CN109197423B - 一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法。该方法首先采用甜瓜侧枝扦插获得生根量较大且成活率高的扦插苗，然后采用白粉菌孢子悬浮液喷雾法对扦插苗进行接菌后在高湿环境下培养，对其进行抗性鉴定，鉴定结果与室外田间抗病性接菌实验结果一致。本发明在环境条件可控的情况下对甜瓜白粉病抗性进行鉴定，具有操作简单易行、表型直观可靠、周期短、不伤害甜瓜植株的优势，对甜瓜白粉病抗性遗传及育种研究具有重要意义。

Description

一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法
技术领域
本发明属于植物抗病育种技术领域，具体涉及一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法。
背景技术
甜瓜果实香脆清甜、风味独特、营养物质丰富，是一种世界范围内广泛种植的经济作物，已成为深受消费者欢迎的高档瓜果。然而，甜瓜主栽品种在生产中极易受到各种病原菌的侵害，尤其是白粉病病害最为严重，且分布范围广，已成为世界性的甜瓜主要病害，是甜瓜绿色生产的主要障碍。白粉菌主要危害的部位是甜瓜植株的叶片，该病原菌在与甜瓜发生亲和反应后，通过形成吸器获取寄主的养分，从而使侵染部位失绿干枯，进而影响叶片的光合同化作用，同时也危害茎和果实生长发育，严重降低甜瓜果实品质和产量，造成重大经济损失。因此，防治甜瓜白粉病是目前甜瓜产业亟待解决的重要问题。
现阶段甜瓜白粉病的防治仍然主要依靠大量喷洒各类化学药品。然而，大量化学试剂的使用不仅严重污染了生态环境，对人类身体健康造成一定威胁，还会导致病原菌产生耐药性，对防治工作造成更大的困难。目前，防治甜瓜白粉病最经济有效、环保的方法就是筛选抗白粉病材料，并进行抗病新品种培育和推广。
由于甜瓜白粉病寄生菌是一种活体寄生菌，只能在活体寄主上寄生，无法通过人工培养基生长，因此甜瓜白粉病抗性鉴定有诸多的困难。目前，比较常用的甜瓜白粉病抗性的鉴定方法是在种子育苗的基础上进行苗期喷雾接菌鉴定和离体叶片接菌鉴定。苗期喷雾接种法对发病条件要求比较严格，而且该方法环节繁琐、鉴定周期长、费时费力，浪费种子材料，特别是不适合甜瓜稀有种质资源的抗病性鉴定。同样，离体叶片接菌法需要在固体培养基上进行无菌操作，所需成本也比较高，无法进行大量种质资源的抗病性鉴定。因此，建立一套便捷、快速、有效、成本低的室内甜瓜白粉病离体抗性鉴定技术迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是克服现有甜瓜抗白粉病鉴定技术的缺陷，提供一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法。该方法首先采用甜瓜侧枝扦插的方法获得生根量较大且成活率高的扦插苗，然后采用白粉菌孢子悬浮液喷雾法对扦插苗进行接菌后在高湿环境下培养，对其进行抗性鉴定，鉴定结果与室外田间抗病性接菌实验结果一致。本发明在环境条件可控的情况下对甜瓜白粉病抗性进行鉴定，具有操作简单易行、表型直观可靠、周期短、不伤害甜瓜植株的优势，对甜瓜白粉病抗性遗传及育种研究具有重要意义。
本发明的技术方案是：一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，包括以下步骤：
1)扦插基质：以体积比为2：0.8-1.2的营养土和蛭石作为扦插基质，对扦插基质进行消毒；
2)甜瓜扦插苗的制备及培养：取保留顶芽或侧芽的甜瓜侧蔓枝条作为扦插枝条；扦插枝条下端依次经过蔗糖水溶液、维生素B12溶液和萘乙酸溶液预处理；然后将扦插枝条插入步骤1)的扦插基质中，黑暗培养炼苗2-3天后正常培养；
3)白粉菌孢子液的准备
从田间随机选取白粉菌发病严重的新鲜甜瓜叶片，取分生孢子制备白粉菌孢子悬浮液；
4)喷雾法接菌
当甜瓜扦插苗长出第2片真叶之后，采用孢子悬浮液喷雾法接种；
5)接菌后培养
将接菌的甜瓜扦插苗放置于温室内黑暗保湿24±4小时，温度控制在28-30℃，湿度控制在80％以上，然后正常培养；
6)发病情况调查及抗性分析
接种7天后对甜瓜扦插苗的抗病情况进行调查，然后根据病情分级结果计算病情指数并划分抗性水平。
优选的，所述步骤2)蔗糖溶液为：2±0.5％(质量比)蔗糖溶液；维生素B12溶液为：将1ml:0.25-1mg(优选1ml:0.5mg)针剂按照体积比1:100的比例兑水稀释；萘乙酸溶液浓度为120±20mg/L。
优选的，所述步骤3)的白粉菌孢子悬浮液的制备方法为：用毛刷将分生孢子转移至盛有蒸馏水的烧杯中，再滴加终浓度0.05±0.01％的Tween-20表面活性剂后高速搅拌均匀，打散孢子团制备得到白粉菌孢子悬浮液，要求孢子悬浮液浓度≥1×105个/mL。
优选的，所述步骤4)的接种方法为：将配置好的白粉菌孢子悬浮液用小喷壶均匀地喷施到甜瓜叶片的正面，1天后重复接种1次。
本发明显著的优势在于：
1、本发明使用蔗糖溶液和维生素B12稀释液进行催根处理，能显著促进扦插苗生根，提高扦插苗的成活率；再经过黑暗炼苗处理后，使扦插苗的成活率可以达到97％以上；
2、在人工气候温室条件下对甜瓜进行扦插育苗，然后对其白粉病抗性进行离体鉴定。通过与甜瓜幼苗白粉病抗性鉴定技术相比，具有周期短、发病显著、重复性好、操作简便易行，节约成本、不受外界环境因素干扰等优势，同时，离体鉴定的方法最重要的是不会对甜瓜植株造成病害，大大缩短了抗白粉病甜瓜新品种的培育周期。
附图说明
图1为实施例1用于高抗白粉病种质材料M1的鉴定表型；
图2为实施例1用于易感白粉病种质材料B29的鉴定表型。
具体实施方式
实施例1：
1)扦插基质准备与消毒
将营养土和蛭石按体积比2:1混合后装于口径15cm的花盆中，基质用50％的多菌灵可湿性粉剂700倍溶液或75％百菌清可湿性粉剂800倍溶液浇透后，自然晾干。
2)甜瓜扦插苗的制备及培养
选择生长健壮、无病虫害的甜瓜侧蔓(留顶芽或侧芽)，将基部切口处理为平滑的马蹄形，即得扦插枝条。将扦插枝条下端2-3cm部分在2％(质量比)蔗糖溶液中浸泡24小时后用清水冲洗；然后在维生素B12溶液中(将1ml:0.5mg针剂按照体积比1:100的比例兑水稀释)中3小时后清水冲洗干净；最后，在120mg/L的萘乙酸溶液中浸泡2小时后清水冲洗干净。然后将扦插枝条插入步骤1)用多菌灵或百菌清溶液杀菌的扦插基质中，黑暗培养2天(保持室内温度在24-30℃，空气相对湿度65％以上)后正常培养(光照周期为：16小时光照/8小时黑暗，保持室内温度在光照30℃黑暗24℃，空气相对湿度保持在50％以上即可)。
3)白粉菌孢子液的准备
从田间随机选取白粉菌发病严重的新鲜甜瓜叶片，用毛刷将分生孢子转移至盛有蒸馏水的烧杯中，再滴加Tween-20表面活性剂(终浓度0.05％)后高速搅拌均匀，打散孢子团即可获得白粉菌孢子悬浮液。用血球计数板于光学显微镜下测算孢子浓度，将孢子悬浮液浓度调整为1×106个/mL，用于接种试验。
4)喷雾法接菌
当甜瓜扦插苗长出第二片真叶之后采用孢子悬浮液喷雾法接种，将配置好的白粉菌孢子悬浮液用小喷壶均匀地喷施到甜瓜叶片的正面，一天后重复接种一次。
5)接菌后培养
将接菌的甜瓜扦插苗放置于空调温室内黑暗保湿24小时，温度控制在28-30℃之间，湿度控制在80％以上；然后，正常培养(光照周期为16小时光照/8小时黑暗，保持室内温度在光照30℃黑暗24℃，空气相对湿度保持在80％以上)。
6)发病情况调查及抗性分析
接种7天后对甜瓜扦插苗的抗病情况进行调查，采用国家蔬菜工程技术研究中心植保课题的病情分级标准，共分6级。0级：整株没有菌斑；1级：少量叶片有白粉菌斑，白粉模糊，茎蔓无菌斑；2级：叶片有较多白粉菌斑，茎蔓有少量菌斑，白粉不明显；3级：叶片上有很多菌斑，连片，茎蔓上有明显菌斑；4级：叶片和茎蔓上均布满白粉菌斑，白粉浓厚；5级：植株死亡。最后，根据病情分级结果采用以下公式计算病情指数并划分抗性水平：
病情指数＝Σ(各级病株数×该病级)×100/(总株数×6)；
抗性水平：
免疫：病情指数为0；
高抗：0<病情指数≤11.11；
中抗：11.11<病情指数≤22.22；
抗病：22.22<病情指数≤33.33；
感病：33.33<病情指数≤55.55；
中感：55.55<病情指数≤77.77；
高感(HS)：病情指数>77.77。
本实施例中选用田间高抗白粉病种质材料M1和易感白粉病种质材料B29，每个种质材料设置10株生物学重复，采用上述方法进行离体侧蔓扦插育苗及白粉病抗性鉴定实验，将发病等级带入病情指数计算公式得到M1的病情指数为1.56，B29的病情指数为59.69。实验结果与室外田间抗病性接菌实验结果一致。
由此可见，本发明的甜瓜白粉病抗性离体鉴定方法具有操作简单、准确、高效、稳定，检测周期短等优点，适合对大批量材料进行快速的抗病性鉴定，具有广阔的应用前景。

Claims (9)

1.一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，包括以下步骤：
1)扦插基质：以体积比为2：0.8-1.2的营养土和蛭石作为扦插基质，对扦插基质进行消毒；
2)甜瓜扦插苗的制备及培养：取保留顶芽或侧芽的甜瓜侧蔓枝条作为扦插枝条；扦插枝条下端依次经过蔗糖水溶液、维生素B12溶液和萘乙酸溶液预处理；然后将扦插枝条插入步骤1)的扦插基质中，黑暗培养炼苗2-3天后正常培养；
3)白粉菌孢子液的准备
从田间随机选取白粉菌发病严重的新鲜甜瓜叶片，取分生孢子制备白粉菌孢子悬浮液；
4)喷雾法接菌
当甜瓜扦插苗长出第2片真叶之后，采用孢子悬浮液喷雾法接种；
5)接菌后培养
将接菌的甜瓜扦插苗放置于温室内黑暗保湿24±4小时，温度控制在28-30℃，湿度控制在80％以上，然后正常培养；
6)发病情况调查及抗性分析
接种7天后对甜瓜扦插苗的抗病情况进行调查，然后根据病情分级结果计算病情指数并划分抗性水平。
2.如权利要求1所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤3)的白粉菌孢子悬浮液的制备方法为：用毛刷将分生孢子转移至盛有蒸馏水的烧杯中，再滴加终浓度0.05±0.01％的Tween-20表面活性剂后高速搅拌均匀，打散孢子团制备得到白粉菌孢子悬浮液。
3.如权利要求2所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤3)要求白粉菌孢子悬浮液浓度≥1×105个/mL。
4.如权利要求1所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤4)的接种的方法为：将配置好的白粉菌孢子悬浮液用小喷壶均匀地喷施到甜瓜叶片的正面，1天后重复接种1次。
5.如权利要求1所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤2)蔗糖溶液为：质量比2±0.5％蔗糖溶液。
6.如权利要求5所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤2)蔗糖溶液为：质量比2％蔗糖溶液。
7.如权利要求1所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤2)维生素B12溶液为：将1ml:0.25-1mg规格的维生素B12针剂按照体积比1:100的比例兑水稀释。
8.如权利要求7所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤2)维生素B12溶液为：将1ml:0.5mg规格的维生素B12针剂按照体积比1:100的比例兑水稀释。
9.如权利要求1-8中任意一项所述的一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法，其特征是，所述步骤2)萘乙酸溶液浓度为120±20mg/L。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109601287A (zh) * 2019-01-16 2019-04-12 漯河市农业科学院 小麦钵体移栽苗期单株室内鉴定抗病育种方法
CN110249929B (zh) * 2019-07-26 2021-07-20 吉林省农业科学院 一种甜瓜种质资源快速扩繁的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1775004A (zh) * 2005-12-15 2006-05-24 上海交通大学 利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法
CN103355025A (zh) * 2013-06-27 2013-10-23 沈阳农业大学 一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法
CN103621332A (zh) * 2013-11-28 2014-03-12 云南省农业科学院花卉研究所 一种快速鉴定月季对白粉病抗性的方法
CN107164481A (zh) * 2017-06-01 2017-09-15 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 甜瓜抗白粉病相关ssr标记及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1775004A (zh) * 2005-12-15 2006-05-24 上海交通大学 利用甜瓜子叶节繁殖克隆苗的方法
CN103355025A (zh) * 2013-06-27 2013-10-23 沈阳农业大学 一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法
CN103621332A (zh) * 2013-11-28 2014-03-12 云南省农业科学院花卉研究所 一种快速鉴定月季对白粉病抗性的方法
CN107164481A (zh) * 2017-06-01 2017-09-15 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 甜瓜抗白粉病相关ssr标记及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
齐振宇，孔德栋等，甜瓜白粉病抗性鉴定方法的比较，实验科学与技术，2015年第3期，2015年6月30日，第23-26页;齐振宇，孔德栋等;《甜瓜白粉病抗性鉴定方法的比较》;20150630;第23-26页 *

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