CN1662554A - 用于预防和治疗早老性痴呆和淀粉状蛋白相关疾病的疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及基于立体化学的“非自身”抗原疫苗，用于预防和/或治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病。本发明提供一种用于预防和治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病的疫苗，所述疫苗克服了与使用天然存在的肽、蛋白或免疫原相关的缺陷。

Description

用于预防和治疗早老性痴呆和淀粉状蛋白相关疾病的疫苗
                    发明背景
本发明涉及基于新型立体化学的“非自身”抗原疫苗，以预防和/或治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病。
淀粉状蛋白病涉及特征为存在淀粉状蛋白纤维的病理病症。淀粉状蛋白是通用术语，是指一组不同的但在许多不同疾病中所见到的特异性蛋白沉积(胞内和/或胞外)。虽然其存在不同，但是所有淀粉状蛋白沉积都具有共同的形态特征，被特定染料(例如刚果红)染色并且具有染色后在偏振光中出现特征性红绿双折射。它们也享有共同的超微结构特征和共同的X射线衍射和红外光谱。
淀粉状蛋白相关疾病可以或者局限于一种器官或者散布至数种器官。第一种情况被称为“局限性淀粉状蛋白病”，而第二种情况则被称为“系统性淀粉状蛋白病”。
某些淀粉状蛋白性疾病可以是特发性的，但这些疾病中的大多数似乎为之前已存在疾病的并发症。例如，原发性淀粉状蛋白病可以在无任何其它病理的情况下发生或者可以在浆细胞性恶液质或多发性骨髓瘤之后发生。继发性淀粉状蛋白病通常见到与慢性感染(例如结核病)或慢性炎症(例如类风湿性关节炎)相关。家族性形式的继发性淀粉状蛋白病也在家族性地中海热(FMF)中见到。该家族性形式的淀粉状蛋白病，同其它类型的家族性淀粉状蛋白病之一一样，在遗传学上是可遗传的并且在特定的人群中被发现。在这两种类型的淀粉状蛋白病中，在数种器官中发现沉积，并因此认为是系统性淀粉状蛋白性疾病。在长期血透患者中发现另一种类型的系统性淀粉状蛋白病。在这些情况的每种情况下，一种不同的成淀粉样蛋白涉及淀粉状蛋白沉积。
“局限性淀粉状蛋白病”是往往涉及一个器官系统的那些疾病。不同的淀粉状蛋白的特征也在于沉积中存在的蛋白类型。例如羊瘙痒病、牛海绵状脑病、克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)等神经变性性疾病的特征为在中枢神经系统中出现并累积蛋白酶抗性形式的朊病毒蛋白(称为AScr或PrP-27)。同样，早老性痴呆(另一种神经变性性疾病)的特征为神经炎性病斑和神经纤维缠结。在这种情况下，由于原纤维Aβ淀粉状蛋白的沉积而形成所述病斑和血管淀粉状蛋白。其它疾病例如成年发病型糖尿病(II型糖尿病)的特征为淀粉状蛋白在胰脏中局部累积。
一旦形成了这些淀粉状蛋白，则没有已知的广泛认可的显著原位溶解所述沉积的疗法或治疗。
各种成淀粉样蛋白具有组构成多个β折叠并且在胞内或胞外沉积以形成不溶性原纤维的能力。各种成淀粉样蛋白虽然在氨基酸序列方面不同，但是都具有相同的形成原纤维并结合于其它元件例如蛋白聚糖、淀粉状蛋白P和补体组分的特性。此外，各种成淀粉样蛋白的氨基酸序列虽然不同但是仍将显示相似性，例如具有能够结合于蛋白聚糖的糖胺聚糖(GAG)部分(称为GAG结合部位)的区域以及将启动β折叠形成的其它区域。
在特定的情况下，淀粉状蛋白性原纤维一旦沉积则可能变成对周围细胞有毒性。作为每一实例，已经表明，以老年斑形式存在的Aβ原纤维与早老性痴呆患者的神经元细胞死亡和小神经胶质细胞增生有关。当在体外进行试验时，显示Aβ肽能够触发小神经胶质细胞(脑巨噬细胞)的活化过程，这将解释早老性痴呆患者脑中发现的小神经胶质细胞增生和脑部炎症的存在。
在II型糖尿病患者中所见到的另一种类型的淀粉状蛋白病中，已经表明成淀粉样蛋白IAPP在体外诱导β-胰岛细胞毒性。因此，IAPP原纤维在II型糖尿病患者胰脏中的出现可以引起β胰岛细胞(郎格罕氏岛(Langerhans))的丧失和器官机能障碍。
早老性痴呆病人在成年时发生进行性痴呆，并在脑中伴随有三种主要的结构改变：神经元在脑的多个部位中弥散性丧失；胞内蛋白沉积的累积，称为神经纤维缠结；和胞外蛋白沉积的累积，称为淀粉状蛋白性病斑或老年斑，被畸形神经末稍所包围(营养不良神经突)。这些淀粉状蛋白性病斑的主要成分是淀粉状蛋白-β肽(Aβ)即通过β-淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的切割所产生的40-42个氨基酸的蛋白。虽然对早老性痴呆进行对症治疗，但是该病目前既不可预防也不可治愈。
应用疫苗治疗早老性痴呆原则上是可行的(Schenk，D.等，(1999)Nature 400，173-177)。Schenk等表明，在脑淀粉状蛋白病(如在早老性痴呆中所见到的)的转基因小鼠模型中，用Aβ肽免疫抑制淀粉状蛋白性病斑和相关营养不良神经突的形成。在该项研究中，用人聚集全-L肽作为免疫原的疫苗在接种疫苗的转基因小鼠中防止β-淀粉状蛋白性病斑的形成、星形胶质细胞增生和神经炎性营养不良。
然而，显而易见的是，应用内源蛋白作为疫苗(或待免疫动物中天然存在的蛋白)有许多缺陷。这些缺陷中的某些包括：
·可能发生自身免疫病，由于产生针对“自身”蛋白的抗体。
·难以激发免疫应答，由于宿主免疫系统不能突破耐受性。
·可能发生脑部急性炎症反应，由于小神经胶质细胞的抗体介导的吞噬作用。
·产生抗独特型抗体。
                        发明概述
本发明涉及基于立体化学的“非自身”抗原疫苗，以预防和/或治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病。本发明的一个目标是提供一种用于预防和治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病的疫苗，该疫苗克服了与应用天然存在的肽、蛋白或免疫原例如原纤维蛋白(例如β淀粉状蛋白)相关的缺陷。
本文所用的术语“原纤维和/或淀粉状蛋白肽”包括本文中所讨论的单体、寡聚体和可溶性β-淀粉状蛋白或任何原纤维蛋白以及可以天然存在的、合成构建的或相当于已知原纤维蛋白的任何其它结构变异体。具体地说，原纤维和/或淀粉状蛋白肽由来自原纤维肽例如淀粉状蛋白或其任何结构变异体的至少3个氨基酸组成。本文所用的术语“相当于”是指多核苷酸序列与参比多核苷酸序列的全部或一部分同源(即相同，在进化上不紧密相关的)，或者多肽序列与参比多肽序列相同。截然相反的是，本文所用的术语“与……互补”是指互补序列与参比多核苷酸序列的全部或一部分同源。举例说明，核苷酸序列″TATAC″相当于参比序列″TATAC″，而与参比序列″GTATA″互补。
术语“淀粉状蛋白相关疾病”包括与或者可溶性形式或者不溶性(病斑)形式的淀粉状蛋白累积相关的疾病，所述疾病可以或者局限于一种器官即“局限性淀粉状蛋白病”或者散布至数种器官即“系统性淀粉状蛋白病”。继发性淀粉状蛋白病可能与慢性感染(例如结核病)或慢性炎症(例如类风湿性关节炎)相关，包括也在家族性地中海热(FMF)中所见到的家族性形式的继发性淀粉状蛋白病。在长期血透患者中发现另一种类型的系统性淀粉状蛋白病。局限性形式的淀粉状蛋白病包括但不限于II型糖尿病及其任何相关障碍、神经变性性疾病例如羊瘙痒病、牛海绵状脑病、克-雅病、早老性痴呆、脑淀粉状蛋白性血管病和朊病毒蛋白相关疾病。
本发明的疫苗可以用于预防和/或治疗淀粉状蛋白相关疾病，并且可以用于生产预防和/或治疗淀粉状蛋白相关疾病的药物。如本文中所述，原纤维肽或蛋白可以衍生自已知与某些形式的淀粉状蛋白性疾病相关的原纤维前体蛋白。这样的前体蛋白包括但不限于血清淀粉状蛋白A蛋白(ApoSAA)、免疫球蛋白轻链、免疫球蛋白重链、ApoAl、甲状腺素运载蛋白、溶菌酶、纤维蛋白原α链、凝溶胶蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C、淀粉状蛋白β蛋白前体(β-APP)、β2微球蛋白、朊病毒前体蛋白(PrP)、心房钠尿因子、角蛋白、胰岛淀粉状蛋白多肽、肽类激素和synuclein。这样的前体也包括这类前体的突变蛋白、蛋白片段和蛋白水解肽。在一个优选的实施方案中，关于原纤维前体蛋白，所述肽有效诱导针对由成淀粉样蛋白或肽所形成的表位的免疫应答。也就是说，正如本文中更详细地描述一样，许多形成原纤维的肽或蛋白是这类前体蛋白的片段，例如以上列举的那些片段。当例如通过蛋白酶切割形成这样的片段时，可以揭示出在所述前体上并不存在表位，因此当该片段是前体蛋白的一部分时，该表位在免疫学上不可用于免疫系统。
在另一个实施方案中，所述肽有效诱导由针对成淀粉样蛋白或肽所形成的表位的免疫应答。成淀粉样蛋白或肽与淀粉状蛋白肽或蛋白同义，包括能够形成原纤维、病斑或淀粉状蛋白沉积的蛋白或肽。如本文中所述，术语“Aβ”、“Aβ肽”、“β-淀粉状蛋白肽”和“淀粉状蛋白β肽”是同义语，是指衍生自β淀粉状蛋白前体蛋白(β-APP)的约38-43个氨基酸的一种或多种肽组合物。解聚的Aβ是指Aβ的可溶性单体和寡聚体肽单位。单体Aβ的一种制备方法是用超声处理将冻干肽溶于纯DMSO中。将所得的溶液离心，以去除任何不溶性微粒。聚集的Aβ是其中单体单位通过非共价键连接在一起的寡聚体的混合物。此外，APP695、APP751和APP770分别指由人APP基因编码的长695个、751个和770个氨基酸残基的多肽。参见Kang等，Nature 325，773(1987)；Ponte等，Nature 331，525(1988)；和Kitaguchi等，Nature 331，530(1988)。人淀粉状蛋白前体蛋白(APP)中的氨基酸的编号依照APP770同种型的序列的编号指定。术语例如Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43分别指含有氨基酸残基1-39、1-40、1-41、1-42和1-43的Aβ肽。优选Aβ肽含有氨基酸残基10-21。更优选所述Aβ肽含有氨基酸残基13-21。
因此，在本发明的一个实施方案中，提供一种用根据非天然D-构型氨基酸合成的“非自身”肽或蛋白产生的疫苗，以避开使用“自身”蛋白的缺陷。与现有技术的疫苗相反，所述肽不需要聚集成可操作性的或免疫原性的。因此，“免疫原性肽”、 免疫原”或“抗原”是能够在给予患者后(加有或不加佐剂)诱导针对本身的免疫应答的分子。这样的分子包括例如与载体蛋白缀合的成淀粉样肽或其片段，所述载体蛋白例如匙孔血蓝蛋白(KLH)、C3d、多糖、牛血清白蛋白(BSA)、破伤风类毒素、热激蛋白(HSP)、卵清蛋白或霍乱毒素。
术语“免疫应答”或“免疫原性应答”是指在脊椎动物个体中产生针对抗原的体液(抗体介导的)和/或细胞(由抗原特异性T细胞或其分泌物介导的)应答。这样的应答可以是由给予免疫原所诱导的主动应答或者是由给予抗体或可以作为抗原呈递细胞起作用的免疫细胞例如致敏T细胞、B细胞、巨噬细胞NK或NKT细胞或致敏树突细胞所诱导的被动应答。通过呈递与I类或II类MHC分子缔合的多肽表位以激活抗原特异性CD4+T辅助细胞和/或CD8+细胞毒性T细胞，从而激发细胞免疫应答。所述应答也可以包括激活免疫细胞例如单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、嗜碱性粒细胞、树突细胞、星形胶质细胞、小神经胶质细胞、嗜酸性粒细胞或先天免疫的其它组分。通过本领域已知的标准增殖测定(CD4+T细胞)或CTL(细胞毒性T淋巴细胞)测定，可以测定细胞介导免疫应答的存在。通过从免疫的第一种哺乳动物中独立地分离出免疫球蛋白(IgG)和T细胞部分并且测量在第二个受治疗者中的保护或治疗效应，可以分辨体液应答或细胞应答对免疫原的保护或治疗效应的相对贡献。
术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可以互换使用，是指具有支持碱基通过氢键与典型多核苷酸连接的骨架的聚合分子，其中聚合物骨架中的碱基以允许在聚合分子和典型多核苷酸(例如单链DNA)之间以序列特异性方式通过这样的氢键连接的方式存在。这样的碱基通常是肌苷、腺苷、鸟苷、胞嘧啶、尿嘧啶和胸苷。聚合分子包括双链和单链RNA和DNA及其骨架修饰物例如甲基膦酸酯键。本文所用的术语“多肽”是指由通过肽键连接的氨基酸残基的单链构成的化合物。术语“蛋白”可以与术语“多肽”同义，或者可以指两种或多种多肽的复合物。术语“肽”也指由通过肽键连接的氨基酸残基组成的化合物。一般而言，肽由100个或少于100个氨基酸组成，而多肽或蛋白具有超过100个氨基酸。本文所用的术语“蛋白片段”也可以用来指肽。
除非在本文中以其它表示进行限定，否则本文所用的指定给氨基酸和保护基的缩写基于IUPAC-IUB生物化学命名委员会的建议(Biochemistry，1972，11：1726-1732)。
在另一个实施方案中，提供一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，其特征在于给予所述受治疗者抗原量的一种全-D肽，所述全-D肽激发所述受治疗者产生针对所述全-D肽的抗体并且激发免疫应答，因此预防原纤维生成、相关细胞毒性和神经变性，其中所述抗体与诱发淀粉状蛋白病的淀粉状蛋白、原纤维蛋白或另一种非淀粉状蛋白的至少一个区相互作用。“原纤维肽”或“原纤维蛋白”是指形成在淀粉状蛋白病斑中存在的原纤维的蛋白或肽的单体或寡聚体或聚集形式。这类肽和蛋白的实例在本文中提供。含有“非淀粉状蛋白”的制剂包括但不限于产生针对凝溶胶蛋白片段的免疫应答的组合物，以治疗遗传性系统性淀粉状蛋白病；产生针对突变溶菌酶蛋白(Alys)的免疫应答的组合物，以治疗遗传性神经病；产生针对纤维蛋白原的突变α链(AfibA)的免疫应答的组合物，以治疗非神经病性形式的淀粉状蛋白病表现如肾病；以及产生针对突变抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(Acys)的免疫应答的组合物，以治疗在冰岛(Iceland)报道的一种遗传性脑血管病形式。另外，某些遗传性形式的朊病毒病(例如克-雅病(CJD)、格-施-沙综合征(Gerstmann-Strussler-Scheinker syndrome)(GSS)和致死性家族性失眠症(FFI))的特征为朊病毒蛋白的突变同种型PrPsc。按照本发明，该蛋白可以用于治疗和预防PrP病斑沉积的治疗组合物中。这些疫苗可以用于预防和/或治疗淀粉状蛋白相关疾病，并且可以用于生产预防和/或治疗淀粉状蛋白相关疾病的药物。
在本发明的再一个实施方案中，用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的疫苗包含至少一种与淀粉状蛋白相互作用的抗体或其片段，以预防原纤维生成，其中所述抗体是针对这种蛋白的抗原量的全-D肽产生的，所述全-D肽例如β折叠区域、GAG-结合部位区域、Aβ(1-42，全-D)和巨噬细胞粘着区域Aβ(10-16)、其免疫原性片段、其蛋白缀合物、其免疫原性衍生肽、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物(peptidomimetics)或具有与任一上述肽有大致同一性的肽。
以下术语用来描述两个或两个以上的多核苷酸之间的序列关系：“大致同一性”、“比较窗”、“序列同一性”、“序列同一性百分比”和“参比序列”。“参比序列”是用作序列比较标准的明确序列；参比序列可以是较大序列的一个亚组，如序列表中给出的全长cDNA序列或基因序列的一个区段等或者可以包含完整的cDNA序列或基因序列。一般而言，参比序列的长度为至少20个核苷酸，通常长度为至少25个核苷酸，一般长度为至少50个核苷酸。由于两个多核苷酸可以各自(1)包含在该两个多核苷酸之间相似的序列(即完整多核苷酸序列的一部分)，和(2)可以还包含在这两个多核苷酸之间不同的序列，在两个或(两个以上)多核苷酸之间的序列比较通过比较“比较窗”内的两个多核苷酸的序列以鉴定和比较序列相似的局部区域来进行。本文所用的术语“比较窗”是指至少20个连续核苷酸位置的概念区段(conceptual segment)，其中可以将一个多核苷酸序列与至少20个连续核苷酸的参比序列进行比较，并且其中所述多核苷酸序列在所述比较窗中的部分相对于参比序列(不包含添加或缺失)可以包含20％或20％以下的添加或缺失(即空位)，以对该两个序列进行最佳比对。用于比对比较窗的最佳序列比对可以按照下述方法进行：局部同源性算法，Smith和Waterman(1981)Adv.Appl.Math.2：482；同源性序列比对算法，Needleman和Wunsch (1970)J.Mol.Biol.48：443；相似性搜索方法，Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85：2444；这些算法的计算机化执行程序(GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Wisconsin Genetics Software PackageRelease 7.0，Genetics Computer Group，575 Science Dr.，Madison，Wis.)；或者检验，并且从中选出通过各种方法产生的最佳比对(即在比较窗内产生同源性的最高百分比)。
术语“序列同一性”是指比较窗内的两个多核苷酸序列是相同的(即基于核苷酸对核苷酸是相同的)。术语“序列同一性百分比”通过以下方法计算：通过比较比较窗内的两个最佳比对序列，测定在这两个序列中存在的相同核酸碱基(例如A、T、C、G、U或I)位置数目，以得出匹配位置的数目，将匹配位置数除以比较窗中的位置总数(即窗的大小)，结果再乘以100，从而得出序列同一性百分比。本文所用的术语“大致同一性”表示多核苷酸序列的特征，其中用至少20个核苷酸位置的比较窗、通常至少25-50个核苷酸的比较窗与参比序列相比，所述多核苷酸包含具有至少85％序列同一性、优选至少90％-95％序列同一性、更优选至少99％序列同一性的序列，其中用比较窗将参比序列与多核苷酸序列进行比较，计算序列同一性百分比，其中所述多核苷酸序列可能包含总计为比较窗参比序列的20％或20％以下的缺失或添加。
当用于指多肽时，术语“大致同一性”是指两个肽序列当进行最佳比对时(例如通过运用缺省空位加权(default gap weights)的程序GAP或BESTFIT)共享至少80％序列同一性，优选至少90％序列同一性，更优选至少95％序列同一性或更高(例如99％序列同一性)。优选不具有同一性的残基位置的差别是保守氨基酸取代。保守氨基酸取代是指具有相似侧链的互换性残基。例如一组具有脂族侧链的氨基酸是甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；一组具有脂族-羟基侧链的氨基酸是丝氨酸和苏氨酸；一组具有含酰胺侧链的氨基酸是天冬酰胺和谷氨酰胺；一组具有芳族侧链的氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；一组具有碱性侧链的氨基酸是赖氨酸、精氨酸和组氨酸；和一组具有含硫侧链的氨基酸是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代基团是缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
术语“抗体”或“免疫球蛋白”包括完整抗体及其片段。抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体，并且可以通过重组技术制备、从血清或腹水中收集或者从杂交瘤获得。通常，片段与衍生这些片段的完整抗体竞争以与抗原片段特异性结合。片段通过重组DNA技术或者完整抗体的酶促或化学切割而产生。抗原结合片段包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv和单链抗体，还包括独立的重链或轻链。抗体片段通过重组DNA技术或者完整免疫球蛋白的酶促或化学分离而产生。术语“抗体”包括一个或多个免疫球蛋白链，所述免疫球蛋白链与其它蛋白化学缀合或者表达为与其它蛋白的融合蛋白。术语“抗体”也包括双特性抗体。双特异性或双功能抗体是具有两个不同重链/轻链对和两个不同结合部位的人工杂交抗体。双特异性抗体可以通过各种各样的方法产生，所述方法包括杂交瘤的融合或Fab′片段的连接。参见例如Songsivilai和Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny等，J. Immunol.148，1547-1553(1992)。
本文所用的术语“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH结构域和VL结构域，其中这些结构域以一种多肽链存在。所述Fv多肽最好在VH结构域和VL结构域之间还包含一个多肽接头，该接头使所述sFv形成所需的抗原结合结构。有关sFv的综述参见Pluckthun， The Pharmacology of Monoclonal Antibodies.第113卷.Rosenburg和Moore编著，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。
两个实体之间的特异性结合是指亲和力为至少106M-1、107M-1、108M-1、109M-1或1010M-1。优选亲和力大于108M-1。如本文中所讨论的，考虑了本发明包括抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中的微小变异，条件是氨基酸序列的变异保持至少75％，更优选至少80％、90％、95％，最优选99％。尤其考虑了保守氨基酸取代。保守取代是在其侧链上相关的氨基酸家族内发生的那些取代。遗传编码的氨基酸一般分为以下类别：(1)酸性氨基酸＝天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性氨基酸＝赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性氨基酸＝丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电荷的极性氨基酸＝甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。更优选的家族是：丝氨酸和苏氨酸是脂族-羟基家族；天冬酰胺和谷氨酰胺是含有酰胺的家族；丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸是脂族家族；而苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是芳族家族。例如，可以预期以下独立取代：亮氨酸被异亮氨酸或缬氨酸取代、天冬氨酸被谷氨酸取代、苏氨酸被丝氨酸取代或一个氨基酸被另一结构上相关的氨基酸的相似取代将对所产生的分子的结合或特性没有太大的影响，如果所述取代在构架位点内并不涉及氨基酸尤其如此。氨基酸改变是否产生功能性肽可以容易地通过测定所述多肽衍生物的比活来确定。在本文中详细地描述了各种测定。片段或类似物的优选氨基末端和羧基末端存在于功能域的边界附近。通过将所述核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共的或私有的序列数据库进行比较，可以鉴定出结构和功能结构域。最好用计算机化比较法来鉴定序列基序或已知结构和/或功能的其它蛋白中存在的预测蛋白质构象结构域。折叠成已知的三维结构的蛋白质序列的鉴定方法是已知的。Bowie等Science 253：164(1991)。因此，前面的实例证明，本领域技术人员可以按照本发明知道可用来确定结构和功能结构域序列基序和结构构象。优选的氨基酸取代是以下的氨基酸取代：(1)降低对蛋白水解的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变对形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)赋予或改进这种类似物的其它物理化学特性或功能特性。类似物可以包括非天然存在的肽序列的序列的各种突变蛋白。例如，可以在天然存在的序列(最好在形成分子间接触的结构域之外的多肽部分中)中进行单个或多个氨基酸取代(最好是保守氨基酸取代)。保守氨基酸取代应该基本上不改变亲代序列的结构特征(例如取代氨基酸不应该破坏亲代序列中存在的螺旋，或者破坏表征亲代序列的其它类型的二级结构)。本领域公知的多肽二级结构和三级结构的实例描述于Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton编著，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to ProteinsStructure(C.Branden和J.Tooze编著，Garland Publishing，New York，N.Y.(1991))；和Thornton等Nature 354：105(1991)，所述文献通过引用结合到本文中。
本文所用的术语“人源化”形式的非人类(例如啮齿动物)抗体是含有从非人类免疫球蛋白中获得的基本序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如抗体的Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或其它抗原-结合亚序列)。人源化抗体多半是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区的残基被来自非人类物种(供体抗体)例如小鼠、大鼠或兔、具有所需特异性、亲和性和容量的高变区取代。在某些情况下，人免疫球蛋白的构架区(FR)残基被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体可以包含既没有在受体抗体也没有在供体抗体中发现的残基。进行这些修饰以进一步精修和使抗体表现最大化。一般而言，人源化抗体将基本上完整包含至少一个、通常两个可变区，其中高变环的完整或基本上完整对应于非人类免疫球蛋白的可变区，完整或基本上完整的FR是人免疫球蛋白序列的那些FR。人源化抗体也将任选包含至少免疫球蛋白恒定区(Fc)的一部分，通常为人免疫球蛋白的一部分。有关更详细的描述参见Jones等，Nature，3221：5222 525(1986)；Reichmarm等，Nature，332：323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596(1992)。
术语“缀合”或“与……缀合的”意指结合在一起、偶联、键合和/或融合。“蛋白缀合物”或“缀合蛋白”一般意指蛋白与非蛋白的化合物。“缀合蛋白”除含有所述氨基酸外还含有永久相关的化学组分。缀合蛋白的非氨基酸部分一般是指其辅基。缀合蛋白可根据其辅基的化学性质进行分类(Lehninger Principles of Biochemistry，3d ed.Worth Publishers 2000)，所述文献通过引用结合到本文中。在缀合物疫苗中，抗原分子与“载体”蛋白或多肽共价连接。所述连接用以增加缀合分子的抗原性。从抗原分子和“载体”蛋白或多肽制备缀合物疫苗的方法是本领域已知的(Jacob，C.O等，Eur.J.Immunol.16：1057-1062(1986)；Parker J.M.R.等，载于ModemApproaches to Vaccines，Chanock，R.M.等编著，第133-138页，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y.(1983)；Zurawski，V.R等，J.Immunol.121：122-129(1978)；Klipstein，F.A等，Infect.Immun.37：550-557(1982)；Bessler，W.G，Immunobiol.170：239-244(1985)；Posnett，D.N等，J.Biol.Chem.263：1719-1725(1988)；Ghose，A.C等，Molec.Immunol.25：223-230(1988)；所有所述文献通过引用结合到本文中)。蛋白和多糖的缀合可以提供其它有利的结果。例如，已经发现蛋白-多糖缀合物不仅增强针对多糖组分的抗体应答，而且增强针对蛋白组分的抗体应答。该效应描述于例如Mond和Lees的双缀合物专利申请即美国专利第5,955,079号和第5,585,100号，这两个专利文献通过引用结合到本文中。该效应也描述于A.Lees等，″EnhancedImmunogenicity of Protein-Dextran Conjugates：I.Rapid Stimulation ofEnhanced Antibody Respones to Poorly Immunogenic Molecules(蛋白质-葡聚糖缀合物的免疫原性增强：I.快速刺激针对差免疫原性分子的增强抗体应答)，″Vaccine，Vol.12，No.13，(1994)，第1160-1166页。该文章通过引用全部结合到本文中。载体蛋白的实例包括但不限于匙孔血蓝蛋白(KLH)、C3d、多糖、牛血清白蛋白(BSA)、破伤风类毒素、热激蛋白(HSP)、卵清蛋白或霍乱毒素。
在另一个实施方案中，提供一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括给予一种包含至少两种抗体或其片段与原纤维蛋白和/或非淀粉状蛋白的两个或多个部分结合的一种组合的药用组合物。在另一个实施方案中，所述药用组合物还包含免疫细胞，更优选致敏淋巴细胞。
“药用组合物”是指适合于给予哺乳动物个体(最好是人类)的化学或生物学组合物。这样的组合物于可以具体配制用于通过许多途径中的一种或多种途径给予，所述途径包括但不限于经口、胃肠外、静脉内、动脉内、皮下、鼻内、舌下、脊柱内、脑室内、经皮等。“药用赋形剂”或“药学上可接受的赋形剂”是配制活性治疗肽所用的载体，通常为液体。所述赋形剂对制剂而言一般不提供任何药理活性，虽然它可以提供化学和/或生物学稳定性、释放特征等。示例性的制剂可以在Remington′s Pharmaceutical Sciences，19th Ed.，Grennaro，A.编著，1995中找到。
再者，在再一个实施方案中，提供一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括给予所述受治疗者抗原量的一种全-D肽，所述全-D肽可以与淀粉状蛋白的至少一个区域例如例如β折叠区域、GAG-结合部位区域、Aβ(1-42)和巨噬细胞粘着区域Aβ(10-16)、其免疫原性片段、其蛋白缀合物、其免疫原性衍生肽、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物进一步相互作用，其中所述化合物激发所述受治疗者的免疫应答，因而防止原纤维生成。
按照另一个相关的方面，本发明包括一种预防或治疗特征为哺乳动物受治疗者的淀粉状蛋白沉积的疾病的方法。按照本发明的该方面，给予所述受治疗者一剂有效产生针对所述受治疗者罹患的淀粉状蛋白性疾病特征性淀粉状蛋白肽的免疫应答的肽。从本质上讲，所述方法包括给予含有对所述疾病(例如上述的那些疾病)特异性的免疫原性淀粉状蛋白肽的药用组合物。这样的方法的特征还在于其有效诱导受治疗者的免疫原性应答。按照一个优选的实施方案，所述方法有效产生特征为关于所述免疫原性肽所针对的淀粉状蛋白肽的血清效价为至少1∶1000的免疫应答。在再一个优选的实施方案中，关于所述淀粉状蛋白组分的血清效价为至少1∶5000。按照一个相关的实施方案，所述免疫应答的特征为约4倍以上的血清免疫反应性量要比治疗前对照血清样品测量的血清免疫反应性水平高。后一种特征当通过ELISA技术测定血清免疫反应性尤其合适，但是适用于任何相对或绝对血清免疫反应性检测。按照一个优选的实施方案，以约1∶100至1∶10,000的血清稀释度测量所述免疫反应性，以确定抗体效价。
按照再一个相关的方面，本发明包括一种测定接受淀粉状蛋白性疾病治疗的患者的预后的方法。在此，测量针对选定疾病特征性淀粉状蛋白肽的患者血清免疫反应性量，患者血清免疫反应性量至少4倍于血清免疫反应性基线对照水平说明特定淀粉状蛋白性疾病的改进状态的预后。按照优选的实施方案，针对患者血清中存在的所选淀粉状蛋白肽的免疫反应性量的特征为关于所述淀粉状蛋白肽的血清效价为至少约1∶1000或至少1∶5000。
本文所用的“被动免疫”是指将抗体、其片段或免疫细胞(即T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、树突细胞、巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞或补体途径的组分)给予个体，以赋予免疫。可以使补体途径的组分与蛋白缀合，以结合主动免疫或被动免疫增强先天(inate)免疫应答。根据制备中所用的人血浆库，从人血中获得的免疫球蛋白(Ig)可以含有多种抗各种组分的抗体。特异性免疫球蛋白从具有高水平的抗特定抗原的抗体的供体血浆或者经免疫以产生这种应答的供体血浆中获得(Immunization，Cecil Textbook of Medicine，19th ed.Vol.1，W.B.Saunders Company 1992；Harrison′s Principles ofInternal Medicine，14th ed，McGraw Hill，1998)。在WO01/62801中描述了螯合血浆、脑和脑脊髓液中淀粉状蛋白-β肽的人源化单克隆抗体，所述抗体用于防止脑和脑血管内淀粉状蛋白-β肽的累积，所述文献通过引用结合到本文中。EP0613007描述了对主要为β折叠构象的β-淀粉状蛋白肽有特异性的抗体。这样的抗体可用于本文所述的发明中。
按照本发明的一个实施方案，提供用于被动免疫哺乳动物以预防或治疗淀粉状蛋白性疾病的方法和组合物。按照本发明的该方面，给予患者有效剂量的抗体或其片段或者免疫细胞，所述抗体或其片段与淀粉状蛋白肽的所选区域、最好是负责β折叠形成的所述肽的中央核心区域内或其附近的区域特异性地结合，所述免疫细胞最好是致敏免疫细胞或抗原呈递细胞。一般而言，这样的抗体根据其特异性地结合各种蛋白、肽和该部分前面段落中介绍药用组合物以及方法中所介绍的组分的能力进行选择。按照一个相关的实施方案，这样的方法和组合物可以包括结合至少两个淀粉状蛋白组分的抗体的组合。一般而言，给予药用组合物使得针对靶淀粉状蛋白肽的血清免疫反应性量比对照血清样品中测量的针对所述组分的血清免疫反应性水平高至少约4倍以上。如本文所述，所述抗体也可以与载体一起给予。一般而言，按照本发明的该方面，这样的抗体将腹膜内、经口、鼻内、皮下、肌内、经皮、局部或静脉内给予(或配制用于给药)，但可以通过任何药学上有效的途径给予或配制用于给药(即有效产生规定治疗水平，如以上和此中所述的)。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗体或抗体结合片段特异性地结合或者B细胞和/或T细胞应答的抗原上的位点。B细胞表位可以通过蛋白质的三次折叠连接的连续氨基酸或非连续氨基酸而形成。从连续氨基酸形成的表位通常保留暴露于变性溶剂中，而通过三次折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理后丧失。表位在独特空间构象中通常包括至少3个、更常见至少5个或8-10个氨基酸。表位空间构象的测定方法包括例如X射线结晶术和二维核磁共振。参见例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷，Glenn且Morris编著(1996)。在一个简单的免疫测定中可以鉴定出识别同一表位的抗体，表明一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力。L-细胞对于CD8细胞识别约9个氨基酸的连续表位或者对于CD4细胞识别约13-15个氨基酸的连续表位。识别所述表位的T细胞可以通过测量抗原依赖性增殖的体外测定进行鉴定，如掺入表位作用下的致敏T细胞的3H-胸苷测定(Burke等，J.Inf Dis.170，1110-19(1994))、抗原依赖性杀伤测定(细胞毒性T淋巴细胞测定，Tigges等，J Immunol.156，3901-3910)或细胞因子分泌物测定。
本文所用的术语“化合物”是指本发明的肽或含有依照本发明的肽的药学上可接受的组合物。在本发明的一个优选实施方案中，所述化合物是以下的式I化合物：
                    R′-(P)-R″    (I)，其中
P是淀粉状蛋白的一种全-D肽，例如β折叠区域、GAG-结合部位区域、Aβ(1-42，全-D)和巨噬细胞粘着区域(10-16，全-D)、其免疫原性片段、其免疫原性衍生物、其蛋白缀合物、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物；
R′是一个N末端取代基，例如：
·氢；
·低级烷基，例如具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基，带有或不带有官能团，例如羧酸酯基、磺酸酯基和膦酸酯基；
·芳族基团；
·杂环基；和
·酰基，例如烷基羰基、芳基羰基、磺酰基和膦酰基；且
R″是一个C末端取代基，例如羟基、烷氧基、芳氧基、未取代或取代的氨基。
在一个实施方案中，R′和R″相同或不同，其中R′和R″的烷基或芳基被诸如以下的官能团进一步取代：卤化物(例如F、Cl、Br和I)、羟基、烷氧基、芳氧基、羟基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基甲酰基、未取代或取代的氨基、磺基或烷氧基磺酰基、膦酰基或烷氧基膦酰基。
当所述化合物具有酸官能团时，它可以为药学上可接受的盐形式或酯形式。当所述化合物具有碱性官能团时，它可以为药学上可接受的盐形式。
在一个实施方案中，P是一种能够与淀粉状蛋白的至少一个区域相互作用的肽。
在本发明的一个优选实施方案中，所述受治疗者是人类。
在本发明的另一个实施方案中，所述淀粉状蛋白相关疾病可以是早老性痴呆。
在本发明的再一个实施方案中，所述淀粉状蛋白相关疾病可以是脑淀粉状蛋白性血管病(CAA)。
在本发明的另一个实施方案中，提供一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括给予所述受治疗者抗原量的式I化合物：
                R′-(P)-R″    (I)，其中
P是淀粉状蛋白的一种全-D肽，例如β折叠区域、GAG-结合部位区域、Aβ(1-42，全-D)和巨噬细胞粘着区域(10-16，全-D)、其免疫原性片段、其免疫原性衍生物、其蛋白缀合物、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物；
R′是一个N末端取代基，所述取代基选自：
·氢；
·低级烷基，例如具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基，带有或不带有官能团，例如羧酸酯基、磺酸酯基和膦酸酯基；
·芳族基团；
·杂环基；和
·酰基，例如烷基羰基、芳基羰基、磺酰基和膦酰基；且
R″是一个C末端取代基，例如羟基、烷氧基、芳氧基、未取代或取代的氨基。
按照该方法，所述化合物诱发所述受治疗者的免疫应答，以预防原纤维生成、神经变性或细胞毒性。
按照本发明的一个优选实施方案，提供一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的疫苗，所述疫苗包含抗原量的一种全-D肽，所述全-D肽可以与以下的区域进一步相互作用：淀粉状蛋白的至少一个区域例如β折叠区域(16-21)、GAG-结合部位区域(13-16)和巨噬细胞粘着区域(10-16，全-D)、其免疫原性片段、其蛋白缀合物、其免疫原性衍生肽、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物，其中所述化合物诱发所述受治疗者的免疫应答或者防止原纤维生成或者有利于清除原纤维形成之前的淀粉状蛋白。一方面，所述疫苗改变哺乳动物血浆中的可溶性Aβ水平，从而降低哺乳动物脑中的可溶性Aβ水平并且防止原纤维病斑的形成。
在另一个实施方案中，某些方法需要针对可溶性Aβ或原纤维Aβ的被动免疫。一方面，本发明提供一种用于预防和/或治疗需要这种预防和/或治疗的第一种哺乳动物的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括将抗原量的一种全-D淀粉状蛋白-β肽给予第二种哺乳动物，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽诱导所述第二种哺乳动物针对所述淀粉状蛋白-β肽的免疫应答，从所述第二种哺乳动物中回收所述抗体或免疫细胞，并且为所述第一种哺乳动物提供治疗或预防有效量的所述抗体或免疫细胞。在该实施方案中，所述全-D淀粉状蛋白-β肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO：1-70的序列有至少80％相同。可用于产生按照本发明的抗体或免疫细胞的Aβ的其它反应性表位包括Aβ的残基1-42内的表位、Aβ的残基16-21内的表位、Aβ的残基13-21内的表位、Aβ的残基10-21内的表位、Aβ的残基10-16内的表位、Aβ的残基25-35内的表位和包含Aβ的游离N末端残基或游离C末端残基的表位。一方面，将免疫细胞即致敏淋巴细胞例如B细胞或T细胞从如所描述的针对Aβ的主动免疫的第二种哺乳动物转移至第一种哺乳动物，实现针对Aβ的被动免疫，从而缓解或预防所述第一种哺乳动物的Aβ相关疾病。另一方面，通过转移能够与Aβ特异性结合的抗体或其片段，实现针对Aβ的被动免疫。再一方面，将人抗体、人源化抗体或嵌合抗体给予所述第一种哺乳动物，从而缓解或预防Aβ相关疾病。
在一个实施方案中，本发明涉及一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括给予所述受治疗者抗原量的一种全-D淀粉状蛋白-β肽，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽诱导所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的免疫应答，并且其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO：1-70的序列有至少80％相同或者与以下的表位特异性结合的至少一种抗体或片段的序列有至少80％相同：Aβ的残基1-42内的表位、Aβ的残基16-21内的表位、Aβ的残基13-21内的表位、Aβ的残基10-21内的表位、Aβ的残基10-16内的表位、Aβ的残基25-35内的表位和包含Aβ的游离N末端残基或游离C末端残基的表位。
在一个实施方案中，本发明涉及改变需要改变的哺乳动物(例如人)的血清Aβ水平，即通过给予治疗或预防量的至少一种与以下的表位特异性结合的抗体或片段：Aβ的残基1-42内的表位、Aβ的残基16-21内的表位、Aβ的残基13-21内的表位、Aβ的残基10-21内的表位、Aβ的残基10-16内的表位、Aβ的残基25-35内的表位和包含Aβ的游离N末端残基或游离C末端残基的表位。一方面，改变所述哺乳动物体内的血清Aβ水平将改变所述哺乳动物体内的可溶性Aβ水平或原纤维Aβ水平。再一方面，改变所述哺乳动物体内的血清Aβ水平将改变所述哺乳动物脑中的可溶性Aβ水平或原纤维Aβ水平。另一方面，改变所述哺乳动物体内的血清Aβ水平将有利于清除所述哺乳动物脑中的Aβ水平。
所述方法既可以用在无症状的患者身上，又可以用在当前表现疾病症状的那些患者身上。以这样的方法给予的抗体可以是人抗体、人源化抗体、嵌合抗体或非人类抗体或其片段，并且可以来自单克隆源或多克隆源、可以得自哺乳动物或者通过重组技术产生。在某些方法中，所述抗体从用Aβ肽免疫的人中制备。在其它方法中，给予人源化抗体。
在某些方法中，将所述抗体与药用载体一起作为药用组合物给予。在某些方法中，给予抗体的剂量为0.0001-100mg/kg体重抗体，优选至少1mg/kg体重抗体。在某些方法中，在长时间内例如至少6个月内以多个剂量给予所述抗体。在某些方法中，所述抗体作为缓释组合物给予。可以通过例如腹膜内、经口、皮下、颅内、肌内、局部、鼻内、经皮或静脉内给予所述抗体。
根据以下的详细描述和权利要求书，本发明的其它特征和优势将是显而易见的。
                          附图简述
图1说明抗原片段的靶位点。
图2说明1mg/ml针对D和L形式的Aβ(16-21)产生的多克隆抗体对原纤维生成的影响。
图3说明0.5mg/ml针对D和L形式的Aβ(16-21)产生的多克隆抗体对原纤维生成的影响。
图4A-4C说明电子显微镜照片，显示抗D KLVFFA肽抗体(图4B)和抗L KLVFFA肽抗体(图4C)相对于对照(图4A)对原纤维生成的影响。
图5A-5D说明抗D KLVFFA对压后皮质(retrosplenial cortex)(图5A)和顶皮质(图5C)的脑切片中的聚集Aβ肽的免疫组织化学以及抗D KLVFFA对后脊皮质(retrospinal cortex)(图5B)和顶皮质(图5D)的相同脑切片中的聚集Aβ肽的组织化学(Thioflavin S测定)。
图6A-6D说明抗L KLVFFA抗体对顶皮质(图6A)和内嗅皮质(图6C)的脑切片中的聚集Aβ肽的免疫组织化学以及抗L KLVFFA抗体对顶皮质(图6B)和内嗅皮质(图6D)的相同脑切片中的聚集Aβ肽的组织化学(Thioflavin S测定)。
图7说明兔子对KLH-缀合的全-L和全-D KLVFFA的应答。
图8A和图8B说明用D13-21-KLH免疫的TgCRND8小鼠脑中的可溶性和不溶性Aβ40水平的降低。
图9说明用D13-21-KLH免疫的TgCRND8小鼠脑中的可溶性Aβ42水平的降低。
图10A和图10B说明用D13-21-KLH免疫的TgCRND8小鼠脑中的总Aβ水平(Aβ40和Aβ42)的降低
                    发明详述
淀粉状蛋白性疾病或淀粉状蛋白病包括许多具有各种各样的表面症状的疾病状态。这些疾病的共同特征为存在蛋白原纤维的异常胞外沉积，称为“淀粉状蛋白沉积”或“淀粉状蛋白病斑”，通常其直径约10-100nm，位于特定器官或组织区域内。这样的病斑主要由天然存在的可溶性蛋白或肽构成，它们聚集在一起形成不溶性原纤维沉积。这些不溶性沉积由直径约10-15nm的原纤维的普遍横向聚集物构成。淀粉状蛋白原纤维当用刚果红染料染色时在偏振光中产生特征性的苹果绿双折射。
形成病斑沉积的肽或蛋白通常从较大的前体蛋白产生。更准确地讲，淀粉状蛋白原纤维沉积的发病机理一般涉及“异常”前体蛋白被蛋白酶切割成片段。这些片段一般聚集在一起形成反平行β折叠；然而，据报道，在家族性淀粉状蛋白性多神经病(变异型甲状腺素运载蛋白原纤维)和透析相关淀粉状蛋白病(β2微球蛋白原纤维)中某些未降解形式的前体蛋白聚集并形成原纤维(Tan，S.Y.和Pepys，M.B.Amyloidosis.Histopathology 25：403-414(1994))。具体地说，已知Aβ(16-21)位点在起动Aβ肽成淀粉样有害过程中起重要作用。也知道，当这些肽由D-氨基酸构成时，它们保留其与天然全-L-同源序列相互作用的能力，从而防止淀粉状蛋白生成。可以用于本发明的其它淀粉状蛋白包括但不限于IAPP的β折叠区域(例如24-29，全-D)、β2-微球蛋白、淀粉状蛋白A蛋白和朊病毒相关蛋白。
所述疾病传统上根据形成病斑沉积的主要原纤维组分进行分类，如下文所述。然而，虽然不希望受理论的束缚，但是有证据支持Aβ可以可以在脑和血液之间来回运输(Ghersi-Egea，J.等，J.Neurochem.，67：880-883，(1996))并且病斑中的Aβ(不溶性或原纤维Aβ)处于与可溶性Aβ的平衡之中(Kawarabayashi，T.等，J.Neurosci.21：372-381，(2001)，这两个文献均通过引用全部结合到本文中。因而，为根据主要原纤维组分鉴定疾病提供了方便，并且通过靶向或者原纤维Aβ或者可溶性Aβ，按照本文描述的组合物和方法可以实现缓解所述疾病。通过主动免疫或被动免疫可以实现靶向原纤维Aβ或可溶性Aβ，如本文中所述并且描述于PCT公开号WO 01/62801、WO01/90182、WO 01/18169、WO 00/77178、WO 00/72880、WO 00/72876、WO 99/60024和WO 99/27944，每个专利文献都通过引用全部结合到本文中。靶Aβ的水平、尤其是可溶性Aβ的水平可通过本领域已知的方法和此中公开的方法(参见美国专利5,766,846、5,837,672和5,593,846，每个专利文献都通过引用全部结合到本文中)来测定。这些水平可以在预防性或治疗性治疗的过程中进行监测。当疾病状态得到减轻时则达到治疗终点。
淀粉状蛋白性疾病
本发明基于这样的发现：淀粉状蛋白性疾病可以通过给予用来刺激针对各种疾病特异性淀粉状蛋白沉积的一个或多个组分的免疫应答的肽进行治疗。以下小节用来举例说明主要形式的淀粉状蛋白病，并不是用来限制本发明。
AA(反应性)淀粉状蛋白病
一般而言，AA淀粉状蛋白病是许多刺激持续急性期应答的疾病的表现。这样的疾病包括慢性炎性疾病、慢性局部或系统性微生物感染和恶性肿瘤。
AA原纤维一般由血清淀粉状蛋白A蛋白(ApoSAA)的蛋白酶切割所形成的8000道尔顿片段(AA肽或蛋白)组成，ApoSAA为HDL复合体中存在的循环载脂蛋白并且在肝细胞对如IL-1、IL-6和TNF等细胞因子应答时合成。沉淀可以在生物体内广泛分布，但优先分布在实质器官中。脾脏通常是沉积部位，而肾脏也可能受到影响。沉积也常常在心脏和胃肠道中。
AA淀粉状蛋白性疾病包括但不限于炎性疾病例如类风湿性关节炎、青少年慢性关节炎、强直性脊椎炎、牛皮癣、牛皮癣性关节病、赖特综合征(Peiter′s syndrome)、成人斯蒂尔病(Adult Still′s disease)、贝赫切特综合征(Behcet′s syndrome)和节段性回肠炎(Crohn′sdisease)。AA沉积也由于慢性微生物感染而产生，例如麻疯病、结核病、支气管扩张、褥疮性溃疡、慢性肾盂肾炎、骨髓炎和惠普尔病(Whipple′s disease)。某些恶性肿瘤也可以导致AA原纤维淀粉状蛋白沉积。这些肿瘤包括如霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma)、肾癌、肠癌、肺癌和泌尿生殖道癌、基底细胞癌和毛细胞白血病等病症。
AL淀粉状蛋白病
AL淀粉状蛋白沉积一般与B淋巴细胞谱系的几乎任何恶液质相关，其范围从浆细胞恶性肿瘤(多发性骨髓瘤)至良性单克隆γ球蛋白病。淀粉状蛋白沉积的存在时常是潜在恶液质的主要指标。
AL淀粉状蛋白沉积的原纤维由单克隆免疫球蛋白轻链或其片段组成。更准确地讲，所述片段衍生自轻链(κ或λ)的N末端区域并且含有其可变区(VL)的全部或一部分。沉积一般发生在间充质组织，引起周围神经病和自主神经病、腕管综合征、巨舌、限制性心肌病、大关节的关节病、免疫不调症、骨髓瘤以及隐性恶液质。然而，应该注意到，可以涉及几乎任何组织，特别是内脏器官例如心脏。
遗传性系统性淀粉状蛋白病
存在许多形式的遗传性系统性淀粉状蛋白病。虽然它们是比较罕见的病症，但是症状的成年发病型及其遗传模式(通常是常染色体显性)导致这类疾病在普通人群中持续存在。一般而言，所述症状归因于前体蛋白的点突变，导致产生变异型asnyloidogenic肽或蛋白。表1总结了这些疾病示例形式的原纤维组成。
表1
原纤维肽/蛋白 遗传变异体 临床症状
甲状腺素运载蛋白及片段(ATTR) Met30等 家族性淀粉状蛋白性多神经病(FAP)，(主要是周围神经)
甲状腺素运载蛋白及片段(ATTR) Thr45，Ala60，Ser84，Met111，Ile122 主要涉及心脏，无神经病
载脂蛋白Al(apoAI)的N末端片段 Arg26 家族性淀粉状蛋白性多神经病(FAP)，(主要是周围神经)
载脂蛋白Al(apoAI)的N末端片段 Arg26，Arg50，Arg60等 Ostertag-type，非神经病性(主要涉及内脏)
溶菌酶(Alys) Thr56，His67 Ostertag-type，非神经病性(主要涉及内脏)
Fibrogen A链片段 Leu554，Val526 颅神经病和格状角膜营养不良
凝溶胶蛋白片段(Agel) Asn187，Tyr187 颅神经病和格状角膜营养不良
抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C片段 Glu68 遗传性脑出血(脑淀粉状蛋白性血管病)-冰岛
型
β-淀粉状蛋白(aβ)，衍生自淀粉状蛋白前体蛋白(APP) Gln693 遗传性脑出血(脑淀粉状蛋白性血管病)-荷兰型
β-淀粉状蛋白(aβ)，衍生自淀粉状蛋白前体蛋白(APP) Ile717，Phe717，Gly717 家族性早老性痴呆
β-淀粉状蛋白(aβ)，衍生自淀粉状蛋白前体蛋白(APP) Asn670，Leu671 家族性痴呆-可能是早老性痴呆
朊病毒蛋白(PrP)，衍生自Prp前体蛋白51-91插入片段 Leu102，Val167，Asn178，Lys200 家族性克-雅病；格-施-沙综合征(遗传性海绵状脑病，朊病毒病)
AA，衍生自血清淀粉状蛋白A蛋白(ApoSAA) 家族性地中海热，主要涉及肾脏(常染色体隐性)
AA，衍生自血清淀粉状蛋白A蛋白(ApoSAA) Muckle-Well′s综合征，肾病，耳聋，荨麻疹，肢体痛
未知 心肌病和永久性心房停顿
未知 皮肤沉积(大疱，丘疹，脓疱性皮肤病)
数据来源于Tan & Pepys，1994，参见上文。
表1中提供的数据是示例性的，并不是用来限制本发明的范围。例如，在甲状腺素运载蛋白基因中的超过40个独立点突变已有描述，所有的点突变都产生临床上相似形式的家族性淀粉状蛋白性多神经病。
甲状腺素运载蛋白(TTR)是一种14千道尔顿蛋白，有时也被称为前白蛋白。它是由肝脏和脉络膜丛产生的，它在转运甲状腺激素和维生素A中起作用。该蛋白的至少50种变异形式(每种的特征为单个氨基酸改变)负责各种形式的家族性淀粉状蛋白性多神经病。例如，在特定进行性形式的神经病中，55位的脯氨酸被亮氨酸取代；在丹麦严重心脏病患者中，111位的甲硫氨酸被亮氨酸取代。从系统性淀粉状蛋白病患者心脏组织中分离的淀粉状蛋白沉积已经揭示出，沉积由TTR及其片段的异源混合物(统称为ATTR，已表征的全长序列)组成。可以从这样的病斑中提取ATTR原纤维组分，并且其结构和序列依照本领域已知的方法来测定(例如Gustavsson，A.等，Laboratory Invest.73：703-708，1995；Kametani，F.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.125：622-628，1984；Pras，M.等，PNAS 80：539-42，1983)。
分子载脂蛋白Al中具有点突变(例如Gly→Arg26；Trp 4→Arg50；Leu→4 Arg60)的病人表现出特征为载脂蛋白AI或其片段(AApoAI)沉积的淀粉状蛋白病形式(″stertag型″)。这些患者的高密度脂蛋白(HDL)水平低并且伴有周围神经病或肾衰竭。
溶菌酶α链的突变(例如Ile→Thr56或Asp→His57)是基于英国家庭中报道的另一种形式的stertag型非神经病性遗传性淀粉状蛋白。在此，突变溶菌酶蛋白(Alys)的原纤维沉积，患者一般表现出肾功能受损。该蛋白与本文中描述的大多数原纤维形成蛋白不同，通常以全(非片段化)形式存在(Benson，M.D.等，CIBA Fdn.Symp.199：104-131，1996)。
β-淀粉状蛋白肽(Aβ)是一种通过蛋白水解从称为β淀粉状蛋白前体蛋白(βAPP)的大蛋白获得的39-43个氨基酸的肽。βAPP中的突变引起家族性形式的早老性痴呆、唐氏综合征(Down′s syndrome)和/或老年痴呆，其特征在于由Aβ原纤维和其它组分组成的病斑的脑部沉积，在下文有更加详细的描述。与早老性痴呆相关的APP中的已知突变发生在β或γ分泌酶的切割位点附近或者在Aβ内。例如，位置717在其加工为Aβ中的APP的γ分泌酶的切割位点附近，而位置670/671在β分泌酶的切割位点附近。这些残基中的任一残基的突变都可能引起早老性痴呆，大概是由于引起从APP产生的Aβ的42/43氨基酸形式的量增加。各种长度的Aβ肽的结构和序列是本领域众所周知的。这样的肽可以依照本领域已知的方法制备(例如Glenner和Wong，Biochem Biophys.Res.Comm.129：885-890，1984；Glenner和Wong，Biochem Biophys.Res.Comm.122：1131-1135，1984)。另外，所述肽的各种形式都是市售的。
Synuclein是一种类似于载脂蛋白的突触相关蛋白，其在神经元胞质溶胶和突触前末稍中是高丰度的。衍生自α-synuclein的肽片段(称为NAC)也是一种早老性痴呆淀粉状蛋白病斑的组分。(Clayton等，1998)。该组分也用作本发明基于免疫学治疗的靶，如下文详述。
凝溶胶蛋白是一种与各种片段和肌动蛋白丝结合的钙结合蛋白。该蛋白187位的突变(例如Asp→Asn；Asp→Tyr)引起一种形式的遗传性系统性淀粉状蛋白病，通常在芬兰患者以及荷兰患者或日本患者中被发现。在各患者中，从凝溶胶蛋白片段形成的原纤维(Agel)，通常由氨基酸173-243(68kDa羧基末端片段)组成并且沉积在血管和基底膜中，引起角膜营养不良和发展为周围神经病的颅神经病、营养不良性皮肤改变以及沉积在其它器官中。(Kangas，H.等，Human Mol.Genet.5(9)：1237-1243，1996)。
其它突变蛋白例如纤维蛋白原的突变α链(AfibA)和突变抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(Acys)也形成原纤维并且发生特征性遗传性疾病。AfibA原纤维形成伴有肾病的非神经病性遗传性淀粉状蛋白的特征性沉积；Acys沉积是冰岛报道的遗传性脑淀粉状蛋白性血管病特征性的。(Isselbacher，Ct at.，Harrison′s Principles of Internal Medicine，McGraw-Hill，San Francisco，1995；Benson等，参见上文)。至少在某些情况下，已经表明，脑淀粉状蛋白性血管病(CAA)患者具有含有非突变形式的抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C与β蛋白连接的淀粉状蛋白原纤维。(Nagai，A.等，Molec.Chem.Neuropathol.33：63-78，1998)。
现在已认为某些形式的朊病毒病是可遗传的，至多占病例的15％，先前认为主要是自然感染的。(Baldwin等，Research Advances inAlzheimer′s Disease and Related Disorders，John Wiley and Sons，NewYork，1995)。在这样的朊病毒病中，患者发生由正常朊病毒蛋白的异常同种型(PrPSc)组成的病斑。一种主要的突变同种型PrPSc，也称为AScr，在其抗蛋白酶降解、去垢剂抽提后的不溶性、次级溶酶体中的沉积、翻译后合成和高β折叠含量方面与正常细胞蛋白不同。已经确定引起克-雅病(CJD)、格-施-沙综合征(GSS)和致死性家族性失眠症(FFI)的至少5个突变是遗传连锁的。从羊瘙痒病原纤维中提取原纤维肽、测序和制备这类肽的(Baldwin)方法是本领域已知的。(例如Beekes，M.等，J.Gen.Virol.76：2567-76，1995)。
例如，已经使一种形式的GSS与密码子102的PrP突变相关，而端脑GSS与密码子117的突变分离。密码子198和217的突变引起一种形式的GSS，其中早老性痴呆特征性神经炎性病斑含有PrP，而不含Aβ肽。某些形式的家族性CJD与密码子200和210的突变相关；在家族性CJD和FFI中均发现了密码子129和178的突变。(Baldwin，参见上文)。
老年系统性淀粉状蛋白病
系统性或病灶性淀粉状蛋白沉积随年龄的增加而增加。例如，野生型甲状腺素运载蛋白(TTR)的原纤维常常在老年人的心脏组织中被发现。这些疾病可以是无症状的即临床上无症状的，或者可以引起心力衰竭。无症状原纤维病灶沉积也可以发生在脑(Aβ)、前列腺淀粉样体(β2微球蛋白)、关节和精囊中。
脑淀粉状蛋白病
淀粉状蛋白的局部沉积常常发生在脑中，特别是在老年人的脑中。淀粉状蛋白在脑中最常见的形式主要由Aβ肽原纤维组成，引起痴呆或散发性(非遗传性)早老性痴呆。事实上，散发性早老性痴呆的发生率大大超过遗传性早老性痴呆的发生率。形成这些病斑的原纤维肽与以上关于遗传性形式的早老性痴呆(AD)的那些肽非常相似。
透析相关淀粉状蛋白病
由β2微球蛋白(β2M)原纤维组成的病斑常常发生在接受长期血透或腹膜透析的患者中。β2微球蛋白是一种11.8千道尔顿多肽并且是I类MHC抗原的轻链，存在于所有去核的细胞上。在正常情况下，不断地从细胞膜上脱落并经肾脏正常滤过。不能清除例如在肾功能受损的情况下，导致在肾脏和其它部位(主要在富含胶原蛋白的关节组织中)沉积。与其它原纤维蛋白不同，β2M分子一般以非片段化形式存在于原纤维中。(Benson，参见上文)。
激素源性淀粉状蛋白病
内分泌器官可以带有淀粉状蛋白沉积，在老年人中尤其如此。分泌激素的肿瘤也可以含有激素源性淀粉状蛋白病斑，其原纤维由多肽激素例如降钙素(甲状腺的髓样癌)、胰岛淀粉状蛋白多肽(淀粉不溶素；存在于大多数II型糖尿病患者中)和心房钠尿肽(独立的心房淀粉状蛋白病)构成。这些蛋白的序列和结构是本领域众所周知的。
其它的淀粉状蛋白病
存在各种各样的其它形式的淀粉状蛋白性疾病，正常情况下表现为淀粉状蛋白的局部沉积。一般而言，这些疾病可能是因为局部产生特定原纤维前体和/或对特定原纤维前体分解代谢存在缺陷或者特定组织(例如关节)对原纤维沉积易感。这样的特发病性沉积的实例包括结节性AL淀粉状蛋白、皮肤淀粉状蛋白、内分泌性淀粉状蛋白和肿瘤相关淀粉状蛋白。
药用组合物
本发明的药用组合物是指用原纤维肽制备的疫苗，所述原纤维肽的氨基酸残基至少50％为右旋型(D-异构体)。优选所述疫苗用以下肽制备：全D-Aβ(10-21)、D-Aβ(13-21)、D-Aβ(25-35)、D-Aβ(16-21)、D-Aβ(10-16)、D-Aβ(1-40)、D-Aβ(1-42)、D-Aβ(10-22)、D-Aβ(13-22)或D-Aβ(16-22)或D-Aβ(1-42)的N末端区域或C末端区域。一般认为所述疫苗诱发宿主的免疫应答或者产生识别天然存在的靶的抗体。本文所用的“全-D”包括具有至少50％D-构型氨基酸的肽。“全-D”最好也包括具有大于或等于50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％D-构型氨基酸的肽。
依照本发明的疫苗能够通过以下两个可能的方案预防脑淀粉状蛋白病的发生：1)抗Aβ抗体在淀粉状蛋白沉积部位起作用，和2)高循环抗Aβ水平对血浆Aβ浓度的系统效应。
具体地说，升高的血浆抗Aβ抗体水平可以通过降低Aβ正常血浆水平而系统地起作用，从而产生Aβ正常水平的系统不平衡。这样的不平衡可能导致负责将Aβ从脑清除到外周的机制激活，以在Aβ脑水平和Aβ血浆水平之间重新建立正常的平衡关系。
因此，可以通过测定主动免疫或被动免疫对这种免疫后不同时间点的血浆和脑Aβ40水平的影响而利用这种可能性。Aβ免疫也可以针对发生脑淀粉状蛋白病发挥系统保护效应。Aβ水平在血浆和脑中的比率在经免疫的转基因动物中仍保持恒定，同时它应该在对照动物中降低。另外，B细胞或骨髓细胞从免疫转基因动物转移至原初转基因动物中应该具有与利用抗Aβ抗体的被动免疫相同的作用。
此外，本发明的疫苗不存在利用“自身”蛋白的缺陷并且不需要聚集以诱导免疫应答。例如，预期针对全-D-Aβ(16-21)肽产生的抗体可以识别全-L-Aβ(16-21)肽序列。本发明的药用组合物除包括免疫原性肽外，还可以包括有效量的佐剂和/或赋形剂。药学上有效的有用佐剂和赋形剂是本领域众所周知的，在下文有更加详细的描述。
按照本发明，能够诱发或提供针对淀粉状蛋白病斑的某些组分的免疫应答的组合物对于治疗或预防淀粉状蛋白性疾病的发生是有效的。具体地说，按照本文提供的发明，当将免疫刺激剂量的抗淀粉状蛋白肽或相应的抗淀粉状蛋白免疫肽给予患者时，可以预防所述患者的淀粉状蛋白沉积过程的进程、缓解其症状和/或减慢所述淀粉状蛋白沉积过程。本小节描述产生针对淀粉状蛋白的主动免疫应答以及被动免疫应答的示例性抗淀粉状蛋白肽，并且提供表明利用这种组合物进行治疗对脑淀粉状蛋白浓度的影响的示例性数据。
抗淀粉状蛋白肽：淀粉状蛋白的抗体、类似物和片段
一般而言，本发明的抗淀粉状蛋白肽由特定病斑组分、优选淀粉状蛋白组分或成淀粉样组分组成，该组分通常是特征性蛋白、肽或其片段。人形式的Aβ被称为Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43。这些肽的序列及其与APP前体的关系由Hardy等，TINS 20，155-158(1997)中的图1加以说明。例如Aβ42具有以下的序列：
H2N-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-
His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-
Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-
Val-Ile-Ala-OH(SEQ ID NO：1)
Aβ41、Aβ40和Aβ39由于分别从C末端起缺失了Ala、Ala-Ile和Ala-Ile-Val而与Aβ42不同。Aβ43由于在C末端存在一个苏氨酸残基而与Aβ42不同。
基于多个原因，Aβ的免疫原性片段相对于本发明方法中的完整分子是有利的。第一，因为只有Aβ内的某些表位诱导有用的治疗早老性痴呆的免疫原性应答，所以同样剂量的含有这类表位的片段混合物比一剂完整的Aβ提供更高摩尔浓度的有效免疫原性表位。第二，Aβ的某些免疫原性片段产生针对淀粉状蛋白的免疫原性应答，而不产生针对衍生Aβ的APP蛋白的显著免疫原性应答。第三，Aβ的片段就生产而论由于其大小较短而比完整Aβ简单。第四，Aβ的片段不以与完整Aβ相同的方式聚集，使药用组合物的制备及其给药简单化。第五，全长Aβ对细胞有毒性，但片段却没有毒性，并且Aβ聚集物可以作为种子起作用以加速病斑沉积，但未聚集的片段则不会。第六，Aβ具有其可以固定和激活经典和替代补体级联的独特特性。具体地说，它先与Clq结合，最终与C3bi结合。该缔合促进与巨噬细胞的结合，导致B细胞的活化。另外，C3bi进一步降解，然后以依赖T细胞的方式与B细胞上的CR2结合，导致这些细胞的活化增加10,000倍。该机制使Aβ产生的免疫应答超过其它抗原所产生的免疫应答(Bradt等，Complement-dependent Proinflammatory Properties of theAlzheimer′Disease β-Peptide(早老性痴呆β-肽的补体依赖性促炎特性)，J.Exp.Med.Vol.188，第431-438页(1998)；Thornton等，Clin.Exp.Immunol.Vol.104，第531-7页(1996)；Jacquier-Sarlin等，Immunologyvol.84，第164-70页(1995)。
Aβ的某些免疫原性片段具有来自天然肽的至少2、3、5、6、10或20个连续氨基酸的序列。某些免疫原性片段具有来自Aβ不超过10、9、8、7、5或3个连续残基。优选的免疫原性片段包括Aβ的残基1-42。在某些方法中，所述抗体与Aβ的残基16-21内的表位特异性地结合。在某些方法中，所述抗体与Aβ的残基13-21内的表位特异性地结合。在某些方法中，所述抗体与Aβ的残基10-21内的表位特异性地结合。在某些方法中，所述抗体与Aβ的残基10-16内的表位特异性地结合。在某些方法中，所述抗体与Aβ的残基25-35内的表位特异性地结合。标识符Aβ16-21例如表示包括Aβ的残基16-21而缺失Aβ的其它残基的片段。其它次优选的片段包括Aβ1-5、1-6、1-7、1-10、3-7、1-3和1-4。这些片段要求临用前根据所述实施例中描述的清除或防止淀粉状蛋白沉积的活性进行筛选。在某些方法中使用在天然存在形式的Aβ中存在的缺失至少1个、有时缺失至少5个或10个N末端或C端氨基酸的片段。例如，从Aβ43的C末端起缺失5个氨基酸的片段包括从Aβ的N末端起前38个氨基酸。除非另有说明，对于Aβ包括上述的天然人氨基酸序列以及类似物，包括等位基因变异体、物种变异体和诱导变异体。类似物通常在1个、2个或几个位置上常常由于保守取代而与天然存在的肽不同。类似物通常表现出与天然肽有至少50％序列同一性，优选60％、70％、80％序列同一性，最优选90％序列同一性。某些类似物也包括非天然氨基酸或N端或C端氨基酸在1个、2个或几个位置上的修饰物。例如，Aβ的1位和/或7位的天然天冬氨酸残基可以被异天冬氨酸取代。非天然氨基酸的实例是D-氨基酸、α，α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸、4-羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、ω-N-甲基精氨酸和异天冬氨酸。如下所述，片段和类似物可以根据在转基因动物模型中相对于未治疗或安慰剂对照的预防或治疗功效进行筛选。
Aβ、其片段和类似物可以通过固相肽合成或重组表达来合成，或者可以从天然来源获得。自动肽合成仪是市售的，可得自许多供应商，例如Applied Biosystems，Foster City，California。重组表达可以在细菌例如大肠杆菌(E.coli)、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞中进行。重组表达方法描述于Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual(C.S.H.P.Press，NY 2d ed.，1989)。某些形式的Aβ肽也是市售的(例如American Peptides Company，Inc.，Sunnyvale，CA和California Peptide Research，Inc.Napa，CA)。
治疗肽也包括较长的多肽，包括例如Aβ肽的活性片段加上其它氨基酸。其它氨基酸可以包括具有佐剂特性或免疫刺激特性的那些氨基酸以及用来增加所述肽的稳定性的那些氨基酸。例如，优选的肽包括含Aβ区段与异源氨基酸序列融合的融合蛋白，所述融合蛋白诱导针对所述异源氨基酸序列的辅助T细胞应答，从而诱导针对所述Aβ区段的B细胞应答。如下所述，这样的多肽可以在动物模型中相对于未治疗或安慰剂对照的预防或治疗功效进行筛选。所述Aβ肽、类似物、活性片段或其它多肽可以以缔合形式、多聚体形式或解离形式给予。治疗肽也包括单体和寡聚体免疫原性肽的多聚体。更具体地讲，可供本发明用的治疗肽产生或诱导针对淀粉状蛋白的免疫应答。抗体也可以结合外周的可溶性形式以用作库，并且驱动Aβ从脑转移到外周，通过调节从CNS至外周的Aβ平衡或者与外周的Aβ形成稳定的复合物，而促进从脑中清除Aβ。因此，这样肽包括但不限于组分本身及其变异体、诱导抗所述组分抗体和/或与抗所述组分抗体交叉反应的所述组分的类似物和模似物以及诱导和/或与所述淀粉状蛋白肽特异性地反应的抗体或T细胞。免疫应答的诱导可以是主动的，如当给予免疫原以在患者体内诱导与所述组分反应的抗体或T细胞，或者是被动的，如当给予本身与患者体内的淀粉状蛋白肽结合的抗体时。用于诱导或产生针对淀粉状蛋白的免疫应答的示例性肽如下所述。
一大类优选的抗淀粉状蛋白肽由衍生自淀粉状蛋白的肽组成。如上所述，淀粉状蛋白性疾病的标志是主要由原纤维组成的淀粉状蛋白病斑在一种或多种器官中的沉积，该原纤维进而构成特征性淀粉状蛋白或肽。按照本发明，这样的淀粉状蛋白或肽组分是有效用于诱导抗淀粉状蛋白免疫应答的肽。表1总结了为各种淀粉状蛋白性疾病特征性的示例性原纤维形成蛋白。按照本发明的该方面，给予患者或易感个体一种包括合适淀粉状蛋白或肽(包括其同系物或片段)的免疫刺激性组合物，达到对所述淀粉状蛋白性疾病的治疗或预防。
用于治疗上述遗传性形式的淀粉状蛋白病的其它制剂包括产生针对凝溶胶蛋白片段的免疫应答的组合物，以治疗遗传性系统性淀粉状蛋白病；产生针对突变溶菌酶蛋白(Alys)的免疫应答的组合物，以治疗遗传性神经病；产生针对纤维蛋白原的突变α链(AfibA)的免疫应答的组合物，以治疗非神经病形式的淀粉状蛋白病表现如肾病；和产生针对突变抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(Acys)的免疫应答的组合物，以治疗冰岛中报道的一种遗传性脑血管病。另外，某些遗传形式的朊病毒病(例如克-雅病(CJD)、格-施-沙综合征(GSS)和致死性家族性失眠症(FFI))的特征为朊病毒蛋白的突变同种型PrPSc。按照本发明，该蛋白可用于治疗和预防PrP病斑的沉积的治疗组合物中。
如上所述，系统性或病灶性淀粉状蛋白沉积也与衰老有关。本发明的再一方面是这样的沉积可以通过给予易感个体由与这种衰老相关的一种或多种蛋白组成的组合物进行预防或治疗。因此，通常在老年人的心脏组织中发现由衍生自野生型TTR的ATTR组成的病斑。同样，某些老年人可以发生Aβ在其脑中的无症状纤维病灶性沉积；Aβ肽疗法(如本文详述的)可经批准后用于这样的个体中。作为再一个实例，但并不限于此，有许多作为本发明治疗方法的候选疾病的另外的非遗传性形式的淀粉状蛋白性疾病。β2微球蛋白原纤维病斑通常发生在接受长期血透或腹膜透析的患者中。按照本发明，这样的患者可以用针对β2微球蛋白或更优选其免疫原性表位的治疗组合物进行治疗。
分泌激素的肿瘤也可以包括激素性淀粉状蛋白病斑，所述病斑的构成一般为受影响的特定内分泌器官的特征。因此，这样的原纤维可能由多肽激素例如降钙素(甲状腺的髓样癌)、胰岛淀粉状蛋白多肽(存在于大多数II型糖尿病患者中)和心房钠尿肽(独立的心房淀粉状蛋白病)构成。本发明也考虑针对动脉粥样硬化的主动脉内膜中形成的淀粉状蛋白沉积的组合物。例如，Westermark等描述了形成这种病斑的载脂蛋白A的69个氨基酸N末端片段(Westermark等Am.J.Path.147：1186-92，1995)；本发明的治疗组合物包括针对这种片段以及该片段本身的免疫肽。
上面的讨论集中在可以用作治疗肽以治疗或预防各种形式的淀粉状蛋白性疾病的淀粉状蛋白原纤维组分。
所述治疗肽也可以是天然存在的或突变的原纤维肽或蛋白的活性片段或类似物，所述活性片段或类似物含有给予人后诱导相似的保护性或治疗性免疫应答的表位。免疫原性片段通常具有来自天然肽的至少3、5、6、10或20个连续氨基酸的序列。示例性的Aβ肽免疫原性片段包括Aβ残基16-21、残基13-21、残基10-21、残基10-16、残基25-35残基10-22、残基13-22、残基16-22。在某些方法中，所述抗体与包含Aβ的游离N末端残基或C末端残基的表位结合。
在某些方法中使用在天然存在形式的原纤维组分中存在的缺失至少1个、有时缺失至少5个或10个N端或C端氨基酸的片段。例如，从Aβ43的C末端起缺失5个氨基酸的片段包括从Aβ的N末端起前38个氨基酸。在某些方法中优选Aβ N端一半的片段。类似物包括等位基因变异体、物种变异体和诱导变异体。类似物通常在1个或几个位置上常常由于保守取代而与天然存在的肽不同。类似物通常表现出与天然肽有至少80％或90％的序列同一性。某些类似物也包括非天然氨基酸或N端或C端氨基酸的修饰物。非天然氨基酸的实例是α，α-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸、4-羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、T-N-甲基精氨酸。
一般而言，本领域技术人员将会认识到，按照本发明该方面设计的片段和类似物可以根据如下所述的与天然存在的原纤维组分的交叉反应性和/或在转基因动物模型中的预防或治疗功效进行筛选。这样的片段或类似物可以用于本发明的治疗组合物中，如果其免疫反应性和动物模型功效大致等于或大于对淀粉状蛋白原纤维组分所测定的相应参数。
这样的肽、蛋白、或片段、类似物和其它成淀粉样肽可以按照本领域众所周知的标准方法通过固相肽合成或重组表达来合成，或者可以从天然来源获得。本文中引用的多个参考文献并结合本文中提供的有关特定原纤维组分的描述提供了示例性的原纤维组合物、原纤维的提取方法、原纤维肽或蛋白组分的序列。另外，其它组合物、提取方法和测序方法是本领域已知的，希望制备和使用这种组合物的人员可利用这些已知技术。自动肽合成仪可以用来制备这样的组合物，并且在市场上可从多个生产商例如Applied Biosystems(Perkin Elmer；Foster City，California)获得，并且合成肽的制备程序是本领域已知的。重组表达可以在细菌例如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞中进行；或者，可以利用本领域已知的无细胞体外翻译系统生产各种蛋白。重组表达方法描述于Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(C.S.H.P.Press，NY 2d ed.，1989)。某些肽和蛋白也是市售的；例如某些形式的Aβ肽可得自以下供应商：American Peptides Company，Inc.，Sunnyvale，California和California Peptide Research，Inc.Napa，California)。
治疗肽也可以由包括例如活性肽淀粉状蛋白片段或类似物加上其它氨基酸在内的较长多肽组成。例如，Aβ肽可以为完整的APP蛋白或其区段例如始于Aβ N末端并持续至APP末端的C-100片段。这样的多肽可以根据如下所述的在动物模型中的预防或治疗功效进行筛选。所述Aβ肽、类似物、活性片段或其它多肽可以以缔合形式(即作为淀粉状蛋白肽)或解离形式例如寡聚体、单体或可溶性形式给予。治疗肽也可以包括单体和寡聚体免疫原性肽或缀合物或载体蛋白的多聚体，和/或如上所述，可以将其加入到其它原纤维组分中，以提供范围更广的抗淀粉状蛋白病斑活性。
在再一个变异中，免疫原性肽例如Aβ的片段可以通过作为免疫原性组合物的组成部分的病毒或细菌来呈递。将编码免疫原性肽的核酸掺入到病毒或细菌的基因组或附加体中，任选的是，所述核酸以使所述免疫原性肽作为分泌型蛋白或者作为与病毒外表面蛋白或细菌的跨膜蛋白的融合蛋白表达的方式掺入，致使所述肽被展示。这样的方法中所用的病毒或细菌应该是非致病性的或者是减毒的。合适的病毒包括腺病毒、HSV、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelanequine encephalitis virus)和其它甲病毒、疱疹性口腔炎病毒(vesicularstomatitis virus)和其它弹状病毒、痘苗病毒和禽痘病毒。合适的细菌包括沙门氏菌属(Salmonella)和志贺氏菌属(Shigella)。免疫原性肽与HBV的HBsAg的融合尤其适合。治疗肽也包括不一定与Aβ有显著氨基酸序列相似性但仍然用作Aβ的模拟物并且诱导相似的免疫应答的肽和其它化合物。例如，任何形成β折叠的肽和蛋白可以根据适应性进行筛选。也可以使用针对Aβ或其它成淀粉样肽的单克隆抗体的抗独特型抗体。这样的抗独特型抗体模拟所述抗原并且产生针对所述抗原的免疫应答(参见Essential Immunology(Poit编著，BlackwellScientific Publications，Palo Alto，6th ed.)，第181页)。非Aβ肽的肽应该诱导针对以上列举的Aβ的一个或多个优选区段(例如10-16、10-21、13-21、16-21和25-35)的免疫原性应答。这样的肽最好诱导特异性地针对这些区段之一而不针对Aβ的其它区段的免疫原性应答。
肽或其它化合物的随机文库也可以根据适应性进行筛选。组合文库可以根据可以以分步方式合成的许多类型的化合物来产生。这样的化合物包括多肽、β-转角模拟物、多糖、磷脂、激素、前列腺素、类固醇、芳香化合物、杂环化合物、苯并二氮杂、寡聚N-取代甘氨酸和低聚氨基甲酸酯(oligocarbamates)。所述化合物的大组合文库可以通过在以下专利文献中描述的编码合成文库(ESL)方法来构建：Affymax的WO 95/12608、Affymax的WO 93/06121、ColumbiaUniversity的WO 94/08051、Pharmacopeia的WO 95/35503和Scripps的WO 95/30642(每个专利文献都通过引用结合到本文中用于所有目的)。肽文库也可通守噬菌体展示法来产生。参见例如Devlin的WO91/18980。
组合文库和其它化合物根据适应性进行初筛，即通过测定其与已知对Aβ或其它成淀粉样肽例如ATTR特异性的抗体或淋巴细胞(B或T)结合的能力。例如，可以用抗Aβ或任何其它目标成淀粉样肽的多克隆血清或单克隆抗体进行初筛。然后对通过这样的筛选鉴定的化合物诱导针对Aβ或其它成淀粉样肽的抗体或反应性淋巴细胞的能力进行进一步分析。例如，可以在用淀粉状蛋白肽预包被的微量滴定板上对多个稀释度的血清进行测试，并且可以进行标准ELISA，以测试抗Aβ的反应性抗体。然后如实施例中描述，可以在有发生产生淀粉状蛋白性疾病倾向的转基因动物中测试化合物的预防和治疗功效。这样的动物包括例如携带Games等(参见上文)描述的APP的717突变的小鼠和携带APP的670/671 Swedish突变的小鼠，如以下文献所描述的：McConlogue等，US 5,612,486和Hsiao等，Science 274，99(1996)；Staufenbiel等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，13287-13292(1997)；Sturchler-Pierrat等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，13287-13292(1997)；Borchelt等，Neuron 19，939-945(1997))。同样的筛选方法可以用在其它潜在肽例如上述Aβ的片段、Aβ的类似物和较长的肽(包括Aβ)上。
人们将会认识到，针对其它淀粉状蛋白病斑组分的免疫应答也可有效用于预防、阻止或减慢淀粉状蛋白性疾病的病斑沉积。这样的组分可以是病斑中原纤维的次要组分或者与原纤维结合或原纤维形成相关，需要说明的是，在整个机体中是普遍存在的或者对淀粉状蛋白沉积是相对非特异性的组分，一般不太适合用作治疗靶。
因此，本发明的再一发现是诱导针对特定病斑组分的免疫应答的肽在治疗或预防淀粉状蛋白性疾病的进程中是有用的。本小节提供有关几个示例性淀粉状蛋白病斑相关分子的背景。按照本发明，诱导针对任何上述分子的免疫应答单独或结合免疫治疗组合物，所述免疫治疗组合物针对上述原纤维组分或针对下述任何其它非原纤维形成组分，提供另外的抗淀粉状蛋白治疗方案。如本文中所述，基于这样的病斑组分的被动免疫方案也构成本发明的一部分。
作为实例，synuclein是一种在结构上与载脂蛋白相似的但存在于神经元胞质溶胶、特别是在突触前末梢附近的蛋白。该蛋白至少有3种形式，称为α、β和γ synuclein。最近，已经表明，α和β synuclein在某些淀粉状蛋白性疾病、特别是早老性痴呆中参与淀粉状蛋白沉积的成核作用。(Clayton，D.F.等，TINS 21(6)：249-255，1998)。更具体地讲，α和β synuclein的NAC结构域的片段(残基61-95)已从早老性痴呆患者的淀粉状蛋白病斑中分离出来；事实上，该片段约包含所述病斑的10％，在用十二烷基硫酸钠(SDS)增溶后仍是不溶性的。(George，J.M.等，Neurosci.News 1：12-17，1995)。此外，据报道，全长αsynuclein及其NAC片段在体外加速β-淀粉状蛋白肽聚集成不溶性淀粉状蛋白。(Clayton，参见上文)。
与淀粉状蛋白病斑相关的其它组分包括非肽组分。例如，基底膜聚糖和基底膜聚糖源性糖胺聚糖是在早老性痴呆和其它CNS和系统性淀粉状蛋白病的含有Aβ的淀粉状蛋白病斑(包括与糖尿病相关的淀粉不溶素病斑)中存在的硫酸肝素大蛋白聚糖。已经表明这些化合物增加Aβ原纤维形成。已经表明基底膜聚糖的核心蛋白和糖胺聚糖链参与结合Aβ。另外的糖胺聚糖、准确地说是硫酸皮肤素、软骨素-4-硫酸和聚硫酸戊聚糖常常在各种类型的淀粉状蛋白病斑中被发现，并且也显示其增加原纤维形成。硫酸葡聚糖也具有这一特性。当使所述分子去硫酸时，这种增加显著降低。针对硫酸化形式的糖胺聚糖(包括特定的糖胺聚糖本身)的免疫原性治疗药物或者作为一期治疗或者作为二期治疗构成本发明的另一个实施方案。这样的分子以及含有所述分子的合适治疗组合物的生产在本领域普通技术人员的知识范围内。
免疫程序
接受本发明疫苗的宿主中存在的激发抗体结合在Aβ(16-21)表位或其它表位例如Aβ(10-21)、Aβ(13-21)、Aβ(10-22)、Aβ(13-22)、Aβ(16-22)和Aβ的N末端区域或C末端区域并且可以预防或逆转淀粉状蛋白生成。本发明的疫苗使免疫宿主产生有效的抗成淀粉样抗体。
建议的免疫程序如下：
a)用全-D肽制备疫苗，所述全-D肽具有与天然存在的β淀粉状蛋白肽即Aβ(全-L)的序列基本相同的序列。所述全-D肽包括一种全长Aβ(1-42，全-D)、一种衍生自Aβ(1-42，全-D)的免疫原性片段的肽和一种相关的肽模拟物；
b)用所述疫苗免疫宿主，以在所述宿主体内产生具有能够防止原纤维生成、相关细胞毒性和神经变性的结合部位的抗体。
合适的药学上可接受的载体包括但不限于适合于以下给药途径的任何非免疫原性药用佐剂例如磷酸缓冲盐溶液(PBS)：经口、胃肠外、经鼻、经粘膜、经皮、血管内(IV)、动脉内(IA)、肌内(IM)和皮下(SC)。
所述药用载体可以含有将抗原呈递给抗原呈递细胞的溶媒。溶媒的实例是脂质体、免疫刺激复合物、微流体化水包角鲨烯型乳剂、可以由聚乳酸/乳乙醇酸(PLGA)组成的微球体。已确定尺寸规格的微粒(＜5微米)包括但不限于水包油型微乳剂(MF59)和聚合微粒。
本发明的载体也可以包括化学和基因佐剂或免疫刺激剂，以增强免疫应答或增加免疫原的抗原性。这些佐剂或免疫刺激剂通过数种机制如淋巴样细胞募集、细胞因子诱导和促进DNA进入细胞等发挥其免疫调节特性。细胞因子佐剂包括但不限于粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-12、GM-CSF、合成胞壁酰二肽类似物或单磷脂酰脂质A。其它化学佐剂或免疫刺激剂包括但不限于乳酸菌、Al(OH)3、胞壁酰二肽和皂苷。微生物佐剂的实例包括但不限于CpG基序、弗氏佐剂、胞壁酰二肽、LPS衍生物、热激蛋白(HSP)、脂质A衍生物、多糖、霍乱毒素、灭活百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)和LT(淋巴毒素大肠杆菌)。非微生物佐剂的实例包括但不限于铝盐、明矾、矿物油、免疫刺激复合体(iscoms)、脂质体、病毒体、archaeosomes、转铁体、非离子表面活性剂囊泡、蜗牛壳形物(cochleates)、蛋白体、磷酸钙、DDA(二甲基二(十八烷基)溴化铵)、细胞因子、激素和C3d。这样的佐剂是本领域众所周知的。
可以将所述肽与调节循环肽的半寿期的载体偶联。这将会使保护周期受到控制。所述肽-载体也可以在佐剂中乳化并且通过标准免疫途径给予。
可以给予本发明的组合物和方法，以治疗性或预防性地治疗与淀粉状蛋白-β原纤维形成、聚集或沉积相关的疾病。本发明的组合物和方法也可以利用任一下述机制用来减缓淀粉状蛋白-β相关疾病的病程，以下所述机制是说明性的但并不限于此，即通过减慢淀粉状蛋白-β原纤维形成或沉积的速率；通过降低淀粉状蛋白-β沉积的程度；通过抑制、防止或减少淀粉状蛋白-β原纤维形成；通过抑制由淀粉状蛋白-β诱导的神经变性或细胞毒性；通过抑制淀粉状蛋白-β诱导的炎症；通过增加从脑中清除淀粉状蛋白-β；或者通过降低淀粉状蛋白β40或淀粉状蛋白-β42肽在脑或血浆中的水平。
在一个优选的实施方案中，所述方法用来治疗早老性痴呆(例如散发性或家族性AD)。所述方法也可以用来预防性或治疗性地治疗淀粉状蛋白-β沉积的其它临床表现例如在唐氏综合征患者中以及在脑淀粉状蛋白性血管病、遗传性脑淀粉状蛋白性血管病、遗传性脑出血或出血性中风的患者中的临床表现。
另外，APP(β-淀粉状蛋白前体蛋白)以及淀粉状蛋白-β蛋白在肌肉纤维中的异常累积涉及散发性包涵体肌炎(IBM)的病理(Askanas，V.等(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：1314-1319；Askanas，V.等(1995)Current Opinion in Rheumatology 7：486-496)。因此，本发明的化合物可以用来预防性或治疗性地治疗其中淀粉状蛋白-β蛋白异常沉积在非神经部位的疾病，例如通过使所述化合物传递至肌肉纤维而治疗IBM。
本发明的疫苗多半通过胃肠外例如血管内(IV)、动脉内(IA)、肌内(IM)、皮下(SC)、经皮等途径给予。在某些情况下，给药可以是经口、经鼻、经直肠、经皮或气雾剂，其中所述疫苗的性质使得可以传递至血管系统。通常，使用一次注射，虽然必要时可以使用不止一次注射。通常，初次免疫后，还经数周间隔时间，采用同一抗原或者必要时经过进一步修饰的抗原进行多次加强免疫。所述佐剂或免疫刺激剂也可以相同或者必要时也可以不同。所述疫苗可以通过任何合适手段给予，包括注射器、套管针、导管等。给药最好是血管内，其中给药部位对于本发明并不是关键性的，优选血液快速流动的部位例如静脉内即外周或中央静脉。当给药与缓释技术或保护性基质结合使用时，可以发现其它途径。
本发明疫苗在预防和/或治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病中的用途可以通过产生针对相应全-D肽的抗体并且测试所述抗体是否可以有效地抑制或防止天然淀粉状蛋白肽(全-L)的原纤维生成加以证实。
制备依照本发明的疫苗所用的化合物具有以下式I的共同结构：
                         R′-(P)-R″    (I)，其中
P是一种原纤维或淀粉状蛋白的全-D肽，例如β折叠区域、GAG-结合部位区域、Aβ(1-42，全-D)和巨噬细胞粘着区域(10-16，全-D)、其免疫原性片段、其免疫原性衍生物、其蛋白缀合物、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物；
R′是一个N末端取代基，所述取代基选自：
·氢；
·低级烷基，例如具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基，带有或不带有官能团，例如羧酸酯基、磺酸酯基和膦酸酯基；
·芳族基团；
·杂环基；和
·酰基，例如烷基羰基、芳基羰基、磺酰基和膦酰基；且
R″是一个C末端取代基，例如羟基、烷氧基、芳氧基、未取代或取代的氨基。
R′和R″可以相同或不同；R′和R″的烷基或芳基可以被选自以下的有机官能团进一步取代：卤化物(F、Cl、Br和I)、羟基、烷氧基、芳氧基、羟基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基甲酰基、未取代或取代的氨基、磺基或烷氧基磺酰基、膦酰基或烷氧基膦酰基等。
术语“烷基”包括饱和脂族基，包括直链烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基和辛基)、支链烷基(例如异丙基、叔丁基、异丁基)、环烷基(例如脂环基)(例如环丙基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基)、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。“烷基”还包括具有氧原子、氮原子、硫原子或磷原子取代一个或多个烃主链碳原子的烷基。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有6个或更少的碳原子(例如直链为C1-C6，支链为C3-C6)，更优选具有4个或更少的碳原子。同样，优选的环烷基在其环结构中具有3-8个碳原子，更优选在所述环结构中具有5个或6个碳原子。“C1-C6”包括含有1-6个碳原子的烷基。
术语“烷基”既包括“未取代的烷基”，也包括“取代的烷基”，后者是指在所述烃主链的一个或多个碳上具有取代氢的取代基的烷基部分。这样的取代基可以包括例如烷基、链烯基、链炔基、卤素、羟基、烷羰氧基、芳羰氧基、烷氧羰基氧基、芳氧羰基氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷基氨羰基、二烷基氨羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亚硫酰基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族部分。环烷基可以例如被上述取代基进一步取代。“烷基芳基”或“芳烷基”部分是被芳基取代的烷基(例如苯甲基(苄基))。“烷基”也包括天然和非天然氨基酸的侧链。
本文所用的“酰基”包括含有酰基基团(CH3CO-)或羰基基团的化合物和部分。“取代的酰基”包括一个或多个氢原子被例如以下的基团取代的酰基：烷基、链炔基、卤素、羟基、烷羰氧基、芳羰氧基、烷氧羰基氧基、芳氧羰基氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷基氨羰基、二烷基氨羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、膦酰基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亚硫酰基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、磺酰基硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族部分即芳基羰基。
术语“杂环基”包括闭环结构，例如包括一个或多个杂原子的3-10元环或4-7元环。杂环基可以是饱和或不饱和的杂环基，包括吡咯烷、氧杂环戊烷、硫杂环戊烷、哌啶、哌嗪、吗啉、内酯、内酰胺例如氮杂环丁烷酮和吡咯烷酮、磺内酰胺、磺酸内酯等。如上所述，所述杂环可以在一个或多个位置上被上述的取代基取代，例如：卤素、羟基、烷羰氧基、芳羰氧基、烷氧羰基氧基、芳氧羰基氧基、羧酸酯基、烷基羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基或芳族或杂芳族部分。
本文所用的术语“芳族基团”意指包括“芳基”取代基。“芳基”包括具有芳香性的基团，包括可以包含0-4个杂原子的5元或6元单环芳族基团以及具有至少一个芳族环的多环体系。芳基的实例包括苯、苯基、吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、噁唑、异噁唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。此外，术语“芳基”包括多环芳基，例如三环、二环，例如萘、苯并噁唑、苯并二噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、1，5-二氮杂萘(napthridine)、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脱氮嘌呤或吲嗪。在环结构中具有杂原子的那些芳基也可以被称为“芳基杂环基”、“杂环基”或“杂芳基”。如上所述，所述芳族环可以在一个或多个环位置上被上述取代基取代，例如：卤素、羟基、烷氧基、烷羰氧基、芳羰氧基、烷氧羰基氧基、芳氧羰基氧基、羧酸酯基、烷基羰基、烷基氨羰基、芳烷基氨羰基、链烯基氨羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、链烯基羰基、烷氧羰基、氨羰基、烷硫基羰基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亚硫酰基、磺酸酯基、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族部分。芳基也可以与非芳香的脂环或杂环稠合或桥连，以形成多环体系(例如四氢化萘、亚甲二氧基苯基)。
在官能团为酸性的情况下，其药学上可接受的盐或酯在本发明的范围内。在官能团为碱性的情况下，其药学上可接受的盐在本发明的范围内。
在一个实施方案中，P是一种能够与淀粉状蛋白或原纤维的至少一个区域相互作用的肽。
在另一个实施方案中，所述优选的化合物选自全长肽、Aβ(1-42，全-D)及其由Aβ(1-40，全-D)、Aβ(1-35，全-D)、Aβ(1-28，全-D)和Aβ(10-21，全-D)组成的低级同系物。
在另一个实施方案中，所述优选的化合物选自短肽，例如Aβ(1-7，全-D)、Aβ(10-16，全-D)、Aβ(13-21，全-D)、Aβ(16-21，全-D)、Aβ(36-42，全-D)AB(10-22全-D)、AB(13-22全-D)或AB(16-22全D)。所述肽可以通过去除任一末端或两个末端的一个或多个残基而被进一步缩短。
所述优选的化合物也可以是衍生自上述肽的全-D肽，即通过用其它氨基酸残基或非氨基酸片段例如氨基烷烃磺酸残基取代序列中的一个或多个残基。
在再一个实施方案中，所述优选的化合物可以与调节所述化合物的生物分布、免疫原性特性和半寿期的载体偶联。
下列化合物是用于制备预防或治疗早老性痴呆和其它淀粉状蛋白相关疾病的疫苗的示例性化合物：
SEQ ID NO：1    Aβ(1-42，全-D)
                DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMV
                GGVVIA
SEQ ID NO：2    Aβ(1-40，全-D)
                DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMV
                GGVV
SEQ ID NO：3    Aβ(1-35，全-D)
                DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLM
SEQ ID NO：4    Aβ(1-28，全-D)
                DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK
SEQ ID NO：5    Aβ(1-7，全-D)
                DAEFRHD
SEQ ID NO：6    Aβ(10-16，全-D)
                YEVHHQK
SEQ ID NO：7    Aβ(16-21，全-D)
                KLVFFA
SEQ ID NO：8    Aβ(10-21，全-D)
                YEVHHQKLVFFA
SEQ ID NO：9    Aβ(13-21，全-D)
                HHQKLVFFA
SEQ ID NO：10   Aβ(36-42，全-D)
                VGGVVLA
SEQ ID NO：11   Lys-Ile-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：12    Lys-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：13    Lys-Phe-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：14    Ala-Phe-Phe-Val-Leu-Lys(全-D)
SEQ ID NO：15    Lys-Leu-Val-Phe(全-D)
SEQ ID NO：16    Lys-Ala-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：17    Lys-Leu-Val-Phe-Phe(全-D)
SEQ ID NO：18    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：19    Lys-Ile-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：20    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：21    Lys-Phe-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：22    Ala-Phe-Phe-Val-Leu-Lys-NH2(全-D)
SEQ ID NO：23    Lys-Leu-Val-Phe-NH2(全-D)
SEQ ID NO：24    Lys-Ala-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：25    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-NH2(全-D)
SEQ ID NO：26    Lys-Val-Val-Phe-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：27    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu全-D)
SEQ ID NO：28    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-NH2(全-D)
SEQ ID NO：29    His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu(全-D)
SEQ ID NO：30    Asp-Asp-Asp(全-D)
SEQ ID NO：31    Lys-Val-Asp-Asp-Gln-Asp(全-D)
SEQ ID NO：32    His-His-Gln-Lys(全-D)
SEQ ID NO：33    Phe-Phe-NH-CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：34    Phe-Phe-NH-CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：35    Phe-Phe-NH-CH2CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：36    Phe-Tyr-NH-CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：37    Phe-Tyr-NH-CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：38    Phe-Tyr-NH-CH2CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：39    HO3SCH2CH2-Phe-Phe(全-D)
SEQ ID NO：40    HO3SCH2CH2CH2-Phe-Phe(全-D)
SEQ ID NO：41    HO3SCH2CH2CH2CH2-Phe-Phe(全-D)
SEQ ID NO：42    HO3SCH2CH2-Phe-Tyr(全-D)
SEQ ID NO：43    HO3SCH2CH2CH2-Phe-Tyr(全-D)
SEQ ID NO：44    HO3SCH2CH2CH2CH2-Phe-Tyr(全-D)
SEQ ID NO：45    HO3SCH2CH2-Leu-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：46    HO3SCH2CH2CH2-Leu-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：47    HO3SCH2CH2CH2CH2-Leu-Val-Phe-Phe-Ala(全-D)
SEQ ID NO：48    Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH-CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：49    Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH-CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：50    Leu-Val-Phe-Phe-Ala-NH-CH2CH2CH2CH2SO3H(全-D)
SEQ ID NO：51    Aβ([L]10-15[D]16-21)
                 Y[L]-E[L]-V[L]-H[L]-H[L]-Q[L]-K[D]-L[D]-V[D]-F[D]-
                 F[D]-A[D]
SEQ ID NO：52    Aβ([D]16-21[L]22-28)
                 K[D]-L[D]-V[D]-F[D]-F[D]-A[D]-E[L]-D[L]-V[L]-G[L]-
                 S[L]-N[L]-K[L]
SEQ ID NO：53    His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val
(全-D)
SEQ ID NO：54    Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys(全-D)
SEQ ID NO：55
Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-
Phc-Phe-Ala(全-D)
以上列举的化合物可以通过去除或插入一个或多个氨基酸残基而修饰，或者通过用其它氨基酸或非氨基酸部分或片段取代一个或多个氨基酸残基而修饰。
下列化合物是通过用其它氨基酸取代一个或两个氨基酸残基而衍生自化合物18(全-D KLVFFA-NH2；SEQ ID NO：18)的示例性化合物：
SEQ ID NO：56    Lys-Leu-Val-Trp-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：57    Lys-Leu-Val-Phe-Trp-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：58    Lys-Leu-Val-Trp-Trp-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：59    Lys-Leu-Val-Tyr-Phe-Ala-NFH2(全-D)
SEQ ID NO：60    Lys-Leu-Val-Phe-Tyr-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：61    Lys-Leu-Val-Tyr-Tyr-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：62    Lys-Leu-Bal-Thi-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：63    Lys-Leu-Val-Phe-Thi-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：64    Lys-Leu-Val-Thi-Thi-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：65    Lys-Leu-Val-Cha-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：66    Lys-Leu-Val-Phe-Cha-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：67    Lys-Leu-Val-Cha-Cha-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：68    Lys-Leu-Val-Pgly-Phe-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：69    Lys-Leu-Val-Phe-Pgly-Ala-NH2(全-D)
SEQ ID NO：70    Lys-Leu-Val-Pgly-Pgly-Ala-NH2(全-D).
对于上述化合物，术语Thi、Cha和Pgly分别是指噻吩丙氨酸、环己基丙氨酸和苯甘氨酸。
用全-D或全-L KLVFFA免疫兔子。所得抗体效价的结果示于图7。如图7所示，本发明的疫苗引起抗体产生。
在另一个实验中，用全-D或全-L KLH-淀粉状蛋白-β片段([L]-淀粉状蛋白-β 13-21和[D]淀粉状蛋白-β 13-21)免疫成年TgCRND8小鼠。抗体效价的结果示于表2。
表2
 KLH-淀粉状蛋白-β片段   TgCRND8中的平均血浆抗体效价(倒数)
[L]淀粉状蛋白-β 13-21[D]淀粉状蛋白-β 13-21     ＜10011,000
本发明包括用本发明的疫苗触发的各种类型的免疫应答，例如应用所述疫苗方法的淀粉状蛋白疗法。
按照本发明，也提供一种按照所用的免疫类型优先触发TH-2应答或TH-1应答的疫苗。通过诱发TH-2应答，主要产生诸如IL-4、Il-10和TGF-β的抗炎细胞因子以及主要产生IgG1和IgG2b抗体类别。优选这种类型的应答，因为可以避免AD患者脑中的主要炎症反应。另一方面，即TH-1应答，产生炎性细胞因子例如IL-1、IL-6、TNF和IFN γ的促炎应答占优势。该类型的应答更有可能触发巨噬细胞群体的激活。然后，这些巨噬细胞通过补体活化过程以及通过抗体介导的过程吞噬任何颗粒性沉积(例如病斑)。该方案对清除已形成的老年斑并且防止新原纤维沉积的形成将是有益的。然而，该应答也将伴随有可能对宿主有害的炎症反应。
这两种方案(即TH-1和TH-2)都是有价值的。所用的抗原可以是含有以下区域的肽：负责细胞粘着的区域即区域10-16、负责GAG结合部位的区域即13-16、负责β折叠的区域即16-21或C末端特异性区域即40-42。这些肽可以以优选获得TH-1应答或TH-2应答的方式呈递，这取决于所用的佐剂类型或者取决于疫苗的给药途径。例如，通过经鼻给药的粘膜免疫是可行的，由于已知这样的给药途径有利于产生TH-2应答。
参考以下实施例，将更加容易地理解本发明，所给出的实施例是为了说明本发明，而不是用来限制本发明的范围。
                        实施例I
在兔子或小鼠中进行测试从原纤维生成淀粉状蛋白中获得的全-D肽疫苗的有效性的体外验证程序，以证明可以产生抗Aβ 16-21(全-D)的抗体(参见图7)。对所产生的抗体进行测试，以证明所述抗体有效地防止天然Aβ(1-40，全-L)在体外的原纤维生成。用原纤维生成的标准测定评价活性，例如基于Thioflavine T、循环二向色性和溶解度的那些活性。
该方案也用来证实当以全-D肽形式使用时最有效的是哪些Aβ肽区域，以制备抗原纤维生成的疫苗。所述实验如下进行：
a)用一系列从Aβ(1-42)序列例如Aβ(16-21)、Aβ(10-21)、Aβ(13-21)等产生的重叠全-D肽免疫兔子或小鼠。
b)用免疫兔子或小鼠制备抗血清。
c)用上述原纤维生成的标准测定对这些抗血清进行测试，以观察Aβ序列的哪些部分产生最有效防止原纤维生成的抗血清。
                            实施例II
抗D-Aβ(16-21)和L-Aβ(16-21)肽疫苗的抗体对原纤维生成的影响
进行一个用以测试针对D-Aβ(16-21)和L-Aβ(16-21)肽产生的抗体的抗原纤维生成活性的验证程序。
用D-Aβ(16-21)或L-Aβ(16-21)肽免疫兔子。通过ThT测定和电子显微镜(EM)测试所产生的抗体的抗原纤维生成活性。
通过Thioflavin T测定(ThT)(图2和图3)以及通过EM(图4A-4C)看出，针对D和L形式的KLVFFA产生的抗体能够阻断原纤维生成过程。在ThT测定中，通过荧光随时间的增加监测原纤维的形成。如附图所示，所述抗体能够抑制这样的荧光增加，证明这些抗体正在抑制原纤维生成。
从这些图(图2-4)中可以看出，针对D-肽产生的抗体的抗原纤维生成活性要比抗L抗体高。
这些结果也通过EM(图4A-4C)加以证实，其中当与对照(图4A)相比时，抗D和抗L KLVFFA肽均阻断原纤维形成。此外，抗D肽的抗原纤维生成活性(图4B)再次比抗L肽(图4C)高。这与ThT测定的结果一致，其中抗D肽抗体比抗L肽抗体在荧光减少方面更高。
                    实施例III
                  抗体结合测定
用针对KLVFFA肽(D型和L型)产生的抗体对脑切片进行染色。如图5A-5D和图6A-6D所示，所述抗体不能与聚集的(ThioS阳性)Aβ结合。从这两组图即对病斑(用ThioS)和Aβ肽(用所产生的抗体)染色的图中可以看出，所述抗体识别细胞表面的Aβ，但不能与病斑结合。这些结果表明，抗KLVFFA肽抗体不与聚集的Aβ结合。这些结果清楚地证明，所述抗体仅识别非聚集的形式并且阻断原纤维生成。由于具有这样的活性，因此本发明的疫苗1)防止Aβ本身组构成原纤维和2)防止由于这样的抗体与不溶性形式结合所触发的炎症反应，因为所述抗体不能与聚集的Aβ结合所致。此外，由于Aβ保持可溶性形式，因此这样的抗体可促进在Aβ组构成原纤维之前从脑中清除Aβ。这样的抗体也将保持Aβ脑浓度与Aβ血浆浓度之间的有益平衡。
                    实施例IV
抗D-和L-Aβ(13-21-KLH)肽疫苗的抗体对淀粉状蛋白-β
            在脑和血浆中累积的影响
用D或L肽免疫9周龄成年TgCRND8小鼠(该小鼠带有表达人淀粉状蛋白前体蛋白(hAPP)的转基因)，此后每2周进行加强免疫(总共注射5次)。最后一次加强免疫后10-14天处死所述小鼠，然后测定淀粉状蛋白-β在所述小鼠脑和血浆中的累积。将脑组织如下匀浆：首先，将脑组织冷冻，给冷冻组织称重。然后将组织在4倍体积的含有1x蛋白酶抑制剂混合剂(Calbiochem#539131)的50mM Tris-HClpH 8.0的溶液中用Wheaton Overhead Stirrer(速度3.6)匀浆。将样品涡旋，然后在Eppendorf离心机中以16,000xg于4℃离心20分钟。将150μL上清液加入到250μL 8M guanidium/50mM Tris-HCl pH 8.0中。将混合物涡旋并贮存于-80℃。将沉淀解冻，涡旋下重悬于7倍体积的5M guanidium/50mM Tris pH8.0中并贮存于-80℃。将上清液和沉淀解冻并在Elma Ultrasonic浴中于80℃超声处理15分钟，然后在干冰上冷冻15分钟，然后解冻并且在Elma Ultrasonic浴中于80℃超声处理10分钟。然后将样品以16,000xg于4℃离心20分钟，对上清液中的淀粉状蛋白-β定量。用人β淀粉状蛋白ELISA试剂盒(Biosource International，产品目录号88-344)，对淀粉状蛋白-β40和淀粉状蛋白-β42进行定量。
用标准ELISA方法测定具体的血浆抗体效价(示于表2，参见上文)。表2中的数据表明，用[D]13-21肽免疫要比用[L]13-21肽免疫在诱导免疫应答的有效性方面高得多。
所得结果也表明，在用[D]13-21-KLH免疫后的TgCRND8小鼠脑中的可溶性和原纤维(不溶性)Aβ40水平(图8A和图8B)均降低、可溶性和原纤维Aβ42水平(图9)均降低以及总Aβ水平(图10A和图10B)降低。所得结果表明，用D肽免疫在降低Aβ水平方面是有效的。此外，D肽比L肽的有效性高得多，因为仅用D肽免疫降低Aβ水平，而用L肽免疫不降低Aβ水平。
                     实施例V
               针对淀粉状蛋白-β的被动免疫
通过使转基因动物例如Xenomouse(Abgenix，Freemont，CA)接触抗原量的全-D淀粉状蛋白-β(10-22)产生人源化抗体，并从所述转基因动物中获得所述人源化抗体。抗原量的范围为10ng至10mg全-D淀粉状蛋白-β肽。可以通过使用所述佐剂增强免疫应答，从而可以使用较低浓度的免疫原。通过ELISA或其它测定免疫应答效价的方法监测血清抗体水平。可以直接从动物血清中回收所述抗体，或者可以从供产生杂交瘤系的免疫动物中回收表达这种抗体的B细胞。通过G蛋白层析或类似的抗体纯化法，从血清、腹水或细胞培养液中纯化所述人源化抗体。
可以用第二种哺乳动物或供体哺乳动物直接产生的抗体或者用从来自供体哺乳动物的免疫细胞中获得的杂交瘤系间接产生的抗体免疫罹患淀粉状蛋白相关疾病或障碍的第一种或受治疗哺乳动物，或者用所述抗体预防淀粉状蛋白相关疾病或障碍。给第一种哺乳动物提供治疗或预防有效量的抗Aβ抗体。抗体片段或致敏免疫细胞例如B细胞、T细胞或致敏抗原呈递细胞可以从供体、优选人供体、更优选同源人供体中获得。根据所述技术和测定法的测量，治疗有效剂量定义为使第一种哺乳动物中的原纤维病斑的形成或质量减少至少5-50％或更高的剂量。病斑形成或量减少100％或更高被认为是治疗终点。主治医师或其它医学专业人员可以监测给药方案，以达到所需的治疗效应或终点。
尽管结合具体的实施方案描述了本发明，但是应当明确的是：可以对本发明进行进一步修改，并且本申请包括总体上按照本发明原理进行的、包含属于本发明所属领域已知技术或常规技术的偏离本发明公开内容而可用于本发明上述必要特征以及属于后附权利要求书范畴的任何变化、应用或改进。

Claims (32)

1.一种用于预防和/或治疗受治疗者的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括给予所述受治疗者抗原量的一种全-D淀粉状蛋白-β肽，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽诱导所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的免疫应答，并且其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO：1-70的序列有至少80％相同。
2.权利要求1的方法，其中所述全-D肽与淀粉状蛋白的至少一个区域相互作用，所述区域选自N末端区域或C末端区域、β折叠区域、GAG-结合部位区域、巨噬细胞粘着区域、其免疫原性片段、其蛋白缀合物、其免疫原性衍生肽、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物。
3.权利要求2的方法，其中所述全-D肽还包含：
(a)一个N末端取代基，所述取代基选自：
氢；
低级烷基，所述低级烷基为具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基；
芳族基团；
杂环基；和
酰基；以及
(b)一个C末端取代基，所述取代基选自羟基、烷氧基、芳氧基、未取代和取代的氨基。
4.权利要求3的方法，其中所述烷基或芳族基团被选自以下的基团进一步取代：卤化物、羟基、烷氧基、芳氧基、羟基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基甲酰基、未取代的氨基、取代的氨基、磺基、烷氧基磺酰基、膦酰基和烷氧基膦酰基。
5.权利要求1的方法，其中所述全-D肽还包含酸官能团或其药学上可接受的盐形式或酯形式。
6.权利要求1的方法，其中所述全-D肽还包含碱官能团或其药学上可接受的盐形式。
7.权利要求1的方法，其中所述全-D肽激发可溶性淀粉状蛋白-β的清除，从而预防或降低淀粉状蛋白诱导的细胞毒性、神经变性或者降低或抑制病斑的形成。
8.一种用于预防和/或治疗需要这种预防和/或治疗的第一种哺乳动物的淀粉状蛋白相关疾病的方法，所述方法包括将抗原量的一种全-D淀粉状蛋白-β肽给予第二种哺乳动物，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽诱导所述第二种哺乳动物针对所述淀粉状蛋白-β肽的免疫应答，从所述第二种哺乳动物回收所述抗体或免疫细胞，并且为所述第一种哺乳动物提供治疗或预防有效量的所述抗体或免疫细胞。
9.权利要求8的方法，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO：1-70的序列有至少80％相同。
10.权利要求8的方法，其中所述全-D肽与淀粉状蛋白的至少一个区域相互作用，所述区域选自C末端区域、β折叠区域、GAG-结合部位区域、巨噬细胞粘着区域、其免疫原性片段、其蛋白缀合物、其免疫原性衍生肽、其免疫原性肽及其免疫原性肽模拟物。
11.权利要求8的方法，其中所述全-D肽还包含：
(a)一个N末端取代基，所述取代基选自
氢；
低级烷基，所述低级烷基为具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基；
芳族基团；
杂环基；和
酰基；以及
(b)一个C末端取代基，所述取代基选自羟基、烷氧基、芳氧基、未取代和取代的氨基。
12.权利要求8的方法，其中所述烷基或芳族基团被选自以下的基团进一步取代：卤化物、羟基、烷氧基、芳氧基、羟基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基甲酰基、未取代的氨基、取代的氨基、磺基、烷氧基磺酰基、膦酰基和烷氧基膦酰基。
13.权利要求8的方法，其中所述全-D肽还包含酸官能团或其药学上可接受的盐形式或酯形式。
14.权利要求8的方法，其中所述全-D肽还包含碱官能团或其药学上可接受的盐形式。
15.权利要求8的方法，其中所述全-D肽激发可溶性淀粉状蛋白-β的清除，从而预防或降低淀粉状蛋白诱导的细胞毒性、神经变性或者降低或抑制病斑的形成。
16.一种用于改变哺乳动物体内淀粉状蛋白-β的血清水平的方法，所述方法包括给予所述受治疗者抗原量的一种全-D淀粉状蛋白-β肽，其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽诱导所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的免疫应答，并且其中所述全-D淀粉状蛋白-β肽的氨基酸序列与选自SEQ ID NO：1-70的序列有至少80％相同。
17.权利要求16的方法，其中改变哺乳动物体内淀粉状蛋白-β的血清水平有利于清除哺乳动物体内的可溶性淀粉状蛋白-β或原纤维淀粉状蛋白-β。
18.权利要求17的方法，其中清除所述哺乳动物体内的可溶性淀粉状蛋白-β或原纤维淀粉状蛋白-β，从而降低或抑制所述哺乳动物脑中病斑的形成。
19.权利要求16的方法，其中所述全-D肽还包含：
(a)一个N末端取代基，所述取代基选自：
氢；
低级烷基，所述低级烷基为具有1-8个碳原子的无环烷基或环烷基；
芳族基团；
杂环基；和
酰基；以及
(b)一个C末端取代基，所述取代基选自羟基、烷氧基、芳氧基、未取代和取代的氨基。
20.权利要求16的方法，其中所述烷基或芳族基团被选自以下的基团进一步取代：卤化物、羟基、烷氧基、芳氧基、羟基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、氨基甲酰基、未取代的氨基、取代的氨基、磺基、烷氧基磺酰基、膦酰基和烷氧基膦酰基。
21.权利要求16的方法，其中所述全-D肽还包含酸官能团或其药学上可接受的盐形式或酯形式。
22.权利要求16的方法，其中所述全-D肽还包含碱官能团或其药学上可接受的盐形式。
23.权利要求16的方法，其中所述全-D肽激发可溶性淀粉状蛋白-β的清除，从而预防或降低淀粉状蛋白诱导的细胞毒性或神经变性。
24.权利要求1的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是一种包含过量的淀粉状蛋白-β肽的疾病，并且诱发所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的所述免疫应答，从而降低过量水平的所述淀粉状蛋白-β肽，以治疗或预防所述淀粉状蛋白相关疾病。
25.权利要求24的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是早老性痴呆。
26.权利要求24的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是脑淀粉状蛋白性血管病。
27.权利要求8的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是一种包含过量的淀粉状蛋白-β肽的疾病，并且诱发所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的所述免疫应答，从而降低过量水平的所述淀粉状蛋白-β肽，以治疗或预防所述淀粉状蛋白相关疾病。
28.权利要求27的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是早老性痴呆。
29.权利要求27的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是脑淀粉状蛋白性血管病。
30.权利要求16的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是一种包含过量的淀粉状蛋白-β肽的疾病，并且诱发所述受治疗者针对所述淀粉状蛋白-β肽的所述免疫应答，从而降低过量水平的所述淀粉状蛋白-β肽，以治疗或预防所述淀粉状蛋白相关疾病。
31.权利要求30的方法，其中所述淀粉状蛋白相关疾病是早老性痴呆。
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