CN1876022A - 丹灯脑通药物制剂及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种丹灯脑通药物制剂及其制备方法和质量控制方法，它用丹参、灯盏细辛、川芎、葛根与辅料制作成，对于中风等脑血管疾病具有有效的治疗效果；与现有技术相比，本发明提供的滴丸，可以掩盖药物的不良口味、气味，并且起到增加稳定性、改善生物利用度的作用；本发明提供的质量控制方法能够科学合理的指导生产，保证产品的治疗效果。

Description

丹灯脑通药物制剂及其制备方法和质量控制方法

技术领域：本发明是一种丹灯脑通药物制剂及其制备方法和质量控制方法，它用丹参、灯盏细辛、川芎、葛根与辅料制作而成，属于中药的技术领域。

背景技术：中风是亚洲第二号杀手，每年有超过二百万人死于中风。无论世界不同地区或不同种族，脑血管意外都是死亡和致残的主要原因。我国每年新发完全性脑中风120-150万人，死亡者80-100万人，存活者中约75％致残，5年内复发率高达41％。美国每年有50万人发病，其中15万人死亡。存活者中需要医疗照顾的200余万人。所以许多发明人及药品企业对其做了大量的研究，也提供了一些治疗的产品；如：已上市的、用丹参、灯盏细辛、川芎、葛根制作成的丹灯通脑胶囊、软胶囊，这个产品处方中含有的葛根中含大量淀粉，水为提取溶剂时，提取液中溶有大量的淀粉、纤维素及糖类，致液粘稠，不仅造成固液分离困难，而且吸湿性强，致使胶囊剂的内容物容易粘结，产品稳定性较差。药典规定软胶囊剂的崩解时间是1小时内，并且由于胶皮的老化常常出现崩解延迟的现象，而中风是急重症，需要起效时间短，生物利用度高的剂型。鉴于这些情况，需要寻找一种治疗效果理想，工艺先进，生物利用度高的丹灯脑通药物制剂。并且为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，需要深入研究控制该药物制剂质量的方法。

发明内容：本发明的目的在于：提供一种对用丹参、灯盏细辛、川芎、葛根与辅料制作而成的丹灯脑通药物制剂及其制备方法和质量控制方法；本发明提供的滴丸，提高药物生物利用度，增加药物抗湿性；本发明提供的质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等；以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。

本发明是这样构成的：它用丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g与辅料制作成注射液、粉针、冻干粉针、凝胶剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、凝胶剂、口服液体制剂、煎膏剂、浸膏剂或膜剂。准确的说：所述制剂为滴丸剂。

所述的丹灯脑通药物制剂的制备方法：取川芎、葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，在制成其他制剂。所述制剂中的滴丸剂这样制备：取川芎、葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加入聚乙二醇4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴制，收集滴丸，除去表面的甲基硅油，包装，即得滴丸剂。所述制剂中的滴丸剂这样制备：主药∶聚乙二醇4000＝1∶1.2、以二甲硅油为冷却剂、冷却剂温度为10～20℃、滴头口径为内径4.0毫米/外径5.0毫米、滴距为4～6cm、滴速30～40d/min、料温70～80℃。

所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法：该方法包括以下全部或部分内容：

(1)丹参药材、灯盏细辛药材、葛根药材、川芎药材、丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮II_A、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的鉴别测试方法；

(2)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮II_A、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的含量测试方法，

(3)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮II_A、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的溶出度测试方法。

所述药物制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参、丹参酮II_A中一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，用乙醚或30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或二氯甲烷或三氯甲烷或醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮II_A对照品中的一种或两种，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，同法制成对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解并稀释至合适浓度，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯或三氯甲烷或二氯甲烷2～40∶0.2～5为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

b、丹灯脑通药物制剂中丹参酮II_A的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇或流动相溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％：95％～5％为流动相，流速为0.5～2ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

c、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，滤过，滤液浓缩，作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的醋酸乙酯或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm或日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

d、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10％～50％∶2％～30％∶88％～20％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

e、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的薄层色色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品中一种或两种的甲醇或乙醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸1～25∶0.2～5∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或冰醋酸2～25∶1～22∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm或日光下检视或喷以三氯化铁与铁氰化钾的混合溶液后日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

f、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐或原儿茶醛中一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水或甲醇或乙醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

g、丹灯脑通药物制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷对照品中的一种或两种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和灯盏细辛对照药材溶液、野黄芩苷对照品溶液的一种或两种各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3％～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液或0.3～10％三氯化铁乙醇溶液，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视或105℃烘1～15分钟后置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

h、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L用1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0的磷酸二氢钠梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

i、丹灯脑通药物制剂中葛根、葛根素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材，加甲醇或乙醇提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～30∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

j、丹灯脑通药物制剂中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

k、丹灯脑通药物制剂中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、川芎嗪中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材，加乙醚或30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇使溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF₂₅₄薄层板上，以正己烷或环己烷或丙酮或丁酮-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯1～40∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇0.5～10∶0.5～10∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm或254nm下检视或喷以三氯化铁-铁氢化钾溶液后日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色荧光斑点或斑点；

l、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或甲醇-甲酸混合溶液溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加乙醚或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液挥干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇-乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液2％～20％∶10％∶40％∶88％～40％或甲醇或乙腈-0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液-甲酸或冰醋酸或磷酸5～95∶95～5∶0.2～5为流动相，检测波长为200～410nm；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

准确的说：所述药物制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参、丹参酮II_A的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮II_A对照品中的一种或两种，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯19∶1为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、丹灯脑通药物制剂中丹参酮II_A的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

c、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加75％甲醇溶液溶解，作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

e、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的薄层色色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取丹参素纳和原儿茶醛对照品中的一种或两种，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的2％三氯化铁与1％铁氰化钾等体积的混合液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

f、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温30℃，供试品色谱中，与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

g、丹灯脑通药物制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇提取，离心，取上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

h、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

i、丹灯脑通药物制剂中葛根、葛根素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚超声处理，滤过，弃去石油醚层，残渣挥干溶剂后加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材，加甲醇提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水3∶4.4∶8∶2为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，显相同颜色斑点；

j、丹灯脑通药物制剂中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

k、丹灯脑通药物制剂中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、阿魏酸中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；

l、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，提取液挥干，残渣加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

所述药物制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水或甲醇或乙醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项：

(1)每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于1.3mg；

(2)每单位量含原儿茶醛的限度不得少于0.5mg；

(3)每单位量含丹参素或其钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于1.8mg；

b.丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10％～50％∶2％～30％∶88％～20％为流动相，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于0.7mg；

c、丹灯脑通药物制剂中丹参酮II_A的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇或流动相溶解活哦稀释至合适刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮II_A的限度不得少于0.05mg；

d、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于2mg；

e、丹灯脑通药物制剂中葛根素的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加石油醚(30～60℃)或石油醚(60～90℃)或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去石油醚(30～60℃)或石油醚(60～90℃)或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，检测波长为190～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素的限度不得少于35mg；

f：丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或甲醇-甲酸混合溶液溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加乙醚或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液挥干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇-乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液2％～20％∶10％∶40％∶88％～40％或甲醇或乙腈-0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液-甲酸或冰醋酸或磷酸5～95∶95～5∶0.2～5为流动相，检测波长为200～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸的限度不得少于4.5mg。

准确的说：所述药物制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a.丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的含量测定：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，检测波长为280nm，柱温30℃，以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项：

(1)每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于2.6mg；

(2)每单位量含原儿茶醛的限度不得少于1.0mg；

(3)每单位量含丹参素或其钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于3.6mg；

b、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于1.4mg；

c、丹灯脑通药物制剂中丹参酮II_A的含量测定：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮II_A的限度不得少于0.1mg；

d、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于4mg；

e、丹灯脑通药物制剂中葛根素的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素的限度不得少于70mg；

f、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，提取液挥干，残渣加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸的限度不得少于9mg。

所述药物制剂的溶出度测试方法应为：取本品，照溶出度测定法，以脱气处理的水为溶出介质，转速为每分钟50～100转，经15～30分钟时，取溶液5～20ml，立即用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取本品，加水定容，超声处理5分钟，取出，放至室温，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照溶液，按含量测定项下的色谱条件，精密吸取上述两种溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，计算每粒的溶出量，葛根素溶出度不得少于80％，应符合规定。

与现有技术相比，本发明提供的滴丸，可以掩盖药物的不良口味、气味，并且起到增加稳定性、改善生物利用度的作用；并且本发明能更加完善的控制由丹参、灯盏细辛、葛根、川芎制成的药物制剂的质量。中药成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断其药效的指标成分。因此本申请人制定了鉴别和含量测定来全面控制药物制剂的质量。但是由于药物制剂中的各药材之间所含的化学成分复杂，对鉴别和含量测定造成干扰，导致鉴别、含量测定和特征不稳定，所以必须控制流动相、展开剂等色谱条件，才能得到良好的薄层色谱和含测条件。也就是说，由于处方中各成分相互之间的干扰影响，只有采用本发明的条件，才能得到理想的薄层色谱和含测条件。

通过一系列实验，以选择本发明提供的药物制剂的制备工艺、使用的辅料种类及用量、比例等；保证其科学、合理、可行；得到的制剂具有有效的治疗效果。

实验例1：提取工艺研究

(1)因素选择：根据长期实践得知，中药煎煮提取效果受到加水量、提取时间、提取次数等因素的影响。因现有的提取工艺已对提取时间、提取次数进行了考察，故在川芎、葛根药材煎煮和丹参、灯盏细辛药材浸渍考察时，选取加水量作为因素，重点考察因素的不同水平对煎煮提取效果的影响。结合生产成本、能源等方面进行综合考虑，选择因素水平。

(2)指标确定：葛根选择浸膏收得率及葛根素含量作为评价指标，川芎、丹参和灯盏细辛选择浸膏收得率为评价指标。浸膏是固体制剂发挥疗效的物质基础，其收率高低直接影响制剂工艺，故选择为提取指标是合理、有效的控制手段。

(3)煎煮试验：称取川芎和葛根药材各200g混匀，共3份，分别加水煎煮三次，第一次1小时，第二、三次0.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，称定膏重，并测定所得浸膏中葛根素的含量，试验结果见下表。

                加水量考察结果表

试验号	加水量(倍)	浸膏收得率(％)	葛根素含量(％)
				1	6	13.37	10.41
2	8	20.67	8.19
				3	10	20.86	8.09

由上表可见：加水量为10倍和8倍量时浸膏收得率和葛根素含量较高，而两者之间没有明显的区别，在保证有效成分提取充分的前提下，为了节约成本和缩短工时，确定提取加水量为8倍量。

(4)浸渍试验：称取丹参500g，共3份，分别加入85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏，称定膏重，试验结果见下表。

            丹参提取溶剂用量考察

试验号	溶剂用量(倍)	膏重(g)	浸膏收得率(％)
				1	6	34.80	6.96
2	8	52.70	10.54
				3	10	53.55	10.71

从上面的试验结果可以看出，加10倍溶剂和加8倍溶剂所得浸膏量比较接近，说明采用8倍量即可将药材提取充分，因此确定提取溶剂用量为8倍。

称取灯盏细辛500g，共3份，分别加入75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏，称定膏重，试验结果见下表。

            灯盏细辛提取溶剂用量考察

试验号	溶剂用量(倍)	膏重(g)	浸膏收得率(％)
				1	4	25.20	5.04
2	6	31.55	6.31
				3	8	32.40	6.48

从上面的试验结果可以看出，加8倍溶剂和加6倍溶剂所得浸膏量比较接近，说明采用6倍量即可将药材提取充分，因此确定提取溶剂用量为6倍。

实验例2：成型工艺研究

2.1制剂处方设计和筛选

滴丸水溶性基质有聚乙二醇4000和聚乙二醇6000，由于我们提取的药膏大部分为水溶性成分，因此我们决定也采用聚乙二醇为基质，并对这两者进行比较试验。将不同型号的聚乙二醇置小烧杯内，加热至80-90℃，待全部熔融后，加入浸膏粉，考察基质与浸膏粉的的融合情况，选择融合情况较好的处方进行滴制(滴制条件：料温80℃，冷却剂为二甲基硅油，滴距6cm，滴速30～40滴/分)，结果见下表。

                        基质与主药的融合情况比较

处方号	处方1	处方2	处方3	处方5	处方6	处方7
							浸膏粉(g)	10	10	10	10	10	10
聚乙二醇4000(g)	10	12	15	----	----	----
							聚乙二醇6000(g)	----	----	----	10	12	15
主药∶基质	1∶1	1∶1.2	1∶1.5	1∶1	1∶1.2	1∶1.5
							主药与基质的融合情况	主药能与基质融合，但体系无流动性	主药能与基质融合，体系流动性很好	主药能与基质融合，体系流动性很好	主药与基质融合较差	主药能与基质融合，但体系无流动性	主药能与基质融合，体系流动较好
滴丸外观	----	光滑，圆整度好	光滑，圆整度好	----	圆整度差，严重拖尾	圆整度差，拖尾
							滴丸硬度	----	硬度较好	硬度较好	----	硬度较好	硬度较好

丸重差异		4.6％	7.0％		----	18％
							溶散时限(min)	----	6～8	7～9	----	----	12～18

上述结果表明，处方2熔融药液的流动性好，滴丸成型性好，光滑、圆润，丸重差异小，溶散较快，故选2号处方为最优。

2.2冷却剂选择

取药材的浸膏粉10g，聚乙二醇4000 12g，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，取适量，分别滴入二甲硅油和液体石蜡冷却剂中，以滴丸的成型情况为指标，结果见下表。

                                冷却剂选择

冷取剂种类	冷却剂温度	滴距	滴速	料温	滴丸成型情况
						二甲基硅油	15℃	6cm	30～40d/min	80℃	圆整度好，成型好
液体石蜡	15℃	6cm	30～40d/min	80℃	滴丸拖尾，形状较差

上表表明，以二甲硅油为冷却剂滴丸圆整度好，成型好。

2.3冷却剂温度选择

取三种药材的浸膏粉10g，聚乙二醇4000 12g，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，取适量，分别滴入不同温度的二甲硅油冷却剂中，观察滴丸成型情况，结果见下表。

                    冷却剂温度选择

冷却剂温度	滴距	滴速	料温	滴丸成型情况
					10℃	6cm	30～40d/min	80℃	圆整度好，成型好
20℃	6cm	30～40d/min	80℃	圆整度好，成型好
					梯度冷却	6cm	30～40d/min	80℃	圆整度好，成型好

注：梯度冷却方法为：上部为10～20℃，下部为5～10℃。

上表表明，在上述三种冷却温度下，本品的成型性均良好，为简便操作，故选择冷却剂温度为10～20℃。

2.4滴头口径选择

取药材的浸膏粉10g，聚乙二醇4000 12g，按制法制得熔融药液，分别选择不同口径的滴管，滴制成丸，以丸型圆整度，硬度、拖尾为指标，结果见下表。

                    滴头口径选择

口径(内/外mm/mm)	丸重(mg)	圆整度	硬度	拖尾
					3.5/4.5	40	+++	+	不托尾

4.0/5.0	60	+++	+++	不托尾
					4.5/5.5	75	-	+	托尾

注：+++示很好；++示较好；+示一般；？示差

上述结果表明，滴头口径为4.0/5.0(内/外mm/mm)的滴头所滴制的滴丸圆整度和硬度等外观指标较好，故选择滴头口径为4.0/5.0(内/外mm/mm)。

2.5滴距选择

取药材的浸膏粉10g，聚乙二醇4000 12g，按制法制得熔融药液，分别以不同的滴距滴制，考察所得滴丸的丸重差异和外观形状，结果见下表。

                滴距选择

滴距(cm)	重量差异	滴丸外观
			2	------	滴丸粘连，圆整度差
4	6％	滴丸外观圆整，表面光滑
			6	8％	滴丸外观圆整，表面光滑
8	17％	滴丸外观圆整，表面光滑

上表表明，当滴距在4～6cm时，滴丸外观圆整，表面光滑，重量差异小，故选择滴距为4～6cm。

2.6熔融药液温度(料温)、滴制速度选择

取药材的浸膏粉10g，聚乙二醇4000 12g，按制法制得熔融药液，按下表的料温和滴制速度(其余条件按制法)进行滴制，结果见下表。

                熔融药液温度(料温)、滴制速度选择

序号	滴速(d/min)	料温(℃)	平均丸重(mg)	平均丸重-60(mg)	滴丸外观
						1	20～30	60～70	57.6	-2.4	圆整、美观
2	20～30	70～80	58.1	-1.9	圆整、美观
						3	20～30	80～90	56.8	-3.2	圆整、美观
4	30～40	60～70	61.7	1.7	圆整、美观
						5	30～40	70～80	60.4	0.4	圆整、美观
6	30～40	80～90	60.8	0.8	圆整、美观
						7	40～50	60～70	66.3	6.3	圆整度稍差
8	40～50	70～80	64.4	4.4	圆整度稍差
						9	40～50	80～90	65.1	5.1	圆整度稍差

从上表可知，当选用滴速30～40d/min、料温70～80℃时，所得丸重与目标丸重最接近，滴丸外观圆整、美观。故选择滴速30～40d/min、料温70～80℃。

实验例3：药效学实验

3.1对瘀血阻络所致的中风治疗作用的研究

取体重250±20g的雌性SD大鼠，用氯氨酮75mg/kg腹腔注射麻醉，于右侧眼外眦至耳缘切开皮肤，切除部分颞肌，于颧弓眼侧上方钻一直径为0.5cm的小孔。暴露软脑膜，可见大脑中动脉主干及两个分枝呈“Y”状，用电凝器灼断大脑中动脉主干，如主干位置偏大脑腹侧不易操作，则同时灼断其两分枝。缝合切口，肌注青霉素钠100单位/次，每日2次，共3d。术后2h，检查动物有无神经系统症状，凡提尾时大脑中动脉阻断对侧前肢屈曲、抓力明显下降阳性者用于实验。

将筛选出的动物随机分成7组：模型组，术后2h，灌胃给予含0.5％CMC-Na的生理盐水；丹灯通脑胶囊组、丹灯通脑软胶囊组、本发明滴丸组、本发明分散片组及本发明颗粒组，术后2h，分别灌胃给予16.0mg/ml生药的相应药物悬液；假模型组(手术同模型组，但不电凝灼断大脑中动脉)，术后2h，灌胃给予含0.5％CMC-Na的生理盐水，以上各组灌胃1ml/100g大鼠，每日1次，共5d。

①行为指标

待造模后24h，进行行为学检测，评分标准如下：a、提鼠尾，左前肢脚掌蜷曲者1分；脚掌蜷曲加左前肢内收者2分；脚掌蜷曲加左肩内旋者3分；脚掌蜷曲加左前肢内收，左肩内旋者4分。b、将大鼠置光滑平面，推右背向左侧移动，根据阻力降低的程度分1～3分。c、将大鼠两前肢置一金属网上，后肢悬空，拉鼠尾，两前肢能抓住网者0分；左前肢肌张力下降，先后前肢松开者1分；左前肢勉强抓住网者2分；左前肢完全抓不住网者3分。共10分。实验结果见下表。

    对大脑中动脉阻塞模型大鼠行为指标的影响

组别	n	剂量(g/kg)	行为指标得分
				模型组假模型组丹灯通脑胶囊组丹灯通脑软胶囊组本发明滴丸组本发明分散片组	101010101010	————0.160.160.160.16	7.2±1.6——5.2±0.55.0±1.24.8±1.15.0±0.7

本发明颗粒组

10

0.16

5.0±0.9

动物造模后2h内即出现明显症状，主要表现为跛行和手术对侧瘫痪。以上结果表明，经市售的丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊、本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒治疗，动物造模后24h症状明显改善，且本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒的改善程度不低于市售的丹灯通脑胶囊和丹灯通脑软胶囊。

②梗死面积测定

第5天给药后1h，断头取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，将其余部分冠状切成5片，置5ml染色液中(含有4％TTC1.5ml，1mol/L K₂HPO₄0.1ml及双蒸水3.4ml)，避光，置37℃恒温水浴中孵育30min，正常组织染成红色，梗死组织为白色，计算出梗死指数(梗死面积占大脑半球面积的百分比)。具体数据见下表。

        对大鼠大脑中动脉阻塞模型梗死面积的影响

组别	n	剂量(g/kg)	梗死指数(％)
				模型组假模型组丹灯通脑胶囊组丹灯通脑软胶囊组本发明滴丸组本发明分散片组本发明颗粒组	10101010101010	————0.160.160.160.160.16	33.5±2.4——30.3±1.826.1±3.923.9±4.223.8±3.029.6±2.6

以上实验结果表明，市售的丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊、本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒均能显著减小模型大鼠脑梗死面积，降低梗死指数，且本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒的治疗与丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊想比无明显差别，甚至更优于市售的丹灯通脑胶囊和丹灯通脑软胶囊。

③病理学检查

经TTC染色后的脑片置10％甲醛溶液固定，经脱水、浸蜡、包埋、切片等步骤后，制成8μm厚的组织切片，甲苯胺蓝染色，在光学显微镜下进行检查，并进行细胞计数。计数方法：选择每只大鼠大脑矢状切面视交叉与漏斗柄连线中点处的病理切片，以固定范围的皮层下基底节为观察对象，用图像处理仪计数细胞数，每个切片观察三个视野，以细胞核消失、细胞体暗染的坏死神经元为计数对象，计算神经元坏死指数(坏死神经元数占总神经元数的百分比)。具体数据见下表。

    对大鼠大脑中动脉阻塞中风模型梗死侧纹状体神经元的影响

组别	n	剂量(g/kg)	神经元坏死指数(％)
				模型组假模型组丹灯通脑胶囊组丹灯通脑软胶囊组本发明滴丸组本发明分散片组本发明颗粒组	10101010101010	————0.160.160.160.160.16	38.11±2.06——24.18±3.4019.88±1.6918.01±1.4716.02±0.9019.64±2.48

病理学检查结果表明，梗死侧脑组织表现为大量神经元周围间隙扩大，出现散在的暗染神经元，神经细胞出现不同程度的皱缩。经市售的丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊、本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒治疗后，纹状体坏死神经元数占总神经元数的百分比明显减少，且本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒的治疗与市售的丹灯通脑胶囊、丹灯通脑软胶囊相比较、更优于市售的丹灯通脑胶囊和丹灯通脑软胶囊。以上实验结果提示说明本发明滴丸、本发明分散片及本发明颗粒可有效用于血瘀缺血所致中风疾病的治疗。

实验例4质量控制方法的考察

4.1丹灯脑通滴丸中丹参、丹参酮II_A的薄层色谱鉴别方法：

为了突出丹参的特征，选择了丹参、丹参酮II_A作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与丹参酮II_A结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对丹参酮II_A进行了展开：

条件	问题
		甲苯-正己烷-甲醇-水(15∶5∶5∶1)硅胶H薄层板	对照品展开至前沿
苯-环己烷-乙醇-甲酸(15∶10∶1∶1)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		环己烷-甲酸乙酯-甲醇(10∶5∶6)硅胶G薄层板	对照品展开至前沿
正己烷-醋酸乙酯-甲醇(15∶5∶1)硅胶GF254薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		甲苯-甲醇(10-0.8)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
苯-甲醇(15-0.8)硅胶G薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		苯-醋酸乙酯(19∶1)硅胶G薄层板	分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以苯-醋酸乙酯(19∶1)硅胶G薄层板为展开剂，在此条件下，丹参酮II_A的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.2丹灯脑通胶囊中丹参酮II_A的液相色谱鉴别方法：

为了突出丹参的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了丹参酮II_A作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与丹参酮II_A结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对丹参酮II_A进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠(80∶20)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠(40∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(75∶25)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠(70∶30)十八烷基硅烷键合硅胶	峰形不太对称
		乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(70∶30)十八烷基硅烷键合硅胶	峰形不太对称
甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(80∶20)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶25)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-1％冰醋酸水溶液(75∶25)为流动相，在此条件下，丹参酮II_A保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.3丹灯脑通滴丸中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

为了突出丹参的特征，选择了丹酚酸B或其镁盐作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与丹酚酸B或其镁盐结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对丹酚酸B或其镁盐进行了展开：

条件	问题
		苯-甲醇-醋酸乙酯(50∶10∶3)硅胶GF254薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
甲苯-甲醇-醋酸甲酯(50∶10∶3)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		氯仿-正己烷-甲酸(50∶20∶5)硅胶G薄层板	对照品展开至前沿
二氯甲烷-甲醇(5∶2)硅胶G薄层板	对照品展开至前沿
		醋酸乙酯-正己烷-丙酮(5∶3∶5)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
苯-甲酸乙酯-甲酸(60∶10∶2)硅胶G薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)硅胶GF254薄层板	分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶GF₂₅₄薄层板为固定相，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开剂，在此条件下，丹酚酸B或其镁盐的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.4丹灯脑通微丸中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

为了突出丹参的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了丹酚酸B或其镁盐作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与丹酚酸B或其镁盐结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对丹酚酸B或其镁盐进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠(40∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠(30∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
		甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(25∶75)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾(30∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		乙腈-0.005mol/L磷酸氢二钠(20∶80)八烷基硅烷键合硅胶	峰有分叉，
乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸(25∶10∶65)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液(30∶10∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液(30∶10∶60)为流动相，在此条件下，丹酚酸B或其镁盐保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.5丹灯脑通软胶囊中丹参素或其钠盐、原儿茶醛的薄层色谱鉴别方法：

为了突出丹参的特征，选择了丹参素或其钠盐、原儿茶醛作为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与丹参素或其钠盐、原儿茶醛结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开：

条件	问题
		环己烷-氯仿-甲醇(5∶3∶5)硅胶G薄层板	对照品展开至前沿
正己烷-醋酸乙酯-甲醇(5∶3∶4)硅胶H薄层板	对照品展开至前沿
		二甲苯-甲酸乙酯(3∶2)硅胶GF254薄层板	阴性有干扰
正己烷-醋酸乙酯-甲酸(2∶1∶1)硅胶G薄层板	阴性有干扰
		甲苯-醋酸乙酯-丙酮(6∶4∶1)硅胶H薄层板	阴性有干扰
苯-甲酸乙酯(10∶9)硅胶H薄层板	阴性有干扰
		苯-醋酸乙酯-甲酸(8∶7∶2)硅胶GF254薄层板	分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶GF₂₅₄薄层板为固定相，以苯-醋酸乙酯-甲酸(8∶7∶2)为展开剂，在此条件下，丹参素或其钠盐、原儿茶醛的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.6丹灯脑通分散片中丹参素或其钠盐、原儿茶醛的液相色谱鉴别方法

为了突出丹参的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了丹参素或其钠盐、原儿茶醛作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与丹参素或其钠盐、原儿茶醛结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对丹参素或其钠盐、原儿茶醛进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠(20∶80)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠(15∶85)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
		甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(17∶83)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(14∶86)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(12∶4∶84)八烷基硅烷键合硅胶	峰有分叉，
乙腈-四氢呋喃-0.5％磷酸酸水溶液(15∶5∶80)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)为流动相，在此条件下，丹参素或其钠盐、原儿茶醛保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.7丹灯脑通片中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

为了突出灯盏细辛的特征，选择了灯盏细辛对照药材、野黄芩苷作为其特征，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对野黄芩苷进行了展开：

条件	问题
		正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5-5-10-4)硅胶H薄层板	对照品展开至前沿
醋酸乙酯-苯-乙酸(5-4-3)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		醋酸乙酯-苯-甲酸(5-4-3)硅胶G薄层板	对照品未分开，阴性有干扰

氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7-2-4)硅胶GF254薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
		甲苯-醋酸乙酯(8-1)硅胶H薄层板	对照品未分开，阴性有干扰
甲醇-醋酸乙酯-甲酸(10-5-0.5)硅胶G薄层板	对照品展开至前沿
		甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)聚酰胺膜	分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以聚酰胺膜为固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)为展开剂，在此条件下，野黄芩苷的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.8丹灯脑通滴丸中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

为了突出灯盏细辛的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了野黄芩苷作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对野黄芩苷进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(80∶20)八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠(40∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	峰形不太对称
		甲醇-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	峰形不太对称
		甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)为流动相，在此条件下，野黄芩苷保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.9丹灯脑通滴丸中葛根、葛根素的一种或两种薄层色谱鉴别方法：

为了突出葛根的特征，选择了葛根、葛根素作为其特征斑点，但是由于药物组合物中存在较多与葛根素结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对葛根素进行了展开：

条件

问题

醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸(10-3-4)硅胶H薄层板	对照品展开至前沿
		正丁醇-甲醇-苯(4∶3∶10)硅胶GF254薄层板	阴性有干扰
三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(5∶2∶3∶2)硅胶GF254薄层板	分离清晰，但Rf值不合适
		醋酸乙酯-甲醇-甲苯(8-3-6)硅胶G薄层板	阴性有干扰
二氯甲烷-醋酸乙酯-苯(7-4-4)硅胶H薄层板	阴性有干扰
		三氯甲烷-乙醇-水(5-4-3)硅胶GF254薄层板	阴性有干扰
三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(3∶4.4∶8∶2)硅胶G薄层板	分离清晰，Rf值适中，阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水(3∶4.4∶8∶2)为展开剂，在此条件下，葛根素的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.10丹灯脑通滴丸中葛根素的液相色谱鉴别方法：

为了突出葛根的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了葛根素作为其特征成分，但是由于药物组合物中存在较多与葛根素结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对葛根素进行了分离：

条件	问题
		甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾(30∶70)二烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快
乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾(20∶80)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钠(20∶80)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钠(30∶70)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		乙腈-0.1％磷酸(13∶87)十八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过慢
乙腈-1％醋酸(20∶80)八烷基硅烷键合硅胶	出峰时间过快，峰行尖锐，对称，阴性无干扰
		甲醇-1％冰醋酸(23∶77)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-1％冰醋酸(25∶75)为流动相，在此条件下，葛根素保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.11丹灯脑通颗粒中川芎药材、阿魏酸中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

为了突出川芎的特征，选择了川芎对照药材、阿魏酸作为其特征，但是由于药材中存在较多与阿魏酸结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对阿魏酸进行了展开：

条件	问题
		正己烷-苯-甲酸乙酯(4-3-5)硅胶H薄层板	对照品展开至前沿
二甲苯-醋酸乙酯-甲酸(7-1-1)硅胶H薄层板	阴性有干扰
		甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(6-1-2)硅胶G薄层板	阴性有干扰
氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7-2-4)硅胶GF254薄层板	阴性有干扰
		甲苯-醋酸丁酯(7-2)硅胶H薄层板	阴性有干扰
环己烷-醋酸乙酯-甲酸(10-3-1)硅胶G薄层板	Rf值过低
		正己烷-醋酸乙酯(9∶1)硅胶G薄层板	分离清晰，Rf值适中阴性无干扰

经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以正己烷-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，在此条件下，阿魏酸的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无干扰。

4.12丹灯脑通颗粒中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

为了突出灯盏细辛的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了阿魏酸作为其特征成分，但是由于药材中存在较多与阿魏酸结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对阿魏酸进行了分离：

条件	问题
		甲醇-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(50∶30∶20)八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(25∶15∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-四氢呋喃-0.5％甲酸水溶液(20∶20∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-四氢呋喃-0.5％甲酸水溶液(20∶15∶65)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
		甲醇-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(40∶10∶50)十八烷基硅烷键合硅胶	阴性有干扰
乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(30∶10∶60)十八烷基硅烷键合硅胶	峰形不太对称
		甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸(45∶55∶2)十八烷基硅烷键合硅胶	保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰

经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸(45∶55∶2)为流动相，在此条件下，阿魏酸保留时间适中，峰行尖锐，对称，阴性无干扰。

4.13丹灯脑通滴丸中丹参素钠、原儿茶醛的含量测定方法

1、仪器、试剂

仪器：

SHIMADZU     10A           高效液相色谱仪

普析通       TU-1810SPC    紫外/可见分光光度仪

SARTORIUS    BP211D        电子分析天平

KQ250DB                    超声波清洗机

试剂：

甲醇         分析纯        北京市通广精细化工公司

冰醋酸       分析纯        北京化学试剂公司

纯净水       娃哈哈

2、色谱分析条件

色谱仪：SHIMADZU      10A           HPLC

固定相：Kromasil-C18  250mm×4.6mm  5μm

流动相：甲醇-1％冰醋酸水溶液(13∶87)

流速：1ml/min

柱温：25℃

检测波长：280nm

3、系统适用性试验根据上述仪器条件得到的丹参素钠、原儿茶醛对照品、样品色谱图，其理论板数以丹参素钠计算大于2500。样品中丹参素钠、原儿茶醛与相近峰分离清晰完全，分离度大于1.5。

4、阴性干扰试验为考察其它药材是否干扰丹参素钠、原儿茶醛的测定，取阴性对照品(缺丹参)与供试品溶液同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对丹参素钠、原儿茶醛的含量测定无干扰，

5、测定波长的选择精密称取丹参素钠2.03mg、原儿茶醛1.86mg，分置100ml棕色量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，在200nm～400nm的波长范围内进行扫描。结果表明，丹参素钠、原儿茶醛均在280nm处有最大吸收，因此选择280nm作为测定丹参素钠、原儿茶醛含量的检测波长。

6、线性关系的考察精密称取丹参素钠8.65mg，原儿茶醛4.02mg，共置10ml棕色量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取0.25、0.75、1.25、1.75、2.25ml，分置10ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。分别以的量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线。

丹参素钠

回归方程Y＝7910186.8208X-4661.7000

决定系数γ＝0.9999

丹参素钠在0.21625～1.94625μg范围内线性良好。

        丹参素钠线性关系

编号	丹参素钠量(μg)	峰面积
			1	0.21625	166983
2	0.64875	509520.5
			3	1.08125	844328.5
4	1.51375	1194569.5
			5	1.94625	1533237.5

原儿茶醛

回归方程Y＝2426365.1741X+2949.9000

决定系数γ＝0.9999

原儿茶醛在0.1005～0.9045μg范围内线性良好。

        原儿茶醛线性关系

编号	原儿茶醛量(μg)	峰面积
			1	0.1005	243789
2	0.3015	732048
			3	0.5025	1228843
4	0.7035	1716004
			5	0.9045	2190308

7、精密度和对照品溶液试验精密称取丹参素钠8.58mg，原儿茶醛4.07mg，共置100ml棕色量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时重复测定一次。

                精密度和对照品溶液试验

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								丹参素钠	668979	668960	667139	669452	673633	669633	0.36
原儿茶醛	996402	994317	996085	995589	993032	995085	0.14

结果表明，对照品溶液精密度良好，在24小时内稳定。

8、供试品溶液的稳定性试验取重量差异项下本品，研细，精密称取1.05227g，置10ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时重复测定。

                                供试品稳定性试验

时间(h)	0	2	6	10	24	均值	RSD(％)
								丹参素钠(mg/g)	0.8254	0.7996	0.8135	0.8302	0.8117	0.8161	1.48
原儿茶醛(mg/g)	0.3617	0.3662	0.3579	0.3684	0.3625	0.3633	1.12
								合计(mg/g)	1.187	1.166	1.171	1.199	1.174	1.179	1.12

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

9、重复性试验取重量差异项下本品，研细，从中取约1g(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

                            重复性试验

编号	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								丹参素钠(mg/g)	0.8302	0.8257	0.8196	0.8224	0.8359	0.8268	0.78
原儿茶醛(mg/g)	0.3771	0.3645	0.3726	0.3768	0.3755	0.3733	1.40
								合计(mg/g)	1.207	1.190	1.192	1.199	1.211	1.200	0.77

结果表明，供试品重复性良好。

10、加样回收率试验采用加样回收法，取重量差异项下本品，研细，从中取约0.5g(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中；精密称取丹参素钠对照品10.19mg，原儿茶醛对照品5.04mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，分置上述10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

丹灯脑通滴丸中丹参素钠含量为0.8268mg/g；

丹灯脑通滴丸中原儿茶醛含量为0.3733mg/g。

                            丹参素钠回收率

编号	称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						1	0.51127	0.4227	0.4076	0.8157	96.41
2	0.50493	0.4175	0.4076	0.8202	98.80
						3	0.50358	0.4164	0.4076	0.8147	97.73
4	0.50076	0.4140	0.4076	0.8185	99.23
						5	0.50267	0.4156	0.4076	0.8114	97.10

丹参素钠平均回收率＝97.85％ RSD＝1.19％

                            原儿茶醛回收率

编号	称量(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						1	0.51127	0.1885	0.2016	0.3882	99.06
2	0.50493	0.1880	0.2016	0.3841	97.28
						3	0.50358	0.1869	0.2016	0.3852	98.35
4	0.50076	0.1876	0.2016	0.3836	97.20
						5	0.50267	0.1897	0.2016	0.3885	98.63

原儿茶醛平均回收率＝98.10％ RSD＝0.84％

12、三批中试样品含量测定

批号	丹参素钠(mg/g)	原儿茶醛(mg/g)	合计(mg/g)
				1批	0.8115	0.3921	1.204
2批	0.8462	0.3654	1.212
				3批	0.8247	0.3788	1.204

4.14丹灯脑通微丸中丹酚酸B的含量测定方法

1仪器与试药

仪器：Agilent1100高效液相色谱仪，chemstationsys工作站；

TU-1800SPC紫外分光光度计。

试药：丹酚酸B：中国药品生物制品检定所；

试剂均为分析纯；

色谱用试剂为色谱纯。

2检测波长的选择精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％甲醇溶解，在190-400nm波长范围扫描。结果表明丹酚酸B在286nm处有最大吸收，因此选择286nm作为含量测定的检测波长。

3色谱条件

色谱柱：Dikma ODS(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60；

检测波长：286nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min。

4系统适用性试验

4.1对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。

4.2供试品溶液的制备取重量差异项下本品，研细，从中取约1g，精密称定，置10ml量瓶中，加水适量超声处理使溶解，取出，放至室温，加水定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

4.3阴性供试品溶液的制备称取不含丹参的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备，作为阴性供试品溶液。

4.4测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。

根据上述条件得到丹酚酸B对照品色谱图、供试品色谱图，其理论板数n均大于2000。供试品中丹酚酸B色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，阴性无干扰。

5线性关系精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％甲醇制成每1ml中含2.688mg的对照品溶液，精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置10ml量瓶中，加75％甲醇至刻度，摇匀，配制成0.053760mg/ml、0.10752mg/ml、0.16128mg/ml、0.21504mg/ml、0.26880mg/ml的对照品溶液。分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定，记录峰面积。以丹酚酸B的量(μg)为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线

    丹酚酸B线性关系

编号	峰面积	进样量(μg)
			1	648.56	0.5376
2	1256.16	1.0752
			3	1880.45	1.6128
4	2545.65	2.1504

5

3183.45

2.6880

回归方程：Y＝0.0008X+0.0046

相关系数：γ＝0.9999

结果表明，丹酚酸B在0.5376μg～2.6880μg之间线性关系良好。

经过计算，丹酚酸B标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定杏丹注射液中丹酚酸B的含量。

6精密度和对照品溶液稳定性试验精密吸取丹酚酸B对照品溶液(0.1385mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别在0、2、4、6、10小时进样测定。

                    精密度和对照品溶液稳定性试验

时间(h)	0	2	4	6	10	平均值	RSD(％)
								峰面积	1641.89	1648.19	1659.09	1672.85	1684.48	1661.30	1.05

结果表明，对照品溶液精密度良好，在10小时内稳定。

7供试品溶液稳定性试验取重量差异项下本品，研细，从中精密称取1.00245g，置10ml量瓶中，加水适量超声处理使溶解，取出，放至室温，加水定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，分别在0、1、2、3、4小时重复测定一次。

                        供试品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	1	2	3	4	平均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	0.8226	0.8174	0.8295	0.8371	0.8255	0.8264	0.90

结果表明，供试品溶液在4小时内稳定性良好。

8重复性试验取重量差异项下本品，研细，从中取约1g(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中，加水适量超声处理使溶解，取出，放至室温，加水定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

                                重现性试验

编号	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	0.8264	0.8207	0.8295	0.8416	0.8358	0.8308	0.98

结果表明，重复性良好。

9加样回收率试验采用加样回收法，取重量差异项下本品，研细，从中取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中；精密吸取丹酚酸B对照品溶液(0.526mg/ml)1ml(共5份)，分置具塞锥形瓶中，精密加水至10ml超声处理30分钟，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

丹灯脑通微丸中丹酚酸B含量0.8308mg/g。

                                加样回收率试验

编号	供试品(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
						1	0.50458	0.4192	0.526	0.9429	99.56
2	0.51294	0.4262	0.526	0.9338	96.51
						3	0.54377	0.4518	0.526	0.9724	98.98
4	0.50292	0.4178	0.526	0.9221	95.87
						5	0.54258	0.4508	0.526	0.9752	99.70

平均回收率＝98.12％；RSD＝1.83％

10样品含量测定

批号	丹酚酸B(mg/g)
		1批	0.8426
2批	0.8337
		3批	0.8519

4.15丹灯脑通微丸中丹参酮II_A的含量测定方法

1仪器与试药

仪器：SHIMADZU LC-2010AHT；

TU-1800SPC紫外分光光度计。

试药：丹参酮II_A：中国药品生物制品检定所；

试剂均为分析纯；

色谱用试剂为色谱纯。

2检测波长的选择精密称取丹参酮II_A对照品适量，加甲醇溶解，在190-400nm波长范围扫描。结果表明丹参酮II_A在270nm处有最大吸收，因此选择270nm作为含量测定的检测波长。

3色谱条件

色谱柱：Dikma ODS(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25；

检测波长：270nm；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min。

4系统适用性试验

4.1对照品溶液的制备精密称取丹参酮II_A对照品适量，加甲醇制成每1ml含12.5μg的溶液，即得。

4.2供试品溶液的制备取重量差异项下本品，研细，从中取约1g，精密称定，置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

4.3阴性供试品溶液的制备称取不含丹参的阴性样品，照供试品溶液的制备方法制备，作为阴性供试品溶液。

4.4测定法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。

根据上述条件得到丹参酮II_A对照品色谱图、供试品色谱图，其理论板数n均大于2000。供试品中丹参酮II_A色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，阴性无干扰。

5线性关系精密称取丹参酮II_A对照品适量，加甲醇制成每1ml中含0.4112mg的对照品溶液，精密量取0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，配制成0.008224mg/ml、0.016448mg/ml、0.024672mg/ml、0.032896mg/ml、0.04112mg/ml的对照品溶液。分别从中精密吸取5μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定，记录峰面积。以丹参酮II_A的量(μg)为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线。

丹参酮II_A线性关系

编号	峰面积	进样量(μg)
			1	292315	0.04112
2	589654	0.08225
			3	874823	0.12336
4	1170013	0.16448
			5	1465977	0.20560

回归方程：Y＝0.000000-0.000025

相关系数：γ＝0.9999

结果表明，丹参酮II_A在0.0411μg～0.2056μg之间线性关系良好。

6精密度和对照品溶液稳定性试验精密吸取丹参酮II_A对照品溶液(0.02056mg/ml)5μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，分别在0、2、4、10、24小时进样测定。

                        精密度和对照品溶液稳定性试验

时间(h)	0	2	4	10	24	平均值	RSD(％)
								峰面积	792038	794412	790868	787546	784935	789959	0.47

结果表明，对照品溶液精密度良好，在10小时内稳定。

7供试品溶液稳定性试验取重量差异项下本品，研细，从中精密称取1.01259g，置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得，分别在0、1、2、3、4小时重复测定一次。

                              供试品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	1	2	3	4	均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	0.06254	0.06135	0.06228	0.06271	0.06229	0.06223	0.85

结果表明，供试品溶液在4小时内稳定性良好。

8重复性试验取重量差异项下本品，研细，从中取约1g(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定。

                                重现性试验

编号	1	2	3	4	5	均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	0.06253	0.06259	0.06181	0.06324	0.06337	0.06271	1.00

结果表明，重复性良好。

9加样回收率试验取重量差异项下本品，研细，从中取约0.5g(共5份)，精密称定，分置10ml量瓶中；精密吸取丹参酮II_A对照品溶液(0.0676mg/ml)0.5ml(共5份)，分置上述10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，测定，即得。

丹灯脑通微丸中丹参酮II_A含量0.06271mg/g。

                            加样回收率试验

编号	供试品(g)	供试品中纯品量(mg)	纯品加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
						1	0.52274	0.03278	0.0338	0.06576	97.57
2	0.51396	0.03223	0.0338	0.06514	97.37
						3	0.52038	0.03263	0.0338	0.06623	99.40
4	0.51709	0.03243	0.0338	0.06535	97.41

5

0.51142

0.03207

0.0338

0.06479

96.80

平均回收率＝97.71％；RSD＝1.01％

10样品含量测定

批号	丹参酮IIA(mg/g)
		1批	0.06574
2批	0.06339
		3批	0.06685

4.16丹灯脑通滴丸中野黄芩苷含量测定

1仪器与试药

1.1主要仪器：

高效液相色谱仪        LC-2010AHT    SHIMADZU

紫外/可见分光光度仪   TU-1810SPC    北京普析通用仪器有限公司

电子分析天平          BP211D        SARTORIUS

超声波清洗机          KQ250DB       昆山市超声仪器有限公司

1.2试药：

野黄芩苷  中国药品生物制品检定所

甲醇      分析纯                北京化工厂

乙腈      色谱纯                迪马公司

磷酸      分析纯                北京化学试剂公司

2野黄芩苷由中国药品生物制品检定所提供野黄芩苷，经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为96.40％，符合含量测定用对照品要求(在测定中，按照96.40％的纯度进行折算)。

3检测波长的选择取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波长范围内扫描。结果表明，野黄芩苷在284nm及335nm处有最大吸收，根据《卫生部药品标准中药成方制剂》相关品种并结合文献报道，选择335nm作为野黄芩苷含量测定的检测波长。

4色谱条件

色谱仪：SHIMADZU LC-2010AHT；

色谱柱：Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；

流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)；

流速：1.0ml/min；

柱温：30℃；

进样量：10μl；

检测波长：335nm。

对照品溶液的制备精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取重量差异项下本品，研细，从中取约1g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

根据上述色谱条件得到野黄芩苷对照品、供试品色谱图，其理论板数n均大于2000，野黄芩苷色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，溶剂无干扰。

5提取时间的选择取重量差异项下本品，研细，从中取约1g(共3份)，精密称定，分置25ml量瓶中，加甲醇适量，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)5、10、20min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

    提取时间考察

提取时间(min)	含量(mg/g)
		5	1.213
10	1.226
		20	1.215

结果表明，超声处理5min即可提取完全。

6线性关系考察精密量取野黄芩苷对照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。以峰面积为纵坐标，野黄芩苷的量(μg)为横坐标作图，绘制标准曲线。

        野黄芩苷标准曲线测定结果

编号	野黄芩苷量(μg)	折算后(μg)	峰面积
				1	0.1956	0.1886	603722

2	0.3912	0.3771	1224078
				3	0.5868	0.5657	1835374
4	0.7824	0.7542	2430678
				5	0.9780	0.9428	3038182

回归方程：Y＝3222232.53x+3654.50

相关系数：γ＝0.9999

结果表明：野黄芩苷在0.1886μg～0.9428μg范围内线性良好。

经计算，野黄芩苷的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定野黄芩苷的含量。

7精密度实验精密吸取野黄芩苷对照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果见下表。

                            精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								峰面积	1572015	1570202	1566206	1559384	1557017	1564965	0.42

结果表明，对照品溶液精密度良好。

8稳定性实验

8.1对照品溶液的稳定性实验精密吸取野黄芩苷对照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定。

                        对照品溶液稳定性试验

时间(h)	0	2	4	8	24	平均值	RSD(％)
								峰面积	1572015	1570202	1566206	1559384	1557017	1564965	0.42

结果表明，对照品溶液24小时内稳定性良好。

8.2供试品溶液的稳定性实验精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定。

                        供试品溶液稳定性实验

时间(h)	0	2	4	8	24	均值	RSD
								含量(mg/g)	1.221	1.215	1.224	1.213	1.207	1.216	0.55

结果表明，供试品溶液24小时内稳定性良好。

9重复性实验取本品，按正文供试品溶液的制备和测定法项下进行操作。

                    重复性实验

编号

1

2

3

4

5

平均值

RSD(％)

含量(mg/g)

1.214

1.231

1.259

1.236

1.272

1.242

1.86

10加样回收率实验采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约0.5g(共5份)，精密称定，分置25ml量瓶中，分别精密加入野黄芩苷对照品溶液(C＝0.672mg/ml)1.0ml，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

丹灯脑通滴丸中野黄芩苷的含量为：1.242mg/g。

                        加样回收率实验

编号	供试品称样量(g)	供试品中纯品量(mg)	野黄芩苷加入量(mg)	折算后(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
							1	0.5117	0.6355	0.672	0.6478	1.2794	99.39
2	0.5084	0.6314	0.672	0.6478	1.2631	97.51
							3	0.5139	0.6383	0.672	0.6478	1.2735	98.06
4	0.5046	0.6267	0.672	0.6478	1.2558	97.11
							5	0.5181	0.6435	0.672	0.6478	1.2676	96.34

平均回收率＝97.68％，RSD＝1.17％

11样品含量测定取本品三批样品，按照正文供试品溶液的制备和测定法项下的操作。

    野黄芩苷含量测定

批号	野黄芩苷含量(mg/g)
		1	1.418
2	1.355
		3	1.472

4.17丹灯脑通滴丸中葛根素含量测定

仪器与试药

(1)主要仪器：

高效液相色谱仪         2010Aht       SHIMADZU

电子分析天平           BP211D        SARTORIUS

紫外/可见分光光度仪    TU-1810SPC    北京普析通用仪器有限责任公司

超声波清洗仪           KQ250DB       昆山超声仪器有限公司

(2)试药：

葛根素    中国药品生物制品检定所

甲醇      分析纯          北京市通广精细化工公司

冰醋酸    优级纯          天津市永大化学试剂开发中心

纯净水    娃哈哈

1检测波长的选择精密称取葛根素对照品适量，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，在200～400nm波长范围内扫描。结果表明，葛根素在250nm处有最大吸收，因此选择250nm作为测定丹灯脑通滴丸中葛根素含量的检测波长。

2色谱条件

色谱仪：SHIMADZU  2010Aht；

色谱柱：Diamonsil(钻石)C₁₈(250×4.6mm 5μm)；

流动相：甲醇-1％冰醋酸水溶液(23∶77)；

检测波长：250nm；

柱温：30℃；

流速：1ml/min；

进样量：10μl。

对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含葛根素80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品，研细，从中取约0.1g，精密称定，置具滤纸的漏斗上，用乙醚约15ml分数次洗涤，滤纸及残渣挥干乙醚，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

根据上述条件得到葛根素、供试品色谱，其理论板数按葛根素峰计算大于4000。样品中葛根素色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5。

3阴性干扰排除试验为考察其它药材和辅料是否干扰葛根素的测定，除葛根外，按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对葛根素的含量测定无干扰。

4对照品纯度检查由中国药品生物制品检定所提供葛根素经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为99.60％，符合含量测定用对照品要求。

5线性关系的考察精密称取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含0.6352mg的溶液，摇匀，精密量取0.5ml、1.0m、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分置10ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，配制成31.76μg/ml、63.52μg/ml、95.28μg/ml、127.04μg/ml、158.80μg/ml的对照品稀释溶液，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。以葛根素的量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，绘制标准曲线。

    葛根素线性关系

编号	葛根素量(μg)	峰面积
			1	0.3176	680324
2	0.6352	1365277
			3	0.9528	2026852
4	1.2704	2727358
			5	1.5880	3396435

回归方程：Y＝21392641.69X+958.30

相关系数：γ＝0.9999

结果表明，葛根素在0.3176μg～1.5880μg范围之内线性关系良好。

经过计算，葛根素标准曲线为一过原点的直线，因此选择外标一点法测定丹灯脑通滴丸中葛根素的含量。

6精密度试验精密吸取葛根素对照品溶液(每1ml含葛根素76.224μg)10μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，考察对照品溶液精密度。

                                精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								峰面积	1625174	1635949	1650877	1641586	1663251	1643367	0.88

结果表明，对照品溶液精密度良好。

7稳定性试验

7.1对照品稳定性试验精密吸取葛根素对照品溶液(每1ml含葛根素76.224μg)10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进样测定。

                        对照品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								峰面积	1625174	1635949	1650877	1641586	1663251	1643367	0.88

结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。

7.2供试品溶液稳定性试验精密吸取供试品溶液(2.1152mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进样测定。

                            供试品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	29.98	29.31	29.61	30.07	29.94	29.78	1.06

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

8重复性试验取本品，研细，从中取约0.1g(共5份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作。

                            重复性试验

编号	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								(mg/g)	30.46	30.10	29.86	30.22	29.22	29.97	1.58

结果表明，重复性良好。

9加样回收率试验采用加样回收法，取本品，研细，从中取约50mg(共6份)，精密称定，分置具滤纸的漏斗上；另取葛根素对照品约1.2mg、1.5mg、1.8mg(各2份)，精密称定，分置上述具滤纸的漏斗上，用乙醚约15ml分数次洗涤，滤纸及残渣挥干乙醚，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

丹灯脑通滴丸中葛根素含量：29.969mg/g

                        葛根素加样回收率试验

编号	供试品称量(mg)	供试品中纯品量(mg)	葛根素加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
						1	53.26	1.596	1.11	2.685	98.11
2	51.47	1.543	1.28	2.803	98.44
						3	50.82	1.523	1.49	2.951	95.84
4	55.61	1.667	1.62	3.239	97.04
						5	52.37	1.569	1.88	3.441	99.57
6	56.96	1.707	1.94	3.605	97.84

葛根素平均回收率＝97.81％，RSD＝1.30％；

10样品含量测定按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，测定三批样品。

三批样品含量测定结果

批号	葛根素(mg/g)
		第一批	31.42
第二批	31.59
		第三批	26.35

4.18丹灯脑通滴丸中阿魏酸含量测定

仪器与试药

(1)主要仪器：

高效液相色谱仪        2010Aht       SHIMADZU

电子分析天平          BP211D        SARTORIUS

紫外/可见分光光度仪   TU-1810SPC    北京普析通用仪器有限责任公司

超声波清洗仪          KQ250DB       昆山超声仪器有限公司

(2)试药：

阿魏酸    中国药品生物制品检定所

甲醇      分析纯         北京市通广精细化工公司

冰醋酸    优级纯         天津市永大化学试剂开发中心

纯净水    娃哈哈

1检测波长的选择精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，在200～400nm波长范围内扫描。结果表明，阿魏酸在330nm处有最大吸收，因此选择330nm作为测定丹灯脑通滴丸中阿魏酸含量的检测波长。

2色谱条件

色谱仪：SHIMADZU  2010Aht；

色谱柱：Diamonsil(钻石)C₁₈(250×4.6mm 5μm)

流动相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸(45∶55∶2)；

检测波长：330nm；

柱温：30℃；

流速：1ml/min。

对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含阿魏酸80μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取重量差异项下本品，研细，从中取约1g，精密加乙醚约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％乙醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

根据上述条件得到阿魏酸、供试品色谱，其理论板数按阿魏酸峰计算大于2000。样品中阿魏酸色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5。

3阴性干扰排除试验为考察其它药材和辅料是否干扰阿魏酸的测定，除川芎外，按处方比例称取其它药材和辅料同法制成阴性对照品溶液并测定。结果表明，阴性样品对阿魏酸的含量测定无干扰。

4对照品纯度检查由中国药品生物制品检定所提供阿魏酸经高效液相色谱法(归一化法)测定纯度为99.57％，符合含量测定用对照品要求。

5提取时间的选择取重量差异项下本品，研细，从中取约1g(共3份)，分置具塞锥形瓶中，精密加乙醚约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％乙醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

    提取时间考察

提取时间(min)	含量(mg/g)
		5	1.821
10	2.023
		20	2.034

结果表明，超声处理10min即可提取完全。

6线性关系的考察精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.6428mg的溶液，摇匀，精密量取0.5ml、1.0m、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分置10ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，配制成32.14μg/ml、64.28μg/ml、96.42μg/ml、128.56μg/ml、160.70μg/ml的对照品稀释溶液，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定。以阿魏酸的量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标做图，绘制标准曲线。

        阿魏酸线性关系

编号	阿魏酸量(μg)	峰面积
			1	0.3214	521296

2	0.6428	1022271
			3	0.9642	1543842
4	1.2856	2057217
			5	1.6070	2581344

回归方程：Y＝1603933.4163X-1318.6000

相关系数：γ＝0.9999

结果表明，阿魏酸在0.3214μg～1.6070μg范围之内线性关系良好。

经过计算，阿魏酸标准曲线为—过原点的直线，因此选择外标一点法测定丹灯脑通滴丸中阿魏酸的含量。

7精密度试验精密吸取阿魏酸对照品溶液(每1ml含阿魏酸77.136μg)10μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，考察对照品溶液精密度。

                          精密度试验

试验次数	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								峰面积	1225093	1205947	1213694	1208556	1230727	1216803	0.88

结果表明，对照品溶液精密度良好。

8稳定性试验

8.1对照品稳定性试验精密吸取阿魏酸对照品溶液(每1ml含阿魏酸77.136μg)10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进样测定。

                        对照品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								峰面积	1225093	1205947	1213694	1208556	1230727	1216803	0.88

结果表明，对照品溶液在24小时内稳定性良好。

8.2供试品溶液稳定性试验精密吸取供试品溶液(40.1084mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时进样测定。

                        供试品溶液稳定性试验结果

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	1.932	2.204	1.958	1.971	1.945	1.966	1.81

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

9重复性试验取本品，研细，从中取约1g(共5份)，精密称定，按正文供试品溶液制备和测定项下进行操作。

                                重复性试验

编号	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								含量(mg/g)	1.962	1.937	1.879	1.943	1.915	1.927	1.65

结果表明，重复性良好。

10加样回收率试验采用加样回收法，取重量差异项下本品，研细，从中取约0.5g(共5份)，精密称定，分置具塞锥形瓶中；另取阿魏酸对照品约1mg(共5份)，精密称定，分置上述具塞锥形瓶中，精密加乙醚约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％乙醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

丹灯脑通滴丸中阿魏酸含量：1.927mg/g

                            阿魏酸加样回收率试验

编号	供试品称量(g)	供试品中纯品量(mg)	阿魏酸加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)
						1	0.51876	0.9997	1.04	2.012	97.34
2	0.53047	1.0222	1.22	2.215	97.77
						3	0.51793	0.9981	1.18	2.152	97.79
4	0.51358	0.9897	1.06	2.026	97.77
						5	0.52165	1.0052	1.14	2.115	97.35

阿魏酸平均回收率＝97.60％，RSD＝0.24％；

11样品含量测定按正文供试品溶液的制备和测定法项下操作，测定三批样品。

三批样品含量测定结果

批号	阿魏酸(mg/g)
		第一批	2.181
第二批	2.243
		第三批	2.025

4.19本发明滴丸剂葛根素溶出度的方法学研究

1实验仪器及试剂

高效液相色谱仪    2010-AHT   SHIMADZU

电子分析天平      BP211D     SARTORIUS

智能溶出试验仪    ZRS-8      天津大学无线电厂

葛根素          0752-200209   中国药品生物制品检定所

甲醇            分析纯        北京市通广精细化工公司

冰醋酸          优级纯        天津市永大化学试剂开发中心

纯净水          娃哈哈

丹灯通脑胶囊    0.35g/粒      云南施普瑞生物工程有限公司

2检测波长的选择葛根素在250nm处有最大吸收，因此选用250nm作为溶出度测定的检测波长。

3线性关系考察精密称取葛根素对照品适量，加甲醇适量溶解后加水制成每1ml含0.0785mg的溶液，从中精密量取0.1、1.5、3.0、4.5、6.0ml，分置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配制成0.785μg/ml、11.775μg/ml、23.55μg/ml、35.325μg/ml、47.10μg/ml的对照品稀释溶液，摇匀，分别从中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。分别以进样量(μg)为纵坐标，峰面积为横坐标做图，绘制标准曲线。结果见下表。

    葛根素线性关系

编号	葛根素(μg)	峰面积
			1	0.00785	17660
2	0.11775	271978
			3	0.23550	552269
4	0.35325	822602
			5	0.47100	1094840

回归方程：Y＝0.000000X+0.000045

相关系数：γ＝0.9999

葛根素在0.00785～0.4710μg范围内线性关系良好。

根据计算，葛根素标准曲线为过原点的直线，因此选择外标一点法测定丹灯脑通滴丸中葛根素的含量。

4提取时间的选择取重量差异项下本品2粒(共3份)，分置500ml量瓶中，加水定至刻度，分别超声处理(功率250W，频率33KHz)5、10、20分钟，取出，放至室温，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，见下表。

丹灯脑通滴丸平均粒重：61.46mg。

                        提取时间选择

提取时间(min)	葛根素(mg/粒)
		5	2.004
10	2.011
		20	1.969

从上述结果可以看出，超声提取5分钟葛根素即可基本提取完全，因此将提取时间定为5分钟。

5阴性干扰排除实验精密称取丹灯脑通滴丸阴性样品(缺葛根)110.73mg，置500ml量瓶中，加水定至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，结果表明，阴性对液相色谱法测定丹灯脑通滴丸的溶出度无干扰。见附图1。

6供试品溶液精密度考察取重量差异项下本品2粒，置500ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，重复测定5次，结果见下表。

                        供试品溶液精密度考察结果

试验次数	1	2	3	4	5	平均值	RSD(％)
								峰面积	175924	174725	176384	175258	177008	175856	0.51

结果表明，供试品溶液精密度良好。

7供试品溶液稳定性考察取重量差异项下本品2粒，置500ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，分别在0、2、6、10、24小时重复测定一次，结果见下表。

                            供试品溶液稳定性考察结果

时间(h)	0	2	6	10	24	平均值	RSD(％)
								峰面积	175924	174725	176384	175258	177008	175856	0.51

结果表明，供试品溶液在24小时内稳定性良好

8回收率考察采用加样回收法，取重量差异项下本品，研细，从中取约60mg(约1粒)，精密称定，分置500ml量瓶中；精密称取葛根素24.45mg，置25ml量瓶中，加少量甲醇超声处理使溶解，取出，放至室温，加水定至刻度，摇匀，精密量取2ml，分置上述500ml量瓶中，加水定至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见下表。

丹灯脑通滴丸中葛根素含量：32.607mg/g。

                        葛根素回收率考察结果

编号	供试品称量(mg)	供试品中葛根素(mg)	葛根素加入量(mg)	测量值(mg)	回收率(％)
						1	60.52	1.973	1.956	3.877	97.34
2	61.13	1.993	1.956	3.934	99.23
						3	60.89	1.985	1.956	3.888	97.29
4	61.62	2.009	1.956	3.905	96.93
						5	62.31	2.032	1.956	3.955	98.31
6	61.78	2.014	1.956	3.946	98.77

葛根素平均回收率＝99.97％，RSD＝0.94％。

经过上述的一系列研究，确定了检测样品中葛根素溶出度的各项技术参数，方法可行。

具体的实施方式：

本发明的实施例1：丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g

取川芎，葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加入聚乙二醇4000，主药∶聚乙二醇4000＝1∶1.2，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴制，以二甲硅油为冷却剂、冷却剂温度为10～20℃、滴头口径为4.0/5.0、滴距为4～6cm、滴速30～40d/min、料温70～80℃，收集滴丸，除去表面的甲基硅油，制成1000g，包装，即得滴丸，本产品口服，一次36粒，一日3次。

本发明的实施例2：丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g

取川芎，葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加入按药物∶辅料比例为1∶1.2的低取代羟丙纤维素、按药物∶辅料比例为1∶1的羧甲基淀粉钠，混合均匀，过5号筛，用水作润湿剂制软材，制粒，60℃烘干，整粒，同时加入按药物∶辅料比例为1∶1.5的低取代羟丙纤维素混匀后压片，即得分散片。

本发明的实施例3：丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g

取川芎，葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加阿司帕坦20g与糊精适量，再取乙醇做粘合剂，在流化床内沸腾制粒，环境相对湿度控制在66％以下，即得颗粒剂。

本发明的实施例4：丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g

取川芎，葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加入卡波姆溶液、矫味剂，搅匀，制成1000瓶，即得凝胶剂。

实施例5：丹灯脑通滴丸中丹参、丹参酮II_A的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸2g，加乙醚20ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2ml溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮II_A对照品中的一种或两种，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯19∶1为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例6：丹灯脑通滴丸中丹参酮II_A的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸3g，加甲醇10ml超声处理10分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例7：丹灯脑通滴丸中丹酚酸B镁的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸3g，加75％甲醇溶液5ml使溶解，作为供试品溶液；以丹酚酸B镁对照品的75％甲醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例8：丹灯脑通滴丸中丹酚酸B的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸3g，加水10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取丹酚酸B对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例9：丹灯脑通滴丸中丹参素钠、原儿茶醛的薄层色色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸3g，加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取丹参素纳和原儿茶醛对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的2％三氯化铁与1％铁氰化钾等体积的混合液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例10：丹灯脑通滴丸中丹参素、原儿茶醛中的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸1g，，加水10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素、原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温30℃，供试品色谱中，与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例11：丹灯脑通滴丸中灯盏细辛药材、野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸1g，，加甲醇10ml超声处理5分钟，离心，取上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑。

实施例12：丹灯脑通滴丸中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸1g，加甲醇10ml超声处理5分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例13：丹灯脑通滴丸中葛根、葛根素的的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸1g，加石油醚(30～60℃)20ml超声处理5分钟，滤过，弃去石油醚层，残渣挥干溶剂后加甲醇20ml提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材1g，加甲醇20ml提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水3∶4.4∶8∶2为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例14：丹灯脑通滴丸中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸0.1g，加乙醚15ml洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇50ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例15：丹灯脑通滴丸中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸3g，加乙醚15ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯10ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、川芎嗪中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材2g，加乙醚15ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

实施例16：丹灯脑通滴丸中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通滴丸1g，精密加乙醚约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％乙醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例17：丹灯脑通滴丸中丹参素、原儿茶醛的含量测定：

取丹灯脑通滴丸1g，，加水10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素、原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，检测波长为280nm，柱温30℃，以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量结果如下：

(1)每单位量含丹参素高于2.6mg；

(2)每单位量含原儿茶醛高于1.0mg；

(3)每单位量含丹参素和原儿茶醛的总和高于3.6mg。

实施例18：丹灯脑通滴丸中丹酚酸B含量测定：

取丹灯脑通滴丸3g，加水10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B高于1.4mg。

实施例19：丹灯脑通滴丸中丹参酮II_A的含量测定：

取丹灯脑通滴丸3g，加甲醇10ml超声处理10分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮II_A高于0.1mg。

实施例20：丹灯脑通滴丸中野黄芩苷的含量测定方法：

取丹灯脑通滴丸1g，加甲醇10ml超声处理5分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷高于4mg。

实施例21：丹灯脑通滴丸中葛根素的含量测定方法：

取丹灯脑通滴丸0.1g，加乙醚15ml洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇50ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素高于70mg。

实施例22：丹灯脑通滴丸中阿魏酸的含量测定方法：

取丹灯脑通滴丸1g，精密加乙醚约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％乙醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％乙醇定至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸高于9mg。

实施例23：丹灯脑通微丸中丹参、丹参酮II_A的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加石油醚(30～60℃)20ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷2ml溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮II_A对照品，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，加石油醚(30～60℃)提取，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮II_A对照品，加三氯甲烷制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯10∶2为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例24：丹灯脑通微丸中丹参酮II_A的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加水10ml超声处理10分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液50∶50为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例25：丹灯脑通微丸中丹酚酸B镁的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加75％乙醇溶液5ml使溶解，作为供试品溶液；以丹酚酸B镁对照品的75％乙醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以苯-二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸3∶2∶4∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例26：丹灯脑通微丸中丹酚酸B的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加甲醇10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取丹酚酸B对照品的75％乙醇醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1％甲酸水溶液20∶15∶65为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例27：丹灯脑通微丸中丹参素钠的薄层色色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加水5ml溶解，作为供试品溶液；另取丹参素钠对照品，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯-甲酸乙酯-冰醋酸5∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的2％三氯化铁与1％铁氰化钾等体积的混合液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例28：丹灯脑通微丸中原儿茶醛的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，加甲醇10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液10∶90为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温30℃，供试品色谱中，与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例29：丹灯脑通微丸中灯盏细辛药材、野黄芩苷的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，加乙醇10ml超声处理5分钟，离心，取上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加乙醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸-水7∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例30：丹灯脑通微丸中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，加乙醇10ml超声处理5分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液30％∶70％为流动相，检测波长为335nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例31：丹灯脑通微丸中葛根、葛根素的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，加石油醚(60～90℃)20ml超声处理5分钟，滤过，弃去石油醚层，残渣挥干溶剂后加乙醇20ml提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材1g，加乙醇20ml提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸乙酯-水2∶3∶5∶2为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，显相同颜色斑点。

实施例32：丹灯脑通微丸中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸30mg，加石油醚(30～60℃)15ml洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加50％甲醇50ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液18％∶82％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例33：丹灯脑通微丸中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸1g，加三氯甲烷15ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、川芎嗪制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材2g，加三氯甲烷15ml提取，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-醋酸乙酯6∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

实施例34：丹灯脑通微丸中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，精密加醋酸乙酯约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％甲醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％甲醇定至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸30∶70∶2为流动相，检测波长为330nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

实施例35：丹灯脑通软胶囊中丹参素钠、原儿茶醛的含量测定：

取丹灯脑通软胶囊1g，加甲醇10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素钠、原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液10∶90为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温30℃，以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量结果如下：

(1)每单位量含丹参素钠高于2.6mg；

(2)每单位量含原儿茶醛高于1.0mg；

(3)每单位量含丹参素钠和原儿茶醛的总和高于3.6mg。

实施例36：丹灯脑通微丸中丹酚酸B含量测定：

取丹灯脑通微丸1g，加甲醇10ml超声处理使溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取丹酚酸B对照品的75％乙醇醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1％甲酸水溶液20∶15∶65为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B高于1.4mg。

实施例37：丹灯脑通微丸中丹参酮II_A的含量测定：

取丹灯脑通微丸1g，加水10ml超声处理10分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮II_A对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液50∶50为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮II_A高于0.1mg。

实施例38：丹灯脑通分散片中野黄芩苷的含量测定方法：

取丹灯脑通分散片1g，加乙醇10ml超声处理5分钟，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1％磷酸水溶液30％∶70％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷高于4mg。

实施例39：丹灯脑通胶囊中葛根素的含量测定方法：

取丹灯脑通胶囊0.1g，加石油醚(30～60℃)15ml洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加50％甲醇50ml溶解，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液18％∶82％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素高于70mg。

实施例40：丹灯脑通微丸中阿魏酸的含量测定方法：

取丹灯脑通微丸0.5g，精密加醋酸乙酯约50ml超声处理10分钟，滤过，滤液挥干，残渣用30％甲醇溶解并定量转移至25ml量瓶中，用30％甲醇定至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸30∶70∶2为流动相，检测波长为330nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸高于9mg。

实施例41：丹灯脑通滴丸中的葛根素溶出度测定方法：

取重量差异项下本品2粒，照溶出度测定法(中国药典2000年版二部附录X C测定法第二法)，以脱气处理的水500ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经15分钟时，取溶液5ml，立即用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取重量差异项下本品2粒，置500ml量瓶中，加水定至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，取续滤液作为对照溶液。按含量测定项下的色谱条件，精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定，计算每粒的溶出量。葛根素(C₂₁H₂₀O₉)溶出度高于80％，符合规定。

实施例42：丹灯脑通滴丸中的葛根素溶出度测定方法：

取重量差异项下本品2粒，照溶出度测定法(中国药典2000年版二部附录X C测定法第二法)，以脱气处理的水500ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经15分钟时，取溶液5ml，立即用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取重量差异项下本品2粒，置500ml量瓶中，加水定至刻度，超声处理(功率250W，频率33KHz)5分钟，取出，放至室温，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，取续滤液作为对照溶液。按含量测定项下的色谱条件，精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定，计算每粒的溶出量。葛根素(C₂₁H₂₀O₉)溶出度高于80％，应符合规定。

实施例43：丹灯脑通滴丸中葛根素的薄层鉴别方法：

取本品粉末约1g，加石油醚(30～60℃)20ml，超声处理5分钟，滤过，残渣挥干溶剂后加甲醇20ml，超声提取5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(3∶4.4∶8∶2)10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例44：丹灯脑通滴丸中的葛根素溶出度测定方法：

取重量差异项下本品2粒，照溶出度测定法(中国药典2000年版二部附录X C测定法第二法)，以脱气处理的水500ml为溶出介质，转速为每分钟80转，依法操作，经15分钟时，取溶液5ml，立即用微孔滤膜(0.45μm，水系)滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含葛根素80μg的溶液。按含量测定项下的色谱条件，精密吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定，计算每粒的溶出量。与含量测定项下的值比较，葛根素(C₂₁H₂₀O₉)溶出度高于80％。

实施例45：丹灯脑通滴丸中的葛根素的含量测定方法：

取本品，研细，从中取约0.1g，精密称定，置具滤纸的漏斗上，用乙醚约15ml分数次洗涤，滤纸及残渣挥干乙醚，置锥形瓶中，精密加入30％乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30％乙醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另取葛根素对照品适量，加30％乙醇制成每1ml含葛根素80μg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-1％冰醋酸水溶液(23∶77)为流动相；检测波长为250nm，测定，本品每单位量含葛根素高于52mg。

Claims (11)

1.一种丹灯脑通药物制剂，其特征在于：它用丹参1026g、灯盏细辛1026g、川芎1026g、葛根1544g与辅料制作成注射液、粉针、冻干粉针、凝胶剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、凝胶剂、口服液体制剂、煎膏剂、浸膏剂或膜剂。

2.按照权利要求1所述的丹灯脑通药物制剂，其特征在于：所述制剂为滴丸剂。

3.按照权利要求1或2所述的丹灯脑通药物制剂的制备方法，其特征在于：取川芎、葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，在制成其他制剂。

4.按照权利要求3所述的丹灯脑通药物制剂的制备方法，其特征在于：所述制剂中的滴丸剂这样制备：取川芎、葛根加8倍水煎煮三次，第一次煎煮1小时，第二、三次0.5小时，滤过；滤液浓缩成50～60℃时相对密度为1.08～1.14的清膏，加2.8倍量乙醇，搅匀，加热至60℃，静置24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；丹参加8倍85％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩成稠膏状，85℃以下真空干燥成干膏；灯盏细辛加6倍75％乙醇浸渍三次，第一次48小时，第二、三次24小时，滤过，滤液减压回收乙醇，放冷，滤过，滤液用20％硫酸溶液调节pH值至2，静置48小时，滤过，得黄绿色沉淀物，用水洗涤至pH值至5～6，85℃以下烘干，与上述干膏混合，粉碎，过筛，加入聚乙二醇4000，混合均匀，加热熔融，搅拌均匀，转移至滴丸机，滴制，收集滴丸，除去表面的甲基硅油，包装，即得滴丸剂

5.按照权利要求4所述的丹灯脑通药物制剂，其特征在于：所述制剂中的滴丸剂这样制备：主药∶聚乙二醇4000＝1∶1.2、以二甲硅油为冷却剂、冷却剂温度为10～20 ℃、滴头口径为内径4.0毫米/外径5.0毫米、滴距为4～6cm、滴速30～40d/min、料温70～80℃。

6.如权利要求1或2所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分内容：

(1)丹参药材、灯盏细辛药材、葛根药材、川芎药材、丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮IIA、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的鉴别测试方法；

(2)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮IIA、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的含量测试方法，

(3)丹参素或其钠盐、原儿茶醛、丹酚酸B或其镁盐、丹参酮IIA、野黄芩苷、葛根素、阿魏酸中全部或部分成分的溶出度测试方法。

7.按照权利要求6所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：所述药物制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参、丹参酮IIA中一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，用乙醚或30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或二氯甲烷或三氯甲烷或醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮IIA对照品中的一种或两种，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，同法制成对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯或甲醇或乙醇溶解并稀释至合适浓度，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯或三氯甲烷或二氯甲烷2～40∶0.2～5为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；

b、丹灯脑通药物制剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇或流动相溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

c、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇或三氯甲烷或二氯甲烷提取，滤过，滤液浓缩，作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的醋酸乙酯或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇或乙醇或丙酮-甲酸或乙酸0.2～6∶0.5～8∶0.5～10∶0.1～3∶0.5～5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm或日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

d、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10％～50％∶2％～30％∶88％～20％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

e、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的薄层色色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解，作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品中一种或两种的甲醇或乙醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或甲酸乙酯-丙酮或甲醇或乙醇-甲酸或冰醋酸1～25∶0.2～5∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或冰醋酸2～25∶1～22∶0.2～10为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365nm或254nm或日光下检视或喷以三氯化铁与铁氰化钾的混合溶液后日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

f、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐或原儿茶醛中一种或两种的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水或甲醇或乙醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

g、丹灯脑通药物制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷对照品中的一种或两种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和灯盏细辛对照药材溶液、野黄芩苷对照品溶液的一种或两种各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3％～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液或0.3～10％三氯化铁乙醇溶液，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视或105℃烘1～15分钟后置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

h、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005 moL/L～0.3moL/L用1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0的磷酸二氢钠梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～410nm；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

i、丹灯脑通药物制剂中葛根、葛根素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材，加甲醇或乙醇提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水0.5～10∶1～15∶1～30∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，应显相同颜色的荧光斑点或斑点；

j、丹灯脑通药物制剂中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇提取，提取液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，检测波长为190～410nm，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

k、丹灯脑通药物制剂中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、川芎嗪中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材，加乙醚或30～60℃石油醚或60～90℃石油醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯或甲醇或乙醇使溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以正己烷或环己烷或丙酮或丁酮-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯1～40∶0.2～5或苯或甲苯或二甲苯-三氯甲烷或二氯甲烷-甲醇或乙醇0.5～10∶0.5～10∶0.1～5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm或254nm下检视或喷以三氯化铁-铁氢化钾溶液后日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，应显相同颜色荧光斑点或斑点；

l、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或甲醇-甲酸混合溶液溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加乙醚或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液挥干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇-乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液2％～20％∶10％∶40％∶88％～40％或甲醇或乙腈-0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液-甲酸或冰醋酸或磷酸5～95∶95～5∶0.2～5为流动相，检测波长为200～410nm；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

8.按照权利要求7所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：所述药物制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参、丹参酮IIA的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材，丹参酮IIA对照品中的一种或两种，制备对照溶液；丹参对照药材溶液的制备：取丹参对照药材，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯19∶1为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

b、丹灯脑通药物制剂中丹参酮IIA的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

c、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加75％甲醇溶液溶解，作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸2∶3∶4∶0.5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；取丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

e、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的薄层色色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解，作为供试品溶液；另取丹参素纳和原儿茶醛对照品中的一种或两种，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸8∶7∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的2％三氯化铁与1％铁氰化钾等体积的混合液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

f、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的液相色谱鉴别方法

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温30℃，供试品色谱中，与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

g、丹灯脑通药物制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇提取，离心，取上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；

h、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

i、丹灯脑通药物制剂中葛根、葛根素的一种或两种的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加30～60℃石油醚超声处理，滤过，弃去石油醚层，残渣挥干溶剂后加甲醇提取，提取液作为供试品溶液；另取葛根对照药材、葛根素中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取葛根对照药材，加甲醇提取，提取液作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-醋酸乙酯-水3∶4.4∶8∶2为展开剂，展开，展距5cm，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材相应的位置上，显相同颜色斑点；

j、丹灯脑通药物制剂中葛根素的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰；

k、丹灯脑通药物制剂中川芎、阿魏酸的薄层色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材、阿魏酸中的一种或两种制备对照溶液；对照药材溶液的制备：取川芎对照药材，加乙醚提取，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；

l、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的液相色谱鉴别方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，提取液挥干，残渣加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。

9.按照权利要求6所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：所述药物制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a、丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水或甲醇或乙醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项∶

(1)每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于1.3mg；

(2)每单位量含原儿茶醛的限度不得少于0.5mg；

(3)每单位量含丹参素或其钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于1.8mg；

b、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀释合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的水或10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-水或0.2％～5％冰醋酸水溶液或0.005％～5％磷酸水溶液或0.2％～5％甲酸水溶液10％～50％∶2％～30％∶88％～20％为流动相，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于0.7mg

c、丹灯脑通药物制剂中丹参酮IIA的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加水或甲醇或乙醇或流动相溶解活哦稀释至合适刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.05％～5％甲酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，流速为0.5～2ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮IIA的限度不得少于0.05mg；

d、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005moL/L～0.3moL/L用1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0的磷酸二氢钠梯度洗脱系统为流动相，检测波长为200～41 0nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于2mg；

e、丹灯脑通药物制剂中葛根素的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加30～60℃的石油醚或60～90℃的石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯提取后，弃去30～60℃的石油醚或60～90℃的石油醚或乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷或醋酸乙酯层，挥干溶剂，残渣加10％～无水甲醇或10％～无水乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95％～5％为流动相，检测波长为190～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素的限度不得少于35mg；

f：丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇或乙醇或甲醇-甲酸混合溶液溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液或取待测药物制剂适量，加乙醚或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷提取，提取液挥干，残渣加甲醇或乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液5％～95％∶95％～5％或甲醇-乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液2％～20％∶10％∶40％∶88％～40％或甲醇或乙腈-0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸二氢钾或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钠溶液或0.005mol/L～2mol/L磷酸氢二钾溶液-甲酸或冰醋酸或磷酸5～95∶95～5∶0.2～5为流动相，检测波长为200～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸的限度不得少于4.5mg。

10.按照权利要求9所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：所述药物制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：

a.丹灯脑通药物制剂中丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种的含量测定：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参素或其钠盐、原儿茶醛中一种或两种对照品的水溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液13∶87为流动相，检测波长为280nm，柱温30℃，以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项：

(1)每单位量含丹参素或其钠盐的限度不得少于2.6mg；

(2)每单位量含原儿茶醛的限度不得少于1.0mg；

(3)每单位量含丹参素或其钠盐和原儿茶醛的总和的限度不得少于3.6mg；

b、丹灯脑通药物制剂中丹酚酸B或其镁盐含量测定：

取待测药物制剂适量，加水溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹酚酸B或其镁盐对照品的75％甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-1.7％甲酸水溶液30∶10∶60为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为286nm，柱温25℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹酚酸B或其镁盐的限度不得少于1.4mg

c、丹灯脑通药物制剂中丹参酮IIA的含量测定：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以丹参酮IIA对照品的甲醇溶液为对照；采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液75∶25为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温为30℃；以外标一点法进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含丹参酮IIA的限度不得少于0.1mg；

d、丹灯脑通药物制剂中野黄芩苷的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于4mg

e、丹灯脑通药物制剂中葛根素的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚洗涤，弃去乙醚液，残渣挥干溶剂后加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以葛根素对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰醋酸水溶液23％∶77％为流动相，检测波长为250nm，柱温在30℃范围内；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含葛根素的限度不得少于70mg

f、丹灯脑通药物制剂中阿魏酸的含量测定方法：

取待测药物制剂适量，加乙醚提取，提取液挥干，残渣加30％乙醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以阿魏酸的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钠溶液-甲酸45∶55∶2为流动相，检测波长为330nm；以外标一点进行计算，待测丹灯脑通药物制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含阿魏酸的限度不得少于9mg。

11.按照权利要求6所述的丹灯脑通药物制剂的质量控制方法，其特征在于：所述药物制剂的溶出度测试方法应为：取本品，照溶出度测定法，以脱气处理的水为溶出介质，转速为每分钟50～100转，经15～30分钟时，取溶液5～20ml，立即用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取本品，加水定容，超声处理5分钟，取出，放至室温，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照溶液，按含量测定项下的色谱条件，精密吸取上述两种溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，计算每粒的溶出量，葛根素溶出度不得少于80％，应符合规定。