CN1596120A - 经鼻吸收用药物组合物 - Google Patents

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金井靖
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Abstract

本发明提供了经鼻吸收用药物组合物，当在鼻腔内给药(经鼻给药)时，包含在所述组合物中的生物活性多肽具有优良的吸收性。更具体来说，经鼻吸收用药物组合物，其中通过使用添加剂，使得等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽被均匀地分散或包埋在不溶于水或难溶于水的多价金属化合物载体上，例如二价或更高价金属化合物，例如铝化合物、钙化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物或锌化合物，由此多肽可被分散或包埋在载体表面内。

Description

经鼻吸收用药物组合物
发明领域
本发明涉及经鼻吸收用药物组合物，更具体来说，本发明涉及含有等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽作为活性组分和能提高该肽的生物利用度的添加剂的经鼻吸收用药物组合物。
发明背景
生物活性多肽是表现出各种特定药理活性的高分子量化合物，是已经在医药领域中出于各种目的而使用的具有显著实用价值的化合物。例如，胰高血糖素样肽I(下文中称为GLP-1)—源自胰高血糖素前体(前胰高血糖素)的一种肽类激素是已知的(Bell等人，Nature，304，368，1983)。已经在哺乳动物中鉴定出来的前胰高血糖素是一种由160个氨基酸组成的前体蛋白，是在胰岛即格罕氏岛(Langerhans岛)A-细胞和肠L-细胞中产生的。在胰腺中，加工酶将前胰高血糖素加工成胰高血糖素和主要的前胰高血糖素片段，而在肠中，前胰高血糖素被以不同方式加工以生成肠高血糖素(glicentin)、GLP-1和胰高血糖素样肽-2(下文中称为GLP-2)(Mojsovr等人，J.Biol.Chem.，261，11880，1986)。
由前胰高血糖素的氨基酸72-108形成的肽(相当于GLP-1)表现出促进胰岛素分泌的活性。在已知的胰岛素分泌促进剂当中，GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)NH2是最有效的胰岛素分泌促进剂，GLP-1(7-37)是通过除去GLP-1的前6个N-末端氨基酸而形成的，GLP-1(7-36)NH2是通过GLP-1(7-37)在36位的酰胺化而形成的(Majsov等人，J.Clin.Invest.， 79，616，1987)。它们还具有抑制胰高血糖素分泌的活性。据表明，GLP-1以GLP-1(7-36)NH2的形式从肠L-细胞分泌到血液循环中(Gutniak等人，N.Engl.J.Med.， 326，1316，1993)。
作为对于食物消化刺激的反应，GLP-1(7-36)NH2立即从肠L-细胞分泌出来，并作用于胰腺以促进胰岛素分泌。同时，其降低胰高血糖素分泌，提高胰岛素分泌细胞中的mRNA表达，降低肝脏中的糖异生，并抑制胃肠道的活动。这意味着GLP-1，包括GLP-1(7-36)NH2可作为根据人体中能量代谢的需要来调节的肠降血糖素(胰岛素分泌刺激剂)起着至关重要的作用。
由于具有上述生物活性，这些肽可用于治疗糖尿病。具体来说，GLP-1(7-36)NH2可在进餐之前给药，以抑制餐后血糖水平的增高，这样其可用作II型糖尿病患者的有效治疗剂。磺酰脲类药物具有促进胰岛素分泌的类似活性，但是它们会带来血糖水平过低的危险性，因为无论血糖水平如何，这类药物都表现出其活性。当长期施用时，该药物还会引起产生胰岛素的细胞变得没有活力。与之不同，因为GLP-1(7-36)NH2促进胰岛素分泌的活性受反映血糖浓度的反馈机制的调控，GLP-1(7-36)NH2很少导致过低的血糖水平。此外，GLP-1(7-36)NH2刺激产生胰岛素的细胞。因此，GLP-1(7-36)NH2与目前在临床上用作糖尿病药物的磺酰脲类药物有着显著不同。
GLP-1(7-36)NH2的各种活性，包括抑制肝脏中的糖异生、激活产生胰岛素的细胞、促进肌肉摄取糖、抑制胃肠道活动和经由中枢神经系统抑制食欲给人们带来了这样的期望，即除了让餐后血糖水平恢复正常以外，长期施用GLP-1(7-36)NH2可使得完整的全身葡萄糖代谢恢复正常和激活这种代谢，和抑制肥胖—糖尿病的重要因素之一。
具有和GLP-1(7-36)NH2类似的肠降血糖素活性(即刺激胰岛素分泌)的另一种肽是exendin-4，它是从毒蜥(一种爬行动物)中分离出来的，并且已确定了其结构。在血浆中，该肽比GLP-1(7-36)NH2更不容易发生降解，因此能够长时间保持其促进胰岛素分泌的活性。与GLP-1(7-36)NH2一样，已知exendin-4能诱导β-细胞分化/新生。
因为GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)NH2的8位被活体内存在的二肽肽酶IV(DPP-IV)裂解，所以希望其中8位的Ala被不易于裂解的氨基酸例如Val取代的衍生物，即[Val8]-GLP-1(7-37)，和其中GLP-1被脂肪酸修饰以通过控制溶解速度来延长表观血浆半衰期的衍生物，即[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)具有相同作用。另一方面，最近的研究表明，在8位裂解的GLP-1(9-37)具有相同的降低血糖水平的作用(Deacon等人，Am.J.Physiol.Endocrinol.Matb.282，873-879，2002)。由于该发现，需要查证将GLP-1(7-36)NH2在8位的氨基酸残基转化和用脂肪酸修饰GLP-1(7-36)NH2以延长表观血浆半衰期的优点。
胃抑制多肽(下文中称为GIP)是一种葡萄糖依赖性刺激胰岛素分泌的肽，它与GLP-1和exendin-4不同，因为除了促进胰岛素分泌的活性以外，它还可以促进胰高血糖素分泌。
在这些肽类肠降血糖素当中，GLP-1(7-36)NH2具有哺乳动物中共有的氨基酸序列，并且被视为理想的抗糖尿病药物。然而，GLP-1(7-36)NH2由于其肽的性质，难以从胃肠道吸收。这严重妨碍了肽作为糖尿病药物的发展。
如已知的那样，除了口服给药，肽可通过皮下注射给药。然而，长期皮下注射必须在医师的观察下进行操作，由于去医院看病的负担和在注射部位的疼痛，注射不是长期施用糖尿病治疗药物的合适途径。虽然在每次餐后给药后可有效调节高血糖水平，但是为了施用肽而每天皮下注射3次显然不现实。另外，不仅施用给I型糖尿病患者，而且也施用给II型糖尿病患者的自我控制型胰岛素注射似乎不能与自我控制型GLP-1注射制剂联合使用。
为了解决上述问题，已经进行了很多尝试来让GLP-1(7-36)NH2以贴剂制剂经由口腔粘膜吸收(Gutniak等人，Diabetes care， 20，1874，1997)。然而，该特定形式的给药涉及使用吸收促进剂，例如牛磺胆酸钠，牛磺胆酸钠是一种胆汁酸，并且具有高度刺激性。结果是，刺激性是不可避免的，并会使粘膜丧失，因而该给药途径不适合长期给药。
因此，迄今为止，尚没有安全、可实现高生物利用度、适于频繁给药的施用GLP-1(7-36)NH2的实用非注射的技术。人们渴望开发出这样的技术。
与低分子量化合物不同，生物活性多肽不能通过除注射以外的任何给药途径有效地给药。主要原因是生物活性多肽会被胃、小肠和大肠中存在的消化酶或者这些器官、鼻腔和肺的吸收上皮消化吸收，并且由于其较大的分子量，多肽不能经由典型的运输途径运送。出于这些原因，最近已经提出了用于鼻吸收的鼻用肽制剂来作为可使用的施用肽的非注射技术。典型地，这样的鼻用肽制剂是通过在吸收促进剂存在下用喷雾器将肽溶液喷雾到鼻腔内来进行给药。该方法的一个问题是，具有在酸性或中性范围内的等电点(在下文中称为pI)的多种已知的生物活性多肽，一些肽，包括GLP-1(7-36)NH2在酸性或中性溶液中往往变得不稳定。
例如，本发明者们所做的观察已揭示，当经鼻施用给大鼠和其它动物时，虽然GLP-1(7-36)NH2的溶液被以一定程度吸收，但是当把该溶液贮存几十小时时，该肽变得不溶解(参见下文中的参考实施例)。因此，溶液制剂不适用于药物组合物，即使溶液是在每次使用该制剂时才将肽溶解的类型时也是如此。
同样，胰高血糖素和胰岛素具有在酸性或中性pH范围内的等电点，并且已知在酸性或中性溶液中将变得不溶解或结晶。许多这样的肽已知都具有在酸性或中性pH范围内的等电点，并因此在酸性或中性溶液中将变得不溶解或结晶。因此，基本上不能以酸性或中性溶液制剂的形式经鼻施用这些肽。
另一方面，预计酸性生物活性多肽在碱性溶剂是高度溶解的。然而，当把酸性生物活性多肽暴露于碱性溶液时，酸性生物活性多肽不仅变得容易降解例如水解—也可以在酸性环境中发生，而且往往会发生外消旋化。结果使得其化学稳定性下降。酸性和碱性生物活性多肽都会发生这些副反应。已知例如，酪蛋白(pI＝约4.6)—一种碱性生物活性多肽在碱性溶液中变得不稳定，这是因为其氨基酸残基天冬氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和丙氨酸发生外消旋化(Friedman等人，J.FoodSci.， 47，760-764，1982)。有机酸包括多种物质，包括各自是生物化合物的乙酸和丁酸，和长链羧酸例如都是营养素的辛酸和癸酸。很多这些有机酸可在药物组合物中用作添加剂。另一方面，已知多种有机碱例如血清素和多巴胺表现出药理活性。碱金属例如钠在很多情况下不适于用作药物组合物中的添加剂，因为它们会使组合物的pH调节很困难，并且往往会与酸性肽形成盐，从而影响肽的性质。出于这些原因，考虑到这些添加组分的化学稳定性和选择性，不优选提供碱性溶液形式的酸性生物活性多肽。
如上所述，不优选提供酸性或中性溶液制剂以及碱性溶液制剂形式的酸性生物活性多肽。因此，酸性生物活性多肽不适于在经鼻给药的溶液制剂中使用。
对于某些类型的生物活性多肽例如胰岛素、降钙素、甲状旁腺激素(PTH)、人生长激素(HGH)和下丘脑激素(LH-RH)，已经有人提出了用于鼻吸收的粉末制剂来代替溶液型鼻用制剂。迄今为止，为了生物活性多肽的经鼻给药，已经试验了很多化合物作为这些经鼻给药用粉末制剂的载体的可能性，并且已提出了使用几种不同载体的不同粉末组合物。
通过研究发现，不溶于水或者在水中的溶解度很小，但是在酸性条件下可溶于水的物质可用作经鼻施用生物活性多肽的粉末制剂的高度有效的载体。例如，已经提出了使用多价金属化合物例如羟磷灰石和碳酸钙(日本专利特开平8-27031)，能够修复或保护粘膜，特别是胃粘膜的物质(日本专利特开平9-255586)或谷粉(日本专利特开平2000-239187)作为载体的经鼻给药用药物组合物。
然而，当对动物经鼻给药时，通过将GLP-1(7-36)NH2分散和吸附在载体例如多价金属化合物上而制得的一种粉末制剂表现出的GLP-1(7-36)NH2生物利用度，在狗中约为4％，在猴子中为1％或以下。因此，该制剂的鼻吸收不令人满意。
等电点在酸性或中性pH范围内的生物活性多肽例如GLP-1(7-36)NH2在酸性或中性pH范围内具有低的溶解度，并且即使溶解在溶液中时，也往往会发生聚集。这些多肽不仅当以溶液形式经鼻给药时不能达到足够的生物利用度，而且即使是以粉末制剂形式经鼻给药也不能达到足够的生物利用度。因此，施用这些肽的有效非注射途径仍有待建立。
WO01/52894 A2中公开了由环肽和多价金属组合物载体组成的经鼻给药用组合物。该专利还公开了可加入吸收促进剂例如米粉和淀粉，并且这些促进剂的粒径应当优选为250μm或更小，更优选为20-180μm。虽然如此，其中没有关于本发明方法的描述，即通过加入粒径与等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽的载体大约相同粒径的促进剂来提高生物利用度的方法。
因此，本发明的目的是提供能够经鼻施用等电点在酸性或中性pH范围内的生物活性多肽的药物组合物。当经口或经由其它非注射给药途径给药时，这样的多肽具有不良生物利用度，在酸性或中性pH范围内具有低的溶解度，并且即使溶解在溶液中时，也往往会发生聚集。本发明药物组合物是安全的，能够达到高的生物利用度，同时不引起任何刺激性。
为了找到实现该目的的方法，本发明者们试验了可能的添加剂，以确定它们作为用于经鼻给药肽的组合物成分的可能性。首先研究了淀粉来确定其是否能够作为添加剂来有助于稳定肽。
淀粉—谷物中富含的一种营养物是可安全地用作经鼻吸收用组合物的添加剂的物质。淀粉由直链淀粉和支链淀粉组成，直链淀粉由通过α-1，4键连接以形成直链的葡萄糖单元构成，而支链淀粉包括α-1，6键，因而是支链的。
使用多价金属化合物作为载体，与作为添加剂的几种不同类型的含有不同比例的直链淀粉和支链淀粉的淀粉联合用于制备经鼻吸收用药物组合物。测试了每种药物组合物的经鼻可吸收度，还测试了作为药物组合物添加剂的淀粉的粒径对鼻吸收增强的影响。
结果本发明者们发现，在鼻腔中施用下述鼻用粉末组合物可实现改善的鼻吸收，并因此可以提供有效的临床治疗。所述组合物是这样制得的：借助于添加剂例如米粉(Domyo-ji粉)、玉米淀粉、马铃薯淀粉以及它们的预胶化或部分预胶化淀粉，所述淀粉各自含有特定比例的支链淀粉和直链淀粉，将酸性生物活性多肽例如GLP-1(7-36)NH2均匀地分散和包埋在粉末或晶状多价金属化合物载体的表面上，所述多价金属化合物载体不溶于水或者在水中的溶解度很小，并且平均粒径为100μm或更小，例如二价或更高价金属化合物，例如钙化合物。
本发明者们还发现，对于酸性肽例如GLP-1(7-36)NH2，当使用水不溶性淀粉作为添加剂和平均粒径为100μm或更小的多价金属化合物例如碳酸钙作为载体时，粒径小于载体的水不溶性淀粉表现出显著的吸收促进效果。基于这些发现，本发明得以完成。
本发明公开
因此，本发明提供了经鼻吸收用药物组合物，其中包含等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和用于将多肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
本发明还提供了经鼻吸收用药物组合物，其中包含等电点为7或低于7，即在中性或酸性pH范围内的生物活性多肽，多价金属化合物载体，和用于将多肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
本发明经鼻吸收用药物组合物的一个具体实施方案包含有效剂量的等电点在中性或酸性pH范围内的生物活性多肽和平均粒径为1μm-20μm的添加剂，这样多肽均匀分散和包埋在平均粒径为100μm或更小的粉末或晶状多价金属化合物载体的表面上。
本发明经鼻吸收用药物组合物的另一个具体实施方案含有肽肠降血糖素，多价金属化合物载体，更具体来说，本发明涉及组合物，其中包含不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和平均粒径为100μm或更小的细粉末或晶体形式的多价金属化合物，以及用于将肽肠降血糖素分散和包埋在所述载体表面上的平均粒径为1μm-20μm的添加剂。
当制剂是通过本发明方法使用具有预胶化淀粉的淀粉组合物或包括预胶化淀粉的组分制得时，添加剂的平均粒径是在载体表面上的不溶于水或者在水中的溶解度很小的淀粉组合物的平均粒径。
附图简述
附图1表示的是，在实施例2中，皮下给药后，GLP-1(7-36)NH2血浆浓度的改变。
附图2表示的是，在实施例2中，经鼻施用不含添加剂的组合物后，GLP-1(7-36)NH2血浆浓度随时间的变化过程。
附图3表示的是，在实施例2中，经鼻施用不含添加剂的使用硫糖铝作为载体的组合物后，GLP-1(7-36)NH2血浆浓度随时间的变化过程。
附图4表示的是，在实施例2中，经鼻施用含有添加剂的组合物后，GLP-1(7-36)NH2血浆浓度随时间的变化过程。
实施本发明的最佳方式
如上所述，本发明提供了经鼻吸收用药物组合物，所述组合物具有高的生物利用度，能够经鼻施用等电点为7或低于7，在酸性或中性pH范围内表现出低溶解度，并且即使溶解在溶液中时，也往往会发生聚集的生物活性多肽。这样的多肽具有不良生物利用度，并且不适于经口给药或经由其它非注射途径给药。在一个具体优选的实施方案中，本发明提供了经鼻吸收用药物组合物，所述组合物含有GLP-1衍生物例如GLP-1、GLP-1酰胺、GLP-1(7-36)NH2、GLP-1(9-36)NH2、GLP-1(9-37)、GLP-1(7-37)、[Val8]-GLP-1(7-36)NH2、[Val8]-GLP-1(7-37)、[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)和GLP-2、exendin-3、extendin-4、胰高血糖素、胃抑制肽(GIP)或胰岛素。
本发明经鼻吸收用药物组合物的高生物利用度是由于借助于添加剂，生物活性多肽以稳定且均匀的方式分散和包埋在载体表面上所致。
当使用β-预胶化或部分预胶化水不溶性或在水中的溶解度很小的淀粉作为添加剂时，使用平均粒径很小的稻米淀粉和玉米淀粉可增加表面积，并且可以改善溶出，由此可提高吸收性。因此，在本发明中，优选使用平均粒径为1μm-20μm的添加剂来改善吸收性。
因此，在本发明中使用的添加剂可以是能够使得生物活性多肽以稳定且均匀的方式分散和包埋在载体表面上的任何添加剂，例如，含有支链淀粉和直链淀粉—二者可以是独立存在的或者以特定比例存在—的淀粉可用作这样的添加剂。得自稻米、玉米等的淀粉通常被分为“非粘性稻米”-型淀粉，其中含有比例为约7∶3-约8∶2的支链淀粉和直链淀粉，和“粘性稻米”-型淀粉，其中基本上只由支链淀粉组成。具体来说，可用于本发明的添加剂的实例包括米粉、稻米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉，β-淀粉例如稻米β-淀粉(非粘性稻米型)、稻米β-淀粉(粘性稻米型)、玉米β-淀粉(非粘性稻米型)、玉米β-淀粉(粘性稻米型)和马铃薯β-淀粉(非粘性稻米型)；预胶化稻米淀粉(非粘性稻米型)、预胶化稻米淀粉(粘性稻米型)、预胶化玉米淀粉(非粘性稻米型)、预胶化玉米淀粉(粘性稻米型)、预胶化马铃薯淀粉(非粘性稻米型)、预胶化小麦淀粉(非粘性稻米型)以及它们的部分预胶化淀粉。
虽然在水中的溶解度很小，但是可以通过与水一起加热胶化来引起淀粉的晶体结构松动。完全胶化淀粉(预胶化淀粉或α-淀粉)和部分预胶化淀粉都可用作本发明的添加剂。
米粉是通过将稻米种子的胚乳研磨而制得的，稻米种子的胚乳是在将种子的外壳和胚芽剥去获得的。米粉富含淀粉，并通常用作食品和药品添加剂。在本发明中，相对于含有预胶化淀粉(α-淀粉)或部分预胶化淀粉的热处理的米粉，由β-淀粉组成的没有进行热处理的米粉是优选的，然而，也可以使用热处理的米粉。优选米粉的一个实例是含有预胶化稻米淀粉的Domyo-ji粉。此外，在本发明中不仅可以使用由β-淀粉组成的玉米淀粉，而且也可以使用部分预胶化或预胶化的淀粉(α-淀粉)玉米淀粉。
此外，可以使用这些淀粉的混合物作为本发明鼻用组合物的添加剂。
在本发明中也可以使用低聚糖、羧基乙烯基聚合物、聚维酮、羟丙基纤维素(HPC)、黄原胶、果胶、藻酸钠、阿拉伯胶粉末和明胶作为添加剂。
在本发明经鼻吸收用组合物中使用的生物活性多肽是等电点(pI)为7或低于7的那些。这样的多肽在酸性或中性pH范围内具有低的溶解度，并且即使溶解在溶液中时，也往往会发生聚集。
下面列出优选的生物活性多肽的实例及其各自的等电点：
GLP-1(pI＝5.05)；GLP-1酰胺(pI＝5.47)；GLP-1(7-36)NH2(pI＝6.76)；GLP-1(7-37)(pI＝5.53)；GLP-1(9-36)NH2(pI＝4.68)；GLP-1(9-37)(pI＝4.87)；[Val8]-GLP-1(7-36)NH2(pI＝6.76)；[Val8]-GLP-1(7-37)NH2(pI＝5.53)；[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)(pI＝4.57)；GLP-2(pI＝4.45)；exendin-3(pI＝4.96)；exendin-4(pI＝4.96；胰高血糖素(pI＝6.75)；和胃抑制肽(GIP)(pI＝6.92)；胰岛素(pI＝5.39)。
还可以使用可经鼻给药的其它生物活性多肽，其实例如下(在下面，pI是指等电点，MW是指分子量，并且除了exendin-3和exendin-4以外，所有化合物都衍生自人)：
降钙素(pI：6.72，MW：3420.88)、katacalcin(pI：5.26，MW：2436.62)、胆囊收缩素-12(pI：3.93，MW：1535.71)、胆囊收缩素-8(pI：3.56，MW：1064.20)、促肾上腺皮质素-促脂解素前体(pI：5.22，MW：8469.32)、促肾上腺皮质素样中间肽(pI：3.91，MW：2309.51)、促脂解素-β(pI：6.17，MW：9805.94)、促脂解素-γ(pI：4.66，MW：6074.57)、促黑素-β(pI：5.57，MW：2204.40)、促肾上腺皮质素释放素(pI：5.09，MW：4758.49)、内皮素-1(pI：4.54，MW：2495.94)、内皮素-2(pI：4.54，MW：2550.9)，内皮素-3(pI：5.38，MW：2647.09)、甘丙肽(galanin)信使相关肽(pI：4.49，MW：6671.52)、胃泌素-71(pI：5.17，MW：8066.88)、胃泌素-34(pI：4.25，MW：3867.26)、胃泌素-17(pI：3.40，MW：2116.24)、胃抑制多肽(pI：6.92，MW：4983.59)、肠高血糖素相关多肽(pI：4.13，MW：3384.50)、胰高血糖素(pI：6.75，MW：3482.79)、胰高血糖素样肽-1(pI：5.05，MW：4167.02)、胰高血糖素样肽-1酰胺(pI：5.47，MW：4111.50)、胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺(pI：6.76，MW：3297.68)、胰高血糖素样肽-1(7-37)(pI：5.53，MW：3355.71)、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺(pI：6.76，MW：3326.74)、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-37)(pI：5.53，MW：3383.87)、[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)(pI＝4.57，MW：3751.2)、GLP-1(9-36)NH2(pI：4.68，MW：2933.2)、GLP-1(9-37)(pI：4.87，MW：3090.4)、胰高血糖素样肽-2(pI：4.21，MW：3922.35)、exendin-3(pI：4.96，MW：4202.63)、exendin-4(pI：4.96，MW：4186.60)、胰岛素β-链(pI：6.90，MW：3429.96)、胰岛素α-链(pI：3.79，MW：2383)、胰岛素(pI：5.39，MW：5807.6)、原促性腺素释放素-I(pI：5.63，MW：7893.83)、促性腺素释放素-II(pI：6.92，MW：1254.33)、促性腺素释放素相关肽-I(pI：4.67，MW：6370.11)、神经调节肽C(pI：6.92，MW：1121.28)、胰岛素样蛋白(INSL)A-链(pI：6.36，MW：3542.16)、促胃动素相关肽E(pI：4.72，MW：7433.47)、亮氨酸-脑啡肽(pI：5.52，MW：555.63)、蛋氨酸-脑啡肽(pI：5.52，MW：573.66)、leumorphin(pI：6.21，MW：3351.68)、催产素(pI：5.51，MW：1010.19)、后叶激素运载蛋白-1(pI：4.94，MW：9600.88)、后叶激素运载蛋白-2(pI：5.05，MW：9787.07)、copeptin(pI：4.11，MW：4021.46)、神经调节肽B(pI：6.74，MW：1133.29)、神经调节肽N(pI：5.52，MW：617.79)、神经肽Y(pI：6.76，MW：4272.72)、神经肽AF(pI：6.05，MW：1979.18)、PACAP相关肽(pI：5.38，MW：4800.32)、胰腺激素(pI：6.26，MW：4182.74)、pancreatic icosapeptide(pI：6.01，MW：2235.44)、肽YY(pI：6.77，MW：4310.80)、tyroliberin(pI：6.74，MW：380.40)、neuroquinine A(pI：6.74，MW：1134.32)、urocortin(pI：5.58，MW：4697.29)、硬骨鱼紧张肽II(pI：4.37，MW：1390.59)、肠肽(PHM-27)(pI：6.75，MW：2986.43)和肠肽-42(pI：6.76，MW：4552.18)。
除了上述生物活性多肽以外，本发明组合物可以是任何可经鼻给药的生物活性肽。
在本发明中，用于携带生物活性多肽和添加剂的载体包括不溶于水或在水中的溶解度很小的载体。例如，可使用选自下列化合物的具有二价或更高价的多价金属化合物：铝化合物、钙化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物或锌化合物。
具体来说，各类多价金属化合物的实例如下：
铝化合物包括干燥的氢氧化铝凝胶、氯化氢氧化铝、合成硅酸铝、轻质氧化铝、胶态水合硅酸铝、氢氧化镁铝、氢氧化铝、氢氧化铝凝胶、硫酸铝、二羟基乙酸铝、硬脂酸铝、天然硅酸铝、一硬脂酸铝和硫酸铝钾。
钙化合物包括磷灰石、羟磷灰石、碳酸钙、乙二胺四乙酸钙二钠、氯化钙、柠檬酸钙、甘油磷酸钙、葡糖酸钙、硅酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硬脂酸钙、三代磷酸钙、乳酸钙。泛酸钙、油酸钙、棕榈酸钙、D-泛酸钙、藻酸钙、无水磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、乙酸钙、糖酸钙、硫酸钙、磷酸一氢钙、对氨基水杨酸钙和生物钙化的化合物。
镁化合物包括L-天冬氨酸镁、氯化镁、葡糖酸镁、硅酸铝镁、硅酸镁、氧化镁、氢氧化镁、硬脂酸镁、碳酸镁、正硅酸铝镁、硫酸镁、硅酸钠镁和合成的硅酸钠镁。
硅化合物包括水合二氧化硅、轻质无水硅酸、合成水滑石、硅藻土和二氧化硅。铁化合物包括硫酸铁。锌化合物包括氯化锌、硬脂酸锌、氧化锌和硫酸锌。
这些多价金属化合物可单独使用或作为两种或更多种化合物的混合物使用。在多价金属化合物当中，钙化合物例如羟磷灰石、碳酸钙或乳酸钙可产生有利结果。
如果多价金属化合物的平均粒径太大，则化合物的喷雾性能变差，并且颗粒会迅速沉淀。反之，如果平均粒径太小，则颗粒难以停留在鼻腔中，而被吸入到支气管和肺中。因此，多价金属化合物的平均粒径优选为10-100μm，更优选为20-60μm，这样金属化合物可有效停留在鼻腔中。
虽然生物活性多肽在本发明组合物中的量(为了施用有效剂量的多肽)可根据多种因素而改变，包括所选活性物质的类型、欲治疗疾病的类型、所需给药次数、患者年龄、体重、症状严重程度、给药途径、所需效果以及其它因素，但是对于例如GLP-1(7-36)酰胺，本发明组合物可以以递送50-5000μg GLP-1(7-36)的剂量经鼻给药。
具体来说，将有效剂量的生物活性多肽与载体(例如多价金属化合物，包括钙化合物、铝化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物和锌化合物)和添加剂干混合。不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体以粉末或晶体形式提供，并且平均粒径为250μm或更小，优选为100μm或更小，更优选为20-60μm。或者，可将组分在水或有机溶剂例如乙醇中彼此湿混合，然后干燥。以这些方法，可将生物活性多肽均匀分散和包埋在载体表面上，以生成本发明经鼻吸收用药物组合物。
本发明经鼻吸收用药物组合物可适当地含有常用于药物制剂的载体，包括润滑剂、DPP-IV抑制剂、赋形剂、增稠剂、支持剂(sustainer)、稳定剂、抗氧化剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、着色剂、香料、矫味剂、悬浮剂、乳化剂、增溶剂、缓冲剂、等渗剂、表面活性剂、缓和剂以及各种其它功能组分。
润滑剂包括硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸和滑石粉。
稳定剂包括季铵盐例如苯扎氯铵、苄索氯铵、氯化十六烷基吡啶、聚氧化乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯例如聚氧化乙烯脱水山梨醇一油酸酯(吐温80)和脱水山梨醇脂肪酸酯例如脱水山梨醇一油酸酯(司盘80)。
当使用易于被二肽肽酶IV(DPP-IV)分解的酸性生物活性多肽例如GLP-1时，药物组合物中优选含有DPP-IV抑制剂。
DPP-IV抑制剂的实例包括diprotin A、杆菌肽和isoleucinethiazolidide。虽然DPP-IV抑制剂的加入量可随每种抑制剂的抑制活性而变，但是其加到药物组合物中的量可以是生物活性多肽或活性组分的重量的约1-10,000倍。
在本发明组合物的生产中，生物活性多肽的量优选为0.005-50％，更优选为0.01-20％，仍然更优选为0.1-10.0％，按制剂的重量为100％计。本发明组合物中载体的量可以为适于临床使用的任何量，例如为70-99.995％，优选为80-99.99％，更优选为90-99.9％，按制剂的重量为100％计。当载体的量在这些范围内时，可获得更好的鼻吸收。添加剂在本发明组合物中的量为例如0.005-50％，优选为0.01-20％，更优选为0.05％-10.0％，按制剂的重量为100％计。
本发明经鼻吸收用药物组合物可通过将不溶于水或者在水中的溶解度很小的多价金属化合物载体、生物活性多肽和添加剂混合来制得。在一个实例中，将作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与玉米淀粉充分混合。然后将该混合物置于容器中，向其中逐渐加入碳酸钙和少量纯化水以形成浆液。把浆液在干燥器中减压干燥过夜。将干燥的产物经由筛过滤，并且如果需要的话，混合入适当量的硬脂酸钙。即制得了本发明药物组合物。
本发明经鼻吸收用药物组合物还可以这样制得，首先用玉米淀粉与加入的碳酸钙和少量纯化水形成浆液。然后将该混合物置于容器中，向其中逐渐加入GLP-1(7-36)NH2粉末，用含有苯扎氯铵的水捏合。将该混合物过滤和干燥，混合入适当量的硬脂酸钙。这也制得了本发明药物组合物。
将适当量的所得经鼻吸收用药物组合物填充到由羟丙基甲基纤维素(HPMC)、淀粉或明胶制成的胶囊中，将胶囊适当包装，优选以密封方式包装。优选的密封包装是压泡包装与铝包装的组合。如果需要的话，可在铝袋中放置干燥剂。整个操作适合在60％或更低的湿度下进行。
实施例
下面通过实施例来进一步详细地描述本发明，这些实施例不是为了以任何方式限制本发明的范围。
除另有说明，实施例中使用下面描述的试验方法和设备。
在本说明书中使用主要缩写具有下列含义
Fmoc；      芴基甲氧基羰基
Boc；       叔丁氧基羰基
Trt；       三苯甲基(trytyl)
Pmc；       五甲基苯并二氢吡喃磺酰基
DCC；       二环己基碳二亚胺
HOBt；      N-羟基苯并三唑
TFA；       三氟乙酸
DIPEA；     二异丙基乙胺
DMF；     二甲基甲酰胺
NMP；     N-甲基吡咯烷酮
TFE；     三氟乙醇
1.通过HPLC分析肽
使用下列设备和条件来进行反相HPLC，以测定制剂中的肽含量和在稳定试验中进行肽分析。
仪器：          SHIMADZU LC-9A系统
柱：            YMC-PROTEIN-PR(4.6mmΦ×150mm)
柱温：          40℃
洗脱剂：        在0.1％三氟乙酸中的乙腈，其中乙腈的浓度在
                10分钟内线性改变
流速：          1ml/min
检测：          UV(214nm)
进样体积：      50μL
2.质谱分析
使用下列设备和条件来测定肽的质量。
仪器：          Finnigan MAT TSQMS
离子源：        ESI
离子检测模式：  正
喷雾电压：      4.5kV
毛细管温度：    250℃
流动相：        0.2％乙酸/甲醇混合物(1∶1)
流速：          0.2ml/分钟
扫描范围        m/z 550-850
3.分析氨基酸序列
使用下述设备来分析肽的氨基酸序列：
仪器：Perkin Elmer 477A序列分析仪
4.分析氨基酸组成
使用下述设备来分析肽的氨基酸组成：
仪器：Hitachi L-8500氨基酸分析仪
5.样本保存(稳定性试验)
将样本在下述恒温箱中于下述温度条件下贮存：
仪器：        Nagano Science LH-30-14
温度设定：    40±2℃，25±1℃
6.冷冻干燥
仪器：使用LABCONCO Corp.的FZ-6。
7.测定在血浆中的浓度
施用药物组合物后，通过放射免疫分析(RIA)或酶免疫分析(ELISA)测定GLP-1(7-36)NH2在血浆中的浓度。
7-1.放射免疫分析(RIA)
用GLP-1(7-36)NH2与牛甲状腺球蛋白的复合佐剂将兔子致敏，以获得抗血清(IgG组分)。将血浆与得自抗血清的抗-GLP-1(7-36)NH2-兔子抗体一起加到试管中，让该混合物在4℃静置过夜。然后加入125I-GLP-1(7-36)NH2，让该混合物在4℃静置过夜。然后加入抗-兔子IgG山羊血清，将该混合物离心，通过γ计数器测定沉淀的放射性(γ射线)。
7-2.酶免疫测定(ELISA)
将抗-GLP-1(7-36)NH2抗体(兔子多克隆抗体)固定到96-孔平板中。将血浆加到平板中，让反应进行2小时。洗涤平板后，加入用辣根过氧化物酶标记的抗-GLP-1(7-36)NH2抗体(鼠多克隆抗体)，让该反应在室温进行1小时。将平板洗涤后，加入四甲基联苯胺来进行反应。测定在450nm的吸收度。
8.计算生物活性多肽的等电点(pI)
使用ExPASy(Expert Protein Analysis System)MolecularBiology Server，Swiss Institute of Bioinformatics。为了计算C-末端酰胺，将序列中的一个Asp或Glu残基用Asn或Gln置换。
9.合成肽(肠降血糖素肽)
使用433A合成仪(ABI公司)，依据ABI标准的FastFmoc(0.25mmol)合成保留的肽树脂。
10.粒径分布(测定碳酸钙和淀粉的粒径)
仪器：使用激光衍射分析仪(RODOS SR)，SYMPATEC HELOS&RODOSCorp.。
参考实施例1：制备GLP-1(7-36)NH 2
制备用于表达由大肠杆菌β-半乳糖苷酶衍生物(β-gal 97)、长为25个氨基酸的连接物和GLP-1(7-37)组成的融和蛋白的表达质粒pG97ompPR(国际专利出版物WO 99/38984)。表达的融和蛋白的连接物区域包括ompT蛋白酶的裂解基序(Arg-Arg)和Kex2蛋白酶的裂解基序(Pro-Arg)，并且在各自的裂解位点被蛋白酶裂解。
为了获得融和蛋白，向从W3110菌株传代下来的大肠杆菌菌株内引入pG97ompPR。在300L培养器中，将所得转化体在含有酵母提取物、无机盐和葡萄糖的生长培养基中培养。将细胞培养直至细菌的浓度达到OD660＝18O。在高压匀化器中加工所得培养物溶液以破坏细胞体，然后离心以收集包含体。将含有包含体的沉淀重悬在去离子水中，离心以洗涤包含体，然后重悬在去离子水中以获得OD660等于1000的包含体的浓缩物(约30L)。
向3.9L包含体浓缩物中加入1L具有未调节的pH的1M Tris-HCl和10L 8M尿素。然后加入去离子水直至终体积为20L。用5N盐酸将所得溶液的pH调节至6.5，把所得溶液在37℃保持2小时以让包含体中存在的大肠杆菌OmpT蛋白酶作用于融和蛋白，以由此裂解下来具有13个加到其N-末端上的氨基酸的GLP-1(7-37)(在下文中称为RHHGP[G])。反应完全后，向该反应混合物中加入尿素粉末至浓度为7M，用5N NaOH将pH调节至8.0。然后将该反应混合物在压力下过滤，获得了30L上清液。把上清液加到用5M尿素/20mM Tris-HCl(pH8.0)/0.1％吐温80溶液平衡的SP-Sepharose Big Beads柱(140mmID×160mm，Amersham Pharmacia Biotechnology)上，然后用0.2M NaCl/20mM Tris-HCl(pH8.0)/0.1％吐温80溶液洗涤。之后用0.5M NaCl/20mM Tris-HCl(pH8.0)/0.1％吐温80溶液将RHHGP[G]洗脱下来，结果获得了含有约100g RHHGP[G]的级份(约20L)。
使用纯化水(UF水)将所得RHHGP[G]级份调节至5.0mg/mL。向该溶液中加入20mM乙酸钠(pH5.2)、5.0μM硫酸铜、0.5g/L抗坏血酸、lmg/L过氧化氢酶、0.1％吐温80和1500个单位/mL酰胺化酶。然后让该反应在32℃进行80分钟，同时向该溶液中鼓入氧气以将溶解氧浓度保持在100％。结果RHHGP[G]的C-末端被酰胺化以形成酰胺形式(RHHGP-1)。向该溶液中加入Tris-HCl(pH8.0)、吐温80、氯化钙和Kex2蛋白酶至终浓度分别为20mM、0.1％、1mM和8,000U/mL，让该反应在32℃进行2.5小时。
将13个氨基酸从RHHGP-1的N-末端上除去以形成游离GLP-1(7-36)NH2。将一份约为10L(3.4g/L)的上述溶液用0.3％吐温80/20mMBriton Robinson(下文中称为BR)缓冲液(pH4.5)稀释(至26L)，并加到用20mM NaCl/0.3％吐温80/20mM BR缓冲液(pH 4.5)平衡的阳离子交换色谱柱(90mmID×400mm，MacroPrep High-S，Biorad)上。用相同溶液洗涤后，用溶液A(20mM BR缓冲液(pH6.0)/20mM NaCl/0.3％吐温80)和溶液B(20mM BR缓冲液(pH7.5)/20mM NaCl/0.3％吐温80)洗脱GLP-1(7-36)NH2，同时溶液B在洗脱剂中的比例以线性方式从50％改变到100％以形成线性梯度。
将纯度为98％或更高的所得级份用UF水稀释至GLP-1(7-36)NH2浓度为6mg/mL，加到用20mM乙酸钠(pH4.5)平衡的Prep C18柱(90mmID×240mm)(Waters)上。用含有20mM乙酸钠(pH4.5)和0.2％乙酸的10％乙腈溶液洗涤后，用含有2％乙酸的30％乙腈溶液洗脱GLP-1(7-36)NH2，获得了含有27g GLP-1(7-36)NH2的溶液(2.5L)。使用蒸发仪将乙腈从洗脱液中除去，用注射用水把GLP-1(7-36)NH2的浓度调节至10mg/mL。然后将该溶液在RL-903BS冷冻干燥器(KyowaVacuum Engineering Co.，Ltd)中冷冻干燥，获得了22g冻干的GLP-1(7-36)NH2。
所获得的产物具有下列分子量和氨基酸组成，因此是GLP-1(7-36)NH2。ESI-MS：3297.4(理论值：3297.68)。用6N盐酸水解后的Leu标准氨基酸组成：
                                               Asp 1.0；(1)，Thr；2.0(2)，Ser；2.7(3)，Glu；4.0(4)，Gly；3.0(3)，Ala；4.1(4)，Val；2.0(2)，Ile；1.0(1)，Leu；2.0，Tyr；1.0(1)，Phe；2.1(2)，Lys；2.0(2)，His；1.0(1)，Arg；1.0(1).
参考实施例2：使用大鼠测试GLP-1(7-36)NH 2 药物组合物溶液的鼻吸 收
将约10mg在参考实施例1中获得的GLP-1(7-36)NH2、180mg蔗糖、8mg无水柠檬酸和0.2mg苯扎氯铵溶解在2mL水中，以形成通过反相HPLC测定的浓度为5mg/mL的样本溶液。将7-9周大、重约250g的雄性SD大鼠(Crj：CD，Charles River Japan Inc.，)在金属笼子中保持12小时的白昼/黑夜循环，同时维持22±5℃的温度和30-70％的湿度。让大鼠自由获取固体食物和自来水，在测试前禁食24小时(每组3只动物)。
对于经鼻给药，在戊巴比妥麻醉下将套管放在股动脉内，用精密吸移管将5μL样本溶液在左鼻腔中给药(约100μg/kg)。在给药后0、5、10、15、20、30、60和90分钟，采集血液置于含有抗凝血剂和酶抑制剂的管中，并离心以获得血浆。使用抗-GLP-1(7-36)NH2抗体通过RIA测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。对于皮下给药，使用注射器以1mL/kg的剂量将皮下给药用的样本溶液(约15μg/mL)皮下注射到大鼠的背部。按照与经鼻给药相同的方式测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。结果如下表1中所示。
表1：GLP-1(7-36)NH2药物组合物溶液的鼻吸收(在大鼠中)
  给药途径     剂量(μg/kg)   Cmax(ng/mL)   AUC(ng·hr/mL)   生物利用度(％)
  经鼻     97±1   4.70±3.28   2.47±1.44   11.2±6.5
  皮下     15   6.68±0.86   3.82±0.58   (100)
平均值±SD(n＝3)
从上述结果中可以看出，生物利用度为11.2±6.5％(平均值±SD，n＝3)，这表明GLP-1(7-36)NH2有效从鼻粘膜中吸收。
参考实施例3：GLP-1(7-36)NH 2 药物组合物溶液的稳定性
将在参考实施例2中制备的GLP-1(7-36)NH2样本溶液在25℃和40℃贮存。
结果如表2所示。从这些结果中可以看出，在每一温度条件下保持1周后，形成了小的颗粒。
表2：GLP-1(7-36)NH2水溶液在0.4％乙酸中的稳定性
  时间     评估     25℃     40℃
  开始时     剩余比例     (100)     (100)
    外观     澄清且无色     澄清且无色
    pH     2.80     2.80
  1周     剩余比例     94.2     85.4
    外观     形成细小颗粒     形成细小颗粒
    pH     2.78     2.78
  2周     剩余比例     88.5     77.3
    外观     形成细小颗粒     胶凝
    pH     2.78     2.71
肽浓度：5mg/mL
0.4％无水柠檬酸
9％蔗糖
0.01％苯扎氯铵
虽然参考实施例2的结果表明该含有GLP-1(7-36)NH2的药物组合物溶液能够在大鼠中经鼻吸收，但是当该溶液的pH在2.7附近时，该溶液的物化稳定性很低。因此，当具有这样的pH时，该药物组合物的溶液是不适宜的。
参考实施例4：GLP-1(7-36)NH 2 溶液的稳定性
通过将蒸馏水加到3.92g磷酸、2.40g乙酸、14.91g氯化钾和2.47g硼酸的混合物中来制备1000mL溶液A，通过将水加到8.0g氢氧化钠中来制备1000mL溶液B。将溶液B滴加到溶液A中，以形成pH值分别为pH2.0、pH3.0、pH4.0、pH5.0、pH6.0、pH7.0和pH9.0的100mL缓冲液(Britton Robinson(BR)缓冲液)。
同时，将约300mg在参考实施例1中制备的GLP-1(7-36)NH2溶解在30mL蒸馏水中。将该溶液(10mg/mL)分成2.0mL的等份试样，向等份试样中各自加入BR缓冲液和0.1M盐酸以形成20mL样本溶液。然后将样本在恒温箱中于40℃贮存1、4和7天，观察样本的外观，并测定GLP-1(7-36)NH2的剩余比例。结果如下表3所示。
表3：GLP-1(7-36)NH2水溶液在不同pH的稳定性
                                              pH
  1.2   2.0   3.0   4.0   5.0   6.0   7.0   9.0
开始时   剩余比例   100   100   100   100   100   100   100   100
  外观   C.C.   C.C.   C.C.   C.C.   C.C.   C.C.   C.C.   C.C.
1天   剩余比例   61.7   4.9   33.8   99.4   98.5   27.4   65.2   95.9
  外观   P.P.   P.P.   P.P.   C.C.   C.C.   P.P.   P.P.   C.C.
2天   剩余比例   23.1   2.5   0.9   97.4   44.0   26.0   54.1   84.3
  外观   P.P.   P.P.   P.P.   C.C.   P.P.   P.P.   P.P.   C.C.
7天   剩余比例   24.4   3.4   0.3   29.4   34.4   26.4   52.0   75.6
  外观   P.P.   P.P.   P.P.   P.P.   P.P.   P.P.   P.P.   C.C.
C.C.：澄清且无色
P.P.：部分沉淀
肽浓度：1mg/mL
温度：40℃
pH1.2：0.1M盐酸
pH2.0～pH9.0：Briton-Robinson缓冲液(μ＝0.2)
剩余比例：在上清液中收集的比例
如表3所示，1天后，在具有pH1.2、pH2.0、pH3.0、pH6.0和pH7.0的样本中形成了沉淀，4天后，在具有pH5.0的样本中出现沉淀，7天后，在具有pH4.0的样本中形成了沉淀。在具有pH9.0的样本中没有形成沉淀，7天后，GLP-1(7-36)NH2的剩余比例降至75.6％。因此，这证明了GLP-1(7-36)NH2在任何酸性、中性或碱性溶液中表现出较低的稳定性，从而不适于在药物组合物溶液中使用。
由于这个观点，测试经鼻给药用组合物的粉末制剂—该药物组合物溶液的替代物—的吸收性。
实施例1：使用狗测试经鼻给药用粉末制剂的吸收性
通过将如下面的制备实施例1-9所述的不同添加剂加到在参考实施例1中获得的GLP-1(7-36)NH2与平均粒径为50μm的起载体作用的碳酸钙细粉末的混合物中来制备经鼻吸收用组合物。
作为对照，制备一种不含添加剂的经鼻给药用组合物样本。
使用分别重约10kg的3只beagle狗，用粉末喷雾器将如在制备实施例1-9中描述的经鼻吸收用药物组合物经鼻给药。在给药后0、5、10、20、30、45、60、90和120分钟测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。作为对照，给药使用碳酸钙载体的不含添加剂的GLP-1(7-36)NH2细粉末。使用抗-GLP-1(7-36)NH2抗体通过RIA测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。通过比较经鼻给药后的曲线下面积(AUC)与皮下施用在盐水中的GLP-1(7-36)NH2后的AUC来计算生物利用度。结果如下表4所示。
表4：在狗中评价经鼻给药用制剂
添加剂     剂量(μg/kg)     Cmax(ng/mL)     Tmax(min)   T1/2(hrs)  AUC0-∞(ng·hr/mL)   生物利用度(％)
无添加剂1)     83.9±3.9     2.65±1.72     6.7±2.9   0.43±0.46 1.09±0.22 4.3±1.0
1％Domyo-ji粉     58.7±2.3     2.53±0.73     16.7±5.8   0.59±0.36 2.35±1.66 13.4±10.1
0.1％玉米淀粉     74.6±7.5     3.87±1.22     11.7±7.6   0.58±0.41 2.62±1.01 11.4±3.9
1％玉米淀粉     58.4±2.8     2.78±1.99     10.0±0.0   0.48±0.30 2.47±2.20 13.7±11.8
    0.1％非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉     80.1±3.2     2.26±0.07     13.5±5.8   0.59±0.40 2.28±1.12 9.5±5.0
    1％非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉     52.3±5.7     2.64±0.85     13.3±0.0   0.33±0.19 1.40±0.63 8.8±4.1
1％聚维酮     52.9±2.4     1.96±1.13     10.0±0.0   0.24±0.07 0.91±0.46 5.6±2.7
1％果胶     53.3±2.8     2.57±1.07     16.7±11.5   0.44±0.28 1.05±0.53 6.6±3.5
    1％非粘性稻米型部分预胶化玉米淀粉     49.7±4.3     1.98±1.67     16.7±11.5   0.44±0.13 1.24±0.91 8.3±6.2
皮下给药 50     20.35±3.48     15.0±0.0   0.39±0.20 5.15±5.13 100
1)碳酸钙载体
平均值±SD(n＝3)
从上面的结果中可以看出，不含添加剂的药物组合物的生物利用度约为4％，而施用本发明药物组合物改善了GLP-1(7-36)NH2的吸收，并使得生物利用度提高了约6％-14％。
制备实施例1：制备含有Domyo-ji粉(1.0％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与31mg Domyo-ji粉混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.92g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(29mg)的硬脂酸钙，获得了2.83g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有690μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约226mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例2：制备含有玉米淀粉(0.1％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与3.5mg玉米淀粉(日本药典：平均粒径＝13.3μm)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.96g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.75g粉末样本。将含有约1000μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约297mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例3：制备含有玉米淀粉(1.0％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与32mg玉米淀粉(日本药典：平均粒径＝13.3μm)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.93g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(29mg)的硬脂酸钙，获得了2.89g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有678μgGLP-1(7-36)NH2的一定量(约213mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例4：制备含有非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(0.1％)的药 物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与3.2mg非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(AMYCOL HF，NIPPON STARCH CHEMICAL Co.，Ltd.)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.96g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.75g粉末样本。将含有约1000μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约297mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例5：制备含有非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(1.0％)的药 物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与30mg非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(AMYCOL HF，NIPPON STARCH CHEMICAL Co.，Ltd.)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.92g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(27mg)的硬脂酸钙，获得了2.77g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有661μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约217mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例6：制备含有聚维酮(1.0％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与32mg聚维酮K30(日本标准药物添加剂)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.93g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(29mg)的硬脂酸钙，获得了2.84g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有642μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约211mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例7：制备含有果胶(1.0％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与31mg果胶(USP)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.93g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(29mg)的硬脂酸钙，获得了2.88g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有644μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约210mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例8：制备含有非粘性稻米型预胶化玉米淀粉(1.0％)的药物 组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与31mg非粘性稻米型预胶化玉米淀粉(PCS，ASAHI KASEI Co.，Ltd.)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入2.92g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.88g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有646μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约211mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例9：制备不含添加剂的药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末置于烧杯中，逐渐加入8.88g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(87mg)的硬脂酸钙，获得了8.76g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有937μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约300mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
实施例2：使用cynomolgus猴子测试经鼻给药用粉末组合物的吸收性 (测试-1)
使用在参考实施例1中获得的GLP-1(7-36)NH2作为生物活性多肽，使用平均粒径为51.9μm的碳酸钙或蔗糖硫酸铝盐(硫糖铝)细粉末作为载体。依据在制备实施例10-18中描述的方法，制备包含由载体携带的不同添加剂的不同经鼻吸收用药物组合物。调节GLP-1(7-36)NH2的剂量，使得每次给每只动物施用约100μg GLP-1(7-36)NH2。每一种添加剂以占制剂总重量0.5％、1.0％、10％和50％的量加到药物组合物中。制备两种不含添加剂的制剂作为对照，一种含有碳酸钙和GLP-1(7-36)NH2，另一种含有硫糖铝和GLP-1(7-36)NH2。
使用由UNISIA JECS Co.Ltd.生产的鼻用喷雾器，将制备实施例10-18的组合物独立地施用到分别重3kg的cynomolgus猴子的鼻腔中，在给药后0、5、10、20、30、45、60、90和120分钟，通过RIA和部分通过ELISA测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。通过比较经鼻给药后的AUC与皮下给药后的AUC来确定生物利用度。
附图1、2和3分别给出了皮下施用在盐水中的GLP-1(7-36)NH2后以及经鼻给药两种不含添加剂的制剂后的GLP-1(7-36)NH2的血浆浓度-时间曲线。附图4给出了经鼻给药含有1％Domyo-ji粉、0.5％玉米淀粉或0.5％非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉的各种经鼻用制剂后的GLP-1(7-36)NH2的血浆浓度-时间曲线。
通过RIA和部分通过ELISA测定而获得的血浆GLP-1(7-36)NH2浓度的评估结果分别如表5和6所示。
表5：在cynomolgus猴子中评估GLP-1(7-36)NH2经鼻给药用制剂(RIA)
添加剂     剂量(μg/kg)     Cmax(ng/mL)     Tmax(min)   T1/2(hrs)     AUC0-∞(ng·hr/mL)   生物利用度(％)
无添加剂1) 22±2     0.19±0.16     20.0±14.1 -4) 0.19±0.06 3.1±3.5
无添加剂2) 24±2     0.09±0.08     10.0±0.0 -4) 0.02±0.02 0.3±0.3
1％Domyo-ji粉 36±2     4.51±0.71     8.3±2.9   0.74±0.53 2.05±0.67 23.1±7.3
0.5％玉米淀粉 37±6     3.05±0.93     8.3±2.9   0.85±0.23 3.25±0.95 34.7±5.3
  0.5％非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉 35±4 0.93±0.40 11.7±7.6 0.76±0.33 1.18±0.92 4.1±11.3
10％HPC3) 36±5     1.71±0.10     10.0±0.0   0.74±0.26 1.28±0.25 14.3±1.3
皮下给药 13     6.37±2.54     10.0±0.00   0.50±0.00 3.23±0.5 (100)
平均值±SD(n＝3)
1)碳酸钙(制备实施例10)
2)硫糖铝(制备实施例11)
3)用水捏合(制备实施例16)
4)“-”是指血浆浓度太低而不能计算。
表6：在cynomolgus猴子中评估GLP-1(7-36)NH2经鼻给药用制剂(ELISA)
    添加剂   剂量(μg/kg)  Cmax(ng/mL)   Tmax(min)   T1/2(hrs)  AUC0-∞(ng·hr/mL)
    10％HPC5)   35±8  0.64±0.29   16.7±11.5   1.54±0.78  0.80±0.22
    10％HPC3)   36±5  1.11±0.55   10.0±0.0   0.84±0.10  0.85±0.19
    10％HPC6)   34±2  0.49±0.02   10.0±0.0   0.74±0.19  0.41±0.06
    50％HPC7)   36±4  0.27±0.09   10.0±0.0   1.96±0.24  0.53±0.23
    1％Domyo-ji粉   36±2  1.42±0.12   5.0±0.0   0.61±0.43  0.70±0.28
3)用水捏合(制备实施例16)
5)粉末混合物(制备实施例15)
6)用乙醇捏合(制备实施例17)
7)用水捏合(制备实施例18)
从上表5和6中可以看出，两种不含添加剂的制剂分别表现出约0.3-3.1％的低的GLP-1(7-36)NH2经鼻吸收，而每一种本发明药物组合物显著提高了鼻粘膜对GLP-1(7-36)NH2的吸收。
制备实施例10：制备不含添加剂的药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末置于烧杯中，逐渐加入8.87g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约84mg)的硬脂酸钙，获得了8.20g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μgGLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例11：制备不含添加剂的药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末置于烧杯中，逐渐加入8.87g硫糖铝。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(84mg)的硬脂酸钙，获得了8.03g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例12：制备含有Domyo-ji粉(1.0％)的药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与89mg Domyo-ji粉混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入8.78g碳酸钙。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(84mg)的硬脂酸钙，获得了8.11g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例13：制备含有玉米淀粉(0.5％)的药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与45mg玉米淀粉(日本药典：平均粒径＝13.3μm)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入8.83g碳酸钙(平均粒径＝50μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(88mg)的硬脂酸钙，获得了8.46g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有98μgGLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例14：制备含有非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(0.5％)的 药物组合物
将相当于30mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与45mg非粘性稻米型预胶化马铃薯淀粉(AMYCOL HF，NIPPON STARCH CHEMICAL Co.，Ltd.)混合。将该粉末混合物置于烧杯中，逐渐加入8.83g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)。将该混合物充分混合后，加入纯化水，把该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(89mg)的硬脂酸钙，获得了8.47g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有101μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例15：制备含有羟丙基纤维素(HPC，10％)的药物组合物(粉 末混合物)
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与300mg HPC(日本药典)一起研磨，获得了粉末混合物。以类似方式将该粉末混合物与2.69g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)一起研磨直至均匀。然后将该混合物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.76g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约30mg)粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例16：制备含有HPC(10％)的药物组合物(用水捏合的混合 物)
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与300mg HPC(日本药典)一起研磨，获得了粉末混合物。以类似方式将该粉末混合物与2.69g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)一起研磨直至均匀。向该混合物中加入纯化水以将混合物形成糊状物。将该糊状物充分混合，在干燥器中减压干燥过夜。将该干燥的混合物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.70g粉末样本。测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μg GLP-1(7-36)NH2的约30mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例17：制备含有HPC(10％)的药物组合物(用乙醇捏合的混合 物)
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与300mg HPC(日本药典)一起研磨，获得了粉末混合物。以类似方式将该粉末混合物与2.69g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)一起研磨直至均匀。向该混合物中加入乙醇以将混合物形成糊状物。将该糊状物捏合，在干燥器中减压干燥过夜。将该干燥的混合物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(28mg)的硬脂酸钙，获得了2.73g粉末样本。测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μgGLP-1(7-36)NH2的约30mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例18：制备含有HPC(50％)的药物组合物
将相当于10mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约12mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与1.5g HPC(日本药典)一起研磨，获得了粉末混合物。以类似方式将该粉末混合物与1.49g碳酸钙(平均粒径＝51.9μm)一起研磨直至均匀。向该混合物中加入纯化水以将混合物形成糊状物。将该糊状物捏合，在干燥器中减压干燥过夜。将所得粉末过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(27mg)的硬脂酸钙，获得了2.54g粉末样本。测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，将含有100μg GLP-1(7-36)NH2的约30mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
实施例3：使用cynomolgus猴子测试经鼻给药用粉末制剂的吸收性(测 试-2)
在本实施例中，我们测定了含有部分预胶化淀粉、羟丙基纤维素-SSL(HPC-SSL)、部分预胶化淀粉/HPC-SSL混合物或玉米淀粉(含量为1.0-10％)作为添加剂的组合物在给药后的鼻吸收性。
使用由UNISIA JECS Co.Ltd.生产的鼻用喷雾器，将制备实施例19-27的组合物独立地施用到分别重2-4kg的cynomolgus猴子的鼻腔中，在给药后0、5、10、15、30、60、90和120分钟，测定血浆中GLP-1(7-36)NH2的浓度。通过比较经鼻给药后的AUC与皮下给药后的AUC来确定生物利用度。
结果如下表7所示。从表7可以看出，与不含添加剂的制剂相比，含有玉米淀粉(其含量在1.0-10％的宽范围内)的制剂表现出有效的促进GLP-1(7-36)NH2经鼻吸收的效果。此外，含有保持部分水不溶性的部分预胶化玉米淀粉的制剂也表现出有效的GLP-1(7-36)NH2的经鼻吸收。通过在药物组合物中使用难溶于水的HPC-SSL作为添加剂，观察到了一定的促进GLP-1(7-36)NH2吸收的效果。虽然没有观察到联合使用HPC-SSL与部分预胶化淀粉的吸收增强作用，但是与不含添加剂的制剂相比，GLP-1(7-36)NH2的经鼻吸收也提高了。
表7：在cynomolgus猴子中评估GLP-1(7-36)NH2经鼻给药用制剂(RIA)
添加剂(％)     剂量(μg/kg)     Cmax(ng/mL)     Tmax(min)     T1/2(hrs)     AUC0-∞(ng·hr/mL)   生物利用度(％)
无添加剂 -     88.9±20.0     1.47±0.70     10.3±0.6     0.45±0.21     50.80±21.31 4.0±1.9
  玉米淀粉 1％     100.9±23.2     2.53±2.33     11.0±1.7     0.37±0.08     68.90±53.28 4.5±2.9
  5％     103.5     6.87     10.0     0.65     258.37   16.7
10％     111.1±19.9     3.21±1.13     10.0±0.0     0.49±0.26     127.77±41.02 7.6±1.2
  HPC(SSL) 0.1％     101.9±19.6     3.20±1.89     10.3±0.6     0.34±0.06     104.52±56.23 6.6±2.5
0.5％     93.7±25.6     2.01±0.44     10.0±5.0     0.57±0.43     65.47±15.24 4.9±1.3
1％     99.1±25.1     1.51±0.96     19.0±10.8     0.43±0.12     62.62±37.66 5.0±4.4
  部分预胶化玉米淀粉 1％     102.2±8.6     5.57±1.47     12.3±2.5     0.36±0.28     189.82±83.09 12.4±5.0
  预胶化玉米淀粉/HPC-SSL   5％/0.1％     112.6±31.1     4.98±2.23     10.0±0.0     0.39±0.10     155.71±58.06 9.1±1.1
制备实施例19：制备含有苯扎氯铵(0.01％)的不含添加剂的药物组合 物
将相当于30.6mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与2.93g碳酸钙(平均粒径＝53.6μm)逐渐混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了2.95g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有311μgGLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例20：制备含有玉米淀粉(1.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
将约2.91g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约29mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)混合。将该混合物充分混合后，加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于29.9mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约29mg)的硬脂酸钙，获得了约2.88g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有312μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例21：制备含有玉米淀粉(5.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
将约2.78g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约150mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)混合。将该混合物充分混合后，加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于29.6mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约35mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了约2.89g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有307μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例22：制备含有玉米淀粉(10.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
将约2.63g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约301mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)混合。将该混合物充分混合后，加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.6mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约27mg)的硬脂酸钙，获得了约2.69g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有341μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例23：制备含有HPC-SSL(0.1％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
向约2.93g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入含有约3mgHPC-SSL的溶液，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.4mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了约2.94g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有310μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例24：制备含有HPC-SSL(0.5％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
向约2.92g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入含有约15mgHPC-SSL的溶液，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.5mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了约2.93g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有312μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例25：制备含有HPC-SSL(1.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的药 物组合物
向约2.90g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入含有约30mgHPC-SSL的溶液，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.6mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约28mg)的硬脂酸钙，获得了约2.85g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有322μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例26：制备含有部分预胶化玉米淀粉(1.0％)和苯扎氯铵 (0.01％)的药物组合物
向约2.90g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入含有约30mg部分预胶化玉米淀粉的溶液，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.8mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约37mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约29mg)的硬脂酸钙，获得了约2.90g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有319μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
制备实施例27：制备含有玉米淀粉(5.0％)、HPC-SSL(0.1％)和苯扎 氯铵(0.01％)的药物组合物
将约2.78g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约151mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)混合，将该混合物充分混合。然后加入含有约3mgHPC-SSL的溶液，之后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于30.3mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约36mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了约2.93g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有310μg GLP-1(7-36)NH2的30mg粉末样本。
实施例4：加入淀粉对肠降血糖素多肽的经鼻吸收的影响
本实施例测试了加入淀粉是否能够提高除GLP-1(7-36)NH2以外的酸性肠降血糖素激素的经鼻吸收，其中是用大鼠中的血糖水平下降作用作为指数。
用戊巴比妥将重约300g的雄性CD(SD)大鼠麻醉。向吸移管(GPS-250，RAININ)的尖端前边缘中填充3mg通过下文描述的制备实施例制得的药物组合物(含有约100μg多肽)，将尖端放在注射器中，然后将组合物与1ml空气一起在大鼠鼻腔中喷雾。在组合物经鼻给药后5分钟，在大鼠的尾部静脉内注射0.5g/kg葡萄糖。在组合物经鼻给药后15分钟(施用葡萄糖后10分钟)，从主动脉采集血样。使用血糖水平测定仪器(FREESTYLE-KISSEI；Kissei Pharmaceutical Co.，Ltd.)测定血糖水平。
结果如下表8所示。从这些结果中可以看出，没有施用肠降血糖素激素的对照组的血糖水平为196mg/dl(3只大鼠的平均值)。对于含有肠降血糖素激素的组合物，与对照组相比，血糖水平下降了。此外，对于肠降血糖素激素，当组合物含有5％玉米淀粉时，与未加入5％玉米淀粉相比，血糖水平下降了。
这些结果清楚地表明，本发明药物组合物可使得更多的肠降血糖素激素被吸收，并且当本发明组合物使用淀粉作为添加剂时，肠降血糖素激素的吸收性得到了提高。
表8：施用肠降血糖素激素降低血糖水平的效果
    多肽   组合物     平均值     S.D.
    对照   -     196     12
GLP-1(7-37)   无添加剂     170     4
  5％玉米淀粉     146     12
Exendin-4   无添加剂     166     6
  5％玉米淀粉     151     12
[Val8]-GLP-1(7-37)   无添加剂     168     12
  5％玉米淀粉     147     10
    {Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)   无添加剂     184     8
  5％玉米淀粉     154     12
参考实施例5：合成{Lys-26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP- 1(7-37)
向含有二氯甲烷(30mL)的5mg(6.9mmol)膨胀C1-Trt(2-C1)树脂中加入Fmoc-Glu-OtBu(5.8g，13.7mmol)与DIPEA(1.5g，11.8mmol)的二氯甲烷溶液，将该混合物轻微搅拌30分钟。通过过滤收集树脂，依次用二氯甲烷、异丙醇和二氯甲烷洗涤。然后将20％哌啶/DMF的混合溶液(30mL)加到所得树脂中，将该混合物轻微搅拌20分钟。通过过滤收集树脂、依次用DMF、异丙醇和二氯甲烷洗涤，干燥。将所得H-G1u(α-OtBu)-Trt(2-C1)树脂(6.1g，6.9mmol)悬浮在N-甲基吡咯烷酮(NMP)/二氯甲烷(1∶1，30ml)的混合溶液中，向该混合物中加入3当量的棕榈酸(5.3g，20.7mmol)、HOBt(2.8g，20.7mmol)和水溶性二环己基碳二亚胺(DCC：4.0g，20.7mmol)，然后将该混合物轻微搅拌过夜。将所得树脂依次用二氯甲烷、NMP和二氯甲烷洗涤，并干燥。向所得棕榈酰基-Glu(α-OtBu)-Trt(2-C1)树脂(8g，6.9mmol)中加入乙酸/TFE/二氯甲烷(1∶2∶7，20ml)的混合溶液，将该混合物轻微搅拌20分钟。将树脂过滤，用10ml TFE洗涤，将滤液浓缩。用己烷处理所得残余物以获得沉淀。将所得沉淀从二氯甲烷/己烷中重结晶，获得了2.0g(产率：66％)用以在26位引入Lys侧链的谷氨酸衍生物，即棕榈酰基-Glu(α-OtBu)。ESI-MS：[M+H]442.3；M+Na]462.4(理论值：441.3[M])。
然后，使用自动肽合成仪433A(ABI Co.，Ltd.)，通过Fmoc方法(0.25mmol方案)构建Fmoc-His(Trt)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(Trt)-Phe-Thr(Trt)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Sln(Trt)-Ala-Ala-Lys(4-甲基三苯甲基)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg(Pmc)-Gly-Arg(Pmc)-Gly-Wang树脂。将所得树脂用1％TFA/5％TIPS/二氯甲烷混合溶液(30ml)处理30分钟以将4-甲基三苯甲基从在26位的Lys侧链上除去。将所得树脂用5％DIPEA/二氯甲烷混合溶液中和，用二氯甲烷洗涤，用NMP(30ml)膨胀。然后将膨胀的树脂与棕榈酰基-Glu(α-OtBu)(441mg，1mmol)在HOBt(135mg，1mmol)和DCC(260mg，1mmol)存在下反应3小时。将所得肽树脂用20％哌啶处理以除去Fmoc，然后用88％TFA/2％TIPS/5％水/5％苯酚的混合溶液(20ml)处理1小时。将树脂过滤，将树脂用10ml TFA洗涤，将合并的滤液浓缩。用乙醚处理所得残余物，获得了沉淀(720mg)。将500mg所得肽粗产物溶解在饱和尿素溶液(200ml)中，使用C4(YMC-pack，PROTEIN-RP，2cm×25cm)通过反相HPLC纯化，用13％-60％乙腈/0.1％TFA的线性梯度以5-10ml/分钟的流速洗脱。收集含有目标产物的级份，冷冻干燥，获得了145mg所需肽。ESI-MS：3751(理论值：3751.2)。用6N盐酸水解后的Leu标准氨基酸组成：
                    Asx：0.97(1)，Thr：1.89(2)，Ser：2.75(3)，Glx：5.08(5)，Gly：4.05(4)，Ala：4.01(4)，Val：1.93(2)，Ile：0.99(1)，Leu： 2，Tyr：0.91(1)，Phe：1.90(2)，Lys：1.10(1)，His：0.90(1)，Arg：1.92(2).
参考实施例6：合成GLP-1(7-37)
使用自动肽合成仪433A(ABI Co.，Ltd.)，通过Fmoc方法(0.25mmol方案)由作为原料的Fmoc-Arg(Pmc)-Wang树脂构建H-His(Trt)-Ala-Glu(OtBu)-Gly-Thr(Trt)-Phe-Thr(Trt)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(Boc)-Gly-Arg(Pmc)-Wang树脂(1.1g)。将600mg所得树脂用88％TFA/2％TIPS/5％水/5％苯酚的混合溶液(20ml)处理1小时。将树脂过滤，将滤液浓缩，用乙醚处理所得残余物，获得了沉淀(380mg)。将所得肽粗产物溶解在纯化水(20ml)中，使用C4(YMC-pack，PROTEIN-RP，2cm×25cm)通过反相HPLC纯化，用9％-68％乙腈/0.1％TFA的线性梯度以10ml/分钟的流速洗脱。收集含有目标产物的级份，冷冻干燥，获得了53mg所需肽。ESI-MS：3355(理论值：3355.7)。用6N盐酸水解后的Leu标准氨基酸组成：
                                      Asx：1.00(1)，Thr：1.99(2)，Ser：2.79(3)，Glx：4.10(4)，Gly：4.01(4)，Ala：4.02(4)，Val：1.92(2)，Ile：0.98(1)，Leu： 2，Tyr：0.92(1)，Phe：1.92(2)，Lys：2.18(2)，His：0.96(1)，Arg：0.94(1).
参考实施例7：合成[Val8]GLP-1(7-37)
使用自动肽合成仪433A(ABI Co.，Ltd.)，通过Fmoc方法(0.25mmol方案)由作为原料的Fmoc-Arg(Pmc)-Wang树脂构建H-His(Trt)-Va1-Glu(OtBu)-Gly-Thr(Trt)-Phe-Thr(Trt)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-Gln(Trt)-Ala-Ala-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys(Boc)-Gly-Arg(Pmc)-Wang树脂(1.4g)。将0.7g所得树脂用88％TFA/2％TIPS/5％水/5％苯酚的混合溶液(20ml)处理1小时。将树脂过滤，将滤液浓缩，用乙醚处理所得残余物，获得了沉淀(327mg)。将所得肽粗产物溶解在纯化水(5ml)中，使用C4(YMC-pack，PROTEIN-RP，2.5cm×30cm)通过反相HPLC纯化，用5％-72％乙腈/0.1％TFA的线性梯度以10ml/分钟的流速洗脱。收集含有目标产物的级份，冷冻干燥，获得了75mg所需肽。ESI-MS：3383(理论值：3383.8)。用6N盐酸水解后的Leu标准氨基酸组成：
                                      Asx：0.99(1)，Thr：1.98(2)，Ser：2.80(3)，Glx：4.10(4)，Gly：4.01(4)，Ala：3.03(3)，Val：2.86(3)，Ile：0.98(1)，Leu： 2，Tyr：0.92(1)，Phe：1.92(2)，Lys：2.18(2)，His：0.92(1)，Arg：0.94(1).
参考实施例8：合成Extendin-4
通过Fmoc方法(0.25mmol方案)由作为原料的Fmoc-Ser(tBu)-Wang树脂构建H-His(Trt)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-Thr(Trt)-Phe-Thr(Trt)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Leu-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gln(Trt)-Met-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-Arg(Pmc)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp-Lue-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-Wang树脂(1.9g)。将1.9g所得树脂用88％TFA/2％TIPS/5％水/5％苯酚的混合溶液(20ml)处理1小时。将树脂过滤，将滤液浓缩，用乙醚处理所得残余物，获得了沉淀(870mg)。将所得肽粗产物溶解在纯化水(80ml)中，使用C4(YMC-pack，PROTEIN-RP，2.5cm×30cm)通过反相HPLC纯化，用18％-72％乙腈/0.1％TFA的线性梯度以10ml/分钟的流速洗脱60分钟。收集含有目标产物的级份，冷冻干燥，获得了270mg所需肽。ESI-MS：4186(理论值：4186.6)。用6N盐酸水解后的Leu标准氨基酸组成：
                                     Asx：1.99(2)，Thr：1.97(2)，Ser：4.77(5)，Glx：6.06(6)，Gly：4.97(5)，Ala：2.02(2)，Val：0.94(1)，Met：0.68(1)，Ile：0.98(1)，Leu： 3，Phe：1.90(2)，Lys：2.17(2)，His：0.98(1)，Arg：0.92(1)，Pro：3.96(4).
制备实施例28：制备含有玉米淀粉(5％)和苯扎氯铵(0.01％)的GLP- 1(7-37)的经鼻吸收用药物组合物
将约269mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约15mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)充分混合。然后向该混合物中加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于9.03mg GLP-1(7-37)的一定量(约10.8mg)的作为肽组分的GLP-1(7-37)粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.2mg)的硬脂酸钙，获得了约252mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有107μgGLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
制备实施例29：制备含有苯扎氯铵(0.01％)的GLP-1(7-37)的经鼻吸 收用药物组合物
将相当于8.75mg GLP-1(7-37)的一定量(约10.5mg)的作为肽组分的GLP-1(7-37)粉末与约284mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)逐渐混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.9mg)的硬脂酸钙，获得了约258mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有102μg GLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
制备实施例30：制备含有玉米淀粉(5.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的[Val8]-GLP-1(7-37)的经鼻吸收用药物组合物
将约269mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约15mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)充分混合。然后向该混合物中加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于9.38mg[Val8]-GLP-1(7-37)的一定量(约13mg)的作为肽组分的[Val8]-GLP-1(7-37)粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约3.1mg)的硬脂酸钙，获得了约261mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的[Val8]-GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有108μg[Val8]-GLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
制备实施例31：制备含有苯扎氯铵(0.01％)的[Val8]-GLP-1(7-37)的经鼻吸收用药物组合物
将相当于9.31mg[Val8]-GLP-1(7-37)的一定量(约13mg)的作为肽组分的[Val8]-GLP-1(7-37)粉末与约284mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)逐渐混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.6mg)的硬脂酸钙，获得了约252mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的[Val8]-GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有111μg[Val8]-GLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
制备实施例32：制备含有玉米淀粉(5.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的 Exendin-4的经鼻吸收用药物组合物
将约270mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约15mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)充分混合。然后向该混合物中加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于9.08mg Exendin-4的一定量(约12mg)的作为肽组分的Exendin-4粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约3.0mg)的硬脂酸钙，获得了约255mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的Exendin-4含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有107μg Exendin-4的3mg粉末样本。
制备实施例33：制备含有苯扎氯铵(0.01％)的Exendin-4的经鼻吸收 用药物组合物
将相当于9.0mg Exendin-4的一定量(约12mg)的作为肽组分的糊精：Exendin-4粉末与约285mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)逐渐混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.6mg)的硬脂酸钙，获得了约260mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的Exendin-4含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有104μg Exendin-4的3mg粉末样本。
制备实施例34：制备含有玉米淀粉(5.0％)和苯扎氯铵(0.01％)的[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的经鼻吸收用药物组合物
将约270mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)与约15mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)充分混合。然后向该混合物中加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于9.23mg[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的一定量(约12mg)的作为肽组分的[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.7mg)的硬脂酸钙，获得了约245mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有113μg[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
制备实施例35：制备含有苯扎氯铵(0.01％)的[Lys 26 ，ε-NH{γ-Glu(N- α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的经鼻吸收用药物组合物
将相当于9.08mg[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的一定量(约12mg)的作为肽组分的[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基))]-GLP-1(7-37)粉末与约285mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)逐渐混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.03mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约2.4mg)的硬脂酸钙，获得了约265mg粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有103μg[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)的3mg粉末样本。
实施例5：作为添加剂的淀粉对酸性多肽经鼻吸收的提高作用
本实施例使用cynomolgus猴子表明了加入淀粉对于人胰岛素经鼻吸收的吸收提高效果。使用人胰岛素作为不是肠降血糖素激素的酸性多肽的一个实例。
使用平均粒径为50μm的碳酸钙或蔗糖硫酸铝盐(硫糖铝)细粉末作为载体。依据在制备实施例10-18中描述的方法，制备含有Domyo-ji粉(1.0％)的经鼻吸收用药物组合物。调节人胰岛素的的剂量，使得能施用约25IU(国际单位)/猴子/40mg组合物。制备两种不含添加剂的制剂作为对照，一种含有碳酸钙和人胰岛素，另一种含有硫糖铝和人胰岛素。
使用由UNISIA JECS Co.Ltd.生产的鼻用喷雾器，将大约40mg制备实施例36-38的组合物独立地施用到分别重约3kg的cynomo1gus猴子的鼻腔中。在给药后0、5、15、20、30、45、60、90和120分钟，用胰岛素.RIA珠II(Dinabott Co.，Ltd)和血糖水平测定仪器FREESTYLE-KISSEI；KISSEI Pharmaceutical Co.，Ltd.)测定血浆中的胰岛素和葡萄糖浓度。
结果如表9和10所示。从这些结果中可以看出，使用不含添加剂的组合物，观察到了人胰岛素的吸收和血糖水平的下降。然而，当施用含有1.0％Domyo-ji粉(部分预胶化淀粉)的组合物时，观察到人胰岛素吸收性增强，并且在早期观察到血糖水平的显著下降。
表9：施用含有人胰岛素组合物后，人胰岛素的血浆浓度
组合物                                       给药后的时间(min)
    给药前     5     10     15     60     120
  碳酸钙     20.5     56.0     166.5     297.0     47.0     16.0
  碳酸钙/Domyo-ji粉(1％)     12.0     115.5     267.5     275.0     56.5     41.5
  硫糖铝     15.0     72.5     183.0     185.0     44.0     17.5
表10：施用含有人胰岛素组合物后的血糖水平
组合物                                    给药后的时间(min)
    给药前     5     10     15     60     120
    碳酸钙     60.0     88.0     96.5     78.5     N.D.     N.D.
    碳酸钙/Domyo-ji粉(1％)     55.0     82.5     73.5     33.5     N.D.     N.D.
    硫糖铝     72.5     74.0     45.0     77.0     20.0     21.5
N.D.：没有检测
制备实施例36：制备胰岛素/硫糖铝的药物组合物
向120mg硫糖铝中加入1ml人胰岛素制剂(Humulin R：ShionogiPharmaceutical Co.，Ltd.)，将该混合物充分混合。然后将该混合物减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约1.2mg)的硬脂酸钙，获得了粉末样本。将含有约25IU人胰岛素的40mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例37：制备胰岛素/碳酸钙的药物组合物
向120mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入1ml人胰岛素制剂(Humulin R：Shionogi Pharmaceutical Co.，Ltd.)，将该混合物充分混合。然后将该混合物减压干燥过夜，让干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约1.2mg)的硬脂酸钙，获得了粉末样本。将含有约25IU人胰岛素的40mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
制备实施例38：制备含有Domyo-ji粉(1.0％)的胰岛素/碳酸钙的药 物组合物
向120mg碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入1ml人胰岛素制剂悬浮液(Humulin R：Shionogi Pharmaceutical Co.，Ltd.)和1.2mg Domyo-ji粉，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物减压干燥过夜，让干燥的产物过180μg的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约1.2mg)的硬脂酸钙，获得了粉末样本。将含有约25IU人胰岛素的40mg粉末样本填充到#2胶囊中以制备经鼻吸收用药物组合物。
实施例6：作为添加剂的淀粉的粒径对药物组合物经鼻吸收的影响
本实施例测试作为含有GLP-1(7-36)NH2的药物组合物的添加剂的淀粉的粒径对经鼻吸收的影响，其中使用大鼠中血糖水平的下降作用作为指数。使用下列两种具有不同平均粒径的细粉淀粉作为本实施例组合物的添加剂。
玉米淀粉：
平均整体粒径(d50)：13.3μm
中央分布：14μm
分布范围：5.5μm-30μm
马铃薯淀粉：
平均整体粒径(d50)：37.7μm
中央分布：45μm
分布范围：5.5μm-105μm
用戊巴比妥将重约300g的雄性CD(SD)大鼠麻醉。向吸移管(GPS-250，RAININ)的尖端前边缘中填充3mg通过下文描述的制备实施例制得的药物组合物(含有约90μg多肽)，将尖端放在注射器中，然后将组合物与1ml空气一起在大鼠鼻腔中喷雾。在组合物经鼻给药后5分钟，在大鼠的尾部静脉内施用0.5g/kg葡萄糖。在组合物经鼻给药后15分钟(施用葡萄糖后10分钟)，从主动脉采集血样。使用血糖水平测定仪器(FREESTYLE-KISSEI；KISSEI Pharmaceutical Co.，Ltd.)测定血糖水平。
结果如下表1所示。从这些结果中可以看出，没有施用GLP-1(7-36)NH2的对照组的血糖水平为196mg/dl(3只大鼠的平均值)。施用不含添加剂、含5％玉米淀粉和5％马铃薯淀粉的含有GLP-1(7-36)NH2的组合物的组的血糖水平分别为170mg/dl、157mg/dl和182mg/dl。这些血糖水平低于没有施用GLP-1(7-36)NH2的对照组的血糖水平。
与使用具有较大粒径的马铃薯淀粉的组相比，在使用具有较小粒径的玉米淀粉的组中观察到了更好的增强GLP-1(7-36)NH2吸收的效果。
从表11中可清楚地看出，当使用具有较小粒径的载体时，可获得优良的GLP-1(7-36)NH2的经鼻吸收，而具有较大粒径的淀粉没有表现出明显的吸收增强效果。
表11：淀粉粒径对于GLP-1(7-36)NH2的降低血糖水平活性的影响
  肽   组合物     平均值     SD
  对照   -     196     12
  GLP-1(7-36)NH2   无添加剂     170     0
  5％玉米淀粉(13.3μm)     157     8
  5％马铃薯淀粉(37.7μm)     182     15
制备实施例39：制备不含添加剂的药物组合物
将相当于90.2mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约108mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2与2.86g碳酸钙混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约30mg)的硬脂酸钙，获得了2.95g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有92μg GLP-1(7-36)NH2的3mg粉末样本。
制备实施例40：制备含有玉米淀粉(5.0％)的药物组合物
向约2.71g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入约150mg玉米淀粉(平均粒径：13.3μm)并充分混合，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于89.2mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约107mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约29mg)的硬脂酸钙，获得了约2.90g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有92μgGLP-1(7-36)NH2的3mg粉末样本。
制备实施例41：制备含有马铃薯淀粉(5.0％)的药物组合物
向约2.71g碳酸钙(平均粒径：53.6μm)中加入约150mg马铃薯淀粉(平均粒径：37.7μm)并充分混合，然后加入纯化水，将该混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，过180μm的筛，获得干燥的产物。将相当于89.5mg GLP-1(7-36)NH2的一定量(约107mg)的作为肽组分的GLP-1(7-36)NH2粉末与上面获得的干燥的产物混合。将该混合物充分混合后，加入含有0.3mg苯扎氯铵的溶液，然后加入纯化水，将所得混合物捏合。捏合后，将该混合物在冷冻干燥器中减压干燥过夜，将该干燥的产物过180μm的筛。向该过筛的混合物中混合入相当于总重量的1.0％的一定量(约29mg)的硬脂酸钙，获得了约2.88g粉末样本。通过反相HPLC测定粉末样本中的GLP-1(7-36)NH2含量，制得了作为经鼻吸收用药物组合物的含有93μgGLP-1(7-36)NH2的3mg粉末样本。
工业实用性
如上所述，本发明提供了新型经鼻吸收用药物组合物，其中含有生物活性多肽，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和能将多肽均匀分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。本发明药物组合物改善了生物活性多肽的吸收性，特别是改善了等电点为7或低于7，由此具有低的溶液稳定性，难以通过包括口服给药在内的任何其它非注射途径给药的生物活性多肽的吸收性。
因此，本发明经鼻吸收用药物组合物使得能够经鼻施用或经鼻粘膜施用尚待确立可行非注射给药途径的粉末组合物形式的胰岛素分泌促进性多肽。这样，本发明组合物提高了多肽的生物利用度，并因此可用作临床有效的药物。所以本发明药物组合物具有显著的医药影响。

Claims (22)

1.经鼻吸收用药物组合物，其中包含等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和用于将多肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
2.权利要求1的经鼻吸收用药物组合物，其中包含等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和平均粒径为1μm-20μm的用于将多肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
3.权利要求1或2的经鼻吸收用药物组合物，其中包含等电点为7或低于7的酸性生物活性多肽，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和不溶于水或者在水中的溶解度很小、平均粒径为1μm-20μm的用于将多肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
4.权利要求1、2或3的经鼻吸收用药物组合物，其中所述不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体是多价金属化合物。
5.权利要求4的经鼻吸收用药物组合物，其中所述多价金属化合物是铝化合物、钙化合物、镁化合物、硅化合物、铁化合物或锌化合物。
6.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述铝化合物选自干燥的氢氧化铝凝胶、氯化氢氧化铝、合成硅酸铝、轻质氧化铝、胶态水合硅酸铝、氢氧化镁铝、氢氧化铝、氢氧化铝凝胶、硫酸铝、二羟基乙酸铝、硬脂酸铝、天然硅酸铝、一硬脂酸铝和硫酸铝钾。
7.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述钙化合物选自磷灰石、羟磷灰石、碳酸钙、乙二胺四乙酸钙二钠、氯化钙、柠檬酸钙、甘油磷酸钙、葡糖酸钙、硅酸钙、氧化钙、氢氧化钙、硬脂酸钙、三代磷酸钙、乳酸钙。泛酸钙、油酸钙、棕榈酸钙、D-泛酸钙、藻酸钙、无水磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、乙酸钙、糖酸钙、硫酸钙、磷酸一氢钙、对氨基水杨酸钙和生物钙化的化合物。
8.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述镁化合物选自L-天冬氨酸镁、氯化镁、葡糖酸镁、硅酸铝镁、硅酸镁、氧化镁、氢氧化镁、硬脂酸镁、碳酸镁、正硅酸铝镁、硫酸镁、硅酸钠镁和合成的硅酸钠镁。
9.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述硅化合物选自水合二氧化硅、轻质无水硅酸、合成水滑石、硅藻土和二氧化硅。
10.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述铁化合物是硫酸铁。
11.权利要求5的经鼻吸收用药物组合物，其中所述锌化合物选自氯化锌、硬脂酸锌、氧化锌和硫酸锌。
12.权利要求4-11任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中所述多价金属化合物的平均粒径为100μm或更小。
13.权利要求12的经鼻吸收用药物组合物，其中所述多价金属化合物的平均粒径为20-60μm。
14.权利要求1-13任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中所述酸性生物活性多肽选自降钙素、katacalcin、胆囊收缩素-12、胆囊收缩素-8、促肾上腺皮质素-促脂解素前体、促肾上腺皮质素样中间肽、促脂解素-β、促脂解素-γ、促黑素-β、促肾上腺皮质素释放素、内皮素-1、内皮素-2、内皮素-3、galanin信使相关肽、胃泌素-71、胃泌素-34、胃泌素-17、胃抑制多肽、肠高血糖素相关多肽、胰高血糖素、胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-1酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)、胰高血糖素样肽-1(9-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(9-37)、胰高血糖素样肽-2、exendin-3、exendin-4、胰岛素β-链、胰岛素α-链、胰岛素、原促性腺素释放素-I、促性腺素释放素-II、促性腺素释放素相关肽-I、神经调节肽C、胰岛素样蛋白(INSL)A-链、促胃动素相关肽E、亮氨酸-脑啡肽、蛋氨酸-脑啡肽、leumorphin、催产素、后叶激素运载蛋白-1、后叶激素运载蛋白-2、copeptin、神经调节肽B、神经调节肽N、神经肽Y、神经肽AF、PACAP相关肽、胰腺激素、pancreatic icosapeptide、肽YY、tyroliberin、neuroquinine A、urocortin、硬骨鱼紧张肽II、肠肽(PHM-27)和肠肽-42。
15.权利要求14的经鼻吸收用药物组合物，其中所述酸性生物活性多肽选自：胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-1酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基)}]-GLP-1(7-37)、胰高血糖素样肽-1(9-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(9-37)、胰高血糖素样肽-2、exendin-3、exendin-4、胰高血糖素、胃抑制肽、胰岛素及其衍生物。
16.权利要求1-13任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中包含肽肠降血糖素，不溶于水或者在水中的溶解度很小的载体，和用于将该肽分散和包埋在所述载体表面上的添加剂。
17.权利要求16的经鼻吸收用药物组合物，其中所述肽肠降血糖素选自：胰高血糖素样肽-1、胰高血糖素样肽-1酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺、[Val8]-胰高血糖素样肽-1(7-37)、[Lys26，ε-NH{γ-Glu(N-α-棕榈酰基))]-GLP-1(7-37)、胰高血糖素样肽-1(9-36)酰胺、胰高血糖素样肽-1(9-37)、胰高血糖素样肽-2、exendin-3、exendin-4、胰高血糖素、胃抑制肽、胰岛素及其衍生物。
18.权利要求1-17任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中所述添加剂是选自下列的淀粉：支链淀粉、直链淀粉或含有任何比例的支链淀粉和直链淀粉的混合物。
19.权利要求1-18任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中所述添加剂是米粉、稻米淀粉、稻米β-淀粉(非粘性稻米型)、稻米β-淀粉(粘性稻米型)、预胶化稻米淀粉(非粘性稻米型)、预胶化稻米淀粉(粘性稻米型)、玉米淀粉、玉米β-淀粉(非粘性稻米型)、玉米β-淀粉(粘性稻米型)、预胶化玉米淀粉(非粘性稻米型)、预胶化玉米淀粉(粘性稻米型)、马铃薯淀粉、马铃薯β-淀粉(非粘性稻米型)、预胶化马铃薯淀粉(非粘性稻米型)、预胶化小麦淀粉(非粘性稻米型)或它们的部分预胶化淀粉。
20.权利要求1-19任一项的经鼻吸收用药物组合物，其中所述添加剂是低聚糖、羧基乙烯基聚合物、聚维酮、羟丙基纤维素、黄原胶、果胶、藻酸钠、阿拉伯胶粉末或明胶。
21.药物组合物，它含有权利要求1-20任一项的经鼻吸收用药物组合物，还含有DPP-IV抑制剂。
22.权利要求21的药物组合物，其中所述DPP-IV抑制剂是diprotin A、杆菌肽或isoleucine thiazolidide。
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