MXPA04005025A - Composiciones farmaceuticas para absorcion nasal. - Google Patents

Abstract

Se pretende proveer composiciones medicinales para absorcion nasal que son excelentes en la capacidad de absorcion de un polipeptido fisiologicamente activo contenido en las mismas como el ingrediente activo in vivo en el caso de administracion en la cavidad nasal (administracion nasal). Mas especificamente, composiciones medicinales para absorcion nasal en donde un polipeptido fisiologicamente activo que tiene un punto isoelectrico de 7 o mas bajo, es dispersado o incrustado de manera uniforme en un portador de compuesto de metal polivalente insoluble en agua o dificilmente soluble en agua, por ejemplo, un compuesto de metal bivalente o mas tal como un compuesto de aluminio, un compuesto de calcio, un compuesto de magnesio, un compuesto de silicio, un compuesto de hierro o un compuesto de zinc con el uso de un aditivo por el cual el polipeptido se puede dispersar o incluir en la superficie del portador.

Description

tf - -.Bísete*» COMPOSICIONES FARMACEUTICAS PARA ABSORCION NASAL CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una composición farmacéutica para absorción nasal y, más en particular, a una composición farmacéutica para absorción nasal que contiene como un ingrediente activo un polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo y aditivos que aumentan la biodisponibilidad del péptido. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los polipéptidos biológicamente activos son compuestos de peso molecular alto que presentan diversas actividades farmacológicas específicas y son compuestos de una utilidad significativa que han sido usados en campos médicos para diversos propósitos. Por ejemplo, el péptido tipo glucagón I (llamado en adelante GLP-1) , una hormona peptídica derivada del precursor de. glucagón (proglucagón) , es conocido (Bell et al., Nature, 304, 368, 1983) . El proglucagón que ha sido identificado en mamíferos es una proteína precursora que consiste de 160 aminoácidos y es producida en células A de islotes pancreáticos (islotes de Langerhans) y células L intestinales. En el páncreas, el proglucagón es procesado por una enzima de procesamiento en glucagón y un fragmento de proglucagón principal mientras que, en el intestino, el proglucagón es procesado en una manera diferente para producir glicentina, GLP-1 y péptido tipo glucagón -2 (llamado en adelante GLP-2) (Mojsovr et al., J. Biol. Chem., 261, 11880, 1986). 5 El péptido formado de los aminoácidos 72-108 de proglucagón (equivalente a GLP-1) presenta una actividad para promover la secreción de insulina. Asimismo, GLP-1 (7-37) , el cual se forma como resultado de la remoción de los primeros 6 aminoácidos N-terminales de GLP-1 y GLP-1 (7-36) NH2, el cual 0 se forma como resultado de amidación de GLP-1 (7-37) en la posición 36, son los promotores más efectivos de la secreción de insulina entre otros promotores de secreción de insulina anteriormente conocidos ( ojsov et al., J. Clin. Invest., 79, 616, 1987) . Igualmente, tienen una actividad para suprimir la secreción de S glucagón. Se ha demostrado que el GLP-1 es secretado de células L intestinales en la circulación sanguínea en forma de GLP-1 (7- 36) H2 (Gutniak et al., N. Engl . J. Med. , 326, 1316, 1993). GLP-1 (7-36) N¾ es secretado inmediatamente de células L intestinales en respuesta a estímulos de ingestión 0 de alimento y actúa en el páncreas para promover la secreción de insulina. Al mismo tiempo, actúa para reducir la secreción de glucagón, incrementar la expresión de ARNm en células que secretan insulina, reducir la gluconeogénesis en el hígado y suprimir la actividad del tracto gastrointestinal . Esto 5 sugiere un papel vital de GLP-1, incluyendo GLP-1 (7-36) N¾, como una incretina (estimulante de la secreción de insulina) que se adapta a los requerimientos de metabolismo de energía en un cuerpo humano Al tener las actividades biológicas antes descritas, los péptidos encuentran una aplicación como un medicamento para tratar la diabetes. Específicamente, el GLP-1 (7-36) H2 se puede administrar antes de la comida para suprimir la elevación posterior a la comida en el nivel de glucosa en sangre de manera que pueda actuar como un agente terapéutico efectivo para los pacientes con diabetes tipo II. Fármacos de sulfonilurea, los cuales tienen una actividad similar de promover la secreción de insulina, están asociados con el riesgo de un nivel de glucosa en sangre excesivamente bajo ya que el fármaco presenta su actividad sin importar el nivel de glucosa en sangre. Cuando se administran durante un periodo prolongado, los fármacos pueden causar también que las células que producen insulina se vuelvan menos activas. En contraste, puesto que la actividad de GLP-1 (7-3S) NH2 para promover la secreción de insulina es regulada por un mecanismo de retroal imentación que refleja la concentración de glucosa en sangre, el GLP-1 (7-36) NH2 raramente produce un nivel de glucosa en sangre excesivamente bajo. Además, el GLP-1 (7-36) N¾ estimula las células que producen insulina. Por consiguiente, existe un contraste claro entre GLP-1 (7-36) NH2 y los fármacos de sulfonilurea actualmente en uso clínico como un medicamento para la diabetes.

Las diversas actividades de GLP-1 (7-36) N¾, entre las que se incluyen la supresión de gluconeogénesis en el hígado, activación de células que producen insulina, promoción de absorción de azúcar por el músculo, supresión de la actividad del tracto gastrointestinal y supresión del apetito a través del sistema nervioso central, han conducido a una expectativa de que, aparte de su actividad para corregir los niveles de glucosa en sangre posteriores a la comida, la administración de GLP-1 (7-36) NH2 durante un periodo prolongado puede normalizar y activar la integridad del metabolismo de glucosa sistémico y suprimir la obesidad, uno de los factores principales de la diabetes. Otro péptido que tiene una actividad de incretina similar (es decir, estimulación de la secreción de insulina) a GLP-1 (7-36) H2 es exendina-4, la cual fue aislada del monstruo de Gila (una especie de reptil) y cuya estructura se determinó. El péptido es menos susceptible a degradación en plasma sanguíneo que GLP-1 (7-36) Ht y es, por consiguiente, capaz de retener la actividad para promover la secreción de insulina durante un periodo de tiempo prolongado. Como con GLP-1 (7-36) NH2, se sabe que exendina-4 induce la diferenciación/neogénesis de células p. Debido a que la octava posición de GLP-1 (7-37) y GLP-1 (7-36) NH2 es cortada por dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) existente dentro del cuerpo vivo, derivado en el cual Ala en la octava posición es sustituida con un aminoácido no cortado fácilmente tal como Val, es decir, [Val8] -GLP-1 (7-37) y derivado en el cual GLP-1 es modificado con ácido graso para retrasar la vida media en plasma aparente al disolver el control de velocidad, es decir, [Lys26, e-NH{7-Glu(N-a-palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) se espera tengan el mismo efecto. Por otra parte, un estudio reciente mostró que GLP-1 (9-37) el cual es cortado en la octava posición, tiene el mismo efecto de reducción del nivel de glucosa en sangre (Deacon et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Matb. 282, 873-879, 2002) . Debido a este descubrimiento, es necesario verificar la ventaja de la conversión del residuo de aminoácido de GLP-1 (7-36) NH2 en la octava posición y la modificación de GLP-1 (7-36) H2 con ácido graso para retrasar la vida media en plasma aparente. El polipéptido inhibitorio gástrico (en adelante GIP) , un péptido que estimula la secreción de insulina en forma dependiente de la glucosa, se distingue de GLP-1 y exendina-4 en que el péptido, además de su actividad para promover la secreción de insulina, puede promover la secreción de glucagón. De estas incretinas peptídicas, GLP-1 (7-36) N¾ tiene una secuencia de aminoácidos común entre mamíferos y se considera un medicamento ideal contra la diabetes. Sin embargo, GLP-1 (7-36) N¾ es difícilmente absorbida desde tractos gastrointestinales debido a su naturaleza como péptido. Esto impide de manera significativa el desarrollo del péptido como un medicamento .para la diabetes. Como se sabe, aparte de la administración oral, el péptido se puede administrar en forma percutánea por medio de inyección subcutánea. Sin embargo, la inyección subcutánea a largo plazo se debe controlar bajo observación de médicos y al considerar la carga y dolores en los lugares de inyección, la inyección no es una vía adecuada para administración del medicamento a largo plazo para tratar la diabetes. Aunque el péptido puede corregir de manera efectiva los niveles altos de glucosa en sangre cuando se administra después de cada comida, la inyección subcutánea dada tres veces al día por lo visto no es una vía práctica para administrar el péptido. Además, no es probable que la inyección de insulina de tipo auto controlada, la cual es administrada no sólo al paciente con diabetes I, sino también al paciente con diabetes tipo II, se use en combinación con formulación inyectable de GLP-l tipo auto controlada. . A fin de solucionar los problemas antes descritos, se han realizado intentos para permitir que GLP-l (7-36) H2 sea absorbido a través de la mucosa de la cavidad oral en forma de una preparación en parche (Gutniak et al., Diabetes care, 2 , 1874, 1997). No obstante, esta forma particular de administración implica el uso de un mejorador de absorción, en este ejemplo, taurocolato de sodio, el cual es un tipo de ácido biliar y es altamente irritante. Como resultado, no se puede evitar la irritación y se puede perder la mucosa, lo cual hace esta vía de administración poco adecuada para administración a largo plazo. Por ende, a la fecha no ha existido una técnica práctica que no sea inyección para administrar GLP-1 (7-36) NH2 y otras incretinas peptídicas que sea segura, que pueda obtener una alta biodisponibilidad y que sea adecuada para el suministro frecuente del fármaco. Se ha esperado durante largo tiempo el desarrollo de tal técnica. A diferencia de los compuestos de peso molecular bajo, los polipéptidos biológicamente activos no son administrados de manera efectiva mediante ninguna vía de administración excepto la inyección. Las razones principales de esto son que los polipéptidos biológicamente activos son sometidos a la digestión por enzimas digestivas presentes en el estómago e intestinos delgado y grueso o en los epitelios absorbentes de estos órganos, cavidad nasal y pulmones y que los polipéptidos, debido a sus grandes pesos moleculares, no son transportados a través de las vías de transporte típicas. Por estas razones, preparaciones nasales de péptidos diseñadas para absorción nasal se han propuesto recientemente para servir como una técnica viable que no es inyección para administrar péptidos. Típicamente, tal preparación nasal de péptidos se administra al rociar una solución de péptidos con un nebulizador en una cavidad nasal en presencia de mej oradores de absorción. Un problema con este enfoque es que, de los diversos polipéptidos biológicamente activos conocidos, ciertos péptidos, entre los que se incluye GLP-1 (7-36) N¾, que tienen un punto isoeléctrico (en adelante pl) en un rango ácido o neutro tienden a volverse inestables en una solución ácida o neutra. Por ejemplo, observaciones por los presentes inventores han revelado que, mientras que una solución de GLP-1 (7-36) NH2, cuando se administra de manera nasal a ratas y otros animales, es absorbida hasta cierto grado, el péptido se vuelve insoluble cuando la solución es almacenada durante varias decenas de horas (ver Ejemplo de Referencia más adelante) . Por lo tanto, la preparación de solución no es adecuada para usar con la composición farmacéutica aún si es del tipo en el cual el péptido se disuelve cada vez que la preparación se usa . Asimismo, el glucagón y la, insulina tienen un punto isoeléctrico en un rango de pH ácido o neutro y se sabe que se vuelven insolubles o se cristalizan en una solución acida o neutra. Se conocen muchos de tales péptidos que tienen un punto isoeléctrico en un rango de pH ácido o neutro y, por consiguiente, se vuelven insolubles o se cristalizan en una solución ácida o neutra. Por lo tanto, es sustancialmente imposible administrar en forma nasal estos péptidos en forma de una preparación de solución acida o neutra. Por otra parte, se .espera que los polipéptidos biológicamente activos ácidos sean altamente solubles en un solvente alcalino (básico) . No obstante, cuando polipéptidos biológicamente activos ácidos fueron expuestos a una solución básica, el polipéptido biológicamente activo ácido no sólo se vuelve susceptible a degradación tal como hidrólisis, la cual puede tener lugar también en un ambiente ácido, sino también tiende a experimentar racemización. Como resultado, se disminuye su estabilidad química. Los polipéptidos biológicamente activos tanto ácidos como básicos pueden experimentar estas reacciones secundarias. Se sabe, por ejemplo, que la caseína (pl = aproximadamente 4.6), un polipéptido biológicamente activo básico, se vuelve inestable a medida que sus residuos de aminoácidos de ácido aspártico, fenilalanina, ácido glutámico y alanina experimentan racemización en una solución básica (Friedman et al., J. Food Sci . , 47, 760-764, 1982). Los ácidos orgánicos incluyen una variedad de materiales, entre los que se incluyen ácido acético y ácido butírico, cada uno es un compuesto biológico, y ácidos carboxílicos de cadena larga tales como ácido octanoico y ácido decanoico, ambos eran nutrientes. Muchos de estos ácidos orgánicos se pueden usar como aditivos en composición farmacéutica. Por otra parte, se sabe que muchas de las bases orgánicas, tales como serotonina y dopamina, presentan actividades farmacológicas. Metales alcalinos tales como sodio en muchos casos no son adecuados para usar como un aditivo en una composición farmacéutica ya que con frecuencia dificultan ajustar el pH de la composición y tienden a formar una sal con un péptido ácido, lo cual afecta las propiedades del péptido. Por estas razones no se prefiere, al considerar la estabilidad química y las elecciones de los componentes de aditivos, proveer el polipéptido biológicamente activo ácido en forma de una solución alcalina. Como se describe anteriormente, no se prefiere proveer polipéptidos biológicamente activos ácidos en forma de una preparación de solución ácida o neutra ni en forma de una preparación de solución alcalina. Por consiguiente, los polipéptidos biológicamente activos ácidos no son adecuados para usar en las preparaciones de solución para administración nasal. Para ciertos tipos de polipéptidos biológicamente activos, tales como insulina, . calcitonina, hormona paratiroidea (PTH) , hormona del crecimiento humano (HGH) y hormona del hipotálamo (LH-RH) , se han propuesto preparaciones en polvo para absorción nasal como una alternativa a la preparación nasal de tipo solución. Muchos compuesto se han examinado para el potencial como un portador para estas preparaciones en polvo para administración nasal y diferentes composiciones en polvo que usan diversos portadores diferentes han sido propuestas hasta ahora para administración nasal de los polipéptidos -biológicamente activos. A través del curso de estudios, se ha encontrado que sustancias que son insolubles o poco solubles en agua pero se pueden disolver en agua bajo condiciones ácidas, pueden servir como un portador altamente efectivo para la preparación en polvo para administración nasal de polipéptidos biológicamente activos. Por ejemplo, se han propuesto composiciones farmacéuticas para administración nasal que usan como un portador un compuesto de metal polivalente, tal como hidroxiapatita y carbonato de calcio (publicación de patente japonesa expuesta al público No. Hei 8-27031) , sustancias que tienen la capacidad de reparar o proteger la mucosa, en particular la mucosa gástrica (publicación de patente japonesa expuesta al público No. Hei 9-255586) , o granos en polvo (publicación de patente japonesa expuesta al público No. 2000-239187). Sin embargo, una preparación en polvo, la cual se formó al dispersar y adsorber GLP-1 ,(7-36) NH2 en el portador tal como el compuesto de metal polivalente, mostró biodisponibilidad de GLP-1 (7-36) NH2 de aproximadamente 4% en perros y 1% o menos en monos cuando se administró en forma nasal a los animales. Por consiguiente, la absorción nasal de la preparación fue menos que satisfactoria. Los polipéptidos biológicamente activos, tales como GLP-1 (7-36) NH2, cuyos puntos isoeléctricos se encuentran en un rango de pH ácido o neutro tienen una solubilidad baja en un rango de pH ácido o neutro y, aún cuando se disuelven en una solución, tienden a aglomerarse. Estos polipéptidos no pueden lograr una biodisponibilidad suficiente no sólo cuando se administran de manera nasal en forma de una solución sino incluso cuando se administran de manera nasal en forma de una preparación en polvo. Por lo tanto, aún se debe establecer una vía efectiva que no sea inyección para administrar estos péptidos. La composición para administración nasal que consiste de un péptido cíclico y portador de composición de metal polivalente se describe en WO 01/52894 A2. Además reveló que se puede agregar un mejorador de absorción tal como harina de arroz y almidón y el tamaño de partícula de esos mejoradores debe ser, de preferencia, 250 µ?? o menos, con mayor preferencia 20 a 180 µp?. No obstante, no hubo descripción referente al método para la mejora de la biodisponibilidad al agregar el mejorador con aproximadamente el mismo tamaño de partícula que, aquél del portador al polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo de la presente invención. Por consiguiente, un objeto de la presente invención es proveer una composición farmacéutica que permita la administración nasal de polipéptidos biológicamente activos con un punto isoeléctrico en un rango de pH ácido o neutro. Tales polipéptidos tienen una biodisponibilidad deficiente cuando se administran oralmente o través de otras vías de administración que no son inyección, tienen una solubilidad baja en un rango de pH ácido o neutro y tienden a aglomerarse aún cuando se disuelven en una solución. La 5 composición farmacéutica es segura y logra una alta biodisponibilidad mientras que no causa irritación. En un esfuerzo por encontrar una manera de alcanzar este objetivo, los presentes inventores examinaron posibles aditivos para el potencial como un componente de la 0 composición para administración nasal de los péptidos. Primero, se estudió el almidón para ver si puede ayudar a estabilizar el péptido como un aditivo. El almidón, un nutriente con abundancia de granos, es un material que se puede usar de manera segura como un S aditivo de la composición de absorción nasal. El almidón consiste de amilosa, la cual se compone de unidades de glucosa unidas mediante enlaces a- 1,4 para formar una cadena recta, y amilopectina, la cual inc!uye enlaces a-1,6 y por consiguiente, es ramificada. 0 Un compuesto de metal polivalente se usa como un portador en combinación con varios tipos diferentes de almidón que contienen amilosa y amilopectina en diversas proporciones como aditivos para preparar composiciones farmacéuticas para absorción nasal. Cada composición farmacéutica fue 5 examinada para su capacidad de absorción nasal. El efecto del tamaño de partícula de almidón como un aditivo de una composición farmacéutica en la mejora de la absorción nasal se examinó también. Como resultado, los presentes inventores han encontrado que la administración de la siguiente composición en polvo nasal en una cavidad nasal puede lograr una absorción nasal mejorada y por lo tanto, puede proveer un tratamiento clínico efectivo. Tal composición se prepara al dispersar e incluir de manera uniforme un polipéptido biológicamente activo ácido, tal como GLP-1 (7-36) NH2, en la superficie de un portador de compuesto de metal polivalente polvoso o cristalino que es ya sea insoluble o poco soluble en agua y tiene un tamaño de partícula promedio de 100 µp? o menos, tal como un compuesto de metal divalente o más alto, por ejemplo, compuestos de calcio, con la ayuda de un aditivo tal como polvo de arroz (polvo Domyo-ji) , almidón de maíz, almidón de papa y un almidón pregelatinizado o parcialmente pregelatinizado de los mismos, cada uno contiene amilopectina y amilosa a una proporción particular. Los presentes inventores han encontrado también que en el caso de usar almidón insoluble en agua como aditivos y compuesto de metal polivalente tal como carbonato de calcio con un tamaño de partícula promedio de 100 µp? o menos como portador, el almidón insoluble en agua con un tamaño de partícula más pequeño que aquél del portador muestra un efecto de facilitación de la absorción notable en el péptido ácido tal como GLP-1 (7-36) NH2. La presente invención se ha completado en base a estos descubrimientos. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Por lo tanto, la presente invención provee una composición farmacéutica para absorción nasal que incluye un polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo para dispersar e incluir el polipéptido en la superficie del portador. Asimismo, la presente invención provee una composición farmacéutica para absorción nasal que incluye un polipéptido biológicamente activo con su punto isoeléctrico de 7 o más bajo, esto es, en un rango de pH neutro o ácido, un portador de compuesto de metal polivalente y un aditivo para dispersar e incluir el polipéptido en la superficie del portador. Una modalidad específica de la composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal contiene, junto con el aditivo con, el tamaño de partícula promedio de 1 µtt? a 20 µp?, una dosificación efectiva del polipéptido biológicamente activo con su punto isoeléctrico dentro de un rango de pH neutro o ácido, de manera que el polipéptido es dispersado e incluido de manera uniforme en la superficie del portador de compuesto de metal polivalente en polvo o cristalino que tiene un tamaño de partícula promedio de 100 µ?t? o menos.

Otra modalidad específica de la composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal contiene incretina peptídica, un portador de compuesto de metal polivalente y, más específicamente, la presente invención se refiere al portador que contiene la composición que es insoluble o poco soluble en agua, junto con el compuesto de metal polivalente en forma de polvo fino o cristalizada que tiene un tamaño de partícula promedio de 100 µt? o menos y un aditivo para dispersar e incluir la incretina peptídica en la superficie del portador con el tamaño de partícula promedio de 1 µt? a 20 µ?t?.

El tamaño de partícula promedio de un aditivo presenta el tamaño de partícula promedio de una composición de almidón insoluble o poco soluble en agua en la superficie del portador, cuando la formulación se prepara mediante el método en la presente invención con el uso del almidón que se compone con almidón pregelatinizado o componentes que incluyen almidón pregelatinizado. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 es un diagrama que muestra cambios en las concentraciones en plasma de GLP-1 (7-36) N¾ en el ejemplo 2 después de administración subcutánea. La figura 2 es un diagrama que muestra los cursos en el tiempo de las concentraciones en plasma de GLP-1 (7-36) NH2 en el ejemplo 2 para administración nasal de composiciones libres de aditivos.

La figura 3 es un diagrama que muestra los cursos en el tiempo de las concentraciones en plasma de GLP-1 (7-36) NH2 en el ejemplo 2 para administración nasal de composiciones libres de aditivos con el uso de sucralfato como portador. La figura 4 es un diagrama que muestra los cursos en el tiempo de las concentraciones en plasma de GLP-1 (7-36) NH2 en el ejemplo 2 para administración nasal de composiciones contenidas en el aditivo. MODALIDAD PREFERIDA DE IA INVENCIÓN Como se describe anteriormente, la presente invención provee una composición farmacéutica para absorción nasal que tiene una alta biodisponibilidad y permite la administración nasal de polipéptidos biológicamente activos que tienen un punto isoeléctrico de 7 o más bajo que presentan una solubilidad baja en un rango de pH ácido o neutro y tienden a aglomerarse aún cuando se disuelven en una solución. Tales polipéptidos tienen una biodisponibilidad deficiente y no son adecuados para administración oral o administración a través de otras rutas que no sean inyección. En una modalidad preferida específica, la presente invención provee una composición farmacéutica para absorción nasal, que contiene derivados de GLP-1 tales como GLP-1, GLP-1 amida, GLP-1 (7-36) NH2, GLP-1 (9-36) NH2 , GLP-1 (9-37), GLP-1 (7-37), [Val8] -GLP-1 (7-36)NH2, [Val8] -GLP-1 (7-37) , [Lys26, -NH{y-Glu (N-a-palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) y GLP-2, exendina-3, exendina-4, glucagón, péptido inhibitorio gástrico (GIP) o insulina. La alta biodisponibilidad de la composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal se deriva de los polipeptidos biológicamente activos dispersados e incluidos en la superficie de un portador en una manera estable y uniforme con la ayuda de un aditivo. Al usar almidones insolubles en agua o poco solubles en agua beta o parcialmente pregelatinizados , usar almidón de arroz y almidón de maíz con un tamaño de partícula promedio pequeño puede expandir el área superficial y puede mejorar la elución y, por consiguiente, se puede mejorar la absorción. Por ende, los aditivos con el tamaño de partícula promedio de 1 µp? a 20 µp? se usan de preferencia para mejorar la absorción en la presente invención. Por lo tanto, el aditivo para usar en la presente invención puede ser cualquier aditivo que permita que el polipéptido biológicamente activo sea dispersado e incluido en la superficie del portador en, una manera estable y uniforme. Por ejemplo, almidones que contienen amilopectina y amilosa ya sea de manera independiente o a una proporción particular se pueden usar como tal aditivo. Los almidones obtenidos del arroz, maíz o similares se clasifican por lo general en almidones de tipo "arroz no glutinoso" que contienen amilopectina y amilosa a una relación de aproximadamente 7:3 a aproximadamente 8:2 y almidones tipo "arroz glutinoso" compuestos sustancialmente sólo de amilopectina. Específicamente, ejemplos del aditivo para usar en la presente ¦ invención incluyen harina de arroz, almidón de arroz, almidón de maíz, almidón de papa, almidón beta tal como almidón beta de arroz (tipo arroz no glutinoso) , almidón beta de arroz (tipo arroz glutinoso) , almidón beta de maíz (tipo arroz no glutinoso) , almidón beta de maíz (tipo arroz glutinoso) y almidón beta de papa (tipo arroz no glutinoso) ; almidón de arroz pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) , almidón de arroz pregelatinizado (tipo arroz glutinoso) , almidón de maíz pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) , almidón de maíz pregelatinizado (tipo arroz glutinoso) , almidón de papa pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) , almidón de trigo pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) y almidón parcialmente pregelatinizado de los mismos. Aunque poco solubles en agua, los almidones se pueden gelatinizar al calentar con agua para hacer que su estructura de cristal se afloje. Tanto el almidón completamente gelatinizado (almidón pregelatinizado o almidón alfa) como el almidón parcialmente pregelatinizado se pueden usar para servir como el aditivo de la presente invención. La harina de arroz se hace al moler albúmenes de semillas de arroz, que permanecen después de que las semillas son desprovistas de vainas y embriones. La harina de arroz es rica en almidón y se usa comúnmente en aditivos de alimentos y farmacéuticos. En la presente invención, harinas de arroz sin tratamiento por calor que se componen de almidón beta se prefieren a las harinas de arroz tratadas por calor que contienen almidón pregelatinizado (almidón alfa) o almidón parcialmente pregelatinizado; sin embargo, se puede usar polvo de arroz tratado por calor. Un ejemplo de la harina de arroz preferida es el polvo Domyo-ji que contiene almidón de arroz pregelatinizado. Además, no sólo el almidón de maíz que se compone de almidón beta, sino también almidón de maíz parcialmente pregelatinizado o pregelatinizado (almidón alfa) se pueden usar en la presente invención. Además , se pueden usar mezclas de estos almidones como el aditivo de las conposiciones nasales de la presente invención. Asimismo, oligosacáridos, polímero de carboxivinilo, povidona, hidroxipropilcelulosa (HPC) , goma de xantano, pectina, alginato de sodio, goma arábiga en polvo y gelatina se pueden usar también como el aditivo en la presente invención. Los polipéptidos biológicamente activos usados en la composición de la presente invenoión para absorción nasal son aquéllos que tienen un punto isoeléctrico (pl) de 7 o más bajo. Tales polipéptidos presentan una baja solubilidad en un rango de pH ácido o neutro y tienden a aglomerarse aún cuando se disuelven en una solución. Ejemplos de los polipéptidos biológicamente activos preferidos se muestran a continuación junto con sus puntos isoeléctricos respectivos: GLP-1 (pl= 5.05); GLP-1 amida (pl= 5.47); GLP-1 (7-36) N¾ (pl= 6.76); GLP-1 (7-37) (pl= 5.53) ; -GLP-1 (9-36) NH2 (pl= 4.68); GLP-1 (9-37) (pl= 4.87); [Val8] -GLP-l (7-36) NH2 (pl= 6.76); [Vale] -GLP-1 (7-37) (pl= 5.53); [Lys26, -NHfr-GlutN-a-palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) (pl= 4.57); GLP-2 (pl= 4.45); exendina-3 (pl= 4.96); exendina-4 (pl= 4.96); glucagón (pl= 6.75); y péptido inhibitorio gástrico (GIP) (pl= 6.92); insulina (pl= 5.39). Otros polipéptidos biológicamente activos que se pueden administrar de manera nasal se pueden usar también, los ejemplos son los siguientes (a continuación, pl significa un punto isoeléctrico, PM significa un peso molecular y todos los compuestos se derivan de humanos excepto la exendina-3 y exendina-4) : calcitonina (pl : 6.72, PM: 3420.88), catacalcina (pl: 5.26, PM: 2436.62), colecistocinina- 12 (pl : 3.93, PM: 1535.71), colecistocinina-8 (pl : 3.56, PM: 1064.20), precursor de corticotropina-lipotropina (pl: 5.22, PM: 8469.32), péptido intermedio tipo cwrticotropina (pl : 3.91, PM: 2309.51) , lipotropina-ß (pl: 6.17, PM: 9805.94), lipotropina-y (pl : 4.66, PM: 6074.57), melanotropina-ß (pl : 5.57, PM: 2204.40), corticoliberina (pl : 5.09, PM: 4758.49), endotelina-1 (pl : 4.54, PM: 2495.94), endotelina-2 (pl : 4.54, PM: 2550.9), endotelina-3 (pl : 5.38, PM: 2647.09), péptido asociado con el mensaje de galanina (pl : 4.49, PM: 6671.52), gastrina-71 (pl: 5.17, PM: 8066.88), gastrina-34 (pl : 4.25, PM: 3867.26), gastrina-17 (pl : 3.40, PM : 2116.24), polipéptido inhibitorio gástrico (pl : 6.92, PM: 4983.59), polipéptido relacionado con glicentina (pl: 4.13, PM: 3384.50), glucagón (pl : 6.75, PM: 3482.79), péptido tipo 5 glucagón-1 (pl : 5.05, PM: 4167.02), péptido tipo glucagón-1 amida (pl: 5.47, PM: 4111.50), péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida (pl : 6.76, PM: 3297.68), péptido tipo glucagón-1 (7-37) (pl: 5.53, PM: 3355.71), [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida (pl : 6.76, PM: 3326.74), [Val8]- péptido tipo 10 glucagón-1 (7-37) (pl : 5.53, PM: 3383.87), [Lys26, e-?? (?-Glu (?-a-palmitoil ) } ] -GLP- 1 (7-37) (pl : 4.57, PM: 3751.2), GLP-l (9-36) NH2 (pl : 4.68, PM: 2933.2), GLP-l (9-37) (pl : 4.87, PM: 3090.4), péptido tipo glucagón-2 (pl : 4.21, PM: 3922.35), exendina-3 (pl : 4.96, PM: 4202.63), 15 exendina-4 (pl : 4.96, PM: 4186.60), cadena de insulina ß (pl : 6.90, PM: 3429.96), cadena de insulina a (pl : 3.79, PM: 2383), insulina (pl : 5.39, PM: 5807.6), progonadoliberina-I (pl: 5.63, PM: 7893.83), gonadoliberina-II (pl: 6.92, PM: 1254.33), péptido relacionado con gonadoliberina- I (pl : 4.67, 20 PM: 6370.11), neuromedina C (pl : 6.92, PM: 1121.28), cadena A de proteína tipo insulina (INSL) (pl : 6.36, PM: 3542.16), péptido relacionado con motilina E (pl . : 4.72, PM: 7433.47), leucina-encef liña (pl : 5.52, PM: 555.63), metionina- encefalina (pl : 5.52, PM: 573.66), leumorfina (pl : 6.21, PM: 25 3351.68), oxitocina (pl : 5.51, PM: 1010.19), neurofisina- 1 ( l: 4.94, PM: 9600.88), neurofisina-2 (pl : 5.05, PM: 9787.07), copeptina (pl: 4.11,- P : 4021.46), neuromedina B (pl: 6.74, PM: 1133.29), neuromedina N (pl : 5.52, PM: 617.79), neuropéptido Y (pl: 6.76, PM: 4272.72), neuropéptido AF (pl: 6.05, PM: 1979.18), péptido relacionado con PACAP (pl : 5.38, PM: 4800.32), hormona pancreática (pl : 6.26, PM: 4182.74), icosapéptido pancreático (pl : 6.01, PM: 2235.44), péptido YY (pl: 6.77, PM: 4310.80), tiroliberina (pl : 6.74, PM: 380.40), neuroquinina A (pl : 6.74, PM: 1134.32), urocortina (pl : 5.58, PM: 4697.29), urotensina II (pl: 4.37, PM: 1390.59), péptido intestinal (PHM-27) (pl : 6.75, PM: 2986.43), y péptido intestinal -42 (pl : 6.76, PM: 4552.18).

Además de aquéllos mostrados anteriormente, la composición de la presente invención puede ser cualquier péptido biológicamente activo que se pueda administrar de manera nasal . En la presente invención, el portador para llevar el polipéptido biológicamente activo junto con el aditivo incluye portadores insolubles o poco solubles en agua. Por ejemplo, se pueden usar compuestos de metal polivalente con una valencia de 2 o más alta seleccionados de compuestos de aluminio, compuestos de calcio, compuestos de magnesio, compuestos de silicio, compuestos de hierro o compuestos de zinc . Específicamente, ejemplos de cada tipo de los compuestos de metal polivalente son los siguientes: el compuesto de aluminio incluye gel de hidróxido de aluminio secado, clorohidroxi aluminio, silicato de aluminio sintético, óxido de aluminio ligero, silicato de aluminio hidroso coloidal, hidróxido de aluminio-magnesio, hidróxido de aluminio, gel de hidróxido de aluminio, sulfato de aluminio, acetato de dihidroxialuminio, estearato de aluminio, silicato de aluminio natural, monoestearato de aluminio y sulfato de aluminio-potasio. El compuesto de calcio incluye apatita, hidroxiapatita, carbonato de calcio, edetato calcico disódico, cloruro de calcio, citrato de calcio, glicerofosf to de calcio, gluconato de calcio, silicato de calcio, óxido de calcio, hidróxido de calcio, estearato de calcio, fosfato terciario de calcio, lactato de calcio, pantotenato de calcio, oleato de calcio, palmitato de calcio, pantotenato de D-calcio, alginato de calcio, fosfato de calcio anhidro, fosfato hidrogenado de calcio, fosfato dihidrogenado de calcio, acetato de calcio, sacarato de calcio, sulfato , de calcio, fosfato monohidrogenado de calcio, para-aminosalicilato de calcio y compuestos biológicamente calcificados. El compuesto de magnesio incluye L-aspartato de magnesio, cloruro de magnesio, gluconato de magnesio, aluminosilicato de magnesio, silicato de magnesio, óxido de magnesio, hidróxido de magnesio, estearato de magnesio, carbonato de magnesio, aluminometasilicato de magnesio, sulfato de magnesio, silicato de magnesio-sodio y silicato de magnesio-sodio ¦ sintético. El compuesto de silicio incluye dióxido de silicio hidroso, ácido silícico anhidro ligero, hidrotalcita sintética, diatomita y dióxido de silicio. El compuesto de hierro incluye sulfato de hierro. El compuesto de zinc incluye cloruro de zinc, estearato de zinc, óxido de zinc y sulfato de zinc. Los compuestos de metal polivalente se pueden usar ya sea de manera individual o como una mezcla de dos o más compuestos. De los compuestos de metal polivalente, compuestos de calcio tales como hidroxiapatita, carbonato de calcio o lactato de calcio produjeron resultados favorables.

Si el tamaño de partícula promedio del compuesto de metal polivalente es demasiado grande, entonces el rendimiento de aspersión del compuesto empeora y las partículas se precipitan rápidamente. A la inversa, si el tamaño de partícula promedio es demasiado pequeño, entonces las partículas difícilmente pueden permanecer en la cavidad nasal y son inhaladas dentro de los bronquios y pulmones . Por lo tanto, se prefiere que el compuesto de metal polivalente tenga un tamaño de partícula promedio de 10 a 100 µp, con mayor preferencia 20 a 60 µp?, de manera que el compuesto de metal pueda permanecer de manera eficiente en la cavidad nasal .

Aunque la cantidad del polipéptido biológicamente activo en la composición de la presente invención para dar una dosis efectiva del polipéptido puede variar dependiendo de muchos factores, entre los que se incluyen el tipo de la sustancia activa que se va a seleccionar, el tipo de enfermedad que se va a tratar, el número deseado de veces de administración, la edad de los pacientes, el peso, gravedad de los síntomas, vía de administración, efectos deseados y otros factores, se prefiere que, en el caso de GLP-1 (7-36) amida, por ejemplo, la composición de la presente invención sea administrada de manera nasal en una dosis que pueda suministrar 50 a 5000 µ de GLP-1 (7-36) amida. Específicamente, una dosis efectiva del polipéptido biológicamente activo se mezcla en seco con el portador (por ejemplo, el compuesto de metal polivalente, que incluye el compuesto de calcio, el compuesto de aluminio, el compuesto de magnesio, el compuesto de silicio, el compuesto de hierro y el compuesto de zinc) y el aditivo. El portador, insoluble o poco soluble en agua, se provee en forma de polvo o cristal y tiene un tamaño de partícula promedio de 250 µp? o menos, de preferencia 100 µp? o menos y con mayor preferencia 20 a 60 µt?. De manera alternativa, los componentes se pueden mezclar en húmedo entre sí en agua o en un solvente orgánico tal como etanol y después secar. De estas maneras, el polipéptido biológicamente activo es dispersado e incluido de manera uniforme en las superficies del portador para dar la composición farmacéutica de la presente invención para - absorción nasal. - La composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal puede contener de manera apropiada portadores usados comúnmente en la formulación de fármacos, entre los que se incluyen lubricante, inhibidor de DPP-IV, excipiente, espesante, sustentador, estabilizador, antioxidante, aglutinante, desintegrante, humectante, agente de coloración, fragancia, sabor, agente de suspensión, emulsificante, solubilizante, agente de regulación de pH, agente de isotonización, agente tensioactivo, agente suavizante y otros componentes funcionales diversos. El lubricante incluye estearato de calcio, estearato de magnesio, estearato de aluminio, ácido esteárico y talco. El estabilizador incluye sales de amonio cuaternario tales como cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, cloruro de cetilpiridinip, ésteres de ácido graso de polioxietilen sorbitán tales como monooleato de polioxietilen sorbitán (Tween 80) y ésteres de ácido graso de sorbitán tales como monooleato de sorbitán (Span 80) . Cuando se usa un polipéptido biológicamente activo ácido, tal como GLP-1, que es susceptible a desintegración por dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) , se prefiere que la composición farmacéutica contenga un inhibidor de DPP-IV.

Ejemplos del inhibidor de DPP-IV incluyen diprotina A, bacitracina y tiazoliduro- de isoleucina. Aunque la cantidad añadida del inhibidor de DPP-IV puede variar dependiendo de la actividad inhibitoria de cada inhibidor, se 5 puede añadir a la composición farmacéutica en una cantidad aproximadamente 1 a 10,000 veces el peso del polipéptido biológicamente activo o el ingrediente activo. En la producción de la composición de la presente invención, la cantidad del polipéptido biológicamente activo 10 se selecciona de preferencia para estar en un rango de 0.005 a 50%, con mayor preferencia en un rango de 0.01 a 20% y aún con mayor preferencia en un rango de 0.1 a 10.0%, suponiendo que el peso de la preparación es 100%. La cantidad del portador en la composición de la presente invención puede ser 15 cualquier cantidad adecuada para uso clínico y está, por ejemplo, en un rango de 70 a 99.995%, de preferencia en un rango de 80 a 99.99%, aún con mayor preferencia en un rango de 90 a 99.9%, suponiendo que el peso de la preparación es 100%. Con la cantidad del portador dentro de estos rangos, se 20 puede lograr una mejor absorción nasal. La cantidad del aditivo en la composición de la presente invención está, por ejemplo, en un rango de 0.005 a 50%, de preferencia en un rango de 0.01 a 20%, con mayor preferencia en un rango de 0.05% a 10.0%, suponiendo que el peso de la preparación es 25 100%.

La composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal se puede obtener al mezclar el portador de compuesto de metal polivalente, el cual es insoluble o poco soluble en agua, el polipéptido biológicamente activo y el aditivo. En un ejemplo, un polvo de GLP-1 (7-36) N¾ para servir como el componente peptídico se mezcla por completo con almidón de maíz. La mezcla es colocada luego en un contenedor al cual se agrega gradualmente carbonato de calcio junto con pequeñas cantidades de agua purificada para formar una suspensión. La suspensión es secada durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida. Los productos secados se filtran a través de un tamiz y, si se desea, se mezcla una cantidad apropiada de estearato de calcio. Esto da la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal se puede obtener también al formar primero la suspensión mediante almidón de maíz y carbonato de calcio agregados junto con pequeñas cantidades de agua purificada. Luego, la mezcla se coloca en un contenedor al cual se agrega gradualmente un polvo de GLP-1 (7-36) NH2 y se amasa con el agua que contiene cloruro de benzalconio. La mezcla se seca y filtra y después se mezcla una cantidad apropiada de estearato de calcio. Esto da también la composición farmacéutica de la presente invención.

Con cantidades apropiadas de la composición farmacéutica resultante para - absorción nasal se llenan cápsulas hechas de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , almidón o gelatina y las cápsulas se empacan de manera apropiada, de preferencia de manera sellada. Un empaque sellado preferido es una combinación de un empaque de burbuja con un empaque de aluminio. De ser necesario, se puede colocar un desecante en la bolsa de aluminio. Es aconsejable que el proceso conpleto se lleve a cabo a 60% o más bajo de la humedad. EJEMPLOS La presente invención se describirá ahora en mayor detalle con referencia a los ejemplos, los cuales no pretenden limitar el alcance de la invención en modo alguno.

A menos que se especifique otra cosa, los métodos y equipo de prueba que se describen a continuación se usan en los ejemplos. Las abreviaciones principales uaadaa en la presente especificación tienen los siguientes significados: Fmoc fluorenilmetoxicarbonilo Boc; ter. Butoxicarbonilo Trt ; tritilo Pmc; pentametilcromansulfonilo DCC; diciclohexilcarbodiimida HOBt N-hidroxibezotriazol TFA ácido trifluoroacético DIPEA; diisopropiletilamina DMF; dimetilformamida MP; ¦ N-metilpirrolidona TFE; trifluoroetanol 1. Análisis de péptidos mediante CIAR El siguiente equipo y condiciones se usaron para realizar una CLAR de fase inversa para determinar el contenido de péptido en las preparaciones y para el propósito de análisis de péptidos en la prueba de estabilidad. Instrumento: sistema SHIMADZU LC-9A Columna: YMC-PROTEÍNA-RP (4.6 mm«> x 150 mm) Temperatura de la columna 40°C eluente acetonitrilo en 0.1% ácido trifluoroacético, con la concentración de acetonitrilo variada linealmente en 10 minutos. Velocidad de flujo: 1 ml/minuto Detección: UV (214 nm) Volumen cargado 50 µ?, 2. Espectrometría de masa. La masa del péptido se determinó con el uso del siguiente equipo y condiciones. Instrumento: Finnigan MAT TSQMS Fuente de iones: ESI Modo de detección de iones: Positivo Voltaje de aspersión: 4.5 kV Temperatura capilar: 250°C Fase móvil: 0.2% mezcla (1:1) de ácido acético/metanol Velocidad de flujo: - 0.2 ml/minuto Rango de exploración m/z 550 a 850 3. Análisis de secuencia de aminoácidos El siguiente instrumento se usó para analizar las secuencias de aminoácidos del péptido: Instrumento: secuenciador Perkin Elmer 477A 4. Análisis de la composición de aminoácidos El siguiente instrumento se usó para analizar la composición de aminoácidos del péptido: Instrumento: analizador de aminoácidos Hitachi L-8500 5. Conservación de muestras (prueba de estabilidad) Las muestras se almacenaron en el siguiente incubador bajo la siguiente condición de temperatura: Instrumento: Nagano Science LH-30-14 Ajustes de temperatura: 40, ± 2°C, 25 + 1°C 6. Secado por congelamiento Instrumento: se usó FZ-6 de LABCONCO Corp. 7. Medición de la concentración en plasma Después de la administración de la composición farmacéutica, la concentración de GLP-1 (7-36) NH2 en plasma se midió por medio de radioinmunoensayo (RIA) o inmunoanálisis ligado a enzimas (ELISA) . 7-1. Radioinmunoensayo (RIA) Un conejo fue sensibilizado con un adyuvante mixto de GLP-l (7-36) N¾ y tiroglobulina de bovino para obtener un antisuero (fracción IgG) . El plasma se colocó en un tubo de ensayo junto con un anticuerpo de conejo anti- GLP-l (7-36) NH2 obtenido del antisuero y la mezcla se dejó reposar durante toda la noche a 4°C. Posteriormente, se agregó 125l-GLP-1 (7-36) NH2 y la mezcla se dejó reposar durante toda la noche a 4°C. Luego se agregó un suero de cabra anti-IgG de conejo y la mezcla se dejó reposar durante 1 hora a 4°C. La muestra resultante se centrifugó y la radioactividad (rayo gamma) del precipitado se midió por medio de un contador gamma. 1-2. Inmunoanálisis ligado a enzimas (ELISA) Anticuerpo anti- GLP-l (7-36) NH2 (anticuerpo policlonal de conejo) fue inmovilizado en una placa de 96 cavidades. El plasma se agregó a la placa y la reacción se dejó continuar durante 2 horas. Después de lavar la placa, se agregó un anticuerpo anti- GLP-l, (7-36) NH2 (anticuerpo policlonal de ratón) marcado con peroxidasa de rábano picante y la reacción se dejó continuar durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de lavar la placa, se agregó tetrametilbencidina para la reacción. Se midió la absorbancia a 450 nm. 8. Cálculo de puntos isoeléctricos (pl) de polipéptidos biológicamente activos Se usó el Servidor de Biología Molecular ExPASy (Sistema Experto de Análisis de Proteínas), Instituto Suizo de Bioinformática. Para el cálculo de- amidas C-terminales, uno de los residuos Asp o Glu en la secuencia fue reemplazado con Asn o Gln. 9. Síntesis del péptido (péptido de incretina) Con el uso de un sintetizador 433A, la resina de péptido conservada se sintetiza de acuerdo con FastFmoc (0.25 mmoles) del estándar ABI . 10. Distribución del tamaño de partícula (Medición del tamaño de partícula de carbonato de calcio y almidón) Instrumento: se usó el Analizador de difracción de láser (RODOS SR) , SYMPATEC HELOS & RODOS Corp. Ejemplo de referencia 1: Preparación de GLP-1 (7-36) NH2 Un plásmido de expresión pG97ompPR para expresar una proteína de fusión que consiste de un derivado de ß-galactosidasa de Escherichia coli (ß-gal 97) , un enlazador de 25 aminoácidos de longitud y GLP-1 (7-37) se preparó (publicación de patente internacional No. W099/38984). La región de enlazador de la proteína de fusión expresada incluye un motivo de corte para ompT proteasa (Arg-Arg) y un motivo de corte para Kex2 proteasa (Pro-Arg) y es cortada por las proteasas en los sitios de corte respectivos. A fin de obtener la proteína de fusión, pG97ompPR se introdujo en una cepa de Bscherichia coli descendida de la cepa W3110. Los transformantes resultantes fueron incubados en un medio de crecimiento que contenía extractos de levadura, sales inorgánicas y glucosa en un incubador de 300 L. Las células fueron incubabas -hasta que la concentración de bacterias alcanzó OD660 = 180. La solución de cultivo resultante fue procesada en un homogenizador de alta presión 5 para destruir los cuerpos celulares y después fue centrifugada para recolectar el cuerpo de inclusión. El precipitado que contenía el cuerpo de inclusión fue resuspendido en agua desionizada, centrifugado para lavar el cuerpo de inclusión y después fue resuspendido en agua 10 desionizada para obtener un condensado (aproximadamente 30 L) del cuerpo de inclusión con un OD660 de 1000. A 3.9 L del condensado de cuerpo de inclusión, 1 L de Tris-HCl 1M con un pH no ajustado se agregó junto con 10 L de urea 8M. Después se añadió agua desionizada a un volumen 15 final de 20 L. El pH de la solución resultante se ajustó a 6.5 con 5N ácido clorhídrico y la solución se mantuvo a 37 °C durante 2 horas para dejar que la proteasa OmpT de Escheri hia coli presente en el cuerpo de inclusión actuara en la proteína de fusión y cortar así GLP-1 (7-37) que tiene 20 13 aminoácidos agregados a su N-terminal (llamado en adelante RHHGP[G]). Después de que la reacción se completó, se agregó polvo de urea a la mezcla de reacción a una concentración de 7M y el pH se ajustó a 8.0 con 5N NaOH. Después, la mezcla de reacción se prensó mediante filtro para obtener un 25 sobrenadante de 30 L. El sobrenadante fue cargado a una columna de Cuentas Grandes de Sefarosa SP (140 mm ID x 160 mm, Amersham Pharmacia Biotechnology) equilibrada con una solución de urea 5M /Tris-HCl 20mM (pH 8.0) /0.1% Tween 80 y luego se lavó con una solución de NaCl 0.2M/ Tris-HCl 20mM 5 (pH 8.0)/0.1% Tween 80. Posteriormente, RHHGP [G] se eluyó con solución de NaCl 0.5M /Tris-HCl 20mM (pH 8.0)/0.1% Tween 80 y, como resultado, se obtuvo una fracción (aproximadamente 20 L) que contenía aproximadamente 100 g de RHHGP [G] . Con el uso de agua purificada (agua UF) , la 10 fracción de RHHGP [G] resultante se ajustó a 5.0 mg/mL. A la solución, se agregaron acetato de sodio 20mM (pH 5.2), sulfato de cobre 5.0 µ?, 0.5g/L- ácido ascórbico, 1 mg/L catalasa, 0.1% Tween 80 y 1500 unidades/mL de enzima de amidación. Luego, la mezcla de reacción se dejó continuar a 15 32 °C durante 80 minutos mientras se soplaba oxígeno en la solución para mantener la concentración de oxígeno disuelta al 100%. Como resultado, la C-terminal de RHHGP [G] se amidó para formar una forma de amida (RHHGP- 1) . A la solución, se agregaron Tris-HCl (pH 8.0), Tween 80, cloruro de calcio y 20 Kex2 proteasa a concentraciones finales de 20 mM, 0.1%, 1 mM y 8,000 U/mL, respectivamente, y la reacción se dejó continuar a 32°C durante dos horas y media. 13 aminoácidos fueron retirados de la N-terminal de RHHGP- 1 para formar GLP-1 (7-36) NH2 libre. Una porción de 25 aproximadamente 10 L (3.4 g/L) de la solución anterior se diluyó (a 26 L) con 0.3% Tween 80/ regulador de pH Briton Robinson (llamado en adelante BR) 20 mM (pH 4.5) y se cargó en una columna de cronatcgraf ía de intercambio de cationes (90 mra ID x 400 mm, MacroPrep High-S, Biorad) equilibrada con NaCl 20mM /0.3% Tween 80/ regulador de pH BR 20mM (pH 4.5). Después de lavar con la misma solución, GLP-1 (7-36) H2 se eluyó con una solución A (regulador de pH BR 20nM (pH 6.0)/ NaCl 20m /0.3% Tween 80) y una solución B (regulador de pH BR 20mM (pH 7.5) /NaCl 20mM /0.3% Tween 80) mientras que la proporción de la solución B en el eluente se varió linealmente de 50% a 100% para formar un gradiente lineal. La fracción resultante con una pureza de 98% o superior se diluyó con agua UF a una concentración de GLP-1 (7-36) NH2 de 6 mg/mL y se cargó en una columna Prep C18 (90 mm ID x 240 mm) (Waters) equilibrada con acetato de sodio 20 mM (pH 4.5) . Después de lavar con una solución de acetonitrilo al 10% que contenía acetato de sodio 20 mM (pH 4.5) y 0.2% ácido acético, GLP-1 (7-36) NH2 se eluyó con una solución de acetonitrilo al 30% que contenía 2% de ácido acético para obtener una solución (2.5 L) que contiene 27 g de GLP-1 (7-36) NH2. Con el uso de un evaporador, el actetonitrilo fue retirado del eluente y la concentración de GLP-1 (7-36) N¾ se ajustó a 10 mg/mL con agua para inyección. Después, la solución se secó por congelamiento en el secador por congelamiento RL-903BS (Kyowa Vacuum Engineering Co., Ltd.) para obtener 22 g del producto de GLP-1 (7-36) NH2 secado por congelamiento.

El producto obtenido tuvo el siguiento peso molecular y composición de aminoácidos y fue identificado así como GLP-1 (7-36) H2. ESI-EM: 3297.4 (valor teórico: 3297.68) . Composición de aminoácidos estándar Leu después de hidrólisis con 6N ácido clorhídrico: Asp 1.0; (1), Thr; 2.0 (2) , Ser; 2.7 (3) , Glu; 4.0 (4) , Gly; 3.0 (3) , Ala; 4.1 (4), Val; 2.0 (2) , lie; 1.0 (1) , Leu; 2.0 , Tyr; 1.0 (1) , Phe; 2.1 (2), Lys; 2.0 (2) , His; 1.0 (1), Arg; 1.0 (1) . Ejemplo de referencia 2: Prueba para absorción nasal de la solución de composición farmacéutica de GLP-1 (7-36) NH2 con el uso de ratas Aproximadamente 10 mg de GLP-1 (7-36) H2 obtenido en el ejemplo de referencia 1, 180 mg de sacarosa, 8 mg de ácido cítrico anhidro y 0.2 mg de cloruro de benzalconio se disolvieron en 2 mL de agua para formar una solución de muestra con una concentración de 5 mg/mL como se midió mediante CLAR de fase inversa. Ratas SD macho, con edades de 7 a 9 semanas y que pesaban aproximadamente 250 g (Crj : CD, Charles River Japan Inc.,), se mantuvieron en una jaula de metal con un ciclo de día/noche de 12 horas mientras se mantenía la temperatura a 22 + 5°C y la humedad a 30 a 70%. Se permitió que las ratas se alimentaran libremente con alimento sólido y agua corriente y fueron sometidas a ayuno durante 24 horas antes de la prueba (3 animales por grupo) . Para administración nasal, se colocó una cánula en la arteria femoral bajo anestesia con pentobarbital y 5 µL de la solución de- muestra -se administraron en la cavidad nasal izquierda con una pipeta de precisión (aproximadamente 100 µg/kg) . La sangre se recolectó en un tubo que contenia anticoagulante e inhibidor de enzima a 0, 5, 10, 15, 20, 30, 60 y 90 minutos después de la administración y se centrifugó para obtener plasma. La concentración de GLP-1 (7-36) NH; en el plasma se midió mediante RIA con el uso de anticuerpo anti-GLP-1 (7-36) NH2. Para administración subcutánea, la solución de muestra para administración subcutánea (aproximadamente 15 µq/mL) se administró en forma subcutánea en la espalda de las ratas con el uso de una jeringa a una dosificación de 1 mL/kg. La concentración de GLP-1 (7-36) ¾ en el plasma se determinó de la misma manera que en la administración nasal. Los resultados se muestran en la Tabla 1 que aparece a continuación. TABLA 1 Absorción nasal de solución de composición farmacéutica de GLP-1 (7-36) NH, (en ratas) Media ± SD (n=3) Como se puede ver a partir de los resultados anteriores, la biodisponibilidad fue 11.2 ± 6.5% (media ± SD, n = 3), lo que indica que GLP-1 (7-36) NH2 fue absorbido de manera efectiva desde la mucosa -nasal . E emplo de referencia 3 : Estabilidad de la solución de composición farmacéutica de GLP-1 (7-36) NH2 La solución de muestra de GLP-1 (7-36) NH2 preparada en el ejemplo de referencia 2 se almacenó a 25°C y 40°C. Los resultados se muestran en la tabla 2 que aparece a continuación. Como se puede ver a partir de los resultados, se observó formación de pequeñas partículas después de una semana en cada condición de temperatura. TABLA 2 Estabilidad de solución acuosa de GLP-1 (7-36) NH2 en 0.4% ácido acético Concentración de péptido: 5 mg/mL 0.4% ácido cítrico anhidro 9% sacarosa 0.01% cloruro de benzalconio Aunque los resultados del ejemplo de referencia 2 indican que la solución de la composición farmacéutica que contiene GLP-1 (7-36) NH2 tiene la capacidad de ser absorbida en forma nasal por ratas, la estabilidad fisicoquímica de la solución es baja cuando la solución tiene un pH de aproximadamente 2.7. Por consiguiente, la solución de la composición farmacéutica no es favorable cuando tiene ese pH. Ejemplo de referencia 4: Estabilidad de la solución de GLP-1 (7-36) NH2 Una solución A de 1, 000 mL se preparó al agregar agua destilada a una mezcla de 3.92 g de ácido fosfórico, 2.40 g de ácido acético, 14.91 g de cloruro de potasio y 2.47 g de ácido bórico y una solución B de 1000 mL se preparó al añadir agua a 8.0 g de hidróxido de> sodio. La solución B se agregó gota a gota a la solución A para formar soluciones de regulador de pH (regulador de pH Britton Robinson (BR) ) de 100 mL con valores de pH respectivos de pH 2.0, pH 3.0, pH 4.0, pH 5.0, pH 6.0, pH 7.0 y pH 9.0. Mientras, aproximadamente 300 mg de GLP-1 (7-36) NH2 preparado en el ejemplo de referencia 1 se disolvieron en 30 mL de agua destilada. La solución (10 mg/mL) se dividió en alícuotas 2.0 mL y los reguladores de pH BR y ácido clorhídrico 0.-1 M se agregaron de manera individual a las alícuotas para formar soluciones de muestra de 20 mL. Después, las muestras fueron almacenadas en un incubador a 40°C durante 1, 4 y 7 días y se observó la apariencia de las muestras y se determinaron las proporciones restantes de GLP-1 (7-36) H2. Los resultados se muestran en la tabla 3 que aparece a continuación. Tabla 3 Estabilidad de solución acuosa de GLE-1 (7-36) NH2 a varios pH T.I.: Transparente e incolora P.P.; Parcialmente precipitada Concentración de péptido: 1 mg/mL Temperatura: 40°C pH 1.2: ácido clorhídrico 0.1 M pH 2.0~pH 9.0: regulador de pH Briton-Robinson (µ= 0.2) Proporción restante: Proporción recolectada en el sobrenadante. Como se muestra en la tabla 3 , se formaron precipitados después de un día en las muestras con pH 1.2, pH 2.0, pH 3.0, pH 6.0 y pH 7.0, después de 4 días en la muestra con pH 5.0, y después de 7 días en la muestra con pH 4.0. Aunque no se formaron precipitados en la muestra con pH 9.0, la proporción restante de GLP-1 (7-3S) NH2 se redujo a 75.5% después de siete días. Por ende, se ha demostrado que GLP-1 (7-36) NH2 presenta una estabilidad relativamente baja en cualquiera de las soluciones ácida, neutra o básica y, por lo tanto, no es adecuado para usar en soluciones de la copmposicion farmacéutica.

Desde ese punto de vista, preparaciones en polvo de la composición para administración nasal, una alternativa a la solución de la composición farmacéutica, fueron sometidas a prueba para la capacidad de absorción. Ejemplo 1: Prueba para la capacidad de absorción de la preparación en polvo para administración nasal con el uso de perros Composiciones para absorción nasal se prepararon al añadir diferentes aditivos como se describe en los siguientes ejemplos de preparación 1 al 9 a una mezcla de GLP-1 (7-36) N¾ obtenido en el ejemplo de referencia 1 y un polvo fino de carbonato de calcio con el tamaño de partícula promedio de 50 µ? para servir como un portador.

Como control, se preparó una muestra de la composición para administración -nasal libre de aditivo. Se usaron 3 perros beagle, cada uno pesaba aproximadamente 10 kg, y las composiciones farmacéuticas para absorción nasal como se describen en los ejemplos de preparación 1 al 9 se administaron en forma nasal con un nebulizador de polvo. La concentración de GLP-1 (7-36) NH2 en el plasma se midió a 0, 5, 10, 20, 30, 45, 60, 90 y 120 minutos después de la administración. Como control, se administró un polvo fino de GLP-1 (7-36) N¾ libre de aditivo con el uso de un portador de carbonato de calcio. Las concentraciones de GLP-1 (7-36) NH2 en el plasma se midieron por medio de RIA con el uso de un anticuerpo anti-GLP-1 (7-36) NH2. La biodisponibilidad se calculó al comparar el área bajo la curva (AUC) después de administración nasal con el AUC después de administración subcutánea de GLP-1 (7-36) NH2 en solución salina. Los resultados se muestran en la tabla 4 que aparece a continuación. , TABLA 4 Evaluación de preparación nasal en perros Biodis- Dosifi¬ Cmax Tmax AUCo— Aditivos cación Tl poni- (ng · hr/ (ng/mL) (min) (hrs) bilidad (pg/kg) mL) (%) Sin 83.9 2.65 6.7 0.43 1.09± aditivo 4.3±1.0 ±3.9 ±1.72 ±2.9 ±0.46 0.22 1% polvo 58.7 2.53 16.7 0.59 2.35± 13.4± Doinyo-j i ±2.3 ±0.73 ±5.8 ±0.36 1.66 10.1 0.1% 74.6 3.87 11.7 0.58 2.62± almidón 11.413.9 ±7.5 ±1.22 ±7.6 ±0.41 1.01 de maíz 1% 58.4 2.78 10.0 0.48 2.47± 13.7± almidón +2.8 ±1.99 +0.0 ±0.30 2.20 11.8 de maíz 0.1% almidón de papa pregela- 80.1 2.26 13.5 0.59 2.28± 9.5±5.0 tinizado ±3.2 ±0.07 +5.8 ±0.40 1.12 tipo arroz no glutinoso 1% almidón de papa pregela- 52.3 2.64 13.3 0.33 1.40± 8.8±4.1 tinizado ±5.7 ±0.85 ±0.0 ±0.19 0.63 tipo arroz no glutinoso 1% 52.9 1.96 10.0 0.24 0.91± 5.6+2.7 povidona ±2.4 +1.13 ±0.0 ±0.07 0.46 1% 53.3 2.57 16.7 0.44 1.05± 6.6±3.5 pectina ±2.8 ±1.07 ±11.5 ±0.28 0.53 1% almidón de maíz parcialmente 49.7 1.98 16.7 0.44 1.24 8.316.2 pregela- +4.3 ±1.67 ±11.5 ±0.13 ±0.91 tini zado tipo arroz no glutinoso Administración 20.35 15.0 0.39 5.15 50 100 subdérmi- ±3.48 ±0.0 ±0.20 ±5.13 ca 1) portador de carbonato de calcio Media ± SD (n=3) Como se puede ver a partir de los resultados anteriores, la biodisponibilidad de la composición farmacéutica libre de aditivo fue aproximadamente 4%, mientras que la administración de las composiciones farmacéuticas de la presente invención mejoró la absorción de GLP-1 (7-36) NH2 y dio como resultado biodisponibilidades incrementadas de aproximadamente 6% a 14%. Ejemplo de preparación 1 : Preparación de composición farmacéutica que contiene polvo Domyo- i (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) H2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 31 mg de polvo Domyo-ji. La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.92 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µ?t?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.83 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) H2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 226 mg) de la muestra de polvo que contenía 690 µg de GLP-1 (7-36) N¾ se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 2: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (0.1%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-l (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 3.5 mg de almidón de maíz (Farmacopea japonesa: tamaño de partícula promedio = 13.3 µtt?) . La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.96 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad {28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.75 g de una muestra de polvo. Con una cantidad (aproximadamente 297 mg) de la muestra de polvo que contenía aproximadamente 1000 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 3: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 32 mg de almidón de maíz (Farmacopea japonesa: tamaño de partícula promedio = 13.3 µ??) . La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.93 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y .la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.89 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 213 mg) de la muestra de polvo que contenía 678 9 de GLP-1 (7-36) H2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 4: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (0.1%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 3.2 mg de almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (AMYCOL HF, NIPPON STARCH CHEMICAL Co . , Ltd.) . La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.96 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida» los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.75 g de una muestra de polvo. Con una cantidad (aproximadamente 297 mg) de la muestra de polvo que contenía aproximadamente 1000 µ9 de GLP-1 (7-36) H2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 5: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoao (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) H2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 30 mg de almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (AMYCOL HF, NIPPON STARCH CHEMICAL Co . , Ltd.). La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.92 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µtp. A la mezcla tamizada, una cantidad (27 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.77 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 217 mg) de la muestra de polvo que contenía 661 de GLP-1 (7-36) H3 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 6: Preparación de composición farmacéutica que contiene povidona (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 32 mg de povidona K30 (Las Normas Japonesas de Aditivos Farmacéuticos) . La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.93 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µtt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.84 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 211 mg) de la muestra de polvo que contenía 642 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 7: Preparación de composición farmacéutica que contiene pectina (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) H2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 31 mg de pectina (USP) . ¦ La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.93 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.88 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) H2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 210 mg) de la muestra de polvo que contenía 644 g de GLP-1 (7-36) H2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 8: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 31 mg de almidón de maíz pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (PCS, ASAHI KASEI Co . , Ltd.). La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 2.92 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezclar se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µtt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.88 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 211 mg) de la muestra de polvo que contenía 646 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 9: Preparación de composición farmacéutica libre de aditivo Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.88 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (87 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total- se mezcló para dar 8.76 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) H2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLA de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 300 mg) de la muestra de polvo que contenía 937 µ9 de GLP-1 (7-36) N¾ se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo 2: Prueba para la capacidad de absorción de la preparación en polvo para administración nasal con el uso de monos cynomolgus (Prueba 1) GLP-1 (7-36) N¾ obtenido en el ejemplo de referencia 1 se usó como el polipéptido biológicamente activo y un polvo fino ya sea de carbonato de calcio o una sal de aluminio de sulfato de sacarosa (sucralfato) con un tamaño de partícula promedio de 51.9 µp? se usó como el portador. De acuerdo con los procedimientos descritos en los ejemplos de preparación 10 a 18, se prepararon diferentes composiciones farmacéuticas para absorción nasal .que contenían diferentes aditivos llevados por el portador. La dosificación de GLP-1 (7-36) NH2 se ajustó de manera que aproximadamente 100 de GLP-1 (7-361 NH2 se administraran a la vez. Cada aditivo se agregó a la composición farmacéutica en cantidades de 0.5%, 1.0%, 10% y 50% con respecto al peso total de la preparación. Dos formulaciones libres de aditivos, una que contenía carbonato de calcio y GLP-1 (7-36) NH2 y la otra contenía sucralfato y GLP-1 (7-36) NH2, se prepararon para servir como controles. Con el uso de un nebulizador nasal fabricado por UNISIA JECS Co., Ltd., las composiciones de los ejemplos de preparación 10 a 18 se administraron de manera individual a monos cynomolgus, cada uno pesaba aproximadamente 3 kg, en sus cavidades nasales, y las concentraciones de GLP-1 (7-36) NH2 en el plasma se midieron mediante RIA y parcialmente mediante ELISA a 0, 5, 10, 20, 30, 45, 60, 90 y 120 minutos después de la administración. La biodisponibilidad se determinó al comparar el AUC después de administración nasal con el AUC después de administración subcutánea. Las figuras 1, 2 y 3 muestran la concentración en plasma - curvas de tiempo de GLP-1 (7-36) NH2 después de administración subcutánea de GLP-1 (7-36) NH2 en solución salina y después de administración intranasal de las dos formulaciones libres de aditivos, respectivamente. La figura 4 muestra la concentración en plasma - curvas de tiempo de GLP-1 (7-36) NH2 después de administración intranasal de las formulaciones nasales respectivas que contienen 1% polvo Domyo-ji, 0.5% almidón de maíz o 0.5% almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoso. Evaluaciones de concentraciones de GLP-1 (7-36) NH2 en plasma como se determinaron mediante RIA y parcialmente mediante ELISA se muestran en las tablas 5 y 6, respectivamente.

TABLA 5 Evaluación de preparación nasal de GLP-1 (7-36) NH; en monos cvnomolcrus (RIA) Media ± SD (n=3) 1) carbonato de calcio (ejemplo de preparación 10) 2) sucralfato (ejemplo de preparación 11) 3) amasado con agua (ejemplo de preparación 16) 4) indica que la concentración en plasma fue demasiado baja para ser calculada.

TABLA 6 Evaluación da preparación nasal de GLP-1 (7-36) NH2 en monos cynomolcpis (ELISA) 3) amasado con agua (ejemplo de preparación 16) 5) mezcla en polvo (ejemplo de preparación 15) 6) amasado con etanol (ejemplo de preparación 17) 7) amasado con agua (ejemplo de preparación 18) Como es evidente a partir de las tablas 5 y 6 anteriores, cada una de las dos formulaciones libres de aditivos mostró una baja absorción oasal de GLP-1 (7-36) H2 de aproximadamente 0.3 a 3.1%, mientras que cada una de las composiciones farmacéuticas de la presente invención facilitó de manera significativa la absorción de GLP-1 (7-36) NH2 por la mucosa nasal. E emplo de preparación 10 : Preparación de composición farmacéutica libre de aditivo Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-35) NH2 se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.87 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (84 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 8.20 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía 100 g de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 11: Preparación de composición farmacéutica libre de aditivo Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.87 g de sucralfato. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µta. A la mezcla tamizada, una cantidad (84 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 8.03 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía 100 µg de GLP-1 (7-36) H2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal . Ejemplo de preparación 12: Preparación de composición farmacéutica que contiene polvo Domyo-ji (1.0%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-36) ¾ se mezcló con 89 mg de polvo Domyo-ji. La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.78 g de carbonato de calcio. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ?p. A la mezcla filtrada, una cantidad (84 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 8.11 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía 100 µg de GLP-1 (7-36) N¾ se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 13: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (0.5%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con 45 mg de almidón de maíz (Farmacopea japonesa: tamaño de partícula promedio = 13.3 µp) . La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.83 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 50 µ?p) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (88 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 8.46 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) N¾ en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía aproximadamente 98 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 14: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoao (0.5%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se mezcló con 45 mg de almidón de papa pregelatinizado tipo arroz no glutinoso (AMYCOL HF, NIPPON STARCH CHEMICAL Co . , Ltd.). La mezcla en polvo se colocó en un recipiente y se agregaron gradualmente 8.83 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µ??) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (89 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 8.47 g de una muestra de polvo. El aontenido de GLP-1 (7-36) H2 en la muestra de polvo se midió mediante una CLAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía 101 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 15: Preparación de composición farmacéutica (mezcla en polvo) que contiene hidroxipropilcelulosa (HPC, 10%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH_ equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se trituró con 300 mg de HPC (Farmacopea japonesa) para obtener una mezcla en polvo. La mezcla en polvo se trituró de manera similar con 2.69 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) hasta que estuvo uniforme. Luego la mezcla se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.76 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) N¾ en la muestra de polvo se midió mediante una CIAR de fase inversa y con una cantidad (aproximadamente 30 mg) de la muestra de polvo que contenía 100 ¡q de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 16: Preparación de composición farmacéutica (mezcla amasada con agua) que contiene HPC (10%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) N¾ equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se trituró con 300 mg de HPC (Farmacopea japonesa) para obtener una mezcla en polvo. La mezcla en polvo se trituró de manera similar con 2.69 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) hasta que estuvo uniforme. Después se agregó agua purificada a la mezcla para formar una pasta con la mezcla. La pasta se mezcló por completo y se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida. La mezcla secada se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µ?t?. A la mezcla tamizada, una cantidad (28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.70 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió y con aproximadamente 30 mg de la muestra de polvo que contenía 100 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejenplo de preparación 17: Preparación de conposición farmacéutica (mezcla amanada con etanol) que contiene HPC (10%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) ÍJH2 se trituró con 300 mg de HPC (Farmacopea japonesa) para obtener una mezcla en polvo. La mezcla en polvo se trituró de manera similar con 2.69 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µp?) hasta que estuvo uniforme. Después se agregó etanol a la mezcla para formar una pasta con la mezcla. La pasta se amasó y se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida. La mezcla secada se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.73 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió y con aproximadamente 30 mg de la muestra de polvo que contenía 100 |jg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal . Ejemplo de preparación 18: Preparación de composición f rmacéutica que contiene HPC (50%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 10 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se trituró con 1.5 g de HPC (Farmacopea japonesa) para obtener una mezcla en polvo. La mezcla en polvo se trituró de manera similar con 1.49 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio = 51.9 µtt?) hasta que estuvo uniforme. Después se agregó agua purificada a la mezcla para formar una pasta con la mezcla. La pasta se amasó y se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida. El polvo resultante se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (27 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.54 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió y con aproximadamente 30 mg de la muestra de polvo que contenía 100 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se llenaron cápsulas del #2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo 3: Prueba de capacidad de absorción de la preparación en polvo para administración nasal con el uso de monos cynomolgus (Prueba 2) En este ejemplo, hemos examinado la capacidad de absorción nasal de GLP-1 (7-36) NH2 al administrar composiciones que contienen el almidón parcialmente pregelatinizado, hidroxipropilcelulosa-SSL (HPC-SSL) , la mezcla del almidón parcialmente pregelatinizado/ HPC-SSL o almidón de maíz (cantidad de 1.0 a 10%) como un aditivo. Con el uso de un nebulizador nasal fabricado por U ISIA JECS Co., Ltd., las composiciones de los ejemplos de preparación 19 a 27 se administraron de manera individual a monos cynomolgus, cada uno pesaba aproximadamente 2 a 4 kg, en sus cavidades nasales, y las concentraciones de GLP-1 (7-36) N¾ en el plasma se midieron mediante RIA a 0, 5, 10, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos después de la administración. La biodisponibilidad se determinó al comparar el AUC después de administración nasal con el AUC después de administración subcutánea. Los resultados se mostraron en la tabla 7 que aparece más adelante. Como es evidente a partir de la tabla 7, las preparaciones que contienen almidón de maíz en el rango amplio como 1.0 a 10% mostraron el efecto de facilitación de absorción nasal efectiva de GLP-1 (7-36) NH2 en comparación con la formulación libre de aditivo. Además, la formulación- que contiene el - almidón de maíz parcialmente pregelatinizado, el cual permanece parcialmente insoluble en agua, mostró también la absorción nasal efectiva de GLP-1 (7-36) NH2. Al usar HPC-SSL difícilmente soluble en agua como el aditivo en las composiciones farmacéuticas, se observó un cierto efecto de facilitación de absorción de GLP-1 (7-36) NH2. Aunque el efecto de mejora de absorción en el uso combinade de HPC-SSL y almidón parcialmente pregelatinizado no se observó, la absorción nasal de GLP-1 (7-36) NH2 se mejoró en comparación con la formulación libre de aditivo. TABLA 7 Evaluación de preparación nasal de GLP-1 (7-36) NH2 en monos cynomolgus (RIA) Biodis- DosifiCmax AUC0- Aditivos Tmax poni- cación (ng/- (ng · hr (%) (min) (hrs) bilidad (pg/kg) mL) /mL) (%) Sin 88.9 1.47 10.3 0.45 50.80 4.0 adi- +20.0 ±0.70 ±0.6 , ±0.21 ±21.31 ±1.9 tivo 100.9 2.53 11.0 0.37 68.90 4.5 Almi1% +23.2 ±2.33 ±1.7 ±0.08 ±53.28 ±2.9 dón 5* 103.5 6.87 10.0 0.65 258.37 16.7 de 111.1 3.21 10.0 0.49 127.77 7.6 maíz 10% ±19.9 ±1.13 ±0.0 ±0.26 ±41.02 ±1.2 101.9 3.20 10.3 0.34 104.52 6.6 0.1% +19.6 ±1.89 ±0.6 ±0.06 ±56.23 ±2.5 HPC 93.7 2.01 10.0 0.57 65.47 4.9 0.5% (SSL) +25.6 ±0.44 ±5.0 ±0.43 ±15.24 ±1.3 99.1 1.51 19.0 0.43 62.62 5.0 1% +25.1 ±0.96 ±10.8 ±0.12 ±37.66 ±4.4 Almidón de maíz parcial102.2 5.57 " 12.3 0.36 189.82 12.4 1% mente ±8.6 ±1.47 ±2.5 ±0.28 ±83.09 ±5.0 pregela- tinizado Almidón de maíz parcial¬ 5%/ 112.6 4.98 10.0 0.39 155.71 9.1 mente 0.1% +31.1 ±2.23 ±0.0 ±0.10 ±58.06 ±1.1 pregela- tinizado /HPC-SSL Ejemplo de preparación 19: Preparación de composición farmacéutica libre de aditivo que contiene cloruro de benzalconio (0.01%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30.6 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló gradualmente con 2.93 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µt?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó la solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.95 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) H2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 311 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 20: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (1.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 2.91 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 29 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µ?t?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 29.9 mg de GLP-1 (7-3£) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó la solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ?p. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.88g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-l (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 312 g de GLP-l (7-36) N¾ se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. E emplo de preparación 21; Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (5.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 2.78 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 150 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 1£0 µt? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 35 mg) del polvo de GLP-l (7-36) N¾ equivalente a 29.6 mg de GLP-l (7-36) NH se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó la solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µtp. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.89g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 307 de GLP-1 (7-36) NH2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 22: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (10.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 2.63 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µ?t?) se mezclaron con aproximadamente 301 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30.6 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó la solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de malla de 180 µt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 27 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.69 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 341 µg de GLP-1 (7-36) H2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 23: Preparación de composición farmacéutica que contiene HPC-SSL (0.1%) y cloruro de benzalconio (0.01%) A aproximadamente 2.93 g . de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µ?t?) se agregó una solución que contenía aproximadamente 3 mg de HPC-SSL y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µ?a para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad 72 (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) H2 equivalente a -30.4 mg de GLP-1- (7-36) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µtt?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.94 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) N¾ en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 310 µg de GLP-1 (7-36) N¾ se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 24: Preparación de composición farmacéutica que contiene HPC-SSL (0.5%) y cloruro de benzalconio (0.01%) A aproximadamente 2.92 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregó una solución que contenía aproximadamente 15 mg de HPC-SSL y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-l (7-36) NH2 equivalente a 30.5 mg de GLP-l (7-36) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.93 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-l (7-36) N¾ en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 30 mg de la nuestra de polvo que contenía 312 µg de GLP-l (7-36) H2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 25: Preparación de composición farmacéutica que contiene HPC-SSL (1.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) A aproximadamente 2.90 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregó una solución que contenía aproximadamente 30 mg de HPC-SSL y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó.

Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µt? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30.6 mg de GLP-1 (7-36) N¾ se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 28 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.85 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 322 ¾ de GLP-1 (7-36) ¾ se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 26; Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz parcialmente pregelatinizado (1.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) A aproximadamente 2.90 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregó una solución que contenía aproximadamente 30 mg de almidón de maíz parcialmente pregelatinizado y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 37 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30.8 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.90 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-3S) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 319 µg de GLP-1 (7-36) NH se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal.

Ejemplo de preparación 27: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (5.0%), HPC-SSL (0.1%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 2.78 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 151 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µt?) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, se agregó una solución que contenía aproximadamente 3 mg de HPC-SSL y luego se agregó también agua purificada a la mezcla y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 36 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 30.3 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.93 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 30 mg de la muestra de polvo que contenía 310 ug de GLP-1 (7-36) NH2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo 4: El efecto a la absorción naaal mediante adición de almidón de polipéptidos de incretina Este ejemplo examinó si la absorción nasal de las hormonas de incretina acidas diferentes de GLP-1 (7-36) H2 sería mejorada por la adición de almidón, con el uso de un efecto de reducción en el nivel de glucosa sanguínea en ratas como un índice . Ratas CD (SD) macho que pesaban aproximadamente 300 g fueron anestesiadas con pentobarbital . El extremo anterior de una punta para pipeta (GPS-250, RAININ) fue llenada con 3 mg de una composición farmacéutica (que contenía aproximadamente 100 g de polipéptido) preparada mediante el ejemplo de preparación que se describe más tarde y la punta fue cargada en la jeringa y la composición se roció en la cavidad nasal de las ratas junto con 1 mi de aire. Luego, 0.5 g/kg de glucosa se administraron de manera intravenosa en la cola de las ratas 5 minutos después de la administración nasal de la composición. Las muestras de sangre se recolectaron de la aorta 15 minutos después de la administración nasal de la composición (10. minutos después de la administración de glucosa) . El nivel de glucosa en sangre se detectó con el uso del instrumento de medición para nivel de glucosa en sangre (FREESTYLE-KISSEI ; Kissei Pharmaceutical Co., Ltd.) Los resultados se muestran en la tabla 8 que aparece a continuación. Como se puede ver a partir de los resultados, el nivel de glucosa en sangre del grupo de control sin administración de hormonas de incretina fue 196 mg/dl (valor promedio de 3 ratas) . En cuanto a la composición que contiene hormonas de incretina, el nivel de glucosa en sangre descendió en comparación con el grupo de control . Más aún, también las hormonas de incretina, el nivel de glucosa en sangre descendió cuando se agrega la composición que contiene 5% de almidón de maíz en comparación con aquél cuando no se agrega 5% de almidón de maíz. Estos resultados muestran claramente que es posible hacer que muchas hormonas de incretina sean absorbidas con la composición farmacéutica de la presente invención y la capacidad de absorción de las hormonas de incretina fue promovida al usar almidón como aditivo para la composición.

TABLA 8 El efecto de reducción del nivel de glucosa en sangre mediante la administración de hormonas de incretina 5 10 Ejemplo de referencia 5: Síntesis de [Lys-26, e-?? (?-Glu (N-g-15 palmitoil) } ] -GLP-1 (7-37) A 5 mg (6.9 mmoles) de resina Cl-Trt (2-C1) de hinchamiento con cloruro de metileno (30 mi) se agregó una solución de cloruro de metileno de Fmoc-Glu-OtBu (5.8 g, 13.7 mmoles) y DIPEA (1.5 g, 11.8 mmoles), y la mezcla se agitó 20 suavemente durante 30 minutos. La resina fue recolectada mediante filtración y se lavó con cloruro de metileno, isopropanol y cloruro de metileno, respectivamente. Luego, una solución mixta de 20% piperidina/DMF (30 mi) se agregó a la resina resultante y la mezcla se agitó suavemente durante 25 20 minutos. La resina fue recolectada mediante filtración y se lavó con DMF, isopropanol y cloruro de metileno, respectivamente y se secó. La resina de H-Glu (ct-OtBu) -Trt(2-Cl) obtenida (6.1 g, 6.9 mmoles) fue suspendida en una solución de mezcla de N-metil pirrolidona (NMP) / cloruro de metileno (1:1, 30 mi) y a esta mezcla se agregaron 3 equivalentes de ácido palmítico (5.3 g, 20.7 mmoles), HOBt (2.8 g, 20.7 mmoles) y diciclohexilcarbodiimida soluble en agua (DCC: 4.0 g, 20.7 mmoles), y después, la mezcla se agitó suavemente durante toda la noche. La resina resultante se lavó con cloruro de metileno, NMP y cloruro de metileno, respectivamente, y se secó. A la resina de palmitoil -Glu (a-OtBu) -Trt (2 -Cl ) obtenida (8 g, 6.9 mmoles) se agregó una solución de mezcla de ácido acético /TFE/ cloruro de metileno (1:2:7, 20 mi) y la mezcla se agitó suavemente durante 20 minutos. La resina se filtró y lavó con 10 mi de TFE y el producto filtrado se concentró. El residuo resultante se trató con hexano para obtener un precipitado. El precipitado obtenido fue recristalizado a partir de cloruro de metileno/ hexano para dar 2.0 g (rendimiento: 66%) de derivado de ácido glutámico para introducir para la cadena lateral de Lys en la posición 26, esto es, palmitoil-Glu (a-OtBu) . ???-??: [M+H] 442.3; M+Na] 462.4 (valor teórico: 441.3 [M] ) . Después, resina de Fmoc-His (Trt) -Ala-Glu (OtBu) -Gly -Thr (Trt) -Phe-Thr (Trt) -Ser(tBu) -Asp(tBu) -Val -Ser (tBu) -Ser (tBu ) -Tyr(tBu) -Leu- Glu(OtBu)- Gly- Gln(Trt) - Ala- Ala- Lys(4-metiltritil) -Glu(OtBu) -Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg (Pmc) - Gly-Arg (Pmc) -Gly- ang se construyó mediante el método de Fmoc (protocolo de 0.25 mmoles) con el uso del sintetizador automático de péptidos 433A (ABI Co., Ltd.). La resina obtenida fue tratada con una solución de mezcla de 1% TFA/ 5% TIPS/ cloruro de metileno (30 mi) durante 30 minutos para retirar el grupo -metiltritilo de la cadena lateral de Lys en la posición 26. La resina resultante fue neutralizada con una solución de mezcla de 5% DIPEA/ cloruro de metileno, lavada con cloruro de metileno e hinchada con NMP (30 mi) . Luego, la resina hinchada se hizo reaccionar con palmitoil-Glu (a-OtBu) (441 mg, 1 mmol) en presencia de HOBt (135 mg, 1 mmol) y DCC (260 mg, 1 mmol) durante 3 horas. La resina de péptido obtenida fue tratada con 20% piperidina para retirar Fmoc y además fue tratada con una solución de mezcla de 88% TFA/ 2% TIPS/ 5% agua/ 5% fenol (20 mi) durante 1 hora. La resina fue filtrada y lavada con 10 mi de TFA y el producto filtrado combinado se concentró. El residuo se trató con éter para obtener el precipitado (720 mg) . 500 mg del péptido crudo obtenido se disolvieron en solución de urea saturada (200 mi) y se purificaron mediante CLAR de fase inversa con el uso de C4 (YMC-pack, PROTEIN-RP, 2 cu x 25 cm) con gradiente de revestimiento de 13% a 60% acetonitrilo/ 0.1% TFA a una velocidad de flujo de 5 a 10 ml/min. La fracción que contenía el pruducto objeto se recolectó y liofilizó para producir 145 mg del péptido de propósito. ESI-EM: 3751 (valor teórico: 3751.2) . Composición de aminoácidos estándar de Leu después de hidrólisis con 6N ácido clorhídrico: Asx: 0.97 (1), Thr : 1.89 (2), Ser: 2.75 (3), Glx: 5.08 (5), Gly: 4.05 (4), Ala: 4.01 (4), Val: 1.93 (2), lie: 0.99 (1), Leu: 2, Tyr : 0.91 (1), Phe : 1.90 (2), Lys: 1.10 (1), His : 0.90 (1) , Arg : 1.92 (2) . Ejemplo de referencia 6: Síntesis de GLP-K7-37) Resina de H-His (Trt ) -Ala-Glu (OtBu) -Gly-Thr (Trt ) -Phe -Thr(Trt) -Ser (tBu) -Asp(OtBu) -Val-Ser (tBu) -Ser(tBu) -Tyr(tBu) -Leu-Glu (OtBu) -Gly-Gln (Trt) -Ala-Ala-Lys (Boc) -Glu(OtBu) -Phe-Ile -Ala-Trp- Leu-Val-Lys (Boc) -Gly-Arg (Pmc) -Wang (1.1 g) se construyó a partir de resina Fmoc-Arg (Pmc) -Wang como el material de partida mediante el método Fmoc (protocolo de 0.25 mmoles) con el uso del sintetizador automático de péptidos 433A (ABI Co. , Ltd.). 600 mg de la resina obtenida se trataron con una solución de mezcla de 88% TFA/ 2% TIPS/ 5% agua/ 5 % fenol (20 mi) durante 1 hora. La resina fue filtrada y el producto filtrado se concentró y el residuo se trató con éter para obtener el precipitado (380 mg) . El péptido crudo obtenido se disolvió en agua purificada (20 mi) y se purificó mediante CLAR de fase inversa con el uso de C4 (Y C-pack, PROTEIN-RP, . 2 cm x 25 cm) con gradiente de revestimiento de 9% a 68% acetonitrilo/ 0.1% TFA a una velocidad de flujo de 10 ml/min. La fracción que contenía el producto objeto se recolectó y liofilizó para producir 53 mg del péptido de propósito. ESI-EM: [M] 3355 (valor teórico: 3355.7) . Composición de aminoácidos estándar de Leu después de hidrólisis con 6N ácido clorhídrico: Asx: 1.00 (1), Thr: 1.99 (2), Ser: 2.79 (3), Glx: 4.10 (4), Gly: 4.01 (4), Ala: 4.02 (4), Val: 1.92 (2), lie: 0.98 (1), Leu: 2, Tyr: 0.92 (1), Phe: 1.92 (2), Lys: 2.18 (2), His: 0.96 (1), Arg: 0.94 (1) . Ejemplo de referencia 7: Síntesis de [Val8] GLP-1 (7-37) Resina de H-His ¡Trt) -Val-Glu (OtBu) -Gly-Thr (Trt) -Phe -Thr (Trt) -Ser (tBu) -As (OtBu) -Val-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -Leu-Glu(OtBu) -Gly-Gln (Trt) -Ala-Ala-Lys (Boc) -Glu(OtBu) -Phe-Ile -Ala-Trp-Leu-Val-Lys (Boc) -Gly-Arg (Pmc) -Wang (1.4 g) se construyó a partir de resina Fmoc-Arg (Pmc) -Wang como el material de partida mediante el método de Fmoc (protocolo de 0.25 mmoles) con el uso del sintetizador automático de péptidos 433A (ABI Co . , Ltd.) . 0.7 g,de la resina obtenida se trataron con una solución de mezcla de 88% TFA/ 2% TIPS/ 5% agua/ 5% phenol (20 mi) durante 1 hora. La resina fue filtrada y el producto filtrado se concentró y el residuo se trató con éter para obtener el precipitado (327 mg) . El péptido crudo obtenido se disolvió en agua purificada (50 mi) y se purificó mediante CLAR de fase inversa con el uso de C4 (YMC-pack, PRO.TEIN-RP, . 2.5 cm x 30 cm) con gradiente de revestimiento de 5% a 72% acetonitrilo/ 0.1% TFA a una velocidad de flujo de 10 ral/min. La fracción que contenía el producto objeto se recolectó y liofilizó para producir 75 mg del péptido de propósito. ESI-EM: [M] 3383 (valor teórico: 3383.8) . Composición de aminoácidos estándar de Leu después de hidrólisis con 6N ácido clorhídrico: Asx: 0.99 (1), Thr: 1.98 (2), Ser: 2.80 (3), Glx: 4.10 (4), Gly: 4.01 (4), Ala: 3.03 (3), Val: 2.86 (3), lie: 0.98 (1), Leu: 2, Tyr: 0.92 (1), Phe: 1.92 (2), Lys: 2. IB (2), His: 0.92 (1), Arg: 0.94 (1). Ejemplo de referencia 8: Síntesis de Exendina-4 Resina de -His (Trt) -Gly-Glu (OtBu) -Gly-Thr (Trt) -Phe-Thr (Trt) -Ser (tBu) -Asp (OtBu) -Leu-Ser (tBu) -Lys (Boc) -Gln (Trt) -Met-Glu( (OtBu) -Glu(OtBu) -Ala-Val-Arg (Pmc) -Leu-Phe-Ile-Glu (Ot Bu) -Trp-Lue-Lys (Boc) -Asn (Trt) -Gly-Gly-Pro-Ser (tBu) -Ser (tBu) -Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Pro-Ser (tBu) -Wang (1.9 g) se construyó a partir de resina Fmoc-Ser (tBu) -Wang como el material de partida mediante el método de Fmoc (protocolo de 0.25 mmoles) . 1.9 g de la resina obtenida se trataron con una solución de mezcla de 88% TFA/ 2% TIPS/ 5% agua/ 5% phenol (20 mi) durante 1 hora. La resina fue filtrada y el producto filtrado se concentró y el residuo se trató con éter para obtener el precipitado (870 mg) . El péptido crudo obtenido se disolvió en agua purificada (80 mi) y se purificó mediante CLAR de fase inversa con el uso de C4 (Y C-pack, PROTEIN-RP, . 2.5 cm x 30 cm) con gradiente de revestimiento de 18% a 72% acetonitrilo/ 0.1% TFA a una velocidad de flujo de 10 ml/min durante 60 minutos. La fracción que contenía el producto objeto se recolectó y liofilizó para producir 270 mg del péptido de propósito. ESI-EM: [M] 4186 (valor teórico: 4186.6) . Composición de aminoácidos estándar de Leu después de hidrólisis con 6N ácido clorhídrico: Asx: 1.99 (2), Thr: 1.97 (2), Ser: 4.77 (5), Glx: 6.06 (6), Gly: 4.97 (5), Ala: 2.02 (2), Val: 0.94 (1), Met : 0.68 ,(1), lie: 0.98 (1), Leu: 3, Phe: 1.90 (2), Lys : 2.17 (2), His: 0.98 (1), Arg : 0.92 (1) , Pro: 3.96 (4) . Ejemplo de preparación 28: Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de GLP-1 (7-37) que contiene almidón de maíz (5%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 269 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µ? ) se mezclaron con aproximadamente 15 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µp?) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, se agregó agua purificada a la mezcla y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp\ para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 10.8 mg) del polvo de GLP-1 (7-37) equivalente a 9.03 mg de GLP-1 (7-37) se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.2 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 252 mg de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 107 µg de GLP-1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 29: Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de GLP-1 (7-37) que contiene cloruro de benzalconio (0.01%) Como el componente poptídico, una cantidad (aproximadamente 10.5 mg) del polvo de GLP-1 (7-37) equivalente a 8.75 mg de GLP-1 (7-37) se mezcló gradualmente con aproximadamente 284 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.9 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 258 mg de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 102 µg de GLP-1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 30; Preparación de composición f rmacéutica para absorción nasal de [Val8] -GLP-1 (7-37) que contiene almidón de maíz (5.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 269 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 15 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µp?) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, se agregó agua purificada a la mezcla y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 13 mg) del polvo de [Val8] -GLP-1 (7-37) equivalente a 9.38 mg de [Val8] -GLP-1 (7-37) se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µG?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 3.1 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 261 mg de una muestra de polvo. El contenido de [Val8] -GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 108 g de [Val8] -GLP-1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 31: Preparación de composición farmacéutica para absorción naaal de [Val8] -GLP-1 (7-37) que contiene cloruro de benzalconio (0.01%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 13 mg) del polvo de [Val8] -GLP-1 (7-37) equivalente a 9.31 mg de [Val8] -GLP-1 (7-37) se mezcló gradualmente con aproximadamente 284 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µt?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.6 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 252 mg de una muestra de polvo. El contenido de [Val8] -GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 111 µg de [Val8] -GLP-1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal . Ejemplo de preparación 32: Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de Exendina-4 que contiene almidón de maíz (5.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 270 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 15 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µ??) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, se agregó agua purificada a la mezcla y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) de polvo de exendina-4 equivalente a 9.08 mg de exendina-4 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 3.0 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 255 mg de una muestra de polvo. El contenido de exendina-4 en la muestra de polvo se midió por medio de una CIAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 107 µg de exendina-4 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 33; Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de Exendina-4 que contiene cloruro de benzalconio (0.01%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) del polvo de amilina: exendina-4 equivalente a 9.0 mg de exendina-4 se mezcló gradualmente con aproximadamente 285 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µt?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ?t?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.6 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 260 mg de una muestra de polvo. El contenido de exendina-4 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 104 µ9 de exendina-4 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 34: Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de [Lys26, E-NH(Y-Glu(N-g-palmitoil) )] -GLP-1 (7-37) que contiene almidón de maíz (5.0%) y cloruro de benzalconio (0.01%) Aproximadamente 270 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se mezclaron con aproximadamente 15 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µ?t?) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, se agregó agua purificada a la mezcla y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) de polvo de [Lys26, E-NH(7-G1U (N-a- palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) equivalente a 9.23 mg de [Lys26, e-NH{y-Glu(N-a-palmitoil) }] -GLP-1 - (7-37) se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla resultante se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshídratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.7 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 245 mg de una muestra de polvo. El contenido de [Lys26, -NH{y-Gl (?-a-palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 113 µg de [Lys26, s-NH{y-Glu (?-a-palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 35: Preparación de composición farmacéutica para absorción nasal de [Lys26, s- H(y-Glu (N-g-palmitoil) )] -GLP-1 (7-37) que contiene cloruro de benzalconio (0.01%) Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 12 mg) de polvo de [Lys26, E-NH{Y-G1U (N-a-palmitoil) }] -GLP-l (7-37) equivalente a 9.08 mg de [Lys26, e-NH{y-Glu (?- -palmitoil) }] -GLP-1 (7-37) se mezcló gradualmente con aproximadamente 285 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) . Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.03 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un deshidratador bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 2.4 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 265 mg de una muestra de polvo. El contenido de [Lys26, £- H{y-Glu (N-a-palmitoil ) } ] -GLP-1 (7-37) en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 103 µg de [Lys26, 8-NH{y-Glu (N-a-palmitoil) } ] -GLP- 1 (7-37) se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo 5: El efecto promotor del almidón como aditivo para abBorción nasal de polipáptidos ácidos Este ejemplo muestra el efecto de mejora de absorción de la adición de almidón para absorción nasal de insulina humana con el uso de monos cynomolgus. La insulina humana se usa como uno de los ejemplos de polipáptidos ácidos diferentes de la hormona de incretina. Polvo fino ya sea de carbonato de calcio o sal de aluminio sulfatada de sacarosa (sucralf to) con un tamaño de partícula promedio de 50 µp?, se usó como el portador. De acuerdo con los procedimientos -descritos en los ejemplos de preparación 10 a 18, se prepararon composiciones farmacéuticas para absorción nasal que contienen polvo Domyo-ji (1.0%). La dosificación de insulina humana se ajustó de manera que se administraran aproximadamente 251 U (Unidad Internacional)/ mono/ 40 mg de la composición. Dos formulaciones libres de aditivo, una que contenía carbonato de calcio e insulina humana y la otra contenía sucralfato e insulina humana, se prepararon para servir como controles. Con el uso de un nebulizador nasal fabricado por UNISIA JECS Co., Ltd., aproximadamente 40 mg de las composiciones de los ejemplos de preparación 36 a 38 se administraron de manera individual a monos cynomolgus, cada uno pesaba aproximadamente 3 kg, en sus cavidades nasales. Las concentraciones de insulina y glucosa en el plasma se midieron mediante cuentas de RIA II de insulina (Dinabott Co., Ltd.) y el instrumento de medición para nivel de glucosa en sangre (FREESTYLE- ISSEI ; Kissei Pharmaceutical Co., Ltd.) a 0, 5, 15, 20, 30, 45, 60, 90 y 120 minutos después de la administración . Los resultados se muestran en las tablas 9 y 10. Como se puede ver a partir de los resultados, la absorción de insulina humana y reducción del nivel de glucosa en sangre se observaron mediante administración de la composición libre de aditivo. No obstante, en el caso de la administración de la composición que contiene 1.0%- de polvo Domyo-ji (almidón parcialmente pregelatinizado) , se observó incremento en la capacidad de absorción de insulina humana y el nivel de glucosa en sangre significativamente bajo se observó en la etapa temprana. TABLA 9 Concentración en plasma de insulina humana mediante administración de la composición que contiene insulina humana TABLA 10 Nivel de glucosa en sangre mediante administración de la composición que contiene insulina humana N.D.: no detectado Ejemplo de preparación 36; Preparación de composición farmacéutica de insulina/sucralfato A 120 mg de sucralfato se agregó 1 mi de preparación de insulina humana (Humulin R: Shionogi Pharmaceutical Co . , Ltd.) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, la mezcla se secó durante toda la noche bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 1.2 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar una muestra de polvo. Con 40 mg de la muestra en polvo que contenía aproximadamente 251 U de insulina humana se llenaron cápsulas del # 2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 37: Preparación de composición farmacéutica de insulina/carbonato de calcio A 120 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregó 1 mi de preparación de insulina humana (Humulin : Shionogi Pharmaceutical Co. , Ltd.) y la mezcla se mezcló por completo. Luego, la mezcla se secó durante toda la noche bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 1.2 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar una muestra de polvo. Con 40 mg de la muestra en polvo que contenía aproximadamente 251 U de insulina humana se llenaron cápsulas del # 2 para preparar una composición farmacéutica par-a absorción nasal. Ejemplo de preparación 38: Preparación de composición farmacéutica de insulina/carbonato de calcio que contiene polvo Domyo- i (1.0%) A 120 mg de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregó una suspensión de 1 mi de preparación de insulina humana (Humulin R : Shionogi Pharmaceutical Co. , Ltd.) y 1.2 mg de polvo Domyo-ji y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 1.2 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar una muestra de polvo. Con 40 mg de la muestra en polvo que contenía aproximadamente 251 U de insulina humana se llenaron cápsulas del # 2 para preparar una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo 6: Efecto de un tamaño de partícula de almidón como un aditivo de una composición farmacéutica en la absorción nasal Este ejemplo examinó el efecto del tamaño de partícula de almidón como el aditivo de la composición farmacéutica que contiene GLP-1 (7-36) NH2 en la absorción nasal con el uso de la actividad reductora del nivel de glucosa en sangre en ratas como un índice.

Los siguientes dos almidones de polvo fino diferentes con - un tamaño de partícula promedio se usaron como los aditivos de la composición farmacéutica de este ejemplo. Almidón de maíz: Promedio del tamaño de partícula integrado (d50) : 13.3 nm Distribución central: 14 µp? Rango de distribución: 5.5 µp a 30 µ?p Almidón de papa: Promedio del tamaño de partícula integrado (d50) : 37.7 µ?? Distribución central: 45 µp? Rango de distribución: 5.5 µ?? a 105 µ?t? Ratas CD (SD) macho que pesaban aproximadamente 300 g fueron anestesiadas con pentobarbital . El extremo anterior de una punta para pipeta (GPS-250, RAININ) fue llenada con 3 mg de una composición farmacéutica (que contenía aproximadamente 90 de polipéptido) preparada mediante el ejemplo de preparación que se describe más tarde y la punta fue cargada en la jeringa y la composición se roció en la cavidad nasal de las ratas junto con 1 mi de aire. Luego, 0.5 g/kg de glucosa se administraron de manera intravenosa en la cola de las ratas 5 minutos después de la administración nasal de la composición. Las muestras de sangre se recolectaron de la aorta 15 minutos después de la administración nasal de la composición (10 minutos después de la administración de glucosa) . El nivel de glucosa en sangre se detectó con el uso del instrumento de medición para nivel de glucosa en sangre (FREESTYLE-KISSEI ; Kissei Pharmaceutical Co. , Ltd. ) . Los resultados se muestran en la tabla 11 que aparece a continuación. Como se puede ver a partir de los resultados, el nivel de glucosa en sangre del grupo de control sin administración de GLP-1 (7-36) NH2 fue 196 mg/dl (valor promedio de 3 ratas) . El nivel de glucosa en sangre de los grupos a los que se les administró la composición que contenía GLP-1 (7-36) NH2 sin el aditivo, con 5% de almidón de maíz y 5% de almidón de papa fue 170 mg/dl, 157 mg/dl y 182 mg/dl, respectivamente. Estos niveles de glucosa en sangre fueron más bajos que aquéllos del grupo de control sin administración de GLP-1 (7-36) NH2. El efecto de mejora de absorción para absorción de GLP-1 (7-36) H2 se observó de preferencia en el caso del grupo que usa almidón de maíz con un tamaño de partícula pequeño en comparación con el grupo, que usa almidón de papa con un tamaño de partícula grande. Como es evidente a partir de los resultados de la tabla 11, la absorción nasal preferible de GLP-1 (7-36) NH2 se puede ver al usar portador con un tamaño de partícula más pequeño, mientras que la dosis de almidón con un tamaño de partícula más grande no muestra un efecto claro de mejora de absorción.

TABLA 11 Efecto de un tamaño de partícula de almidón en la actividad para reducir el nivel de glucosa en sangre mediante GLP-1 (7- 36) NH; Ejemplo de preparación 39: Preparación de composición farmacéutica libre de aditivo Como el componente peptidico, una cantidad (aproximadamente 108 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 90.2 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con aproximadamente 2.86 g de carbonato de calcio. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenia 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó agua purificada y la mezcla se amase. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de malla de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 30 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar 2.95 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 92 µg de GLP-1 (7-36) N¾ se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal . Ejemplo de preparación 40: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de maíz (5.0%) A aproximadamente 2.71 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregaron aproximadamente 150 mg de almidón de maíz (tamaño de partícula promedio: 13.3 µtt?) y la mezcla se mezcló por completo, y después se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 107 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH2 equivalente a 89.2 mg de GLP-1 (7-36) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µp?. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.90 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 92 µ9 de GLP-1 (7-36) NH2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Ejemplo de preparación 41: Preparación de composición farmacéutica que contiene almidón de papa (5.0%) A aproximadamente 2.71 g de carbonato de calcio (tamaño de partícula promedio: 53.6 µp?) se agregaron aproximadamente 150 mg de almidón de papa (tamaño de partícula promedio: 37.7 µp?) y la mezcla se mezcló por completo, y después se agregó agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y se hizo pasar a través de un tamiz de 180 µp? para obtener los productos secados. Como el componente peptídico, una cantidad (aproximadamente 107 mg) del polvo de GLP-1 (7-36) NH equivalente a 89.5 mg de GLP-1 (7-3,6) NH2 se mezcló con los productos secados obtenidos anteriormente. Después de mezclar por completo la mezcla, se agregó una solución que contenía 0.3 mg de cloruro de benzalconio y luego se agregó también agua purificada y la mezcla se amasó. Después de amasar, la mezcla se secó durante toda la noche en un secador por congelamiento bajo presión reducida y los productos secados se hicieron pasar a través de un tamiz de 180 µ??. A la mezcla tamizada, una cantidad (aproximadamente 29 mg) de estearato de calcio equivalente a 1.0% del peso total se mezcló para dar aproximadamente 2.88 g de una muestra de polvo. El contenido de GLP-1 (7-36) NH2 en la muestra de polvo se midió por medio de una CLAR de fase inversa y 3 mg de la muestra de polvo que contenía 93 µg de GLP-1 (7-36) NH2 se prepararon como una composición farmacéutica para absorción nasal. Aplicación industrial Como se expone, la presente invención provee una composición farmacéutica novedosa para absorción nasal, que contiene un polipéptido biológicamente activo, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo capaz de dispersar e incluir de manera uniforme el polipéptido en las superficies del portador. La composición farmacéutica sin precedentes mejora la capacidad de absorción de polipéptidos biológicamente activos, en particular, los polipéptidos biológicamente activos ácidos que tienen un punto isoeléctrico de 7 o más bajo y, .por lo tanto, una baja estabilidad en solución, que son de otra manera difíciles de administrar mediante cualesquier otras vías de administración que no sean inyección entre las que se incluye la administración oral . Por consiguiente, la composición farmacéutica de la presente invención para absorción nasal permite la administración nasal, o aplicación a la mucosa nasal, de polipéptidos promotores de la secreción de insulina, para los cuales aún se- debe establecer una vía de administración viable que no sea inyección, en forma de una composición en polvo. De esta manera, la composición mejora la biodisponibilidad del polipéptido y puede así servir como un medicamento clínicamente efectivo. Por esta razón, la composición farmacéutica de la presente invención tiene un impacto médico significativo. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

105 REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Una composición farmacéutica para absorción nasal, caracterizada porque comprende un polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo para dispersar e incustar el polipéptido en la superficie del portador. 2. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende un polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo para dispersar e incrustar el polipéptido en la superficie del portador con el tamaño de partícula promedio de 1 µt? a 20 µp?. 3. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque comprende un polipéptido ácido biológicamente activo con un punto isoeléctrico de 7 o más bajo, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo para dispersar e inccrustar el polipéptido en la superficie del portador que es insoluble o poco soluble en agua, con el tamaño de partícula promedio de 1 µ?t? a 20 µp?. 106 4. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la- reivindicación 1, 2 ó 3, caracterizada porque el portador que es insoluble o poco soluble en agua es un compuesto de metal polivalente. 5. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque el compuesto de metal polivalente es un compuesto de aluminio, un compuesto de calcio, un compuesto de magnesio, un compuesto de silicio, un compuesto de hierro o un compuesto de zinc. 6. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de aluminio es uno seleccionado del grupo que consiste de gel de hidróxido de aluminio secado, clorohidroxi aluminio, silicato de aluminio sintético, óxido de aluminio ligero, silicato de aluminio hidroso coloidal, hidróxido de aluminio-magnesio, hidróxido de aluminio, gel de hidróxido de aluminio, sulfato de aluminio, acetato de dihidroxialuminio, estearato de aluminio, silicato de aluminio natural, monoestearato de aluminio y sulfato de aluminio-potasio . 7. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de calcio es uno seleccionado del grupo que consiste de apatita, hidroxiapatita, carbonato de calcio, 107 edetato calcico disódico, cloruro de calcio, citrato de calcio, glicerofosfato de calcio, gluconato de calcio, silicato de calcio, óxido de calcio, hidróxido de calcio, estearato de calcio, fosfato terciario de calcio, lactato de calcio, pantotenato de calcio, oleato de calcio, palmitato de calcio, pantotenato de D-calcio, alginato de calcio, fosfato de calcio anhidro, fosfato hidrogenado de calcio, fosfato dihidrogenado de calcio, acetato de calcio, sacarato de calcio, sulfato de calcio, fosfato monohidrogenado de calcio, paraaminosalicilato de calcio y compuestos biológicamente calcificados. 8. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de magnesio es uno seleccionado del grupo que consiste de L-aspartato de magnesio, cloruro de magnesio, gluconato de magnesio, aluminosilicato de magnesio, silicato de magnesio, óxido de magnesio, hidróxido de magnesio, estearato de magnesio, carbonato de magnesio, aluminometasilicato de magnesio, sulfato de magnesio, silicato, de magnesio-sodio y silicato de magnesio-sodio sintético. 9. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de silicio es uno seleccionado del grupo que consiste de dióxido de silicio hidroso, ácido silícico anhidro ligero, hidrotalcita sintética, diatomita y dióxido de silicio. 108 10. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de hierro es sulfato de hierro. 11. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de zinc es uno seleccionado del grupo que consiste de cloruro de zinc, estearato de zinc, óxido de zinc y sulfato de zinc. 12. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, caracterizada porque el compuesto de metal polivalente tiene un tamaño de partícula promedio de 100 µp? o menos. 13. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque el compuesto de metal polivalente tiene un tamaño de partícula promedio de 20 a 60 µ?t?. 1 . La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizada porque el polipéptido ácido biológicamente activo es uno seleccionado del grupo que consiste de calcitonina, catacalcina, colecistocinina- 12 , colecistocinina-8 , precursor de corticotropina-lipotropina, péptido intermedio tipo corticotropina, lipotropina-ß , lipotropina-?, melanotropina-ß, corticoliberina, endotelina-1 , endotelina-2 , endotelina-3 , péptido asociado 109 con el mensaje de galanina, gastrina-71, gastrina-34, gastrina-17, polipéptido inhibitorio gástrico, polipéptido relacionado con glicentina, glucagón, péptido tipo glucagón-1, péptido tipo glucagón-1 amida, péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (7-37), [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida, [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-37), [Lys26, e- ? (?-Glu (?-a-palraitoil ) }] -GLP-1 (7-37), péptido tipo glucagón-1 (9-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (9-37), péptido tipo glucagón-2, exendina-3, exendina-4, cadena de insulina ß, cadena de insulina a, insulina, progonadoliberina-I , gonadoliberina-II , péptido relacionado con gonadoliberina- I , neuromedina C, cadena A de proteína tipo insulina (INSL) , péptido relacionado con motilina E, leucina-encefaliña, metionina- encefalina, leumorfina, oxitocina, neurofisina-l, neurofisina-2 , copeptina, neuromedina B, neuromedina N, neuropéptido Y, neuropéptido AF, péptido relacionado con PACAP, hormona pancreática, icosapéptido pancreático, péptido Y, tiroliberina, neuroquinina A, urocortina, urotensina II, péptido intestinal (PH -27) y péptido intestinal -42. 15. La composición farmacéutica para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque el polipéptido ácido biológicamente activo es uno seleccionado del grupo que consiste de péptido tipo glucagón-1, péptido tipo glucagón-1 amida, péptido tipo glucagón-1 110 (7-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (7-37) , [Val8] - péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida, [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-37), [Lys26, e- ? (?-Glu (?-a-palmitoil ) } ] -GLP- 1 (7-37), péptido tipo glucagón-1 (9-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (9-37), péptido tipo glucagón-2, exendina-3, exendina-4, glucagón, polipéptido inhibitorio gástrico, insulina y derivados de los mismos. 16. El compuesto farmacéutico para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque comprende incretina peptídica, un portador que es insoluble o poco soluble en agua y un aditivo para dispersar e inrustar la incretina peptídica en la superficie del portador. 17. El compuesto farmacéutico para absorción nasal de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque la incretina peptídica es una seleccionada del grupo que consiste de péptido tipo glucagón-1, péptido tipo glucagón-1 amida, péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (7-37), [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-36) amida, [Val8]- péptido tipo glucagón-1 (7-37), [Lys26, -NH(y-Glu(N- -palmitoil) }] -GLP-l (7-37), péptido tipo glucagón-1 (9-36) amida, péptido tipo glucagón-1 (9-37), péptido tipo glucagón-2, exendina-3, exendina-4, glucagón, polipéptido inhibitorio gástrico, insulina y derivados de los mismos. 111 18. El compuesto farmacéutico para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, caracterizado porque el aditivo es un almidón seleccionado del grupo que consiste de amilopectina, amilosa, o una mezcla que contiene amilopectina y amilosa a cualquier proporción. 19. El compuesto farmacéutico para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque el aditivo es harina de arroz, almidón de arroz, almidón beta de arroz (tipo arroz no glutinoso) , almidón beta de arroz (tipo arroz glutinoso) , almidón de arroz pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) , almidón de arroz pregelatinizado (tipo arroz glutinoso) , almidón de maíz, almidón beta de maíz (tipo arroz no glutinoso) , almidón beta de maíz (tipo arroz glutinoso) , almidón de maíz pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso), almidón de maíz pregelatinizado (tipo arroz glutinoso) , almidón de papa, almidón beta de papa (tipo arroz no glutinoso) , almidón de papa pregelatinizado (tipo arroz no glutinoso) , almidón de trigo pregelatinizado (tipo arrez no glutinoso) o un almidón parcialmsnte pregelatinizado de los mismos. 20. El compuesto farmacéutico para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque el aditivo es un oligosacárido, polímero de carboxivinilo , povidona, hidroxipropilcelulosa, goma de xantano, pectina, alginato de sodio, goma arábiga en polvo o gelatina. 112 21. Una composición farmacéutica caracterizada porque contiene la composición- farmacéutica para absorción nasal de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 junto con un inhibidor de DPP-IV. 22. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque el inhibidor de DPP-IV es diprotina A, bacitracina o tiazoliduro de isoleucina .