CN1652768A

CN1652768A - 用于节育和激素替代疗法的具有孕酮受体调节活性的5－{2－羟基－3－[′1－(3－三氟甲基苯基)－环丙基]－丙酰氨基}－2－苯并[c]呋喃酮及相关化合物

Info

Publication number: CN1652768A
Application number: CNA038106590A
Authority: CN
Inventors: 诺贝特·施梅斯; 曼弗雷德·莱曼; 乌尔丽克·富尔曼; 彼得·穆恩; 赫丽斯塔·黑格勒－哈通; 米夏埃多·克洛茨比歇尔
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2002-03-11
Filing date: 2003-03-10
Publication date: 2005-08-10
Also published as: CR7490A; JP2005526064A; RS89504A; CA2478948A1; NO20044279L; UA78027C2; EP1482925A1; DK1482925T3; EP1482925B1; RU2314299C2; HRP20040923A2; ES2280766T3; WO2003075915A1; RU2004130430A; US20030232824A1; IL164032A0; DE60311236D1; DE60311236T2; AU2003209720A1; AR035904A1

Abstract

本发明涉及通式(I)所示的非甾体孕激素或其药物学可接受的衍生物或类似物，其中，R₁和R₂分别是－H或－F，R₃是－CH₃或－CF₃，Ar是(a)或(b)，这些孕激素适用于选择性地调节不同靶组织中孕酮受体介导的作用，特别是子宫相对于乳房组织。因此，本发明孕激素，可任选地与雌激素结合，可用于避孕(特别是不含雌激素的口服避孕药)、激素替代疗法和妇科病症的治疗。本发明还涉及选择性调节不同靶组织或器官的孕激素受体介导的作用的方法。

Description

用于节育和激素替代疗法的具有孕酮受体调节活性的5-{2-羟基-3- [′1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮及相关化合物

技术领域

本发明涉及一种通式(I)所表示的非甾体孕激素，以及所述化合物选择性地调节孕酮受体对不同靶组织的调节作用的应用，即本发明涉及对不同的靶组织有分离活性功能(dissociated activity profile)的孕激素，优选为具有子宫/乳房分离作用。本发明还涉及所述化合物相对于乳房组织孕酮受体的介导作用选择性地增强子宫组织孕酮受体的介导作用的应用和方法。由于本发明孕激素独特的分离活性和选择性功能，本发明特别涉及所述化合物在节育上的应用，尤其可以用于口服避孕药、激素替代疗法和妇科病症的治疗。本发明的孕激素特别适合用于不含雌激素的口服避孕药。

背景技术

孕酮是一种独特的生殖激素，它在女性生殖系统中具有决定性的作用。孕酮主要的靶器官是子宫、卵巢、乳房和下丘脑-垂体轴。除主要作为妇女妊娠控制剂(例如，口服避孕药(OC))应用外，孕激素可以任选地与雌激素相结合，广泛应用于激素替代疗法(HRT)。孕激素也用于治疗一些妇科病症，例如痛经、子宫内膜异位和因激素不足或失衡导致的功能失调性子宫出血病。由于孕激素的某些作用可能在某些应用中不合需要，或与除孕激素受体外的其他受体的交叉反应，所以开发新型的孕激素以改善其活性功能成为极大的挑战。另外对于肿瘤学等治疗应用的探索也要求孕激素有新的活性功能。

最近，在WO 98/54159中披露对孕酮受体有非常强的亲和力，但额外具有雄性激素作用的非甾体孕激素。这些孕激素不仅适用于妇女节育(FC)和HRT(任选地和雌激素结合)，而且可用于男性FC、男性HRT和男性综合症的治疗。

WO 00/32584披露特殊的非甾体糖皮质激素，其抗炎活性和代谢作用间具有明显的分离。它们对于孕激素受体的亲和力高，但它们的孕激素潜力并不显著。

最后，DE 100 38639.3披露对糖皮质激素受体具有很强的亲和力糖皮质激素，其从而具有抗炎作用以及抗过敏作用、免疫抑制和抗增殖作用，可用于治疗包括关节炎和过敏症等的疾病。

然而，特别在女性节育和HRT领域对下述孕激素有很大的需求，该孕激素对其他激素受体的亲和力较低，而对不同的PR靶组织或器官如在乳房和生殖道中有很强的分离作用。

特别地，由于许多流行病学研究有关乳腺癌发病率与应用复合口服避孕药(COC)或HRT特别是长期应用的关系，提供具有抗乳房组织增殖潜力且同时对子宫内膜具有有益作用的作用分离的孕激素似乎是有益的。(见例如K.E.Malone等，Epidemiologic Reviews 1993，15，80-97和Standford等，Epidemiologic Reviews 1993，15，98-107)。尽管该风险是矛盾的和有争议的，但是有证据显示在某些环境下多年服用孕激素可能会增强普通乳房上皮细胞的有丝分裂活性。所以，提供乳房中有益的作用诸如抗增殖作用并且对卵巢和/或子宫有传统的孕激素作用的分离活性功能的孕激素是适宜的。

最近，有试验对具有组织特异性的孕激素受体配体进行筛选，见WO 02/054064。一种筛选具有分离活性功能的孕酮受体(PR)配体的方法基于孕激素表达为两种不同的同种型(PR-A和PR-B)的事实，该同种型似乎可被具有PR-A或PR-B选择性的化合物彼此独立地激活。

这两种PR同种型在迄今为止所检验的所有孕酮靶器官上均有表达(例如乳房、子宫等)。但是，有明显证据表明PR-A和PR-B功能以组织特异性方式调节对孕酮的反应。排除同种型特异性的小鼠表明PR-A和PR-B对同一靶器官具有不同的功能。在这些研究的基础上，PR-B似乎是最重要的负责乳腺增殖和分化的受体，而孕激素对子宫上皮细胞和排卵的抗增殖作用很可能是由PR-A介导的(B.Mulac-Jericevic，Science2000，289，1751-1754；Orla Conneely，Endocrine Society Meeting，Toronto，June 2000)。

因此，在WO 02/054064中披露的发明基于下述新理论，即PR活性的同种型特异性配体可能导致在激素治疗和避孕中孕激素活性的调节具有组织选择性。然而，WO 02/054064提供了用于确定潜在的PR同种型和/或组织特异性PR配体的工具，而本发明提供了特定的非甾体孕激素，其具有显著的PR同种型选择性，同时对不同的PR靶器官具有令人惊奇的分离作用，特别是子宫/乳房的分离活性功能。

发明目的

如上所述，本发明的一个目的是提供用于FC、HRT和妇科病症治疗的新型孕激素。另一个目的是提供适用于不含雌激素的口服避孕药的新型孕激素。特别地，希望可以提供对某些PR靶器官如子宫具有有益作用，而不会增强对其他PR靶器官的副作用如乳房上皮细胞的增殖/分化的新型孕激素。因此，本发明希望提供一种对不同的靶组织或器官有分离作用功能的新型孕激素，优选为子宫/乳房特异性孕激素。

本发明的另一目的是提供一种方法，该方法用于相对于优选为乳房组织的次选(second selected)组织选择性地调节优选为子宫组织的首选(first selected)组织中孕酮介导的作用。提供下述方法特别有益，即在子宫选择性增强抗增殖作用而在乳房组织阻止诸如增殖和分化的不良作用。

本发明的另一个目的是提供PR同种型选择性的(优选为PR-A相对于PR-B的选择性)孕激素。本发明也希望能提供选择性地调节优选为PR-A的PR同种型介导的作用的方法，以及选择性地激活优选为PR-A的PR同种型转录的方法。

所有这些目的令人惊奇地通过通式(I)的孕激素、所述孕激素的应用以及以下进一步详述的本发明调节孕酮介导的作用得以实现。

发明内容

第一方面，本发明提供一种如下的通式(I)的化合物。本发明优选的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮。

第二方面，本发明提供一种包括单独(例如在不含雌激素的口服避孕药中)或任选地与作为附加成分的17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素结合的通式(I)化合物的药物组合物。

第三方面，本发明提供通式(I)的化合物在治疗中的应用。

第四方面，本发明提供包含通式(I)化合物的药物组合物在治疗中的应用。

第五方面，本发明提供通式(I)所示的化合物或包括所述化合物的药物组合物在制备药剂中的应用。该药剂用于相对于优选为乳房组织的次选组织选择性地调节优选为子宫组织的首选组织的孕酮受体介导的作用，尤其是用于节育、激素替代疗法或妇科病症的治疗。

第六方面，本发明提供通式(I)化合物作为避孕药的应用，优选为不含雌激素的口服避孕药，例如，“仅含孕酮的药丸(progesterone-onlypill)”(POP)。

第七方面，本发明提供相对于优选为乳房组织的次选组织选择性地调节优选为子宫组织的首选组织的孕酮受体介导的作用的方法，尤其是用于节育、激素替代疗法或妇科病症的治疗。该方法包括向个体给药通式(I)化合物的步骤。

此外，第八方面，本发明提供通式(I)化合物在制备药剂中的应用，该药剂用于相对于孕酮受体同种型B转录选择性激活孕酮受体同种型A转录以及相对于孕酮受体同种型B介导的作用选择性增强孕酮受体同种型A介导的作用。

第九方面，本发明提供相对于孕酮受体同种型B转录选择性激活孕酮受体同种型A转录以及相对于孕酮受体同种型B介导的作用选择性增强孕酮受体同种型A介导的作用的方法。

附图说明

图1证明切除卵巢的未成熟雌性大鼠皮下应用化合物((+)-1)(与0.3mg/kg R5020等效的((+)-1)剂量)与标准的孕激素普美孕酮(R5020)相对比，对末端(terminal)和小泡终蕾(alveolar endbud)生成的刺激作用的差别。

图2显示通过MIB-5染色法，应用化合物((+)-1)与标准的孕激素普美孕酮(R5020)相比，对未成熟切除卵巢雌性大鼠的乳房上皮细胞增殖的刺激作用。

图3涉及未成熟切除卵巢雌性大鼠皮下应用R5020(标准孕激素)和化合物((+)-1)后对末端和小泡终蕾生成的刺激作用(临界值)。

图4证明与以雌二醇处理的对照组相比化合物((+)-1)对大鼠子宫生长(子宫湿重和子宫干重；上皮厚度)的抗雌激素作用。

具体实施方式

第一方面，本发明提供如通式(I)所示的非甾体孕激素化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物

其中R₁和R₂彼此独立地是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

限制条件为该化合物不是5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮。

为本发明的目的，如上所述通式(I)化合物的“药物学可接受的衍生物或类似物”为结构衍生自和/或基本相似于上述通式(I)结构的化合物以及在定性和/或定量方面与通式(I)化合物获得的生物学活性(体外和/或体内)也基本相似的化合物。

如通式(I)的化合物具有立体中心(stereogenic center)，其存在两种不同的立体异构体(对映体)形式。因此本发明化合物可提供为外消旋体，即对应体的混合物(例如记作(±))。然而，例如通过对映体选择性合成或通过应用例如在以下实施例1a)中所述的标准分离方法，本发明化合物还可提供为单独的(+)或(-)、即右旋或左旋对映体。应知道，通过披露(+)或(-)异构体，同样披露了这些异构体固有的绝对构型。

标准分离方法在熟练技术人员的能力范围之内。例如，可以通过一种光学活性的载体(例如，CHIRALPAK AD^TM)以色谱法将外消旋体分离为纯异构体。此外，还可以下述方法分离，即使通式(I)的(外消旋)化合物的游离羟基与光学活性酸(如α-羟基苯基乙酸，樟脑磺酸或酒石酸)进行反应，生成非对映异构体的酯，该酯可通过分步结晶或通过色谱法并随后皂化生成光学上的纯对映体。

本发明优选的化合物是上述的通式(I)化合物，其为(+)对映异构体。

通式(I)化合物的实例如下：

外消旋体，(+)和(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮(((±)-1)，((+)-1)和((-)-1))，

外消选体，(+)和(-)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮(((±)-2)，((+)-2)和((-)-2))，

外消选体，(+)和(-)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮(((±)-3)，((+)-3)和((-)-3))，

外消选体，(+)和(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮(((±)-4)，((+)-4)和((-)-4))，

外消选体，(+)和(-)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮(((±)-5)，((+)-5)和((-)-5))，以及

外消选体，(+)和(-)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮(((±)-6)，((+)-6)和((-)-6))，

本发明特别优选的化合物如下：

(((±)-1)、((+)-1)、((-)-1))，

(((±)-2)、((+)-2)、((-)-2))，

(((±)-3)、((+)-3)、((-)-3))，

(((±)-4)、((+)-4)和((-)-4))。

本发明最优选的化合物是5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，下文称作化合物(1)：

如上所述，5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮的(+)-对映异构体为特别优选并指定为((+)-1)。(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-1)的合成路线以及该化合物的物理数据如实施例1所述。此化合物在体内以及体外实验中的试验结果如实施例2、3、4和5中所述。

通过这些实施例可以证明本发明优选的孕激素((+)-1)具有理想的体内和体外功能。就化合物((+)-1)的体外功能而言，在以下实施例5中证明化合物((+)-1)是选择性的PR-A激动剂且显示出高PR-A相对PR-B的特异性(本发明化合物的PR同种型特异性的详细情况在下述本发明第八和第九部分中给出)。如所证实，化合物((+)-1)选择性地激活PR-A转录，从而选择性地增强PR-A介导的作用。

就化合物((+)-1)的体内活性功能而言，其具有高度分离性。具体而言，((+)-1)在子宫对维持妊娠显示出很高活性，而对乳腺活性相当低，即((+)-1)不激活乳腺的增殖和分化(见实施例3的大鼠实验)，特别是在妊娠得以维持的剂量范围内。

化合物((+)-1)是迄今为止所确定的在体内最有效的孕激素之一。在排卵抑制实验(见实施例2)中，化合物((+)-1)至少与本试验所用的标准孕激素R5020(普美孕酮)同样有效。在大鼠的维持妊娠实验中(见实施例3)，化合物((+)-1)的效力是左炔诺孕酮(LNG)的大约10倍。此外，在Clauberg实验(兔子宫内膜变性；见实施例4)中，记录表明((+)-1)皮下和口服应用具有同样的孕激素效力。这证明((+)-1)口服给药时具有很强的活性。

此外，尽管显示对雄激素受体(AR)具有中等的结合力，化合物((+)-1)在体内显示无雄性激素作用，也没有抗雄性激素作用。在体内雄性激素和抗雄性激素作用的缺乏在切除睾丸的大鼠实验中得以证明(前列腺重量和精囊的变化)。在大鼠妊娠维持实验中，即使给予高于维持妊娠所需100倍的剂量时，仍未发现化合物((+)-1)的雄性激素作用。另外，尽管发现化合物((+)-1)对糖皮质激素(GR)有十分强的亲和力，但是它在体内似乎并没有表现任何糖皮质激素或抗糖皮质激素作用，此结论可由旨在测量胸腺重量改变的试验得出。最后，因为化合物((+)-1)在体外与盐皮质激素受体(MR)和雌激素受体α(ERα)以微乎其微的亲和力相结合，预期其没有同这些受体交互反应导致的MR或ERα激素作用。

就上述作用与活性而言，化合物((+)-1)被认为是本发明中通式(I)的所有其他化合物的实例。

由于以上所证实的本发明中的新型孕激素的有益作用，尤其是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，即化合物((+)-1)，这些孕激素尤其适用于避孕药，特别是不含雌激素的口服避孕药，例如仅含孕激素的药丸(POP)。

第二方面，本发明提供包含上述通式(I)所定义的、且不是5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的孕激素的药物组合物。优选的药物组合物包含上述优选的化合物。本发明更优选的药物组合物包含5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮(1)，最优选为(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-1)。

例如就要治疗/影响的症状或应用的方式而言，根据所需的应用，本发明的药物组合物——当不作为不含雌激素的口服避孕药应用时(其为本发明孕激素优选的应用之一)——除优选为((+)-1)的通式(I)化合物外，还含有雌激素成分。例如，在该药物组合物试图用作(口服)避孕药(其应用将在下面做更详细的解释)的情况下，通常被用于复合(口服)避孕药的雌激素是适当的。尽管任何天然雌激素(尤其是雌三醇或雌二醇)或合成雌激素、甾体或非甾体都可应用，在这方面尤其是用于口服给药的优选的雌激素是17α-乙炔基雌二醇及其酯、醚以及其他17α-乙炔基雌二醇的衍生物。

此外，衍生于雌二醇或乙炔基雌二醇的雌三烯-3-氨基磺酸酯(WO96/05216和WO 96/05217)可用于和通式(I)所示的化合物、优选化合物((+)-1)相结合。衍生于雌烷的14α，15α-亚甲基甾体化合物，尤其是14α，15α-亚甲基-17α-雌二醇和相应的3-氨基磺酸酯衍生物也适用于这个方面。

为应用于激素替代疗法(其应用将在下文做更详细的解释)，可任选地与本发明通式(I)的孕激素、优选为化合物((+)-1)相结合的雌激素优选为雌二醇、雌二醇戊酸酯或者其他的雌二醇酯以及结合的(天然的，例如马的)雌激素。

在本发明的药物组合物中，如上通式(I)所定义的化合物，尤其是化合物((+)-1)，和任选的其他雌激素成分，优选为17α-乙炔基雌二醇必须为(药物学)有效的量。给药的剂量(即，“(药物学)有效的量”)视所需治疗的病症、或者其他任何所需的应用以及给药方式而在较大的范围内变化。其可以包括任何对所欲的治疗或应用有效的剂量。“药物学有效的量”的确定在本领域熟练的技术人员能力范围之内。

更准确地，在用于任何设想的应用(即口服避孕药(复合口服避孕药以及不含雌激素的口服避孕药，例如“仅含孕激素的药丸”)，HRT和对妇科病症以及其他疾病病症的治疗)的本发明药物组合物中，向个体给药优选为化合物((+)-1)的通式(I)化合物的每日剂量在0.01至2mg范围内通常被认为是适当的。然而，对于特定的应用尤其适宜的剂量如下：

当优选为化合物((+)-1)的本发明孕激素与如上定义的雌激素结合用于作为复合口服避孕药的药物组合物中时，个体给药适宜的每日剂量为10μg至100mg。个体给药适宜的每日剂量优选为10μg至1mg。

当优选为化合物((+)-1)的本发明孕激素用于如“仅含孕激素的药丸”(POP)的不含雌激素的口服避孕药的药物组合物中而不含任何其他雌激素成分时，个体给药适宜的每日剂量为10μg至1mg，更优选为30μg至300μg或10μg至100μg，而低至1μg至10μg的剂量范围也可以应用。

当优选为化合物((+)-1)的本发明孕激素用于HRT用药物组合物中时，个体给药适宜的每日剂量为10μg至10mg，更优选为10μg至1mg(相当于醋酸甲羟孕酮(MPA)等效剂量的1/100)，最优选为10μg至100μg。

当优选为化合物((+)-1)的本发明孕激素用于除避孕药或HRT的其他应用的药物组合物时，如治疗妇科病症如经前期综合症(其显示为头痛、抑郁症状、水潴留等)、痛经、子宫内膜异位、肌瘤或功能失调性子宫出血，其给药量通常同上述用于COC、POP和HRT的范围相同，但也可视所欲达到的效果而不同于这些值。

当优选为化合物((+)-1)的本发明孕激素与优选为17α-乙炔基雌二醇的雌激素成分结合用于如上定义的药物组合物中时，雌激素成分个体给药适宜的每日剂量为(或等效于)0.01至0.05mg。优选为0.015至0.03mg的17α-乙炔基雌二醇。

本发明中的孕激素，尤其是化合物((+)-1)，与优选为17α-乙炔基雌二醇的雌激素成分结合给药用于优选为复合口服避孕药(COC)的避孕药或HRT中时，孕激素和雌激素可以同时给药，例如在同一片剂中，或者也可根据特定方案分别甚至通过不同途径例如口服和非胃肠道给药。在避孕药(如不含雌激素的口服避孕药)和HRT应用中，优选为化合物((+)-1)的如上所定义的本发明孕激素和任选的(为复合口服避孕药时)如上所定义的雌激素成分的每日剂量可在整个女性月经周期内维持不变，或可在女性月经周期内相互独立地变化，如公知的两级或多级制剂，其中孕激素以及雌激素的浓度在月经周期的两个或多个阶段内升高。此外，在序贯应用中设想在周期第一阶段内单独给药雌激素成分，在周期第二阶段内加入孕激素。并且，与传统的口服避孕药相同，本发明的孕激素，特别是化合物((+)-1)，以及任选的如上所定义的另外的雌激素成分在28天的周期内服用y＝28-x天后可被打断x天，其中x可为例如7、6、5、4或更少，且由此y可为例如21、22、23、24或更多。在不含雌激素的口服避孕药例如为POP的情况下，本发明的孕激素，特别是化合物((+)-1)的每日给药不应被打断。

本发明中药物组合物可以本领域公知的方法制备，下文将进行更为详细的解释。视所欲给药的方式以及所用活性化合物的特定性能如溶解度、生物利用度等而定，公知公用的佐剂以及其他合适的载体、稀释剂、矫味剂等都可应用。合适的载体和佐剂为下列文献中所推荐用于药学、化妆品和相关领域的：Ullmann’s Encyclopedia of Technical Chemistry，Vol.4，(1953)，pp.1-39；Journal of Pharmaceutical Sciences，Vol.52(1963)，p.918ff；H.v.Czetsch-Lindenwald，“Hilfsstoffe für Pharmazie und angrenzendeGebiete”Pharm，Ind.2，1961，p.72ff；Dr.H.P.Fiedler，Lexikon derHilfsstoffe für Pharmazie，Kosmetik und angrenzende Gebiete，Cantor KG，Aulendorf in Württemberg，1971.

如上所述，通式(I)的孕激素尤其是化合物((+)-1)或者含有所述化合物的不含(如在不含雌激素的口服避孕药中)或包括其他的雌激素成分例如17α-乙炔基雌二醇的药物组合物的适宜的服用方式是口服，例如通过片剂、丸剂、糖锭剂、胶囊、颗粒剂、溶液剂、乳剂或者混悬剂等。如上所述适于本发明目的的化合物可与公知公用的佐剂和载体混合用于口服给药药物组合物的制备，例如阿拉伯树胶、滑石、淀粉、糖(例如甘露糖、甲基纤维素、乳糖等)、明胶、表面活性剂、硬脂酸镁、含水或不含水的赋形剂、石蜡衍生物、交联剂、分散剂、乳化剂、滑润剂、防腐剂、调味剂(例如精油等)、或者增溶剂(例如苯甲酸苄酯或苯甲醇)。在药物组合物中，活性成分还可分散于微粒如纳米颗粒组合物中。

然而，还设想其他的应用方式，如非胃肠道给药，例如腹膜内、肌肉(如通过含水、油性或其他溶液注射剂，例如通过储库型注射剂，其中激素由储库缓慢释放进入血液，并从而传送至靶器官例如下丘脑、垂体和子宫)、皮下或透皮应用。对于非胃肠道给药，可将活性试剂溶解或悬浮于生理可接受的稀释剂中，例如含有或不含有增溶剂、表面活性剂、分散剂或乳化剂的油。作为油，例如可使用且不限于橄榄油、花生油、棉籽油、大豆油、蓖麻油和芝麻油。如本领域中所公知，可通过用于透皮传递活性试剂的特定设计、任选地含有特定渗透促进剂的合适贴剂实现透皮应用。此外，乳剂、软膏、霜剂或凝胶也可用于透皮传递。

应用的另一种方式是通过埋植含有惰性载体材料的储库型植入剂。该储库型材料可为例如生物可降解聚合物或如硅酮橡胶的合成聚硅氧烷。该植入剂设计用于在较长的时期内(例如3至5年)以被控制的方式释放活性药剂。再一种适宜的给药方式是通过阴道内装置(例如阴道环)或子宫内系统(IUS)，其含有在延长的时期内控释如本发明的孕激素和/或雌激素的活性药剂的储库。这种IUS(例如MIRENA^TM)在植入子宫腔后可在长达5年(或直到系统被移除)时间内以确定量持续释放激素。孕激素和/或雌激素的每日释放量对应于上述的每日剂量。

第三方面，本发明提供通式(I)所示的化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物在治疗中的应用：

其中R₁和R₂分别独立是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

但限制条件是该化合物不是5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮。

第四方面，本发明提供药物组合物在治疗中的应用，该药物组合物包括如上所定义的通式(I)所示的化合物，但限制条件为该化合物不是5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮。

在本发明的第三和第四方面中，用于治疗的优选的化合物和组合物和本发明的第一和第二方面中所述的优选的化合物和组合物是一样的。优选地，本发明的化合物和组合物，尤其是化合物((+)-1)或包含化合物((+)-1)的药物组合物，可例如作为(复合)口服避孕药(COC)、不含雌激素的口服避孕药例如仅含孕激素的“微丸”(minipills)(POP)、避孕贴剂、注射剂、植入剂或子宫内系统(IUS)用于节育，或任选与孕激素特别是17α-乙炔基雌二醇结合应用于激素替代疗法或妇科病症的治疗，如痛经、子宫内膜异位、肌瘤、经前期综合症、功能失调性子宫出血病等。对其他可治疗的疾病或例如在避孕领域的其他应用的解释将在下文本发明第五和第六方面进行讨论。

第五方面，本发明提供通式(I)所示的化合物或其药物学上可接受的衍生物或类似物在制备相对于次选组织选择性地调节首选组织的孕酮受体介导的作用的药剂中的应用：

其中R₁和R₂分别独立地是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

但是包括了化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮，而此化合物被本发明的第一、二、三和第四方面从通式(I)的范围内排除。

如前文所公开的本发明的各个方面，特别是第一方面，如上所述的相同的通式(I)化合物是优选的用于本发明目的的化合物。因此，化合物(I)，尤其是化合物((+)-1)即(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，或其药物学可接受的衍生物和类似物，对于本发明的第五方面来说，同样是最优选的化合物。

在本发明的这个方面的目的中，“选择性地调节”PR介导的作用是指如上所述的通式(I)所示的化合物对首选的靶组织可以达到一种或几种作用，与次选的靶组织中的所述配体导致的作用相比这些作用的种类不同(例如，抑制、刺激或不产生作用)和/或强度不同(例如，弱、强和/或持续长或短)。

应当明白，本发明的益处当然不止限于首选和次选组织本身，而是同样旨在首选和次选器官，因此本发明的第五方面还涉及通式(1)的如上所定义的化合物(且包括被本发明的第一、二、三和第四方面从通式(I)的范围内排除的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮)在制备相对于次选组织选择性地调节首选组织的PR介导的作用的药剂中的应用。

为了本发明的目的，首选的靶器官优选为生殖道，即主要为子宫，次选靶器官为乳房，特别是乳腺。相应地，首选的靶组织优选为子宫组织，次选的靶组织优选为乳房组织。这样，本发明第五部分的化合物相对优选为子宫组织的首选靶组织和优选为乳房组织的次(即不同的)选靶组织显示出分离活性功能。

优选地，“相对于次选组织选择性地调节首选组织的PR介导的作用”在本发明特定的上下文中是指选相对于所述优选为乳房组织的次选组织在所述优选为子宫组织的首选组织中选择性地提高PR介导的作用。换句话说，通过本发明的方法和应用，相对(即对比)于次选组织(优选为乳房组织)中的PR介导的作用，首选组织(优选为子宫组织)中的PR介导的作用被选择性地增强，即在所述首选和次选靶组织观察到对PR介导的作用分离。

术语“相对于次选组织选择性地调节首选组织的PR介导的作用”并未因此意图限于首选和次选组织中PR介导的作用的某些绝对的值，而是包括下述情况，其中，例如次选组织(优选为乳房组织)中诱导的PR介导的作用低或根本检测不到，而在首选组织(优选为子宫组织)中诱导的PR介导的作用非常显著或仅中等，但无论如何相对次选组织中诱导的PR介导的作用有所提高。

最优选地，上述本发明第五部分所定义的本发明化合物相对乳房中不良的PR介导的作用如乳房上皮细胞的增殖/分化，发挥对生殖道中的PR介导的有益的和/或保护的作用如维持妊娠，并且还维持传统的孕激素作用如抑制排卵等。

因此，本发明提供具有明显分离的孕激素活性功能的孕激素化合物，其能够在一个孕酮靶器官如子宫引发所需的有益的效果，而在另一个孕酮靶器官例如乳房不引发不良作用如乳房组织的增殖/分化(其表现为乳腺末端终蕾的加速生成)。然而，本发明的益处并不仅限于分离的子宫/乳房组织功能，其同样可用于有关孕酮受体调节的其他靶组织的结合。

用于本发明这方面的如上所定义的通式(I)的优选为化合物((+)-1)的化合物实际上显示出分离的活性(子宫对乳腺)在下文例如实施例3中得以证实，其中据证实本发明的化合物，特别是化合物((+)-1)，相对于维持妊娠和就乳腺末端终蕾的增殖而论的在乳房组织显著降低的孕激素活性来说，在子宫显示出体内强促孕活性。实施例中还包括生物测试的详细描述，该生物测试用于测定某一化合物是否实际上相对于优选为乳房组织的次选组织选择性地调节优选为子宫组织的首选组织的PR介导的作用。

然而，可以这样笼统地说，为测定某一化合物是否实际上相对于另一靶组织选择性地调节确定的靶组织的PR介导的作用，优选相对于由已知的标准孕激素配体如标准孕激素R5020(普美孕酮)所产生的作用测定所述化合物引发的作用的种类(即是否该化合物抑制、不影响、增强或维持所述靶组织中的PR介导的作用)以及所引发作用的强度。然后优选在考虑到预期的医疗适应症或预期的应用(例如节育或HRT等)的情况下，将所测化合物在第一和第二靶组织中所产生的效果加以比较和评价。在一方面体内实验和另一方面体外实验或者联合体内/体外应验的基础上，对组织特定性孕激素受体配体的筛选实验详叙于WO02/054064，其所公开的内容并入本文作为参考。例如，测定某一化合物是否相对于乳房选择性地诱发子宫或卵巢的PR介导的作用的试验为对啮齿动物乳房上皮细胞增殖/分化的生物测定、啮齿动物妊娠维持试验或子宫内膜增殖/分化试验、以及啮齿动物的排卵抑制试验或排卵过度试验。然而，如前所述，本发明并不仅限于子宫/乳房选择性孕激素，而是同样适用于涉及PR介导的作用的其他组织或器官。在并非如上所述的优选组织的所需的靶组织中选择并进行如上所述的适宜的体内试验，以及相对于适宜的标准孕激素测定某种所测孕激素所诱发的作用无疑在熟悉本领域人员的知识范围内。

由于上文所述的通式(I)的孕激素，尤其是化合物((+)-1)对不同孕酮靶器官特别是乳房和生殖道中PR介导的作用具有显著的分离活性功能，由本发明化合物(及任选的其他雌激素成分)制备的药剂适用于治疗某些妇科病症以及用于HRT。本发明化合物作为避孕药的应用并不总是医疗适应症，而是属于本发明的第六个方面，为此将在下文加以讨论。应知道妇科病症包括并不限于例如子宫内膜异位、肌瘤、痛经、经前期综合症(PMS，其为许多症状的集合名词，如下腹疼痛、头痛、肿胀、抑郁、易怒等，在月经之前六到八天许多妇女都体验过这些症状)、功能失调性子宫出血症(由于激素缺乏或不平衡导致)。本发明的化合物也可控制月经周期不规则。HRT主要用于减轻更年期症状如更年期综合症(例如潮热，盗汗)、骨质疏松症、粘膜干燥以及心理症状(例如抑郁)。甚至有有力证据表明，HRT预防心血管疾病、阿尔兹海默氏病、结肠癌或其他疾病的发展。

至于设想的以及优选的应用方式、设想的以及优选的剂量、设想的以及优选的其他药剂成分和任选的其他雌激素成分可参考本发明的第二方面。彼处所有有关合适的、优选的、更优选的以及最优选的实施方案的叙述都同样适用于本发明的第五方面，即包括被本发明的第一、二、三和第四方面从通式(I)的范围内排除的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的通式(I)化合物在制备相对于次选组织调节首选组织PR介导的作用的药剂中的应用。本发明该方面(以及本发明的其他方面)的优选实施方案也包含于本发明各个方面相应的从属权利要求中。

鉴于本发明第五方面涉及通式(I)所表示的化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物的单纯医疗目的的应用，本发明第六方面涉及通式(I)化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物作为避孕药的应用。

其中R₁和R₂分别独立是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

尽管一般的节育以及特别是避孕可在特定环境下由于单纯的医疗原因(并因此使这方面与上述本发明的第五方面有关)应用，避孕(即预防怀孕)通常被认为并非意欲预防或治疗特定疾病。不过，或者单独使用孕激素(如不含雌激素的口服避孕药，例如POP)还是与雌激素联合使用(如COC)的避孕都具有除抑制妊娠之外的有益(医疗上的)作用。已知避孕药能够治疗某些病症，如月经周期中的不定期出血或者具有上文本发明第五部分所列举症状的经前期综合症。通常避孕药还对皮肤的外观有积极的影响。此外，服用避孕药的妇女更少患有盆腔炎(PID)，并可以减少患卵巢、子宫内膜和结肠直肠癌症的危险。

如上文所提到的，本发明的新型孕激素尤其是化合物((+)-1)适用于不含雌激素的口服避孕药，例如仅含孕激素的“微型药丸”(POP)。这些不含雌激素的口服避孕药对那些因为某些雌激素作用而不耐联合使用雌激素—孕激素但仍想要享受片剂形式激素避孕药的好处的妇女来说是一种合适的选择。此外，不含雌激素的口服避孕药对那些正在哺乳的妇女来说也是一种不错的选择，由于在哺乳期由于雌激素抑制乳汁的生成，因此服用复合雌激素—孕激素避孕药是不妥的。

本发明的新型孕激素尤其是化合物((+)-1)可不仅用于完全不含任何雌激素成分的口服避孕药，还可用于基本不含雌激素的口服避孕药。“基本不含雌激素”应理解为是指雌激素的量比在雌激素—孕激素复合型口服避孕药中通常所含有的量低。

然而，除了上述仅含孕激素(即，不含雌激素的口服避孕药)或结合雌激素的避孕药的优点之外，包括上述本发明孕激素尤其是化合物((+)-1)的避孕药实际上也避免了已知避孕药潜在的缺点，本发明的孕激素仅激活特定靶组织或器官(尤其是子宫)的孕激素受体，而对任何其他的预期之外的组织或器官(尤其是乳腺)仅有很小程度的(或完全没有)作用，从而使得这些治疗具有良好的耐受度并且出现严重的副作用以至引发潜在的健康问题的危险更小。此外，由于它们具有定制地调节PR介导的病症和作用的潜力，本发明的孕激素尤其是化合物((+)-1)由于具有靶组织特异性因此可以较低剂量给药，该剂量比已知孕激素用于避孕药(以及本发明第五方面所讨论的其他适应症)的剂量要小得多。孕激素作为避孕药的其他方面的应用可以从下书中得到，“Kontrazeption mit Hormonen”(“含激素的避孕药”)，H.-D.Taubert和H.kuhl、Georg Thieme Verlag Stuttgart-纽约，1995年。

关于本发明第六方面的优选实施方案，一方面可参考权利要求，另一方面可参考本发明第二部分所给出的解释和叙述，即包含通式(I)尤其是化合物((+)-1)孕激素的药物组合物。其所述给药方式、剂量、成分的结合(尤其是有关任选的其他雌激素成分)，以及任何其他优选的实施方案同样全部适用于本发明的第六方面，即通式(I)所示的化合物用于避孕药的应用。

本发明的第七方面涉及相对于次选组织或器官选择性地调节首选组织或器官的孕酮受体介导的作用的方法。

该方法包括以下步骤，即向需要选择性地调节孕酮受体介导的作用的个体给药有效量的通式(I)化合物或其药物学上可接受的衍生物或类似物或者是包含通式(I)的该化合物的药物组合物。

其中R₁和R₂分别独立地是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

但是包括化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮，而此化合物被本发明的第一、二、三、四和第六方面从通式(I)的范围内排除。

关于本发明的第七方面，相对于次选组织对首选组织选择性地调节孕酮介导的作用例如包括——如上文所述的本发明的其他方面——相对于次选的优选为乳房组织的靶组织或优选为乳腺的靶器官的不良的PR介导的作用(如增殖/分化)，在首选的优选为子宫组织的靶组织或优选为子宫的靶器官选择性地增强期望出现的和/或保护作用。然而，应当理解为本发明并非限于本发明孕激素对子宫/乳房的分离活性，而是本发明还包括对受孕激素受体介导影响的任何其他首选和次选靶组织的分离的活性。关于“相对于次选组织调节首选组织中的PR介导的作用”的优选实施方案以及详细解释，参考本发明其他方面所述，特别是第五方面。

如在本发明的第五方面以及本发明的第六方面所解释，需要选择性地调节孕酮受体介导的作用的优选为哺乳动物、最优选为人的个体可以是例如需要(由于医疗原因)或希望避免怀孕的女性个体。因此，如上文已经叙述的，本发明第七方面的方法可用于避孕药。在这方面，上文所述所有有关本发明孕激素作为避孕药的应用的内容同样适用于本发明的第七方面的应用，包括关于给药剂量、剂量方案、给药方式以及任选雌激素与本发明孕激素的结合的优选实施方案。

除了避孕之外，相对次选组织对首选组织PR介导的作用的调节有益和必需的医疗适应症为例如激素替代疗法或妇科病症的治疗。所有这些适应症已经在例如本发明的第五方面作了详细的叙述，且同样适用于本发明的第七方面。

本发明的第八方面和第九方面涉及通式(I)所示化合物或其药物学上可接受的衍生物或类似物在制备相对于PR-B转录选择性地激活PR-A转录和相对于PR-B介导的作用选择性地提高PR-A介导的作用的药剂中的应用，

其中R₁和R₂分别是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，

Ar是

或

但是包括了化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮，而此化合物被本发明的第一、二、三、四和第六方面从通式(I)的范围内排除。

本发明的第八方面和第九方面还涉及相对于PR-B转录选择性地激活PR-A转录的方法以及相对于PR-B介导的作用选择性地提高PR-A介导的作用的方法。这些方法包括向需要选择性地调节PR-A转录和PR-A介导的作用的个体分别给药通式(I)的化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物的步骤：

其中R₁和R₂分别是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，

Ar是

或

如下文实施例5所证明，本发明的孕激素，尤其是化合物(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，((+)-1)，已被发现可以选择性地激活PR-A的转录，并从而选择性的诱导PR-A介导的作用，而优选地不影响PR-B的转录和PR-B介导的作用。

如上文“发明背景”部分所述，在B.Mulac-Jericevic以及O.Conneely研究的基础上，PR同种型B看上去是乳腺增殖和分化的最主要原因，而孕激素对子宫上皮细胞和对排卵的抗增殖作用很可能是由PR同种型A所介导的(B.Mulac-Jericevic，Science 2000，289，1751-1754；Orla Conneely，Endocrine Society Meeting，Toronto，June 2000)。因此，如上文所述，孕激素对孕酮受体同种型A显示选择性，即激活PR-A转录且同时优选地不影响PR-B转录的孕激素，也可能选择性地增强在子宫内PR介导的作用，而同时优选地不影响乳腺内PR介导的作用。证明该PR同种型特异性和PR配体的组织选择性之间的联系是在先申请WO 02/054064的主题。本发明通过实施例3和实施例5再次证实了这一原则，其中本发明优选的化合物，化合物((+)-1)被证明是一种选择性的和高效的PR-A激动剂，因此，其在体外对PR同种型A相对于B以及在体内对不同的靶组织显示出强烈的分离活性功能，包括在子宫组织诱发期望的和有益的效果而在乳房组织不诱发如乳腺增殖/分化的不良效果。

然而，本发明的应用并不限于子宫对乳房系统，而是可延伸到其他的孕酮靶器官系统。基本上PR同种型介导的作用涉及其中的任何病症都可以通过本发明孕激素的应用、或通过本发明第八方面的药剂的制备、或通过本发明第九方面的包括给药所述孕激素的方法加以治疗。应当明白，有关本发明的其他方面所述的本发明的优选孕激素、给药方式、剂量和剂量方案、与其他成分如雌激素的结合等等，都同样适用于这里所述的第八方面和第九方面。

须注意，为了本发明的目的，本发明孕激素相对于PR同种型B对PR同种型A的选择性(或者是特异性，该术语在本文用作选择性的同义词)被定义为此孕激素在PR-A和PR-B转染的细胞中诱发的转录功效的差异。优选地，该差异达到或者超过10％，更优选为达到或超过15％，最优选为达到或超过20％。“转录功效”被定义为确定浓度的被测孕激素相对于标准的孕激素(例如，R5020)在PR-A或者PR-B转染的细胞中所达到的响应。

除了“转录功效”以外，另一个潜在的评价被测孕激素对PR-A或PR-B的选择性的参数是“能力”，即EC₅₀值(或与其技术等效的ED₅₀)，其通过在体外在PR-A或PR-B转染的细胞中加以测定。优选地，特定的被测孕激素对PR-A对PR-B转染的细胞所达到的能力的差异应在因子为10的范围之内或因子大于10。关于转录功效和能力的测定的更详细的叙述见下文的实施例5，以及在先申请WO 02/054064，其因此目的并入本文作为参考。如下文实施例5所证明，本发明的化合物尤其是化合物((+)-1)是具有PR-A选择性的强激动剂。

除了上文所描述的本发明的孕激素的体内的应用之外，由于其对PR同种型A的特异性，这种显著的选择性地激活PR-A转录的能力也可为了诊断或科学研究的目的被开发用于例如涉及两种PR同种型的体外测定。因此，本发明的第八方面和第九方面也提供单纯属于受体水平的体外应用和方法。例如，优选为化合物((+)-1)的本发明化合物可用作评价其他PR配体潜在的PR同种型特异性的标准。因此，本发明化合物可以并入诊断或科学试剂盒，用以确定其他化合物选择性地激活PR同种型转录的能力。本发明的化合物也用来鉴别某些诊断或科学应用所需的PR同种型特异的细胞。

有关下文实施例5中所用具有PR同种型特异性的孕激素的体外测定的细节，参见WO 02/054064，在此并入作为参考。WO 02/054064特别揭示了如何得到由表达PR-A或PR-B的质粒转染的细胞，如何检测PR-A和PR-B转录以及如何鉴定那些显示PR同种型特异性的PR配体。此外，如上文提到的，WO 02/054064也揭示了组织选择性PR配体的筛选实验。

关于制备通式(I)所示的化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物的方法

其中R₁和R₂分别是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，

Ar是

或

具有或不具有该化合物不是5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的限制条件，该方法类似于WO98/54159中所揭示的用于得到其所述的更大类的化合物的方法。然而，因为本发明的化合物相对于WO 98/54159中所揭示化合物是新颖的，所以下文叙述了得到本发明孕激素的几条不同的合成路线。化合物(1)、(2)、(3)和(4)的制备将在实施例1a)、1b)、1c)和1d)中分别详加描述。

得到如上文所述的通式(I)所示的化合物的首选方法始于通式(II)所示的化合物

其中取代基R₁、R₂和Ar的定义与上文所述的通式(I)的解释相同。通式(II)化合物在催化剂的存在下与通式CF₃-SiMe₃或CF₃-Si(R^x)₃所示的化合物反应，其中R^x是C₁到C₄的烷基，或与甲基金属化合物例如格氏试剂或烷基锂反应，生成通式(I)的化合物。氟盐或碱性碳酸盐等碱性盐可以作为催化剂应用(参考J.Am.Chem.Soc.111，1989，393)。

此外，本发明通式(I)所示的化合物也可由通式(III)所示的化合物合成：

其中R₁和R₂的定义与上文所述的通式(I)相同，LG是离去基团，如-Cl、-Br或甲苯磺酸盐取代基。通式(III)的化合物与化合物Ar-NH-R’反应，其中Ar与上文所述的通式(I)的定义相同，R’是氢原子或C₁到C₅的酰基。在特定的环境下，取代基R’须在随后去掉。通式(III)所示的化合物也作为中间产物生成，例如，它可作为从相应的碳酸直接生成的酰基氯。

本发明通式(I)所示化合物的苯环上的取代型包含取代基R₁、R₂和-CF₃可以按照本领域公知的芳香环选择性取代的方法得到。

通过以下的实施例对本发明进行更进一步的描述，但是，这些实施例并没有限制本发明的范围。

实施例

实施例1：通式(I)孕激素的制备

a) 制备(±)-、(+)-和(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2- 三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-1、(+)-1和(-)-1)：1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-腈：

在-70℃惰性气体气氛下，在10分钟内将8.15ml N，N′-二甲基咪唑烷二酮(N，N’-dimethylimidazolidinone)加入78ml 2M的二异丙基胺锂溶液(四氢呋喃/庚烷/苯乙烷)中。15分钟后，加入10.6g(2-氟-5-三氟甲基苯基)-乙腈。10分钟后，在-20℃，加入20.3ml 1，2-二氯乙烷(注意：也可将(2-氟-5-三氟甲基苯基)-乙腈与1，2-二溴乙烷和Cs₂CO₃反应)并将混合液在-20℃搅拌2个小时，在环境温度下搅拌16个小时。然后，用冰使混合液冷却并加入氯化铵饱和溶液和乙酸乙酯。然后将乙酸乙酯相用氯化铵饱和溶液洗涤两次，再用水洗涤两次，用硫酸钠干燥，通过Kugelrohr装置浓缩蒸馏。

产量：8.7g 1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-腈，b.p.140℃/0.04hPa1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-醛(carbaldehyde)：

将8.5g 1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-腈溶解在60ml甲苯中。在-70℃，在45分钟内加入56ml 1M溶解于甲苯的氢化二异丁基铝。4小时后，在-78℃，逐滴加入120ml的乙酸乙酯。混合物放置以达到环境温度，并用2N的硫酸洗涤三次，用水洗涤一次。乙酸乙酯相用硫酸钠干燥，用硅胶(己烷/乙酸乙酯：5+1)色谱分离。

产量：4.5g 1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-醛

3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]2-氧代-丙酸：

在20分钟内冰冷却下向5.0g 2-二乙基膦酰基-2-乙氧基乙酸乙酯在40ml四氢呋喃中的溶液中加入10ml 2M的二异丙基胺锂溶液在四氢呋喃/庚烷/甲苯中的溶液。混合物在0℃搅拌30分钟。在30分钟内，在0℃下加入30ml 4g 1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的四氢呋喃溶液。在环境温度下放置20小时后，向混合物中加入2N硫酸，用乙酸乙酯萃取，然后用硫酸钠干燥并浓缩。然后将粗产物溶解在50ml的乙醇中，用33ml2M的氢氧化钠溶液使之皂化。

产量：5.2g此酸，在充分搅拌的同时，与180ml 2N硫酸加热回流数小时。用乙酸乙酯萃取后用水清洗，得到4.6g黄色油状3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸。

5-{3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮：

在-10℃，向15ml的2.9g 3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸的二甲基乙酰胺溶液中加入0.84ml亚硫酰氯。混合液在-10℃搅拌30分钟，在0℃搅拌1小时，然后加到1.95g 5-氨基2苯并呋喃酮中(反之亦然，或将5-氨基2苯并呋喃酮加入混合液中)。在环境温度下放置16小时，加入2M的盐酸和乙酸乙酯，把有机相用水洗至中性，用硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶(己烷/乙酸乙酯：1+1)色谱分离，在二异丙基醚中重结晶，得到2.4g 5-{3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮(m.p.168℃)。

(±)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-1)：

将2.7g 5-{3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮溶解在15ml二甲基甲酰胺中；在冰冷却下，加入4.25ml三氟甲基-三甲基硅烷和972g碳酸铯。在环境温度下搅拌18小时，然后在冰冷却的条件下，加入6.5ml 1M的氟化四丁铵的四氢呋喃溶液，混合液搅拌1小时。添加全部的水后，产物用乙酸乙酯萃取。有机相用硫酸钠干燥并浓缩。用硅胶(己烷/乙酸乙酯：3+2)色谱分离，得到馏分1为760mg的初始原料，以及馏分2为880mg的(±)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-1)(m.p.158℃)。

化合物((±)-1)的对映异构体的分离：

化合物((±)-1)的对映异构体的混合物可以用手性载体(CHIRALPAKAD^，从DAICEL得到)色谱分离进行分离，用己烷/乙醇：97+3作为流动相，得到2.4g的外消旋体：

馏分1为(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-1)：867mg；m.p.162-163℃，α_D＝+114.5°(在氯仿中c＝0.5)；

馏分2为(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-1)：860mg；m.p.163-164℃，α_D＝-113.7°(在氯仿中c＝0.5)。

b) 制备(±)-、(-)-和(+)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-、(+)-、(-)-2)：

1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-腈：

从(2-氟-3-三氟甲基苯基)-乙腈的制备与1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-腈的制备类似(见实施例1a))。B.p.120℃/0.04hPa。

1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-醛：

从1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-腈的制备与1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的制备类似(见实施例1a))。

3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸：

从1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的制备与3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸的制备类似(见实施例1a))。M.p.177℃(降解)。

6-{3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮：

从3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸的制备与6-{3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮的制备类似(见实施例1c))。M.p.117-118℃。

(±)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-2)：

与实施例1a)中化合物(±)-1)类似，(±)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-2)可以由6-{3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮得到。M.p.200-201℃。

化合物((±)-2)的对映异构体的分离：

如实施例1a)所述将(+)和(-)对映异构体进行分离。分离产量：

馏分1为(-)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((-)-2)：m.p.171-173℃，α_D＝-115.2°(在氯仿中c＝0.5)，

馏分2为(+)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((+)-2)：m.p.168-173℃。

c) 制备(±)-、(+)-和(-)-6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2- 甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-、(+)-和(-)-3)：

6-{3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮：

在-10℃将1.8ml亚硫酰氯加入到60ml的6.0g 3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸(如WO 98/54159所述制备)的二甲基乙酰胺溶液中。混合物在-10℃搅拌30分钟，在0℃搅拌1小时，然后与5g 6-氨基-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮混合。在环境温度下放置16小时，混合液分为水相和乙酸乙酯相。有机相用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。用己烷和乙酸乙酯(10-20％)作为液相的硅胶色谱分离，得到6.78g 6-{3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮(m.p.136-139℃)。

(±)-6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-3)：

将215mg 6-{3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮溶解在7.5干燥的四氢呋喃中。在冰冷却的条件下，加入0.32ml 3M甲基溴化镁的醚溶液。30分钟后，在0℃，将此反应液倒入饱和氯化铵溶液中，用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水清洗，用硫酸钠干燥并蒸发。用己烷和乙酸乙酯(0-20％)作为液相的硅胶色谱分离，馏分1为80mg的初始原料，馏分2为95mg的6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((±)-3，m.p.75-76℃)。

化合物((±)-3)的对映异构体的分离：

如实施例1a)所述的((±)-1)，将(+)和(-)对映异构体进行分离。分离产量：

馏分1为(-)-6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((-)-3)：m.p.129-130℃，α_D＝-54.8°(在氯仿中c＝0.5)，

馏分2为(+)-6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮((+)-3)：m.p.132-135℃，α_D＝+55.2°(在氯仿中c＝0.5)。

d) 制备(±)-、(+)-和(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-、(+)-和(-)-4)：

1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-腈：

从(2-氟-3-三氟甲基苯基)-乙腈的制备与1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-腈的制备相类似(见实施例1a))。B.p.120℃/0.04hPa。

1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-醛：

从1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的制备与1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的制备相类似(见实施例1a))。

3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸：

从1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基-醛的制备与3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸的制备相类似(见实施例1a))。M.p.177℃(降解)。

5-{3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮：

从3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酸和5-氨基2苯并呋喃酮的制备与5-{3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮的制备相类似(见实施例1a))。M.p.157-158℃。

(±)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-4)：

与实施例1a)中化合物((±)-1)的制备类似，(±)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((±)-4)可以由5-{3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-氧代-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮得到。M.p.212-214℃。

化合物((±)-4)的对映异构体的分离：

馏分1为(-)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((-)-4)：m.p.165-166℃，α_D＝-115.5°(在氯仿中c＝0.5)，

馏分2为(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-4)：m.p.164-166℃。

实施例2(体内孕激素活性测定——排卵抑制)：

在治疗开始之前，监控雌性大鼠(体重：190到210g)的两个月经周期。只有具有规律的4天周期的动物才能用于随后的实验。从动情后期开始向动物给药被测化合物4天(第1到第4天)，其后，控制该周期。

对于皮下应用，被测化合物溶解在苯甲酸苄酯/蓖麻油(1+9 v/v)中，每日剂量为以1ml/kg体重的体积给药。

口服应用中，被测化合物混悬于载体液体(85mg Myrj^R溶解于100ml0.9％w/v的氯化钠溶液)中，每日剂量为以2ml/kg体重的体积给药。

评价：

在应用被测化合物的第4天，用乙醚麻醉那些处于发情期或发情后期的动物，切除其一侧的卵巢。准备好管道，通过显微镜观察其中的卵子。第5天，用二氧化碳处死所有动物(完整的以及切除部分卵巢的)，用同样的方法保存并分析管道。然后，测定并用百分数的形式表示有多少动物的排卵作用被抑制。

下文中的表1-a和表1-b清楚的说明化合物((+)-1)通过抑制LH分泌，有效抑制了成年雌性大鼠的排卵作用。表1-a证明((+)-1)的EC₅₀是45μg/kg。因此，此化合物被认为具有很强的促孕活性。与标准孕激素R5020(普美孕酮)的比较显示化合物((+)-1)在体内是目前所确定的效力最强的孕激素之一。其因子为1至2(或更多)，效力相当于或超过了R5020(参考表1-b)。

表1-a

((+)-1)的剂量[μg/kg]	抑制率(％)	EC₅₀[μg/kg]
((+)-1)的剂量[μg/kg]	抑制率(％)	EC₅₀[μg/kg]	01030100	0014100	45

表1-b

	R5020(标准品)	((+)-1)	((+)-1)(与R5020相比的因子)
	R5020(标准品)	((+)-1)	((+)-1)(与R5020相比的因子)	排卵抑制(大鼠)[EC₅₀]	0.06mg/kg	0.04mg/kg	1-2

实施例3：(乳房/子宫选择性的体内测定)

a) 对大鼠乳房上皮细胞增殖/分化作用的生物鉴定实验

这个实验的目的是评价孕激素对乳腺发育的作用，特别是对雌激素引发的大鼠的乳房末端终蕾的生成。孕激素与其他激素(促乳激素、雌激素、糖皮质激素、生长激素等)一起诱导乳腺上皮细胞的增殖和分化。尤其是，它们涉及小泡和末端终蕾的形态形成，乳汁在这些部位生成并分泌到管腔中。

为了测定本发明中的被测孕激素，尤其是化合物((+)-1)对乳腺分化和增殖的作用，将21天龄的未成熟雌性大鼠(Wistar Han，SPF)在治疗开始之前的4到6天切除卵巢。连续6天给予动物标准雌激素(雌酮(E1)，70μg/kg)和被测孕激素((+)-1)(用量：0.1ml/50g体重；赋形剂：苯甲酸苄酯/蓖麻油(1+4 v/v)；皮下给药)。对照组给予例如赋形剂、不含孕激素的雌酮、雌二醇与已知的孕激素例如R5020(普美孕酮)。在治疗6天后，用二氧化碳处死动物。

为了整体染色(whole mount staining)，刮去动物左腹部腹股沟处乳房区域的毛，并连同皮肤一起切下。为了组织学/免疫组织化学分析，将动物右腹部腹股沟处乳腺连同与其连接的结缔组织一起切下，然后固定在3.7％的福尔马林PBS(磷酸盐缓冲液；不含Ca²⁺/Mg²⁺)中。

整体染色

依照Tellyesniczky方法(见下)，将标本固定在乙醇—福尔马林溶液中过夜。然后将乳腺组织和连接在其上的皮下组织从真皮剥离，然后再将标本固定整夜。之后步骤如下：70％乙醇：1.5小时；丙酮：3×1.5小时；丙酮：整夜；异丙醇：1.5小时；96％乙醇：2小时；苏木精-铁：3小时；VE水：先冲洗标准然后2×0.5小时；70％乙醇：整夜；80％乙醇：1.5小时；96％乙醇：1.5小时；异丙醇：1.5小时。然后将标本转移到陪氏培养皿中，加入甲苯中放置约1小时，即直到组织不再上浮。然后用雪松木油(Merck，no.1.06965)处理组织。上述温育时间为最少时间且可延长。尤其是，在固定后用70％乙醇温育的时间可延长至至少2.5周。整体染色所需溶液的制备：

a)Tellyesniczky乙醇-福尔马林：甲醛37％：81.8ml，乙醇70％：1636ml，冰醋酸(在使用之前不久加入)：81.8ml(共：1800ml)。

b)苏木精母液：苏木精(Merck，no.1.15938)：10g，乙醇96％：100ml。此溶液在使用前必须在37℃放置48小时。在暗处放置可保存几乎无限长时间。

c)所用苏木精-铁溶液：苏木精母液(经过滤后)：15.2ml，乙醇96％：1374ml，FeCl₃×6H₂O(s.4)：91.1ml，1mol/l HCl：220ml(共：1700ml)；用2mol/l NaOH调节pH至1.25。

d)FeCl₃×6H₂O溶液：FeCl₃×6H₂O(Merck，no.1.03943)：1.07g，VE水：90.2ml，HCl：37％：0.92ml(共：91.1ml)。

用40-倍的放大率，计数在尾部方向乳头附近的末端终蕾数目。被测区域应为大约1.8mm²。对于充分分化的标本，该面积可以减少，其应至少具有250个可测得的蕾。计数完毕后，计算每1mm²终蕾的数目。

评价：

末端和小泡终蕾的数目用每mm²+/-标准差表示(SD)。被测孕激素的孕激素作用可以测定为末端和小泡终蕾的临界值(见图3)(即在首次测得显著孕激素作用的浓度)，或者测定为达到与0.3mg/kg对照化合物普美孕酮(R5020)(见图1)相同的分化作用所需的等效剂量。对于图1显示的数据，以ANOVA(Dunn’s方法)检验各被测组之间的差异。图3中，与雌酮对照组相比使用t-检验检验各组之间的差异。图1和图3中的星号表示其有显著的差异。

MIB-5免疫组织化学法(依照C.Gerlach等，Lab.Invest.1997，77(6)，697-698，有修改)：

为了更详细的评价乳房上皮细胞的增殖，用增殖标记试剂MIB-5对细胞进行染色如下(参考图2)：乳腺固定于4％甲醛/PBS中24小时，并嵌入石蜡中。在载玻片上展开4μm的切片，脱去石蜡，在pH6.0的柠檬酸盐缓冲液中用微波处理10分钟，用PBS清洗。载玻片用3％H₂O/甲醇封闭15分钟，用Blockingkit(Vektor，no.SP-2001)封闭10分钟，以及用在PBS中1∶2稀释的大鼠血清(Sigma，no.S-7648)封闭30分钟以减少非特异性染色并在PBS中清洗。用单克隆抗体MIB-5(Dianova，no.Dia-5055)温育载玻片1小时，此抗体对大鼠Ki-67抗原(用PBS/0.2％BSA稀释至1∶200)具有特异性。然后，用PBS/0.2％吐温20清洗载玻片两次，在用PBS/0.2％吐温20以1∶200稀释的生物素化大鼠抗-小鼠第二抗体(Dianova，no.425-066-100)中温育1小时，并再次用PBS/0.2％吐温20清洗两次，随后在抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶(Vecstain Elite ABCKit no.PK-6100)络合物中温育1小时。用二氨基联苯胺(Zymed SubstrateKit)进行染色。所有的步骤均在室温下进行。

评价：

为了描述被测化合物的特性，测定被MIB-5染色的乳房上皮细胞的百分数。图2显示MIB-5阳性的上皮细胞数目的百分比+/-标准差(SD)。用ANOVA(Bonferroni t-检验)检验各组之间的差异。图2中的星号表示显著性差异(p＜0.05)。实验结果在下文的c)部分作进一步的讨论。

b) 大鼠维持妊娠实验

对于大鼠，去势导致妊娠的终止。孕激素(与雌激素结合)能够维持去势动物的妊娠。然而，去势大鼠维持妊娠的程度仅在确定的剂量范围内最佳。因此，一般来说高剂量或低剂量都可以导致作用减弱。用一定剂量的雌酮(E₁)同时进行治疗可以增强孕激素的妊娠维持作用。

怀孕的大鼠(Wistar Han，SPF)重190至220g(每剂量5至8只动物)，在其怀孕第八天第一次实质给药2小时后切除其卵巢。从第八天至第十四天，大鼠每日联合给药被测孕激素以及标准剂量的E₁。一天后，用二氧化碳处死动物。对于每只动物，依照胎儿的心跳测定动物胎儿存活和死亡的数目。在子宫为空的情况下，利用10％硫化铵溶液染色的方法测定着床位置的数目。

被测孕激素和雌酮的剂型和应用：

S.c.(皮下)应用：被测孕激素溶解于苯甲酸苄酯/蓖麻油(1+4 v/v)中，每日剂量为以1ml/kg体重的体积给药。

P.o.(口服)应用：被测孕激素悬浮于载体液体(85mg Myrj^R溶解于100ml 0.9％w/v氯化钠溶液中)，每日剂量为以2ml/kg体重的体积给药。

I.p.(腹膜内)应用：被测孕激素溶解于丙二醇并置入微型渗透泵(2001型，1.0μl/h，7天)，将其置于大鼠的腹腔。

雌酮的标准剂量为皮下0.005mg/kg体重，且溶解于苯甲酸苄酯/蓖麻油(1.4 v/v)中。

评价：

测定每只动物妊娠维持率[％]、每剂量的妊娠维持率(单一值的中值)和EC₅₀(50％动物的妊娠得以维持的剂量；100％对应于没有切除卵巢的对照动物)。实验结果在下文的c)部分作进一步的讨论。

c) (+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-1)所得的结果以及对结果的讨论

下文中的实验结果(表2)得自对本发明的最优选化合物相对于标准孕激素R5020(普美孕酮)的如上文a)所述的大鼠乳房上皮细胞(整体染色法)的增殖/分化作用生物鉴定实验以及如上文b)所述的妊娠维持实验，该最优选化合物为(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-1)。

表2显示在妊娠维持实验中，要达到EC₅₀值每kg体重(大鼠)所需的被测孕激素(R5020或((+)-1))的剂量，以及在乳房上皮细胞(大鼠；整体染色法)增殖/分化作用的生物鉴定中所需的剂量。中间一栏“等效剂量”指要达到与0.3mg/kg R5020同样的作用所需的((+)-1)的剂量。最右边一列表示被测孕激素((+)-1)区别于标准孕激素R5020在两个实验中所显示活性的因子。引用源于分别进行的三个不同实验中不同的成对的值用于乳房上皮细胞的分化/增殖实验。从单一值的中值得到ca.1的因子(见最左边一列)。

表2：

	R5020(标准品)	((+)-1)	((+)-1)(与R5020相比的因子)
	R5020(标准品)	((+)-1)	((+)-1)(与R5020相比的因子)	妊娠维持(大鼠)[EC₅₀]	0.1mg/kg/d	0.012mg/kg/d	8
乳腺，整体染色(大鼠)[等效剂量]	0.3mg/kg/d0.3mg/kg/d0.1mg/kg/d	0.6mg/kg/d0.9mg/kg/d0.03mg/kg/d	ca.1	妊娠维持(大鼠)[EC₅₀]	0.1mg/kg/d	0.012mg/kg/d	8
乳腺，整体染色(大鼠)[等效剂量]	0.3mg/kg/d0.3mg/kg/d0.1mg/kg/d	0.6mg/kg/d0.9mg/kg/d0.03mg/kg/d	ca.1	乳腺，整体染色(大鼠)[临界剂量]		0.1mg/kg/d

本发明优选的孕激素化合物((+)-1)引起末端和小泡终蕾的剂量依赖性增加，与0.3mg/kg/d普美孕酮等效的剂量是0.6mg/kg/d(图1)。

此外，((+)-1)诱导末端和小泡终蕾的临界剂量是100μg/kg/d(见图3)。令人感兴趣的是，随((+)-1)浓度的增加MIB-5阳性细胞呈剂量依赖性减少(图2)。此外，图2证明0.3mg/kg/d普美孕酮显示约42％的MIB-5阳性细胞，而1mg/kg/d((+)-1)显示约12％的MIB-5阳性细胞。

总而言之，这些结果显示((+)-1)对乳腺具有与参比化合物普美孕酮大致相同的活性。最值得注意的是，在对妊娠完全维持的药物剂量(见表2)下未发现对末端和小泡终蕾的形成的任何影响(图3，表2)。因此，((+)-1)对子宫相对乳腺具有组织选择性活性。这种有利于向子宫活性的分离至少是6倍。此外，((+)-1)的剂量和对乳腺增殖的诱导呈反比关系。

上述的结果清楚的表示，本发明的优选化合物(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮((+)-1)与标准孕激素R5020相比，其对妊娠维持的效力高，而对乳房上皮细胞的增殖/分化作用却非常低。与R5020相比，化合物((+)-1)维持妊娠的效力为R5020的8倍，但是对乳腺的作用却与R5020大致相同。这些实验结果有力的证明了，本发明的化合物((+)-1)是一种PR介导的作用的选择性调节剂，相对于本发明次选靶组织乳房的PR介导的作用(乳腺的增殖/分化)，其增强了本发明首选靶组织子宫的PR介导的作用(妊娠维持)。特别地，如上文所述，当服用维持妊娠有效量的化合物((+)-1)时，未发现其对乳腺的影响(见表2和图3)。因此，如上文“具体实施方式”部分所述，该化合物尤其适用于避孕、HRT以及妇科病症的治疗。本发明优选的孕激素化合物((+)-1)特别适用于不含雌激素的口服避孕药。

如上所述化合物((+)-1)所得的对子宫/乳房分离活性功能的实验结果不仅证明该化合物作为本发明的组织特异性孕激素非常适用于“具体实施方式”部分所述的适应症和应用，还证明PR配体的PR同种型特异性与PR配体的组织特异性有关这一概念的生存力，参见WO 02/054064。此外，结果显示组织特异性孕激素，特别是本发明的子宫/乳房选择性孕激素可被识别孕激素识别为具有PR同种型，即PR-A对PR-B，选择性。上述结果明确的证明，如下文实施例5所证明，与PR同种型B相比对PR同种型A有选择性的孕激素在适合维持妊娠的剂量时，相对于对乳房的PR介导的作用(参见上文表2)选择性地增强子宫的PR介导的作用。然而，应明白，对PR-A与PR-B的选择性(如实施例5证明，已测定本发明孕激素对PR-A与PR-B的选择性)并非仅仅导致子宫/乳房选择性(如本发明孕激素在上文所确证)，而是可包括任何其他的孕酮靶组织选择性以及基于孕酮同种型介导的作用的任何其他的PR介导的作用的选择性调节。

实施例4：口服妊娠前活性的体内测定—兔子宫内膜的变性

本实验使用未成年的雌性兔(新泽西大白兔，30至35天龄；来自Schriever，德国)。为了引起子宫内膜的增殖，在实验的第一至第四天，所有的兔子用5.0g/kg/天的17-α雌二醇(皮下，0.5ml/kg/day)引发。从第七至第十天，以0.001、0.01和0.1mg/kg/day的剂量口服给药被测化合物(口服，0.5ml/kg/天)。一组动物作为阴性对照组，在雌二醇引发后仅给予赋形剂。另一组作为阳性对照组，在雌二醇引发后仅给予孕酮以引发子宫内膜的分化。为了研究本发明最优选的化合物((+)-1)的孕激素活性，一治疗组在雌二醇引发后仅给予化合物((+)-1)。

评价：

第十一天尸检。利用光学显微镜测定孕激素活性的参数McPhail指数(即，分化程度)(分数：1到4；1＝无腺分化，4＝最大程度的分化)。

如下文表3所证明，本发明优选的化合物，化合物((+)-1)，对兔的子宫内膜变性实验(Clauberg实验)很有效。经测定，((+)-1)口服应用和皮下给药具有同样的效力。因此，当口服给药时，必须考虑到化合物((+)-1)具有很强的活性。

表3

应用方式	((+)-1)[mg/kg]	McPhail指数	临界值[mg/kg]
应用方式	((+)-1)[mg/kg]	McPhail指数	临界值[mg/kg]	皮下(s.c.)	0.0010.010.1	1.02.73.8	0.001-0.01
口服(p.o.)	0.0010.010.1	1.22.53.0	0.001-0.01	皮下(s.c.)	0.0010.010.1	1.02.73.8	0.001-0.01

实施例五：PR-A/PR-B同种型特异性体外实验

如本发明的第八和第九方面，通式(I)所示的孕激素，包括不属于本发明的第一、二、三、四和第六方面的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮，可用于相对于PR-B的转录选择性地激活PR-A的转录，即本发明的孕激素优选为并不激活PR-B的转录，至少与激活PR-A转录的程度不同。因此，这些孕激素可用于相对于PR-B介导的作用选择性地激活PR-A介导的作用，即这些化合物优选为不影响PR-B介导的作用。下文叙述测定特定的孕激素是否对PR-A或PR-B具有选择性的体外实验。下文还证明本发明通式

(I)所示的孕激素是选择性PR-A激动剂。关于此实验的更详细的叙述，尤其是关于PR-A和PR-B转染的细胞的制备见WO 02/054064，在此并入作为参考。

通过由表达hPR-A(第一细胞)或hPR-B(第二细胞)的质粒稳定转染而来的第一和第二SK-N-MC细胞，以及与激素反应性MTV启动子相联系的LUC报告基因实施本发明筛选PR同种型特异性孕激素的方法。

细胞培育在37℃和含有5％二氧化碳的气氛下的含有Earl’s盐的最低必需培养基(S-MEM，不含L-谷氨酰胺；Gibco BRL，no.21090-022)中，补充10％的胎牛血清(FCS)、青霉素100U/链霉素100μg/ml(Biochrom，no.A2213)，L-谷氨酰胺4mmol/l(Gibco BRL，no.25030-024)、丙酮酸钠1mmol/l(Biochrom，no.L0473)以及1×非必须氨基酸(Biochrom，no.K0293)。

转录实验中，将细胞置入96孔碟(2×10⁴细胞/碟)中，并且在上述培养基中培育，但FCS被3％的经木炭吸滤过(stripped)的FCS代替。48小时后，细胞与预先稀释的被测化合物接触。为了测定激动作用，在高浓度(10^-6至10^-11mol/l)的被测孕激素中培育细胞。作为报告基因诱导阳性对照的细胞用10^-6至10^-11mol/l的R5020(普美孕酮)处理。作为报告基因诱导的阴性对照组的细胞培育在1％的乙醇中。

与被测孕激素温育24小时后，移去培养基，将细胞溶解在20μl的细胞溶解缓冲液(荧光素酶分析系统E 153A；Promega)中并搅拌该板10分钟。在30秒内向每碟中加入30ul荧光素酶试剂(荧光素酶分析系统E 151A+152A；Promega)，在循环模式下，通过Microlite ML 3000微量滴定板光度计(Dynatech)测定细胞溶解产物中的荧光素酶报告基因产物的活性。

评价反应得到有效性[％]，评价EC₅₀值得到效力[nM]。激动活性的

计算如下：

测得数据点的LUC活性[％]计算如下：

其中，CI＝100％刺激作用(R5020，10^-7mol/l)

CO＝0％刺激作用(乙醇，1％)。

因此，有效性[％]按下式计算：

效力[nM]，即EC₅₀，用图表测定。

本发明的不同孕激素所达到的一些有效性结果见下表2。这些结果明确证明本发明孕激素尤其是化合物((+)-1)的PR同种型A选择性。因此，这些孕激素能够相对于PR-B的转录选择性地激活PR-A的转录。同时，这些孕激素能够相对于PR-B介导的作用选择性地增强PR-A介导的作用。因此，尽管现有技术总试图寻找效力更高的孕激素，而本发明则提供适用于选择性地靶向某些期望的组织或器官，优选为相对于乳房组织中PR介导的作用选择性地激活子宫组织PR介导的作用的孕酮受体同种型，特别是孕酮受体A同种型的高度选择性孕激素。

表4：

	PR-A激动有效率[％]	PR-B激动有效率[％]	Δ激动有效率(A-B)
	PR-A激动有效率[％]	PR-B激动有效率[％]	Δ激动有效率(A-B)	(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，((+)-1)	88.7	25	64
(+)-6-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮，((+)-2)	99.2	67.5	32		88.7	25	64
	99.2	67.5	32	(+)-6-{2-羟基-3-[1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-甲基-丙酰氨基}-4-甲基-2，3-苯并恶嗪-1-酮，((+)-3)	94	71	23
(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-3-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮，((+)-4)	100	82	18		94	71	23

实施例六：大鼠抗向子宫活性实验

具有雌激素活性的化合物诱导子宫的生长，导致子宫重量的增长。它们通过增加上皮厚度，还可诱导子宫内膜上皮细胞的外观发生特殊性变化。PR调节剂通过抑制子宫重量增加和上皮细胞增殖对抗雌激素活性。该作用有时称作“机能性抗雌激素”作用。

为测定本发明最优选的孕激素即化合物((+)-1)的抗向子宫活性，将被切除卵巢的大鼠用0.3μg/kg/d雌二醇(E2)及剂量增加的((+)-1)处理3天(见图4)。如图4所示，除了一组(见图4，底部的图，150μg/kg的((+)-1)，用“#”表示)包括9只大鼠外，每一被测组都包括10只大鼠。

评价：

子宫重量、内腔上皮细胞厚度以及阴道涂片中细胞分化和角质化的状态的改变都是雌激素活性的参数。与((+)-1)结合，雌激素—刺激的子宫重量增加和内腔上皮细胞厚度增加的降低都是抗雌激素活性的参数(见图4)。

与赋形剂对照组相比，参比组(雌二醇(E2)处理的)子宫重量和内腔上皮细胞厚度的刺激作用可以用下式计算：

在抗雌激素试验中，与参比化合物(雌二醇)的作用相比较，子宫重量或内腔上皮细胞厚度的抑制作用可如下计算：

统计分析中，利用Schering AG的生物统计部门研发的软件计算95％的置信区间。星号表示显著性差异(p＜0.05)。

讨论：

如图4所示，当与雌二醇结合给药时，((+)-1)在对子宫重量和上皮细胞厚度增加的剂量依赖性抑制方面有很强的机能性抗雌激素作用。5μg/kg/d剂量的((+)-1)显示出次最大作用。15μg/kg/d剂量产生最大作用。

总之，((+)-1)是一种具有强机能性抗雌激素活性的PR调节剂。在与妊娠维持活性(EC₅₀值为12μg/kg/d)同样的剂量范围内，((+)-1)具有抗向子宫活性。这些结果证明((+)-1)在子宫内的高孕激素效力。

孕激素((+)-1)对乳腺末端和小泡终蕾的形成的临界值很高(见图3和表2)，但是，即使((+)-1)的浓度很低，其对子宫依然有作用(见实施例6和图4)。其证明本发明的化合物在乳房和子宫中具有分离的作用。

Claims

1.通式所示的化合物或其药物学可接受的衍生物或类似物，

其中R₁和R₂分别独立地是-H或-F，

R₃是-CH₃或-CF₃，以及

Ar是

或

2.(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。

3.一种包括如权利要求1所述化合物的药物组合物。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其中权利要求1所定义的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。

5.如权利要求3或4所述的药物组合物，其中权利要求1所定义的化合物的含量使得其每日剂量为0.01到2mg。

6.如权利要求3到5之一所述的药物组合物，其还包括17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其中17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分的含量使得其每日剂量是0.01到0.05mg。

8.如权利要求1所述的化合物，其是用于治疗中。

9.(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物，其是用于治疗中。

10.如权利要求8或9所述的化合物，其是用于节育、激素替代疗法或者妇科病症的治疗中。

11.如权利要求3所述的药物组合物，其是用于治疗中。

12.包括(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物的药物组合物，其是用于治疗。

13.如权利要求11或12所述的药物组合物，其是用于节育、激素替代疗法或者妇科病症的治疗。

14.如权利要求1所述，但包括被权利要求1所排除的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的化合物在制备药剂中的应用，该药剂用于相对于次选组织选择性地调节首选组织的孕酮受体介导的作用。

15.如权利要求14所述的应用，其中首选组织是子宫组织而次选组织是乳房组织。

16.如权利要求14或15所述的应用，其用于相对于乳房组织中孕酮介导的作用选择性地增强子宫中孕酮介导的作用。

17.如权利要求14到16之一所述的应用，其中该药剂用于节育、激素替代疗法或者妇科病症的治疗。

18.如权利要求14到17之一所述的应用，其用于相对于乳房组织的增殖和分化作用选择性地增强子宫的抗增殖作用。

19.如权利要求14到18之一所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。

20.如权利要求14到19之一所述的应用，其中该药剂是口服给药。

21.如权利要求14到20之一所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物的含量使得其每日剂量为0.01到2mg。

22.如权利要求14到21之一所述的应用，其中该药剂还包括17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分。

23.如权利要求22所述的应用，其中17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分的含量使得其每日剂量为0.01到0.05mg。

24.如权利要求22或23所述的应用，其中如权利要求1定义的化合物和17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分的每日剂量在妇女月经周期中彼此独立地改变。

25.如权利要求1所述的化合物或如权利要求3所述的药物组合物作为避孕药的应用。

26.如权利要求25所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。

27.如权利要求25或26所述的应用，其中该避孕药是口服给药。

28.如权利要求25至27之一所述的应用，其中该避孕药是一种不含雌激素的口服避孕药。

29.如权利要求25至28之一所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物的含量使得其每日剂量为0.01到2mg。

30.如权利要求25至27以及29之一所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物附加有17α-乙炔基雌二醇或其他雌激素成分。

31.如权利要求30所述的应用，其中17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分的含量使得其每日剂量为0.01到0.05mg。

32.如权利要求25至27和29至31之一所述的应用，其中如权利要求1定义的化合物和17α-乙炔基雌二醇或其他的雌激素成分的每日剂量在妇女月经周期中彼此独立地改变。

33.如权利要求1所述，但包括被权利要求1所排除的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的化合物在制备药剂中的应用，该药剂用于相对于孕酮受体同种型B的转录选择性地激活孕酮受体同种型A的转录。

34.如权利要求33所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。

35.如权利要求1所述，但包括被权利要求1所排除的化合物5-[3-{1-(3-三氟甲基苯基)-环丙基}-2-羟基-2-三氟甲基-丙酰氨基]-2-苯并[C]呋喃酮的化合物在制备药剂中的应用，该药剂用于相对于孕酮受体同种型B介导的作用选择性地增强孕酮受体同种型A介导的作用。

36.如权利要求35所述的应用，其中如权利要求1所定义的化合物是(+)-5-{2-羟基-3-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯基)-环丙基]-2-三氟甲基-丙酰氨基}-2-苯并[C]呋喃酮或其药物学可接受的衍生物或类似物。