CN1723035A - 格瑞林在治疗胃切除个体营养不良中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及格瑞林或其类似物在制备具有下列一种或多种应用的药物中的用途，所述应用为在胃切除个体中，治疗和/或预防体重和身体脂肪损失、预防或治疗恶病质、刺激食欲、刺激食物摄入、刺激体重增加或增加身体脂肪重量。

Description

格瑞林在治疗胃切除个体营养不良中的用途
本申请中所引用的所有专利或非专利参考文献在此全部引入作为参考。
发明领域
本发明涉及格瑞林(ghrelin)及其类似物在治疗经历胃切除术后个体的营养不良中的用途。具体地，本发明涉及格瑞林或其类似物在增加胃切除个体的体重、身体脂肪重量、食欲和健康中的用途。
胃被认为具有几种重要功能如最初的食物贮藏室并通过与胃酸和胃蛋白酶的混合消化食物。此后，食物以稳定的速率逐步地释放至小肠内。世界范围内大量的患者因为不同的适应症进行了胃切除术。他们大多数是因为室癌(ventricle cancer)，一些是因为胃溃疡尤其是在严重的出血或破裂之后。多年来进行了多种不同的胃切除术。一类用于胃溃疡的治疗是窦切除术与选择性迷走神经切断术相联合。此外，根据Billroth I和II的包含窦切除的外科手术被用于治疗胃溃疡。另一类用于治疗室癌的外科手术是使用所谓的鲁氏Y(Roux-en-Y)完全室切除，食管空肠造口术(oesophago-Jejunostomi)。胃切除术，尤其是使用鲁氏Y完全室切除，导致外胃迷走神经部分的切断，即，完全迷走神经切除。目前，在已进行胃癌外科手术的患者中超过四分之三已进行全胃切除术。
尽管胃切除术可为肿瘤或胃溃疡并发症提供治疗，但是其伴随各种后续的病症。在这些患者中，已观察到大部分和全部胃切除术均导致外科手术后最先的六月内体重损失约10％，已显示所述损失主要是由于身体脂肪的损失，而身体细胞的重量和肌肉重量基本上保持不变(Liedman等，WorldJ Surg 21，(1997)，416-20)。还注意到存在食欲缺乏和吸收不良，这也被认为是体重损失的原因。
此外，胃切除的患者还遭受疲劳、骨质疏松以及腹泻的困扰，其被认为是由脂肪吸收的能力减少而引起的。而且，因铁吸收减少和维生素B12的缺乏而导致贫血，维生素B12的缺乏是由于胃中正常产生的内因子的缺乏而引起的。
尽管向胃切除患者例行给予维生素B12、铁和钙的替换治疗，他们仍遭受疲劳、脂肪重量损失和骨质疏松(Fischer等，Complication of Surgery，In：Schwartz(Ed)，Principles of surgery，(1999)，第7版，McGraw-Hill，New York，470-472页)。可能存在的问题是将失去起始贮藏和消化摄取食物的场所。
因此，本发明的问题在于缓解外科手术后胃切除患者所遇到的症状，特别是提供方法以消除患者无法保持体重和身体脂肪的缺陷。
该问题通过提供格瑞林或其类似物在制备治疗胃切除个体的体重和身体脂肪损失的药物的应用而得以解决。
发明背景
格瑞林是乙酰化的长度为28氨基酸的肽，其分离自人胃的特殊细胞，即所谓的A细胞，其主要位于胃体和胃底的胃腺内。它们包含附着于丝氨酸残基的辛酰酯(Kojima等，Nature，402，(1999)，656-660)。格瑞林及其类似物已知是动物和人体内生长激素的释放剂。这些肽通过7-跨膜G-蛋白偶联受体起效，所述受体既存在于下丘脑又存在于脑下垂体中(Smith等，EndocrRev 18，(1997)，621-45)。
格瑞林、其受体和通过该受体起效的合成化合物阐明了独特的“反向”顺序。在八十年代中，发现一系列阿片样肽中的合成六肽能够从离体的垂体细胞中释放生长激素(GH)(Bowers CY，Momany F，Reynolds GA，Chang D，Hong A，Chang K 1980 Structure-activity relationships of a syntheticpentapeptide that specifically releases growth hormone in vitro.Endocrinology106：663-667)。由于这一作用不依赖于生长激素释放激素(GHRH)受体，一些制药公司着手基于这一六肽GH促分泌素(GHS)及其假定受体的药物开发项目。因此在九十年代中期描述了几类强效的肽和非肽GH促分泌素(BowersCY，Mo-many FA，Reynolds GA，Hong A 1984On the in vitro and in vivoactivity of a new synthetic hexapeptide that acts on the pituitary to specificallyrelease growth hormone.Endocrinology 114：1537-1545；PatchettAA，NargundRP，Tata JR，Chen MH，Barn kat KJ，Johnston DB，Cheng K，Chan Ww，Butler B，Hickey G，.1995 Design and biological activities of L-163，191(MK-0677)：apotent，orally active growth hormone secretagogue.Proc NatI Acad Sci USA92：7001-7005；Smith RG，Cheng K，Schoen WR，Pong SS，Hickey G，Jacks T，Butler B，Chan Ww，Chaung LY，Judith F.1993 A nonpeptidyl growth hormonesecretagogue.Science 260：1640-1643)。
几年以后，最终克隆了这些人工GH促分泌素所作用的受体并显示其是7TM G蛋白偶联受体家族成员(Howard AD，Feighner SD，Cully DF，ArenaJP，Liberator PA，Rosenbium Cl，Hamelin M，Hreniuk DL，Palyha OC，AndersonJ，Paress PS，Diaz C，Chou M，Liu KK，Mckee KK，Pong 55，Chaung LY，Elbrecht A，Dashkevicz M，Heavens R，Rigby M，Sirinathsinghji DJ，Dean DC，Melillo DG，Van Der Ploeg LH，1996 A receptor in pituitary and hypothalamusthat functions in growth hormone release.Science 273：97-977；Smith RG,VanDer Ploeg LH，Howard AD，Feighner SD，Cheng K，Hickey GJ，Wyvratt MJ，Jr.，Fisher MH，Nargund RP，Patchett AA 1997 Peptidomimetic regulation of growthhormone secretion.Endocr Rev 18：621-645)。在1999年，最终发现了这一受体的内源性配体，激素格瑞林(Kojima M，Hosoda H，Date Y，Nakazato M，Matsuo H，Kangawa K 1999 ghrelin is a growth-hormone-releasing acylatedpeptide from stomach.Nature 402：656-660)。生产格瑞林的主要位点是胃，其中在胃粘膜的经典内分泌细胞中发现该肽。
据报道格瑞林在胃肠道，特别是胃中起效，因为其被发现可刺激胃酸生成和胃肠蠕动(Asakawa等，Gastroenterology 120(2001)，337-345；Masuda等，Biochem Biophys Res.Commun.276(2000)，905-908)。
已知完全胃切除术患者将循环格瑞林水平减少至正常个体的30％(Ariyasu等，J.Clin.Ecdocrinol Metab 86(2001)，4753-4817)。在大鼠中，外科手术除去胃中生成酸的瘤胃和胃底部分后，循环中的格瑞林水平降低至正常的20％(Dornonville de la Cour等，Regul.Pept.99(2001)，141-150)。
尽管已发现格瑞林是食欲刺激性信号，但已指出这一刺激效果在迷走神经切断后丧失(Asakawa，supra)，使得大家注意到格瑞林的适当作用需要胃的存在。
与一般的观点相反，本发明人现已发现格瑞林及其类似物在胃切除个体中仍然有效，这里不执行胃中的潜在局部效果。这些发现是令人惊奇的，因为已报道格瑞林类似物对喂食和下丘脑NPY表达的刺激取决于未受损的迷走神经分布(Asakawa，supra)。
本发明还包含格瑞林类似物的用途，在本申请上下文中，格瑞林类似物被理解为在体内实质上执行与格瑞林同样生理作用的任何肽或非肽化合物。例示性的非肽格瑞林类似物描述于EP 0869 974和EP 1060 190中，其举例说明了大量格瑞林类似物，该文献在此引物作为参考。
根据本发明，格瑞林可按照熟知的乙酰化28氨基酸肽进行应用且可通过化学合成或重组技术制备。生成肽并向3号丝氨酸连接上辛酰酯的技术为本领域技术人员所熟知。可选择地，可利用上面参考文献中提到的任何类似物。优选的化合物是具有以下命名的化合物如NN 703[5-氨基-5-methylex-2-烯酸N-甲基-N-((1R)-1-(甲基-((1R)-1-甲基氨基甲酰基-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(萘基(naphtalen)-2-基)乙基)酰胺]和MK677[有时称为MKO677，cf.Drug Discovery Today，vol.4，No.11，11月1999，497-506]或NNC26-1291，或NNC 26-1187是非肽基的生长激素促分泌素，分别描述于WO99/58501和WO 00/26252中，所有文献在此引入作为参考。
简言之，本发明提供了用于长期治疗发生于胃切除术后的体重损失、脂肪重量损失等的方法，其中向患者给予药学有效量的物质，该物质给予胃切除患者时导致格瑞林受体激动剂水平增加。
优选地，该治疗包含增加个体的食欲和增加个体的身体脂肪重量，其最终将改善个体的健康感觉和生活质量。
此外，格瑞林和/或其类似物还可与另一种胃衍生因子(stomach derivedfactor)联合应用，从而改善所观察的结果。例示性提到的因子是胰抑素(pacreastatin)、促胃液素、组胺、抵抗素(resistine)、前列腺素如前列腺素E2以及内因子。
此外，格瑞林和/或其类似物可与另一种体重和身体脂肪诱导因子联合应用。例示性提到的因子为黑色素浓缩激素(MCH)、MCH受体激动剂尤其是MCH受体1激动剂、神经肽Y(NPY)、NPY受体1激动剂、NPY受体5激动剂、以及包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受体2拮抗剂、α-促黑色素细胞激素(α-MSH、α-黑皮质素(melanocortin))、黑皮质素-3受体(MC3R)拮抗剂、黑皮质素-4受体(MC4R)拮抗剂、与刺鼠相关的肽(Agrp)、Agrp-激动剂、可卡因-和安非他明-调节转录(CART)的拮抗剂、阿立新(orexin)受体1和受体2激动剂、生长激素(GH)、GH受体激动剂、胰岛素样生长因子-I(IGF-1)和IGF-1受体1激动剂。
此外，本发明涉及包含格瑞林或其类似物的组合物，其用于治疗胃切除个体中的营养不良，特别是增加其食欲、体重，具体为其身体脂肪重量，以及最终提高健康状况。例如，可增加脂肪重量的化合物可以基于其在体外脂肪细胞中刺激葡萄糖合成甘油三酯的能力而鉴定。
该组合物将包含活性成分与可药用载体或稀释剂，本领域技术人员根据给药途径选择所述载体或稀释剂。所应用的药物载体或稀释剂可以是常规的固态或液态载体，例如乳糖、环糊精、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、硬脂酸镁、纤维素衍生物、或糖浆、橄榄油、磷脂、聚氧乙烯或仅是水。相似地，载体和稀释剂可以包含本领域已知的任何缓释材料，如单独或与一种或多种蜡混合的甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。这些组合物可以是常规的形式，如胶囊、片剂、气溶胶、溶液、悬浮液或局部给药。
对于本发明，剂量将根据所应用的化合物和给药方式而改变。剂量水平将在每天约0.01μg/kg体重至10mg/kg体重，优选在约0.01μg/kg体重至1mg/kg体重范围内，更优选在0.1μg至10μg/kg体重范围内。给药途径可以是任何有效地将活性化合物输送至合适或所需作用位点的途径，如经口、经鼻、经肺部、透皮或胃肠外给药，优选经口或经肺部的途径。
目标化合物可以以可药用酸加成盐，或者合适时以碱金属或碱土金属或低级烷基铵盐给予。据信这样的盐形式显示了与游离碱形式大致相同的活性顺序。适宜的剂量在约50mg至约200mg范围内，优选约20mg至约100mg的式I化合物与可药用载体或稀释剂混合。
发明简介
本发明涉及格瑞林或其类似物在治疗经历胃切除术个体中营养不良症状中的用途。具体地，本发明属于格瑞林或其类似物或其促分泌素在增加胃切除个体的体重、身体脂肪重量、食欲以及健康中的用途。
附图简介
在附图中，
图1图示了使用GH促分泌素MK677治疗胃切除的大鼠的体重增加；
图2图示了接受治疗的动物显示了较高的脂肪垫重量；
图3显示使用GH促分泌素MK677治疗胃切除的大鼠增加了下丘脑中NPY mRNA的水平。
定义
氨基酸：实体，其包含由包含碳原于或碳原子链的中间部分分离的氨基末端部分(NH2)和羧基末端部分(COOH)，其包含至少一个侧链或官能团。NH2是指存在于氨基酸或肽的氨基末端的氨基，COOH是指存在于氨基酸或肽的羧基末端的羧基。一般的术语氨基酸包含天然和非天然氨基酸。列于J.Biol.Chem.，243：3552-59(1969)并在37C.F.R.，第1.822(b)(2)节被采用的标准命名法的天然氨基酸属于列于下面表1中的氨基酸组。非天然氨基酸没有列于表1中。非天然氨基酸的例子包含那些列于如37C.F.R.，第1.822(b)(4)节的那些氨基酸，其被全部引入作为参考。其它的非天然氨基酸的例子列于下文。此处描述的氨基酸残基可以是“D”或“L”异构体形式。
表1.天然氨基酸及其代号
 符号   氨基酸
 1个字母     3个字母
 YGFMASILT     TyrGlyPheMetAlaSerIleLeuThr   酪氨酸甘氨酸苯丙氨酸蛋氨酸丙氨酸丝氨酸异亮氨酸亮氨酸苏氨酸
  VPKHQEWRDNC   ValProLysHisGlnGluTrpArgAspAsnCys   缬氨酸脯氨酸赖氨酸组氨酸谷氨酰胺谷氨酸色氨酸精氨酸天冬氨酸天冬酰胺半胱氨酸
食欲：通过测量食物的摄入量和通过评价个体对进食的渴望以评价个体的食欲。典型地通过一周几次随机给予个体短期问卷而评价食欲(即，饥饿)。典型地，使用不是全部必需的1至5的类似物标度，通过回答下面的问题受试者评价他们的饥饿度、对食物的偏见以及渴望进食较大量的和不同类型的食物。
氨基酸残基：术语“氨基酸残基”意在包含无论是标准氨基酸、非标准氨基酸还是假氨基酸的氨基酸，其可与至少一种其它种类如2种、例如3种、如多于3种其它种类的氨基酸反应。特别地，氨基酸残基可包含代替游离羧基的酰基键和/或代替游离氨基的氨键。此外，反应后的氨基酸残基可包含代替酰胺键的酯或硫酯键。
BMI：体重参数(BMI)测量个体的高度/体重比。其是通过将体重(千克)被高度(米)的平方来除而测定的。BMI的“正常”范围是19-22。
身体脂肪重量：身体脂肪重量可通过例如脂肪折叠技术测定。在这一技术中，通过测量身体上代表性位点的皮肤折叠厚度使用钳型测径器测量皮下脂肪。然后或者通过从不同测量中增加数量并将这些值作为个体间相对肥胖程度的指征，或者通过使用已开发的预测身体脂肪百分数的数学等式的测量，将这些皮肤折叠测量用于计算身体脂肪。
恶病质：一种消耗紊乱，其症状包含体重损失、肌肉消耗、食欲损失和整体的虚弱。这些症状通常与慢性疾病相关。
浓度等价：浓度等价是等价的剂量，其被定义为当根据剂量-应答曲线评价时在体外和/或体内具有与野生型格瑞林相同应答的格瑞林样化合物的剂量。
胃切除：此处，“胃切除”被定义为除去、失去或减少个体的全部或部分胃的大小。所述除去或失去优选外科手术除去。
胃切除个体：此处，术语“胃切除个体”是指经历胃切除术的个体，即所有或部分所述个体的胃优选通过外科手术的方法经受了除去、失去或大小的减少。
格瑞林：如Kojima M，Hosoda H，DateY，Nakazato M，Matsuo H，KangawaK 1999 ghrelin is a growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach.Nature 402：656-660描述的多肽。。人28氨基酸格瑞林具有SEQ ID NO：1的氨基酸。
GHS：生长激素促分泌素
GHS-R 1a：GHS受体。GHR-R 1a也表示为GHS 1a。
个体：活的动物或人类。在优选的实施方案中，受试者是哺乳动物，其包含人和非人哺乳动物如狗、猫、猪、牛、绵羊、山羊、马、大鼠和小鼠。在最优选的实施方案中，该受试者是人。
分离：用于描述任何不同的格瑞林样化合物，此处公开的多肽和核苷酸已经从其天然环境的成分中鉴定和分离和/或恢复。其天然环境的污染成分是典型地干预多肽的诊断或治疗应用的物质，其可以包含酶、激素和其它蛋白质的或非蛋白质的溶液。在优选实施方案中，将纯化该多肽。
“体重损失”：本文中定义为BMI的减少。
“身体脂肪损失”：本文中定义为个体总脂肪重量的减少或个体身体脂肪百分比上的减少。
肽：多个共价键连接的氨基酸残基限定的序列并通过酰胺键连接。该术语可与寡肽和多肽类似使用。氨基酸可以是天然氨基酸和非天然氨基酸，包含其任何的组合。天然和/或非天然氨基酸可通过肽键或非肽键连接。术语肽还包含由本领域已知的化学或酶催化反应诱导的翻译后修饰物。如果需要，这样的翻译后修饰物可在分离前诱导。如此处指定的氨基酸将优选是L-立体异构体形式。可使用氨基酸类似物代替20种天然存在的氨基酸。已知几种这样的类似物，包含氟代苯并氨酸、正亮氨酸、吖丁啶-2-羧酸、S-氨基乙基半胱氨酸、4-甲基色氨酸等。
此外，应指出在氨基酸残基序列的起点或末端的破折号表示与一个或多个氨基酸残基的其它序列的肽键，或者与氨基末端基团如NH2或乙酰基或与羧基末端如COOH的共价键。
受体：受体是可特异地(非随机的)结合于另一分子的分子，如蛋白、糖蛋白等。
发明详述
本发明涉及用于治疗和/或预防胃切除个体的体重损失和相关病情的格瑞林或其类似物。因此，本发明涉及治疗和/或预防体重和身体脂肪损失、刺激体重增加和增加身体脂肪重量。特别地，本发明涉及治疗和/或预防体重和身体脂肪损失或刺激体重增加，更优选治疗和/或预防体重和身体脂肪损失。当已停止提高体重损失且开始获得体重增加时可观察到治疗和预防的效果。这可能是由于格瑞林或其类似物在刺激胃切除个体的食欲，从而刺激食物摄入方面的令人惊奇的效果。本发明还涉及刺激胃切除个体的食欲和刺激食物摄入，更具体地是刺激食欲。本发明因此涉及预防或治疗胃切除个体的恶病质。
在另一个实施方案中，观察到格瑞林可用作增加合成代谢因子IGF-1的物质，并因此导致体重增加和/或预防体重和身体脂肪损失。
本发明一方面属于格瑞林或其类似物在制备治疗胃切除个体的体重和身体脂肪损失的药物中的用途。
“格瑞林类似物”和“格瑞林样化合物”在此处可替换使用，并将其理解为是指在体内实质上执行与格瑞林同样生理作用的任何肽或非肽化合物。例示性的非肽格瑞林类似物描述于EP 0869 974和EP 1 060 190中，其举例说明了大量格瑞林类似物，该文献在此引物作为参考。
优选地，根据本发明的格瑞林样化合物为包含式I定义的结构的化合物：
Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2，其中
Z1是任选存在的保护基，
各X1独立选自氨基酸，其中所述氨基酸选自天然存在和合成的氨基酸，
X2选自任何天然存在和合成的氨基酸，所述氨基酸被大疏水基团修饰，优选酰基或脂肪酸，
各X3独立选自氨基酸，其中所述氨基酸选自天然存在和合成的氨基酸，
其中一个或多个X1和X3任选被大疏水基团修饰，优选酰基或脂肪酸，
Z2是任选存在的保护基，
m是1-10范围内的整数
n是0或是1-35范围内的整数。
因此，术语“格瑞林样化合物”包含天然存在的28氨基酸人格瑞林，该氨基酸序列示于SEQ ID NO：1中，以及天然存在的27氨基酸人格瑞林，该氨基酸序列示于SEQ ID NO：2中。因此，本发明涉及格瑞林或其肽类似物的用途。格瑞林由Kojima描述于Nature(1999)，vol.402，656-660中。
本发明包含非对映异构体及其消旋的和已分离对映体的纯形式。格瑞林样化合物可包含D-氨基酸、L-氨基酸、α-氨基酸、β-氨基酸、γ-氨基酸、天然氨基酸和合成氨基酸等或其组合。优选地，格瑞林样化合物中的氨基酸是L-对映体。
格瑞林样化合物包含经大疏水基团修饰的氨基酸。修饰氨基酸的N-末端氨基酸数目在1-9范围内。因此，m优选是选自1-9范围内的整数，如选自1-8，如选自1-7，如选自1-6，如选自1-5，如选自1-4，如选自1-3，如选自1-2，如2。
修饰氨基酸的N-末端氨基酸数目更优选较低，如选自1-3，如选自1-2。最优选2个氨基酸位于修饰氨基酸的N-末端。
在优选的实施方案中(X1)m在该序列的N-末端部分具有Gly残基。因此，在优选的实施方案中(X1)m选自下面的序列：
Gly，Gly-Ser，Gly-Cys，Gly-Lys，Gly-Asp，Gly-Glu，Gly-Arg，Gly-His，Gly-Asn，Gly-Gln，Gly-Thr，以及Gly-Tyr。
更优选的(X1)m选自Gly-Ser和Gly-Cys，最优选选自Gly-Ser。
换言之，在优选的实施方案中格瑞林样化合物选自：
式IIZ1-Gly-(X1)m-1-(X2)-(X3)n-Z2，
式IIIZ1-Gly-Ser-(X2)-(X3)n-Z2，以及
式IVZ1-Gly(X2)-(X3)n-Z2。
以及格瑞林样化合物更加优选为式III。
如上所述，X2可以是大疏水基团修饰的任何氨基酸。特别地，X2选自修饰的Ser、Cys、Asp、Lys、Trp、Phe、Ile和Leu。更加优选地，X2选自修饰的Ser、修饰的Cys和修饰的Lys，以及最优选地X2选自修饰的Ser。
此外，(X1)m-(X2)优选为Gly-Xaa-Ser*，或Gly-Xaa-Cys*，其中Xaa为任何氨基酸，更优选(X1)m-(X2)为Gly-Ser-Ser*或Gly-Ser-Cys*，其中*表示大疏水基团修饰的氨基酸残基。
(X3)n优选包含格瑞林片断的序列，或格瑞林片断的变体，如人格瑞林。因此，(X3)n优选包含选自一种或多种如下所示序列的序列：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His
Phe Leu Ser Pro Glu
Phe Leu Ser Pro
Phe Leu Ser
Phe Leu
Phe
在一个优选实施方案中，格瑞林样化合物的长度与人格瑞林，即27或28个氨基酸的长度基本相似。因此，n优选1-25范围内的整数，如选自1-24，如选自1-15，如选自1-10，如选自10-25，如选自10-24，如选自15-25，如选自15-24。
(X3)n可以选自任何的格瑞林片断，如人格瑞林，因此，(X3)n可以选自一种或多种如下所示的序列或其类似物：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys
Phe Leu Ser Pro Glu Hls Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His
Phe Leu Ser Pro Glu
Phe Leu Ser Pro
Phe Leu Ser
Phe Leu
Phe
或选自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys Glu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Val
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys
或选自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu SerLys Lys Pro Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys Glu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala  Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Ala
或选自
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu Ser
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys Glu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala  Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala
在另一实施方案中，(X3)n优选包含或由选自下列的序列组成：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His
Phe Leu Ser Pro Glu
Phe Leu Ser Pro
Phe Leu Ser
Phe Leu
Phe
功能性
此处所述的格瑞林样化合物在GHS受体处有活性。这些化合物可结合于受体，且优选刺激受体活性。
可使用不同的技术如检测细胞内GHS受体构象的改变、G-蛋白偶联活性的改变和/或细胞内信使的改变而测量GHS受体的活性。
一种简单的测量格瑞林样化合物激活格瑞林受体能力的测量是测量其EC50，即，化合物可以激活受体信号至该化合物最大作用一半时的剂量。
格瑞林受体可以是在初步细胞培养物上的内源性表达，例如垂体细胞，或者在转染格瑞林受体的细胞上表达。根据测试的类型可以使用整体细胞测试或使用由任一这些细胞类型制备的膜进行测试。
由于格瑞林受体通常被认为是与Gq信号通路初步偶联，可以使用任何监测在Gq/G11信号通路中活性的适宜测试，例如：
1)测试法，其为了提高信噪比例如通过检测与例如抗-G□q或-11抗体沉淀结合的GTPgS结合进行检测Gq/G11的激活。此测试还可以检测与其它G-蛋白而不是Gq/11的偶联。
2)例如通过测量磷酸肌醇酯的累积，测试磷脂酶C(PLC)的活性的测试法，所述磷脂酶C是一种在通路中最初的下游效应分子，所述磷酸肌醇酯是PLC的一种产物。
3)在信号级联中更下游的是细胞内贮存的活化钙(mobilization ofcalcium)
4)还可测量更加下游的信号分子如不同类的MAP激酶(p38，jun，等)的活性、NF-K-B转位和CRE驱动基因翻译。
替换地，还可向活化格瑞林受体上结合荧光标记抑制蛋白。
在一个实施方案中，化合物与受体GHS-R 1A的结合可使用上面描述的测试进行测量。
当使用上文描述的测试测量，根据本发明的格瑞林样化合物优选具有相对于28氨基酸人格瑞林至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％的功能活性；和/或EC50高于约1,000，高于约100，或高于约50或高于约10。高于是指效能，因此显示了为获得结合抑制需要较低的量。
在本发明的一个实施方案中，化合物在GHS-R 1A上的效能(EC50)低于约500nM。在另一个实施方案中，该化合物在GHSR 1A上的效能(EC50)低于约100nM，如低于80nM，例如低于60nM，如低于40nM，例如低于20nM，如低于10nM，例如低于5nM，如低于1nM，例如低于0.5nM，如低于0.1nM，例如低于0.05nM，如低于0.01nM。
在另一个实施方案中，化合物的离解常数(Kd)低于500nM。在另一个实施方案中，配体的离解常数(Kd)低于100nM，如低于80nM，例如低于60nM，如40nM，例如低于20nM，如低于10nM，例如低于5nM，如低于1nM，例如低于0.5nM，如低于0.1nM，例如低于0.05nM，如低于0.01nM。
可使用存在于不同环境中的重组制备的GHS受体多肽进行结合测试。这样的环境包括，例如，包含由重组核苷酸或天然存在的核苷酸表达的GHS受体多肽的细胞提取物和纯化细胞提取物；还包括，例如，应用由重组方法或从被引入不同环境的天然存在的核苷酸制备的纯化GHS受体多肽。
使用重组表达的GHS受体提供了一些优势，如在所定义的细胞系统中表达受体的能力，以便在GHS受体处对化合物的应答可更易区别于在其它受体处的应答。例如，GHS受体可在如HEK 293、COS7和CHO的细胞系中表达，所述细胞系无法通过表达载体(expression vector)正常地表达受体，其中不含表达载体的相同细胞系可用作对照。
同一性和同源性
术语“同一性”或“同源性”应被解释为意指如果需要获得整体序列的最大同一性百分比且不考虑任何保守取代基作为序列同一性的部分，在排序并引入裂隙后，氨基酸残基在候补序列中的百分比与所比较的相应序列的残基是相一致的。N-或C-末端的伸展或插入均不解释为降低同一性或同源性。排列的方法和计算机程序是为本领域所熟知的。可使用序列分析软件(例如，Sequence Analysis Software Package，Genetics Computer Group，University of Wisconsin Biotechnology Center，1710 University Ave，Madison，Wis 53705)测定序列同一性。这一软件通过指定对于各种取代、删除或其它修饰的同源性程度进行相似序列的匹配。
与所定义的序列相比，此处指定的一种或多种同源物序列可以有一个或多个氨基酸不同，但可以表现相同的功能，即同源物可视为预定序列的功能等价物。
如上所述，此处任一预定序列的同源物可被定义为：
i)同源物包含能够被受体识别的氨基酸序列，所述受体可以识别28氨基酸人格瑞林，优选乙酰化28氨基酸人格瑞林，和/或
ii)同源物包含能够选择性结合于GHS-R la的氨基酸序列，和/或
iii)与28氨基酸人格瑞林，优选乙酰化28氨基酸人格瑞林相比较，同源物具有对GHS-R 1a基本相似或更高的亲和力。
在上面的实施方案中，28氨基酸人格瑞林具有示于SEQ ID NO：1中的序列，且当乙酰化时是在3位进行乙酰化。
此处所用抗体可以是与格瑞林的N-末端部分或C-末端部分结合的抗体，优选与格瑞林N-末端部分结合的抗体。该抗体可以是如Ariyasu等在“Delayed short-term secretory regulation of ghrelin in obese animals：Evidensed by a specific RIA for the active form of ghrelin，Endocrinology143(9)：3341-3350，2002”中描述的抗体。
同源物的例子包含一个或多个保守的氨基酸取代基，所述氨基酸取代基在预定氨基酸的相同组的范围内包含一个或多个保守的氨基酸取代基，同源物或者包含多种保守的氨基酸取代基，其中各保守取代基通过在预定氨基酸的不同组的范围内进行取代而生成。
同源物因此可包含相互独立的保守取代基，其中所述同源物的至少一个甘氨酸(Gly)被选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的氨基酸和其同源物所独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述丙氨酸(Ala)被选自甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的氨基酸和其同源物所独立地取代，其中所述同源物的至少一个缬氨酸(Val)被选自甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述亮氨酸(Leu)被选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个异亮氨酸(Ile)被选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸和亮氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述天冬氨酸(Asp)被选自谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述苯丙氨酸(Phe)被选自酪氨酸、色氨酸、组氨酸、脯氨酸的氨基酸，优选选自酪氨酸和色氨酸，以及其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述酪氨酸(Tyr)被选自苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、脯氨酸的氨基酸，优选选自苯丙氨酸和色氨酸，以及其同源物独立地取代，其中所述片断中至少一个所述精氨酸(Arg)被选自赖氨酸和组氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个赖氨酸(Lys)被选自精氨酸和组氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述天冬酰胺(Asn)被选自天冬氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个谷氨酰胺(Gln)被选自天冬氨酸、谷氨酸和天冬酰胺的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个脯氨酸(Pro)被选自苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸的氨基酸和其同源物独立地取代，其中所述同源物的至少一个所述半胱氨酸(Cys)被选自天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的氨基酸所取代。
保守取代基可引入优选预定序列的任何位置。但是引入非保守的取代基也可能是所期望的，特别是但不限于在任何一个或多个位置引入非保守取代基。
其中导致形成功能等价同源物序列的非保守取代基例如i)在极性上实质不同，例如用非极性侧链(丙氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或蛋氨酸)的残基来取代具有极性侧链的残基或带电荷的氨基酸，或者用带电荷的或极性残基来取代非极性残基，其中所述极性侧链如甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺，所述带电荷的氨基酸如天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸或赖氨酸；和/或ii)实质改变其对多肽骨架定位的作用如使用其它残基取代为或来取代(substitution of or for)脯氨酸或谷氨酸；和/或iii)在电荷上实质不同，例如用负电荷残基如谷氨酸或天冬氨酸来取代正电荷残基如赖氨酸、组氨酸或精氨酸(反之亦然)；和/或iv)在立体大小上实质不同，例如用大残基如组氨酸、色氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸取代一种小侧链的氨基酸例如丙氨酸、天冬氨酸或丝氨酸(反之亦然)。
在一个实施方案中氨基酸取代是基于其疏水和亲水值以及氨基酸侧链取代基的相对相似性而进行的，所述相似性包含电荷、大小等。考虑各种前述特征的例示性氨基酸取代为本领域技术人员熟知且包含：精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酸和天冬酰胺；以及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
在一个优选实施方案中，结合区包含与SEQ ID NO 1至少有60％同源性的氨基酸序列的同源物。
更优选地，同源性是与SEQ ID NO 1至少有65％，如至少70％，如至少75％，如至少80％，如至少85％，如至少90％，如至少95％，如至少98％的同源性。
在一个更优选的实施方案中，上述百分比涉及与SEQ ID NO：1相比同源物序列的相一致。
SEQ ID NO：1的同源物可以是27氨基酸人格瑞林SEQ ID NO：2、大鼠格瑞林SEQ ID NO：3。其它同源物可以是描述于EP 1197496(Kangawa)的变异体，在此并入作为参考。
大的疏水基
根据本发明的格瑞林样化合物的大疏水基是当3位的丝氨酸残基被大疏水基修饰时，能提供与GHS-R la具有结合亲和力的脱乙酰28氨基酸人格瑞林的任意大疏水基。
当所修饰的氨基酸包含例如-OH、-SH、-NH或-NH2作为其侧链取代基时，优选通过酰化这样的取代基而形成基团。因此连接的方式可以选自酯、醚、硫酯、硫醚、酰胺和尿素。
例如，如果修饰的氨基酸是丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或羟脯氨酸，该氨基酸在侧链具有羟基。如果修饰的氨基酸是半胱氨酸，该氨基酸在侧链具有巯基。如果修饰的氨基酸是赖氨酸、精氨酸、组氨酸、色氨酸、脯氨酸或羟脯氨酸，其在侧链具有氨基或亚胺基团。
因此上述的羟基、巯基、氨基和亚胺基可以是化学修饰的。也就是说，羟基或巯基可以被醚化、酯化、硫醚化或硫酯化。亚胺基团可以被亚胺醚化、亚胺硫醚化或烷基化。氨基可以被酰胺化、硫酰胺化或氨基甲酰化(carbamidate)。
此外，巯基可被二硫化，亚胺基可被酰胺化或硫酰胺化，以及氨基可以被烷化或硫代氨基甲酰化。
在优选的实施方案中，修饰的氨基酸是通过酯键与连接于疏水基的偶联丝氨酸。
疏水基可以是饱和或不饱和的包含一个或多个碳原子的烷基或酰基的任一基团。在一个实施方案中，大疏水基是酰基，其包含通过从有机酸、有机磺酸或有机磷酸中除去羟基所形成的基团。有机羧酸包含例如脂肪酸，并且其碳原子数优选1至35。在有机磺酸或有机磷酸中，其碳原子数优选1至35。
因此，酰基优选选自C1-C35酰基，如C1-C20酰基，如C1-C15酰基，如C6-C15酰基，如C6-C12酰基，如C8-C12酰基。
更优选地，酰基选自C7酰基、C8酰基、C9酰基、C10酰基、C11酰基和C12酰基。这样的酰基可由辛酸(优选辛酸)(octanoic acid(preferably caprylicacid))、癸酸(优选癸酸)(decanoic acid(preferably capric acid))或十二酸(优选月桂酸)以及其单烯或多烯脂肪酸形成。
在一个实施方案中，酰基选自C8酰基和C10酰基。这样的酰基可以由辛酸(优选辛酸)或癸酸(优选癸酸)形成。
在一个实施方案中，酰基选自C7酰基、C9酰基和C11酰基，如选自C9酰基和C11酰基。
此外，修饰的氨基酸可以是任一氨基酸，其中基团如EP 1197496(Kangawa)所描述的进行修饰，其在此引入作为参考。
保护基团
根据本发明的格瑞林样化合物还可在N-末端或C-末端或两端包含保护基。
在体内条件下，共价键连接于N-末端氨基酸的保护基减少氨基末端的反应性。氨基保护基包含-C1-10烷基、-C1-10取代烷基、-C2-10烯基、-C2-10取代烯基、芳基、-C1-6烷基芳基、-C(O)-(CH2)1-6-COOH、-C(O)C1-6烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-O-C1-6烷基或-C(O)-O-芳基。优选地，氨基末端保护基是乙酰基、丙基、丁二酰基、苄基、苄氧羰基或叔丁氧羰基。
在体内条件下，共价键连接于C-末端羧基的保护基减少羧基末端的反应性。羧基末端保护基优选连接于最后氨基酸的a-羰基。羧酸末端保护基包含酰胺、甲酰胺和乙酰胺。
共轭物
格瑞林样化合物还可以以与另一实体共轭的形式给予，从而例如延长其半衰期。
在一个实施方案中，共轭物是格瑞林或其衍生物或同源物和Ac-RYY(RK)(WI)RK)-NH2的共轭物，其中括号表示可允许氨基酸残基的变化。共轭物中肽的例子还可见于美国专利申请2003040472中。
药物治疗指征
在本发明的一个方面，格瑞林或其类似物用于制备供需要这样治疗的个体使用的药物。优选地，所述药物用于治疗胃切除个体的体重和/或身体脂肪的损失。在另一个实施方案中，该治疗刺激食欲和/或防止个体的营养不良。术语“营养不良”是指个体无法消耗、吸收或维持体内足够水平的一种或多种大量或微量营养物以保持身体健康。在另一个等同的实施方案中，该治疗包含改善胃切除个体的健康感觉和生活质量。
在此处描述的任一治疗中，格瑞林或其类似物可与一种或多种其它胃衍生因子联合使用。这一其它的胃衍生因子可包含任何激素、酰化或非酰化的肽、氨基酸衍生物、核苷酸、脂肪酸衍生物、碳水化合物或其它衍生于或从胃分泌的物质，以及可优选(但不排除)下列物质：胰抑素、胃泌素、组胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、内因子。
除了“胃衍生因子”格瑞林还可用于与任何作用于“起源于胃的因子”相同受体的合成的低或高分子量激动剂联合使用。
药物组合物
虽然本发明的化合物或盐可以以原化合物的形式给予，但是其优选存在于药物组合物中。因此，本发明还提供用于医学用途的药物组合物，其包含如此处定义的格瑞林或其类似物或可药用盐，以及可药用载体。所述的本发明的组合物优选以任何方式给药至个体以获得有益的效果，优选通过刺激食欲和/或防治营养不良，和/或改善个体的健康感觉或生活质量。在一个优选实施方案中，根据本发明的组合物提供经口、经鼻、经肺、透皮或胃肠外途径给予。更优选地，该组合物提供经口或经肺途径给予。还可以考虑其它可有效地将药物递送至靶点或将药物引入血液的给药方法。
本发明的化合物可与至少一种其它化合物一起给予。这些化合物可以同时给予，或按照分开的组合物或者组合于单一剂型中的形式给予，或者相继给予。
在一个优选实施方案中，当为了治疗目的向个体给予时，该药物组合物不是免疫原，除非其目的是诱导免疫应答。
优选地，该组合物包含用于治疗胃切除个体的体重和身体脂肪损失的格瑞林或其类似物或可药用盐和可药用载体、媒介物和/或赋形剂和/或转运分子。
转运分子通过合并于或瞄向本发明化合物而起作用。可以使用本领域技术人员已知的任何适宜的转运分子。转运分子例如可以是脂质体、微囊和/或微球。
许多方法可用于制备脂质体，如在例如Szoka等，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9：467(1980)，美国专利4,235,871，4,501,728和4,837,028中所描述的，所有文献在此引入作为参考。
微囊可通过表面活性剂(包含疏水部分和一个或多个离子或强亲水基团的分子)在水溶液中形成。随着固体表面活性剂浓度的增加，其吸附于空气/水或玻璃/水界面的单层充填得如此紧密，以至进一步的占据需要过度压缩已成为两个单层的表面活性剂分子。进一步增加溶解的表面活性剂的量使其超过这一浓度，导致等量于新分子的量聚集成微囊。这一过程起始于被称为“临界微囊浓度”的特征化浓度。
在稀释的表面活性剂溶液中形成的微囊的形状是近乎球形的。表面活性剂分子的极性端排列在球形壳的外面而他们的烃链朝向中心，形成微囊的球核。烃链随机盘绕纠缠且微囊内部具有非极性的液体样特性。在聚氧乙烯非离子性清洁剂的微囊中，聚氧乙烯部分朝向外面并被水浸润。这一排列是能量有利的，因为亲水端基团与水接触，且烃部分离开了水媒介并被极性端基团部分地掩蔽而不与水接触。位于微囊内的表面活性剂分子的该烃末端相互间通过弱的范德华力相互作用。
微囊的大小或其聚集的数目很大程度上受几何因素支配。烃核的半径不能超过表面活性剂伸展的烃链的长度。因此，增加该链的长度或增加同源系列提高了球形微囊的聚集数目。如果表面活性剂的浓度增加到超过某一百分比以及如果加入电解液(离子性表面活性剂时)或提高温度(非离子性表面活性剂时)，微囊的大小增加。在这些情况下，微囊过大而无法维持球形变成椭圆体、圆柱体或最终成为片形。
本领域技术人员熟知的常用表面活性剂可用于本发明的微囊。适宜的表面活性剂包含月桂酸钠、油酸钠、月桂基硫酸钠、八氧乙烯乙二醇单十二烷基醚、辛苯聚醇9(octoxynol 9)和PLURONIC F-127(Wyandotte ChemicalsCorp.)。优选的表面活性剂为与静脉内注射相适合的非离子性聚氧乙烯和聚氧丙烯清洁剂，如吐温-80、PLURONIC F-608、正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷等。此外，磷脂如那些描述可用于制备脂质体的磷脂也可用于形成微囊。
此处所用的用于指示组合物、载体、稀释剂和药物的术语“可药用”、“生理上可耐受的”以及其语法上的变化可以相互替换使用，并代表可给予或施于个体而不产生不合意的生理作用如恶心、头昏、心嘈等的物质。
本领域熟知包含溶解的或分散的活性成分的药物组合物的制备。典型地，这样的组合物被制备为无菌注射液或悬浮液，水溶液或非水溶液，但也可制备适用于溶液或悬浮液的固体形式，所述固体形式在应用前溶于液体中。还可被制备为乳剂。
活性成分可与赋形剂相混合，所述赋形剂为可药用并与活性成分相兼容的，所述赋形剂的用量应适用于此处描述的治疗方法。适宜的赋形剂为例如水、盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等或其组合物。此外，如果需要，该组合物可包含少量的辅助物质如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等以增强活性成分的效果。
本发明的药物组合物可包含该化合物可药用盐。可药用盐包含酸加成盐(与多肽的游离氨基形成的)。
这样的盐包含可药用加成盐、可药用金属盐、铵盐和烷基化铵盐。酸加成盐包含无机酸以及有机酸的盐。适宜无机酸的代表性的例子包含盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸和硝酸等。适宜的有机酸的代表性的例子包含甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、安息香酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、扑酸(pamoic)、二甲撑基水杨酸、乙烷二磺酸、葡糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、对-氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸和对甲苯磺酸等。可药用无机或有机酸加成盐的其它例子包含列于J.Pharm.Sci.1977，66，2中的可药用盐，其在此引入作为参考。金属盐的例子包含锂、钠、钾和镁盐等。
铵和烷基化的铵盐的例子包含铵、甲基铵盐、二甲基铵盐、三甲基铵盐、乙基铵盐、羟乙基铵盐、二乙基铵盐、丁基铵盐和四甲铵盐等。
游离羧基所形成的盐还可以源自于无机碱如钠、钾、铵、钙或铁的氢氧化物，以及有机碱如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等。
在本发明上下文中，还包含在本发明范围内的化合物或其可药用酸加成盐是其任何的水合物(水合形式)。
液体组合物还可以包含除水以外的液体相。这些其它的液体相的例子是甘油、植物油如棉子油、有机酯如油酸乙酯和水油乳液(water-oilemulsions)。
合适的药物载体包含惰性固体稀释剂或填料，无菌的水溶液和各种的有机溶剂。固体载体的例子为乳糖、石膏粉、蔗糖、环糊精、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸或纤维素的低级烷基醚。液体载体的例子为糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯或水。
然后将通过组合本发明的化合物和可药用载体所形成的药物组合物以各种适宜于公开的给药途径方便地给予。该组合可方便地存在于通过药物领域已知的方法所形成的单元剂型中。
在本发明的优选实施方案中，该组合物包含格瑞林样化合物或其盐作为冻干物，以及该组合物进一步包含溶剂。在另一个实施方案中，该组合物是格瑞林样化合物或其盐。优选地，溶剂可以是任何适宜的溶剂，如此处描述的，且优选的溶剂是盐水或生理缓冲液样的磷酸缓冲液。
本发明还涉及制备包含本发明的化合物的药物或药物组合物的方法，所述方法包含混合至少一种如上述的格瑞林样化合物和生理上可接受的载体。
在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含作为活性成分的如上述的化合物或其可药用盐以及可药用载体。
从而，该组合物还可包含如上述的转运分子。
在本发明的另一方面，本发明的化合物可与其它已知增加体重的药学活性物质组合给药，所述物质例如黑色素浓缩激素(MCH)、MCH受体激动剂尤其是MCH受体1激动剂、神经肽Y(NPY)、NPY受体1激动剂和NPY受体5激动剂、包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受体2拮抗剂、α-促黑色素细胞激素(α-MSH，α-黑皮质素)、黑皮质素-3受体(MC3R)拮抗剂、黑皮质素4受体(MC4R)拮抗剂、与刺鼠相关的肽(Agrp)、Agrp激动剂、可卡因-和安非他明-调节转录(CART)的拮抗剂、阿立新受体1和受体2激动剂、生长激素(GH)、GH受体激动剂、和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、IGF-1受体1激动剂或其它的药学活性物质。此外，其它活性物质可以包含其它胃衍生因子包含但不限于，一种或多种胃泌素、胰抑素、组胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、内因子。其组合可以是用分份试剂盒(kit-in-part)系统的形式，其中组合的活性物质可以同时、相继或分别给予。
经口给予的组合物
本发明的化合物可被配制为多种经口剂型。药物组合物和剂型可包含本发明的化合物或其可药用盐或其结晶形式作为活性成分。可药用载体可以是固体或液体。固体性质的制剂包含粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和分散颗粒。固体载体可以是一种或多种物质，其可用作稀释剂、芳香剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、润湿剂、片剂的崩解剂或成胶囊的材料。
优选地，该组合物将含有约0.5％至75％重量份的本发明的化合物，其余由适宜的药物赋形剂组成。对于经口给药，这样的赋形剂包含药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、凝胶、碳酸镁等。
在粉剂中，载体是细分的固体，其是与细分的活性成分的混合物。在片剂中，该活性成分与具有必需的粘合能力的载体以适宜的比例混合并压缩至所需的形状和大小。该粉剂和片剂优选包含一至七十百分比的活性化合物。适宜的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点的腊、可可油等。术语“制剂”意在包含活性化合物与作为载体提供胶囊的包封材料的组合物以及载体或不含载体，其中所述胶囊中为活性组分，所述组合物被与其相关联的载体所包围。相似地，包含扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以是适于经口的固体形式。
根据本发明的滴剂可以包含无菌或非无菌水或油的溶液或悬浮液，并可通过在适宜的水溶液中溶解活性成分而制备，任选包含抗细菌剂和/或抗真菌剂和/或任何其它适宜的防腐剂，以及任选包含表面活性剂。然后，所得溶液可经过滤澄清，转移至适宜的容器后密封并经高压灭菌或维持在98-100℃半小时。可选择地，该溶液可经过滤灭菌并无菌地转移至容器中。适用于滴剂的抗细菌剂和抗真菌剂的例子为硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、笨扎氯铵(0.01％)和氯己啶(0.01％)。油溶液制剂中适宜的溶剂包含乙二醇、稀释的乙醇和丙二醇。
还包含固体形式的制剂，所述制剂意在使用前不久转变成经口的液体形式的制剂。这样的液体形式包含溶液、悬浮液和乳液。这些制剂可包含活性成分以及矫色剂、香味剂、稳定剂、缓冲液、人工的和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
其它适用作经口给予的形式包含液体形式的制剂，其包含乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、含水悬浮液、贴牙剂、凝胶洁牙剂、口香糖，或者意在使用前不久转变成液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可在丙二醇水溶液中制备或可包含乳化剂如卵磷脂、山梨聚糖单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可通过在水中溶解活性成分并加入适宜的矫色剂、芳香剂、稳定剂和增稠剂而制备。含水悬浮液可通过在水中分散细分的活性成分和粘性物质而制备，所述粘性物质如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它熟知的悬浮剂。固体形式的制剂包含溶液、悬浮液和乳液，并可包含活性成分以及矫色剂、芳香剂、稳定剂、缓冲液、人工的和天然的甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
胃肠外给药的组合物
本发明的组合物可被配制为胃肠外给药(例如通过注射，例如快速注射或持续灌注)并可以按照单位剂量形式存在于添加防腐剂的安瓿、预填充的注射器、小容积的输液或多剂量容器中。该组合物可以采取在油或水媒介剂中的悬浮液、溶液或乳液的形式，例如在聚乙二醇的水溶液中。油或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介剂的例子包含丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)以及可注射的有机酯(例如，油酸乙酯)，并且可以包含配制试剂如保存、润湿、乳化或悬浮、稳定和/或分散的试剂。可选择地，该活性成分可以为通过无菌分离了无菌固体或通过冷冻干燥溶液而获得粉末形式，所述粉末在使用前与适宜的媒介剂例如无菌无热原的水进行配制。如果必要的话，水溶液应该是合适的缓冲液，并且该液体稀释剂首先加入足够的盐水或葡萄糖使其等渗。该水溶液特别适用于静脉注射、肌肉注射、皮下注射和腹膜内给药。通过本领域技术人员已知的标准技术可容易地得到所有应用无菌的水介质。
格瑞林或其类似物或可药用盐的溶液，(和例如抗原决定簇和蛋白酶抑制剂)可以在水或盐水中制备，并且任选与无毒的表面活性剂混合。用于静脉注射或动脉内给药的组合物可能包含无菌水溶液，同时可以包含缓冲液、脂质体、稀释剂以及其它合适的添加剂。
适用于肠胃外组合物的油包含石油、动物、植物或合成的油类。适用于这些组合物的特定油的例子包含花生、大豆、芝麻、棉籽、谷物、橄榄、凡士林油和矿物中的油。适用于肠胃外组合物的脂肪酸包含油酸、硬脂酸和异硬脂酸。油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯是合适的脂肪酸酯。
适用于肠胃外组合物的脂肪酸盐包含脂肪酸的碱金属、铵和三乙醇胺盐，合适的清洁剂包含(a)阳离子清洁剂例如二甲基二烷基铵卤化物、和烷基吡啶鎓卤化物；(b)阴离子清洁剂例如烷基、芳基和烯烃的磺酸盐，烷基、烯烃、醚和单甘油酯的硫酸盐和磺基丁二酸盐，(c)非离子的清洁剂例如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇胺和聚氧乙烯丙烯共聚物，(d)两性清洁剂如烷基-β-氨基丙酸和2-烷基-咪唑啉季铵盐，以及(e)其混合物。
在溶液中，该胃肠外组合物典型地将包含约0.5至约25％重量份的活性成分。可以使用防腐剂和缓冲液。为了使注射位点的刺激最小化或完全消除，这样的组合物可包含一种或多种亲水-亲脂平衡(HLB)约12至17的非离子性表面活性剂。这样的组合物中表面活性剂的量典型地在约5至约15％重量份范围内。适宜的表面活性剂包含聚乙烯山梨聚糖脂肪酸酯如山梨聚糖单油酸酯以及环氧乙烯和疏水基形成的高分子量加合物，所述加合物可通过环氧丙烯与丙二醇缩合而形成。该胃肠外组合物可存在于单一剂量或多剂量的密封容器中，如安培和小瓶，并可在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，在使用前仅需要加入无菌液体赋形剂例如水用于注射。临时的注射溶液和悬浮液可由先前所述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适于注射或灌注的药物剂型可包含无菌水溶液或分散剂，所述的无菌水溶液或分散剂包含通过包封于脂质体中而适于给予的活性成分。在所有的情况中，最终的剂型在制备和贮存条件下必需是无菌的、液态的且稳定的。
无菌注射液通过在适当的溶剂中合并所需量的格瑞林或其类似物或可药用盐以及各种其它上面列举的所需成分后，过滤灭菌而制备。
局部给药的组合物
本发明的化合物还可局部给药。局部给药的区域包含皮肤表面以及直肠、鼻腔、口腔和喉咙的粘膜组织。经由皮肤和粘膜局部给药的组合物不应增加刺激的征兆，如肿胀或发红。
该局部组合物可以包含适用于局部给药的可药用载体。因此，该组合物可以为例如悬浮液、溶液、软膏、洗剂、乳剂、泡沫、气雾剂、喷雾剂、栓剂、植入剂、吸入剂、片剂、胶囊、干粉、糖浆、香膏(balm)或锭剂。制药工业中熟知这样的组合物的制备方法。
本发明的化合物可被配制成表皮的局部给药如软膏、乳膏或洗剂和透皮贴剂。配制软膏或乳膏时可以使用例如水性或油性基质并加入适宜的增稠和/或凝胶剂。配制洗剂时可以使用水性或油性基质，且通常还将包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或矫色剂。适用于在口腔中局部给药的组合物包含锭剂，所述锭剂包含在芳香的基质中的活性试剂，该基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；药锭包含在惰性基质如凝胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的活性成分；漱口剂包含在适宜的液体载体中的活性成分。
根据本发明的乳膏、软膏或贴剂是用于外敷的活性成分的半固体组合物。它们是通过混合细粉或粉末形式的活性成分与具有适宜的机械性质的辅料以及油脂的或非油脂的基质混合而制备的，其中所述活性成分单独存在或在含水或不含水液体的溶液或悬浮液中。这一基质可以包含烃如硬质、软质或液态的石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；如粘液；天然来源的油如杏仁、谷物、落花生、蓖麻或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或者脂肪酸如硬脂酸或油酸连同醇如丙二醇或大粒凝胶。该组合物可以并入任何适宜的表面活性剂如阴离子型、阳离子型或非离子表面活性剂如山梨聚糖酯或其聚乙二醇衍生物。还可包含悬浮剂如天然树胶、纤维素衍生物或无机物如silicaceoussilica，以及其它成分如羊毛脂。
根据本发明的洗剂包含那些适用于皮肤或眼睛的洗剂。眼用洗剂可以包含无菌水溶液，任选包含抗菌素并可通过相似于制备滴剂的方法制备。用于皮肤的洗剂或搽剂还可包含快速干燥和冷却皮肤的试剂如乙醇和丙酮，和/或润湿剂如甘油或油如蓖麻油或花生油。
此处描述的药物试剂-化学调节物复合物可透皮给药。透皮给药典型地包含将用于经皮通道递送的药物释放入患者的体循环。该皮肤位点包含用于透皮给药的解剖区域并包含前臂、腹部、胸部、背部、臀部、乳头区域等。
透皮释放通过使患者皮肤接触复合物源较长的时间而得以实现。透皮贴剂具有增加提供控释药物-化学调节物复合物至体内的优势。参见Transdermal Drug Delivery：Developmental Issues and Research Initiatives，Hadgraft and Guy(eds.)，Marcel Dekker，Inc.，(1989)；Controlled Drug Delivery：Fundamentals and Applications，Robinson and Lee(eds.)，Marcel Dekker Inc..(1987)；and Transdermal Delivery ofDmgs，1-3卷，Kydonjeus and Berner(eds.)，CRC Press，(1987)。这样的剂型可通过溶解、分散或将药物-化学调节物复合物并入适当媒介如弹性基质材料中而进行制备。还可应用吸收增强剂来提高化合物穿过皮肤的通量(flux)。其通量速率可通过提供速率控制膜或将化合物分散于聚合物基质或树胶中而得以控制。
许多类型的透皮贴剂可用于此处描述的方法中。例如，简单的粘连贴剂可由背板材料和丙烯酸酯胶粘剂制备。药物-化学调节物复合物和任何增强剂被配制入粘性熔铸溶液中并使其彻底混合。将该溶液直接熔铸在背板材料上并在烘箱中蒸发熔铸溶剂，形成粘连膜。可附加释放衬垫以完成该系统。
可选择地，聚氨基甲酸乙酯基质贴剂可用于释放药物-化学调节物复合物。该贴剂的各层包含背板、聚氨基甲酸乙酯药物/增强剂基质、膜、胶粘剂和释放衬垫。在室温处理下固化聚氨基甲酸乙酯前聚物制备该聚氨基甲酸乙酯基质。加入水、醇和前聚物的复合物导致形成胶粘牢固的弹性体，所述弹性体仅可直接熔铸背板材料。
本发明的其它实施方案将利用水凝胶基质贴剂。典型地，该水凝胶基质将包含醇、水、药物和一些亲水聚合物。该水凝胶基质可以并入在背板和粘连层之间的透皮贴剂。
储存液体的贴剂也可用于此处描述的方法中。该贴剂包含不可渗透的或半透的热密封的背板材料、热密封的膜、丙烯酸酯压敏皮肤胶粘剂、和硅化处理的释放衬垫。该背板热密封于膜上以形成储藏室，在所述储藏室中填充复合物、增强剂、胶凝剂和其它赋形剂的溶液。
除了胶凝的药物-化学调节物溶液被限制于薄的泡沫层，典型地为聚氨基甲酸乙酯中，泡沫基质贴剂的样式和成分与液体储存系统相似。该泡沫层位于背板和热密封于贴剂周围的膜之间。
对于被动释放系统，释放速率典型地受位于储藏室和皮肤间的膜、从整体装置的扩散或者在释放系统中作为速率-控制屏障的皮肤自身的控制。参见美国专利号4,816,258；4,927,408；4,904,475；4,588,580，4,788,062等。药物释放的速率将部分取决于膜的性质。例如药物穿过体内膜的释放通常高于穿过皮肤屏障的速率。复合物从装置释放至膜的速率受储藏室和皮肤间限速膜的最显著地控制。假定皮肤对复合物具有足够的渗透性(即，穿过皮肤的吸收大于通过膜的速率)，膜将用于控制患者的剂量速率。
适宜的渗透膜材料可基于所需的渗透度、复合物的属性和与构建装置相关的机理考虑进行选择。例示性的渗透膜材料包含广泛的天然和合成聚合物，如聚二甲硅氧烷(硅酮橡胶)、乙烯基乙酸乙烯酯共聚物(EVA)、聚氨基甲酸乙脂、聚氨基甲酸乙脂-聚醚共聚物、聚乙烯、聚酰胺、聚氯乙烯(PVC)、聚丙烯、聚碳酸酯、聚四氟乙烯(PTFE)、纤维素材料例如三乙酸纤维素和硝酸/醋酸纤维素、以及水凝胶例如甲基丙烯酸-2-羟乙酯(HEMA)。
取决于所要求的装置特性，该装置中可包含其它的项目，如其它常规的治疗产品组分。例如，根据本发明的组分也可包含一种或多种防腐剂或者抑菌剂，例如羟基苯甲酸甲酯、羟基苯酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯铵等。这些药学组分还可包含其它活性成分如抗微生物药物特别是抗生素、麻醉剂、镇痛剂和止痒剂。
作为栓剂给药的组合物
本发明的组合物可以配制为栓剂给药。低熔点的蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物首先熔融并例如通过搅拌可将活性成分均匀地分散。然后将该熔融均匀的化合物倾入适宜大小的铸模中，使冷却并固化。
该活性化合物可被配制成包含例如约0.5％至约50％本发明化合物的置于聚乙二醇(PEG)载体(例如PEG 1000[96％]和PEG 4000[4％])中的栓剂。
经鼻给药的化合物
本发明的化合物可被配置用于经鼻给药。通过常规的方法将溶液或悬浮液直接应用于鼻腔，例如使用滴管、移液管或喷雾器。该组合物可以以单剂或多剂形式提供。在使用滴管或移液管的时候，可以通过向患者给予适当的预定体积的溶液或悬浮液而实现。在使用喷雾器的时候，可以通过例如测量离子化喷雾泵的方式而实现。
用于气溶胶给药的化合物
本发明的化合物可被配置用于气溶胶给药，特别是用于呼吸道并包含鼻内给药。该化合物通常将具有小的粒径例如5微米级或更小。这样的粒径可以通过本领域已知的方法获得，例如通过微粒化。该活性成分是以与适宜的喷射剂如氟氯化碳(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适宜的气体的压缩物的形式提供。该气溶胶还可适宜地包含表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可通过计量阀控制。可选择地，可以以干燥粉末混合物的形式提供活性成分，例如在适宜粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)中的化合物粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单元剂量的形式存在，例如胶囊或可通过吸入器装置给予粉末的明胶或泡包装的筒。
应用苄醇或其它适宜的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、应用氟化碳和/或应用其它增溶剂或分散剂，可将通过气溶胶给予的组合物制备成例如盐水中的溶液。
可药用盐
本发明还意在包含这些化合物的可药用盐，所述可药用盐是可制备的。这些盐将是用于药学用途时可接受的盐。即该盐将保持母体化合物的生理活性且该盐在用于治疗疾病时将不会具有不适当的或有害的效果。
以标准的方式制备可药用盐。如果母体化合物是碱，在适宜的溶剂中使用过量的有机或无机酸处理。如果母体化合物是酸，在适宜的溶剂中使用过量的有机或无机碱处理。
本发明的化合物以其碱金属或碱土金属盐的形式，按照有效的剂量并存地、同时地或与可药用载体或稀释剂一起给予，特别且优选其药物组合物的形式为经口、直肠、或胃肠外(包含皮下)的途径给予。
用于本发明药物组合物的可药用酸加成盐的例子包含来源于矿酸的盐如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸，以及有机酸如酒石酸、醋酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸、对甲苯磺酸和芳基磺酸。
给药-剂量方案
此处所述的药物制剂优选为单元剂型。在这样的剂型中，制剂被细分为包含合适量活性组分的单元剂量。该单元剂型可以是包装的制剂，该包装中包含离散量的制剂，如分包装的片剂、胶囊和小瓶或安瓿中的粉末。此外，该单元剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或其可以是适当量的包装形式的任何这些剂型。需要时，组合物可以制备成适于缓释或控释给予活性成分的肠溶衣。
在本发明的一方面，向需要这种治疗的个体以药学有效量给予此处所述的组合物的适宜剂量。此处，“药学有效量”被定义为给予包含药物或药物组合物或方法中各活性组分的总量，所述方法足以显示有益的疗效。此处所用的术语“单元剂型”是指适用于人或动物受试者的物理离散单元，各单元仅包含预定量的化合物或与其它药剂组合的预定量的化合物，所述预定量的化合物与可药用稀释剂、载体或媒介剂为足以产生所需效果。对于本发明单元剂型的规格取决于所应用的特殊化合物和所达到的效果以及各化合物在宿主体内的药物动力学。给药量应为“有效量”或在个体患者体内达到“有效水平”的必需量。
剂量需求将随着所应用的具体药物组合物、给药途径和所治疗的具体受试者而变化。理想地，本方法所治疗的患者将接受在最大耐受剂量之内的药学有效量的化合物，所述药学有效量是在发生耐药性之前最大耐受剂量通常不高于所需剂量。适宜的剂量方案优选考虑本领域熟知的因素而确定，这些因素包含给药的受试者类型；受试者的年龄、体重、性别和医疗条件；给药途径；受试者的肾和肝的功能；所需的效果；以及所应用的具体化合物。
在实现疗效却无毒性范围内最准确地获得药物浓度的给药方案，需要基于药物在靶点生物利用度的动力学。这包含对药物的分布、平衡和清除的考虑。
根据本发明应用的组合物的优选剂量为相当于约0.1mg至约10mg格瑞林每千克体重的浓度，其优选每天给药。更优选地，该药物包含约5至约250mg，更优选约20mg至约200mg，更优选约20mg至约100mg的格瑞林或其类似物的单元剂量。本发明的格瑞林样化合物可与可药用载体或稀释剂混合给予。
应指出，饭前发生的正常格瑞林应答为格瑞林血浆浓度的短期突增，由于该肽半衰期短，静脉注射格瑞林将确保获得相似的格瑞林浓度的短暂峰。给药途径必需确保不降解，该肽的生物活性形式将是循环中的主要形式，所述活性形式将到达格瑞林受体并刺激它们。因此，为了获得药物的最大效果，优选每天给药一次至三次，各次给药在进食90分钟内，如进食85分钟内、如进食80分钟内、如进食75分钟内，如进食70分钟内、如进食65分钟内、如进食60分钟内、如进食55分钟内、如进食50分钟内、如进食45分钟内，如进食40分钟内、如进食35分钟内、如进食30分钟内、如进食25分钟内，如进食20分钟内、如进食15分钟内、如进食10分钟内、如进食5分钟内。更优选在各次主食前给药，如每天给药三次。
对于本发明，剂量将依据所应用的化合物和给药方式而变化。剂量水平将在每天约0.01μg/kg体重至10mg/kg体重间，优选在约0.01μg/kg体重至1mg/kg体重间，更优选在0.1μg/kg至10μg/kg体重间变化。对于应用此处公开的化合物的所有方法，每日经口剂量方案将优选约0.01μg至约80mg/kg总体重。每日胃肠外剂量方案为约0.01μg至约80mg/kg总体重。每日局部剂量方案将优选从0.01μg至150mg，每天给药一次至四次，优选两次或三次。每日吸入剂量方案将优选每日从约0.01μg/kg至约1mg/kg。本领域技术人员还将认识到，化合物或其可药用盐的个体剂量的最佳量和间隔将由所治疗病情的属性或程度、给药的形式、途径和位点、以及所治疗的具体患者所决定，且这样的最佳值可通过常规技术测定。本领域技术人员还将理解的是最佳的疗程，即在确定的天数内每天给予的化合物或其可药用盐的药剂数目，可由本领域技术人员使用常规的疗程测定测试而确定。
此外，由于“有效水平”用作优选的剂量端点，实际的剂量和给药计划可以依据个体在药物动力学、药物分布和代谢中的差异而变化。“有效水平”可被定义为例如患者体内所需的与本发明的一种或多种化合物浓度相应的血液或组织水平。
格瑞林的制备方法
可以使用本领域熟知的技术制备格瑞林样化合物。例如，格瑞林样化合物的多肽区域可以经化学或生物化学的方法合成和修饰。本领域熟知用于化学合成多肽的方法。(参见例如，Vincent在Peptide and Protein DrugDelivery，New York，N.Y.，Dekker，1990中的描述。)包含将核酸引入细胞并表达核酸的生物化学合成技术的例子提供于Ausubel，Current Protocols inMolecular Biology，John Wiley，1987-1998，和Sambrook等，in MolecularCloning，A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989。
包含本发明化合物的药物组合物可以经常规的技术制备，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy 1995，E.W.Martin主编，Mack Publishing Company，第19版，Easton，Pa中所描述的。该组合物可以是常规的形式例如胶囊、片剂、气溶胶、溶液、悬浮液或局部应用。
实施例
下面的实施例举例说明了本发明，而非对其限制。
实施例1
Lehto-Axtelius D.等在Osteopenia after gastrectomy，fundectomy orantrectomy：an experimental study in the rat，Regul.Pept.78(1998)，41-50中描述了进行全胃切除术并随后在食管和十二指肠之间进行端-端吻合。该胃切除术在贲门水平伴随着全部的迷走神经切断术。通过打开腹部并切除胃进行了类似的手术(sham operation)。
在类似的胃切除大鼠中，格瑞林水平为2.06±0.22ng/ml，然而在胃切除术后它们低于测验的最低可检测的水平即0.25ng/ml。胃切除术四周后，动物通过管饲法每天一次给予水或格瑞林类似物MK-0677(4mg/kg/天)。
试验全过程的每天都测量食物摄入量和体重。使用格瑞林治疗的动物显示了对食物的需求增加。治疗两周后，对动物进行断头、收集血液和组织并快速冷冻。剥离性腺、肠系膜的和腹膜后的脂肪垫并称重，然后计算总重。使用购自所述Phoenix Pharmaceuticals(Dornonville de Ia Cour，supra)的试剂盒来测量血清中的格瑞林。
使用GH促分泌素MK677治疗胃切除大鼠，令人惊奇地增加了体重。此外，该治疗导致剥离的脂肪垫重量增加，以及下丘脑神经肽Y(NPY)mRNA的水平增加。
实施例2
竞争性结合测试
转染COS-7的细胞在转染一天后，以密度为每孔1×105个细胞被转移至培养板中，为得到5-8％放射性配体的结合。转染两天后，在4□C使用25pM的125I-格瑞林进行3小时的竞争性结合试验(Amersham，Little Chalfont，UK)。结合测试是在0.5ml的50mM Hepes缓冲液，pH7.4，补充有1mM CaCl2，5mM MgCl2，和0.1％(w/v)小牛血清白蛋白，40□g/ml杆菌肽中进行的。在1□M未标记的格瑞林存在下的结合中检测到了非特异性结合。在0.5ml冰冷的缓冲液中洗涤细胞两次，并加入0.5-1ml溶胞缓冲液(8M脲，2％NP4O于3M乙酸中)，计算结合放射性。重复进行该测定。最初的试验显示在这些条件下与放射性配体达到稳态结合。
实施例3
受体激活测试
一种简单测量格瑞林样化合物激活格瑞林受体能力的方法是测量其EC50，即化合物能够激活受体信号直至该化合物最大效果的一半时的剂量。格瑞林受体可以在初级细胞培养物例如垂体细胞上内源性表达，或者在转染格瑞林受体的细胞上异源性表达。根据测试的类型可以使用整体细胞测试或使用所有由这些细胞类型所制备的膜测试。
由于格瑞林受体通常被认为与Gq信号通路初步偶联，可以使用监测Gq/G11信号通路活性的任何适宜的测试，例如：
1)测试法，其为了提高信噪比例如通过检测与例如抗-G□q或-11抗体沉淀结合的GTPgS结合进行检测Gq/G11的激活。此测试还可以检测与其它G-蛋白而不是Gq/11的偶联。
2)例如通过测量磷酸肌醇酯的累积，测试磷脂酶C(PLC)的活性的测试法，所述磷脂酶C是一种在通路中最初的下游效应分子，所述磷酸肌醇酯是PLC的一种产物。
3)在信号级联中更下游的是细胞内贮存的活化钙
4)还可测量更加下游的信号分子如不同类的MAP激酶(p38，iun，等)的活性、NF-K-B转位和CRE驱动基因翻译。
5)替换地，还可向活化格瑞林受体上结合荧光标记抑制蛋白。
实施例4
格瑞林样化合物的合成方法
氨基酸衍生物和合成试剂可以由商业途径获得。主要通过使用由Perkin Elmer生产的Applied Biosystem 433A合成子进行肽链的延伸，通过Boc或Fmoc方法构建保护的肽衍生树脂。通过Boc法获得的保护的肽树脂使用无水氢氟酸(HF)在对甲酚存在下脱保护从而释放肽，然后进行纯化。通过Fmoc法获得的保护的肽树脂使用三氟乙酸(TFA)或包含各种净化剂的稀释TFA脱保护，并纯化所释放的肽。在反相HPLC的C4或C18柱上进行纯化。纯化产品的纯度通过反相HPLC确定，其结构通过氨基酸组合物分析和质谱确定。
本发明的肽通过常规的肽合成方法生产。具体地，下面例示了酰化或烷基化肽的合成。此外，来源于人的格瑞林(此后缩写为h格瑞林)或来源于大鼠的格瑞林(此后缩写为r格瑞林)与胰岛素或糜蛋白酶或与两种酶相继反应以获得下面的格瑞林片断：19.格瑞林(16-18)，20.h格瑞林(1-15)，21.r格瑞林(1-15)，23h格瑞林(1-11)，24.r格瑞林(1-11)，25.格瑞林(1-10)，26.格瑞林(1-9)，27.格瑞林(1-8)和30.格瑞林(1-4)。然后，通过分析HPLC分离这些片断并测量它们的活性。41.[N-乙酰基]-格瑞林(1-10)通过使用N-乙酰基丁二酰亚胺处理格瑞林(1-10)的常规方式而制备。人和大鼠格瑞林还可以通过使用天然材料而制备。
序列表
<210>1
<211>28
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>3位氨基酸经脂肪酸修饰
<400>1
Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys
1           5           10          15
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
        20          25
<210>2
<211>27
<212>PRT
<213>人
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>3位氨基酸经脂肪酸修饰
<400>2
Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Arg Lys Glu
1           5           10          15
Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
        20          25
<210>3
<211>28
<212>PRT
<213>黑鼠
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>3位氨基酸经脂肪酸修饰
<400>3
Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Lys Ala Gln Gln Arg Lys
1           5           10          15
Glu Ser Lys Lys Pro Pro Ala Lys Leu Gln Pro Arg
        20          25

Claims (37)

1.格瑞林或其类似物在制备具有下列一种或多种应用的药物中的用途，所述应用为在胃切除个体中，
治疗和/或预防体重和身体脂肪损失，和/或
预防或治疗恶病质，和/或
刺激食欲和/或
刺激食物摄入和/或
刺激体重增加和/或
增加身体脂肪重量。
2.根据权利要求1的用途，其中格瑞林或其类似物是格瑞林样化合物或其可药用盐
其中格瑞林样化合物包含式I定义的结构
Z1-(X1)m-(X2)-(X3)n-Z2，其中
Z1是任选存在的保护基
各X1独立选自氨基酸，其中所述氨基酸选自天然存在和合成的氨基酸，
X2为任何选自天然存在和合成的氨基酸，所述氨基酸被大疏水基团，优选酰基或脂肪酸所修饰，
各X3独立选自氨基酸，其中所述氨基酸选自天然存在和合成的氨基酸，
其中一个或多个X1和X3任选地被大疏水基团，优选酰基或脂肪酸所修饰，
Z2为任选存在的保护基，
m是1-10范围内的整数
n是0或是1-35范围内的整数。
3.根据前述任一项权利要求的用途，其中m是选自1-9范围内的整数，如选自1-8，如选自1-7，如选自1-6，如选自1-5，如选自1-4，如选自1-3，如选自1-2，如2。
4.根据前述任一项权利要求的用途，其中X2选自修饰的丝氨酸、修饰的半胱氨酸和修饰的赖氨酸，如其中X2为修饰的丝氨酸。
5.根据前述任一项权利要求的用途，其中格瑞林样化合物选自：
式II  Z1-Gly-(X1)m-1-(X2)-(X3)n-Z2，
式III  Z1-Gly-Ser-(X2)-(X3)n-Z2，以及
式IV  Z1-Gly-(X2)-(X3)n-Z2。
6.根据权利要求5的用途，其中格瑞林样化合物为式III。
7.根据前述任一项权利要求的用途，其中(X3)n包含选自一种或多种如下所示的序列：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His
Phe Leu Ser Pro Glu
Phe Leu Ser Pro
Phe Leu Ser
Phe Leu
Phe
8.根据前述任一项权利要求的用途，其中n选自1-25范围内的整数，如选自1-24，如选自1-15，如选自1-10，如选自10-25，如选自10-24，如选自15-25，如选自15-24。
9.根据前述任一项权利要求的用途，其中(X3)n为选自一种或多种如下所示的序列：
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys Leu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Ala
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys Pro
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu Ser
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys Glu
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg Lys
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg Val
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln Arg
Phe Leu Ser Pro Glu His Gln
Phe Leu Ser Pro Glu His
Phe Leu Ser Pro Glu
Phe Leu Ser Pro
Phe Leu Ser
Phe Leu
Phe
10.根据前述任一项权利要求的用途，其中酰基选自C1-C35酰基，如C1-C20酰基，如C1-C15酰基，如C6-C15酰基，如C6-C12酰基，如C8-C12酰基。
11.根据前述任一项权利要求的用途，其中酰基选自C7酰基、C8酰基、C9酰基、C10酰基、C11酰基和C12酰基。
12.根据前述任一项权利要求的用途，其中酰基选自C8酰基和C10酰基。
13.根据前述任一项权利要求的用途，其中酰基选自C7酰基、C9酰基和C11酰基，如选自C9酰基和C11酰基。
14.根据前述任一项权利要求的用途，其中药物包含格瑞林样化合物或其盐的溶液。
15.根据权利要求14的用途，其中溶剂是盐水。
16.根据前述任一项权利要求的用途，其中的治疗刺激食欲并预防个体营养不良。
17.根据权利要求1-15一项或多项的用途，其中的治疗包含改善个体的健康感觉和生活质量。
18.根据前述任一项权利要求的用途与另一种胃衍生因子相联合。
19.根据权利要求18的用途，其中胃衍生因子选自胰抑素、胃泌素、组胺、抵抗素、前列腺素如前列腺素E2、内因子。
20.根据前述任一项权利要求的用途与另一种体重和/或身体脂肪诱导因子相联合。
21.根据权利要求20的用途，其中所述因子选自：黑色素浓缩激素(MCH)、MCH受体激动剂尤其是MCH受体1激动剂、神经肽Y(NPY)、NPY受体1激动剂、NPY受体5激动剂、以及包含肽YY(PYY)和PYY(3-36)的NPY受体2拮抗剂、α-促黑色素细胞激素(α-MSH、α-黑皮质素)、黑皮质素-3受体(MC3R)拮抗剂、黑皮质素-4受体(MC4R)拮抗剂、与刺鼠相关的肽(Agrp)、Agrp-激动剂、可卡因-和安非他明-调节转录(CART)的拮抗剂、阿立新受体1和受体2激动剂、生长激素(GH)、GH受体激动剂、胰岛素样生长因子-I(IGF-1)和IGF-1受体1激动剂。
22.根据前述任一项权利要求的用途，其中药物适于经口、经鼻、透皮、经肺部或胃肠外给药。
23.根据权利要求1-22的用途，其中药物是用于经口给药的制剂。
24.根据权利要求1-22的用途，其中药物是用于经鼻给药的制剂。
25.根据权利要求1-22的用途，其中药物是用于透皮给药的制剂。
26.根据权利要求1-22的用途，其中药物是用于经肺部给药的制剂。
27.根据权利要求1-22的用途，其中药物是用于胃肠外给药的制剂。
28.根据前述任一项权利要求的用途，其中活性化合物按照每天约0.01μg/kg体重至10mg/kg体重，优选0.1至10μg/kg体重进行给予。
29.根据前述任一项权利要求的用途，其中药物以相当于10ng至10mg格瑞林每千克体重的浓度给予。
30.根据前述任一项权利要求的用途，其中药物在进食之前或期间给予。
31.根据前述任一项权利要求的用途，其中药物每天给予一次至三次，各次给药在进食期间或最多进食90分钟内，如最多进食85分钟内、如最多进食80分钟内、如最多进食75分钟内，如最多进食70分钟内、如最多进食65分钟内、如最多进食60分钟内、如最多进食55分钟内、如最多进食50分钟内、如进食前最多45分钟内，如进食前最多40分钟内、如进食前最多35分钟内、如进食前最多30分钟内、如进食前最多25分钟内，如进食前最多20分钟内、如进食前最多15分钟内、如进食前最多10分钟内、如进食前最多5分钟内。
32.根据前述权利要求的用途，其中药物每天给予3次。
33.组合物，其包含用于治疗胃切除个体体重和身体脂肪损失的格瑞林或其类似物。
34.根据权利要求33的组合物，其用于增加胃切除个体的食欲、健康感觉和生活质量、并降低营养不良。
35.根据权利要求33或34的组合物，其包含可药用载体或稀释剂。
36.根据权利要求33至36任一项的组合物，其在单元剂型中包含约5至约250mg的格瑞林或其类似物或其可药用盐。
37.根据权利要求33至36任一项的组合物，其中格瑞林或其类似物包含一种或多种权利要求2-31的特征。
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