CN1935980A - 从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 - Google Patents
从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1935980A CN1935980A CN 200610039954 CN200610039954A CN1935980A CN 1935980 A CN1935980 A CN 1935980A CN 200610039954 CN200610039954 CN 200610039954 CN 200610039954 A CN200610039954 A CN 200610039954A CN 1935980 A CN1935980 A CN 1935980A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tea
- yeast
- tea fungus
- bacteria
- bacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 title claims abstract description 96
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 14
- 235000020279 black tea Nutrition 0.000 title claims abstract description 11
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 100
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 36
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 147
- 235000013616 tea Nutrition 0.000 claims description 84
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 58
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 28
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 23
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 23
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 20
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 20
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 claims description 19
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 19
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 16
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241000235648 Pichia Species 0.000 claims description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 9
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 5
- WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 4-hexylbenzene-1,3-diol Chemical compound CCCCCCC1=CC=C(O)C=C1O WFJIVOKAWHGMBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 3
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 claims description 3
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 3
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 3
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 claims description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 claims description 3
- 235000020333 oolong tea Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940049547 paraxin Drugs 0.000 claims description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000011435 rock Substances 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 229940092665 tea leaf extract Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 abstract 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 5
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 5
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 4
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 3
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 3
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 3
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 241000235017 Zygosaccharomyces Species 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000235349 Ascomycota Species 0.000 description 1
- 240000006914 Aspalathus linearis Species 0.000 description 1
- 235000012984 Aspalathus linearis Nutrition 0.000 description 1
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001185310 Symbiotes <prokaryote> Species 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- -1 cetic Species 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000011169 microbiological contamination Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Tea And Coffee (AREA)
Abstract
本发明涉及从普通混杂的红茶菌液中纯化获得酿酒酵母菌菌株的方法。所要解决的问题是：提供一种分离纯化红茶菌中重要菌种—酿酒酵母菌的工艺方法。特点是：包括下述步骤，取家庭或市售的红茶菌菌液进行纯化分离；按照《微生物分类学》一书中的方法对分离获得的多个纯的酵母菌菌株进行菌种鉴定；用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株；本发明采用微生物学技术从传统的红茶菌饮料中分离纯化出红茶菌的主要酿酒酵母菌菌株，以利于用纯菌株培养出具有醇、酸、甜、香独特风格的红茶菌。这种工艺具有无杂菌污染、菌种易保藏、产品质量稳定、易于工业化生产和产品商业化的特点。
Description
技术领域
本发明涉及从普通混杂的红茶菌液中纯化获得酿酒酵母菌菌株的方法。。
背景技术
红茶菌又名“海宝”、“红茶菇”，是一种传统保健饮料，广泛流传于我国、日本、东南亚和南欧诸国。一般家庭中用经验方式培养红茶菌，从他人处获得红茶菌液，将此菌液接进配好的糖茶水中，根据温度的区别培养约7～15天，得到新的红茶菌。这种传统的培养方式存在以下缺点：①容易污染杂菌，②菌种不易保藏，③产品品质不稳定，④不易大规模培养，⑤不易商业化开发。为解决这些问题，本报告拟用现代生物技术开发利用红茶菌这一传统饮料，提高生产红茶菌的技术水平，稳定产品的质量，推动传统饮料的商业化生产和销售。
现在已经知道红茶菌最主要的菌群是由酵母菌、醋酸菌和乳酸菌三类微生物构成，各地的红茶菌产品中这些菌群的菌种多少存在区别，例如酵母菌中有接合酵母、球拟酵母、不显酵母、汉逊德氏酵母、热带假丝酵母、路德类酵母和酿酒酵母之分，醋酸菌中有巴氏醋酸菌、木醋酸菌、醋化醋酸菌、弱氧化醋酸菌等。由于地域性的差异导致红茶菌中菌群组成的差异，最终导致产品风味的差异，因此出现从不同地区引种的培养物风味出现较大差异。
在红茶菌中酵母菌的作用是将蔗糖、葡萄糖降解产生乙醇，醋酸菌氧化乙醇产生乙酸。酵母菌和醋酸菌还可以合成酯类、内酯等产物，赋予红茶菌特征性风味。根据研究，对红茶菌产品的胶状外形和风味具有最主要贡献的微生物是醋酸菌和酵母菌。乳酸菌只是由于也耐一定的酸度，才能在糖茶液中生存，产生对人体有益的微量的乳酸和其他化合物。实际上可以认为红茶菌是酵母菌和醋酸菌的松散的共生体。在家庭培养的红茶菌的表面通常形成很厚的胶状的灰白色膜状物，红茶菌菌膜是由醋酸菌将葡萄糖聚合成纤维素而成，在膜中存在醋酸菌和少量的酵母菌，在膜的下方存在较多的酵母菌、乳酸菌和其他微生物，酸性膜的存在阻止了其他微生物的污染。在静止培养条件下醋酸菌合成大量的胶膜导致糖类的不必要的浪费。茶叶中的儿茶素和单宁对很多微生物具有抑制作用，而红茶菌中的醋酸菌和酵母菌可以忍耐较高浓度的儿茶素和单宁，并且可以降解部分儿茶素和单宁，将其作为营养利用，降低了红茶菌液的苦涩味，残存的儿茶素也可作为营养保健成份。正是由于上述的各种原因导致形成红茶菌的特征性的风味。
一般家庭培养的红茶菌中还存在耐酸的霉菌和其他细菌，这些微生物对红茶菌产品没有什么贡献，但却是产品质量不稳定、导致污染的根本原因。
发明内容
本发明旨在：提供一种分离纯化红茶菌中重要菌种—酿酒酵母菌的工艺方法。
具体的操作方法如下：
从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法，包括下述步骤：
(1)、从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌
A、取家庭或市售的红茶菌菌液，在无菌条件下，用取样器从菌膜下吸取0.1mL的菌液，采用0.85％生理盐水进行10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，得三份稀释液；
B、在超净工作台上，取融化后降温至约50℃的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基倒平板，在平板中注入约20mL的培养基，在培养基中加入0.1～100mg/L浓度的抑制细菌的抗生素，待培养基凝固后，取上述三份稀释液0.05mL～0.2mL分别加入三个平板上，用三角刮铲将菌液均匀涂布于平板表面；
C、将上述制备好的平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
D、用接种环挑取经纯化的过各种典型的酵母菌菌株的菌落至另一新配置的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基平板划线，将平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
E、持续D步骤的操作至少2次，直至菌落完全纯化；得到20株以上纯的酵母菌菌株；
(2)、按照《微生物分类学》的方法对分离获得的多个纯的酵母菌菌株进行菌种鉴定，经鉴定获得管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌共4种酵母菌；
(3)、用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株
将鉴定为管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌的4株酿酒酵母菌菌株与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌共4株醋酸菌菌株分别进行两两组合接种试验，即一种酿酒酵母菌加一种醋酸菌的组合接种试验，具体操作步骤如下：
A、红茶菌糖茶液的配制，取原料茶叶3～10g，糖30～100g，水1000mL，用沸水冲泡茶叶和糖，保持微沸1～10min，静置使茶叶沉淀，取上清液，分装至试管、150mL或250mL三角瓶，108℃～121℃灭菌处理10～25min；
B、按两两组合用接种环从上述纯化的4株酵母菌菌株和4醋酸菌菌株的纯培养中挑取一环混合分别接进红茶菌糖茶液中，20℃～35℃静止培养6～15天；
即管囊酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌菌株混合接种；
即酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即德氏酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即毕赤氏酵母分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
结果是，酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种后均可以形成典型的带有胶膜的红茶菌液。
上述的红茶菌中酿酒酵母菌的分离纯化方法，从红茶菌菌液中分离纯化酿酒酵母菌的B步骤、D步骤中的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基配方：糖50～100g，酵母膏5～10g，CaCO315～30g，琼脂12～20g，水1000mL。
上述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，所述葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基和红茶菌糖茶液配方中的糖为红糖或白糖或冰糖或蔗糖或葡萄糖或饴糖或蜂蜜，或者任意几种糖类的混合物。
上述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，从红茶菌菌液中分离纯化酵母菌的B步骤中的抗生素为青霉素或链霉素或氯霉素或红霉素或庆大霉素，其浓度在1～100mg/L。
上述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，所述的茶叶为绿茶、红茶、乌龙茶、茶末、各类茶叶提取物、几种茶叶的混合物。
酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)，其生长特征在于：
在GYC固体培养基上3-5天菌落大小2～4mm，圆形，边缘整齐，凸起，表面潮湿，奶酪状，乳白色；菌落粘状，接种环易挑起；在GYC液体培养基生长有沉淀；最高生长温度37℃。
细胞一般呈卵圆形，3～8×5～15μm，以出芽方式无性生殖，有性孢子为子囊孢子，无假菌丝。
本发明的菌种已按专利法实施细则第二十五条第三款的规定在国家知识产权局专利局指定的保藏单位——中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期：2006年4月6日，保藏号：CGMCC1670，并附具存活性报告书。
采用现代生物工程技术发掘改进传统产品和工艺，是我国食品工业发展的重要方向。本发明采用微生物学技术从传统的红茶菌饮料中分离纯化出红茶菌的主要酿酒酵母菌菌株，以利于用纯菌株培养出具有醇、酸、甜、香独特风格的红茶菌。这种工艺具有无杂菌污染、菌种易保藏、产品质量稳定、降低消耗、易于工业化生产和产品商业化的特点。
红茶菌具有广泛的营养保健功能，生产红茶菌的原料价格低廉，采用现代生物技术提升传统的饮料产品的技术含量和质量水平，促进其商业化开发，具有重要的社会意义和经济价值。本发明分离纯化的酿酒酵母菌为工业化开发利用红茶菌提供了保证。
具体实施方式
下面对本发明作进一步地说明。
实施例1：
酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)，其生长特征在于：
在GYC固体培养基上3-5天菌落大小2～4mm，圆形，边缘整齐，凸起，表面潮湿，奶酪状，乳白色；菌落粘状，接种环易挑起；在GYC液体培养基生长有沉淀；最高生长温度37℃。
细胞一般呈卵圆形，3～8×5～15μm，以出芽方式无性生殖，有性孢子为子囊孢子，无假菌丝。
分离纯化酿酒酵母菌的方法如下：
(1)A、取家庭或市售的红茶菌菌液，在超净工作台上，在无菌条件下，用无菌的取样器从菌膜下吸取0.1mL的菌液，采用0.85％生理盐水进行10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，逐渐稀释样品，得三份稀释液；
B、在超净工作台上，取融化后降温至约50℃的葡萄糖酵母膏GYC固体培养基倒平板，在直径9cm的平板中注入约20mL的培养基，在培养基中加入0.1～100mg/L浓度的抑制细菌的抗生素，待培养基凝固后，取不同稀释度的三份稀释液菌液0.05mL～0.2mL加入三个平板上，用无菌的三角刮铲将菌液均匀涂布于平板表面；
C、将上述制备好的平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
D、用接种环挑取经纯化的各种典型的酵母菌菌株的菌落至另一新配置的葡萄糖酵母膏GYC固体培养基平板划线，将平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
持续D步骤的操作至少2次，直至菌落完全纯化；
上述B步骤、D步骤中的葡萄糖酵母膏GYC固体培养基配方：白糖75g，酵母膏7g，CaCO325g，琼脂16g，水1000mL。
葡萄糖酵母膏GYC固体培养基和红茶菌糖茶液配方中的糖，可为红糖或白糖或冰糖或蔗糖或葡萄糖或饴糖或蜂蜜，或者任意几种糖类的混合物。
上述B步骤中的抗生素可以是青霉素或链霉素或氯霉素或红霉素或庆大霉素，其浓度在1～100mg/L。
(2)、按照《微生物分类学》(张纪忠主编，复旦大学出版社，1990)的方法对分离获得的多个纯的酿酒酵母菌菌株进行菌种鉴定，经鉴定获得管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌共4种酵母菌菌株。
按照微生物学研究的原则，在分离到某一纯菌株后，要根据微生物分类和鉴定的通用方法，对种名未知的菌株进行鉴定，获取有关其分类的信息，为进一步的研究和应用提供分类学的依据。
酵母菌不是分类学上的名称，而是单细胞的真菌的通称，酵母菌在分类学上分属于子囊菌、担子菌和半知菌。酵母菌的形态特征简单，基本为球形、卵园形，因此对酵母菌进行鉴定主要是以生理生化特征为主、形态学特征为辅。本研究是以张纪忠主编的《微生物分类学》第四篇(第368页—第428页)中规定的方法和技术对分离获得的酵母菌菌株进行鉴定，将这些菌株定为接合酵母、汉逊德氏酵母、路德酵母和酿酒酵母共4个种。
(3)、用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株
将鉴定为管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌的4株酿酒酵母菌菌株与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌共4株醋酸菌菌株分别进行两两组合接种试验，即一种酿酒酵母菌加一种醋酸菌的组合接种试验，具体操作步骤如下：
A、红茶菌糖茶液的配制，取原料绿茶3～10g，蔗糖30～100g，水1000mL，用沸水冲泡茶叶和糖，保持微沸1～10min，静置使茶叶沉淀，小心取出取上清液，分装至试管、150mL或250mL三角瓶，108℃～121℃灭菌处理10～25min；
B、按两两组合用接种环从上述纯化的4株酵母菌菌株和4株醋酸菌菌株的纯培养中挑取一环混合分别接进红茶菌糖茶液中，20℃～35℃静止培养6～15天；
即管囊酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即德氏酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即毕赤氏酵母分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
结果是，酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种后均可以形成典型的带有胶膜的红茶菌液。
利用纯化取得的酿酒酵母菌菌株与醋酸菌菌株配合，采用液体菌种培养静止红茶菌和振荡通气培养红茶菌的方法即可生产出典型的具有醇、香、酸、甜特征的红茶菌液。
实施例2：
在分离纯化酿酒酵母菌的方法中，上述B步骤、D步骤中的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基配方：葡萄糖50g，酵母膏5g，CaCO315g，琼脂12g，水1000mL。
配制红茶菌糖茶液的茶为红茶
上述步骤中的糖也可以是任意几种糖类的混合物，比例任意调配。
其它同实施例1。
实施例3：
在分离纯化酿酒酵母菌的方法中，上述B步骤、D步骤中的葡萄糖酵母膏GYC固体培养基配方：蜂蜜100g，酵母膏10g，CaCO330g，琼脂20g，水1000mL。
配制红茶菌糖茶液的茶为乌龙茶，也可以是茶末、各类茶叶提取物、几种茶叶的混合物。
其它同实施例1。
Claims (5)
1、从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法，其特征在于：
(1)、从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌
A、取家庭或市售的红茶菌菌液，在无菌条件下，用取样器从菌膜下吸取0.1mL的菌液，采用0.85％生理盐水进行10倍、100倍、1000倍的梯度稀释，得三份稀释液；
B、在超净工作台上，取融化后降温至约50℃的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基倒平板，在平板中注入约20mL的培养基，在培养基中加入0.1～100mg/L浓度的抑制细菌的抗生素，待培养基凝固后，取上述三份稀释液0.05mL～0.2mL分别加入三个平板上，用三角刮铲将菌液均匀涂布于平板表面；
C、将上述制备好的平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
D、用接种环挑取经纯化的过各种典型的酵母菌菌株的菌落至另一新配置的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基平板划线，将平板置于25℃～35℃的培养箱中培养3～7天；
E、持续D步骤的操作至少2次，直至菌落完全纯化；得到20株以上纯的酵母菌菌株；
(2)、按照《微生物分类学》的方法对分离获得的多个纯的酵母菌菌株进行菌种鉴定，经鉴定获得管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌共4种酵母菌；
(3)、用斜面菌种接种静止培养红茶菌的方法以筛选酿酒酵母菌菌株
将鉴定为管囊酵母菌、酿酒酵母菌、德氏酵母菌、毕赤氏酵母菌的4株酿酒酵母菌菌株与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌共4株醋酸菌菌株分别进行两两组合接种试验，即一种酿酒酵母菌加一种醋酸菌的组合接种试验，具体操作步骤如下：
A、红茶菌糖茶液的配制，取原料茶叶3～10g，糖30～100g，水1000mL，用沸水冲泡茶叶和糖，保持微沸1～10min，静置使茶叶沉淀，取上清液，分装至试管、150mL或250mL三角瓶，108℃～121℃灭菌处理10～25min；
B、按两两组合用接种环从上述纯化的4株酵母菌菌株和4醋酸菌菌株的纯培养中挑取一环混合分别接进红茶菌糖茶液中，20℃～35℃静止培养6～15天；
即管囊酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌菌株混合接种；
即酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即德氏酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
即毕赤氏酵母分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种；
结果是，酿酒酵母菌分别与木醋酸菌、巴氏醋酸菌、液化醋酸菌、弱氧化醋酸菌混合接种后均可以形成典型的带有胶膜的红茶菌液。
2、根据权利要求1所述的红茶菌中酿酒酵母菌的分离纯化方法，其特征在于：从红茶菌菌液中分离纯化酿酒酵母菌的B步骤、D步骤中的葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基配方：糖50～100g，酵母膏5～10g，CaCO315～30g，琼脂12～20g，水1000mL。
3、根据权利要求1所述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，其特征在于：所述葡萄糖酵母膏(GYC)固体培养基和红茶菌糖茶液配方中的糖为红糖或白糖或冰糖或蔗糖或葡萄糖或饴糖或蜂蜜，或者任意几种糖类的混合物。
4、根据权利要求1所述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，其特征在于：从红茶菌菌液中分离纯化酵母菌的B步骤中的抗生素为青霉素或链霉素或氯霉素或红霉素或庆大霉素，其浓度在1～100mg/L。
5、根据权利要求1所述的红茶菌中酵母菌的分离纯化方法，其特征在于：所述的茶叶为绿茶、红茶、乌龙茶、茶末、各类茶叶提取物、几种茶叶的混合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006100399549A CN100429302C (zh) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | 从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2006100399549A CN100429302C (zh) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | 从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1935980A true CN1935980A (zh) | 2007-03-28 |
| CN100429302C CN100429302C (zh) | 2008-10-29 |
Family
ID=37953724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2006100399549A Expired - Fee Related CN100429302C (zh) | 2006-04-27 | 2006-04-27 | 从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN100429302C (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101857880A (zh) * | 2010-05-20 | 2010-10-13 | 首都博物馆 | 去除文物上结晶盐结块的生物清洗剂的制备方法及清洗方法 |
| CN102461730A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 安龙县康天生态产业开发有限责任公司 | 动物活性微生态发酵浓缩饲料和配合饲料的制作方法 |
| CN105255784A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-01-20 | 江西省蚕桑茶叶研究所 | 茶叶叶围优势菌及其应用 |
| CN107699506A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-02-16 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种红茶菌中的酿酒酵母及其应用 |
| CN112175845A (zh) * | 2020-10-19 | 2021-01-05 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一株适用于茶酒酿造的酿酒酵母及其应用 |
| CN113969242A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-01-25 | 吉林省农业科学院 | 一种高产γ-氨基丁酸的酿酒酵母菌以及在制备γ-氨基丁酸产品中的应用 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101491362B (zh) * | 2009-02-17 | 2012-06-06 | 福州大学 | 利用纯菌混合发酵生产红茶菌饮料 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6254900B1 (en) * | 1997-05-17 | 2001-07-03 | Wilhem Hansen | Method for the manufacture of cheese, quark and yogurt products from soybeans |
-
2006
- 2006-04-27 CN CNB2006100399549A patent/CN100429302C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101857880A (zh) * | 2010-05-20 | 2010-10-13 | 首都博物馆 | 去除文物上结晶盐结块的生物清洗剂的制备方法及清洗方法 |
| CN101857880B (zh) * | 2010-05-20 | 2012-05-23 | 首都博物馆 | 利用生物清洗剂清洗文物上结晶盐结块的方法 |
| CN102461730A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 安龙县康天生态产业开发有限责任公司 | 动物活性微生态发酵浓缩饲料和配合饲料的制作方法 |
| CN105255784A (zh) * | 2015-11-17 | 2016-01-20 | 江西省蚕桑茶叶研究所 | 茶叶叶围优势菌及其应用 |
| CN105255784B (zh) * | 2015-11-17 | 2018-06-29 | 江西省蚕桑茶叶研究所 | 茶叶叶围优势菌及其应用 |
| CN107699506A (zh) * | 2017-11-24 | 2018-02-16 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种红茶菌中的酿酒酵母及其应用 |
| CN107699506B (zh) * | 2017-11-24 | 2020-12-29 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一种红茶菌中的酿酒酵母及其应用 |
| CN112175845A (zh) * | 2020-10-19 | 2021-01-05 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一株适用于茶酒酿造的酿酒酵母及其应用 |
| CN112175845B (zh) * | 2020-10-19 | 2022-03-01 | 中国农业科学院茶叶研究所 | 一株适用于茶酒酿造的酿酒酵母及其应用 |
| CN113969242A (zh) * | 2021-10-28 | 2022-01-25 | 吉林省农业科学院 | 一种高产γ-氨基丁酸的酿酒酵母菌以及在制备γ-氨基丁酸产品中的应用 |
| CN113969242B (zh) * | 2021-10-28 | 2023-09-26 | 吉林省农业科学院 | 一种高产γ-氨基丁酸的酿酒酵母菌以及在制备γ-氨基丁酸产品中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN100429302C (zh) | 2008-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101503655B (zh) | 一种提高浓香型白酒陈香味的人工窖泥制备方法 | |
| CN100448978C (zh) | 采用纯菌组合工业化强制通气快速生产红茶菌的工艺方法 | |
| CN101445776B (zh) | 以味为主的白酒调味酒或白酒调味液的制备方法 | |
| CN109439557A (zh) | 高产酸、低产杂醇油酿酒酵母菌及其组合物和应用 | |
| CN100429302C (zh) | 从红茶菌中分离纯化酿酒酵母菌的方法 | |
| CN106754580B (zh) | 可同时促进酿酒酵母产酒精和风味物质的芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102960663A (zh) | 一种制作浆水菜的方法 | |
| CN102352323A (zh) | 产酯酵母及用该酵母生产小曲清香型调味酒的方法和应用 | |
| CN110923171B (zh) | 一株去除黑木耳土腥味的乳酸菌及其酵素制备方法 | |
| CN115386509B (zh) | 一种植物乳杆菌mmb05及其在发酵海苔下脚料制备紫菜酱的应用 | |
| CN100445368C (zh) | 红茶菌中木醋酸菌的分离纯化方法 | |
| CN102987063B (zh) | 一种有机酸动物生长调节剂及其制备方法 | |
| KR20120121282A (ko) | 매생이를 이용한 돈가스 소스의 제조 방법 | |
| CN109666616A (zh) | 高产乙偶姻及增香莫海威芽孢杆菌直投式发酵剂的制备方法及在山西老陈醋生产中的应用 | |
| CN105661415A (zh) | 蔬菜生物发酵生产方法 | |
| CN109182151A (zh) | 银杏内生真菌的分离筛选方法 | |
| CN103005382A (zh) | 降胆固醇菌粉，含有该菌粉的降胆固醇复合调味酱及其应用 | |
| CN103190585B (zh) | 一种新的芽菜生产工艺 | |
| CN112111434A (zh) | 一种优良乳酸菌、筛选方法及其在小曲制作中的应用 | |
| CN111607621A (zh) | 一种产玫瑰花香的酵母及其在灵武长枣酵素中的应用 | |
| CN101565724B (zh) | 极细枝孢霉生物合成茶黄素粗提物的方法 | |
| CN106479923A (zh) | 一株同时降解精氨酸和尿素的发酵乳杆菌 | |
| CN114027089B (zh) | 一种提高食用菌菇风味的方法与应用 | |
| CN102093960B (zh) | 一种高产β-葡萄糖苷酶产香酵母及在无醇苹果饮料的应用 | |
| CN103805520A (zh) | 一株高酸性蛋白酶华根霉及培养方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20081029 Termination date: 20150427 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |