CN1869218A - 一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 - Google Patents
一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1869218A CN1869218A CN 200510072233 CN200510072233A CN1869218A CN 1869218 A CN1869218 A CN 1869218A CN 200510072233 CN200510072233 CN 200510072233 CN 200510072233 A CN200510072233 A CN 200510072233A CN 1869218 A CN1869218 A CN 1869218A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- thalline
- dna
- genomic dna
- washing
- genome dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明介绍了一种简单快捷的适用于多种微生物基因组DNA提取的方法。将不同的菌体先经过液氮研磨或加入适当的20％SDS后加入缓冲液和裂解液，或直接加入缓冲液和裂解液后，于60℃温浴15分钟，然后直接用苯酚∶氯仿∶异戊醇和氯仿抽提除蛋白，最后经无水乙醇沉淀和70％乙醇洗涤即得到较纯的、可直接用于PCR等基因操作的基因组DNA。
Description
技术领域
本发明涉及基因组DNA的提取方法。
背景技术
现在用于分离和提取基因组DNA的方法很多，并且也都已经非常成熟。但其中对于提取细菌基因组DNA的方法报道的最多，并且也比较简单。但是对于丝状真菌和酵母的基因组DNA的提取方法则比较复杂，一般需要先用酶处理。因此，寻找一种简单方便的、并且能在多种微生物中使用的基因组DNA的提取方法既可以省时又可以省力。
发明内容
本发明的目的是提供了一种新的、简单快捷的、并适用于多种微生物基因组DNA的提取方法。
所述的微生物基因组DNA的提取方法，其包括以下步骤：
1、菌体的洗涤：
收集培养好的细菌、酵母和丝状真菌菌体，分别用磷酸缓冲液洗涤两次。
2、菌体的收集：
酵母和细菌分别在6,000rpm离心8分钟收集菌体，而丝状真菌菌体采用真空抽滤的办法收集菌体。
3、菌体破壁：
在离心得到的湿重为50～100g的菌体中加入300μL的磷酸盐缓冲液和300μL的裂解液，于60℃温浴15分钟，每隔2分钟上下颠倒混匀液体；
所述的微生物基因组DNA提取方法中，其所述第3步中丝状真菌在加入磷酸缓冲液和裂解液前，先用液氮研磨以便彻底破壁；
所述的微生物基因组DNA提取方法中，其所述第3步中酵母菌在破壁过程中再加入100μL的浓度为20％的SDS溶液；
所述的微生物基因组DNA提取方法中，其所述第1和第3步中磷酸缓冲液的成份为100mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，其pH值为8.0；
所述的微生物基因组DNA提取方法中，其所述第3步中裂解液的成份为100mmol/LNaCl，500mmol/L Tris-HCl和0.5％SDS，其pH值为8.0。
4、除蛋白：
依次用苯酚∶氯仿∶异戊醇和氯仿抽提蛋白，10,000rpm离心3分钟，取上清。
5、基因组DNA的沉淀：
在上清液中加入2倍体积的冰乙醇和1μL浓度为1μg/mL的RNase，混匀后-20℃放置1小时，10,000rpm离心5分钟，去上清。
6、基因组DNA的洗涤与干燥：
沉淀用75％的乙醇洗涤两次后，自然干燥，最后用50μL无菌水溶解，即得到较纯的、可直接用于PCR等基因操作的基因组DNA。
附图说明
附图是DNA的水平琼脂糖电泳图谱，其中的1泳道是λ噬菌体DNA经HindIII限制型内切酶酶切后的电泳图谱；左边的三个泳道分别为下面三个基因组DNA提取实施例的效果图，其中2为大肠杆菌，3为黑曲霉，4为酿酒酵母菌。
以下通过具体实事例详细说明发明的实施，目的在于帮助读者更好地理解本发明的实质，但不作为对本发明实施范围的限定。
实施例1：大肠杆菌DH5α在LB培养基中37℃振荡培养过夜后，离心收集菌体，其基因组DNA的提取结果见附图第2泳道，提取DNA的产量为80μg/g菌体。
实施例2：黑曲霉在查氏培养基中30℃振荡培养3天后，抽滤收集菌体，经液氮研磨后其基因组DNA提取的结果见附图第3，提取DNA的产量为100μg/g菌体。
实施例3：酵母菌H158在YPD培养基中30℃振荡培养24小时后，离心收集菌体，其基因组DNA的提取结果见附图第4泳道；与其他提取方法相比效果稍差，提取DNA的产量仅为20μg/g菌体，但是可以用于以后的分子遗传操作。
用A260/A280对以上提取的三种基因组DNA的质量进行了检测，结果表明三种DNA的纯度较高，比值都达到了1.8。
Claims (3)
1、一种基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)菌体的洗涤：收集培养好的菌体，分别用磷酸缓冲液洗涤两次，
(2)菌体的收集：酵母和细菌分别在6,000rpm离心8分钟收集菌体，而丝状真菌菌体采用真空抽滤的办法收集菌体，作后得到湿重为50～100g的菌体，
(3)菌体破壁，菌体于60℃温浴15分钟，其特征在于：
(a)丝状真菌先经过液氮研磨再加入300μL缓冲液和300μL裂解液，
(b)酵母菌中先加入100μL的20％SDS后再加入300μL缓冲液和300μL裂解液，
(c)细菌中直接加入300μL缓冲液和300μL裂解液后，
(4)除蛋白：依次用苯酚∶氯仿∶异戊醇和氯仿抽提蛋白，
(5)基因组DNA的沉淀：用2倍体积的冰乙醇，混匀后-20℃放置1小时，
(6)基因组DNA的洗涤与干燥：沉淀用75％的乙醇洗涤两次后，自然干燥，最后用50μL无菌水溶解，即得到较纯的、可直接用于PCR等基因操作的基因组DNA。
2、根据权利和要求1所述的基因组DNA提取的步骤中，其特征在于，磷酸缓冲液的成份为100mmol/L NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，其pH值为8.0；裂解液的成份为100mmol/L NaCl，500mmol/L Tris-HCl和0.5％SDS，其pH值为8.0。
3、根据权利和要求1所述的基因组DNA提取的步骤中，其特征在于，其所述的第(5)步中，同时加入1μL浓度为1μg/mL的RNase以除去RNA。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510072233 CN1869218A (zh) | 2005-05-27 | 2005-05-27 | 一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200510072233 CN1869218A (zh) | 2005-05-27 | 2005-05-27 | 一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1869218A true CN1869218A (zh) | 2006-11-29 |
Family
ID=37442997
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200510072233 Pending CN1869218A (zh) | 2005-05-27 | 2005-05-27 | 一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1869218A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101230344B (zh) * | 2008-01-16 | 2010-06-02 | 浙江大学 | 一种快速提取真菌dna的sls裂解液及其应用 |
| CN102643801A (zh) * | 2012-05-10 | 2012-08-22 | 南京林业大学 | 一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组dna的提取方法 |
| CN102102098B (zh) * | 2009-12-16 | 2013-02-13 | 西南民族大学 | 一种改良的酚-氯仿法提取真菌dna |
| CN105602941A (zh) * | 2016-03-20 | 2016-05-25 | 北京农学院 | 一种真菌菌丝总dna提取液及提取真菌菌丝总dna的方法 |
| CN107164229A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-09-15 | 四川省畜牧科学研究院 | 一种从环境样品中提取纯化总细菌的方法 |
| CN113265397A (zh) * | 2021-06-01 | 2021-08-17 | 上海捷瑞生物工程有限公司 | 一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法 |
| CN114703173A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-07-05 | 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种λ噬菌体DNA提取试剂盒及提取方法 |
-
2005
- 2005-05-27 CN CN 200510072233 patent/CN1869218A/zh active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101230344B (zh) * | 2008-01-16 | 2010-06-02 | 浙江大学 | 一种快速提取真菌dna的sls裂解液及其应用 |
| CN102102098B (zh) * | 2009-12-16 | 2013-02-13 | 西南民族大学 | 一种改良的酚-氯仿法提取真菌dna |
| CN102643801A (zh) * | 2012-05-10 | 2012-08-22 | 南京林业大学 | 一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组dna的提取方法 |
| CN102643801B (zh) * | 2012-05-10 | 2013-03-27 | 南京林业大学 | 一种适用于全基因组测序的产糖被细菌基因组dna的提取方法 |
| CN105602941A (zh) * | 2016-03-20 | 2016-05-25 | 北京农学院 | 一种真菌菌丝总dna提取液及提取真菌菌丝总dna的方法 |
| CN105602941B (zh) * | 2016-03-20 | 2018-03-20 | 北京农学院 | 一种真菌菌丝总dna提取液及提取真菌菌丝总dna的方法 |
| CN107164229A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-09-15 | 四川省畜牧科学研究院 | 一种从环境样品中提取纯化总细菌的方法 |
| CN113265397A (zh) * | 2021-06-01 | 2021-08-17 | 上海捷瑞生物工程有限公司 | 一种用于酵母基因组提取的细胞裂解液、试剂盒和方法 |
| CN114703173A (zh) * | 2022-03-18 | 2022-07-05 | 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种λ噬菌体DNA提取试剂盒及提取方法 |
| CN114703173B (zh) * | 2022-03-18 | 2023-06-06 | 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种λ噬菌体DNA提取试剂盒及提取方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1869218A (zh) | 一种简单快捷的适用于多种微生物基因组dna提取的方法 | |
| Mahuku | A simple extraction method suitable for PCR-based analysis of plant, fungal, and bacterial DNA | |
| Tsai et al. | Rapid method for separation of bacterial DNA from humic substances in sediments for polymerase chain reaction | |
| US20170321209A1 (en) | Method for isolating dna | |
| WO2009093142A1 (en) | Method for the extraction and purification of nucleic acids on a membrane | |
| CN103421906B (zh) | 检测金黄色葡萄球菌耐药性的组合物和方法 | |
| CN102382877A (zh) | 一种研究大曲细菌群落结构多样性的方法 | |
| Porteous et al. | A simple mini-method to extract DNA directly from soil for use with polymerase chain reaction amplification | |
| Tra Bi et al. | Identification of yeasts isolated from raffia wine (Raphia hookeri) produced in Côte d’Ivoire and genotyping of Saccharomyces cerevisiae strains by PCR inter-delta | |
| ATE452187T1 (de) | Methode zur isolation von nukleinsäuren | |
| Giudici et al. | Karyotyping of Saccharomyces strains with different temperature profiles | |
| CN102827833A (zh) | 一种蝇类肠道微生物总dna的提取方法 | |
| CN106754872B (zh) | 一种从杨树木材中提取微生物基因组dna的方法 | |
| CN101629174A (zh) | 一种简单高效价廉的森林土壤样品dna纯化方法 | |
| CN101372703A (zh) | 植物叶际微生物基因组dna提取方法 | |
| Yurlova et al. | Distinction of species in Aureobasidium and related genera by PCR-ribotyping | |
| Onwumah et al. | Molecular characterization of yeast isolated from palm wine in Alakahia, Rivers State, Nigeria | |
| CN108048378A (zh) | 一种产dna酶的菌株hl28-6及其应用 | |
| CN101029322A (zh) | 动物胆汁与血液混合用微生物发酵提取胆红素的方法 | |
| CN108949901B (zh) | 一种快速鉴定窖泥中甲烷囊菌的酶切方法 | |
| CN103911411A (zh) | 含天蚕素AD和BuforinⅡ的抗菌肽复合液的生产及纯化方法 | |
| CN103333883A (zh) | 一种高效提取用于pcr扩增的地下水微生物dna的方法 | |
| CN104232623A (zh) | 一种改进的动物组织基因组dna提取方法 | |
| Hong et al. | Restriction Fragment Length Ploymorphism of PCR Amplified Ribosomal DNA Among Korean Isolates of Phytophthora | |
| ES2408509B1 (es) | Extractos enzim�ticos de hongos de la vid que degradan aminas bi�genas en vinos. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |