CN1899536A - 一种治疗糖尿病肾病的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗糖尿病肾病的药物，该药物以黄芪、水蛭、玉米须、芡实、金樱子、益母草、蝉蜕、山楂为原料，根据每味中药的不同特性，分别用水提、制得浸膏粉或直接烘干、粉碎成细粉后，按比例混合，再制成丸剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。本发明药物对脾肾亏虚或夹水湿内停或夹瘀血阻络证为主的糖尿病肾病疗效显著。

Description

一种治疗糖尿病肾病的药物及其制备方法

技术领域：

本发明涉及一种治疗糖尿病肾病的药物及其制备方法，具体地说是以中草药为原料制成的中成药。

背景技术：

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(Diabetes mellitus，DM)患者最常见、最严重的全身性微血管并发症之一。随着人们生活水平的提高，其发病率有逐年上升的趋势，病情进入临床DN期后很难逆转。国外报道约40％的1型DM和5～20％的2型DM患者可以发生DN。国内报道对642例糖尿病人的肾脏病变调查表明，DN的总发生率为47.66％，其中早期为34％，临床DN为13.5％。在美国透析病人的30％为DN患者，因DN导致尿毒症死亡者约占DM病人(诊断年龄在31岁以下)的27％～31％。中华医学会糖尿病学分会慢性并发症调查组对全国30个省、市、自治区1991～2000年住院的24，496例DM患者回顾性分析结果表明DN患者占所有DM慢性并发症住院患者的33.6％，因DN导致尿毒症死亡者约占DM病人总数的27～31％。因此，DN已经成为导致终末期肾脏疾病(ESRD)的重要因素，也是DM患者死亡的主要原因。所以如何有效地预防、治疗DN已成为医学界共同关注的问题。

目前在治疗DN上，西医尚无特效的治疗方法，其手段主要是控制高血糖、减少蛋白尿、控制高血压、低蛋白饮食及纠正脂代谢紊乱等对症治疗。

有关糖尿病肾病的病机中医各家虽众说不一，因此所设计方剂不仅组分不同，而且组分含量差别也较大。张丽萍曾在《中国中西医结合肾病杂志》上公开了一种治疗糖尿病肾病的糖肾宁汤[张丽萍.糖肾宁汤治疗临床期糖尿病肾病的临床观察，中国中西医结合肾病杂志，2005，6(7)：409-411]，该汤剂由黄芪30g、太子参12g、淮山药15g、茯苓15g、熟地黄12g、生地黄20g、黄精12g、金樱子20g、芡实20g、制大黄15g、丹参15g、水蛭6g、当归尾20g、益母草30g配伍制成，处方较大，且为汤剂，服用及携带受限。关于防治糖尿病肾病的中药，国知局的专利文献中先后公开了各种中药复方。其中，CN1424100专利申请公开了由黄芪10～20黄精8～15山茱萸6～13水蛭0.15～1酒炙大黄4～10川芎7～15牛膝7～15制备的复方；CN1431001专利申请公开了以黄芪4～9山茱萸1～4地黄2～6酒大黄1～4葛根3～7泽泻2～6丹参3～8益母草2～6桃仁1～4太子参3～7枸杞子2～6制备而成的复方；CN1289610专利申请公开了由黄芪20-40、白术15-25、大黄5-15、熟地25-40、山萸肉5-15、五味子15-25、金樱子5-15、赤芍15-25组方配伍制成胶囊或丸剂；CN1347714专利申请公开了由黄芪20～65％太子参5～30％女贞子5～15％枸杞子10～30％水蛭10～14％大黄5～30％可以制成散剂、胶囊剂、丸剂或片剂；CN1634328专利申请公开了由生黄芪15～45克，制附子10～20克，制大黄10～20克制成的复方；CN1726967专利申请公开了由黄芪6-15g、葛根6-15g、灵芝6-15g、女贞子6-15g、大黄4-12g、丹参6-15g制成的中药制剂；CN1569180专利申请公开了虎杖4.5～5.5份、黄芪3.0～3.5份、肉桂0.5～1.5份制成的中药制剂；CN1686291专利申请公开了由黄芪270克、茯苓135克、山药60克、紫河车60克、龟甲60克、牛膝60克、山萸肉60克、车前子135克组成的复方；CN1726967专利申请公开了由黄芪6-15g、葛根6-15g、灵芝6-15g、女贞子6-15g、大黄4-12g、丹参6-15g制成的中药制剂；CN1754546专利申请公开了由山茱萸2-15份、生地1-12份、黄芪5-30份、益母草4-20份、鬼箭羽2-10份、黄芩3-15份、槐花2-8份、僵蚕2-10份、和余甘子1-4份制成的中药制剂。上述众多专利组方发明人经过药理药效实验证明均可用于治疗糖尿病肾病，而且具有一定的治疗效果，为什么没一个能脱颖而得到普遍认可，这说明有必要对组方进行进一步筛选和优化才能开发出效疗确切的治疗糖尿病肾病的药物。

本发明人在《第一军医大学学报》2006年4期上发表了一篇题为《肾康丸对早期糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞分泌NO、TGF-β₁的影响》的论文，文中公开了所述的“肾康丸”由黄芪、水蛭、玉米须、芡实、金樱子、益母草、蝉蜕、山楂等八味原料药配伍组成，同时通过实验对“肾康丸”的作用机制进行了探索，并对“肾康丸”进行了方解，但未涉及“肾康丸”的组分含量和制备方法。

发明内容：

本发明的目的是提供一种优化的治疗糖尿病肾病的药物，该药物对脾肾亏虚或夹水湿内停或夹瘀血阻络证为主的糖尿病肾病患者疗效显著。

本发明的另一目的是提供该治疗糖尿病肾病的药物的制备方法。

本发明的解决方案是基于祖国医学对糖尿病肾病发病机理的认识及治疗原则，参考现代药理研究成就，从祖国医药宝库中，筛选出补气虚、滋肾阴、化瘀血、利水湿、扶正培本、药膳同源的天然食用植物药，按中医理论组方，提取精华，使其抑制人肾小球MC增殖，抑制基质过度生成，下调细胞表面β1整合素mRNA的表达，并通过降低过氧化物的含量，提高超氧化物歧化酶的活性，从而降低氧自由基对肾脏微血管的损伤，同时通过改善肾脏微循环，防止肾小球硬化，保护肾功能，减轻尿蛋白的排出。

本发明所述药物由以下重量配比的原料制成：黄芪15～90份、水蛭3～20份、玉米须15～90份、芡实10～60份、金樱子10～60份、益母草9～30份、蝉蜕3～30份、山楂10～60份。

制备本发明药物配方的优选重量配比范围是：

黄芪20～60份、水蛭5～15份、玉米须20～45份、芡实20～45份、金樱子20～45份、益母草10～20份、蝉蜕10～20份、山楂20～45份。

本发明药物的最佳重量配比是：

其中最佳重量份数为：黄芪60份、水蛭10份、玉米须30份、芡实30份、金樱子30份、益母草15份、蝉蜕10份、山楂30份。

本发明所用原料黄芪为豆科，拉丁文为Radix Astragali，较好选用产于内蒙古或山西的黄芪(亦称：北芪)。

将上述各组分制成本发明药物的生产方法是：

(1)将净制的将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉；

(2)将净制的黄芪、水蛭、芡实、金樱子、蝉蜕和山楂70℃烘干，粉碎成细粉；

(3)将步骤(1)所得浸膏粉与步骤(2)所得原料粉混匀制得本发明药物的活性组分。

上述方法所制的活性组分与医学上常用的辅料混合可制成丸剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。其中，将所制的活性组分用冷水泛丸，烘干，制丸，包黑色氧化铁衣，川蜡打光，分装，得丸剂；在所制的活性组分中加入硬酯酸镁1％-4％，混合，再加入95％乙醇6ml制软材，过筛，得颗粒剂，或者再压片，制得片剂；在所制的活性组分加入糊精20-50g，混合均匀，直接填充空胶囊，得胶囊剂。

本发明所述治疗糖尿病肾病的药剂，处方中重用黄芪，补益肺脾肾之气，利水消肿为君药；芡实、金樱子补脾益肾，固摄精微为臣药，三药合用能补气健脾益肾以固本。水蛭破血逐瘀，攻逐久积之瘀滞，益母草活血祛瘀，利水消肿，玉米须利水消肿，蝉蜕疏散风热，共为佐药，功能活血化瘀、利水消肿以治标及兼证。山楂消积化滞，以防大剂量黄芪之壅滞为使药。诸药相伍，扶正祛邪，标本兼治，共奏健脾益肾固精，活血祛瘀利湿之功，符合糖尿病肾病的病因病机和治疗大法。临床实践也证明本方对脾肾亏虚或夹水湿内停或夹瘀血阻络证为主的糖尿病肾病疗效显著。

以下通过药理药效试验和临床实验来进一步说明本发明所述药物所能达到的技术效果。

一：药效学实验

1.对早期糖尿病肾病的治疗和肾脏保护作用实验研究

1.1材料与方法

1.1.1受试药物

本发明药物(本实验中命名为肾康丸，下述实验相同)，按下述实施案例3制备。开搏通(卡托普利)片，Capoten tablets，上海中美施贵宝药业有限公司生产，批号：0402032。

1.1.2早期DN动物模型的建立与分组给药

雄性Wistar大鼠，体重200～250g，适应性喂养1周后，禁食12h，按55mg·kg-1左下腹腔内一次性注射链脲佐菌素(STZ)制作早期DN大鼠模型。STZ临用前用枸橼酸钠缓冲液(0.1mol·L^-1，pH 4.5)配制成0.5％浓度，10min内用完。连续喂养2w，测血糖、尿糖、尿量，若血糖值高于16.7mmol·L^-1、尿糖(+++)以上、尿量增加1倍以上，则造模成功。造模成功后，随机分为肾康丸组、开搏通组、早期糖尿病肾病模型对照组共3组，每组10只。另设正常对照组(n＝10只)，注射等量0.1mol·L^-1枸橼酸钠溶液。肾康丸组用肾康丸1.1g/kg(按照人与大鼠体表面积换算，相当于成人12g/d)灌胃，肾康丸在临用前温开水配成混悬液；开搏通组用开搏通3.6mg/kg(按照人与大鼠体表面积换算，相当于成人37.5mg/d)灌胃，开搏通同样在灌胃前用温开水配制；早期糖尿病肾病模型组、正常对照组用生理盐水10ml/kg灌胃。上述各组灌药1次/d，连续给药4周。各组大鼠自由进食饮水，实验中不予任何降血糖药物。

1.1.3观察指标和测定方法

观察大鼠一般情况包括精神状态、活动情况、饮食、毛色、饮水量、尿量等；取左肾，称重，计算相对肾重(KW/BW)；剪尾法采血，每2周测1次血糖，用MediSense QID电子感应血糖仪及配套试纸条；测血中糖化血红蛋白(GHb)含量，用紫外分光光度法；尿糖尿蛋白定性，采用珠江生化试剂公司提供的安健尿糖、尿蛋白试纸行半定量测量；24小时尿蛋白定量(Upro)，采用考马斯亮兰法；尿白蛋白排泄量(UAlb)，采用放射免疫法，由北京北方免疫试剂研究所提供大鼠专用尿白蛋白试剂盒，用SN-682型自动γ免疫计数器检测；血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平，采用7071A型全自动生化分析仪检测；用苦味酸法测定尿肌酐并计算内生肌酐清除率(Ccr)：内生肌酐清除率(Ccr)＝尿肌酐浓度(umol/L)×尿量(ml/min)/血肌酐浓度(umol/L)；血清和肾组织匀浆中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量检测，试剂盒由南京建成生物工程公司提供，具体操作按试剂盒说明书进行；肾脏病理学变化包括HE、Masson染色的普通光镜观察和透射电镜观察。

1.2实验结果：

1.2.1各组大鼠一般状况、体重、血糖在实验前后的变化

正常组大鼠活动频繁，动作敏捷，反应迅速；模型组大鼠精神萎靡，反应迟钝，动作迟缓，毛发枯槁无光泽，弓背蜷体，尿量增多，饮水、进食量与正常组比较增加明显；肾康丸组及开搏通组精神状况一般，活动较模型组明显增多；尤以肾康丸组大鼠精神状况、反应、毛色比模型组好。实验前各组大鼠体重无明显差异，在实验期间各组大鼠体重均增长，其中正常组体重增长较快，而模型组、肾康丸组与开搏通组体重则增长相对较慢，且三者之间无显著差异，但与正常组比较有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)。治疗前后模型组、肾康丸组和开搏通组大鼠血糖与正常组比较有显著性差异(P＜0.01)，提示模型造模成功。测定各组体重、血糖治疗前后变化情况见表1-1。

             表1-1各组大鼠治疗前后体重(g)、血糖(mmol/L)变化比较( x±s)

组别	例数	体重(g)		血糖(mmol/L)
						治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
		正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	220.56±15.18216.49±12.73224.37±15.81219.66±14.49	260.47±21.51225.46±22.58*245.76±18.47△236.37±16.75△					4.56±0.2716.57±2.84*17.18±1.39*16.91±1.87*	4.64±0.3617.26±1.59*16.35±1.62*17.17±1.83*

注：与正常组比较*P＜0.01，△P＜0.05。

1.2.2各组大鼠尿糖、24h尿量、24h尿蛋白、24h尿白蛋白变化的情况

实验中正常大鼠尿糖始终为阴性，模型组、肾康丸组与开搏通组大鼠尿糖均为++～++++。模型组、肾康丸组与开搏通组尿量较正常组明显增多(P＜0.01)，其中以模型组更为明显(P＜0.05)；24h尿蛋白定量及尿微量白蛋白变化情况与尿量变化相同，模型组、肾康丸组与开搏通组尿蛋白与尿微量白蛋白较正常组明显增多(P＜0.01)，其中以模型组更为明显(P＜0.05)。提示：肾康丸可在一定程度上减少尿蛋白与尿微量白蛋白的排出。各组大鼠24h尿量、24h尿蛋白、24h尿白蛋白变化的情况见表1-2。

         表1-2各组大鼠24h尿量、24h尿蛋白、24h尿微量白蛋白变化的比较( x±s)

组别	例数	尿量(ml)	尿蛋白(mg/24h)	尿白蛋白(mg/24h)
					正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	15.69±6.2156.87±24.72*32.94±16.37*△34.88±18.95*△	26.34±10.4768.19±12.31*34.67±18.45*△42.94±14.58*△	7.58±0.2716.43±1.56*8.41±1.49*△9.18±1.37*△

注：与正常组比较*P＜0.01，与模型组比较△P＜0.05。

1.2.3各组大鼠肾功、糖化血红蛋白的变化

实验结束时，各组大鼠肌酐、尿素氮相互之间比较无明显变化(P＞0.05)，提示早期糖尿病肾病肾功能变化不大，但肾康丸治疗组肾功较模型组低，接近正常组，可能是肾康丸对肾功能稍有改善。糖化血红蛋白是血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，模型组、肾康丸组和开搏通组糖化血红蛋白与正常组比较明显升高(P＜0.01)，三组之间比较无显著性差异，结果偏高的原因可能与血糖原因有关。

      表1-3各组大鼠肾功、糖化血红蛋白变化的比较( x±s)

组别	例数	肌酐(μmo/L)	尿素氮(mmol/L)	糖化血红蛋白(％)
					正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	35.28±1.8437.75±1.4335.59±2.6136.21±1.35	7.27±1.728.35±1.477.67±1.827.94±1.63	15.74±3.2736.29±2.88*32.74±2.24*34.07±2.51*

注：与正常组比较*P＜0.01。

1.2.4各组大鼠内生肌酐清除率、肾重、相对肾重的变化

实验中各组大鼠肾脏内生肌酐清除率(Ccr)无明显差异(P＞0.05)，但模型组Ccr较正常组高，说明糖尿病肾病早期，Ccr有增高趋势。模型组相对肾重比正常组高，有显著性差异(P＜0.01)，说明DN造模成功，并且在早期存在肾脏肥大。经过肾康丸治疗后，相对肾重有所下降，但是与正常组相比有显著性差异(P＜0.05)，与模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05)，考虑可能与用药时间不够长有关，但同样可以说明肾康丸有减轻模型肾脏肥大的趋势。见表1-4。

表1-4各组大鼠内生肌酐清除率、肾重、相对肾重变化的比较( x±s)

组别	例数	内生肌酐清除率(ml/min)	肾重(g)	相对肾重(‰)
					正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	2.49±1.092.74±1.192.70±0.652.73±0.86	0.85±0.721.14±0.47*1.04±0.36△1.08±0.44△	3.26±0.325.05±1.17*4.24±0.27△4.57±0.56△

注：与正常组比较*P＜0.01，△P＜0.05。

1.2.5各组大鼠血脂与NO含量的变化

模型组大鼠肾组织和血清NO含量明显下降(P＜0.01)。肾康丸、开搏通治疗组的血与肾组织NO含量明显升高，虽不及正常组，但具有统计学意义(P＜0.05)。肾康丸组、开搏通组与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)，提示肾康丸可能通过提高NO含量来起到对早期糖尿病肾病的治疗保护作用；肾康丸组血脂情况与对照组比较也具有统计学意义(P＜0.05)，提示肾康丸还可改善早期糖尿病肾病的脂质代谢。各组大鼠NO及血脂变化结果见表1-5。

                      表1-5各组大鼠一氧化氮含量、血脂变化的比较( x±s)

组别	例数	血NO(μmol/L)	肾NO(μmol/gp)	甘油三脂(mmol/L)	胆固醇(mmol/L)
						正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	120.47±14.1587.83±15.46*108.66±13.51△☆102.59±12.41△☆	1.42±0.310.63±0.17*1.16±0.54△☆0.94±0.26△☆	0.52±0.111.49±0.37*0.74±0.52△☆1.41±0.64	1.76±0.242.57±0.47*1.92±0.16△☆2.53±0.55

注：与正常组比较*P＜0.01，△P＜0.05；与模型组比较☆P＜0.05。

1.2.6各组大鼠血清和肾组织SOD、MDA的变化

模型组大鼠肾组织和血清有明显的SOD活性下降(P＜0.01)，MDA值增高的现象(P＜0.01)。肾康丸治疗组的血与肾组织SOD活性均明显升高，MDA含量下降，但仍不及正常组，却具有统计学意义(P＜0.05)。开搏通组稍具升高SOD活性和降低MDA的作用，但与模型组比较无显著性差异。提示肾康丸能升高血清和肾组织SOD活性，降低MDA含量。各组大鼠血清和肾组织SOD、MDA含量结果见表1-6。

                 表1-6各组大鼠血清、肾组织SOD、MDA含量变化的比较( x±s)

组别	例数	血清		肾组织
						SOD(U/ml)	MDA(nmol/ml)	SOD(U/mgp)	MDA(nmol/mgp)
		正常组模型组肾康丸组开搏通组	10101010	120.47±15.2195.64±12.35△112.72±13.74*☆108.61±11.85	9.38±1.1711.73±1.65△10.27±1.46*☆10.04±1.59					1.249±0.0431.032±0.052△1.156±0.064*☆1.094±0.071	0.731±0.1531.145±0.104△0.957±0.176*☆0.942±0.218

注：与正常组比较*P＜0.05，△p＜0.01。与模型组比较☆P＜0.05。

1.2.7各组大鼠肾脏病理的变化

光镜下观察：分别在光镜下放大100倍、200倍、400倍观察，可见正常组的肾小球结构清晰，肾小球由球囊及其内的毛细血管丛组成，未见增大及萎缩，球囊壁光滑，细胞外基质与系膜细胞分布正常，毛细血管腔清晰；而模型组多数大鼠肾小球明显增大，肾小球肿胀，充血，肾小囊变窄，肾小球毛细血管基底膜(GBM)增厚，肾小球系膜增宽，系膜细胞增生，足细胞明显肿胀，胞浆呈泡沫状，部分肾小管出现上皮细胞肥大、空泡变性，管腔变窄，肾间质部分出现水肿、部分小血管玻璃样变性，可见少数间质纤维化，未见明显的肾小球硬化，无明显肾小管空泡变性及肾间质血管玻璃样变。肾康丸及开搏通组肾小球轻度增大、肿胀、充血，GBM轻度增厚，系膜轻度增宽，肾小管上皮细胞肿胀等病变，但病变范围与模型组比小且较轻。治疗组间未见明显差异。

电镜下观察：分别在电镜下放大4000倍、5000倍、6000倍、8000倍、10K倍观察，正常组大鼠结构清晰，肾小球、肾小管及毛细血管丛正常，GBM均匀，系膜细胞分布正常；模型组大鼠GBM呈均质性增厚，同一小球内不同部位的基底膜厚度差异明显，增厚处基膜的三层细微结构不清楚，足细胞肿胀，部分胞浆内可见较大的脂质空泡，足突融合，系膜基质增多，系膜区扩大，系膜细胞增生，肾小管基底膜节段性变薄或增厚；肾小管上皮细胞脱落、微绒毛明显减少、变短、甚至脱落，毛细血管内可见红细胞聚集，出现空泡变性(见附图3-2-9～12)。肾康丸组、开搏通组肾小管基底膜增厚比模型组轻，肾小管上皮细胞及微绒毛轻微脱落，上皮细胞足突距离增宽，肾小管线粒体结构基本正常，出现程度较轻的电子高密度溶酶体，线粒体嵴清晰。治疗组间无显著差异性。

1.3讨论

1.3.1动物模型

实验结束时(注射STZ 6周后)，该糖尿病肾病模型病程处在相当于Mogensen分期的1期～3期，属于早期DN模型。

1.3.2治疗作用

肾康丸可改善早期糖尿病肾病大鼠一般状态；减轻肾脏肥大，对肾脏病理损害也有一定程度的保护作用；显著降低尿蛋白、尿白蛋白排泄率；可明显降低胆固醇、甘油三脂，改善脂质代谢；明显提高早期糖尿病肾病大鼠血清及肾组织的NO含量，并可能提高NO活性、抑制过氧化亚硝基阴离子(ONOO^-)产生；可明显提高早期糖尿病肾病大鼠血清及肾组织的SOD含量，降低MDA的含量，提示肾康丸可通过清除氧自由基，减轻氧化应激对肾脏的损害。

2.对早中期糖尿病肾病的治疗和肾脏保护作用实验研究

2.1材料与方法

2.1.1受试药物

同实验1。

2.1.2早中期糖尿病肾病动物模型的建立与分组给药

雄性Wistar大鼠，按65mg·kg-1左下腹腔内一次性注射STZ制作早中期糖尿病肾病大鼠模型。分组给药同前，连续给药8周。

2.1.3观察指标和测定方法

观察大鼠一般情况包括：精神状态、活动情况、饮食、毛色、饮水量、尿量等；体重、相对肾重：称量各组大鼠给药前后体重，计算体重变化，大鼠处死后，取出左肾，称重后，按下式计算相对肾重；血糖、尿糖：采用美国强生公司One touch ultra血糖仪及其配套试纸测血糖，采用珠江生化试剂公司安健尿糖试纸行半定量测量尿糖；血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿肌酐(Ucr)、内生肌酐清除率(Ccr)：用7071A型全自动生化分析仪测定SCr、BUN浓度，用苦味酸法检测Ucr，并计算Ccr；糖化血红蛋白(GHb)：用紫外分光光度法；24h尿蛋白(Upro)：采用考马斯亮兰法；尿白蛋白(Ualb)排泄量：Ualb采用放射免疫法，由北京福瑞生物工程公司提供大鼠专用尿白蛋白试剂盒，用SN-682型自动γ免疫计数器检测；肾脏病理学变化包括HE、Masson染色的普通光镜观察和透射电镜观察。

2.2实验结果：

2.2.1对大鼠一般情况的影响

如表2-1所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠8周时体重明显降低(P＜0.01)，前后体重增长量减少(P＜0.01)，24h尿量及饮水量明显增加(P＜0.01)，同时大鼠一般情况较差，精神萎靡，反应迟钝，毛竖无光泽，动作迟缓，弓背蜷体，部分动物尾部皮肤角化或有溃烂，分别于第3w，6w死亡1只大鼠。开搏通及肾康丸治疗组的大鼠一般情况较模型对照有所改善，8w体重及前后体重增长明显增加(P＜0.01)，造模后增加的24h尿量及饮水量明显减少(P＜0.01)。尤以肾康丸组作用明显。

                  表2-1各组大鼠治疗前后体重变化及增加体重的比较( x±s)

组别	n	0w体重	8w体重	增加体重	24h尿量	24h饮水量
							(g)	(g)	(g)	(mL)	(mL)
		正常对照组模型对照组开搏通组肾康丸组	8799	230.13±8.79211.67±10.30212.33±9.27211.89±10.99	341.50±15.23218.58±13.35△△246.67±14.67**263.22±17.53**	111.38±17.217.43±6.43△△34.33±12.89**51.33±17.62**						18.75±3.0687.41±15.67△△61.89±15.08**59.00±15.85**	27.50±4.00108.86±13.95△△69.78±11.37**66.67±11.21**

注：^△P＜0.05，^△△P＜0.01vs正常对照组；*P＜0.05，**P＜0.01vs模型对照组，下同。

2.2.2对大鼠血糖、尿糖的影响

如图1所示，造模后大鼠血糖明显升高，且模型对照组血糖浓度呈进行性增高，均显著高与正常对照组(P＜0.01)。给药组在4w内血糖浓度逐渐升高，4w后血糖浓度开始下降。至8w时，与模型对照组比较，肾康丸组血糖浓度显著降低(P＜0.05)，开搏通组血糖浓度有降低趋势，但无统计学意义。实验过程中，正常对照组尿糖均为阴性，造模3组尿糖均为+++～++++。

2.2.3对大鼠肾重、相对肾重的影响

如表2-2所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠肾重及相对肾重(KW/BW)均显著升高(P＜0.01)。各治疗组对上述指标均有显著降低作用(P＜0.01)。

表2-2各组大鼠肾重和相对肾重的比较( x±s)

组别	n	肾重	KW/BW
				(g)

正常对照组模型对照组开搏通组肾康丸组

8799

0.89±0.141.19±0.12△△0.98±0.12**0.95±0.10**

2.62±0.475.46±0.75△△4.00±0.62**3.63±0.43**

2.2.4对大鼠肾功能的影响

如表2-3所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿肌酐(Ucr)和内生肌酐清除率(Ccr)均显著升高(P＜0.01)。各治疗组与模型对照组相比，对升高的Scr、BUN和Ccr均有显著降低作用(P＜0.01或P＜0.05)，对Ucr有降低趋势，但无统计学意义(P＞0.05)。

                     表2-3各组大鼠肾功能变化的比较( x±s)

组别	n	Scr	BUN	Ucr	Ccr
						(μmol·L-1)	(mmol·L-1)	(μmol·L-1)
		正常对照组模型对照组开搏通组肾康丸组	8799	57.52±12.4177.86±11.33△△64.02±10.91*61.81±9.78**	6.60±1.0012.47±1.67△△10.84±1.47**10.09±1.52**					9721.11±2081.546116.09±1767.52△△5504.79±1273.915444.66±1017.66	2.25±0.614.79±1.40△△3.66±0.91*3.02±1.03*

2.2.5对大鼠糖化血红蛋白、24h尿蛋白总量及尿白蛋白量的影响

如表2-4所示，与正常对照组比较，模型对照组大鼠糖化血红蛋白(GHb)，24h尿蛋白总量(Upro)、24h尿白蛋白量(Ualb)均显著升高(P＜0.01)。与模型对照组相比，开搏通和肾康丸治疗组对升高的GHb、24h Upro和24h Ualb均有显著降低作用(P＜0.01或P＜0.05)。

          表2-4各组大鼠治疗前后体重变化及增加体重的比较( x±s)

组别	n	GHb	24hUpro	24hUalb
					(％)	(mg)	(mg)
		正常对照组模型对照组开搏通组肾康丸组	8799	15.73±1.5631.82±3.65△△27.24±4.81*26.93±4.97*				7.93±1.9219.81±3.33△△13.90±3.41**12.87±3.17**	0.39±0.161.11±0.24△△0.70±0.25**0.62±0.24**

2.2.6对大鼠肾脏病理变化的影响

肉眼及光镜下观察：正常对照组大鼠肾脏大小形状正常，表面光滑，色暗红，包膜无粘连，易剥离。光镜下见肾小球结构清晰，未见增大及萎缩，球囊壁光滑，细胞外基质与系膜细胞分布正常，毛细血管腔清晰。模型对照组多数大鼠肾脏体积增大；光镜下肾小球明显增大，肾小球肿胀、充血，肾小囊变窄，部分肾小球GBM增厚，肾小球系膜增宽，系膜细胞增生，部分肾小管出现细胞肥大、空泡变性，管腔变窄，肾间质部分出现水肿、部分小血管玻璃样变性，可见少数间质纤维化。肾康丸及开搏通组肾脏体积大部分较模型组变小，但仍较正常大鼠肾脏有所最大；光镜下见肾小球轻度增大、充血，GBM轻度增厚，系膜轻度增宽，肾小管细胞肿胀等病变，病变范围与模型组比较小且轻，未见肾小球硬化及肾间质纤维化。治疗组间未见明显差异。

电镜下观察：正常组大鼠结构清晰，GBM均匀，厚度正常，足细胞体积较大，核着色较浅，胞质内有丰富的粗面内质网和线粒体；系膜区无扩张；近曲小管上皮细胞排列整齐，游离面含丰富微绒毛形成刷状缘，基底面可见质膜内褶系。模型组大鼠肾脏GBM呈匀质性增厚，足细胞胞突多呈连续性附着于基膜上，形成足突融合，足细胞内细胞器减少，系膜区扩大，系膜基质增多，肾小管基底膜节段性变薄或增厚；肾小管上皮细胞脱落、微绒毛减少、变短、甚至脱落，毛细血管内可见红细胞聚集，出现空泡变性。各治疗组肾小球GBM和肾小管基底膜增厚较模型组大鼠轻，上皮细胞足突距离增宽，肾小管上皮细胞及微绒毛轻微脱落。治疗组间无显著差异性。

2.3讨论

2.3.1动物模型

实验结束时(注射STZ 10周时)，该糖尿病肾病模型病程处在相当于Mogensen分期的2期～4期，属于早中期DN模型。

2.3.2治疗作用

肾康丸能增加早中期糖尿病肾病大鼠的体重，改善大鼠一般状况，降低DN大鼠血糖和GHb水平，减少尿蛋白的排泄，改善大鼠的肾功能及肾脏病理损害，表明肾康丸具有保护早中期糖尿病肾病大鼠肾脏，延缓糖尿病肾病进程的作用。

二：临床实验

1材料与方法

1.1受试药物

本发明药物按下述实施案例3制备。开搏通(卡托普利)片，Capoten tablets，上海中美施贵宝药业有限公司生产，批号：0402032。

1.2研究对象与诊断标准

80例选自珠江医院门诊及住院患者，均符合上述诊断标准，随机分为治疗组与对照组。其中治疗组40例，男22例，女18例；年龄36～72岁，平均54.1±18.1岁；病程2～21年，平均7.9±4.3年：对照组40例中男性21例，女性19例，年龄39～68岁，平均55.8±16.4岁，病程3～16年，平均6.6±3.8年。两组病例性别、年龄、病程及临床表现差异无显著性(P＞0.05)，具有可比性。

两组患者均符合以下条件：(1)按照世界卫生组织糖尿病专家委员会(WHO1999年)制定的标准确诊为DM患者；(2)尿蛋白排泄量连续3次测定在30～300mg/24h之间；(3)排除原发性肾脏病及其他肾脏疾病、原发性高血压、肿瘤、发热及剧烈运动等引起的尿蛋白增多等原因。

1.3治疗方法

两组患者均予饮食控制，降糖药物治疗或胰岛素治疗控制血糖。治疗组给予肾康丸口服，6g/次，2次/日；对照组则口服开搏通，12.5mg/次，3次/日。8周为一个疗程，观察1～2个疗程后统计疗效。

1.4观察指标

空腹血糖、餐后2小时血糖、血脂(美国康仁全自动生化分析仪)；糖化血红蛋白(HbAlc，％，亲和层析微柱法)；24小时尿蛋白排泄量(Alb，mg/24h放射免疫法测定)；血清NO含量测定(硝酸盐还原酶法测定)试剂盒由南京建成生物医学研究所提供，并严格按说明书操作；血清SOD含量测定(采用黄嘌呤氧化酶法)试剂盒由南京建成生物医学研究所提供，并严格按说明书操作；治疗前后分别检测血常规(血细胞分析仪)，肝、肾功能(美国康仁全自动生化分析仪)

1.5疗效判定标准

显效：症状基本消失，尿蛋白排泄量＜30mg/24h；有效：症状减轻，尿蛋白量有所减少而未达到显效标准；无效：尿蛋白量未达到上述标准或加重者。

2实验结果：

2.1肾康丸、开搏通两组治疗效果

肾康丸组40例，显效15例，有效22例，无效3例，总有效率92.5％；开搏通组40例，显效6例，有效23例，无效11例，总有效率72.5％。两组之间总有效率比较，肾康丸组明显优于开搏通组，差异具有显著性(P＜0.05)。见图2。

2.2两组患者治疗前后尿蛋白排泄量结果

两组患者尿蛋白排泄量与本组治疗前比较均明显下降，差异有显著性(P＜0.01)，提示两组药物均可降低尿蛋白排泄量；两组患者治疗后效果比较，肾康丸组下降明显，差异具有显著性(P＜0.05)，提示肾康丸降低尿蛋白排泄量效果较开搏通好。见表1-1，

     表1-1两组患者治疗前后尿蛋白排泄量(mg/24h)变化比较( x±s)

组别	例数	治疗前	治疗后
				开搏通组肾康丸组	4040	142.27±43.36140.52±44.29	68.45±20.36*42.52±16.13*△

注：与同组治疗前比较*P＜0.01；与开搏通组治疗后比较△P＜0.05

2.3空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(P2hBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)结果

两组患者治疗后与治疗前结果同组比较均明显下降，差异有显著性(P＜0.01)，但两组患者均有降糖治疗，故不能说明两组药物与血糖之间的关系；两组间治疗后效果比较，无显著性差异(P＞0.05)。见表1-2，

       表1-2两组患者治疗前后FBG、P2hBG、HbAlc变化比较( x±s)

观察指标	例数	治疗前		治疗后
						开搏通组	肾康丸组	开搏通组	肾康丸组

FBG(mmol/L)P2hBG(mmol/L)HbAlc(％)

404040

9.95±2.2114.16±2.8511.28±2.17

9.82±2.2714.07±2.9611.13±2.14

6.31±1.54*8.62±1.92*7.41±1.81*

6.38±1.35*△8.73±1.91*△7.46±1.75*△

注：与同组治疗前比较*P＜0.01；与开搏通组治疗后比较△P＞0.05

2.4两组患者治疗前后胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)结果

肾康丸组患者治疗后TC与TG均明显下降，与治疗前比较具有显著性差异(P＜0.01)，开搏通组患者治疗后TC与TG改变不明显，与治疗前比较无显著性差异(P＞0.05)，提示肾康丸可以改善患者血脂情况；两组患者之间比较，均有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)。见表1-3。

     表1-3两组患者治疗前后TC、TG(mmol/L)变化比较( x±s)

组别	例数	治疗前		治疗后
						TC	TG	TC	TG
		开搏通组肾康丸组	4040	5.74±1.575.87±1.25	2.20±0.762.26±0.64					5.68±1.555.02±0.76*☆	2.14±0.531.37±0.45*

注：与同组治疗前比较*P＜0.01；与开搏通组治疗后比较△P＜0.01，☆P＜0.05

2.5两组患者治疗前后血清NO、SOD含量变化

两组患者治疗后血清NO、SOD含量均明显升高，与同组治疗前比较有显著性差异(P＜0.01)，提示两组药物都可以提高早期DN患者血清NO、SOD含量。两组患者治疗后组间比较，也具有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)，提示肾康丸组能更好地提高早期DN患者血清NO、SOD含量。见表1-4。

       表1-4两组患者治疗前后血清NO(umol/L)、SOD(U/ml)含量变化比较( x±s)

组别	例数	治疗前		治疗后
						NO	SOD	NO	SOD
		开搏通组肾康丸组	4040	48.4±16.747.1±21.4	52.6±18.354.8±22.9					61.2±15.3*74.3±17.9*△	79.4±14.7*96.1±15.5*☆

注：与同组治疗前比较*P＜0.01；与开搏通组治疗后比较△P＜0.05，☆P＜0.01

2.6药物安全性评价：

本药临床观察过程中，开搏通治疗组在治疗过程中出现3例皮疹、皮肤瘙痒，对症处理后消失；肾康丸组未发现任何毒副作用，对血常规、肝、肾功能未见不良影响。

3讨论

3.1有效控制血糖的基础上，临床上肾康丸对早期糖尿病肾病患者有较好的治疗保护作用。

3.2肾康丸可通过清除氧自由基，减轻氧化应激对肾脏的损害。

附图说明：

图1为上述对早中期糖尿病肾病的治疗和肾脏保护作用实验研究中各组大鼠血糖的变化曲线图；

图2为上述临床实验中本发明药物(肾康丸)与开搏通两组疗效比较图

具体实施方式：

例1：(丸剂)

1、处方：取北芪100g、水蛭25g、玉米须100g、芡实100g、金樱子100g、益母草50g、蝉蜕25g、山楂100g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀。用冷水泛丸，烘干，选丸，包黑色氧化铁衣，川蜡打光，分装，造成6g×1丸剂。

3、产品的鉴别：取本品20g，研细，加正丁醇60ml，超声提取30分钟，虑过，虑液用1％NaOH溶液洗3次，每次30ml，去碱液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，去水层，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇制成1ml含1mg的溶液，做为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、用法和用量：口服，一次6g，一日2次。

例2：(丸剂)

1、处方：取北芪200g、水蛭40g、玉米须125g、芡实125g、金樱子125g、益母草70g、蝉蜕40g、山楂125g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀。用冷水泛丸，烘干，选丸，包黑色氧化铁衣，川蜡打光，分装，制得6g×1丸剂。

3、产品的鉴别：取本品20g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声提取30分钟，虑过，虑液挥干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加乙醇制成1ml含1mg的溶液，做为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-乙酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、用法和用量：口服，一次6g，一日2次。

例3：(丸剂)

1、处方：取北芪300g、水蛭50g、玉米须150g、芡实150g、金樱子150g、益母草75g、蝉蜕50g、山楂150g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀。用冷水泛丸，烘干，选丸，包黑色氧化铁衣，川蜡打光，分装，制得6g×1丸剂。

3、产品的鉴别：取金樱子对照药材5g，加乙酸乙酯50ml，超声提取30分钟，虑过，虑液浓缩至2ml，做为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取对照药材溶液和采用例2所述方法制备的本品供试溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

4、用法和用量：口服，一次6g，一日2次。

例4：(片剂)

1、处方：取北芪150g、水蛭30g、玉米须200g、芡实200g、金樱子250g、益母草100g、蝉蜕100g、山楂300g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀，加入硬酯酸镁1％-4％，混合，再加入95％乙醇6ml制软材，过筛，制颗粒，压片，即得。

3、用法和用量；口服，一次4片，一日3次。

例5：(颗粒剂)

1、处方：取北芪450g、水蛭100g、玉米须450g、芡实300g、金樱子300g、益母草45g、蝉蜕30g、山楂50g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀，加入硬酯酸镁1％-4％，混合，再加入95％乙醇6ml制软材，过筛，制颗粒，即得。

3、用法和用量：5g，冲服，一日2次。

例6：(胶囊剂)

1、处方：取北芪300g、水蛭50g、玉米须150g、芡实150g、金樱子150g、益母草150g、蝉蜕150g、山楂150g。

2、制备方法：以上8味药材净制，将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉。其余六味药材70℃烘干，粉碎成细粉，与上述浸膏粉混匀。加糊精20-50g，混合均匀，直接填充于空胶囊中。

3、用法和用量：口服，一次4粒，一日3次。

Claims (7)

1、一种治疗糖尿病肾病的药物，其特征是该药物由以下重量配比的原料制成：

黄芪15～90份、水蛭3～20份、玉米须15～90份、芡实10～60份、金樱子10～60份、益母草9～30份、蝉蜕3～30份、山楂10～60份。

2、根据权利要求1所述的一种治疗糖尿病肾病的药物，各原料的重量配比是：

黄芪20～60份、水蛭5～15份、玉米须20～45份、芡实20～45份、金樱子20～45份、益母草10～20份、蝉蜕10～20份、山楂20～45份。

3、根据权利要求1所述的一种治疗糖尿病肾病的药物，各原料的重量配比是：

黄芪60份、水蛭10份、玉米须30份、芡实30份、金樱子30份、益母草15份、蝉蜕10份、山楂30份。

4、权利要求1、2、3所述治疗糖尿病肾病的药物的制备方法是：

(1)将净制的将玉米须和益母草水提2次，第一次，加8倍量的水加热提取2小时，滤过，第二次，残渣加6倍量的水再提取2小时，滤过，合并两次的提取液，浓缩至1∶1时离心，取上清液，再浓缩至比重为1.2，喷雾干燥，得浸膏粉；

(2)将净制的黄芪、水蛭、芡实、金樱子、蝉蜕和山楂70℃烘干，粉碎成细粉；

(3)将步骤(1)所得浸膏粉与步骤(2)所得原料粉混匀制得本发明药物的活性组分。

5、权利要求4所述治疗糖尿病肾病的药物的制备方法，其中将步骤(3)制得的活性组分用冷水泛丸，烘干，选丸，包黑色氧化铁衣，川蜡打光，分装，制得丸剂。

6、权利要求4所述治疗糖尿病肾病的药物的制备方法，其中在步骤(3)制得的活性组分中加入硬酯酸镁1％-4％，混合，再加入95％乙醇6ml制软材，过筛，制得颗粒剂，或者再压片，得制片剂。

7、权利要求4所述治疗糖尿病肾病的药物的制备方法，其中在步骤(3)制得的活性组分中加入糊精20-50g，混合均匀，直接填充空胶囊，制得胶囊剂。

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