg HOSu (0,048 mmol) og 10,85 mg DCC (0,048 mmol) ble tilsatt. Løs-ningen ble omrørt i 22 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. 3) Til reaksjonskaret av (2) ble det tilsatt 4 ul 1-(2-aminoetyl)piperazin (0,03 mmol) og 12 ul trietylamin (0,09 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 4 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C44H6oN807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 917,4+120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,03 min.

M.S. (+): m/z = 917.

Eksempel 50. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 55)

1) Aminolyse av Pd-Bpheid med dietylentriamin ble utført som beskrevet for forbindelse 27 i eksempel 22. Produktet ble renset på en silikakolonne med en løpende løsning av 80% metanol og 20% ammoniakk. 2) Pd-Bpheid-aminolyseproduktet ble reagert med 80 mg (0,17 mmol) PyBroP oppløst i 100 ul kloroform og 80 mg (0,88 mmol) 3-amino-l,2-propandiol oppløst i 2 ml NMP ved romtemperatur, under argonatmosfære i løpet av 16 timer. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H58N807Pd + 2 CH3C00H

Molekylær vekt: 890 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 11,90 min.

M.S. (+): m/z = 890.

Eksempel 51. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid (forbindelse 56) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) 19 mg av Pd-Bpheid-aminolyseproduktet (0,024 mmol) ble oppløst i 1,0 ml av tørr NMP. 97 mg av N-(2-pyridyl)etylendiamin (0,142 mmol), fremstilt som beskrevet i eksempel 40, 77 mg av koblingsreagensen 0-(benzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetrametyluroniumtetrafluorborat (TBTU) (0,24 mmol) og 50 ul trietylamin (0,36 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 90 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C45H56N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 925,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,38 min.

M.S. (+): m/z = 925.

Eksempel 52. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 57) 1) N-(2-pyridyl)etylendiamin fremstilt som beskrevet i eksempel 40 ovenfor (200 mg), ble blandet med 40 mg Pd-Bpheid over natt ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min. 2) Pd-Bheid-2-(diaminoetyl)piperidinaminolyseproduktet (35 mg, 0,042 mmol) ble løst i 200 ul tørr DMF. 10 mg HOSu (0,086 mmol) og 22 mg DCC (0,105 mmol) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 5 timer ved romtemperatur under argonatmosfære.

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 18,91 min.

M.S. (+): m/z = 949.

2) 28 mg av den Pd-Bpheid-2-(diaminoetyl)-pyridin-OSu-aktiverte esteren (0,03 mmol) ble oppløst i 300 ul tørr dimetylformamid. 28 mg av 3-amino-l,2-propandiol (0,31 mmol) og 41 ul trietylamin ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 14 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C45H56N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 925,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,53 min.

M.S. (+): m/z = 925.

Eksempel 53. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,d-dihydroksypropyl)amid-17<3->([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 58) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for 46 i eksempel 42. 2) Alle løsningsmidler ble vakuumavgasset. Det rensede aminodiolet ble oppløst i 2 ml av NMP og 200 ul av DMSO. Til løsningen ble 100 mg (0,21 mmol) PyBroP i 200 ul kloroform, og 160 ul (1 mmol) flytende tris(2-etylamino)amin tilsatt. Forbindelsene ble omrørt under argon ved romtemperatur i løpet av 16 timer. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C44H63N907Pd + 3 CH3COOH

Molekylær vekt: 933,2 + 180,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 10,86 min.

M.S. (+): m/z = 933.

Eksempel 54. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 59)

1) 25 mg Pd-Bpeid, 3 (35 umol) og 39,4 mg HOSu (342 umol) ble oppløst i 1 ml tørr DMF under argonatmosfære. 31 mg DCC (150 umol) oppløst i 500 ul tørr DMF ble introdusert. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur over natt. DMF ble fordampet og produktet ble renset ved væskekromatografi ved å benytte SiC>2som en stasjonær fase og 95% CHCl3:5% EtOH som elueringsmiddel. Produktet ble mottatt i de første fire fraksjonene. Løsningsmidlet ble fordampet; 55 mg Pd-Bpheid-OSu ble mottatt. 2) 25 mg av det tidligere produktet, Pd-Bpheid-OSu, (30 umol), ble oppløst i 1 ml tørr DMF. Til denne løsningen ble 13 N,N-diisopropyletylamin (DIPEA) (74 umol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt under argonatmosfære i et par minutter. 3-amino-1,2-propandiol (97 ul, 37 umol) i 1 ml DMF ble tilsatt til reaksjonskaret. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur under inert atmosfære i 5 timer. Ikke noe aminolysepro-dukt ble detektert. 3) 200 ml (1,28 mmol) tris(aminoetyl)amin ble tilsatt til reaksjonskaret av (2). Argon ble passert gjennom reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt over natt ved romtemperatur. Produktet ble renset ved fortynning av reaksjonsblandingen ble 30 ml vann og vas-king av det vannholdige laget med 30 ml n-butanol. Det organiske laget ble deretter vasket med 3x30 ml vann. Butanolen ble fordampet og produktet ble oppløst i 1,5 ml surt vann og 300 ul acetonitril. Løsningen ble fordelt i alikvoter og lyofilisert.

Formelstruktur: C44H63N907Pd + 3 CH3COOH

Molekylær vekt: 933,2 + 180,2

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,46 min.

M.S. (+): m/z = 934.

Eksempel 55. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(3-aminopropyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 60) 1) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble omrørt i 1 ml (11,8 mmol) 1,3-diaminopropan, i løpet av 60 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Overskudd av amin ble fordampet ved sterkt vakuum i løpet av 16 timer. 2) Produktet ble oppløst i 1 ml DMSO og lml DMF, og omrørt i en løsning av 100 mg (0,21 mmol) PyBroP i 500 ul kloroform og 100 m 3-amino-l,2-propandiol ved romtemperatur under argonatmosfære, i løpet av 16 timer. Rensing av produktet ble gjort ved presipitering med vann etterfulgt av HPLC-rensing ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C^HssNyOyPd + CH3COOH

Molekylær vekt: 861,2 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,06.

M.S. (+): m/z = 861.

Eksempel 56. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(4-aminobutyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 61) 1) 20 mg Pd-Bpheid, 3 (28 umol) og 0,5 ml (4,9 mmol) 1,4-diaminobutan (99%) ble omrørt ved 30°C i 4 timer under argonatmosfære ved hvilket tidspunkt 1 ml vann ble tilsatt til reaksjonskaret og omrørt i et par minutter. Løsningen ble så lyofilisert. 2) Pd-Bpheid-aminolyseproduktet ble oppløst i 2 ml tørr DMF. En løsning av 414 mg (4,4 mmol) 3-amino-l,2-propandiol (97%) i 400 ul tørr DMF ble tilsatt til blandingen. Reaksjonskaret ble spylt med argon. 130 mg PyBroP (279 umol) i 500 ul kloroform ble introdusert til reaksjonskaret. Blandingen ble omrørt i nye 90 min. ved 30°C under argonatmosfære. Så ble reaksjonen avkjølt, og overskudd av koblingsreagens ble ødelagt ved å tilsette 1 ml vann. Blandingen ble fortynnet med 100 ml vann. Produktet ble ekstrahert fire ganger med kloroform, 100 ml og 3 x 50 ml. De organiske vaskeløsningene ble kombinert og fordampet. Produktet ble renset ved HPLC ved bruk av RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 876,4 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,32 min.

M.S. (+): m/z = 876

Eksempel 57. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2>dietylaminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 62) 1) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (0,042 mmol) ble oppløst i 300 ul 2-(dietylaminoetyl)amin (2,11 mmol). Løsningen ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Overskudd av 2-(dietylaminoetyl)amin ble fordampet i sterkt vakuum.

Produktet ble analysert ved HPLC-MS.

Retensjonstid: 15,49 min.

M.S. (+): m/z = 831

2) 27 mg 3-amino-l,2-propandiol (0,3 mol), 28 mg PyBroP (0,06 mmol) og 300 ul DMF ble tilsatt til løsningen i avsnitt 1. Løsningen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C44H6iN707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 906,4 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,93 min.

M.S. (+): m/z = 904.

Eksempel 58. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N-etylaminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 63) 1) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble omrørt i 1 ml (9,5 mmol) N-etyletylendiamin i 60 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble overskuddet av amin fordampet i sterkt vakuum. 2) Produktet ble så oppløst i 800 ul DMF og omrørt med en løsning av 70 mg (0,77 mmol) 3-amino-l,2-propandiol i 200 ul DMF og en løsning av 70 mg (0,15 mmol) PyBroP i 200 ul kloroform, ved romtemperatur under argonatmosfære i 2 timer. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 875,2 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,16 min.

M.S. (+): m/z = 875

Eksempel 59. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(3-N-metylaminopropyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 64) 1) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble omrørt i 1 ml (9,6 mmol) N-metyl-1,3-propandiamin, i 120 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Så ble overskuddet av amin fordampet i sterkt vakuum. 2) Produktet ble så oppløst i 800 ul DMF og omrørt med en løsning av 80 mg (0,88 mmol) 3-amino-l,2-propandiol i 200 ul DMF og en løsning av 75 mg (0,16 mmol) PyBroP i 200 ul kloroform, ved romtemperatur under argonatmosfære i løpet av 2 timer. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N707Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 875,2 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 12,93 min.

M.S. (+): m/z = 875.

Eksempel 60. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->(2-hydroksyetyl)amid (forbindelse 65) 1) 300 mg Pd-Bpheid, 3 (420 umol), 655 mg PyBroP (1260 umol), 30,78 ul etanolamin (504 ul), 0,6 ml DMF og 0,1 ml trietylamin ble omrørt ved romtemperatur i 1 time under argonatmosfære. Reaksjonsblandingen ble fordampet i vakuum, produktet ble renset ved vannkloroformekstraksjon. Kloroformfasen inneholdende produktet ble tørket over vannfri MgSC>4, filtrert og fordampet. 2) Etter fordamping, ble 460 ul N,N-dimetyletylendiamin (4,2 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time under argonatmosfære. Produktet ble renset ved vann- og n-butanolekstraksjon. n-butanolfasen inneholdende produktet ble tørket (MgSC>4, vannfri), filtrert og fordampet.

Formelstruktur: C4iH55N706Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 848,2 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

M.S. (+): m/z (mest rikelig) = 846

UV-Vis-spektrum: 750 nm, 516 nm, 386 nm, 332 nm, 264 nm.

Eksempel 61. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 131-(2-N2-dimetylaminoetyl)amid-173-(3-hydroksypropyl)amid (forbindelse 60J 1) Aminolyse av Pd-Bpheid ble utført som beskrevet for forbindelse 25 i eksempel 20. 2) Hele produktet oppnådd i trinn 1 ovenfor ble så oppløst i 6 ml DMF. 1 ml av løsning-en ble reagert med 20 ul (0,26 mmol) 3-amino-l-propanol, 70 mg (0,15 mmol) PyBroP og 20 ul (0,18 mmol) N-metyl-morfolin. Blandingen ble omrørt i 90 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N706Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 859,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,38 min.

M.S. (+): m/z = 859.

Eksempel 62. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->(2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 67) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid ble utført som beskrevet for forbindelse 25 i eksempel 20. 2) Produktet ble så oppløst i 6 ml DMF. 1 ml av løsningen ble reagert med 20 ul (0,25 mmol) l-amino-2-propanol, 70 mg (0,15 mmol) PyBroP og 20 ul (0,18 mmol) N-metyl-morfolin. Blandingen ble omrørt i 90 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C42H57N706Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 859,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 14,82 min.

M.S. (+): m/z = 859.

Eksempel 63. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->((R)-2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 68) Syntesen av forbindelse 68 var identisk til den av forbindelse 67 beskrevet i eksempel 63 ovenfor, ved å benytte den R-optiske isomeren av aminoalkoholen.

Formelstruktur: C42H57N706Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 859,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,52 min.

M.S. (+): m/z = 859.

Eksempel 64. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->((S)-2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 69) Syntesen av forbindelse 68 var identisk til den av forbindelse 67 beskrevet i eksempel 63 ovenfor, ved å benytte den S-optiske isomeren av aminoalkoholen.

Formelstruktur: C42H57N706Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 859,3 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,50 min.

M.S. (+): m/z = 859.

Eksempel 65. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 131-(2-N2-dimetylaminoetyl)amid-173-(2-(2-hydroksyetylamino)etyl)amid (forbindelse 70) 1) Aminolyse av Pd-Bpheid ble utført som beskrevet for forbindelse 25 i eksempel 20. 2) Produktet ble så oppløst i 6 ml DMF. 1 ml av løsningen ble reagert med N-(2-hydroksyetyl)-etylendiamin (20 ul, 0,17 mmol), 70 mg (0,15 mmol) PyBroP og 20 ul

(0,18 mmol) N-metyl-morfolin. Blandingen ble omrørt i 90 minutter ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C43H6oN806Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 889,2 0 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,34 min.

M.S. (+): m/z = 888.

Eksempel 66. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 -(3-N-(2'-pyridyl)aminopropyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 71) 1) 500 mg 2-klorpyridin (8,73 mmol) ble oppløst i 3,6 ml 1,3-diaminopropan (44 mmol). lOOmg kaliumkarbonat og 200 ul DMF ble tilsatt. Forbindelsen ble tilbake-strømmet i 22 timer ved 102°C. Produktet N-(2-pyridyl)propylendiamin ble renset på silikagel 60 (0,040-0,063 mm). Mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%. Produktet var ufarget olje. TLC-analyse på ark silikagel 60 F254mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%. Produkt Rf = 0,38. 2) 20 mg Pd-Bpheid, 3 (28 umol) ble oppløst i 300 ul av NMP og 125 mg (0,83 mmol) N-(2-pyridyl)propylendiamin ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 23 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Aminolyseproduktet ble renset på silikagael 60 (0,040-0,063 mm). Mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%.

Produktet ble analysert ved HPLC-MS.

Retensjonstid: 8,02 min.

M.S. (+): m/z = 864.

3) Pd-Bpheid-aminolyseproduktet (30 mg, 0,023 mmol) ble oppløst i 400 ul NMP. 90 mg HB TU (0,24 mmol), 50 ul trietylamin (0,35 mmol) og 20 mg 3-amino-l,2-propandiol (0,23 mmol) ble tilsatt. Oppløsningen ble omrørt i 4 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C46H58N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 941,4+120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 18,89 min.

M.S. (+): m/z = 941.

Eksempel 67. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(4-N-(2'-pyridyl)aminobutyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 72)

1) 0,835 ml 2-klorpyridin (8,8 mmol) ble oppløst i 8,8 ml 1,4-diaminobutan (88 mmol). Blandingen ble tilbakestrømmet i 4 timer ved 128°C. Produktet ble renset på silikagel 60 (0,040-0,063 mm). Mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløsning 10%. Produktet var en fargeløs olje. TLC-ark silikagel 60 F254. Mobil fase: metanol 90%, ammoniakkløs-ning 10%. Butyldiamin: Rf = 0, produkt Rf = 0,42. 2) 30 mg Pd-Bpheid, 3 (42 umol) ble oppløst i 700 ul NMP og 80 mg (0,48 mmol) N-(2-pyridyl)butylendiamin ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 15 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 22,36 min.

M.S. (+): m/z = 877.

3) 17 mg av Pd-Bpheid-aminolyseproduktet (0,019 mmol) ble oppløst i 400 ul NMP og 100 ul vann. 9 mg HOSu (0,077 mmol), 17 mg N-(3-dimetylaminopropyl)-N-etylkarbodiimid (EDC) (0,87 mmol) og 5 ul ammoniakkløsning ble tilsatt. Etter 16 timer ble 200 mg 3-amino-l,2-propandiol (2,2 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved preparativ HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H6oN807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 949,5 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,79 min.

M.S. (+): m/z = 949

Eksempel 68. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(3-N-(2'-pyridyl)aminopropyl)amid (forbindelse 73)

1) Aminolyse med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for forbindelse 46 i eksempel 42. 2) 32 mg Pd-Bpheid-aminolyseproduktet (0,04 mmol) ble oppløst i 800 ul NMP. 152 mg HB TU (0,4 mmol), 56^.1 trietylamin og 60 mg N-(2-pyridyl)propylendiamin (fremstilt som beskrevet ovenfor for forbindelse 72) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 16 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastighet: 4 ml/min.

Formelstruktur: C46H58N807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 939,4+ 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,28 min.

M.S. (+): m/z = 939.

Eksempel 69. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2,3-dihydroksypropyl)amid-17<3->(4-N-(2'-pyridyl)aminobutyl)amid (forbindelse 74) 1) Aminolyse med 3-amino-l,2-propandiol og påfølgende rensing ble utført som beskrevet for forbindelse 46 i eksempel 42. 2) 25 mg av Pd-Bpheid-aminolyseproduktet (0,031 mmol) ble oppløst i 600 ul NMP. 120 mg HBTU (0,31 mmol), 45 ul trietylamin og 50 mg N-(2-pyridyl)butylendiamin (fremstilt som beskrevet ovenfor for forbindelse 72) ble tilsatt. Løsningen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur under argonatmosfære. Produktet ble renset ved HPLC ved å benytte en RP-18 kolonne. Mobil fase: A = 0,2% eddiksyre i vann. B = 0,2% eddiksyre i acetonitril. Gradient: 20% B (0-6 min.) til 95% B (30-33 min.). Strømningshastig-het: 4 ml/min.

Formelstruktur: C47H6oN807Pd + 2 CH3COOH

Molekylær vekt: 953,5 + 120,1

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 15,43 min.

M.S. (+): m/z = 953.

Eksempel 70. Palladium 3<1->okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13<1->(2-N<2->dimetylaminoetyl)amid-17<3->(glykosyl)amid (forbindelse 75)

1) 300 mg Pd-Bpheid, 3 (420 umol) og 476 mg HOSu (4,14 mmol) ble oppløst i 4 ml tørr DMF under argonatmosfære. 435,5 mg DCC (2,1 mmol) oppløst i 2 ml tørr DMF ble introdusert. Reaksjonen ble omrørt ved romtemperatur over natt. TLC (92% CHC13:8% MeOH) vist ikke noe ureagert Pd-Bpheid. 2) 926 mg glykosylamin hydroklorid, 98%, (4,28 mmol) og 2190 ul DIPEA (12,6 mmol) ble introdusert til det tidligere reaksjonskaret inneholdende den aktive esteren, Pd-Bpheid-OSu. Reaksjonen ble omrørt under argonatmosfære ved romtemperatur i 24 timer. TLC (8% CHCl3:92% MeOH) viste ikke noe ureagert aktiv ester gjenværende i reaksjonskaret. 3) 3 ml N,N-dimetyletylendiamin (26 mmol) ble tilsatt til reaksjonskaret av trinn (2) og omrørt over natt ved romtemperatur under argon. HPLC-MS viste at det ønskede produktet og dets Schiff-base er hovedproduktene. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med 100 ml vann og vasket med 4x50 ml n-butanol. Det var nødvendig å tilsette til hver vaskeløsning et lite volum av vannholdig mettet NaCl for å oppnå separasjon. De organiske lagene ble kombinert og vasket med 50 ml vann. Butanolen ble så fordampet og konsentrasjonsrest av Schiff-base ble hydrolysert ved å benytte fortynnet eddiksyre. Det fordampede produktet ble fortynnet i 60 ml vann inneholdende 1% eddiksyre. Den sure løsningen ble omrørt i 1 time under argonatmosfære ved romtemperatur. HPLC-MS viste at Schiff-basen var fullstendig ødelagt.

Formelstruktur: C45H6iN709Pd + CH3COOH

Molekylær vekt: 948,4 + 60,0

Produktet ble analysert ved HPLC og MS-identitetsbekreftelse.

Retensjonstid: 13,81 min.

M.S. (+): m/z = 948.

Eksempel 71. Interaksjoner av den dikationiske forbindelsen 5 med humant serumalbumin (HSA)

Den fotodynamiske aktiviteten av de forskjellige Bchl-derivatene er kritisk avhengig av både biotilgjengeligheten av deres monomere (dimere) former og transcellulær trafikke-ring, kan bli betraktelig modulert ved binding til serumalbumin.

En løsning av 5 i PBS (3,2xlO_<4>M, 100 ul) ble blandet med ulike mengder av humant serumalbumin (0,1, 0,5, 1, 2 og 5 mg). Aggregering, ved høye konsentrasjoner av 5 i vannholdige løsninger, er reflektert ved splitting av den opprinnelige monomere toppen ved 747 nm til to nye topper ved 720 og 760 nm. Tilstanden av aggregering ble fulgt spektrofotometrisk over området av albuminkonsentrasjoner ved romtemperatur i en 0,1 mm kuvette. Absorbansidentitetsverdiene ved toppbølgelengdene ble tatt som en indi-kasjon for aggregering.

Tilsetning av albuminet forårsaket disaggregering av sensibilisatoren 5 i PBS (fig. 2). Absorpsjonsspektrene av løsningene inneholdende økende mengder av albumin lignet spektrumet av det monomere pigmentet 5 i metanol.

H. BIOLOGISK DEL

Materialer og fremgangsmåter

( i) Cellekultur. HV5-museendotelceller ble dyrket som monolag i Dulbecco's modifi-serte Eagle's medium (DMEM)/F12 inneholdende 25 mM HEPES, pH 7,4, 10% fetalt kalveserum (FCS), glutamin (2 mM), penicillin (0,06 mg/ml) og streptomycin (0,1 mg/ml) (heretter referert til som "dyrkningsmediumet"). Cellene ble dyrket ved 37°C i en 8% C02-fuktet atmosfære.

( a) Bakterielle kulturer. Bakterier av stammer St. albus og E. coli XL-1 ble dyrket i flytende LB-medium (E. coli i LB inneholdende 12,5 ug tetracyklin/ml) til en endelig tetthet av OD6oonm = 0,5-0,9 (1 OD = 8x10 o bakterie/ml). Bakterien ble spunnet ned (4000xg, 5 min.) og resuspendert i PBS.

( iii) Fremstilling av sensibilisatorer for in vitro- eksperimenter. Lagerløsninger av forbindelsene 5, 7, 9 og 11 ble fremstilt ved å løse opp de tørre forbindelsene direkte i dyrkningsmedium til de ønskede konsentrasjonene, før anvendelse.

( tv) Fototoksisitetstest.

( a) Celler. For å bestemme den fotodynamiske virkeevnen, ble celler dyrket i 96-brønners plater (40xl0<3>/brønn) og inkubert i mørke i dyrkningsmedium inneholdende økende konsentrasjoner av sensibilisatorer 5, 7, 9 og IL. for en periode på 1 min. til 8 timer. Ubundet sensibilisator ble fjernet ved å vaske cellene en gang med friskt dyrkningsmedium. Platene ble belyst ved romtemperatur, fra deres bunnside, i 10 min.

(650<X<800 nm, 12 J/cm<2>). Lyskilden var en 100W halogenlampe (Osram, Tyskland) utstyrt med en <650 nm avskjæring og et 4-cm vannfilter. Kulturene ble plassert i dyrkningsinkubatoren og celleoverlevelse ble bestemt 24 timer etter belysning, ved Neutral Red viabilitetstest. Celleoverlevelse ble beregnet som prosentandelen av fargen akkumulert i de ubehandlede kontrollene. Triplikate bestemmelser ble utført og representative eksperimenter er vist. Tre typer av kontroller ble benyttet: (i) lys kontroll: celler belyst i fravær av pigmenter; (ii) mørk kontroll: celler behandlet med pigmenter, men holdt i mørke; og (iii) ubehandlede celler som ble holdt i mørke.

( b) Bakterier. For å bestemme den fotodynamiske virkeevne, ble bakterier fortynnet til alikvoter på 300 ul inneholdende omkring IO<7>bakterier, og inkubert med økende konsentrasjoner av sensibilisator i plastikktestrør i mørke i 1 time ved romtemperatur, og så belyst ved 70 mW/cm i 15 min. Prøver av de behandlede bakteriekulturene ble deretter platet ved ulike konsentrasjoner (50-200 bakterier/plate) på LB-agar og dyrket i 24 timer ved 37°C for å bestemme bakterieoverlevelse ved kolonitelling. Triplikate bestemmelser ble utført og representative eksperimenter er vist.

( v) Dyr. Hanner av CDl-nakenmus (28-32 g) og Wistar hannrotter (250-300 g) ble holdt med fri tilgang til mat og vann i dyreavdelingen i henhold til retningslinjene til Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israel.

( vi) Anestesi. Mus ble anestesert ved i.p. injeksjon av 80 ul ketamin (100 mg/ml, Rho-ne-Merieux, Frankrike) og xylazin (2%, Vitamed, Israel) blanding (85:15, v:v). Rotter ble anestesert ved gass (2% av isofluran i 98% O2).

( vii) Tumorimplantering. Dyrkede C6 gliomcellemonolag ble skrapet i saltoppløsning, sentrifugert ved 250 g i 5 min., resuspendert i saltoppløsning og subkutant injisert (2x10<6>celler/mus) inn i ryggen av CDl-nakenmus. Tumorer nådde en behandlingsdia-meter på 6-8 mm i løpet av 2 uker. Musene ble avlivet (i henhold til retningslinjene til Weizmann Institute of Science) når tumorer nådde diameteren av >15 mm.

( vitt) Fremstilling av sensibilisatorer for injeksjon. Lagerløsninger av forbindelser 5 og 11 ble fremstilt før anvendelse ved å løse opp de tørre forbindelsene direkte i PBS til den ønskede konsentrasjonen for injeksjon.

( ix) Farmakokinetikk. Anesteserte Wistar-rotter (n = 3 pr. hvert tidspunkt) ble i. v. injisert med forbindelse 5 ifølge oppfinnelsen (0,6 mg/kg). Blodprøver (~100-200 ul) ble tatt ved 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 120, 360 og 480 min. etter injeksjon, overført og veid i på forhånd innveide 2 ml testrør inneholdende 10 ul heparin, og blandet forsiktig. Kontrollblodprøver ble samlet fra tre ubehandlede rotter og behandlet på samme måte. Testrørene inneholdende blodprøvene ble veid igjen for å kalkulere den eksakte prøve-massen. Blodprøvene ble så frosset i flytende nitrogen og lyofilisert. De lyofiliserte prøvene ble ekstrahert med metanol (1 ml hver), vortekset og sentrifugert. Supernatanten ble samlet og analysert ved fluorescensmålinger (spektrofluorimeter SLM-8000, Aminco, USA). Fluorescensemissjonsspektrene ble registrert i et område på 650-850

nm, med eksitasjon ved 520 nm. Fluorescens av metanol og ubehandlede blodekstrakter ble benyttet som kontroller. En kalibreringskurve med kjente konsentrasjoner av sensibilisatoren ble fremstilt.

( x) Biodistribusjon. Wistar-rotter (n = 2) ble anestesert og forbindelse 5 ifølge oppfinnelsen (0,6 mg/kg) ble injisert til deres halevene. Kontrollgruppen (n = 2) ble ikke behandlet med sensibilisatoren. Ved 30 min. og 24 timer etter injeksjon, ble rotter (en for hvert tidspunkt) avlivet og prøver av de indikerte organene eller vevene (hjerte, lever, lunge, milt, nyre, hjerne, testes, hud, muskel og fett) ble samlet og veid i på forhånd veide rør, øyeblikkelig frosset på tørris og lagret ved -20°C i mørke inntil analysert. For undersøkelse, ble hver prøve tint, veid igjen og homogenisert (Polytron, Kinematica GmbH og Ultra-Turrax) i iskaldt vann. Rørene ble så frosset i flytende nitrogen og lyofilisert. De lyofiliserte prøvene ble ekstrahert med metanol (5-10 ml) i en mengde ekvivalent til vevsvekten, og så vortekset og sentrifugert. Supernatanten ble samlet og analysert og fluorescensmålt som beskrevet i (ix) ovenfor. Fluroescensen av metanol og av vevsekstrakter fra kontrolldyr ble benyttet som kontroller.

( xi) PDT- kontroll. CDl-nakenmus som bærer C6-gliom (n = 17) ble anestesert og forbindelse 5 (0,3 mg/kg) ble injisert via halevenen. Tumorområdet ble øyeblikkelig belyst (medikament-til-lys tidsintervall (DLT1)=0) transkutant i 15 min. ved 755 nm diodela-ser (CeramOptec, Tyskland) med lysdose av 80 mW/cm (lysfeltdiameter - 14 mm). Etter belysning, ble musene (n = 12) plassert tilbake i buret. Tumorrespons (ved å benytte lokal nekrose ved dag 8 post-PDT som endepunkt) ble registrert fotografisk, og tumorvolum ble bestemt (Gleave et al., 1992). Respons ble betraktet som partiell når bare en del av den belyste tumoren ble nekrotisk. Mus ble betraktet kurert om de var tumorfrie 90 dager etter behandling. Fortsatt tumorvekst etter PDT ble skåret som ingen respons. Mus ble avlivet når tumordiameter nådde 15 mm. Følgende kontroller ble benyttet: (i) mørk kontroll (n = 3) -tumorbærende mus i.v. injisert med sensibilisator, men ikke belyst; (ii) lys kontroll (n = 2) -tumorbærende mus ikke injisert med sensibilisator, men belyst; (iii) ubehandlet kontroll (n = 2) -tumorbærende mus ikke injisert med sensibilisator og ikke belyst.

Eksempel 72. Cytofototoksisitet av forbindelse 5, 7,9 og 11 på endotelceller Fototoksisiteten av forbindelser 5, 7, 9 og 11 på H5V-museendotelceller ble bestemt som beskrevet i avsnitt øv) ( a) ovenfor. Celler ble inkubert med økende konsentrasjoner (0,001, 0,01, 0,1, 1 eller 10 uM) av forbindelsene i 1, 6, 60, 90, 120, 240 og 480 min., vasket og så belyst eller holdt i mørke. Resultatene er vist i fig. 3A-3C: fototoksisitet av forbindelse 5 og 11 etter 90 min. inkubasjon er vist i fig. 3A; og fototoksisitet av forbindelser 5, 7 og 9 etter 2 timers inkubasjon er vist fig. 3B; og fototoksisitet av forbindelse 5 (10 uM) etter inkubasjon i 1-10 min. er vist i fig. 3C. Som kan bli sett i figurene, er sensibilisatorene raskt virkende, deres fototoksisitet er konsentrasjon- og lysavheng-ig, og deres LD50er omkring den samme (3 og~0,2 uM etter hhv.~3 min. og 2 timer av preinkubasjon). Ingen mørketoksisitet ble observert for området av konsentrasjon testet.

Eksempel 73. Farmakokinetikk og biodistribusjon av forbindelse 5 Farmakokinetikken og biodistribusjonen av sensibilisatoren 5 ble bestemt in vivo i Wistar-rotter som beskrevet i avsnitt ( ix) og ( x) ovenfor.

Resultatene av farmakokinetikken, som avbildet i fig. 4, viser at omkring 60% av sensibilisatoren 5 var forsvunnet i løpet av 30 min. etter i.v. injeksjon (0,6 mg/kg). Forsvin-ningskinetikken indikerer en bioseksjonert fordeling 24 timer etter i.v. administrasjon. Resultatene av biodistribusjonen, som avbildet i fig. 5A-5B, viser at 30 min. etter injeksjon er nivåene av sensibilisatoren 5 relativt høye i blodet, nyrene og lungene (fig. 5A), og 24 timer etter injeksjon er nivået av sensibilisatoren falt til nesten bakgrunnsnivået i blodet, men signifikante nivåer ble fortsatt funnet i nyrene, leveren og milten (fig. 5B).

Eksempel 74. Fotodynamisk behandling av C6-gliomxenografter i CDl-nakenmus med forbindelse 5

Basert på farmakokinetikkdataene beskrevet i eksempel 20 ovenfor, ble behandlingspro-tokollen for forbindelse 5 satt til 15-min. belysning øyeblikkelig etter injeksjon av sensibilisatoren, ved å benytte en tilegnet medisinsk laser tilpasset til toppabsorpsjonen av 5 (CeramOptec, Tyskland, 755 nm). For å test virkeevnen av medikament, ble hanner av CDl-nakenmus (n = 12) behandlet med en dose på 0,3 mg/kg forbindelse 5 og lysintensitet på 80 mW/cm<2>. Alle dyr i lys-og-medikament (fullstendig) behandlingsgruppen utviklet inflammasjon og ødem ved dag 1 etter behandling. Fig. 6A viser fotografier av tumorsetet av en PDT-behandlet mus ved dager 0, 4, 14, 21 og 32. Tumorutvikling ble observert ved dag 4 og tumornekrose ble observert ved dag 14. Ved dag 21, ble tumor-utflating observert med en skorpe som dekker såret. Ved dag 32, var såret leget og dyret kurert. Fig. 6B-6C er fotografier av tumorsetet av hhv. en mus injisert med forbindelse 5, men ikke belyst og av en mus injisert med saltoppløsning og belyst. Ingen nekrose av tumor foregikk i begge tilfeller.

Fig. 7 avbilder en Kaplan-Meier-overlevelseskurve som viser 80% overlevelse for mus behandlet med forbindelse 5 og belyst (behandling, kvadrater).

Eksempel 75. Fototoksisitet av forbindelse 5 mot Gram-positive og Gram-negative bakterier

Fototoksisiteten av positivt ladet forbindelse 5 ble testet på Gram-positive St. albus og Gram-negative E. coli bakterier i sammenligning med det negativt ladede Pd S^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin ^-^-sulfoetyOamid dikaliumsaltet (beskrevet i PCT/EL03/00973). Bakterier ble inkubert med økende konsentrasjoner av sensibilisatorene i 1 time og belyst eller holdt i mørke. Resultatene, avbildet i fig. 8A-8D, viser at den positivt ladede sensibilisatorforbindelsen 5 var fototoksisk mot både Gram-positive St. albus (fig. 8B) (Kd0,02 uM) og Gram-negative E. coli (fig. 8D) (Kd1,7 uM) bakterier, i mens den negativt ladede sensibilisatoren på forhånd kjent i fagfeltet, var effektiv mot Gram-positive St. albus (fig. 8A) (Ka 0,3 uM), men ikke mot Gram-negative E. coli (fig. 8C). Nesten 100% død av E. coli ble observert md 10 uM av forbindelse 5 (fig. 8D). Gram-positive bakterier St. albus, var 100 ganger mer sensitive for forbindelse 5 enn Gram-negative E. coli. Ingen fototoksisitet ble observert når bakterie-ne ble inkubert og behandlet med det samme område av sensibilisatorkonsentrasjon uten belysning (mørke kontroller).

Eksempel 76. Fototoksisitetstest

Materialene og fremgangsmåtene er beskrevet i den biologiske delen ovenfor.

H5V-celler (40xl0<3>/brønn) ble dyrket i 96-brønners plater i 24 timer til -80% konflu-ens. For å bestemme fototoksisitet, ble dyrkningsmedium et erstattet med 100 ul/brønn medium, i fravær eller nærvær av 10" til 10" M sensibilisator, og inkubert i mørke i 15 min. eller 3 timer i dyrkningsinkubatoren. Platene (PDT-gruppe) ble så plassert i lysfel-tet ved romtemperatur og belyst fra bunnen i 10 min. (800 > X > 650 nm, 12 J/cm<2>). Etter belysning ble mediumet byttet til friskt dyrkningsmedium. Kulturene ble så plassert i dyrkningsinkubatoren og celleoverlevelse ble bestemt 24 timer senere, ved å benytte nøytral rød overlevelsestesten beskrevet ovenfor.

De følgende kontrollene ble benyttet:

1. Lyskontroll: celler ble belyst i fravær av sensibilisator.

2. Mørkekontroll: Celler ble behandlet med sensibilisator, men holdt i mørke. Ubehandlet: Celler ble holdt i mørke uten noen behandling.

Etter 24 timer post PDT ble dyrkningsmediumet i brønnene erstattet ved 100 ul friskt medium inneholdende 40 ug/ml nøytral rød. Platen ble inkubert i 1,5 timer i en mørk dyrkningsinkubator. Mediumet ble suget av og cellene vasket med 100 ul av løsning inneholdende 1% CaCb og 0,5% formaldehyd, som fjerner den uinkorporerte fargen og fikserer cellene til substratet. Fargen ble så ekstrahert fra cellene til supernatanten ved tilsetning av 100 ul 1% iseddiksyre i 50% etanol. Etter 1-2 min. ved romtemperatur, ble den optiske tettheten av brønnene bestemt i et mikroplatespektrofotometer ved å benytte et 570 nm filter. Etter subtraksjon av testkontroller, ble den totale optiske tettheten beregnet som den gjennomsnittlige verdien av triplikate bestemmelser. Celleoverlevelse ble beregnet som prosentandelen av fargen akkumulert i den ubehandlede kontrollen. For å bestemme celleoverlevelse, ble data plottet mot sensibilisatorkonsentrasjon. Disse kurvene ble så benyttet for å beregnet LDso-verdier.

Etter syntese, ble forbindelsene beskrevet i eksemplene 23 til 75 ovenfor renset, delt inn i like alikvoter og lyofilisert for lagring (tørket ved -20°C). Det eksakte innholdet av materialet ble bestemt ved HPLC-diodematrisedeteksjon, og virkeevne av PDT ble eva-luert ved to inkubasjonstider som beskrevet i den eksperimentelle delen. Resultatene er presentert i tabeller 1-3 nedenfor:

Alle forbindelsene fremstilt i henhold til oppfinnelsen, viste bedre løselighet i sammenligning med Pd-Bpheid, 3. De fleste av forbindelsene krevde lave prosentandeler av

Cremophor i isoton mannitol for å danne 100% monomer løsning ved 2 mg/ml, mens noen av forbindelsene krevde lave konsentrasjoner av propylenglykol eller PEG-400 for å oppnå den samme monomere løsningen (begge tilsetningsstoffer er betraktet veldig trygge for anvendelse). Den switterioniske egenskapen av disse forbindelsene kan være en medvirkende faktorer for behovet for Cremophor for å generere en monomer løsning.

Syntesen av forbindelse 25-32 er mye enklere enn den av det opprinnelige mono-kationet tatt som referansen og reprodusert her som 24. Bemerkelsesverdig er PDT-aktivitetene av forbindelse 26, 28 og 32 (f.eks. er 32 omkring 4-5 ganger mer aktive enn 24 ved begge inkubasjonstider).

Syntesen av forbindelse 34-45 er mye enklere enn den av det opprinnelige di-kationet tatt som en referanse og reprodusert her som 33. Bemerkelsesverdig er PDT-aktivitetene ved kort inkubasjonstid av 34, 36, 38 og 45 (f.eks. er 36 mer aktiv ved 15 min. inkubasjonstid enn 33 er ved 3 timer).

Alle av forbindelsene av tabellen ovenfor viste bedre løselighet i sammenligning med Pd-Bpheid, 3. De fleste av forbindelsene krever bare lave prosentandeler av propylen glykol eller PEG-400 for å danne 100% monomer løsning ved 2 mg/ml. Selv om syntesen av de fleste forbindelsene krever to eller tre kjemiske transformasjoner, kan de fleste av forbindelsene bli fremstilt i "one-pot"-reaksjoner med minimale mellomliggende rensinger og isoleringer (i eksemplene presentert her, ble preparativ HPLC benyttet i mange reaksjoner under mellomliggende og endelige rensetrinn, simpelthen for bekvemmelighet). Enkle ekstraksjoner og presipiteringer har også blitt vellykket benyttet for å rense disse forbindelsene, som på denne måten omgår behovet for kostbar og langtekkelig HPLC-rensing i stor skala.

Eksempel 77. Biodistribusjon av forbindelsene

Dyrene var hanner av CDl-nakenbus bærende RCC-xenografter. Tre dyr ble benyttet for hvert tidspunkt. Forbindelser 28^, 32, 10^36 og 75 ble benyttet i eksperimentene.

Anestesi ble gjort med ketamin:xylazin (85:15, vol/vol).

Anesteserte dyr ble injisert med en løsning av testforbindelsen (2 mg/ml) i isoton mannitol ved en dose på 1,5 mg/kg. Tre dyr ble avlivet ved hvert tidspunkt og prøver av blod, hjerte, lunge, lever, nyre, tarm, milt, muskel, hud, tumor og hjerne ble samlet. Tidspunktene benyttet var 5 min., 15 min., 30 min., 1 time, 2 timer, 6 timer, 24 timer, 48 timer, 72 timer, 5 dager og 7 dager etter injeksjon. Prøver ble presist innveid, oppløst i konsentrert salpetersyre og analysert for palladium ved ICPMS.

Resultatene er representert i grafene vedlagt her (fig. 9A til 9E).

REFERANSER

F. Borle, A. Radu, P. Monnier, H. van den Bergh, G. Wagnieres, (2003).

Evaluation of the photosensitizer tookad for photodynamic therapy on the syrian golden hamster cheek pouch model: Light dose, drug dose and drug-light interval effects. Photochem. Photobiol. 78(4): 377-383.

R.B. Campbell, D. Fukumura, E.B. Brown, L.M. Mazzola, Y. Izumi, R.K. Jain, V.P. Torchilin, L.L. Munn, (2002). Cationic charge determines the distribution of liposomes between the vascular and extravascular compartements of tumors. Cancer Res. 62(23): 6831-6836.

Q. Chen, Z. Huang, D. Luck, J. Beckers, P.H. Brun, B.C. Wilson, A. Scherz, Y. Salomon og F.W. Hetzel, (2002). Preclinical studies in normale canine prostate of a novel palladium-bacteriopheophorbide (WST09) photosensitizer for photodynamic therapy of prostate cancers. Photochem. Photobiol. 76:438-445. M. Dellian, F. Yuan, V.S. Trubetskoy, V.P. Torchilin, R.K. Jain, (2002). Vascular permeability in a human tumor xenografts; molecular charge dependence. Br. J. Cancer 82:1513-1518.

T.J. Dougherty og J.G. Levy, (2003). Photodynamic therapy (PDT) and clinical applica-tions. BiomedicalPhotonics Handbook. V. Tuan. Boca Raton, CRC Press LCC. 38:1-38.

M. Elhilali (2004). Results of a phase I/II trial of WST09-mediated photodynamic therapy (WST09-PDT) for recurrent localized prostate cancer following failed external beam radiation therapy (EBRT). XEXth EAU CONGRESS, Workshop 1 "Vascular tar-geted photodynamic therapy for the treatment of prostate cancer: first clinical results wim palladium bacteriopheophorbide (WST09)", VENNA

N. Ghinea og N. Simionescu (1985). Anionized and cationized hemeundecapeptides as probes for cell-surface charge and permeability studies - differentiated labeling of endothelial plasmalemmal vesicles. J. Cell. Biol. 100(2):606-612. M.E. Gleave, J.T. Hsieh, H.C. Wu, A.C. von Eschenbach, L.W. Chung, (1992). Serum Prostate specific antigen levels in mice bearing human prostate LCNaP tumors are determined by tumor volume and endocrine and growth factors. Cancer Res. 52:1598-1605.

S. Gross, a. Gilead, A. Scherz, M. Neeman og Y. Salomon, (2003). Monitoring photodynamic therapy of solid tumors online by BOLD-contrast MRI. Nat. Med. 9:1327-1331. M.R. Hamblin, M. Rajadhyasksha, T. Momma, N.S. Soukos, T. Hasan (1999). In vivo fluorescence imaging of the transport of charget chlorin e6 conjugates in a rat orthotopic prostata tumour. Br. J. Cancer, 81(2):261-268.

H. Hashizume, P. Baluk, S. Morikawa, J.W. McLean, G. Thurston, S. Roberge, R.K. Jain, D.M. McDonald, (2002). Openings between defective endothelial cells explain tumor vessel leakiness. Am. J. Pathol. 156(4):1363-1380. D.K. Kelleher, O. Thews, A. Scherz, Y. Salomon og P. Vaupel, (2003). Combined hy-perthermia and chlorophyll-based photodynamic therapy: tumour growth and metabolic microenvironment. Br. J. Cancer, 89:2333-2339. I. Kinoshita, K. Kashiwabara, J. Fujita, K. Matsumoto og S. Ooi, (1981). Preparation, resolution, and adsorption and circular dichroism spectra of

[Co(en)n{NH2CH2CH2P(CH3)2]<3+>and the related complexes, and the absolute configu-ration of (+)589-/ac-[Co{NH2CH2CH2P(CH3)2}3]<3+>determined by X-Ray analysis. Bull. Chem. Soc. Jpn. 54:2683-2690.

N.V. Koudinova, J.H. Pinthus, A. Brandis, O. Brenner, P. Bendel, J. Ramon, Z. Eshhar, A. Scherz, og Y. Salomon, (2003). Photodynamic therapy with Pd-bacteriopheophorbide (TOOKAD): Successful in vivo treatment of human prostatic small cell carcinoma xenografts. Int. J. Cancer, 104:782-789.

B. Krammer (2001). Vascular effects of photodynamic therapy. Anticancer Res. 21(6B):4271-7.

O. Mazor, G. Kostenich, A. Brandis, A. Orenstein, Y. Salomon og A. Scherz (2003). Selective tumor vascular destruction of colon carcinoma xenografts by the hydrophilic Pd-bacteriochlorophyll derivative, WST11 9 . International Photodynamic Association, 20.-23. mai, Miyazaki, Japan, Book of Abstracts, s. 19. V. Plaks, N. Koudinova, U. Nevo, J.H. Pintus, H. Kanety, Z, Eshhar, J. Ramon, A. Scherz, M. Neeman og Y. Salomon, (2004). Photodynamic Therapy of Established Prostatic Adenocarcinoma with TOOKAD: A Biphasic Apparent Diffusion Coefficient Change as Potential Early MRI Response Marker. Neoplasia, In press. D. Preise, O. Mazor, N. Koudinova, M. Liscovitch, A. Scherz, Y. Salomon (2003). By-pass of tumor drug resistance by antivascular therapy. Neoplasia 5(6):475-480.

S. Ran, A. Downes, P.E. Thorpe, (2002). Increased exposure of anionic phospholipidis on the surface of tumor blood vessels. Cancer Res. 62:6132-6140. V. Rosenbach-Belkin, L. Chen, L. Fiedor, I. Tregub, F. Paviotsky, V. Brumfeld, Y. Salomon, A. Scherz, (1996). Serine conjugates of chlorophyll and bacteriochlorophyll: photocytotoxicity in vitro and tissue distribution in mice bearing melamona tumors. Photochem. Photobiol. 64:174-181.

S. Schreiber, S. Gross, A. Brandis, A. Harmelin, V. Rosenbach-Belkin, A. Scherz og Y. Solomon, (2002). Local photodynamic therapy (PDT) of rat C6 glioma xenografts with Pd-bacteriopheophorbide leads to decreased metastases and increase of animal cure compared with surgery. Int. J. Cancer, 99:279-285.

A. Segev, D. Aviezer, M. Safran, Z. Gross, A. Yayon, (2002). Inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation by a novel fibroblast growth factor receptor antagonist. Cardiovasc. Res. 53(1):232-241.

N. Simionescu, M. Simionescu, G.E. Palade, (1981). Differentiated microdomains on the luminal surface of the capillary endothelium. I. Preferential distribution of anionic sites. J. Cell. Biol. 90(3):605-613.

T. Suzuki, M. Rude, K.P. Simonsen, M. Morooka, H. Tanaka, S. Ohba, F. Galsbol, og J. Fujita, (1994). Preparation and characterization of Iridium(III) complexes containing (2-aminoethyl)dimethylphosphine (edmp). Structures of^c-[Ir(edmp)3]Cl3»5H20 and trans( Cl, Cl), cz's(P,.P,)-[IrCl2(edpp)2]BF4and comparisons of their propterties with those of the Cobalt(IE) and Rhodium(m) analogs. Bull. Chem. Soc. Jpn. 67:1013-1023.

G. Thurston, J.W. McLean, M. Rizen, P. Baluk, A. Haskell, T.J. Murphy, D. Hanahan, D.M. McDonald, (1998). Cationic liposomes target angiogenic endothelial celles in tumors and chronic inflammation in mice. J. Clin. Invest 101:1401-1413.

J. Trachtenberg, (2003). Initial Phase I/II Trial of WST09-PDT Photodynamic Therapy Following Failed External Beam for Prostate Cancer. CapCure Retreat, Washington

DC.

V. Tuan et al., (2002). Pharmaceutical strategies utilizing recombinant human serum albumin. Pharm. Res. 19:569-577. M.R. Wasielewski og W.A. Svec, (1980). "Synthesis of Covalent Linked Dimeric De-rivatives of Chlorophyll a, Pyrochloropyll a, Chlorophyll b, and Bacteriochlorophyll a", J. Org. Chem. 45:1696-174.

J. Zilberstein, A. Bromberg, A. Frantz, V. Rosenbach-Belkin, A. Kritzmann, R. Pfefer-mann, Y. Salomon, A. Scherz, (1997). Light-dependent oxygen consumption in bacteriochlorophyll-serine-treated melanoma tumors: on-line determination using a tissue-inserted oxygen microsensor. Photochem. Photobiol. 65(6): 1012-1019.

J. Zilberstein, S. Schreiber, M.C. Bloemers, P. Bendel, M. Neeman, E. Schechtman, F. Kohen, A. Scherz, Y. Salomon, (2001). Antivascular treatment of solid melanoma tu mors with bacteriochlorophyll-serine-based photodynamic therapy. Photochem. Photobiol. 73(3):257-266.

Claims

1. Bakterieklorofyllderivat med formel JJ:

karakterisert vedat M representerer 2H, et divalent metallatom valgt fra gruppen Pd, Pt, Co, Sn, Ni, Cu, Zn og Mn, eller et trivalent metallatom valgt fra gruppen Fe, Mn, Co, Au, Al, Gd, Er, Yb og Cr; Ri, R2og Re er hver uavhengig Y-Rg, -NR9R9eller -N+R9R 9R"9A"; Y er O eller S; R4er -CH=CR9R9, -CH=CR9Hal, -CH=CH-CH2-NR9R 9, -CH^H-CI^-Nl^R 9R"9A", -CHO, -CH=NR9, -CH=N%R 9A\ -CH2-OR9, -CH2-SR9, -CH2-Hal, -CH2-R9, -CH2-NR9R 9, -CH^N<+>RgR^R^A", -CH2-CH2R9, -CH2-CH2Hal, -CH2-CH2OR9, -CH2-CH2SR9, -CH2-CH2-NR9R'9, -CH2-CH2-N+-R9R 9R"9A", -COCH3, C(CH3)=CR9R 9, -C(CH3)=CR9Hal, -C(CH3)=NR9, -CH(CH3)=N+R9R 9A\ -CH(CH3)-Hal, -CH(CH3)-OR<9>, -CH(CH3)-SR9, -CH(CH3)-NR9R9, -CH(CH3)-N%R 9R 9A, eller -C ss CR9; R8, R9, R 9 og R"9er hver uavhengig: (a) H; (b) Ci-C25hydrokarbyl; (c) Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en eller flere funksjonelle grupper valgt fra gruppen bestående av halogen, nitro, okso, OR, SR, epoksy, epitio, aziridin, -CONRR', -COR, - COOR, -COSR, -OS03R, -S03R, -S03R, -S02R, -NHS02R, -S02NRR', -NRR', =N-OR, =N-NRR', -C(=NR)-NR'R", -(R)N_C(=NR)-NR'R", -NR-NR'R", O <- NR-, >C=NR, -(CH2)n-NR-COR', -(CH2)n-C0-NRR', -0-(CH2)„-OR, -0-(CH2)n-0-(CH2)n-R, -OPO3RR', -P02HR, -PO3RR, eller hvor n er et heltall fra 1 til 6, R, R' og R" er hver uavhengig H, hydrokarbyl eller heterocyklyl eller to av R, R' og R" sammen med N-atomet som de er festet til danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et eller flere heteroatomer valgt fra O, S eller N, og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet med alkyl eventuelt substituert ved halogen, hydroksyl eller amino; (d) Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en eller flere funksjonelle grupper valgt fra positivt ladede grupper valgt fra: (i) en oniumgruppe som ikke inneholder N; (ii) et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe; eller (iii) et kation avledet fra en heteroaromatisk forbindelse inneholdende en eller flere nitrogenatomer og eventuelt O- eller S-atomer; negativt ladede grupper slik som COO", COS", -S03",-OS03", -PO3"<2>", -OPO3R", -P02H", eller -P03R"; basiske grupper som konverteres til positivt ladede grupper under fysiologiske forhold valgt fra -NRR', -C(=NR)-NR'R", -PRR', -NR-NR'R", -(R)N-C(=NR)-NR'R", 0<-NR-, >C=NR, eller et N-inneholdende heteroaromatisk radikal hvor R, R' og R" er som definert i (c) ovenfor; eller en sur gruppe som konverteres til en negativt ladet gruppe under fysiologiske forhold slik som -COOH, -COSH, -S03H or -P03H2; (e) Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, inneholdende et eller flere heteroatomer og/eller en eller flere karbocykliske eller heterocykliske halvdeler; (f) Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, inneholdende et eller flere heteroatomer og/eller en eller flere karbocykliske eller heterocykliske halvdeler og substituert ved en eller flere funksjonelle grupper som definert i (c) og (d) ovenfor; (g) Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved en rest av en aminosyre, et peptid, et protein, et monosakkarid, et oligosakkarid eller et polysakkarid; eller (h) en rest av en aminosyre, et peptid, et protein, et monosakkarid, et oligosakkarid eller et polysakkarid; Rg kan ytterligere være H+ eller et kation R<+>10, når RI, R'2 og R6 hver er uavhengig Y-R8; R<+>10 et metall, ammonium eller et organisk kation; A er et fysiologisk akseptabelt anion; m er 0 eller 1; og farmasøytisk akseptable salter og optiske isomerer derav; forutsatt at bakterieklorofyllderivatet med formel JJ har minst en positivt ladet gruppe og/eller minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold.

2. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertved atMer2H.

3. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertved at M er Pd.

4. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertv e d at det inneholder minst en positivt ladet gruppe.

5. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 4,karakterisertv e d at nevnte minst ene positivt ladede gruppe er et kation avledet fra en N-inneholdende gruppe valgt fra -N<+>(RR'R"), -(R)N-N<+>(RR'R"), O <- N^RR')-, >C=N<+>(RR'), -C(=RN)-N<+>RR'R" og -(R)N-C(=HN)-N<+>RR'R"-gruppe, nevnte kation er en endegruppe eller en gruppe lokalisert i hydrokarbylkjeden av bakterieklorofyllmolekylet.

6. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 5,karakterisertv e d at nevnte kation er en ammoniumgruppe med formel -N^RR^"), hvor hver av R, R' og R" uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, eller heterocyklyl, eller to av R, R' og R" sammen med N-atomet danner en mettet ring med 3-7 medlemmer, eventuelt inneholdende et O-, S-eller N-atom og eventuelt ytterligere substituert ved det ytterligere N-atomet.

7. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1 eller 6,karakterisertv e d at nevnte mettede ring med 3-7 medlemmer er valgt fra gruppen bestående av aziridin, pyrrolidin, piperidin, morfolin, tiomorfolin, azepin eller piperazin eventuelt substituert ved det ytterligere N-atomet ved C1-C6alkyl eventuelt substituert med halo, hydroksyl eller amino.

8. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 4,karakterisertv e d at nevnte minst ene positivt ladede gruppe er et kation avledet fra en heteroaromatisk forbindelse inneholdende et eller flere N-atomer og eventuelt O- eller S-atomer valgt fra gruppen bestående av pyrazolium, imidazolium, oksazolium, tiazolium, pyridinium, quinolinium, isoquinolinium, pyrimidinium, 1,2,4-triazinium, 1,3,5-triazinium eller purinium.

9. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 4,karakterisertv e d at nevnte minst ene positivt ladede gruppe er en oniumgruppe valgt fra gruppen bestående av -0<+>(RR'), -S<+>(RR'), -Se<+>(RR'), -Te<+>(RR'), - P<+>(RR'R"), -As<+>(RR'R"), -Sb<+>(RR'R"), eller -Bi<+>(RR'R"), hvor R, R' og R" hver uavhengig er H, hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, eller heterocyklyl.

10. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertv e d at det inneholder minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold.

11. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 10,karakterisertv e d at nevnte minst ene basiske gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold er et N-inneholdende aromatiske radikal utvalgt fra pyrazolyl, imidazolyl, oksazolyl, tiazolyl, pyridyl, quinolinyl, isoquinolinyl, pyrimidyl, 1,2,4-triazinyl, 1,3,5-triazinyl eller purinyl.

12. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertved at Rg, R^ R'9 og R" 9 er hver uavhengig C1-C25 hydrokarbyl, fortrinnsvis en rettkjedet eller forgrenet C1-C25alkyl- eller C2-C25alkenylkjede, helst C1-C10eller Ci- C6alkyl, eventuelt inneholdende en eller flere heteroatomer utvalgt fra O, S eller N, og/eller avbrutt og/eller substituert med en eller flere karbocykliske eller heterocykliske grupper.

13. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertv e d at M er 2H eller Pd; R 2 er -ORg hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Ri er OH, -NR9R9, eller -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH; Re er -NR9R'9eller -NR9-CH2-CH(OH)-CH2OH; R9er H eller Ci-C6alkyl; og

R'9er C1-C25hydrokarbyl substituert ved minst en positivt ladet gruppe og/eller minst en basisk gruppe som er omdannet til en positivt ladet gruppe under fysiologiske forhold.

14. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 13,karakterisertv e d at R9er H og R'9er C1-C25alkyl, fortrinnsvis C1-C10, mer foretrukket C1-C6alkyl, substituert ved minst en positivt ladet gruppe -ISTRR^R" eller ved minst en basisk gruppe -NRR' og eventuelt avbrutt ved en -N(R")-gruppe, hvor R og R' hver uavhengig er H, C1-C6alkyl eventuelt substituert med NR"R", eller heterocyklyl slik som pyridyl, eller R og R' sammen med N-atomet danner en ring med 6 medlemmer ytterligere inneholdende et O-, S- eller N-atom, og R" er H eller Ci-C6alkyl.

15. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 13,karakterisertved at Ri er utvalgt fra OH, -NHR'9, -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH, og R6er en - NHR'9-gruppe valgt fra gruppen bestående av: (i) -NH-(CH2)n-NRR' or -NH-(CH2)„-N<+>RR'R"; (ii) -NH-(CH2)n-N(R'' )-(CH2)n-NRR';

hvor X er O, S eller NR; R, R' og R" er hver uavhengig H eller C1-C6alkyl; n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2 til 6; og m er et heltall fra 1 til 6, fortrinnsvis 1 til 3.

16. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 15,karakterisertved der Ri er OH, valgt fra forbindelsene her betegnet forbindelser 12 og 24-32: Palladium 3 1 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 1 -(2-N 3-trimetylammoniumetyl)amid kloridsalt (forbindelse 12); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - (trimetylammoniumetyl)amid acetatsalt (forbindelse 24); Palladium 3 1 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakteri• eklori• n-13 1 -(2-N 2-dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 25) 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(3-N - dimetylaminopropyl)amid (forbindelse 26); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 27); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 28); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 3 ^(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 29); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3^(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 30); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-[(2-N - dietylaminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 31); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(3-[(3-aminopropyl)amino]propyl)amid (forbindelse 32).

17. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 15,karakterisertved at Ri er -NHRVvalgt fra forbindelsene her betegnet forbindelser 4-11 og 33-45:

1 13

3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 4);

3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 173-di(2-N3-trimetylammoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse 5);

1 13

3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(3-aminopropyl)amid (forbindelse 6);

3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 173-di(3 -N3-trimetylammoniumpropyl)amid disitratsalt (forbindelse 7);

1 13

3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(6-aminoheksyl)amid (forbindelse 8);

3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 1,173-di(6-N3-trimetylammoniumheksyl)amid disitratsalt (forbindelse 9); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 10); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3 1, 173-di(2-N3-trimetylammoniumetyl)amid difosfatsalt (forbindelse 11); 1 13 3 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-N - trimetylammoniumetyl)amid diacetatsalt (forbindelse 33); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31,173-di(3-aminopropyl)amid (forbindelse 34); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(4-aminobutyl)amid (forbindelse 35); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3 1, 173-di(2-N2-dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 36); 1 13 2 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(3-N - dimetylaminopropyl)amid (forbindelse 37); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di-(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 38); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 3 1, 173-di-(2-[(2-N2-dietylaminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 39); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 , 17 -di(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 40); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31,173-di(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 41); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di-(3-[(3-aminopropyl)amino]propyl)amid (forbindelse 42); Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 43); 1 13 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid (forbindelse 44); 1 13 2 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-N - dietylaminoetyl)amid (forbindelse 45).

18. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 15, hvori Ri er -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH, valgt fra forbindelsene her betegnet forbindelser 48, 50, 55, 57, 59-64, 71 og 72: Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2-aminoetyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 48); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 50); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 55); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid-173-(2,3 -dihydroksypropyl)amid (forbindelse 57); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-([2-bis(2-aminoetyl)amin]etyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 59); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 3 ^(S-aminopropyl)amid-17<3->(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 60); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(4-aminobutyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 61); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dietylaminoetyl)amid-l 73-(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 62); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 3^(2-N-etylaminoetyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 63); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 3 ^(3-N-metylaminopropyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 64); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(3-N-(2'-pyridyl)aminopropyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 71); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(4-N-(2'-pyridyl)aminobutyl)amid-17 -(2,3-dihydroksypropyl)amid (forbindelse 72).

19. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 13,karakterisertved at Re er -NH-CH2-CH(OH)-CH2OH og Ri er en -NHR'9-gruppe valgt fra gruppen bestående av: (i) -NH-(CH2)„-NRR' eller -NH-tCH^n-l^R^R", (ii) -NH-(CH2)n-N(R")-(CH2)n-NRR';

hvor X er 0, S eller NR; R, R' og R" er hver uavhengig H eller d-C6alkyl; n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2 til 6; og m er et heltall fra 1 til 6, fortrinnsvis 1 til 3.

20. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 19,karakterisertv e d at det er valgt fra forbindelsene her betegnet forbindelser 46, 47, 49, 51-54, 56,58, 73 og 74: Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(2-trimetylammoniumetyl)amid (forbindelse 46); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(2-aminoetyl)amid (forbindelse 47); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 3 -(2-N 2-dimetylaminoetyl)amid (forbindelse 49); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l 31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-l7<3->(2-[(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 51); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 3 -(2-[(2-N 2-dietylaminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 52); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(2-morfolino-N-etyl)amid (forbindelse 53); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(2-piperazino-N-etyl)amid (forbindelse 54); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(2-N-(2'-pyridyl)aminoetyl)amid (forbindelse 56); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -([2-bis(2-aminoetyl)amino]etyl)amid (forbindelse 58); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(3-N-(2'-pyridyl)aminopropyl)amid (forbindelse 73); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(4-N-(2'-pyridyl)aminobutyl)amid (forbindelse 73); Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l31-(2,3-dihydroksypropyl)amid-17 -(4-N-(2'-pyridyl)aminobutyl)amid (forbindelse 74).

21. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 1,karakterisertv e d at M er 2H eller Pd;

R'2er -ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl; R4er -COCH3; Re er -NH-CH2-CH2-NRR'; og Ri er valgt fra gruppen bestående av -NH-(CH2)n-OH; -NH-CH(OH)-CH3; -NH-(CH2)n-NR-(CH2)n-OH; og - glykosylamino; hvor R og R' hver uavhengig er H, metyl eller etyl; og n er 2 eller 3.

22. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 21,karakterisertv e d at det er valgt fra forbindelsene her betegnet forbindelser 65-70 og 75: 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17 -(2-hydroksyetyl)amid (forbindelse 65); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17<3->(3-hydroksypropyl)amid (forbindelse 66); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17 -(2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 67); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17<3->((R)-2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 68); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17 -((S)-2-hydroksypropyl)amid (forbindelse 69); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17<3->(2-(2-hydroksyetylamino)etyl)amid (forbindelse 70); 1 12 Palladium 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 -(2-N - dimetylaminoetyl)amid-17 -(glykosyl)amid (forbindelse 75).

23. Bakterieklorofyllderivat med formel JJ ifølge krav 1,karakterisert vedatMer Pd, R'2er - ORg, hvor Rg er C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, Rt er -COCH3og Ri og/eller Re er -NR9R'9, hvor R9er H og R'9er Ci-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis Ci-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert med en gruppe valgt fra (i) guanidino- eller guanidiniumgruppe; (ii) sulfoniumgruppe; (iii) fosfino eller fosfonium; eller (iv) arsino- eller arsoniumgruppe.

24. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 23 (i),karakterisertved at Ri og R6er en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-C(=NH)-NH2ler -NH-(CH2)„-C(=NH)-N<+>(R)3A", hvor R er Ci-C6alkyl, mer foretrukket metyl, n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et anion.

25. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 24,karakterisertv e d at det er valgt fra de her betegnede forbindelse 14 og 14a: Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3*,17-di(2-guanidinoetyl)amid (forbindelse 14) og Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3*,173-di(2-trimetylguanidiniumetyl)amid (forbindelse 14a).

26. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 23 (ii),karakterisertved at Ri og R6er en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-S<+>(R)2A", mer foretrukket -NH-(CH2)„-S(CH3)2<+>A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et anion.

27. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 26,karakterisertved at det er representert ved den her betegnede forbindelse 15: Palladium 3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-l3^(2-S2-dimetylsulfoniumetyl)amid sitratsalt (forbindelse 15).

28. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 23 (iii),karakterisertved at Ri og R6er en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-P(R)2, mer foretrukket -NH-(CH2)„-P(CH3)2eller NH-(CH2)„-P<+>(R)3A, mer ket -NH-(CH2)„-P<+>(CH3)3A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et motanion.

29. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 28,karakterisertv e d at det er valgt fra de her betegnede forbindelsene 17 og 18:

1 13 3 3 -okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-P - trimetylfosfoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse 17);

3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 1, 173-di(2-dimetylfosfinoetyl)amid (forbindelse 18).

30. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 23 (iv),karakterisertved at Ri og R6er en gruppe med formelen -NH-(CH2)n-As(R)2, mer foretrukket -NH-(CH2)„-As(CH3)2, eller NH-(CH2)„-As<+>(R)3A", mer ket -NH-(CH2)„-As<+>(CH3)3A", hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et motanion.

31. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 30,karakterisertved at det er representert ved den her betegnede forbindelsen 19:

3 ^okso-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 173-di(2-As3-trimetylarsoniumetyl)amid disitratsalt (forbindelse 19).

32. Bakterieklorofyllderivat med formel JJ ifølge krav 1,karakterisert vedat M er 2H eller Pd, R'2er-OR8, hvor Rg er Ci-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -C(CH3)=NR9, og Ri og/eller R6er -NR'9R"9, hvor R'9er H og R9og R"9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket C1-C10eller C1-C6alkyl, substituert ved minst en aminoendegruppe.

33. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 32,karakterisertved at R4er-C(CH3)=N-(CH2)n-NH2, Ri og Re er begge-NH-(CH2)„-NH2, og n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6.

34. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 33,karakterisertv e d at det er valgt fra de her betegnede forbindelsene 20 og 21:

1 13 3 -(aminoetylimino)-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin-13 ,17 -di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 20); 1 13 Palladium 3 -(aminoetylimino)-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 ,17 - di(2-aminoetyl)amid (forbindelse 21).

35. Bakterieklorofyllderivat med formel JJ ifølge krav 1,karakterisert vedat M er 2H eller Pd, R'2er-OR8, hvor R» er Ci-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, R4er -C(CH3)=NR9, Ri og/eller Re er -NR'9R"9, hvor R'9er H og R9og R"9er C1-C25hydrokarbyl, fortrinnsvis C1-C25alkyl, mer foretrukket Ci-Cioeller C1-C6alkyl, substituert ved minst en positivt ladet gruppe.

36. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 35,karakterisertv e d at nevnte positivt ladede gruppe er en ammoniumendegruppe med formelen -N<+>(RR'R")A", hvor R, R' og R" fortrinnsvis er det samme C1-C6alkyl, fortrinnsvis metyl, og A" er et anion.

37. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 36,karakterisertved atR4er-C(CH3)=N-(CH2)n-N(R)3<+>A",RiOgR6er-NH-(CH2)n-N(Ci-C6alkyl)3+A\ mer foretrukket -NH-(CH2)n-N(CH3)3<+>A<->, hvor n er et heltall fra 1 til 10, fortrinnsvis 2, 3 eller 6, og A" er et anion.

38. Bakterieklorofyllderivat ifølge krav 37,karakterisertv e d at det er valgt fra de her betegnede forbindelsene 22 og 23: 3 ^(trimetylammoniumetylimino)-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1 ,17 3-di(2-trimetylammoniumetyl)amid (forbindelse 22); Palladium 3<1->(trimetylammoniumetylimino)-15-metoksykarbonylmetyl-rodobakterieklorin 13 1 ,17 3-di(2-trimetylammoniumetyl)amid (forbindelse 23).

39. Farmasøytisk sammensetning,karakterisert vedat det omfatter et bakterieklorofyllderivat med formelen II ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 38, og en farmasøytisk akseptabel bærer.

40. Bakterieklorofyllderivat med formel JJ ifølge et hvilket som helst av kravene 1-38, for anvendelse innen tumor fotodynamisk terapi.

41. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 39 for anvendelse innen tumor fotodynamisk terapi.

42. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 41 eller et bakterieklorofyllderivat for anvendelse ifølge krav 40, der nevnte fotodynamiske terapi er vaskulær målrettet fotodynamisk terapi (VTP).

43. Farmasøytisk sammensetning for anvendelse ifølge krav 41 eller 42, der den fotodynamisk terapi er for fotodynamisk terapi av tumorer.

44. Farmasøytisk sammensetning for anvendelse ifølge krav 43 eller bakterieklorofyllderivatet for anvendelse ifølge krav 40 eller 42, der den fotodynamisk terapi er fotodynamisk terapi av maligne tumorer, som inkluderer primære og metastatiske tumorer valgt fra melanom, prostata, hjerne, hode, hals, kolon, ovarie, bryst, brystveggstumorer som oppstår fra brystcancer, hud, lunge, øsofagus og blærecancere og andre hormonsensitive tumorer.

45. Farmasøytisk sammensetning for anvendelse ifølge krav 43 eller bakterieklorofyllderivatet for anvendelse ifølge krav 40 eller 42, der den fotodynamisk terapi er fotodynamisk terapi av godartet prostatahypertrofi.

46. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 41 eller 42 eller bakterieklorofyllderivatet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-38, for anvendelse ved behandling av kardiovaskulære sykdommer som inkluderer okklusjon av blodåre og trombose i koronare arteriesykdommer, intimal hyperplasi, restenose og aterosklerotiske plaque.

47. Farmasøytisk sammensetning eller bakterieklorofyllderivatet for anvendelse ifølge krav 46,der nevnte behandling av kardiovaskulære sykdommer er for å forebygge eller redusere in-stent restenose etter koronar angiografi.

48. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 41 eller 42 eller bakterieklorofyllderivatet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-38, for anvendelse ved behandling av dermatologiske sykdommer, lidelser og tilstander slik som akne, arrdannelse av akne, psoriasis, fotvorter, vorter, aktinisk keratose og portvinsflekker.

49. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 41 eller 42 eller bakterieklorofyllderivatet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-38, for anvendelse ved behandling av øyesykdommer, lidelser og tilstander slik som korneal og koroidal neovaskularisering og aldersrelatert makuladegenerasjon (AMD).

50. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 41 eller 42 eller bakterieklorofyllderivatet ifølge krav 40, for anvendelse tumordiagnostikk.

51. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 39 eller bakterieklorofyllderivatet ifølge et hvilket som helst av kravene 1-38, for å drepe celler eller infeksiøse midler som omfatter bakterier og virus.

52. Farmasøytisk sammensetning ifølge krav 51, for in vitro å drepe celler eller infeksiøse midler som omfatter bakterier og virus i et biologisk produkt ved å belyse nevnte produkt, fortrinnsvis der nevnte biologiske produkt er blod.