CN1775004A - 利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法 - Google Patents
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Abstract
一种农业技术领域的利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法。步骤为：(1)取材灭菌；(2)预培养：用灭好菌的甜瓜种子培养出无菌苗；(3)启动培养：将无菌苗子叶剪下，在启动培养基上培养，然后切去顶芽，再在原培养基上诱导培养；(4)不定芽诱导和伸长培养：将子叶节转接芽诱导培养基中培养，见有芽点出现时将外植体转接入伸长培养基；(5)继代培养：待丛生芽伸长到3cm时，将伸长芽利用扦插的方法进行继代培养；(6)生根培养；(7)再生植株的驯化：将生根的再生苗取出，洗净根部培养基并作修剪后，种植到驯化基质中。本发明进行甜瓜克隆苗生产，繁殖系数比其他繁殖方法更高，苗健壮，长势强。移栽到大田，生长势丝毫不差于实生苗。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种农业技术领域的方法，具体是一种利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法。
背景技术
甜瓜杂种一代具有明显的杂种优势，产量一般较亲本品种增产20％-99％，甚至可达300％以上，而且通常还使果实的含糖量、干物质含量和贮藏性等都得到提高。在日本的甜瓜栽培中，基本上都是杂种一代。我国甜瓜的生产和科研，在八十年代中期就已经注意了这个问题，近年，主要产区已以杂种一代形式应用于生产。总之，甜瓜杂种一代的利用，已经成为国际甜瓜的生产的新趋势。虽然，杂交种优势明显，但是杂交种生产麻烦，其每年的制种需要投入大量的工作和资金，要设置隔离区防止种质混杂，又要注意亲本的繁殖与维持其原有的特性。正是由于制种工作的烦琐，不可能很快满足市场的需求，再者，目前甜瓜的生产用种大多是从国外引进，导致了甜瓜种植户付出大量的资金用于购种。为了能够减少甜瓜种子用户的经济负担，育种工作者在培育新品种的同时努力研究杂种优势的固定，使之代代相传，不至于衰退。在甜瓜上建立快速、高效、稳定的再生系统，其中利用组织培养技术进行植物克隆，来固定杂交种优良性状是有效的途径之一。甜瓜的繁殖最主要依靠的是种子繁殖，目前很少有人研究其无性繁殖方法。近几年，也有报道采用组织培养的方法繁殖种苗。
经对现有技术的文献检索发现，孙天国等在《北方园艺》2005(2)：64-65上发表的“薄皮甜瓜子叶组织培养的研究”一文中报道了甜瓜子叶为外植体的培养方案，利用子叶直接诱导不定芽。但是这种方法仍然存在一些很难解决的问题。外植体培养10天左右就可看到“芽”的出现，再培养10天，外植体表面可出现30-50个“芽”，然而在继代到伸长培养基后，这么多芽只产生相对很少的可伸长的芽苗，导致最终的繁殖系数很低，不能应用于生产实践。
发明内容
本发明针对现有技术的不足和缺陷，提供一种利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，使其建立一个快速、高倍数、微芽繁殖体系，获得原品种优良特性的甜瓜快繁体系，以减少甜瓜生产用种的资金投入，降低成本，解决优良品种的退化和混杂现象，且达到快速繁殖优良种苗的目的。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：
(1)取材灭菌：将甜瓜种子剥去种壳，进行常规灭菌；
(2)预培养：用灭好菌的甜瓜种子培养出无菌苗；
(3)启动培养：将无菌苗子叶剪下，在启动培养基上培养，然后切去顶芽，再在原培养基上诱导培养；
(4)不定芽诱导和伸长培养：培养一段时间后，将子叶节转接芽诱导培养基中培养，见有芽点出现时将外植体转接入伸长培养基；
(5)继代培养：待丛生芽伸长到3cm时，将伸长芽利用扦插的方法(一分为二)进行继代培养，继代繁殖一次后即可进行生根培养；
(6)生根培养：不定芽在生根培养基上培养生根；
(7)再生植株的驯化：将生根的再生苗取出，洗净根部培养基并作适当修剪后，种植到驯化基质中。
本发明用甜瓜子叶节先去掉具有顶端优势的顶芽，再用细胞高浓度的培养基诱导丛生芽，在诱导出的丛生芽长到3cm高时，即可切下转入生根培养基，使其生根，最后驯化成健壮的再生植株。采用切去顶芽的甜瓜子叶节进行培养，消除了顶端优势的影响，使不定芽引导率更高。本发明进行甜瓜克隆苗生产，繁殖系数比其他繁殖方法更高，苗健壮，长势强。移栽到大田，生长势丝毫不差于实生苗。
具体实施方式
结合本发明的内容提供以下实施例，具体实施如下：
(1)取材灭菌：将甜瓜种子剥去壳后，用70％的酒精灭菌30s，再用经过滤的饱和漂白粉溶液灭菌15min，在超净工作台上用无菌水冲洗3次，并在无菌水中浸泡6h；
(2)预培养：将灭好菌的甜瓜种子接种于MS培养基中(其中包含蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH值调整为5.8，下同)，每150ml三角瓶内接4粒种子，培养温度为25℃，光照时间为16h/d，光照强度18.75μmol·m-2·s-1；
(3)启动培养：当无菌苗子叶展开时，切去下胚轴(子叶节处留1.5cm)，将子叶节转接到MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培养基中，培养2天后切去顶芽，再在原培养基上诱导培养；
(4)不定芽诱导和伸长培养：培养4天后，将子叶节转接入MS+BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L培养基中培养，见有芽点出现时可将外植体转接入伸长培养基MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培养；
(5)继代培养：待丛生芽伸长到3cm后，将伸长芽利用扦插的方法(一分为二)进行继代培养。培养基是MS+BA0.05mg/L+IAA0.02mg/L，继代繁殖一次后即可进行生根培养；
(6)生根培养：不定芽转接在MS+NAA0.2mg/L生根培养基上，培养14天即可生根；
(7)再生植株的驯化：将生根的再生苗取出，洗净根部培养基并作适当修剪后，选择整齐一致的材料分别栽在珍珠岩∶草炭土为1∶1的基质中，注意保温保湿，3周后即可与实生苗长势相同。
甜瓜克隆苗在上海交大农生院农场进行试种，结果表明：甜瓜克隆苗前期长势略逊于实生苗，栽培3周后即可跟上，并逐渐超过实生苗。甜瓜成熟比实生苗早5天左右。
Claims (9)
1、一种利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取材灭菌：将甜瓜种子剥去种壳，进行灭菌；
(2)预培养：用灭好菌的甜瓜种子培养出无菌苗；
(3)启动培养：将无菌苗子叶剪下，在启动培养基上培养，然后切去顶芽，再在原培养基上诱导培养；
(4)不定芽诱导和伸长培养：培养一段时间后，将子叶节转接芽诱导培养基中培养，见有芽点出现时将外植体转接入伸长培养基；
(5)继代培养：待丛生芽伸长到3cm时，将伸长芽利用扦插的方法进行继代培养，继代繁殖一次后即进行生根培养；
(6)生根培养：不定芽在生根培养基上培养生根；
(7)再生植株的驯化：将生根的再生苗取出，洗净根部培养基并作修剪后，种植到驯化基质中。
2、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(1)，取材灭菌，具体如下：
将甜瓜种子剥去壳后，用70％的酒精灭菌30s，再用经过滤的饱和漂白粉溶液灭菌15min，在超净工作台上用无菌水冲洗3次，并在无菌水中浸泡6h。
3、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(2)，预培养，具体如下：
将灭好菌的甜瓜种子接种于MS培养基中，每150ml三角瓶内接4粒种子，培养温度为25℃，光照时间为16h/d，光照强度18.75μmol·m-2·s-1。
4、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(3)，启动培养，具体如下：
无菌苗子叶展开时，切去下胚轴，子叶节处留1.5cm，将子叶节转接到MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培养基中，培养2天后切去顶芽，再在原培养基上诱导培养。
5、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(4)，不定芽诱导和伸长培养，具体如下：
培养4天后，将子叶节转接入MS+BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L培养基中培养，见有芽点出现时将外植体转接入伸长培养基MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L培养。
6、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(5)，继代培养，具体如下：
待丛生芽伸长到3cm后，将伸长芽利用扦插的方法进行继代培养，培养基是MS+BA0.05mg/L+IAA0.02mg/L，继代繁殖一次后即进行生根培养。
7、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(6)，生根培养，是指：不定芽转接在MS+NAA0.2mg/L生根培养基上，培养14天生根。
8、根据权利要求3-7任意一项所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的MS培养基，其中包含蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH值为5.8。
9、根据权利要求1所述的甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法，其特征是，所述的步骤(7)，再生植株的驯化，具体如下：
将生根的再生苗取出，洗净根部培养基并作修剪后，选择整齐一致的材料分别栽在珍珠岩∶草炭土为1∶1的基质中，注意保温保湿，3周后即与实生苗长势相同。
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