CN1827773A - 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法 - Google Patents

用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1827773A
CN1827773A CN 200610034693 CN200610034693A CN1827773A CN 1827773 A CN1827773 A CN 1827773A CN 200610034693 CN200610034693 CN 200610034693 CN 200610034693 A CN200610034693 A CN 200610034693A CN 1827773 A CN1827773 A CN 1827773A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tobacco leaf
leaf protein
protein
solution
alkali
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN 200610034693
Other languages
English (en)
Other versions
CN100376684C (zh
Inventor
赵谋明
崔春
饶国华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China University of Technology SCUT
China National Tobacco Corp Guangdong Branch
Original Assignee
South China University of Technology SCUT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China University of Technology SCUT filed Critical South China University of Technology SCUT
Priority to CNB2006100346931A priority Critical patent/CN100376684C/zh
Publication of CN1827773A publication Critical patent/CN1827773A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100376684C publication Critical patent/CN100376684C/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

本发明涉及用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法，包括：利用碱溶酸沉法提取低次烟叶中的蛋白质制备烟叶蛋白浆；采用复合蛋白酶对烟叶蛋白浆进行限制性酶解后，灭酶，制备烟叶蛋白酶解液；采用超滤膜对烟叶蛋白酶解液进行分级分离获得烟叶蛋白抑菌肽混合液；将烟叶蛋白抑菌肽混合液冷冻干燥或喷雾干燥；得到的烟叶蛋白抑菌肽混合物能有效抑制革兰氏阴性菌的生长繁殖，最低抑菌浓度为0.05％，可以作为食品添加剂广泛应用于食品及相关领域中；本发明通过碱溶酸沉法可显著提高烟叶蛋白的提取率；通过生物酶解可有效控制蛋白的降解程度；通过超滤膜分离酶解液富集生物活性肽，简化分离操作工艺，提高生物活性肽的有效浓度。

Description

用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法
技术领域
本发明涉及到用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法。
背景技术
中国是烟草种植和生产大国，其种植面积和产量均居世界首位。在烟草种植和加工过程中，产生了大量的低次烟叶、烟梗、烟末和烟籽等烟草废弃物，约占烟叶总产量的25％。对低次烟叶资源的综合利用，一直受到国内外研究者的重视。有很多研究报道：从低次烟叶中提取类似大豆蛋白质的烟叶蛋白质，作为食物蛋白来源和优质饲料添加剂。从烟叶蛋白的提取方法来看，早期研究工作者所提取的烟叶蛋白往往带有颜色和味道，并且生产工艺复杂，投资大，产量低，成本难以被接受。后来许多科研工作者对烟叶中的烟叶蛋白进行了提纯，得到了高纯度的烟叶蛋白，其中特别是Kung和Tso、Lowe对烟叶中FI蛋白提纯方法的逐步简化做了很大贡献。但纵观国内外科研工作者所研究总结出的提取方法，都需有超速或高速冷冻离心步骤，并且大多过程需控制在0～4℃左右；亦有采用等电聚焦、凝胶电泳、超滤等方法提取烟叶蛋白。这些方法虽然能获得纯净的烟叶蛋白，但成本太高，单位时间提取的产量较低，难以适应大规模工业化生产。我国开发利用烟叶蛋白的研究工作起步较晚，仅对烟叶蛋白的提取方法进行了一些初步探讨，但规模化提取烟叶蛋白的技术难题还有待解决。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供一种用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法。本发明通过高效提取低次烟叶蛋白(烟叶蛋白提取率达到86.71％，比文献报道中的提取率高出一倍多)、有效控制烟叶蛋白的酶解过程、分级膜分离酶解液富集生物活性肽、具有工艺操作简便、生产成本低、没有任何污染、所得抑菌活性肽生物活性稳定，最低抑菌浓度为0.05％，安全性高等优点，能广泛应用于食品领域中，为低此烟叶的深加工利用提供了一条新的途径。
本发明的用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法，包括如下步骤：
(1)用碱溶酸沉法提取低次烟叶中的蛋白质制备烟叶蛋白浆；
(2)采用复合蛋白酶对烟叶蛋白浆进行限制性酶解后，灭酶，制备烟叶蛋白酶解液；
(3)采用超滤膜对烟叶蛋白酶解液进行分级分离获得烟叶蛋白抑菌肽混合液；
(4)将烟叶蛋白抑菌肽混合液冷冻干燥或喷雾干燥。
优选方案如下：
步骤(1)中，将低次烟叶粉碎成60-100目的烟叶粉末后，将烟叶粉末与水以1∶10～15混合，40～60℃磨浆，用氢氧化钠调整pH值至为7.5～8.5，搅拌1小时后用200目滤布过滤，滤液为碱提烟叶蛋白溶液；滤渣采用上述工艺再碱溶1-2次，过滤除杂，合并碱提烟叶蛋白溶液；用盐酸调整碱提烟叶蛋白溶液的pH值至2.5～3.5，在4-10℃下酸沉6-10hr后，离心沉淀蛋白，即得烟叶蛋白浆。
所述离心沉淀蛋白中的离心条件是4800rpm，4-10℃，20-30min。
步骤(2)中，将烟叶蛋白浆溶解在水中，使蛋白浓度达到4-8％，混合均匀后用0.1M盐酸或0.1M氢氧化钠将溶液pH值调节到6.0-7.5，温度保持在40-50℃，加入蛋白酶3000-4500U/g蛋白，水解度控制在3-7％，灭酶，得到烟叶蛋白酶解液。
步骤(2)得到的烟叶蛋白酶解液通过分子量10000Da的超滤膜除去大分子物质后得透过液；用截留分子量为1000Da的超滤膜对透过液进行二次超滤剔除小分子肽、氨基酸及其他杂质成分，即得分子量为1000Da-10000Da的烟叶蛋白抑菌肽混合液，将其冷冻干燥或喷雾干燥保存。
步骤(2)中所述酶采用ProtamexTM或木瓜蛋白酶。
步骤(2)中，酶解反应结束后，在100℃加热10min灭酶，将酶解产物冷却到25℃。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：碱溶酸沉法提取低次烟叶中的蛋白可以显著提高低次烟叶蛋白提取率，跟文献报道中所提到的有机溶剂提取法和水浸提法的提取率相比，蛋白提取率提高了一倍多；通过控制低次烟叶蛋白的降解程度，得到具有明显抗菌活性的生物活性肽；通过分级膜分离技术，使其有效抑菌肽得以富集，最低抑菌浓度为0.05％。本发明工艺操作简便、生产成本低、没有任何污染、所得抑菌活性肽生物活性稳定，安全性高，可广泛应用于食品领域中。
具体实施方式
实施例1
第一步：将低次烟叶粉碎成100目的烟叶粉末后，与水以1∶10混合，40℃磨浆，用氢氧化钠调整pH值至为7.5，搅拌1小时后用200目滤布过滤，滤液为碱提烟叶蛋白溶液。滤渣采用上述工艺再碱溶2次，过滤除杂，合并碱提烟叶蛋白溶液；用盐酸调整碱提烟叶蛋白溶液的pH值至2.5，在4℃下酸沉6hr后，4800rpm，4℃，离心20min，沉淀蛋白，得烟叶蛋白浆，其回收率达86.71％。
第二步：将低次烟叶蛋白浆溶解在水中，使蛋白浓度达到4％，混合均匀后用0.1M盐酸将溶液pH值调节到6.0，温度保持在40℃，加入复合蛋白酶(ProtamexTM)4500U/g蛋白，水解度控制在3％，得到酶解烟叶蛋白液，100℃加热10min灭酶；
第三步：将烟叶蛋白酶解液控制通过分子量10000Da的超滤膜除去大分子物质后得透过液；采用截留分子量为1000Da的超滤膜对透过液进行二次超滤剔除小分子肽、氨基酸及其他杂质成分，即得分子量为1000Da-10000Da的烟叶蛋白抑菌肽混合液，将其冷冻干燥保存，其最低抑菌浓度为0.09％。
实施例2
第一步：将低次烟叶粉碎成80目的烟叶粉末后，与水以1∶12混合，50℃磨浆，用氢氧化钠调整pH值至为8，搅拌1小时后用200目滤布过滤，滤液为碱提烟叶蛋白溶液。滤渣采用上述工艺再碱溶2次，过滤除杂，合并碱提烟叶蛋白溶液；用盐酸调整碱提烟叶蛋白溶液的pH值至3.0，在4℃下酸沉6hr后，4800rpm，4℃，离心20min以沉淀蛋白，得烟叶蛋白浆，其回收率达84.24％。
第二步：将低次烟叶蛋白浆溶解在水中，使蛋白浓度达到4-8％，混合均匀后用0.1M氢氧化钠将溶液pH值调节到7.0，温度保持在45℃，加入木瓜蛋白酶3000U/g蛋白，水解度控制在5％，得到酶解烟叶蛋白液，100℃加热10min灭酶；
第三步：将烟叶蛋白酶解液温度控制通过分子量10000Da的超滤膜除去大分子物质后得透过液；采用截留分子量为1000Da的超滤膜对透过液进行二次超滤剔除小分子肽、氨基酸及其他杂质成分，即得分子量为1000Da-10000Da的烟叶蛋白抑菌肽混合液，将其冷冻干燥保存，其最低抑菌浓度为0.07％。
实施例3
第一步：将低次烟叶粉碎成60目的烟叶粉末后，与水以1∶15混合，50℃磨浆，用氢氧化钠调整pH值至为8.5，搅拌1小时后用200目滤布过滤，滤液为碱提烟叶蛋白溶液。滤渣采用上述工艺再碱溶1次，过滤除杂，合并碱提烟叶蛋白溶液；用盐酸调整碱提烟叶蛋白溶液的pH值至3.0，在4℃下酸沉10hr后，4800rpm，4℃，离心20min，沉淀蛋白，即得烟叶蛋白浆，其回收率达83.53％。
第二步：将低次烟叶蛋白浆溶解在水中，使蛋白浓度达到8％，混合均匀后用氢氧化钠将溶液pH值调节到8.5，温度保持在50℃，加入木瓜蛋白酶4000U/g蛋白，水解度控制在7％，得到酶解烟叶蛋白液，100℃加热10min灭酶；
第三步：将烟叶蛋白酶解液温度控制通过分子量10000Da的超滤膜除去大分子物质后得透过液；采用截留分子量为1000Da的超滤膜对透过液进行二次超滤剔除小分子肽、氨基酸及其他杂质成分，即得分子量为1000Da-10000Da的烟叶蛋白抑菌肽混合液，将其冷冻干燥保存，其最低抑菌浓度为0.05％。

Claims (7)

1、一种用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)利用碱溶酸沉法提取低次烟叶中的蛋白质制备烟叶蛋白浆；
(2)采用复合蛋白酶对烟叶蛋白浆进行限制性酶解后，灭酶，制备烟叶蛋白酶解液；
(3)采用超滤膜对烟叶蛋白酶解液进行分级分离获得烟叶蛋白抑菌肽混合液；
(4)将烟叶蛋白抑菌肽混合液冷冻干燥或喷雾干燥。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，将低次烟叶粉碎成60-100目的烟叶粉末后，将烟叶粉末与水以1∶10～15混合，40～60℃磨浆，用氢氧化钠调整pH值至为7.5～8.5，搅拌1小时后用200目滤布过滤，滤液为碱提烟叶蛋白溶液；滤渣采用上述工艺再碱溶1-2次，过滤除杂，合并碱提烟叶蛋白溶液；用盐酸调整碱提烟叶蛋白溶液的pH值至2.5～3.5，在4-10℃下酸沉6-10hr后，离心沉淀蛋白，即得烟叶蛋白浆。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，将烟叶蛋白浆溶解在水中，使蛋白浓度达到4-89％，混合均匀后用0.1M盐酸或0.1M氢氧化钠将溶液pH值调节到6.0-7.5，温度保持在40-50℃，加入蛋白酶3000-4500U/g蛋白，水解度控制在3-7％，灭酶，得到烟叶蛋白酶解液。
4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于将步骤(2)得到的烟叶蛋白酶解液通过分子量10000Da的超滤膜除去大分子物质后得透过液；用截留分子量为1000Da的超滤膜对透过液进行二次超滤剔除小分子肽、氨基酸及其他杂质成分，即得分子量为1000Da-10000Da的烟叶蛋白抑菌肽混合液，将其冷冻干燥或喷雾干燥保存。
5、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述离心沉淀蛋白中的离心条件是4800rpm，4-10℃，20-30min。
6、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述酶采用ProtamexTM或木瓜蛋白酶。
7、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于步骤(2)中，酶解反应结束后，在100℃加热10min灭酶，将酶解产物冷却到25℃。
CNB2006100346931A 2006-03-28 2006-03-28 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法 Expired - Fee Related CN100376684C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100346931A CN100376684C (zh) 2006-03-28 2006-03-28 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2006100346931A CN100376684C (zh) 2006-03-28 2006-03-28 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1827773A true CN1827773A (zh) 2006-09-06
CN100376684C CN100376684C (zh) 2008-03-26

Family

ID=36946326

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2006100346931A Expired - Fee Related CN100376684C (zh) 2006-03-28 2006-03-28 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100376684C (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103734905A (zh) * 2014-01-03 2014-04-23 广东中烟工业有限责任公司 一种去蛋白烟草提取物的制备方法及应用
CN104738306A (zh) * 2015-03-31 2015-07-01 川渝中烟工业有限责任公司 一种从香料烟废弃烟籽中提取蛋白质的方法
CN104738302A (zh) * 2015-03-31 2015-07-01 川渝中烟工业有限责任公司 一种从大田废弃鲜烟叶中提取可溶性蛋白质的方法
CN108977491A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及用于制备抗前列腺癌药物的用途
CN108977492A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及在抗前列腺癌方面的应用
CN108977490A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及在制备抗前列腺癌药物方面的应用
CN108977489A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及其医药用途
CN109112173A (zh) * 2018-09-09 2019-01-01 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及抗前列腺癌用途
CN110934159A (zh) * 2019-12-24 2020-03-31 贵州贵安精准医学研究院股份有限公司 一种天然杀菌喷雾剂的开发及应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1101942A (zh) * 1993-10-19 1995-04-26 合肥经济技术学院 自烟草鲜叶中制取f-1-p晶体蛋白的新方法

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103734905B (zh) * 2014-01-03 2016-03-30 广东中烟工业有限责任公司 一种去蛋白烟草提取物的制备方法及应用
CN103734905A (zh) * 2014-01-03 2014-04-23 广东中烟工业有限责任公司 一种去蛋白烟草提取物的制备方法及应用
CN104738306B (zh) * 2015-03-31 2018-12-25 四川中烟工业有限责任公司 利用闪式提取技术从香料烟废弃烟籽中提取蛋白质的方法
CN104738302A (zh) * 2015-03-31 2015-07-01 川渝中烟工业有限责任公司 一种从大田废弃鲜烟叶中提取可溶性蛋白质的方法
CN104738302B (zh) * 2015-03-31 2018-12-25 四川中烟工业有限责任公司 利用闪式提取技术从大田废弃鲜烟叶中提取可溶性蛋白质的方法
CN104738306A (zh) * 2015-03-31 2015-07-01 川渝中烟工业有限责任公司 一种从香料烟废弃烟籽中提取蛋白质的方法
CN108977491A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及用于制备抗前列腺癌药物的用途
CN108977492A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及在抗前列腺癌方面的应用
CN108977490A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及在制备抗前列腺癌药物方面的应用
CN108977489A (zh) * 2018-09-09 2018-12-11 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及其医药用途
CN109112173A (zh) * 2018-09-09 2019-01-01 淮安亿泰生物科技有限公司 一种酶解肽及抗前列腺癌用途
CN109112173B (zh) * 2018-09-09 2021-09-17 广西赣华真美生物科技有限公司 一种酶解肽及抗前列腺癌用途
CN108977492B (zh) * 2018-09-09 2021-11-09 刘飞 一种酶解肽及在抗前列腺癌方面的应用
CN110934159A (zh) * 2019-12-24 2020-03-31 贵州贵安精准医学研究院股份有限公司 一种天然杀菌喷雾剂的开发及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN100376684C (zh) 2008-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1827773A (zh) 用低次烟叶蛋白制备抑菌肽的方法
WO2015103974A1 (zh) 麦角硫因的提取及纯化方法
CN102961741B (zh) 一种破伤风类毒素疫苗的制备方法
CN1259345C (zh) 一种从透明质酸发酵液中制备透明质酸钠的方法
CN101869169B (zh) 以鱼下脚料发酵耦合膜技术制备鱼低聚肽的方法
CN112209998B (zh) 一种超声辅助提取玉米蛋白的方法
CN103627768A (zh) 鱼皮胶原蛋白生物活性小肽及其制备方法
JP6077672B2 (ja) 細胞培養培地用のトウモロコシ活性ペプチド添加剤
CN111454375A (zh) 一种银耳多糖的提取方法
CN113005161A (zh) 一种聚唾液酸的制备方法及聚唾液酸制品
CN108101980B (zh) 一种高纯度藻蓝色素的制备方法
CN104404094A (zh) 基于蛤利用酶转化法提取牛磺酸的方法
CN103804526B (zh) 一种肝素钠粗品的提纯方法
CN112125948B (zh) 一种从植物叶片中同步提取植物多酚和植物蛋白并制备植物蛋白水解肽的方法
CN1100563C (zh) 北冬虫夏草生产基质中有效成分的提取方法
CN112457377B (zh) 美洲大蠊多肽及其应用
CN113350381B (zh) 一种提高珍珠水解液蛋白比例的方法和处理液
CN1544645A (zh) 双酶法生产硫酸软骨素
CN101067132A (zh) 一种凝血酶的提取分离方法
CN1826949A (zh) 大豆种皮制备果胶新方法
CN108059686B (zh) 一种以化橘红为基础制备多糖的方法
CN1179781C (zh) 生物大分子的电超滤－溶析结晶分离提纯法
CN111848644A (zh) 青霉素发酵液的处理方法
CN1160455C (zh) 一种从谷氨酰胺转胺酶发酵液中提取谷氨酰胺转胺酶的方法
CN114990183B (zh) 一种基于大米蛹虫草子实体制备虫草素和降血压肽的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY; APPLICANT

Free format text: FORMER OWNER: SOUTH CHINA UNIVERSITY OF TECHNOLOGY

Effective date: 20070302

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20070302

Address after: 510640 No. five, 381 mountain road, Guangzhou, Guangdong, Tianhe District

Applicant after: South China University of Technology

Co-applicant after: Guangdong Branch of China National Tobacco Corporation

Address before: 510640 No. five, 381 mountain road, Guangzhou, Guangdong, Tianhe District

Applicant before: South China University of Technology

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20080326

Termination date: 20130328