发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足,提出了一种用现代化分析和提取手段,提取具有补肾疏肝、化瘀消斑、清热化痰功效的经验处方中的有效成份的方法,也即一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法。
本发明的目的是由以下技术方案来达到的,本发明是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是组合植物药提取物原料的重量配方为:
地 黄 341~512 菟丝子 341~512 柴 胡 227~342
白 芍 227~342 当 归 227~342 甘 草 136~205
(a)取当归加5~8倍量水浸泡20~90分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油2~4小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加6~14倍量水浸泡0.5~2小时,煎煮0.5~2.0小时,滤过,药渣再加4~12倍量水,煎煮0.5~2.0小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,浓缩至50℃下相对密度为1.05~1.32,浓缩液于50~70℃下加原药材投料量0.6~0.8%的壳聚糖溶液,持续搅拌15~25分钟,低温静置20~72小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是取上述药材提取物,减压浓缩至50℃度下相对密度为1.05~1.4,干燥,粉碎加入当归挥发油的β-环糊精包合物,混匀,制粒,制成药剂学所述的颗粒剂、胶囊剂和片剂。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是取上述药材提取物,加分散剂,加入当归挥发油,混匀,制成软胶囊。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是取上述药材提取物,加入当归挥发油,按药剂学方法制成口服液。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是取上述药材提取物,超滤后,加入当归挥发油,按药剂学方法制成注射液。
本发明的目的由以下技术方案也可达到,所述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是组合植物药提取物原料的重量配方为:
地 黄 341~512 菟丝子 341~512 柴 胡 227~342
白 芍 227~342 当 归 227~342 甘 草 136~205
取当归、地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加6~14倍量水浸泡0.5~2小时,煎煮0.5~2.0小时,滤过,药渣再加4~12倍量水,煎煮0.5~2.0小时,滤过,合并两次滤液,浓缩至50℃下相对密度为1.05~1.10,浓缩液于50~70℃下加原药材投料量0.5~1.5%的壳聚糖溶液,持续搅拌15~25分钟,低温静置20~72小时,离心,弃去沉淀,上清液超滤,加入支架剂,溶解,过滤。经冷冻干燥,制成冻干粉针剂。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与浓度为0.5~1.5%醋酸溶液制成的浓度为0.5~1.5%的溶液。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是所述的当归挥发油的β-环糊精包合物,是按当归挥发油:β-环糊精以1∶7~9的重量比,25~35℃的包合温度,2.5~3.5小时的包合时间下制成的。
本发明的目的由以下技术方案来进一步达到,根据前述的治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,其特点是所述的减压浓缩是在为0.06~0.09兆帕负压和60~80℃的温度下进行的。
本发明与现有技术相比,将具有补肾疏肝、化瘀消斑、清热化痰功效,临床上用于治疗肾虚肝郁证的黄褐斑疗效显著的经验方中的药材经提取挥发油、水煎煮、纯化和低温干燥等方法精制成干浸膏,干法制粒制成新剂型,并根据其组成药物在处方中的地位及其所含活性成分的理化特性,制订了较为客观的质量标准。对于发扬中医药特色,挖掘古方、经验方,进行中医药治疗黄褐斑的疗效研究,有着积极的意义。选用本发明的剂型。它不仅保持了汤剂的特色,而且可以提高疗效、减少用药体积、便于患者服用;尚克服了汤剂服前临时煎煮、容易变质霉败的缺点,有利于大批量生产和贮运。实验也证明,本发明的组合植物药的提取方法制得的制剂,在治疗黄褐斑方面有确切的疗效。
具体实施方式
下面为本发明的实施例,进一步描述本发明的发明内容。
实施例一、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 426.5 菟丝子 426.5 柴 胡 284.5
白 芍 284.5 当 归 284.5 甘 草 170.5
(a)取当归加6倍量水浸泡30分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油3小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加10倍量水浸泡1小时,煎煮1.2小时,滤过,药渣再加7倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,减压浓缩至50℃下相对密度为1.1,浓缩液于60℃下加原药材投料量0.7%的壳聚糖溶液,持续搅拌20分钟,低温静置24小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。
取上述药材提取物,减压浓缩至50℃下相对密度为1.2,干燥,粉碎加入当归挥发油的β-环糊精包合物,混匀,制粒,制成药剂学所述的颗粒剂、胶囊剂和片剂。其中,制成胶囊1000粒,每粒含生药量1.87克。
所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与浓度为1%醋酸溶液制成的浓度为1%的溶液。所述的当归挥发油的β-环糊精包合物,是按当归挥发油:β-环糊精以1∶8的重量比,30℃的包合温度,3小时的包合时间下制成的。减压浓缩是在为0.07兆帕负压和65℃的温度下进行的。
实施例二、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 341 菟丝子 512 柴 胡 342
白 芍 227 当 归 227 甘 草 136
(a)取当归加5倍量水浸泡90分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油2小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加6倍量水浸泡2小时,煎煮0.5小时,滤过,药渣再加12倍量水,煎煮2小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,减压浓缩至50℃下相对密度为1.05,浓缩液于50℃下加原药材投料量0.8%的壳聚糖溶液,持续搅拌15分钟,低温静置20小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。
取上述药材提取物,减压浓缩至50℃下相对密度为1.05,干燥,粉碎加入当归挥发油的β-环糊精包合物,混匀,制粒,制成药剂学所述的颗粒剂、胶囊剂和片剂。
所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与浓度为0.5%醋酸溶液制成的浓度为0.5%的溶液。所述的当归挥发油的β-环糊精包合物,是按当归挥发油:β-环糊精以1∶7的重量比,25℃的包合温度,2.5小时的包合时间下制成的。减压浓缩是在为0.06兆帕负压和60℃的温度下进行的。
实施例三、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 512 菟丝子 341 柴 胡 227
白 芍 342 当 归 342 甘 草 205
(a)取当归加8倍量水浸泡20分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油4小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加14倍量水浸泡0.5小时,煎煮2小时,滤过,药渣再加4倍量水,煎煮0.5小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,减压浓缩至50℃下相对密度为1.32,浓缩液于70℃下加原药材投料量0.6%的壳聚糖溶液,持续搅拌25分钟,低温静置72小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。
取上述药材提取物,减压浓缩至50℃下相对密度为1.4,干燥,粉碎加入当归挥发油的β-环糊精包合物,混匀,制粒,制成药剂学所述的颗粒剂、胶囊剂和片剂。
所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与重量浓度为1.5%醋酸溶液制成的浓度为1.5%的溶液。所述的当归挥发油的β-环糊精包合物,是按当归挥发油:β-环糊精以1∶9的重量比,35℃的包合温度,3.5小时的包合时间下制成的。减压浓缩是在为0.09兆帕负压和80℃的温度下进行的
实施例四、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 426.5 菟丝子 426.5 柴 胡 284.5
白 芍 284.5 当 归 284.5 甘 草 170.5
(a)取当归加6倍量水浸泡30分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油3小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加10倍量水浸泡1.5小时,煎煮1.2小时,滤过,药渣再加7倍量水,煎煮1.3小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,减压浓缩至50℃下相对密度为1.1,浓缩液于60℃下加原药材投料量0.7%的壳聚糖溶液,持续搅拌20分钟,低温静置30小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。取上述药材提取物,加分散剂,加入当归挥发油,混匀,制成软胶囊。所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与浓度为1%冰醋酸溶液制成的浓度为1%的溶液。
实施例五、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 341 菟丝子 512 柴 胡 342
白 芍 227 当 归 227 甘 草 136
(a)取当归加5倍量水浸泡40分钟,水蒸汽蒸馏,提取挥发油2小时,所得当归挥发油另器存放;
(b)当归蒸馏后的药渣与地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加6倍量水浸泡1小时,煎煮0.75小时,滤过,药渣再加8倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并两次滤液与当归提油后的残液,减压浓缩至50℃下相对密度为1.05,浓缩液于50℃下加原药材投料量0.8%的壳聚糖溶液,持续搅拌15分钟,低温静置20小时,离心,弃去沉淀,得药材提取物。
取上述药材提取物,加入当归挥发油,按药剂学方法制成口服液。所述的壳聚糖溶液是壳聚糖与浓度为1%醋酸溶液制成的浓度为1%的溶液。
实施例六、取实施例五的药材提取物,超滤后,加入当归挥发油,按药剂学方法制成注射液。
实施例七、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 426.5 菟丝子 426.5 柴 胡 284.5
白 芍 284.5 当 归 284.5 甘 草 170.5
取当归、地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加10倍量水浸泡1小时,煎煮1.5小时,滤过,药渣再加7倍量水,煎煮1.5小时,滤过,合并两次滤液,浓缩至50℃下相对密度为1.10,浓缩液于60℃下加原药材投料量0.7%的壳聚糖溶液,持续搅拌20分钟,低温静置30小时,离心,弃去沉淀,上清液超滤,加入支架剂,溶解,过滤。经冷冻干燥,制成冻干粉针剂。
实施例八、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 341 菟丝子 512 柴 胡 342
白 芍 227 当 归 227 甘 草 136
取当归、地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加6倍量水浸泡2小时,煎煮0.5小时,滤过,药渣再加12倍量水,煎煮2.0小时,滤过,合并两次滤液,浓缩至50℃下相对密度为1.05,浓缩液于50℃下加原药材投料量1.5%的壳聚糖溶液,持续搅拌25分钟,低温静置72小时,离心,弃去沉淀,上清液超滤,加入支架剂,溶解,过滤。经冷冻干燥,制成冻干粉针剂。
实施例九、本实施例是一种治疗黄褐斑的组合植物药的提取方法,组合植物药提取物原料的重量(克)配方为:
地 黄 512 菟丝子 341 柴 胡 227
白 芍 342 当 归 342 甘 草 205
取当归、地黄、菟丝子、柴胡、白芍、甘草药材加14倍量水浸泡0.5小时,煎煮2.0小时,滤过,药渣再加4倍量水,煎煮0.5小时,滤过,合并两次滤液,浓缩至50℃下相对密度为1.10,浓缩液于70℃下加原药材投料量0.5%的壳聚糖溶液,持续搅拌15分钟,低温静置20小时,离心,弃去沉淀,上清液超滤,加入支架剂,溶解,过滤。经冷冻干燥,制成冻干粉针剂。
药效实验:
在下述药效实验中定义本发明的药剂名称为:褐斑净
一、概述
经主要药效学研究,褐斑净胶囊具有的药理作用如下:
1.褐斑净胶囊具有减轻黄体酮攻击小鼠的黄褐斑模型皮肤黑色素沉积的作用;可抑制小鼠黄褐斑模型的氧化反应,调节氧化与抗氧化之间平衡紊乱,具有降低皮肤、肝脏酪氨酸含量与MDA水平,升高SOD水平的作用。
2.褐斑净胶囊具有减少紫外线攻击豚鼠的黄褐斑模型表皮黑色素沉着面积、减轻黑色素沉着程度的作用;具有降低模型豚鼠皮肤与肝脏的酪氨酸、MDA水平,升高SOD水平的作用;褐斑净胶囊对模型豚鼠雌二醇(E2)水平的升高有一定的抑制作用。
3.褐斑净胶囊能对抗肾上腺素引起的微血管收缩,扩张小鼠微血管细静脉和细动脉,且呈剂量依赖性。提示褐斑净具有改善微循环的作用。
4.褐斑净胶囊各给药组能明显降低“血瘀”模型大鼠不同切变率下的全血粘度、血浆粘度及血沉的作用。
二、实验目的
通过药效学试验验证褐斑净胶囊与临床功能主治有关的作用。
三、实验结果
1.褐斑净对黄体酮攻击小鼠的黄褐斑实验动物模型的影响
(1)对造模小鼠一般情况的影响
开始观察小鼠每日一般情况,小鼠行为活动、精神状况、排泄物等无明显异常。注射黄体酮注射液20日后用10%Na2S溶液给小鼠脱毛(背部右下侧)并每日观察脱毛部位皮肤变化情况发现模型组及各给药组脱毛部位皮肤色泽暗于正常组,以模型组最为严重,各给药组情况略好于模型组。
(2)对造模小鼠表皮黑色素沉积的影响
正常组:表皮结构正常。由2~6层角质形成细胞组成,其中基底层细胞排列较紧密,中间层细胞胞体较大,角化层细胞很薄。基底层细胞间偶见黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞,中间层的角质形成细胞内有时可见被吞噬的少量、淡染的黑色素颗粒存在。
模型组:表皮角质形成细胞的基底层细胞间,常见有数个黑色素细胞夹杂其间,中间层的角质形成细胞内有被吞噬的大量、浓染的黑色素颗粒存在,其他未见异常。
褐斑净小剂量组:表皮角质形成细胞的基底层细胞间的黑色素细胞仍常见,中间层的角质形成细胞内有被吞噬的大量、浓染的黑色素颗粒存在,其他未见异常。
褐斑净中剂量组:夹杂在表皮角质形成细胞基底层间的黑色素细胞较少见,被吞噬的黑色素颗粒在角质形成细胞内分布少,且淡染。
褐斑净大剂量组:表皮结构正常。基底层细胞间偶见黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞,中间层的角质形成细胞内有时可见被吞噬的少量、淡染的黑色素颗粒存在。
化瘀祛斑胶囊组:表皮结构正常。基底层细胞间偶见黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞,中间层的角质形成细胞内有时可见被吞噬的少量、淡染的黑色素颗粒存在。
(3)对造模小鼠皮肤酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响
结果显示,造模后小鼠皮肤酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低,与正常组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01);各给药组较模型组酪氨酸、MDA降低,SOD水平升高,其中褐斑净小、中、大剂量组酪氨酸水平显著降低,褐斑净大剂量组MDA水平显著降低,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净小、中、大剂量组SOD水平明显升高,与模型组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01)。提示褐斑净胶囊对模型小鼠皮肤酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低有一定的抑制作用。
表1褐斑净胶囊对小鼠皮肤酪氨酸、MDA、SOD活性的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
酪氨酸(μg/mg.pr) |
MDA(nmol/mg.pr) |
SOD(Nμ/mg.pr) |
正常组模型组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
--0.533.747.4814.96 |
101010101010 |
0.095±0.0270.118±0.022Δ0.102±0.0340.097±0.015*0.097±0.014*0.093±0.013** |
0.104±0.0290.135±0.022Δ0.126±0.0340.186±0.2280.119±0.0170.103±0.019** |
2.004±0.4041.504±0.264ΔΔ2.199±0.671**2.574±0.719**2.270±0.275**2.225±0.723** |
注:与正常组比较,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
(4)对造模小鼠肝脏酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响
结果显示,造模后小鼠肝脏酪氨酸、MDA水平显著升高,SOD水平显著降低,与正常组比较有显著性差异(p<0.05);各给药组较模型组酪氨酸、MDA水平降低,SOD水平升高,其中化瘀祛斑胶囊组、褐斑净小、中、大剂量组酪氨酸水平显著降低,褐斑净中、大剂量组MDA水平显著降低,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净大剂量组SOD水平明显升高,与模型组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01)。提示褐斑净胶囊对模型小鼠肝脏酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低有一定的抑制作用。
表2褐斑净胶囊对小鼠肝脏酪氨酸、MDA、SOD活性的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
酪氨酸(μg/mg.pr) |
MDA(nmol/mg.pr) |
SOD(Nμ/mg.pr) |
正常组模型组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 | --0.533.747.4814.96 | 101010101010 |
0.103±0.0190.148±0.025ΔΔ0.111±0.026**0.110±0.033**0.112±0.024**0.106±0.025** |
0.276±0.1790.484±0.085ΔΔ0.546±0.1970.470±0.3130.276±0.069**0.281±0.086** |
39.623±2.95235.625±1.974ΔΔ43.357±7.418**37.979±4.89937.062±3.45740.962±4.630** |
注:与正常组比较,ΔΔp<0.01;与模型组比较,**p<0.01。
2.褐斑净对紫外线照射豚鼠的黄褐斑模型的影响
(1)对造模豚鼠一般情况的影响
紫外线照射17日后造模豚鼠活动减少,陆续出现部分动物抓挠后足;观察脱毛部位皮肤变化情况发现模型组及各给药组脱毛部位皮肤色泽暗于正常组,部分动物皮肤逐日出现黑色斑块,部分动物后足发黑,以模型组最为严重,各给药组情况略好于模型组。
(2)对造模豚鼠表皮黑色素沉积的影响(皮肤表皮免疫组化检查结果)
正常组:基底层细胞间可见黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞,分布密度约为每7~16个细胞可见到一个细胞,中间层的角质形成细胞内有时可见被吞噬的少量、淡染的黑色素颗粒存在。
模型组:表皮角质形成细胞的基底层细胞间,夹有数量较多的黑色素颗粒染色阳性的黑色素细胞,分布密度约为每3~7个细胞可见到一个。中间层的角质形成细胞内有被吞噬的大量黑色素颗粒存在,黑色素颗粒量多密集,所以着色很深,许多细胞呈黑色。
褐斑净小剂量组:表皮角质形成细胞的基底层细胞间的黑色素细胞分布仍较密集,染色较深,中间层的角质形成细胞内有被吞噬的大量、浓染的黑色素颗粒存在,其他未见异常。
褐斑净中剂量组:夹杂在表皮角质形成细胞基底层间的黑色素细胞分布较稀疏,约为每4~15个细胞可见到一个,染色也较淡。被吞噬的黑色素颗粒在角质形成细胞内分布少,且淡染。其他未见异常。
褐斑净大剂量组:表皮结构正常。基底层细胞间黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞分布密度大为降低,约为每10~20个细胞可见到一个,着色也很淡,一般为褐色,中间层的角质形成细胞内极少见到被吞噬的黑色素颗粒存在。
化瘀祛斑胶囊组:基底层细胞间可见黑色素颗粒阳性反应的黑色素细胞分布较稀疏,约为每4~12个细胞可见到一个,着色多为深褐色,中间层的角质形成细胞内有时可见被吞噬的少量的黑色素颗粒存在。
(3)对造模豚鼠黑色素细胞面积、数量的影响
造模后模型组黑色素面密度、目标个数、数密度、周密度明显高于正常组(p<0.01);化瘀祛斑胶囊组面密度、周密度,褐斑净中剂量组面密度、周密度,褐斑净大剂量组目标面积、面密度、目标个数、数密度、周密度均显著低于模型组(p<0.05,0.01)。
表3褐斑净对造模豚鼠黑色素细胞面积、数量的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
目标面积(μm2) | 面密度 | 目标个数 | 周密度 |
数密度(E-05) |
正常组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 | --0.271.873.747.48 | 776868 |
52.22±14.8268.10±26.5947.74±18.0260.36±16.1356.19±24.4431.03±8.18** |
0.0078±0.00430.0206±0.0061ΔΔ0.011±0.0045**0.0154±0.00730.0114±0.0053*0.0047±0.0004** |
19.57±8.8345.00±17.68ΔΔ32.83±13.1536.00±16.5928.67±7.7121.75±4.40** |
0.0052±0.00240.0112±0.0029ΔΔ0.0072±0.0030*0.0095±0.00350.0075±0.0029*0.0039±0.0003** |
14.3±6.532.8±12.9ΔΔ24.3±9.726.2±12.221.1±5.716.0±3.3** |
注:与正常组比较,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。样本缺失,原因:部分样本染色标记不成功。
(4)对造模豚鼠黑色素细胞染色深浅度的影响
豚鼠黑色素细胞染色深浅度用灰度值和光密度值表示,颜色越深,灰度值越小,光密度越大。积分光密度是平均光密度与面积的乘积,颜色越深,面积越大,积分光密度越高[3]。造模后豚鼠黑色素细胞平均光密度、积分光密度明显高于正常组,平均灰度明显低于正常组(p<0.05,0.01);用药后各给药组平均灰度有一定的降低,平均光密度、积分光密度有一定的升高,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净大剂量组积分光密度显著低于模型组(p<0.05,0.01)。
表4褐斑净对造模豚鼠黑色素细胞染色深浅度的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) | 平均灰度 | 平均光密度 | 积分光密度 |
正常组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 | --0.271.873.747.48 | 776868 |
107.39±16.5984.66±7.84ΔΔ90.1±6.0790.64±8.7484.25±8.5390.15±6.89 |
0.39±0.070.49±0.04ΔΔ0.46±0.030.46±0.040.49±0.050.46±0.03 |
21.18±7.4834.28±11.80Δ21.66±7.02*28.50±10.0828.29±13.9913.58±3.15** |
注:与正常组比较,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。样本缺失,原因:部分样本染色标记不成功。
(5)对造模豚鼠皮肤酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响
结果显示,造模后豚鼠皮肤酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低,其中皮肤酪氨酸、SOD水平与正常组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01);各给药组较模型组酪氨酸、MDA水平降低,SOD水平升高,其中褐斑净中、大剂量组酪氨酸水平显著降低,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净小、中、大剂量组MDA水平显著降低,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净大剂量组SOD水平明显升高,与模型组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01)。提示褐斑净胶囊对模型豚鼠皮肤酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低有一定的抑制作用。
表5褐斑净胶囊对豚鼠皮肤酪氨酸、MDA、SOD活性的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
酪氨酸(μg/mg.pr) |
MDA(nmol/mg.pr) |
SOD(Nμ/mg.pr) |
正常组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
--0.271.873.747.48 |
1099999 |
0.045±0.0060.053±0.009Δ0.044±0.0110.043±0.0120.044±0.010*0.044±0.008* |
0.078±0.0290.122±0.0890.041±0.030*0.025±0.021**0.019±0.011**0.018±0.006** |
2.58±0.521.17±0.19ΔΔ1.68±0.67*1.40±0.471.36±0.501.54±0.31** |
注:与正常组比较,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
(6)对造模豚鼠肝脏酪氨酸(Tyr)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响
结果显示,造模后豚鼠肝脏酪氨酸、MDA水平明显升高,SOD水平明显降低,与正常组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01);各给药组较模型组酪氨酸、MDA水平降低,SOD水平升高,其中化瘀祛斑胶囊组、褐斑净小、中、大剂量组酪氨酸及MDA水平显著降低,化瘀祛斑胶囊组、褐斑净大剂量组SOD水平明显升高,与模型组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01)。提示褐斑净胶囊对模型豚鼠肝脏酪氨酸、MDA水平升高,SOD水平降低有一定的抑制作用。
表6褐斑净胶囊对豚鼠肝脏酪氨酸、MDA、SOD活性的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
酪氨酸(μg/mg.pr) |
MDA(nmol/mg.pr) |
SOD(Nμ/mg.pr) |
正常组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
--0.271.873.747.48 |
1099999 |
0.050±0.0110.065±0.014Δ0.053±0.007*0.051±0.006*0.043±0.003**0.047±0.012* |
0.073±0.0150.108±0.020ΔΔ0.062±0.019**0.082±0.029*0.079±0.023*0.071±0.033* |
48.24±6.8438.74±2.94ΔΔ44.13±3.02**43.43±6.4741.83±5.1244.64±7.58* |
注:与正常组比较,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05,**p<0.01。
(7)对造模豚鼠血清性激素水平的影响
结果显示,造模后豚鼠E2、FSH水平明显升高,与正常组比较有显著性差异(p<0.05,p<0.01);各给药组较模型组E2水平降低,其中褐斑净大剂量组E2水平显著降低,与模型组比较有显著性差异(p<0.05)。提示褐斑净胶囊对模型豚鼠雌二醇(E2)水平的升高有一定的抑制作用。
表7褐斑净胶囊对豚鼠对血清激素水平的影响(
X±S)
组别 | 剂量 |
动物数(只) |
E2(pg/ml) |
LH(mIU/ml) |
FSH(mIU/ml) |
正常组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
--0.271.873.747.48 |
1099999 |
3.52±2.7911.02±8.25Δ7.32±7.697.23±9.965.04±3.014.45±1.96* |
0.57±0.180.60±0.230.48±0.110.71±0.190.57±0.170.47±0.07 |
1.97±0.692.87±1.01ΔΔ2.58±0.732.92±0.723.05±0.642.37±0.55 |
注:与正常组比较,Δp<0.05,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05。
3.褐斑净胶囊对小鼠耳廓微循环的影响
实验结果显示褐斑净胶囊小、中、大三个剂量组对血流速度无明显影响,但均能对抗肾上腺素引起的微血管收缩,扩张小鼠微血管细静脉和细动脉,与空白对照组比较差异显著(p<0.05或p<0.01),且呈剂量依赖性。表明褐斑净具有改善微循环的作用。
表8褐斑净胶囊对小鼠耳廓微循环血流速度的影响(
X±S)(n=10)
组别 |
剂量(g/kg) |
正常值(μm/s) |
注射肾上腺素后增加百分率(%) |
5min |
10min |
20min |
30min |
空白对照组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
-0.533.747.4814.96 |
106.4±6.2105.2±7.3100.3±9.2101.2±8.1102.9±4.0 |
1.9±4.5-0.5±8.73.1±8.70.9±4.8-0.5±4.4 |
-0.8±3.81.6±7.13.2±9.11.9±5.74.2±8.9 |
-1.8±8.4-2.7±5.90.9±3.40.2±7.63.3±7.8 |
-1.7±5.0-2.1±5.3-1.5±6.33.1±7.50.2±7.2 |
表9褐斑净胶囊对小鼠耳廓微静脉管径的影响(
X±S)(n=10)
组别 |
剂量(g/kg) |
正常值(μm) |
注射肾上腺素后增加百分率(%) |
5min |
10min |
20min |
30min |
空白对照组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
-0.533.747.4814.96 |
11.4±1.311.8±1.311.7±1.011.2±1.111.8±1.2 |
-29.7±10.1-33.4±15.0-22.6±7.9-21.7±15.5-28.9±13.8 |
-36.0±7.8-20.7±15.5*-20.8±6.9**-16.0±18.2**-20.4±14.9** |
-20.4±7.3-5.7±13.0**-8.7±9.4**0.1±16.4**1.3±11.0** |
-2.9±6.811.2±8.9**7.8±12.1*11.2±13.9**11.7±10.8** |
注:与空白对照组比较,*p<0.05,**p<0.01。
表10褐斑净胶囊对小鼠耳廓微动脉管径的影响(
X±S)(n=10)
组别 |
剂量(g/kg) |
正常值(μm) |
注射肾上腺素后增加白分率(%) |
5min |
10min |
20min |
30min |
空白对照组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
-0.533.747.4814.96 |
9.3±1.09.6±1.29.7±1.29.1±1.110.0±1.0 |
-21.9±7.6-17.7±11.8-19.3±12.3-15.1±15.6-10.9±7.0** |
-25.5±8.9-16.5±11.1-15.9±15.9-13.0±11.1*0.4±19.2** |
-18.5±12.6-2.9±13.5*-2.8±14.4*2.2±17.2**17.3±15.7** |
-4.7±8.54.4±11.43.1±11.810.9±21.4*22.8±19.2** |
注:与空白对照组比较,*p<0.05,**p<0.01。
4.褐斑净胶囊对“血瘀证”模型大鼠血液流变性的影响
(1)造模后大鼠不同切变率下的全血粘度和血浆粘度均明显升高,与空白对照组比较有非常显著性差异(p<0.01)。褐斑净胶囊各给药组能明显降低“血瘀”模型大鼠不同切变率下的全血粘度及血浆粘度,与模型组比较差异均有显著性(p<0.01,p<0.05),结果见表11。
表11褐斑净胶囊对“血瘀证”大鼠全血和血浆粘度的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) |
全血粘度 |
血浆粘度 |
200.0s-1 |
60.0s-1 |
5.0s-1 |
1.0s-1 |
100.0s-1 |
空白对照组模型组化瘀祛斑胶囊组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 | --0.271.873.747.48 | 1010991010 |
3.87±0.544.93±0.85ΔΔ4.23±0.54*4.28±0.694.31±0.474.39±0.43 |
4.94±0.555.93±0.50ΔΔ5.36±0.42*5.14±0.43**5.48±0.52*5.17±0.66** |
10.71±0.7212.90±1.66ΔΔ12.46±0.6011.74±0.8411.57±0.87*10.70±0.73** |
25.24±1.0028.99±3.53ΔΔ26.94±1.9927.87±2.1725.63±2.56*25.40±3.04* |
1.34±0.141.68±0.25ΔΔ1.50±0.061.44±0.20*1.43±0.13*1.46±0.18* |
注:化瘀祛斑胶囊组与褐斑净小剂量组各有1管凝血,无法检测出数据。与空白对照组比较,ΔΔp<0.01;与模型组比较,**p<0.01,*p<0.05。
(2)对“血瘀证”模型大鼠红细胞压积、血沉的影响
造模后大鼠红细胞压积未见明显改变。模型大鼠血沉增加,与空白对照组比较有显著性差异(p<0.01)。褐斑净胶囊各给药组血沉有一定的下降,模型组比较有显著性差异(p<0.05),结果见表12。
表12褐斑净胶囊对“血瘀证”模型大鼠红细胞压积、血沉的影响(
X±S)
组别 |
剂量(g/kg) |
动物数(只) | 红细胞压积(%) | 血沉(mm/h) |
空白对照组模型组化瘀祛斑组褐斑净小剂量组褐斑净中剂量组褐斑净大剂量组 |
--0.271.873.747.48 |
101010101010 |
40.20±5.4040.92±7.5743.21±5.1542.85±5.4443.10±7.4743.79±5.44 |
0.46±0.141.73±0.24ΔΔ1.28±0.761.25±0.68*1.12±0.75*1.11±0.68* |
注:与空白对照组比较,ΔΔp<0.01;与模型组比较,*p<0.05。