CN1322130A - 抑制3型3α－羟基类固醇脱氢酶 - Google Patents

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Abstract

用3型3α－羟基类固醇脱氢酶的抑制剂或联用其它活性药物如5型17β－羟基类固醇脱氢酶的抑制剂,治疗和/或抑制发生前列腺癌、良性前列腺增生、前列腺炎、痤疮、皮脂溢、多毛症或雄激素性脱发的新方法。还公开了新抑制剂和药品。

Description

抑制3型3α-羟基类固醇脱氢酶
                     发明领域
本发明涉及应用由天然前体生物合成类固醇性激素的酶的抑制剂治疗类固醇性激素依赖性疾病的方法。具体地说，公开了减少天然产生雄激素如睾丸激素和二氢睾丸激素的抑制剂。
                     相关技术背景
已知许多雄激素敏感性疾病，即雄激素活性促进其发生或发展的疾病。这样的疾病包括但不限于前列腺癌、良性前列腺增生、痤疮、皮脂溢、多毛症、雄激素性脱发、性早熟、肾上腺增生和多囊卵巢综合征。也已知许多雌激素敏感性疾病，即雌激素活性促进其发生或发展的疾病。这样的疾病包括但不限于乳腺癌、子宫内膜癌、子宫内膜异位症、平滑肌瘤和性早熟。
当分别给予雄激素受体拮抗剂(“抗雄激素物质”)或雌激素受体拮抗剂(“抗雌激素物质”)时，可抑制雄激素和雌激素活性。参见例如WO 94/26767和WO 96/26201。通过用已知方法抑制雄激素或雌激素生物合成或分泌也可以减少雄激素和雌激素活性。参见例如WO90/10462、WO 91/00731、WO 91/00733和WO 86/01105。在WO97/11162中描述了5型17β-羟基类固醇脱氢酶。
Dufor等(Biochemical and Biophysical Research Communications 228，474-479(1996))描述，从人前列腺cDNA文库分子克隆以及特征鉴定了人3型3α-羟基类固醇脱氢酶。
在1998年3月11日提交、系列号为60/077,510的美国临时专利申请中公开了人5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂。
本发明提供人3型3α羟基类固醇脱氢酶有效抑制剂或人3型3α羟基类固醇脱氢酶和人5型17β-羟基类固醇脱氢酶两者的有效抑制剂，因为发现它们可抑制雄激素的形成。并不认为现有技术描述或提出了抑制3型3α羟基类固醇脱氢酶在减少靶组织睾丸激素和二氢睾丸激素量中可起有益的作用。
                         发明概述
因此本发明目的之一是在优先避免抑制2型或4型17β-羟基类固醇脱氢酶、1型3α羟基类固醇脱氢酶或任何其它雄激素降解酶的同时应用人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂选择性更强而更有效地抑制4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素和5α-雄甾烯-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素。
本发明另一个目的是在优先避免抑制2型或4型17β-羟基类固醇脱氢酶、1型3α羟基类固醇脱氢酶或任何其它雄激素降解酶的同时应用人3型3α-羟基类固醇脱氢酶和5型17β-羟基类固醇脱氢酶两者的抑制剂选择性更强而更有效地抑制4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素和5α-雄甾烯-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素。
另一目的是提供前列腺癌、良性前列腺增生和前列腺炎的治疗和预防方案。
另一目的是提供雄激素敏感性皮肤疾病尤其是痤疮、皮脂溢、多毛症和雄激素性脱发的治疗和预防方案。
在一个实施方案中，本发明提供在其需要患者抑制4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素或抑制5α-雄甾烯-3，17-2酮转化为二氢睾丸激素的方法，包括给予所述患者治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂而不是17-内酯衍生化合物。
在另一实施方案中，本发明提供抑制人3型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的方法，包括将治疗有效量的具有下式结构的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂给予需要这样的治疗的患者：
Figure A9981173900181
其中所述虚线为任选π键；
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)。
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β为羟基、酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R16α和R16β独立选自氢、低级烷基和苄基，或R16α和R16β一起构成C5-C6环烯。
在另一个实施方案中，本发明提供抑制人3型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的方法，包括将治疗有效量的选自以下的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂给予需要这种抑制的患者：
Figure A9981173900201
在另一个实施方案中，本发明提供测定4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素和5α-雄甾烯-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素的推定抑制剂的有效性，包括测定在存在所述推定抑制剂下3型3α-羟基类固醇脱氢酶的活性，并确定相对于缺乏所述推定抑制剂时与所述脱氢酶活性有关的降低所述活性的相关有效性。
在另一实施方案中，本发明提供包含一种药学上可接受的稀释剂或载体和治疗有效量的具有以下分子结构的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的药用组合物：
Figure A9981173900221
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)；
其中所述虚线为任选π键；
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β选自羟基、酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
在另一实施方案中，本发明提供包含药学上可接受的稀释剂或载体和治疗有效量的具有以下分子结构的人3型-3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的药用组合物：
Figure A9981173900222
其中R100选自氢、羧基、酰氨基、C1-C5烷基、卤基、硝基、羟基和C1-C3烷氧基。
在又一实施方案中，本发明提供以下分子结构的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂：
Figure A9981173900231
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)；
其中所述虚线为任选π键；
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β选自羟基、酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R16α和R16β独立选自氢、低级烷基和苄基，或R16α和R16β一起构成C5-C6环烯。
在另一个实施方案中，本发明提供具有以下分子结构的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂：
Figure A9981173900241
其中R100选自氢、羧基、酰氨基、C1-C5烷基、卤基、硝基、羟基和C1-C3烷氧基。
在又一实施方案中，本发明提供治疗或降低前列腺癌发生风险的方法，包括将治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂而不是17-内酯衍生化合物给予需要这种治疗或降低的患者。
在又一实施方案中，本发明提供治疗或降低良性前列腺增生发生风险的方法，包括将治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂而不是17-内酯衍生化合物给予需要这种治疗或降低的患者。
在另一实施方案中，本发明提供治疗或降低前列腺炎发生风险的方法，包括将治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂给予需要这种治疗或降低的患者。
在另一实施方案中，本发明提供治疗或降低痤疮、皮脂溢、多毛症或雄激素性脱发发生风险的方法，包括对需要这种治疗或降低的患者给予治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的人5型17β-羟基类固醇脱氢酶的活性抑制剂而不是给予17-内酯衍生化合物。
本发明的抑制剂用于预防和/或治疗本文所述的某些疾病，即雄激素活性刺激其发生或发展的疾病。我们的实验室工作一个更为令人惊奇的结果是发现：本申请人目前证实已知其催化活性反应影响类固醇的3位的3型3α-HSD催化涉及17位的反应。发现3型3α-HSD参与由雄甾烯二酮和雄甾烯二酮形成睾丸激素和DHT，该发现使得可以通过抑制本申请人发现的该新生物合成途径增强抑制这两种重要的雄激素的生物合成。发现3型3α-羟基类固醇脱氢酶具有类似于17β-羟基类固醇脱氢酶(催化4-雄甾烯二酮-3，17-二酮转化为睾丸激素和5α-雄甾烯-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素)的活性，抑制3型3α-羟基类固醇脱氢酶的17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制剂联合或不联合5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂和/或5α-还原酶抑制剂可减少这些酶催化产生的雄激素。因为这些酶的催化反应形成的雄激素是雌激素的前体，所以本发明也适用于雌激素活性促进其发生或发展的疾病。
关于本文推荐的所有剂量，主治医师应该监测个体患者反应并据此调节剂量。
需要治疗或降低特定疾病发生风险的患者为诊断患有这种疾病的患者或怀疑患有这种疾病的患者。
除非另有指明，本发明活性化合物的优选剂量对于治疗目的和预防目的是相同的。无论治疗(或预防)那种特定疾病，本文所述每一活性组分的剂量相同。
在降低疾病发生风险方法的医学治疗法中所用的“3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂”是指抑制所述酶的IC50(用本文表1所述的相同方法计算)不高于200nM的化合物。这种抑制剂的IC50优选不高于50nM，最优选低于10nM。此外，优选不需要的对1型3α-HSD和2型17β-HSD的抑制在3.10-7M时低于90％，优选低于80％，最优选低于70％。在某些实施方案中，优选在10-7M浓度时刺激Shionogi细胞的雄激素活性低于100％，优选低于50％，最优选低于20％。
当将两种或多种不同活性剂在本文论述为联合疗法的一个部分(例如酶抑制剂和抗雄激素物质)时，给予多个不同的化合物而不是给予具有多种活性的单一化合物。
除非另有说明或本文显而易见的，本文所述剂量是指不受药用赋形剂、稀释剂、载体或其它成分影响的活性化合物的重量，尽管这样的附加成份最好包含在其中，见本文实施例所述。通常用于制药工业的任何剂型(胶囊、片剂、注射剂等)均适用于本发明，而术语“赋形剂”、“稀释剂”或“载体”包括通常在制药工业的这类剂型中与活性成分一起的这类非活性成分。例如包括常见的胶囊、丸剂、肠溶包衣、固体或液体稀释剂或赋形剂、调味剂、防腐剂等。
如本文所述，术语烃部分包括但不限于直链或支链烷基、直链或支链链烯基、直链或支链链炔基、苯基、苯基烷基、苯基链烯基、苯基链炔基。
                     附图简述
图1图示活性雄激素在人体前列腺中的生物合成途径。
图2图示用3型3α-HSD稳定转染的培养的完整293细胞(ATCCCRL 1573)中的17β-HSD和3α-HSD活性。将用3型3α-HSD稳定转染的细胞以105细胞/孔密度接种在24孔培养板中。在新更换的培养基中加入0.1μM[14C]-标记的4-二酮和[14C]-标记的DHT，以分别评价3型3α-HSD酶的17β-HSD活性[4-二酮转化为睾丸激素(□)]和3型3α-HSD酶的3α-HSD活性[DHT转化为3α-二醇(○))和转染酶的活性。非转染细胞用作对照。在培养指定时间后，收集并萃取培养基，如本文“1、2、3型和517β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶学测定”所述进行测定。
图3a-3c显示用对3型3α-HSD的抗体免疫染色的正常人皮的石蜡切片。在以下部位可见存在的3型3α-羟基类固醇脱氢酶；
a)上皮和成纤维细胞
b)毛囊
c)汗腺。
                 优选实施方案的详细说明
前列腺癌是前列腺上皮的疾病，而良性前列腺增生(BPH)主要涉及前列腺的基质部分。前列腺炎尽管更常见于前列腺上皮，但是可见于前列腺的这两种区域。
本申请人的最新结果表明，5型17β-羟基类固醇脱氢酶(5型17β-HSD)和3型3α羟基类固醇脱氢酶(3型3-HSD)存在于前列腺上皮，主要存在于上皮基底细胞，因此通过图1所示的途径将雄甾烯二酮转化为睾丸激素。然后这种睾丸激素扩散到雄激素依赖性腺腔上皮细胞，以及使前列腺癌生长。关于基质部分，3型3α-HSD和5型17β-HSD主要见于散布于肌肉细胞中的成纤维细胞。据认为，成纤维细胞分泌的生长因子刺激周围细胞，因此产生BPH。在这些基质成纤维细胞中存在的雌激素可能为雌激素以及雄激素在BPH中发挥作用提供了基础。然而，前列腺癌只是一种雄激素敏感型疾病。
在先有技术中，已知3型3α-HSD将DHT转化为无活性代谢产物雄甾烷-3α，17β-二醇。本申请人最近发现3α-HSD的令人惊奇的作用，它分别催化雄甾烯二酮和雄甾烷二酮形成睾丸激素和DHT(见图1)。据认为，抑制3型3α-HSD以抑制形成睾丸激素和DHT的好处明显胜过当抑制3型3α-HSD时可能产生的任何雄激素代谢中的降低。因为在前列腺组织中存在许多其它形成雄激素必需的酶，所以提出这样一种可能性：本文所讨论的联合疗法(例如应用其它酶活性抑制剂、抗雄激素物质和/或睾丸切除术)将产生较单独应用一种活性剂更好的效果。人们特别认为正确的是通过两种或多种不同机制治疗疾病的联合治疗(例如抑制两种或多种 不同合成途径，抑制雄激素形成同时联合阻断与雄激素受体的结合等)。
图1适用于各种前列腺癌、良性前列腺增生和前列腺炎，虽然前列腺癌和BPH的细胞类型不同。在前列腺癌中，5型17β-HSD和3型3α-HSD主要存在于一种细胞类型(基底细胞)，而5α-还原酶存在于就位于基底细胞之上的腺泡腔细胞中，因此使得睾丸激素可由基底细胞扩散到腺泡腔细胞，然后转化为作用更强的雄激素DHT。位于基质间隔的成纤维细胞将雄甾烯二酮转化为睾丸激素，然后在同一细胞中转化为DHT。
1型3α-HSD在前列腺中的量不多，而是肝脏的一种主要酶。在本发明中使用的抑制剂(例如3型3α-HSD抑制剂、5型17β-HSD抑制剂、5α-还原酶抑制剂等)最好对1型3α-HSD几乎没有或没有抑制作用，因为它有益地使雄激素灭活。所以本申请人优选避免抑制1型3α-HSD当实施本发明时不会延迟肝脏组织对雄激素的灭活。
我们发现人3型3α-HSD在将5α雄甾烷-3，17-二酮和二氢睾丸激素分别转化为雄甾酮和雄甾烷-3α，17β-二醇的同时，将4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素和5α-雄甾烷3，17-二酮转化为二氢睾丸激素。在前列腺组织中，人3型3α-HSD的表达比人5型17β-HSD的表达高得多，因此说明在前列腺中通过该途径形成大部分的雄激素(图1)。
在一个优选实施方案中，如图1所示，通过同时有效抑制5α-还原酶和5型17β-羟基类固醇脱氢酶活性有效阻断二氢睾丸激素的产生，从而抑制形成雄激素。
存在两种类型的5α-还原酶。这两种类型均在前列腺中表达，但是2型5α-还原酶的表达水平更高。Merck的产品Proscar(非那甾胺，MK-906)主要抑制2型5α-还原酶。
Glaxo Wellcome生产的化合物GI 198745(17β-{N-2，5-双(三氟甲基)苯基}氨基甲酰基-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-3-酮)和Endorecherche的化合物EM-503(17β-(N，苯甲酰基，N-苯基)氨基-4-甲基-4-氮杂-雄甾烷-3-酮)既有效抑制1型5α-还原酶又有效抑制2型5α-还原酶，因此可更有效地阻断DHT形成。
但是抑制5α-还原酶活性确实提高睾丸激素(T)水平。尽管弱于DHT，但是T也具有使前列腺不同程度生长的雄激素作用。
为了更有效地阻断雄激素形成，抑制17β-羟基类固醇脱氢酶活性也是有用的，该酶将4-二酮转化为T或者将A-二酮转化为DHT。该活性在前列腺由5型17β-HSD而且令人惊奇的是由3型3α-HSD催化。我们开发了5型17β-HSD的高效抑制剂，其分子结构和合成如下：EM-1401，EM1404的合成
流程A
Figure A9981173900291
3-三氟甲磺酰氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(b)在氩气氛下，将化合物a(500mg，1.35mmol)、2，6-二甲基吡啶(0.355mL，3.05mmol)和4-二甲基氨基吡啶(33mg，0.27mmol)在无水二氯甲烷(25mL)中的溶液在0℃下冷却，用三氟甲磺酸酐(0.308mL，1.83mmol)处理并搅拌45分钟。用水猝灭反应混合物，用二氯甲烷萃取。用2％盐酸、饱和碳酸氢钠和水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。经快速层析(己烷-乙酸乙酯49-1至己烷-乙酸乙酯4-1)纯化粗制油，获得三氟甲磺酸盐b(EM-1 399)(540 mg，80％)：IR(CHCl3)2957，2872，1711，1490，1426，1248，1214，1141，926，846，621cm-1；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.03(s，3H)，1.28(s，3H)，1.29(s，3H)，1.35-2.40(m，17H)，2.88(m，2H)，6.98(s，1H)，7.02(d，J＝8Hz，1H)，7.33(d，J＝8.7Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.32，23.22，25.48，25.80，26.89，27.57，27.68，29.37，31.49，31.80，34.69，37.72，38.46，43.66，47.10，48.59，93.43，116.54，118.08，120.80，121.07，127.05，139.31，140.43，147.46，177.70。3-羧基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(EM-1401) 方法A：用一氧化碳冲洗化合物b(560mg，1.12mmol)、醋酸钾(440mg，4.48mmol)、醋酸钯(12.6mg，0.056mmol)和1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁(125mg，0.255mmol)在二甲亚砜(20mL)中的混合物20分钟，于80℃在一氧化碳气球中搅拌3小时以上。用0.5N盐酸稀释反应混合物并用二氯甲烷萃取。用水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。经快速层析(二氯甲烷-甲醇19-1至二氯甲烷-甲醇4-1)纯化反应混合物，获得羧酸EM-1401(300mg，68％)：IR(KBr)2937，2872，1718，1676，1388，1314，1230，1180，，1160cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3+CD3OD)δ0.75(s，3H)，1.01(s，6H)，1.10-2.17(m，17H)，2.65(m，2H)，7.09(d，J＝8.1Hz，1H)，7.48(s，1H)，7.51(d，J＝8.5Hz，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3+CD3OD)δ13.71，22.75，24.98，25.27，26.65，26.87，28.76，30.84，31.46，34.21，37.33，38.22，43.84，46.74，93.92，124.84，126.52，127.32，129.91，136.31，144.94，168.70，178.97。3-烷氧基羰基-1，3，5-(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(c)用一氧化碳冲洗化合物b、三乙胺(3.25equiv)、醋酸钯(0.07equiv)、1，3-二(二苯基膦基)丙烷(0.06equiv)和乙醇(1.5equiv至大量过剩)在DMF(10％W/V)中的混合物20分钟，于90℃在一氧化碳气球中搅拌16小时以上。在室温下冷却反应混合物，用水稀释并用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机相，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。经3次快速层析(2次用苯-丙酮4-1和己烷-乙酸乙酯7-3)纯化反应混合物，获得混合物c(例如EM-1398，R＝苄基，70％)：IR(CHCl3)2938，1716，1293，1262，1177，1152，1130，1109，732 cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.02(s，3H)，1.28(s，3H)，1.29(s，3H)，1.34-1.41(m，17H)，2.91(m，2H)，5.35(s，2H)，7.33-7.45(m，6H)，7.79(s，1H)，7.83(d，J＝8.1Hz，1H)；13CNMR(75MHz，CDCl3)δ14.39，23.28，25.55，25.74，27.14，27.64，27.75，29.25，31.56，31.93，34.75，37.77，38.56，44.34，47.16，48.82，66.42，93.50，125.34，126.90，127.45，128.05，128.10，128.52，130.23，136.22，136.81，145.49，166.55，177.75。3-羧基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(EM-1401) 方法B：将化合物c(350mg，0.72mmol)和10％钯活性炭(50mg)在乙酸乙酯(40mL)中的混合物在氢气球中搅拌3小时以上。反应混合物经C盐过滤并蒸发。经快速层析(二氯甲烷-THF 19-1至二氯甲烷-THF 3-1)纯化粗制混合物，获得羧酸EM-1401(240mg，84％)。用甲醇-THF重结晶样品(特征如前所述)。3-酰胺基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(d)在氩气氛下，将EM-1401和吡啶(15equiv)在无水二氯甲烷(1.6％W/V)中的溶液在0℃下冷却，用用草酰氯(6equiv处理并搅拌0.5小时。使反应混合物达到室温并搅拌4小时以上。蒸发反应混合物，将其溶解于无水THF(1.6％W/V)中，于0℃冷却，用10equiv胺处理并搅拌15分钟。用水猝灭反应混合物，用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。经快速层析(己烷-丙酮19-1至己烷-丙酮3-2)纯化粗制混合物，获得化合物d(例如 EM-1404，R1＝R2＝H，65％)：IR(CHCl3)3433，3350，2941，2873，1702，1664，1611，1388，1310，1159cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3+CD3OD)δ0.73(s，3H)，0.99(s，6H)，1.10-2.16(m，17H)，2.64(m，2H)，7.08(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.32(d，J≈9Hz，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3+CD3OD)δ13.69，22.72，24.96，25.27，26.64，26.84，28.78，29.09，30.81，31.44，34.19，37.31，38.27，43.72，46.74，93.92，124.20，124.93，127.70，130.00，136.45，143.88，170.63，178.96。
5型17β-HSD和3型3α-HSD具有85.5％氨基酸同一性。在5型17β-HSD和3型3α-HSD之间一级结构的高度同源性能够解释见于3型3α-HSD活性的微弱17β-HSD活性。但是，因为3型3α-HSD的表达水平比5型17β-HSD高得多，所以3型3α-HSD产生的意外17β-HSD活性在前列腺中起作重要作用。因此必需抑制3型3α-HSD活性，以有效阻断雄激素形成(图1)。
3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂可按照本发明单独使用或作为与其它策略(见下文)的联合疗法的一部分，联合疗法通过不同机制对雄激素敏感型疾病产生有益的作用，因而获得协同的联合作用。这类联合疗法除了3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂(以及在某些实施方案中与5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂联合)之外包括一种或多种以下策略：
策略1：通过化学或外科切除术抑制卵巢或睾丸分泌激素。该方法适用于治疗雌激素或雄激素分别对其产生不利作用的疾病。当使用外科或化学切除术时，优选使用LHRH拮抗剂、LHRH拮抗剂和/或3型3α-羟基类固醇脱氢酶(如本文所述它催化一定的睾丸雄激素形成)抑制剂的化学切除法。在美国专利4,659,695中报告了合适的LHRH拮抗剂，但是可使用任何具有产生化学切除作用的LHRH拮抗剂，因为它们均通过最初所述的相同机制起作用(Labrie等，J.Androl.1：209-228，1980)。使用剂量是本领域已知的。某些合适LHRH拮抗剂报道于美国专利4,666,885，但是如果按照生产商的建议使用，任何LHRH拮抗剂均适用。
策略2：采用雄激素或雌激素受体拮抗剂(“抗雄激素物质”或“抗雌激素物质”)分别防止雄激素或雌激素激活雄激素或雌激素受体。策略2适用于雄激素活性或雌激素活性分别对其产生不利作用的疾病。抗雄激素物质(例如氟他胺(N-[4-硝基-3-(三氟甲基)苯基)]-2-甲基丙酰胺)及其剂量是本领域已知的，剂量为250mg，2-3次/日，尼鲁米特的剂量为150mg/日，卡地索的剂量为50-750mg/日。
当按照本发明使用抗雌激素物质时，或者单独使用或者作为本文所述联合疗法的一部分使用，主治医师至少在开始应该使用生产商推荐的剂量。但是，主治医师应该监测个体患者的反应和代谢，并对患者作相应的剂量调整。实际上，这适用于本文所讨论的所有策略和在本发明的任何联合疗法中使用的所有活性成分。一种优选的抗雌激素物质为报告于PCT/CA96/00097(WO 96/26201)中的EM-800。EM-800的分子结构为：
本发明的另一优选抗雌激素物质是EM-01538：
Figure A9981173900332
本发明的其它优选SERM包括他莫昔芬((Z)-2-[4-(1，2-二苯基-1-丁烯基)]-N，N-二甲基乙胺)(Zeneca，UK有售)、托瑞米芬(芬兰的Orion-Farmos或Schering-Plough有售)、屈洛昔芬和CP-336，156(顺式-1R-[4’-吡咯烷代(pyrrolidino)-乙氧基苯基]-2S-苯基-6-羟基-1，2，3，4-四氢萘D-(-)-酒石酸盐)(Pfizer Inc.，USA)、雷洛昔芬(Eli Lilly and Co.，USA)、LY 335563和LY 353381(Eli Lilly and Co.，USA)、Iodoxifene(SmithKline Beecham，USA)、公开于Shalmi等的WO 97/25034，WO97/25935，WO 97/25037，WO 97/25038和Korsgaard等的WO 97/25036的Levormeloxifene(3，4-反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基]-7-甲氧基苯并二氢吡喃(Novo Nordisk，A/S，丹麦)、GW5638(Willson等公开于Endocrinology 138(9)，3901-3911，1997)和吲哚衍生物(Miller等公开于EP 0802183A1)和Wyeth Ayers(USA)开发并公开于JP10036347的TSE 424(American home products corporation)和在WO 97/32837中描述的非类固醇雌激素衍生物。
存在两种类型的5α-还原酶。两种类型均在前列腺表达，但是2型5α-还原酶的表达水平更高。Merck产品Proscar(非那甾胺，MK-906)主要抑制2型5α-还原酶。
Glaxo Wellcome生产的化合物GI 198745(17β-{N-2，5-双(三氟甲基)苯基}氨基甲酰基-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-3-酮)和Endorecherche的化合物EM-503(17β-(N，苯甲酰基，N-苯基)氨基-4-甲基-4-氮杂-雄甾烷-3-酮)既有效抑制1型5α-还原酶又有效抑制2型5α-还原酶，因此可更有效地阻断DHT形成。
策略3：通过抑制睾丸激素5α-还原酶的活性抑制雄激素睾丸激素转化为更强的雄激素二氢睾丸激素(DHT)(例如以推荐剂量给予Proscar，Merck Sharp和Dohme Canada有售)。可使用任何其它有效的5α-还原酶抑制剂。使用的剂量可以是每日口服2-20mg。所述剂量应该是生产商推荐剂量。策略3适用于雄激素活性对其产生不利影响的疾病。
策略4：使用芳香酶抑制剂减少雌激素的产生。策略4适用于雌激素活性对其产生不利影响的疾病或同样为雌激素敏感性疾病的雌激素受体介导的恶化型雌激素敏感型疾病(例如良性前列腺增生)。芳香酶抑制剂(和抗雌激素物质)也可用来减轻雌激素水平升高产生的不需要的雌激素作用，雌激素水平升高见于某些雄激素依赖性疾病的治疗。当按照本发明使用芳香酶抑制剂时，或者单独使用或者作为本文所述的一种联合疗法的一部分使用，主治医师应该在开始时使用生产商的推荐剂量。当口服给药时，一般获得需要血清水平的有效剂量为每50公斤体重1.0mg-20mg活性成分/日。例如Arimidex(Zeneca)的每日口服剂量为1mg。但是，主治医师应该监测患者个体反应和代谢，并相应调节患者的具体剂量。某些芳香酶抑制剂包括例如美国专利5,227,375中所述分子结构。也可通过以1mg/日的剂量给予Zeneca，UK销售的Arimidex(2，2’-[5-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-次苯基双(2-甲基丙酰基腈)。任何其它芳香酶抑制剂均可按照生产商建议使用。
一般来说，对于雄激素敏感型疾病和雌激素敏感型疾病而言，据认为，同时用性激素类固醇生物合成抑制剂(催化雌激素或雄激素生物合成、或雌激素或雄激素前体生物合成的一个或多个步骤的酶的抑制剂)和雌激素受体拮抗剂和/或雄激素受体拮抗剂的治疗具有相加作用而不是多余的作用，因为它们通过不同机制以有益的方式发挥作用。同样人们认为，两种不同酶抑制剂(催化性激素类固醇生物合成的一个或多个不同步骤的酶)的活性提供相加作用，尤其是当所述抑制剂影响一个以上合成途径时。据认为这种方法可获得更充分的效果。
本发明的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂和5型17-β羟基类固醇脱氢酶抑制剂可与上述策略1-4中的 任意一个 任意组合使用，所述策略的作用(增强或降低雄激素活性或雌激素活性)与对所述疾病的需要作用一致。注意，以下所述是列举的按照本发明可治疗或可降低其风险的典型疾病。在每种疾病下面指出了对所述特定疾病的治疗或降低风险的优选疗法或联合疗法。但是，这类联合疗法可用一种或多种以上所列的四种策略进行追加，所述策略的选择只受限于雌激素活性和/或雄激素活性对特定疾病是产生有利作用还是不利作用。
A)前列腺癌(雄激素活性对其产生不利作用)
1.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
2.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
3.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH-激动剂(或拮抗剂)
4.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
5.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH-激动剂(或拮抗剂)
6.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH-激动剂(或拮抗剂)+抗雄激素物质
7.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
8.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH-激动剂(或拮抗剂)+抗雄激素物质
9.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5 α-还原酶抑制剂+LHRH激动剂(或拮抗剂)
10.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH-激动剂+5α-还原酶抑制剂
11.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
12.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
13.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+LHRH激动剂(或拮抗剂)+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
B)良性前列腺增生(雄激素活性和雌激素活性均对其产生不利作用)
1.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
2.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
3.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
4.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
5.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
6.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
7.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
8.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
9.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
10.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
11.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
12.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
13.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
14.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂+抗雌激素物质或芳香酶抑制剂
C)前列腺炎(雄激素活性对其产生不利作用)
1.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
2.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
3.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
4.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
5.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
6.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
7.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂。
D)痤疮、皮脂溢、多毛症、雄激素性脱发(雄激素活性对其产生不利作用)
1.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
2.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂
3.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
4.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质
5.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
6.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+5α-还原酶抑制剂
7.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂。
8.3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂+抗雄激素物质+5α-还原酶抑制剂
当按照本发明使用3型3α-羟基类固醇抑制剂时，或者单独使用或者作为本文所述联合疗法的一部分使用，最好主治医师使患者的3型抑制剂血清浓度控制在0.5ng/ml-100ng/ml，优选为1ng/ml-20ng/ml，最优选为1ng/ml-10ng/ml。可用LC/MS测定血清浓度。当口服给药时，一般获得所需血清水平的有效剂量为每50公斤体重每日1.0mg-1,000mg活性成分，优选10mg-500mg，最优选10mg-100mg。然而剂量应该随所选定抑制剂的生物利用度和患者个体反应而不同。例如当选定EM-01645或EM-01667-C时，口服剂量优选为每50公斤体重每日5mg-500mg，更优选为10mg/日-300mg/日，例如为20mg/日-100mg/日。主治医师应该监测患者个体反应和血清水平，判断是否适当，并相应调整患者的剂量。当注射给药时，通常较低的剂量是合适的，例如每50公斤体重每日10mg-100mg.
当按照本发明使用5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂时，作为一种本文所述联合疗法的一部分使用，主治医师最好将患者血清的5型抑制剂浓度控制于0.5ng/ml-100ng/ml，优选为1ng/ml-20ng/ml，最优选为1ng/ml-10ng/ml。可用LC/MS测定血清浓度。当口服给药时，一般获得所需血清水平的有效剂量为每50公斤体重每日1.0mg-1,000mg活性成分，优选10mg-500mg，最优选10mg-100mg。然而剂量应该随所选定抑制剂的生物利用度和患者个体反应而不同。例如当选定EM-1404时，口服剂量优选为每50公斤体重每日5mg-500mg，更优选为10mg/日-300mg/日，例如为20mg/日-100mg/日。主治医师应该监测患者个体反应和代谢(血清水平，判断是否适当)，并相应调整患者的剂量。当注射给药时，通常较低的剂量是合适的，例如每50公斤体重每日10mg-100mg。
当按照本发明使用3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂时，作为一种本文所述联合疗法的一部分使用，主治医师最好将患者的3型抑制剂血清浓度控制在0.5ng/ml-100ng/ml之间，优选在1ng/ml-20ng/ml之间，最优选在1ng/ml-10ng/ml之间。当口服给药时，所述剂量优选为每50公斤体重每日1.0mg-1,000mg活性成分，优选在5mg-500mg之间，最优选在10mg-100mg之间。然而主治医师应该监测患者个体反应和代谢，并对患者的剂量作相应调整。这类抑制剂的合成如下所示：
            3型17β-HSD抑制剂的合成
                    流程B
Figure A9981173900401
用TBDMS保护17β-醇  在二氢睾丸激素(DHT，e)(5g，17.2mmol)的DMF溶液中加入咪唑(6eq.)和TBDMSCl(6eq.)。在室温下搅拌反应物过夜。将混合物倾倒在冰上并过滤。用水洗涤生成的白色沉淀物，经五氧化磷减压干燥24小时。获得85-90％产率17β-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-5α-雄甾烷-3-酮(f)白色固体；IR(KBr)v1719(C＝O，酮)；1H NMR(CDCl3)δ-0.001和0.005(s，6H，Si(CH3)2)，0.71(s，3H，CH3-18)，0.87(s，9H，SiC(CH3)3)，1.01(s，3H，CH3-19)，3.54(t，J＝8.2Hz，1H，CH-17)；13C NMR(CDCl3)δ-4 80和-4.47，11.41，11.52，18.11，21.13，23.56，25.87，28.98，30.94，31.36，35.54，35.78，37.13，38.21，38.65，43.36，44.74，46.84，50.55，54.15，81.79，212.03。3位羰基的烷基化于0℃，在化合物f(500mg，1.23mmol)的无水THF(100mL)溶液中滴加3eq.市售格氏试剂的无水THF。使混合物在0℃下反应3小时，然后在室温下留置过夜。加入饱和氯化铵溶液，并用乙酸乙酯萃取粗产物。用饱和氯化钠溶液洗涤有机相，经硫酸镁干燥，减压蒸发。用己烷和乙酸乙酯混合物作洗脱剂，在硅胶上经快速层析容易地使3β-烷基化的立体异构体与3α-烷基化立体异构体分离。当原位产生格氏试剂时，如在乙基苯基溴化镁的情况下，用相应的溴化物、活性镁和碘化物通过周知的方法制得5eq.。然后将所述类固醇溶解于无水乙醚中，并将其滴加至试剂溶液中。获得所述两种立体异构体的产率约为60％。3β-苄基-17β[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-3α-羟基-5α-雄甾烷(ga)白色固体(24％)；IR(KBr)v 3585和3460(OH，醇)；1H NMR(CDCl3)δ0.002和0.009(s，6H，Si(CH3)2)，0.69(s，3H，CH3-18)，0.75(s，3H，CH3-19)，0.88(s，9H，SiC(CH3)3)，2.71(s，2H，CH2Ph)，3.54(t，J＝8.2Hz，1H，CH-17)，7.20-7.34(5H，Ph)；13C NMR(CDCl3)δ-4.82和-4.50(SiC(CH3)3)，11.25，11.40，18.08，20.62，23.50，25.85，28.41，30.91，31.62，33.27，33.81，35.60，35.84，37.19，40.10，40.84，43.30，50.43，50.69，54.43，71.22，81.82(C-17)，126.37，128.09(2X)，130.56(2X)，137.06。3α-羟基-3β-(苯乙基)-17β[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-5α-雄甾烷(gb)白色固体(38％)；IR(膜)v 3447(OH，醇)；1H NMR(CDCl3)δ0.018和0.025(s，6H，Si(CH3)2)，0.71(s，3H，CH3-18)，0.78(s，3H，CH3-19)，0.89(s，9H，SiC(CH3)3)，2.73(m，2H，Ph-CH2)，3.56(t，J＝8.1Hz，1H，CH-17)，7.18-7.31(5H，Ph)；13C NMR(CDCl3)δ-4.77和-4.46(SiC(CH3)3)，11.28，11.44，18.12(SiC(CH3)3)，20.67，23.54，25.89(SiC(CH3)3)，28.52，29.60，30.97，31.66，33.31，33.92，35.66，36.04，37.25，40.03，41.05，43.35，46.47，50.76，54.55，71.50(C-3)，81.86(C-17)，125.68，128.38(4X)，142.82。水解TBDMS基团和氧化生成的醇的方法将甲硅烷基化醚溶解于盐酸的甲醇溶液(2％，v/v)中，使生成的混合物在室温下搅拌3小时。然后加入水，真空蒸发甲醇。使获得的白色沉淀物在未纯化的情况下进行琼斯氧化。于0℃下，向粗制醇的丙酮搅拌溶液中滴加琼斯试剂(2.7M铬酸溶液)。30-45分钟后结束反应。加入异丙醇和水，真空去除丙酮。用乙酸乙酯萃取余下的水溶液层。用盐水洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。用HPLC级溶剂乙酸乙酯和己烷作为洗脱剂在硅胶上进行纯化。3β-苄基-3α-羟基-5α-雄甾烷-17-酮(CS-213)白色固体(对于所述两步骤为88％)；IR(KBr)v 3408(OH，醇)，1732(C＝O，酮)；1H NMR(CDCl3)δ0.75(s，3H，CH3-19)，0.84(s，3H，CH3-18)，2.69(s，2H，CH2Ph)，7.18-7.32(5H，Ph)；13C NMR(CDCl3)δ11.18，13.78，20.20，21.71，28.16，30.79，31.52，33.18，33.70，35.64，35.79，35.88，39.97，40.69，47.75，50.39，51.41，54.22，71.22，126.40，128.09(2X)，130.51(2X)，136.93，221.27。3α-羟基-3β-苯乙基-5α-雄甾烷-17-酮(EM-1324-CS)  白色固体(对于所述两步骤为82％)；IR(膜)v 3486(OH，醇)，1737(C＝O，酮)；1HNMR(CDCl3)δ0.79(s，3H，CH3-19)，0.86(s，3H，CH3-18)，2.71(m，2H，PhCH2)，7.18-7.30(5H，Ph)；13C NMR(CDCl3)δ11.21，13.82，20.26，21.76，28.26，29.54，30.87，31.58，33.27，33.80，35.10，35.84，36.07，39.89，40.90，46.43，47.80，51.49，54.35，71.42，125.69，128.31(2X)，128.39(2X)，142.70，221.31。
在所述任何疗法中使用的所有活性成分均可配制为药用组合物，该药用组合物含有一种或多种其它活性成分。或者，它们中的每一种成分可分别给予，但是尽可能同时给予，使得患者最终的血液水平升高或者同时从每一活性成分(或策略)获得有益作用。在本发明的一部分优选实施方案中，例如一种或多种活性成分配制成一种药用组合物。在本发明的其它实施方案中，提供包括至少两个独立容器的试剂盒，就容器中含有的活性成分而言，其中至少一个容器的内容物完全或部分不同于至少另一个容器的内容物。在本发明的这些联合疗法中使用两个或多个不同容器。本文所讨论的联合疗法同样包括在生产治疗(或预防)所述疾病的药物中使用所述联合治疗组合中的一种活性成分，在此所述治疗或预防还包括所述组合的其它活性成分或策略。治疗或预防所述疾病的方法的一部分实施方案应用本文所述的特定5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂和/或3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂(即本文所述分子结构)。
除非另有说明，可交互使用LHRH激动剂和LHRH拮抗剂通过已知技术抑制睾丸激素或卵巢激素的分泌。希望当给予本发明的活性成分时对糖皮质激素受体的激活最小化。3型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂可用来获得类似于LHRH激动剂或拮抗剂提供的益处。
       3型3α-羟基类固醇脱氢酶的优选抑制剂
下表列举了我们发现可用作3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的化合物。该表还包括许多情况，进一步测试了特定化合物的其它重要参数的，例如雄激素活性和抗雄激素活性，以及化合物对雄激素受体、雄激素敏感细胞增生的作用，而其它作用在下文中更全面地解释。在其表号没有“撇号”(’)的下表中，给出了详细的优选抑制剂(或比较化合物)的分子结构。其表号具有“撇号”(’)的相应表提供每一受试化合物的功能效能的信息。栏头的数字对应于所有表格末的说明，说明每栏报告的信息以及如何测得的。空白条目表示还没有测定。
                        表1
Figure A9981173900441
                                    表1’
    1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15
    名称 口服生物利用度AUC 0-7h(ng/mL.h) 对3型3α-HSD活性的抑制IC50(nM)抑制率(％)(3.10×10-73.10×10-6 对1型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对2型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对3型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对1型3α-HSD活性的抑制IC50(nM) 对V型17β-HSD活性的抑制IC50(nM)   Shionogi活性   ZR-75-1活性基础E2 对雄激素受体的抑制百分率*(E-7  E-5)E-8    E-6 对孕激素受体的抑制百分率*(E-7 E-5)E-8   E-6 对糖皮质激素受体的抑制百分率*(R-7 E-5)E-8   E-6 对雌激素受体的抑制百分率*(E-7 E-5)E-8   E-6
  基础E-7  E-6     DHTE-7   E-6IC50(nM) 3E-8    E-6 3E-8   E-6
EM-01645  52±3  ＜1.0 (35    38)   4.2±1     4.5 0      0  0     3 4     5
EM-2330  1.3±0.1 (24    32)    592 (10    37) 65    65  12    -38 0      3  0     3 1     8 0     27
EM-1832 (97    98) (62    91)
EM-1831 (96    96) (76    94)
EM-1834 (99    97)  72    83)
EM-1836 (96    97)
EM-1131  124±27  77    8495    98 (21    70)  99    100      3 0     0  -15   -47 0      0  2      1  2     10 0     0 5     3
EM-01667-C  152±18 (91    96)8±1 (56    83)   50±6 6     -3  -9    -43
EM-01621 (68    95)118±9 (53    68)   21±2 (16    46) 69    56  147   60  1      3  0     0 0     0 0     6
EM-1125-CS  95±6.5 (72    82)1.84±0.3 (58    83)  83     7      2 3     -10  -30   -43 10      34  0     0  2      1  5     7 0     1 2     2
EM-1126  ND  78    88 (26    59)  84     92    6±1 0     -8  0     -49  0      -89  0     0  2      10  5     14 0     0 1     0
EM-1124  5.1±1(8h)  89    91  90     94   3±0.2 0     -11  0     -65  0      12  0     0  1      7  1     20 1     1 0     0
表2
                                                表2’
    1     2     3     4     5     6     7     8     9     10     11     12     13     14     15
    名称 口服生物利用度AUC 0-7h(ng/mL.h) 对3型3α-HSD活性的抑制服IC50(nM)抑制率(％)(3.10×10-73.10×10-6) 对1型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对2型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对3型17β-HSD活性的抑制IC50(nM) 对1型3α-HSD活性的抑制IC50(nM) 对V型17β-HSD活性的抑制IC50(nM)         Shionogi活性           ZR-75-1活性基础E2   对雄激素受体的抑制百分率*(E-7 E-5)E-8   E-6   对孕激素受体的抑制百分率*(E-7  E-5)E-8    E-6   对糖皮质激素受体的抑制百分率*(E-7  E-5)E-8    E-6   对雌激素受体的抑制百分率*(E-7  E-5)E-8    E-6
    基础E-7    E-6      DHTE-7    E-8IC50(nM) 3E-8   E-6 3E-8   E-6
EM-01678 (96    95) (56    83) (98    98) 63     91) -4     7  -60    -86 0     19 0      66 3     13 0      0
EM-01666 (51    81) (54    83) (81    95) (0     20) -25    5  -26    -93 1     19 16     23 7     3 3      18
EM-01692 (40    39) (37    25) (35    39) (88    95) 0     2 0      0 0     2 0      3
EM-01729 (85    91) (68    87) (95    97) (16    62) 99     137  -19    -15 0     28 0      76 3     78 2      27
EM-01762 (88    96) (25    56) (83    95) (9     27) -4     30  -64    -52 0     2 10     2 2     2 0      0
EM-01801 (32    79) (20    66)
EM-01807 (36    59) (22    32)
EM-01812 (89    95) (37    78)
EM-01813 (52    84) (14    32)
EM-1430 (93    92) (69    73) (66    93)
表格说明
第1栏为优选的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的口服生物利用度，用ng/mL.h表示，按下文中的“体内测定人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂”所述测定。最好数字较大。ND表示未测定。
第2栏为对人3型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度表示(IC50，nM)。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中。空白表示未测定。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第3栏为对人1型17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度(IC50，nM)表示。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中最好IC50值较高。空白表示未测定。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第4栏为对人2型17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度(IC50，nM)表示。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中。最好IC50数字较大。空白表示未测定。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第5栏为对人3型17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度(IC50，nM)表示。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中。最好IC50数字较小。空白表示未测定。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第6栏为对人1型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度(IC50，nM)表示。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中。最好IC50数字较大。空白表示未测定。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第7栏为对人5型17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制，用抑制50％酶活性的浓度(IC50，nM)(中间的数字)表示。其中测定IC50的方法描述于下文的“II-1，2，3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”中。最好IC50数字较小。当未测定IC50时，括号内为3.10-7M(左侧数字)和3.10-6M(右侧数字)抑制剂抑制酶活性的百分率。括号内为3.10-7和3.10-6M抑制剂抑制酶活性的百分率。
第8栏为优选的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的雄激素活性，用抑制剂浓度10-7M(左侧数字)和10-6M(右侧数字)刺激Shionogi细胞增殖的百分率表示。其中测定对细胞的刺激作用的方法描述于下文的“III-雄激素/抗雄激素活性”中。最好数字较小。ND表示未测定。
第9栏为优选的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的抗雄激素活性，用抑制50％DHT诱导的Shionogi细胞增殖的浓度(IC50，nM)(括号中间的数字)表示。还报告了抑制剂浓度10-7M(左侧数字)和10-6M(右侧数字)抑制DHT诱导的Shionogi细胞增殖的百分率。其中对细胞抑制作用的测定方法描述于“III-雄激素/抗雄激素活性”中。最好数字较小。ND表示未测定。
第10栏为优选的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的雌激素活性，用抑制剂浓度10-7M(左侧数字)和10-6M(右侧数字)刺激ZR-75-1细胞增殖的百分率表示。其中对细胞刺激作用的测定方法描述于“IV-雌激素/抗雌激素活性”中。最好数字较小。ND表示未测定。
第11栏为优选的3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的抗雌激素活性，用抑制剂浓度10-7M(左侧数字)和10-6M(右侧数字)抑制E2诱导的ZR-75-1细胞增殖的百分率表示。其中对细胞抑制作用的测定方法描述于“IV-雌激素/抗雌激素活性”中。最好数字较小。ND表示未测定。
第12栏为与雄激素受体的结合，用抑制剂浓度10-8M(星号数字为10-7M)(左侧数字)和10-6 M(星号数字为10-5)(右侧数字)抑制[3H]R1881结合的百分率表示。其中测定抑制百分率的方法描述于“V-雄激素受体(AR)测定”中。最好数字较小。
第13栏为与孕激素受体的结合，用抑制剂浓度10-8M(星号数字为10-7M)(左侧数字)和10-6M(星号数字为10-5)(右侧数字)抑制[3H]R5020结合的百分率表示。其中测定抑制百分率的方法描述于“VI-孕激素受体测定”中。最好数字较小。
第14栏为与糖皮质激素受体的结合，用抑制剂浓度10-8M(星号数字为10-7M)(左侧数字)和10-6M(星号数字为10-5)(右侧数字)抑制[6，7-3H*(N)]-地塞米松结合的百分率表示。其中测定抑制百分率的方法描述于“VII-糖皮质激素受体测定”中。
第15栏为与雌激素受体的结合，用抑制剂浓度10-8M(星号数字为10-7M)(左侧数字)和10-6M(星号数字为10-5)(右侧数字)抑制[3H]-E2结合的百分率表示。其中测定抑制百分率的方法描述于“VIII-雌激素受体(ER)测定”中。
                     优选抑制剂的效用 I-人类3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂的生物利用度的体内测定 1)原理
通过测定单次经口给予3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂后的血浆浓度在Sprague Dawley大鼠体内进行其生物利用度测定。在不同时间间隔的测量值大于或等于1.0ng/mL和小于或等于50ng/mL。a)动物和处理
雄性Sprague-Dawley大鼠[CrL：CD(SD)Br]重275-350g，得自Charles-River Canada Inc.，在环境适应期间每笼2只大鼠，试验期间每笼1只。将动物保持在12小时光照：12小时黑暗(在08：00时开灯)环境下。动物任意进食鉴定合格的大鼠饲料(Lab Diet #5002，颗粒)和自来水。给药前一个晚上大鼠开始禁食(只可以饮水)。
对三只动物经口管饲给予剂量为0.5mg/大鼠(1.0ml/大鼠)作为0.4％甲基纤维素悬浮液的每种待测化合物。每天测试4-8种新化合物，一组动物在相同条件下在每个给药日接受甲地孕酮醋酸盐(MGA)作为对照。在管饲后1、2、3、4和7小时在异氟烷诱导麻醉下从大鼠颈静脉取约0.7ml血液样本。将血液样本立即转移到含有DETA的冷藏的0.75ml Micrtainer中，并保持在冰水浴中直到以3000 rpm离心10分钟。收集血液后迅速(50分钟以内)分离血浆。然后将一等份0.25ml血浆转移到硼硅酸盐管(13×100)中，在干冰上迅速冷冻。将血浆样品保持于-80℃，然后用LCMS/MS检测所述抑制剂的血浆浓度。2)LCMS检测a)仪器
1.真空歧管
2.涡轮Vap LV蒸发器
3.具有相关外围设备的质谱仪API III或API-300(PE/Sciex)
4.自动注射器
5.HPLC泵
6.输注泵
7.校准吸移管b)试剂和溶液
1.甲醇，HPLC级
2.水，超纯(Super Q)
3.乙醇，试剂级
4.N-丁基氯，HPLC级
5.丙酮，HPLC级
6.雄性大鼠血浆(EDTA)
7.在参比标准乙醇溶液中3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂约100μg/mL
8.EM 248内标参比标准品(50ng/mL溶液)
9.质量校准溶液(mass calibrator solution)聚乙二醇(PE/Sciex)c)质谱条件
检测仪：质谱仪API-300(PE/Sciex)
界面：涡轮离子喷雾口(开口1/5)
辅流：4.5L/分钟(氮)
雾化流：11
幕气流(curtain gas flow)：11
探测温度：460℃
压力：约3×10-5托
CAD气体厚度：3
计数控制：1
流动相：甲醇和1mm甲酸铵以及水和1mm甲酸铵的梯度
流速：1mL/分钟d)EM-118的质谱分析参数
采样时间：150秒
间歇时间：30秒
持续时间：4分钟
MRM模式用于
EM-1118分析：444.2和398.3
注射：10μL
数据处理：“API标准软件”更新版e)标准溶液的制备
用甲醇制备每种3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂母液，不使用时，将所述甲醇溶液保藏于-20℃。如表1所述，用雄性大鼠血浆制备每种化合物的校准曲线标准溶液。
由保藏于-20℃的EM-248标准母液制备含有EM-248 50ng/mL的内标甲醇溶液。
3α-HSD抑制剂的浓度              溶液体积                         血浆体积
标准溶液50ng/mL                  90μl，μg/mL                     1.71mL
标准溶液20ng/mL                  0.8mL，50ng/mL                    1.2mL
标准溶液10ng/mL                  0.9mL，20ng/mL                    0.9mL
标准溶液5ng/mL                   0.8mL，10ng/mL                    0.8mL
标准溶液2ng/mL                   0.6mL，5ng/mL                     0.9mL
标准溶液1ng/mL                   0.5mL，2ng/mL                     0.5mL
标准溶液0ng/mL                   N/A                               0.5mL
        空白                     N/A                               0.5mLf)从大鼠血浆萃取3型抑制剂的方法
将等份的大鼠血浆(0.250mL)转移到13×100mm硼硅酸盐管。在每个样品中加入水(1.0mL)和内标溶液(0.1mL)，涡旋混合2分钟。在每个样品中加入N-丁基氯和丙酮(v∶v，7∶3)的混合物，并涡旋混合2分钟。重复该步骤，用涡轮Vap蒸发器在35℃、氮气下蒸发合并的有机相至干。用1mL甲醇复制残余物，用涡轮Vap蒸发器于35℃蒸发。将最终的萃取物复制入0.1mL甲醇/水(v/v，75∶25)中，然后转移入锥形瓶中，以注射入质谱仪。g)分析
通过分析6个不同5型抑制剂浓度(1、2、5、10、20和50ng/mL)的复份大鼠血浆样品，进行分析步骤。确定定量底限(LOQ)为1.0ng/mL。低于1.0ng/mL的值表示为低于定量界限(BLQ)。h)线性
发现EM-1118的分析方法在1.0-50ng/mL范围内是线性的。加权(1/X)线性回归分析获得相关性(R2)为0.991。i)AUC值的计算
对测试的所有化合物确定血浆浓度与时间曲线(AUC)在给药后0-7小时的曲线下面积。用线性梯形法(linear trapezoidal method)(与模型无关)计算每只大鼠的AUC0-7值，数据以平均值AUC0-7±SEM(n＝3)表示。II-1、2、3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定
酶来源 用磷酸钙法(Kingston等，Current Protocols in MolecularBiology，E.M.Ausbel，R.Brent，R.E.Kingston，D.D.Moore，J.G.Seidaman，J.A.Smith，K.Struhl.编辑，John Wiley & Sons，New York，第9.1.1-9.1.9页，1991；Luu-The等，J.Invest.Dermatol.，102：221-226，1994)，利用编码1、2和3型17β-HSD(Luu-The等，J.SteroidBiochem.Molec.Biol.，55：581-587，1995)、5型17β-HSD(描述于WO97/11162)以及1和3型3α-HSD(Dufort等，Biochem.Biophys.Res.Commun.228：474-479，1996)的表达载体瞬时转染293细胞。对于采用亚细胞部分测定，将细胞在50mM磷酸钠缓冲液(pH7.4)中进行超声处理，所述缓冲液含有20％甘油和1mM EDTA，分别以10 000×g离心30分钟，然后以100 000×g离心1小时分离线粒体部分和微粒体部分。胞质部分(100 000×g上清液)用于测定1型活性，而所述微粒体部分(100 000×g沉淀)用于测定2和3型17β-HSD活性。
孵育 在6孔培养板中新更换的培养基中缺乏或加入浓度逐渐增加的本发明优选抑制剂的情况下，在1ml含有20％甘油、1mMEDTA和2mM辅因子(NADPH或NAD+)的50mM磷酸钠缓冲液，pH7.4中，含有以下0.1μM 14C-标记底物于37℃进行酶反应1小时，所述底物为：1型17β-HSD的底物雌激素酮、3和5型17β-HSD的底物DHEA和4-雄甾烯-3，17-二酮(Δ4)、2型17β-HSD的底物睾丸激素以及1和3型3α-HSD活性的底物雄甾烷二酮和DHT。温育1小时后，用2ml乙醚萃取所述类固醇两次。合并有机相并蒸发至干。将所述类固醇溶解于50μl二氯甲烷，上样于硅胶60薄层层析(TLC)板(Merck，Darmstad，Germany)，然后用甲苯-丙酮(4∶1)溶剂系统展开分离。通过与参比类固醇比较鉴定底物和代谢产物，通过放射性自显影显示，用Phosphoimager System(Molecular Dynamics，Sunnyval，CA)定量。也可用HeLa、SW-13、293、COS-1细胞进行转染，优选的细胞系为293细胞。III-Shionogi活性
用Shionogi小鼠乳腺癌细胞检测了部分优选化合物的雄激素/抗雄激素活性。
材料  基本必需培养基(MEM)、非必需氨基酸和胎牛血清购自Flow Laboratories。为了去除内源性类固醇，将血清与1％活性炭(NoritA，Fisher)和0.1％Dextran T-70(Pharmacia)于4℃孵育过夜。于25℃再吸附2小时以进一步去除蛋白结合的类固醇。血清也可于56℃孵育20分钟灭活。5α-二氢睾丸激素(DHT)得自Steraloids。抗雄激素羟氟他胺(OH-FLU)由T.L.Nagabuschan和R.Neri博士(Schering Corporation，Kenilworth，U.S.A.)惠赠。
分散细胞、培养和克隆  带有雄激素敏感型乳腺肿瘤的Shionogi雄性小鼠由Keishi Matsumoto博士，Osaka，日本和Yvonne Lefebvre博士，Ottwa，加拿大提供。取出肿瘤并在冰冷无菌25 mM Hepes缓冲液(137mM NaCl；5mM KCl；0.7mM Na2HPO4；10mM葡萄糖，pH7.2)中洗涤，以用于原代培养。用剪刀剪碎组织，在含有3.8mg/ml胶原酶(Clostridium，Boehringer)、1.5mg/ml透明质酸酶II(Sigma)和3％牛血清白蛋白部分V(Schwartz-Mann)的Hepes缓冲液中于37℃消化肿瘤组织2小时。离心(500×g，10分钟)收集分散细胞，通过悬浮在含有5％葡聚糖包被、炭处理胎牛血清(DCC-FCS)、1％非必需氨基酸、10IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素和100 nM二氢睾丸激素(DHT)(Steraloids)的基本必需培养基(MEM)中洗涤两次。
将细胞以75 000细胞/ml密度平板培养在5％二氧化碳、37℃环境下的75cm2培养瓶的相同培养基中。每周更换培养基一次。将类固醇和抗类固醇溶解于乙醇中并保持在选定母液中，以使培养基中的乙醇终浓度低于0.01％。这样的乙醇浓度不会影响细胞生长。
通过在含有3mM乙二胺四乙酸(EDTA)(pH7.2)的0.1％胰酶(FlowLaboratories)的Hepes缓冲液中温和消化对接近融合的细胞进行传代。离心沉淀细胞，用培养基重悬浮，用Coulter计数器计数，如上所述再平板培养。在存在100nM DHT下如文献所述(Stanley等，Cell 10：35-44，1977)进行软琼脂集落培养。
测定类固醇和抗类固醇的细胞生长和敏感性  将细胞以20 000细胞/孔密度培养在24孔培养板中。在每3孔中加入指定增加浓度的药剂，使细胞生长10-12天，每3-4天更换一次培养基。通过用Coulter计数器直接计数细胞数。
计算和统计学分析  按照所述最小平方回归(Rodbard，Endocrinology 94：1427-1431，1974)计算DHT和糖皮质激素作用的ED50值。按照多极检验(multiple-range test)(Kramer，Biometrics 12：307-310，1956)计算统计学显著性。IV-雌激素/抗雌激素活性
已用ZR-71-1人乳腺癌细胞系测定部分优选化合物的雌激素/抗雌激素活性，见以下更详细的描述。
备用培养物的保持  ZR-75-1细胞(第83代)获自美国典型培养物收藏中心(Rockville，MD)，常规用含有1nM雌二醇(E2)、2mM L谷氨酰胺、1mM焦磷酸钠、15mM N-2-羟乙基哌嗪-N’-乙磺酸、10IU青霉素/ml、100μg链霉素/ml和10％(v/v)胎牛血清(Hyclone，Logan，UT)的无酚红RPMI 1640在95％空气、5％二氧化碳的湿化环境下，于37℃培养。所有培养基和培养基添加成分均购自Sigma。通过用含有EDTA(0.2g/L)的胰酶溶液处理每周传代细胞一次。用于本文所述试验的细胞培养物为89-94代细胞。
细胞增殖的测定  收获对数生长期细胞，简单离心，重悬浮在RPMI 1640中。然后将细胞以一式三份平板培养在LIMBRO 24-孔塑料培养板(2 cm2/孔)中。因为平板培养细胞密度影响激素对ZR-75-1细胞生长的影响，因此以1×104细胞/孔平板接种细胞。72小时后，在缺乏或存在0.1M雌二醇(E2)下用含有3.10-7和10-6M抑制剂浓度的新鲜培养基更换培养基。对照培养物只接受乙醇溶媒。然后使细胞于37℃生长10天，每2天更换一次培养基(组成相同)。缺乏抑制剂时，ZR-75-1细胞在含0.1M雌二醇(E2)的培养基中的倍增时间约48小时。
在E2和/或抗雌激素处理后，于37℃加入0.5ml胰酶溶液(Sigma)5-10分钟，然后加入含5％葡聚糖包被的无炭牛血清的0.5mlRPMI 1640以阻断酶作用，从而收获细胞。如前所述，通过测定DNA含量确定细胞数(0.10ml等份)(Simard等，Endocrinology 126：3223-3231，1990)。V-雄激素受体(AR)测定
组织准备  雄性Sprague-Dawley大鼠(Crl：CD(SD)Br)重200-300g，获自Charles-River Inc.(St-Constant，Québec，加拿大)。在全身麻醉(异氟烷)下切除大鼠性腺，24小时后颈脱臼处死大鼠。迅速取出腹部的前列腺，并使其与粘着组织游离解剖，在干冰上冷冻。前列腺保持在-80℃直到测定为止。
所有后续步骤于0-4℃进行。用Polytron PT-10匀浆器(BrinkmanInstruments，加拿大)，设定为5，处理三次，每次10秒，两次之间间隔10秒以便冷却，在5体积(重量/体积)缓冲液A(25 mM Tris-HCl，1.5mM EDTA二钠盐，10mM α-一硫代甘油，10％甘油和10mM钼酸钠，pH7.4)中匀浆前列腺。然后用Beckman L5-65超速离心机(Fullerton，CA)以105,000×g离心匀浆60分钟。按照Bradford方法(Anal.Biochem.72：248-254，1976)用牛血清白蛋白作为标准品检测胞质部分的蛋白浓度。
雄激素受体测定  利用羟基磷灰石测定法(HAP)测定雄激素结合。简而言之，将溶解于乙醇中的放射性类固醇[3H]R1881稀释入缓冲液A中。然后在存在或缺乏指定浓度的未标记化合物(0.1ml，用含有10％乙醇的缓冲液A制备)下将等份前列腺胞质制备物(0.1ml)与8nM[3H]R1881(0.1ml，～200,000cpm)于0-4℃孵育16-18小时。加入丙炎松(150nM)以遮蔽孕激素受体。通过与用缓冲液P(50mM，Tris-HCl，10mM KH2PO4，pH7.4)如下制备的0.3ml HAP于0-4℃孵育40分钟分离未结合的类固醇：用缓冲液P洗涤10g HAP直到上清液pH达到7.4为止，然后在离心和倾析上清液后加入37.5ml缓中液P。在与HAP孵育并以1,000×g离心10分钟后，用1ml缓冲液P洗涤沉淀3次。再后通过与1ml乙醇在室温下孵育60分钟从所述沉淀萃取放射性。离心后，将上清液倾入闪烁瓶，用乙醇再萃取沉淀一次。之后在合并的上清液中加入10ml Formula-989闪烁液，用Beckman计数器测定放射性。
计算  以抑制剂浓度10-8和10-6M时抑制[3H]R1881结合的百分率报告结果。VI-孕激素受体测定
化学物质 [17α-甲基-3H]-孕激素(R5020)(84Ci/mmol)和相应的未标记化合物购自New England Nuclear(Lachine，Québec，加拿大)。所有其它化学物质均分析级。
未标记类固醇母液用乙醇保持在4℃。然后用含有30％乙醇的缓冲液B(10mM Tris-HCl，1.5mM EDTA，10mMα-一硫代甘油，pH7.4)经适当稀释制备需要的类固醇溶液。
组织准备  雄性Sprague-Dawley大鼠重200-300g，获自Charles-River Inc.(St-Constant，Québec，加拿大)。在全身麻醉(异氟烷)下切除大鼠性腺，24小时后颈脱臼处死大鼠。迅速取出子宫，并使其与粘着组织游离解剖，在干冰上冷冻。将组织保持在-80℃备用。
胞质准备  所有步骤于4℃进行。用Thermovac粉碎机在干冰上冷冻粉碎组织。然后用Polytron PT-10匀浆器(Brinkman Instruments，加拿大)，设定为5，处理两次，每次10秒，两次之间间隔10秒以便冷却，在10体积(重量/体积)缓冲液A(25mM Tris-HCl，1.5mM EDTA，10mM α-一硫代甘油，10％甘油和10mM钼酸钠，pH7.4)中匀浆样品。然后以105,000×g离心匀浆90分钟。上清液立即用以测定。
结合测定  利用葡聚糖包被的炭吸附技术测定孕激素结合。在0-4℃用100μl胞质、100μl[3H]-R5020(5nM终浓度，其含有1,000nM的地塞米松以便遮蔽糖皮质激素受体)和100μl指定浓度的未标记化合物孵育16-18小时。每一浓度以一式三份进行。用300μlDCC(1％NoritA和0.1％Dextran T-70的缓冲液B)结束测定。孵育10分钟后，各管以2,000×g离心10分钟，并倾入装有6ml BCS液体闪烁液(NewEngland Nuclear，Dupont)的管形瓶中。用Beckman计数器以35％计数效率测定放射性。
计算  以抑制剂浓度10-8和10-6M时抑制[3H]R5020结合的百分率报告结果。VII-糖皮质激素受体测定
化学物质 [6，7-3H(N)]-地塞米松(39Ci/mmol)购自New EnglandNuclear(Lachine，Québec，加拿大)，而未标记的地塞米松获自Steraloids(Wilton，NH)。所有其它化学物质均为分析级。
未标记类固醇母液用乙醇保持在4℃。然后用含有30％乙醇的缓冲液B(10mM Tris-HCl，1.5mM EDTA，10mMα-一硫代甘油，pH7.4)经适当稀释制备需要的类固醇溶液。
组织准备  雄性Sprague-Dawley大鼠重200-300g，获自Charles-River Inc.(St-Constant，Québec，加拿大)。颈脱臼处死大鼠并迅速取出肝脏，并使其与粘着组织游离解剖，在干冰上冷冻。将组织保持在-80℃备用。
胞质准备  所有步骤均于4℃进行。剪碎组织并用Polytron PT-10匀浆器(Brinkman Instruments，加拿大)，设定为5，处理两次，每次10秒，两次之间间隔10秒以便冷却，在10体积(重量/体积)缓冲液A(25mM  Tris-HCl，1.5mM EDTA，10mMα-一硫代甘油，10％甘油和10mM钼酸钠，pH7-4)中匀浆。然后以105,000×g离心匀浆90分钟。上清液立即用以测定。
结合测定  利用葡聚糖包被的炭吸附技术测定糖皮质激素结合。用100μl胞质、100μl[3H]-地塞米松(5nM终浓度)和100μl指定浓度的未标记化合物于0-4℃孵育16-18小时。每一浓度进行一式三份。用300μlDCC(2.5％Norit A和0.25％Dextran T-70的缓冲液B)结束测定。孵育10分钟后，各管以2,000×g离心10分钟，并倾入装有6ml BCS液体闪烁液(New England Nuclear，Dupont)的管形瓶中。用Beckman计数器以35％计数效率测定放射性。
计算  以抑制剂浓度10-8和10-6M时抑制[3H]-地塞米松结合的百分率报告结果。VIII-雌激素受体(ER)测定
组织准备 雌性Sprague-Dawley大鼠(Crl：CD(SD)Br)重200-300g，获自Charles-River Inc.(St-Constant，Québec，加拿大)。在全身麻醉(异氟烷)下切除大鼠性腺，24小时后颈脱臼处死大鼠。迅速取出子宫，并使其与粘着组织游离解剖，在干冰上冷冻。子宫保持在-80℃直到测定为止。
所有后续步骤于0-4℃进行。用Polytron PT-10匀浆器(BrinkmanInstruments，加拿大)，设定为5，处理三次，每次10秒，两次之间间隔10秒以便冷却，在10体积(重量/体积)缓冲液A(25mM Tris-HCl，1.5mM EDTA二钠盐，10mMα-一硫代甘油，10％甘油和10mM钼酸钠，pH 7.4)中匀浆子宫。然后用Beckman L5-65超速离心机(Fullerton，CA)以105,000×g离心匀浆60分钟。按照Bradford方法(Anal.Biochem.72：248-254，1976)用牛血清白蛋白作为标准品检测胞质部分的蛋白浓度。
利用前述葡聚糖包被的炭吸附技术(Asselin等，Endocrinology，101：666-671，1977；Asselin和Labrie，J.Steroid Biochem.，9：1079-1082，1978)测定雌激素结合。简而言之，将溶解于乙醇中的[3H]E2稀释入缓冲液A中。然后在存在或缺乏指定浓度的未标记化合物(0.1ml，用含有10％乙醇的缓冲液A制备)下将等份子宫胞质制备物(0.1ml)与5nM[3H]E2(～200,000cpm，0.1ml)在室温下孵育3小时。然后通过与0.3ml0.5％Norit-A和0.05％Detran T-70的缓冲液B(1.5mM EDTA二钠盐，10mM一硫代甘油和10mM Tris-HCl，pH7.4)于0-4℃孵育15分钟分离未结合的类固醇，并以3,000×g离心15分钟。取出等份上清液(0.3ml)进行放射性测定。加入10ml Formula-989闪烁液(New EnglandNuclear-DuPont)后，用Beckman计数器以计数效率62％测定放射性。
计算  以抑制剂浓度10-8和10-6M时抑制E2结合的百分率报告结果。
选择优选抑制剂的主要标准包括生物利用度、对3型3α-羟基类固醇脱氢酶和5型17β羟基类固醇脱氢酶的所需要的抑制作用、不需要的对2型17β羟基类固醇脱氢酶的抑制程度和抗雄激素活性。人们认为EM 01645和EM 01667以及类似化合物的5’位的甲基增强对5型17β-HSD抑制作用(相对于不需要的对2型的抑制作用)的选择性。人们还认为3位的游离羟基与2位取代具有同样有益的作用。
本申请人测试了广泛化合物作为3型3α-HSD抑制剂的效果。根据本实验室工作，我们认为本文所述的一些分子结构特征为本发明的类固醇化合物提供了有益的特征。例如我们认为芳香A环和为羟基或常见的在体内转化为羟基的前体药物基团的3位部分是使得当同时在2位和/或4位适当取代时对3型3α-HSD具有良好抑制作用的特征。2和/或4位的取代基优选独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(前提是2和4位取代基不能同时为氢)。在2位具有良好作用的取代基往往在4位也具有良好作用，反之亦然。从产生的角度来看同时在2和4位进行相同的取代更容易，而且我们测试的该型化合物往往为3型3α-HSD的良好抑制剂。
本申请人还发现当具有D-环取代基时，例如类固醇核16或17位的本文所述取代基，3型3α-HSD抑制剂具有更好的选择性。选择性是指优选的D-环取代基、尤其是17位的所述取代基往往抑制本发明抑制剂和例如不需要抑制的酶或不需要激活的受体之间的相互作用。测试的某些参数(均为需要和不需要的)见本文中其表号后面具有撇号(’)的表格。(另外参见所述表格下面的详细解释)。从表中看出，本发明的优选化合物有效抑制3型3α-HSD活性同时基本上避免了本申请人对相同化合物测试的许多不需要活性。例如合适的D-环取代基往往减少不需要的雄激素或雌激素活性。我们发现17-螺-内酯和17α-苄基取代基对3型3α-HSD提供良好的选择性。并不是要求保护本文所讨论的所有3型3α-HSD化合物，因为其中部分化合物还对5型17β-HSD具有良好的活性，而它们在本申请人另外针对这种独立活性的专利申请中要求保护。“体外”抑制3型3α-HSD使4-雄甾烯二酮(4-二酮)转化为睾丸激素(T)
利用抑制DHT转化为雄甾烷-3α，17β-二醇，初步确定对3型3α-HSD的抑制作用，如在上文的“II-1、2、3和5型17β-HSD以及1和3型3α-HSD的酶测定”所述并报告于表1和2的第2栏。为了完成该数据，某些优选抑制剂对3型3α-HSD将4-雄甾烯二酮(4-二酮)转化为睾丸激素(T)的抑制作用在表3和4中报告。
3型3α-HSD将4-雄甾烯二酮(4-二酮)转化为睾丸激素(T)的酶测定
酶来源：
纯化在大肠杆菌中表达完成的人3型3α-HSD。通过PCR扩增人3型3α-HSD的编码区，并插入pGEX-1λT(Amersham Pharmacia Biotech，Inc.，Québec，加拿大)载体中，以产生与谷胱甘肽-S-转移酶的融合蛋白。3型3α-HSD在大肠杆菌表达完成，经谷胱甘肽-琼脂糖4B亲和柱(Amersham Pharmacia Biotech)纯化，按生产商所述用凝血酶裂解融合蛋白。
孵育：在终体积为1ml的50mM磷酸钠缓冲液(pH7.5)、20％甘油、1mMEDTA和0.1μM[14C]-标记类固醇和1 mM NADPH中孵育纯化酶。孵育2小时后，用1ml乙醚萃取所述类固醇两次。合并有机相并蒸发至干。将所述类固醇溶解于50μl二氯甲烷，上样于硅胶60 TLC板(Merck，Darmstad，Germany)，然后用甲苯-丙酮(4∶1)溶剂系统展开分离。通过与参比类固醇比较鉴定底物和代谢产物，通过放射性自显影显示，用Phosphoimager System(Molecular Dynamics，Sunnyval，CA)定量。
                         表3
  实验名称   对3型3α-HSD将4-二酮转化为T的抑制百分率E-7       E-6
  EM-1124     98     99
  EM-1125     72     88
  EM-1126     82     95
  EM-1131     80     97
  EM-1667c     39     91
  EM-1645     65     91
见表1的结构
                                           表4
Figure A9981173900661
  名称   R2   R4   R16α   R16β   R17α   R17β 对3型3α-HSD将4-二酮转化为T的抑制百分率％
    E-7     E-6
 EM-1926   NC-     H   CH3    CH3     H    -OH     94     97
 EM-2060   NC-     H     H     H     H   -OC2H5     88     99
 EM-2200    H    -CN     H     H          ＝O     80     97
 EM-2132   NC-     H     H     H   -C3H7    -OH     92     99
 EM-2318   NC-     H     H     H   -Ph    -OH     90     97
 EM-2150   NC-     H   -CH2Ph     H          ＝O     83     99
 EM-2330   NC-     H     H     H     H   -CONH2     90     98
 EM-2359   NC-     H     H     H  CH2Φ(p-t-Bu)    -OH     79     98
在上述表格的化合物中最优选化合物的分子结构如下：
Figure A9981173900671
Figure A9981173900681
               优选抑制剂的合成实施例
本文中的IR谱用Perkin-Elmer 1600系列FT-IR分光光度计获得。质子NMR谱用Brucker AC-F 300仪器记录获得。使用以下缩小：s，单峰；d，双峰；dd，两个双峰；t，三重峰；q，四重峰；和m，多重峰。参照氯仿(对于1H为7.26ppm，对于13C为77.00ppm)的化学位移(δ)，并以ppm表示。用Jasco DIP 360旋光计在室温下测定旋光度。质谱(MS)用V.G.Micromass 16F机器获得。薄层层析(TLC)在0.25mm Kieselgel 60F254板(E.Merck，Darmstadt，FRG)上进行。对于快速层析使用Merck-Kieselgel 60(230-400目A.S.T.M.)。除非另有说明，原料和反应物在市面购买获得，直接使用或用标准方法纯化后使用。所有纯化干燥的溶剂和反应物均保藏于氩气下。在惰性环境即氩气下调定装配的冷却环境下进行无水反应。有机溶液经硫酸镁干燥，经旋转蒸发器减压蒸发。原料和试剂获自Aldrich Chemical Company，Inc.(Milwaukee，Wisconsin)。缩写一览表
DHP                      3，4-二氢-2H-吡喃
EDTA                     乙二胺四乙酸
HPLC                     高压液相层析
PTSA                     对甲苯磺酸
THF                      四氢呋喃
THP                      四氢吡喃
TMS                      四甲基甲硅烷基
                           实施例1
     合成2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-17-螺-δ-内酯衍生物
这些化合物的合成按流程1所述进行。
                    流程1
a.NaNO2，HNO3，AcOH b.TBDMSCL，咪唑 c.HCC(CH2)2OTHP，MeLi d.H2，Pd/CaCO3 e.5％HCl，MeOH f.琼斯试剂 g.LDA，Met实施例1A3-羟基-2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-17-酮(2a)该标题化合物的制备按Stubenrauch和Knuppen所述方法进行。该方法如下所述。
将雌酮(1，18.004g，66.6mmol)溶解于煮沸的醋酸(540mL)，并使其冷却至50℃。由70％硝酸(4.5mL，70mmol)、水(10mL)和少量硝酸钠晶体制备硝化混合物，温热到50℃并在搅拌下滴加至雌酮溶液中。在室温下搅拌过夜后，经抽吸过滤黄色沉淀物，由92％醋酸水溶液重结晶。因此获得为浅黄色固体的4-硝基衍生物(6.800g，32％)。IR(v)3227(OH)，2931，2864，1723(C＝O)，1626，1584，1523，1458，1404，1374，1295，1264，1245，1211，1169，1085，1062，1027，954，930，908，881，823，796，719，654，588，556，530，494cm-1；1H NMR(吡啶-d5)δ0.85(3H，s，18’-CH3)，2.85(2H，d，6’-CH2)，5.00(1H，s，OH)，7.11(1H，d，J＝8.7Hz，2’-CH)，7.26(1H，d，J＝8.7Hz，1’-CH)；13C NMR(吡啶-d5)δ13.8(C-18)，21.6(C-15)，24.4(C-11)，25.7(C-7)，26.2(C-12)，32.0(C-6)，35.9(C-16)，37.7(C-8)，44.0(C-14)，47.9(C-13)，50.1(C-9)，115.4(C-2)，128.4(C-1)，129.0(C-10)，131.8(C-5)，148.4(C-3)，219.2(C-17)。
减压蒸发上述反应物滤液，用乙醇/水8.5∶1.5重结晶残留物。获得的棕色固体(7.854g)进一步经二氧化硅柱(乙酸乙酯/己烷，8-20％梯度)快速层析，获得纯净化合物2a(6.284g，30％)的黄色固体。IR(n)：3300(OH)，2933，2864，1737(C＝O)，1630，1562，1522，1480，1431，1372，1311，1252，1216，1146，1084，1054，1035，1008，905，832，762，722，662，600，520cm-1；1H NMR(吡啶-d5)δ0.85(3H，s，18’-CH3)，2.76(2H，d，6’-CH2)，4.99(1H，s，OH)，6.98(1H，s，4’-CH)，7.96(1H，s，1’-CH)；13CNMR(吡啶-d5)δ13.8(C-18)，21.7(C-15)，25.8(C-11)，26.1(C-7)，29.6(C-12)，31.9(C-6)，35.9(C-16)，37.8(C-8)，43.5(C-14)，47.9(C-13)，50.3(C-9)，119.8(C-4)，122.2(C-1)，132.8(C-10)，147.8(C-2)，152.6(C-3)，219.1(C-17)。
实施例1B
3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-17-酮(2b)将2-硝基-雌酮(2a，1.118g，3.55mmole)、咪唑(0.670g，9.84mmole)和TBDMSCl(0.781g，5.18mmole)的无水DMF(50mL)溶液在Ar(g)下搅拌过夜。然后将混合物倾入冰/水(80mL)上。过滤白色沉淀物，用水洗涤，然后真空干燥获得(2b)浅黄色粉末(1.447g，95％)。[a]D 25+123.9°(c1.03，CHCl3)；IR(NaCl)2933，2860，1736(s，C＝O)，1617，1561，1518，1492，1408，1351，1291，1256，1054，909，832，790，697cm-1；1H NMRδ0.24(6H，s，Si(CH3)2)，0.92(3H，s，18-CH3)，1.01(9H，s，SiC(CH3)3)，1.40-1.78(6H，m)，1.90-2.35(5H，m)，2.37-2.60(2H，m)，2.90(2H，m，6-CH2)，6.67(1H，s，4-CH)，7.76(1H，s，1-CH)；13C NMRδ220.2，147.2，143.8，139.6，133.3，122.6，122.1，50.3，47.9，43.6，37.8，35.8，31.3，29.4，26.1，25.7，25.6，21.5，18.2，13.8，-4.4。实施例1C3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-17β-羟基2-硝基-17α-(4’-(2”-四氢-2”H-吡喃氧基)-丁炔基)-1，3，5(10)-雌三烯(3)  在四氢-2-(丁炔氧基)-2H-吡喃(1.71mL，10.91mmole)的无水THF(75mL)搅拌溶液中，于Ar(g)、35℃下滴加MeLi 1.4M的乙醚(7.80mL，10.92mmole)溶液。将溶液搅拌45分钟，然后于-35℃加入酮2b(1.294g，3.01mmole)的无水THF(20mL)溶液。75分钟后，向反应混合物中加入冰(20g)和饱和碳酸氢钠水溶液(70mL)并用乙酸乙酯萃取水相。用盐水洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤，然后真空浓缩。粗制品黄色油经二氧化硅(40g，2∶8乙酸乙酯/己烷)纯化获得黄色泡沫状物的化合物3(1.617g，92％)。[a]D 25-57.5°(c 0.72，CHCl3)；IR(NaCl)3423(宽峰，OH)，2936，2870，2366，1654，1630，1578，1560，1527，1481，1458，1438，1313，1268，1121，1080，1032，899，869，761，669cm-1；1H NMRδ0.23(6H，s，Si(CH3)2)，0.87(3H，s，18-CH3)，1.00(9H，s，SiC(CH3)3)，1.20-2.35(20H，m)，2.55(2H，t，J＝6.9Hz，CCCH2)，2.84(2H，m，6-CH2)，3.55(2H，m，链的CH2O)，3.85(2H，m，THP的CH2O)，4.65(1H，m，THP的CH)，6.65(1H，s，4-CH)，7.76(1H，s，1-CH)；13C NMRδ147.0，144.2，139.5，133.9，122.6，122.0，98.8，84.5，83.4，79.8，65.8，62.2，49.4，47.1，43.2，38.9，32.6，30.6，29.6，26.7，26.2，25.6，25.4，22.8，20.4，19.4，18.2，12.7，-4.4。实施例1D3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-17β-羟基-2-硝基-17α-(4’-(2”-四氢-2”H-吡喃氧基)-丁基)-1，3，5(10)-雌三烯(4)  将化合物3(2.00g，3.42mmol)和5％Pd/CaCO3(400mg)的无水甲醇(400mL)溶液在H2(g)环境(气球)下搅拌1小时。然后将混合物通过C盐过滤，旋转蒸发滤液。残余物经硅胶(2∶8乙酸乙酯/己烷)纯化获得白色泡沫状固体的化合物4(1.483g，74％)。[a]D 25+31.3°(c 0.90，CHCl3)；IR(NaCl)3458(宽峰，OH)，2935，2860，1616，1563，1518(NO2)，1491，1408，1348(NO2)，1291，1256，1119，1070，1023，925，893，832，784，672cm-1；1H NMR δ0.23(6H，s，Si(CH3)2)，0.91(3H，s，18-CH3)，1.00(9H，s，SiC(CH3)3)，1.20-2.38(26H，m)，2.85(2H，m，6-CH2)，3.48(2H，m，链的CH2O)，3.83(2H，m，THP的CH2O)，4.59(1H，m，THP的CH)，6.65(1H，s，4-CH)，7.75(1H，s，1-CH)；13C NMRδ146.9，144.1，139.4，134.0，122.4，121.9，98.9，83.2，67.6，67.6，62.4，49.3，46.6，36.3，34.1，31.3，30.7，30.3，29.5，26.9，26.0，25.5，25.4，23.3，20.4，19.6，18.1，14.3，-4.4。实施例1E17α-(4’-羟基丁基)-3，17β-二羟基-2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯(5)将化合物4(300mg，0.510mmol)的5％盐酸的甲醇(10mL)溶液在室温而且在氩气下搅拌12小时。然后将反应混合物倾入碳酸氢钠/冰上，减压蒸发甲醇，用乙酸乙酯萃取水相，用盐水洗涤合并的有机层，经硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干。获得粗制品黄色泡沫状物(198mg，100％)。经快速层析(用二氯甲烷装柱，然后用乙酸乙酯/二氯甲烷2∶8，4∶6，1∶1，6∶4，9∶1洗脱)纯化获得黄色固体的化合物82(127.0mg，64％)。Rf0.21(8∶2乙酸乙酯/己烷)；M.p.184-6℃；[a]D 26+58.8°(c 1.00，CHCl)；IR(v)3335，2934，2865，1735，1719 1654，1630，1576，1522，1479，1434，1373，1305，1266，1169，1112，1067，1033，1000，896，874，762，659cm-1；1H NMR δ0.90(3H，s)，3.69(2H，d，J＝5.7Hz)，6.84(1H，s)，7.98(1H，s)，10.42(1H，s)；13C NMRδ14.3，19.8，23.3，26.1，26.8，29.8，31.2，33.3，34.3，36.1，39.0，43.2，46.5，49.4，61.7，62.8，83.4，118.8，121.4，131.6，133.7，149.2，152.8。实施例1F2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(6’-氧代)四氢吡喃(EM-1124)在0℃向化合物5(128mg，0.33mmole)的无水丙酮(25mL)的搅拌溶液中缓慢加入第一个1.1相当量的琼斯试剂(1.25M，0.29mL，0.80mmol)。然后搅拌橙色溶液0.5小时，再后加入第二个相当量的琼斯试剂。再搅拌黑色溶液0.5小时，再后用异丙醇猝灭(形成绿色沉淀物)。搅拌该混合物10分钟。然后通过C盐过滤，旋转蒸发滤液。将残余物溶解于乙酸乙酯中，然后用饱和碳酸氢钠水溶液、水、盐水洗涤，干燥(硫酸镁)，过滤，旋转蒸发。粗制品固体在二氧化硅(3∶7乙酸乙酯/己烷)上经快速层析纯化获得黄色固体的EM-1124(108mg，85％)。M.p.213℃；[a]25 D+90.0°(c 0.70，CHCl3)；IR(NaCl)3198，2934，2876，2245，1720(s，C＝O，内酯)，1630，1577，1522，1480，1434，1378，1314，1267，1234，1199，1169，1151，1120，1070，1036，1024，992，914，851，759，732，662，585cm-1；1H NMRδ 1.02(3H，s，18-CH3)，1.20-2.23(16H，m)，2.25-2.65(3H，m)，2.90(2H，m，6-CH2)，6.85(1H，s，4-CH)，7.97(1H，s，1-CH)，10.41(1H，s，OH苯酚)；13C NMRδ171.9，152.8，148.9，133.3，131.7，121.5，118.9，93.0，48.8，47.1，43.1，38.4，33.9，31.6，29.7，29.4，27.9，26.8，25.8，23.4，15.8，14.2。实施例1G2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’-甲基-6’-氧代)四氢吡喃(EM-1126，EM-1131)  如下制备LDA：在-78℃、Ar(g)下，向二异丙胺(92μL，71mg，0.70mmol)的无水THF(5mL)搅拌溶液中加入n-BuLi(1.2M/己烷，580μL，0.68mmol)，然后于0℃搅拌该溶液25分钟，再后冷却至-78℃。加入EM-1124(66mg，0.17mmol)的无水THF(5mL)溶液，然后搅拌生成的深橙色溶液30分钟。加入无水HMPA(2mL)，15分钟后加入MeI(107μL，243mg，1.71mmol)。然后再搅拌所述溶液4小时。用饱和氯化铵水溶液猝灭反应并用乙酸乙酯萃取。用1M硫酸铜水溶液(4×)、水、1M亚硫酸钠水溶液、盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)，过滤，然后旋转蒸发获得粗制固体(103mg)。在二氧化硅(1∶9→2∶8乙酸乙酯/己烷)上经快速层析纯化首先获得EM-1126(11mg，16％)，紧接着获得EM-1131(34mg，34％)，两者均为黄色固体。EM-1126：M.p.204-6℃；[a]25 D+73.4°(c 1.67，CHCl3)；IR v 3422(br，OH)，2937，2874，1725(vs，CO)，1630，1577，1525，1479，1458，1432，1378，1311，1269，1249，1205，1188，1150，1118，1088，1071，1007，990，934，896，760，731，668，585，495cm-1；1H NMRδ1.03(3H，s)，1.30(3H，d，J＝7.1Hz)，1.31-1.77(10H，m)，1.89-2.03(5H，m)，2.15(1H，td，J＝7.1Hz，J’＝5.0Hz)，2.30-2.50(2H，m)，2.90(2H，dd，J＝8.3Hz，J’＝4.9Hz)，6.85(1H，s)，7.98(1H，s)，10.43(1H，s，OH)；13C NMRδ174.8，152.9，149.0，133.4，131.7，121.5，118.9，93.4，48.7，47.1，43.1，38.5，36.2，34.6，31.6，29.7，28.6，26.9，25.9，25.2，23.4，17.4，14.4。EM-1131(EM-1126的5’-差向异构体，未测定真正构型)：M.p.206-8℃；[a]25 D+62.6°(c 0.68，CHCl3)；IR v 3422(br，OH)，3192，2934，2876，2858，2824，1721(vs，CO)，1631，1578，1522，1482，1458，1436，1377，1314，1271，1237，1204，1173，1120，1103，1082，1051，1019，1002，933，901，877，860，759，663，638，600，495cm-1；1H NMRδ1.01(3H，s)，1.24(3H，d，J＝7.0Hz)，1.31-1.80(10H，m)，1.89-2.20(6H，m)，2.35(1H，br s)，2.55(1H，六重峰，J＝7.5Hz)，2.89(2H，t，J＝5.2Hz)，6.84(1H，s)，7.96(1H，s)，10.41(H，s，OH)；13C NMRδ175.8，152.8，148.9，133.3，131.6，121.4，118.8，92.5，77.4，77.0，76.6，48.5，47.0，43.0，38.4，33.8，33.4，31.6，29.7，27.16，26.7，25.8，243，23.6，17.2，14.3。实施例1H2-硝基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(EM-1125)  如下制备LDA：在-78℃、Ar(g)下，向二异丙胺(206μL，159mg，1.57mmol)的无水THF(12 mL)搅拌溶液中加入n-BuLi(1.2M/己烷，1.28mL，1.53mmol)，然后于0℃搅拌该溶液20分钟，再后冷却至-78℃。加入EM-1126和EM-1131(153mg，0.38mmol)的无水THF(10mL)混合溶液，然后搅拌生成的深橙色溶液20分钟。加入无水HMPA(4.7mL)，15分钟后加入MeI(238μL，544mg，3.83mmol)。然后再搅拌所述溶液5分钟，之后温热至-30℃，再搅拌1小时。用饱和氯化铵水溶液猝灭反应并用乙酸乙酯萃取。用盐水(6×)、水、1M亚硫酸钠水溶液、盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)，过滤，然后旋转蒸发获得粗制液体。在二氧化硅(1∶9→2∶8乙酸乙酯/己烷)上经快速层析纯化获得EM-1125(82mg，52％)的黄色固体。M.p.195-7℃；[a]25 D+72.8°(c 1.61，CHCl3)；IR v 3421(br，OH)，3194，2954，2927，2873，1718(vs，CO)，1631，1578，1523，1476，1458，1438，1386，1312，1298，1271，1204，1151，1118，1059，1032，1016，931，898，872，855，758，663，595cm-1；1H NMRδ1.02(3H，s)，1.28(6H，s)，1.32-1.77(10H，m)，1.85-2.15(6H，m)，2.36(1H，br s)，2.89(2H，dd，J＝8.2Hz，J’＝4.9Hz)，6.85(1H，s)，7.97(1H，s)，10.42(1H，s，OH)；13C NMRδ177.7，152.8，149.0，133.3，131.7，121.5，118.9，93.4，48.6，47.1，43.1，38.5，37.8，34.7，31.6，31.5，29.7，27.7(4)，27.6(8)，26.7，25.9，25.5，23.3，14.4。
                           实施例2合成2-氰基-1，3，5(10)-雌三烯-30’-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四
                          氢吡喃(13)
                           流程2
Figure A9981173900771
3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17-酮(7)按照Pelletier等(Steroids 59：536-547，1994)所述方法由雌酮(6)制备该醚。3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-17β-羟基-17α-{4’-(2”-四氢-2”H-吡喃基)丁炔-1’-基}-1，3，5(10)-雌三烯(8)于0℃向HC≡C(CH2)2OTHP(18.3mL，117mmol)的无水THF(600mL)溶液中滴加正丁基锂(43.7mL，109mmol)，搅拌该混合物90分钟。将混合物冷却至-78℃，滴加TBDMS-雌酮7(15g，39mmol)的THF(500mL)溶液。然后使该反应混合物降至室温，再搅拌15小时。蒸发溶剂至1/2体积，加入水200mL。用乙酸乙酯(3×200mL)萃取该混合物，用盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)并蒸发至干。用己烷/乙酸乙酯(9/1)作为洗脱剂经硅胶柱层析纯化残余物获得15.1g(72％)所述产物；IR(NaCl cm-1)3432，2934，2858，1607，1495，1287，1256，1033，958，839；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.12(d，1H，J＝8.4Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.4，8.4Hz)，6.54(d，1H，J＝2.2Hz)，4.66(br.s.，1H)，3.89-3.79(m，2H)，3.56-3.50(m，2H)，2.79(br.s.，2H)，2.56(t，2H，J＝7.0Hz)，2.35-2.17(m，3H)，2.07-1，23(m，17H)，0.98(s，9H)，0.87(s，3H，18-Me)，0.19(s，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.3，137.8，133.0，126.1，119.9，117.1，98.7，84.7，83.2，80.0，65.8，62.1，49.5，47.2，43.7，39.4，39.0，32.9，30.6，29.7，27.3，26.4，25.7，25.4，22.8，20.3，19.3，18.1，12.8，-4.4。3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基17β-羟基-17α-{4’-(2”-四氢-2”H-吡喃基)丁炔-1’-基}-1，3，5(10)-雌三烯(9)在室温下向链炔8(15.1g，28mmol)的乙酸乙酯(500mL)溶液中加入5％活性炭载钯(1.5g，10％重量)。向烧瓶中充入氢气3次(真空后充入氢气)，然后在1个大气压的氢气下搅拌。反应后进行TLC。3小时后，通过C盐塞过滤该混合物，减压去除溶剂。将粗产物直接用于下一步骤而不用再纯化；IR(NaCl cm-1)3474，2935，2858，1607，1570，1496，1471，1286，1257，1156，1137，1119，1033，954，839，780；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.12(d，1H，J＝8.4Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.1，8.4Hz)，6.55(s，1H)，4.59(br.s，1H)，3.92-3.73(m，2H)，3.55-3.38(m，2H)，2.82-2.77(m，2H)，2.30-1.33(m，26H)，0.97(s，9H)，0.90(s，3H，18-Me)，0.18(s，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.27，137.81，133.08，126.02，119.87，117.06，(98.90，98.84)，83.38，67.61，62.33，49.50，46.67，43.81，39.58，36.35，34.28，31.60，30.75，30.36，29.62，27.51，26.26，25.67，25.47，23.37，20.45，19.66，18.12，14.35，-4.43。3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基17β-羟基-17α-(4’-羟基丁炔-1’-基)-1，3，5(10)-雌三烯(10)在THP醚9(15.1g，28mmol)的甲醇(400mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(150mg，0.8mmol)，搅拌反应5小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)，在旋转蒸发器中蒸发溶剂体积至一半。用二氯甲烷萃取该混合物，用盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)并蒸发至干。将粗产物直接用于下一步骤而不需要进一步纯化；IR(NaCl cm-1)3356，2931，2858，1608，1496，1471，1286，1256，954，839，780；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.12(d，1H，J＝8.5Hz)，6.61(dd，1H，J＝2.5，8.5Hz)，6.55(s，1H)，3.69(br.d，2H，J＝5.2Hz)，2.82-2.78(m，2H)，2.35-2.26(m，1H)，2.20-1.94(m，2H)，1.90-1.81(m，1H)，1.62-1.22(m，17H)，0.98(s，9H)，0.90(s，3H，18-Me)，0.19(s，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.27，137.81，133.05，126.02，119.89，117.09，83.59，62.56，49.50，46.69，48.81，39.58，35.98，34.32，33.20，31.61，29.62，27.51，26.26，25.68，23.37，19.74，18.14，14.36，-4.40。3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(6’-氧代)四氢吡喃(11)  于4℃，在二醇10(12.5g，27mmol)的丙酮(500mL)溶液中滴加2.7M琼斯试剂(15.1mL，41mmol)溶液。搅拌反应物30分钟。加入2-丙醇(100mL)，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液(200mL)。蒸发溶剂至1/2体积，用乙酸乙酯萃取该混合物。用盐水洗涤有机相，干燥(硫酸镁)并减压浓缩。用己烷/丙酮(6/1)经硅胶柱层析纯化残留物，获得8.6g内酯。(3步骤的得率为68％)；IR(NaCl，cm-1)：2960，2930，2857，1732，1607，1496，1284，1264，1244，1037，958，840；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.11(d，1H，J＝8.4Hz)，6.61(dd，1H，J＝2.3，8.4Hz)，6.56(s，1H)，2.85-2.79(m，2H)，258-2.39(m，2H)，2.38-2.25(m，1H)，2.21-2.10(m，1H)，2.03-1.27(m，15H)，1.02(s，3H，18-Me)，0.97(s，9H)，0.18(s，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ172.00，153.36，137.63，132.62，126.02，119.92，117.19，93.25，48.88，47.26，43.68，39.05，33.98，31.96，29.50，29.48，27.94，27.46，25.98，25.67，23.48，18.12，15.87，14.30，-4.43。3-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(12)在氩气下的1L干燥烧瓶中将内酯11(8.6g，19mmol)溶解于无水THF(300mL)中，并冷却至0℃。滴加1MLiHMDS(47.3mL，47.3mmol)溶液。于0℃搅拌混合物15分钟，冷却至-78℃，然后加入甲基碘(5.9mL，79mmol)。在此温度下搅拌反应物1小时，然后在2小时内使其温热至室温。加入氯化铵(200mL)饱和水溶液，用乙酸乙酯萃取混合物。用亚硫酸钠饱和水溶液、盐水洗涤有机层，干燥(硫酸镁)，减压浓缩。用己烷/丙酮(5/1)作为洗脱剂通过柱层析纯化残余物，获得7.4g(81％)二甲基化合物；IR(NaCl，cm-1)：2954，2930，2858，1725，1496，1287，1258，1150，1137，956，840；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.11(d，1H，J＝8.5Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.4，8.5Hz)，6.55(d，1H，J＝2.1Hz)，2.81-2.78(m，2H)，2.36-2.28(m，1H)，2.20-1.38(m，，16H)，1.28(s，3H)，1.27(s，3H)，1.02(s，3H，18-Me)，0.97(s，9H)，0.18(s，6H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ177.79，153.33，137.62，132.62，132.62，125.99，119.90，117.14，93.66，48.67，47.24，43.65，39.06，37.74，34.79，31.96，31.56，29.50，27.73，27.61，27.42，26.01，25.65，25.55，23.26，18.11，14.42，-4.43。1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(13)于0℃，在甲硅烷基醚12(7.1g，14.7mmol)的THF(300mL)溶液中滴加1M TBAF(17.6mL，17.6mmol)溶液，搅拌所述反应物15分钟。加入冰水(200mL)沉淀所述化合物。将烧瓶置于旋转蒸发器上减少THF体积，然后将其置于冰浴上。过滤收集沉淀物，用冷水洗涤，在烘箱(30℃)中干燥24小时，获得5.4g(100％)3-OH化合物；IR(NaCl，cm-1)：3357，2932，2871，1695，1287，1158；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.14(d，1H，J＝8.4Hz)，6.63(dd，1H，J＝2.6，8.4Hz)，6.55(d，1H，J＝2.6Hz)，4.62(br.s.，1H，OH)，2.81-2.79(m，2H)，2.38-2.29(m，1H)，2.20-1.81(m，5H)，1.76-1.31(m，11H)，1.29(s，3H)，1.28(s，3H)，1.01(s，3H，18-Me)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ178.06，153.52，138.08，132.19，126.42，115.26，112.74，93.80，48.69，47.29，43.65，39.14，37.81，34.84，31.98，31.61，29.53，27.76，27.64，27.39，26.12，25.59，23.29，14.43。
                             实施例3
                        合成EM-01667
                            流程3
Figure A9981173900811
3-羟基-2-苯基亚硒基(selenenyl)-雌-1，3，5(10)-三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(14)在Ar(g)下将3-羟基-雌-1，3，5(10)-三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(406mg，1.10mmol)(13)和苯基亚硒酰氯(253mg，1.32mmol)的无水三氯甲烷(24mL)溶液在0℃下搅拌1小时，然后在室温下过夜。将生成的黄色溶液倾入冰/水中，然后用二氯甲烷(3×)萃取。干燥合并的有机相(棉塞)，然后旋转蒸发获得粗制泡状物固体。用1∶9乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂通过快速层析(二氧化硅)纯化获得7(353mg，61％)和4-异构体(86mg，15％)。化合物7：[a]25 D+77.7°(c 1.14，CHCl3)；IR v 3366，3050，2965，2928，2869，1709，1603，1576，1550，1458，1438，1384，1349，1310，1294，1262，1202，1157，1141，1114，1065，1017，984，892，845，736，689，665，593，555，498，460cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.02(3H，s)，1.27(9)(s，3H)，1.28(4)(s，3H)，1.27-1.80(11H，m)，1.88-2.28(6H，m)，2.87(2H，t，J＝4.8Hz)，6.24(1H，s，OH)，6.80(1H，s)，7.21(5H，br s)，7.52(5H，s)ppm；13C NMR(CDCl3)δ14.4，23.3，25.5，26.1，27.2，27.6，27.7，29.5，31.5，31.8，34.7，37.7，38.9，43.4，47.2，48.6，93.6，111.6，114.7，126.5，129.2(6)，129.3(4)，131.2，133.3，134.7，141.4，154.4，177.8ppm。2-氯-3-羟基-雌-1，3，5(10)-三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(EM-01667)在Ar(g)、0℃下，将14(116mg，0.22mmol)和N-氯琥珀酰胺(44mg，0.33mmol)的无水三氯甲烷(15mL)溶液搅拌30分钟。将所述溶液倾倒在冰/水上，然后用二氯甲烷(3×)萃取。干燥(棉塞)合并的有机相后，旋转蒸发获得粗制固体。用1∶29→1∶19乙酸乙酯/甲苯作为洗脱剂经快速层析(二氧化硅)纯化获得EM-01667(51mg，57％)，为白色固体。Rf0.28(3∶7乙酸乙酯/己烷)；m.p.241℃；[a]25 D+62.6°(c 1.09，CDCl3)；IR(v)3253(br.，OH)，2936，2873，1685(CO)，1608，1501，1458，1418，1388，1314，1300，1263，1223，1160，1016，987，884，844，737，673，598cm-1；1H NMR(CDCl3)δ1.01(3H，s)，1.28(6H，s)，1.25-1.75(11H，m)，1.85-2.28(6H，m)，2.80(2H，dd，J’＝8.7Hz，J”＝3.9Hz)，5.33(1H，br s，OH)，6.73(1H，s)，7.19(1H，s)ppm；13CNMR(CDCl3)(δ)14.4，23.3，25.6，26.1，27.2，27.7，27.8，29.0，31.6，31.8，34.8，37.8，38.8，43.4，47.2，48.6，93.6，116.0，117.1，125.6，133.5，137.1，149.0，177.8ppm。
                         实施例4
                    合成EM-01728
                        流程4
Figure A9981173900821
17-苄基-1，3，5(10)雌三烯-3，17β-二醇(15)
在Ar(g)、0℃下，在雌酮(5.0g，18.5mmol)的无水THF(200mL)溶液中加入苯基氯化镁(2 M的THF，65mL)并搅拌该溶液过夜。于0℃加入氯化铵饱和水溶液并用二氯甲烷萃取(3次)，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，然后蒸发。所述产物经快速层析(RP-C18，30∶30∶40-10∶30∶60，水/甲醇/CH3CN)获得为白色固体的1(4.0g，60％)和雌酮(1.5g，30％回收率)。化合物1：Rf：0.25(2∶98，甲醇/二氯甲烷)；IR(v)3284，2926，2856，1725，1686，1655，1606，1561，1499，1439，1378，1343，1321，1286，1252，1221，1156，1082，1029，1016，930，915，888，872，820，786，732，700，646，586 cm-1；1H NMR(CD3OD)(δ)0.94(3H，s，H18)，1.32-2.35(13H，m)，2.67(1H，d，J＝13.5Hz，CH-Ph)，2.78(2H，m，H6)，2.87(1H，d，J＝13.5Hz，CH-Ph)，6.49(1H，d，J＝2.4Hz，H4)，6.56(1H，dd，J＝8.3Hz，J’＝2.5Hz，H2)，7.10(1H，d，J＝8.3Hz，H1)，7.18-7.30(5H，m，Ph)ppm；13C NMR(CD3OD)(δ)15.3，24.1，27.7，28.8，30.8，32.4，32.8，41.4，43.6，45.2，50.9，84.5，113.7，116.1，126.9，127.2，128.7，132.3，136.6，138.8，140.3，155.9ppm。17-苄基-2-苯基亚硒基(selenyl)-1，3，5(10)雌三烯-3，17β-二醇(16)
于0℃下在1(508mg，1.40mmol)的甲醇/三氯甲烷(1∶10，33mL)搅拌溶液中加入PhSeCl(322mg，1.68mmol)。2小时后，橙色溶液变为黄色溶液，将其倾倒在冰/水上，用二氯甲烷萃取，干燥(硫酸镁)，过滤，然后蒸发。粗制固体经快速层析(二氧化硅，1∶29乙酸乙酯/甲苯)获得为淡棕色固体的2(456mg，63％)和4-苯基亚硒基异构体(71mg，10％)。化合物2：1H NMR(δ)1.00(3H，s，H18)，1.30-2.38(14H，m)，2.82(2H，dd，J＝78.1Hz，J’＝13.2Hz，CH2-Ph)，2.90-2.93(2H，m，H6)，6.26(1H，br s，OH)，6.85(1H，s，H1)，7.21-7.38(10H，m)，7.59(1H，s，H4)；13C NMR(δ)14.5，23.4，26.4，27.4，29.7，31.3，33.7，39.4，42.4，43.7，46.7，49.5，82.9，111.5，114.7，126.3，126.5，128.1，129.2，129.3，131.0，131.3，133.7，134.8，138.2，141.6，154.4ppm。17-苄基-2-氯-1，3，5(10)雌三烯-3，17β-二醇(EM-01728)
于0℃、A(r)g下在2(155mg，0.30mmol)的三氯甲烷(15mL)搅拌溶液中加入N-氯琥珀酰胺(48mg，0.36mmol)。1小时后，与化合物2一样处理反应物，并经快速层析(二氧化硅，1∶29→1∶19乙酸乙酯/甲苯)纯化获得白色固体(74mg，62％)的EM-01728。Rf 0.18(1∶19乙酸乙酯/甲苯)；M.p.220℃；[a]25 D+74.8°(c 0.96，丙酮-d6)；IR(v)3544(OH)，3284(br，OH)，3023，2931，2849，1601，1497，1454，1338，1285，1257，1201，1084，1015，979，918，885，796，755，702，675，642，560，532，504cm-1；1H NMR(CD3OH)(δ)0.95(3H，s，H18)，1.33-1.75(15H，m)，2.68(1H，d，J＝15.5Hz，CH-Ph)，2.76(1H，dd，J＝8.3Hz，J’＝3.6Hz，H6)，2.88(1H，d，J＝15.5Hz，CH-Ph)，6.60(1H，s，H4)，7.16(1H，s，H1)，7.17-7.31(5H，m，Ph)ppm；13C NMR(丙酮-d6)(δ)15.2，24.0，27.3，28.3，29.9，32.1，33.5，40.7，43.5，44.6，48.0，50.3，83.6，117.5，118.3，126.6，127.5，128.5，132.2，134.2，137.8，140.6，151.3ppm。
                             实施例5
                    合成EM-01831和EM-01832
                            流程5
Figure A9981173900841
16，16-二甲基-3-甲氧基-1，3，5(10)-雌三烯-17-酮(17)
于Ar(g)、室温下在3-甲氧基-雌-1，3，5(10)三烯-17-酮(10.00g，35mmol)的无水THF(500mL)中加入NaH(60％的油，2.55g，105mmol)和碘甲烷(22mL，350mmol)。将溶液回流过夜。然后加入更多的NaH(2.55g，105mmol)和碘甲烷(22mL，350mol)，再将所述溶液回流24小时。用乙醇(100mL)，然后用冰水(300mL)骤冷获得的溶液。用乙酸乙酯(2×300mL)萃取该溶液，用盐水洗涤(2×300mL)，经硫酸镁干燥，减压蒸发获得黄色固体。用乙酸乙酯/己烷(1∶19)作为洗脱剂在硅胶上经快速层析纯化，获得3(10.19g，93％)，为白色固体。IR(v)2933，2869，1731(CO)，1609，1502，1467，1382，1315，1258，1240，1153，1037，1020，902，850，816，781cm-1；1H NMR(δ)0.94(3H，s，H18)，1.09(3H，s，16-Me)，1.22(3H，s，16-Me)，1.40-2.42(11H，m)，2.90(2H，dd，J＝8.0Hz，J’＝3.3Hz，H6)，3.79(3H，s，OMe)，6.65(1H，d，J＝2.7Hz，H4)，6.73(1H，dd，J＝8.4Hz，J’＝2.7Hz，H2)，7.21(1H，d，J＝8.5Hz，H1)ppm；13CNMR(δ)14.4，25.8，26.0，26.7，27.3，29.7，32.3，37.6，37.9，44.2，45.3，47.2，49.0，55.2，111.5，113.9，126.3，132.2，137.7，157.6，225.1ppm。16，16-二甲基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17-酮(18)
将3-甲氧基-雌-1，3，5(10)三烯-17-酮-16-二甲基即17(6.00g，19mmol)和碘代三甲基硅烷(27mL，190mmol)的无水二氯甲烷(1000mL)溶液在At(g)下回流过夜。将生成的溶液倾倒在冰/水(600mL)上，用二氯甲烷(3×600mL)萃取，经硫酸镁干燥，过滤，然后减压蒸发。用乙酸乙酯/甲苯(1∶9)作为洗脱剂在硅胶上通过快速层析纯化粗制的棕色固体，获得白色固体4(3.50g，62％)。IR(v)3361(br.s.，OH)，3027，2923，2876，1860(w)，1717(CO)，1620，1584，1499，1460，1355，1286，1248，1152，1099，1023，909，875，816，787，735，647，571，516cm-1；1HNMR(δ)0.91(3H，s，H18)，1.06(3H，s，16-Me)，1.18(3H，s，16-Me)，1.23-2.35(11H，m)，2.81(2H，t，J＝4.5Hz，H6)，6.56(1H，d，J＝2.3Hz，H4)，6.62(1H，dd，J＝8.5Hz，J’＝2.6Hz，H2)，7.09(1H，d，J＝8.4Hz，H1)ppm；13C NMR(δ)14.4，25.7，25.8，26.6，27.1，29.4，32.2，37.5，37.8，44.0，45.3，47.1，49.1，112.7，115.2，126.2，131.3，137.7，154.2，226.3ppm。16，16-二甲基-2-苯基亚硒基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17-酮(19)
于0℃在18(2.00g，6.70mmol)的甲醇/三氯甲烷(1∶10，550mL)搅拌溶液中加入PhSeCl(1.56g，8.15mmol)。在室温下搅拌该反应混合物过夜。然后将生成的黄色溶液倾倒到冰/水(500mL)中，用二氯甲烷(2×500mL)萃取，经硫酸镁干燥，过滤，然后减压蒸发。用乙酸乙酯/甲苯(0.3∶9.7)在硅胶上通过快速层析纯化产物，获得白色泡沫状物的5(2.44g，80％)和2-氯异构体(100mg，5％)。化合物5：1H NMR(δ)0.94(3H，s，H18)，1.08(3H，s，16-Me)，1.21(3H，s，16-Me)，1.24-2.36(11H，m)，2.92(2H，dd，J＝8.4Hz，J’＝3.6Hz，H6)，6.21(1H，s，OH)，6.82(1H，s，H4)，7.17-7.23(5H，m，Ph)，7.54(1H，s，H1)ppm。2-氯-16，16-二甲基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17-酮(EM-01831)
在室温以及Ar(g)下，在5(680mg，1.50mmol)的无水三氯甲烷(200mL)的搅拌溶液中加入N-氯琥珀酰胺(246mg，1.84mmol)。然后于-30℃搅拌该混合物1小时。用饱和氯化铵水溶液(300mL)猝灭反应，用二氯甲烷(2×300mL)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，然后减压蒸发。用甲醇/乙酸乙酯/己烷(0.5∶1∶9)作为洗脱剂通过快速层析纯化粗产物，获得黄色固体EM-01831(178mg，33％)。IR(v)3321(br，s，OH)，2922，2853，1724(CO)，1606，1502，1468，1414，1380，1340，1260，1215，1019，885，830，738，673，626cm-1；1H NMR(δ)0.93(3H，s，H18)，1.08(3H，s，16-Me)，1.21(3H，s，16-Me)，1.26-1.35(11H，m)，2.84(2H，dd，J＝9.0，J’＝4.3Hz，H6)，5.33(1H，s，OH)，6.75(1H，s，H4)，7.20(1H，s，H1)ppm；13C NMR(δ)14.4，25.7，26.0，26.5，27.3，29.0，32.2，37.5，37.6，43.9，45.3，47.1，49.0，116.0，117.2，125.7，133.4，137.0，149.1，225.0ppm。2-氯-16，16-二甲基-1，3，5(10)-雌三烯-3，17β-二醇(EM-01832)
在-78℃、Ar(g)下向EM-01831(200mg，0.60mmol)的无水THF(20mL)的搅拌溶液中加入LiAlH4(33mg，0.86mmol)。在24小时内使反应物温度缓慢地回升至室温。使反应物冷却至0℃，加入更多的LiAlH4(23mg，0.60mmol)，再搅拌混合物2小时。用1M罗谢尔盐水溶液(50mL)骤冷反应混合物，然后用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用盐水(50mL)洗涤有机层，经硫酸镁干燥，过滤，然后减压蒸发。用乙酸乙酯/甲苯(1∶19)作为洗脱剂在硅胶上经快速层析纯化纯化产物，获得白色固体EM-01832(145mg，72％)。IR(v)3557(s，OH)，3388(s，OH)，3186(br，s，OH)，2921，2861，1602，1576，1486，1454，1430，1409，1382，1344，1256，1207，1128，1069，1029，981，880，798，733，677，584，534cm-1；1H NMR(δ)0.81(3H，s，H18)，1.01(3H，s，16-Me)，1.06(3H，s，16-Me)，1.24-2.20(11H，m)，2.74(2H，dd，J＝8.4Hz，J’＝3.7Hz)，3.23(1H，s，H17)，6.59(1H，s，H4)，7.13(1H，s，H1)ppm；13C NMR(δ)11.5，25.3，26.2，27.2，29.1，32.3，37.7，37.9，39.0，41.2，43.8，45.4，46.8，89.8，115.9，117.0，125.7，134.0，137.3，148.9ppm。
                          实施例52-氰基-1，3，5(10)-雌三烯-17-螺-(二甲基-δ-内酯)的3-羟基衍生物
                         流程5 实施例5A2-甲酰基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(20)将内酯13(1.0g，2.72mmol)在氩气氛下溶解于无水1，2-二氯乙烷(9mL)中。连续加入SnCl4(0.16mL，1.37mmol)和Bu3N(0.52mL，2.18mmol)。在室温下搅拌该混合物20分钟。加入甲醛(0.23g，7.84mmol)，并在回流下搅拌该混合物6小时。将反应混合物倾倒入酸水溶液(pH＝2)中，用二氯甲烷萃取。用盐水溶液洗涤有机层，干燥(硫酸钠)，过滤，真空浓缩。用(95∶5-80∶20)己烷-丙酮洗脱，在硅胶上经快速层析纯化粗产物，获得0.74g(69％)所述产物；IR(NaCl，cm-1)：3164，2937，2872，1716，1652，1571，1487，1466，1386，1298，1152，1017，914，731；1H NMR(CDCl3)1.00(s，3H)，1.26(s，6H)，1.23-2.40(m，17H)，2.80-2.90(m，2H)，6.66(s，1H)，7.39(s，1H)，9.79(s，1H)，10.77(s，1H)；13C NMR(CDCl3)δ14.3，23.2，25.4，25.9，26.8，27.6，27.7，30.0，31.4，31.6，34.6，37.7，38.6，42.9，47.0，48.5，93.4，116.9，118.9，130.3，132.2，147.8，159.2，177.7，196.0。实施例5B2-羟亚氨基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(21)在氩气氛下，将化合物20(215mg，0.54mmol)的无水乙醇-吡啶1-1(4mL)溶液用羟基胺盐酸盐(56.6mg，0.814mmol)处理并在室温下搅拌25分钟。蒸发该反应混合物，用水稀释，用二氯甲烷萃取3次。用盐水洗涤合并的有机相，经硫酸钠干燥，过滤，蒸发获得肟113(217mg，98％)；1H NMR(300MHz，CDCl3)1.02(s，3H)，1.29(s，6H)，1.43-1.70(m，10H)，1.89-2.12(m，6H)，2.22-2.37(m，1H)，2.80-2.87(m，2H)，6.69(s，1H)，7.05(s，1H)，8 15(宽峰，s，1H)，8.20(s，1H)，9.61(s，1H)。实施例5C3-乙酰氧基-2-氰基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(22a)将化合物21(180mg，0.44mmol)和乙酸酐(125μl，1.32mmol)的吡啶(3.5mL)溶液回流1小时。蒸发该反应混合物，用二氯甲烷稀释并水洗涤3次、用饱和碳酸氢钠洗涤1次以及用盐水洗涤1次。有机相经硫酸镁干燥，过滤并蒸发。通过快速层析(二氯甲烷到二氯甲烷-乙酸乙酯19-1)纯化粗混合物，获得乙酸酯22a(145mg，76％)：IR(CHCl3)2933，2872，2229，1773，1718，1613，1494，1183cm-1；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.02(s，3H)，1.28(s，6H)，1.34-1.89(m，11H)，1.94-2.33(m，6H)，2.37(s，3H)，2.89-2.94(m，2H)，6.95(s，1H)，7.55(s，1H)。实施例5D2-氰基-1，3，5(10)-雌三烯-3-醇-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(22b)用10％碳酸钾(0.5mL)处理化合物22a(60mg，0.14mmol)的甲醇(5mL)溶液，并搅拌30分钟。用1N盐酸酸化该反应混合物至pH2，用二氯甲烷萃取3次。用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，过滤，蒸发。在乙醇水溶液中重结晶粗混合物，获得所述酚22b(28mg，52％)。IR(CDCl3)3334，2932，2868，1692，1312，1206，1159cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.97(s，3H)，1.29(s，6H)，1.26-2.14(m，16H)，2.21-2.28(m，1H)，2.82-2.86(m，2H)，6.69(s，1H)，6.91(s，1H)，7.35(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ 14.41，23.30，25.62，26.92，27.69，27.78，29.84，31.62，31.79，34.82，37.84，38.70，43.18，47.23，48.67，93.52，97.01，116.29，116.69，129.44，133.69，144.86，155.73，177.88。实施例5E3-烷氧基-2-氰基-1，3，5(10)-雌三烯-17(R)-螺-2’-(5’，5’-二甲基-6’-氧代)四氢吡喃(22c)在氩气氛下将化合物22b、烷基碘(5 equiv)和碳酸铯(1.5equiv)的无水乙腈(1％W/V)悬浮液搅拌16小时，必要时回流。用盐水骤冷反应混合物并用二氯甲烷萃取3次。用盐水洗涤合并的有机相，经硫酸镁干燥，过滤，蒸发。通过快速层析(二氯甲烷到二氯甲烷-乙酸乙酯10-1)和重结晶(甲醇)纯化粗混合物，获得化合物22c(例如EM-1396，R＝(CH2)2OCH3，75％)：IR(CDCl3)3013，2941，2881，2229，1710，1610，1500，1304，1136cm-1；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.01(s，3H)，1.28(s，6H)，1.20-1.75(m，10H)，1.80-2.20(m，6H)，2.20-2.35(m，3H)，2.80-2.95(m，2H)，3.47(s，3H)，3.79(t，J＝4.8Hz，2H)，4.17(t，J＝4.8Hz，2H)，6.67(s，1H)，7.44(s，1H)；13C NMR(75MHz，CDCl3)δ14.41，23.25，25.58，25.90，26.96，27.66，27.74，30.24，31.59，31.78，34.79，37.80，38.68，43.16，47.20，48.60，59.55，68.78，70.71，93.43，99.55，112.80，116.98，130.72，133.31，144.09，158.29，177.70。实施例6
Figure A9981173900911
                   药用组合物实施例
以下所述的是利用优选的活性化合物EM-2330(3型3α-HSD抑制剂)的几种药用组合物，这仅仅是举例说明而不是限制本发明。本发明的其它化合物或其组合物可代替(或除此之外)EM-02318和EM-02200。活性成分的浓度可以与本文所述的优选剂量的宽范围一致，而且取决于优选的给药频度。其中可使用的其它成分的数量和类型是本领域周知的。
              实施例A
        适用于注射的组合物
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     0.4
    乙醇     6.4
    氯化钠     0.8
    水     91.5
    苄醇     0.9
              实施例B
     适宜用作局部应用洗剂的组合物
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     1.0
    乙醇     70.0
    聚乙二醇     29.0
                 实施例C
       适宜用作局部应用凝胶的组合物
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     1.0
    羟丙基纤维素     1.5
    乙醇     70.0
    聚乙二醇     27.5
                实施例D
                片剂
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     1.0
    明胶     5.0
    乳糖     67.5
    淀粉     26.5
              实施例E
             明胶胶囊
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     2.0
    含水乳糖     80.0
    淀粉     4.8
    微晶纤维素     12.8
    硬脂酸镁     0.4
                实施例F
      适宜用作局部应用凝胶的组合物
    成分   重量％(按组合物总重量计)
    EM-2330     1.0
    乙醇     4.0
    聚乙二醇     4.0
    明胶     1.0
    氯化钠     0.9
    苄醇     1.0
    水，USP     88.1
其它3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂可替代上述制剂中的EM-2330。在某些实施方案中，可以同时包含两种或多种3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂，(或一种3型3α-HSD抑制剂加上一种5型17β-HSD抑制剂)，在此情况下两种抑制剂的总重量百分比优选2倍于以上单独使用EM-2330的实施例所述的剂量，同时相应减少最主要赋形剂(例如水、乳糖、乙醇等)的重量百分比。其它本文优选组合的活性成分可以相似的方式加入。
用优选实施方案和实施例描述了本发明，但是本发明不受其限制。本领域技术人员容易了解只受限于本文权利要求书的更广泛的本发明适用性和范围。

Claims (79)

1.在需要这种抑制作用的患者抑制4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素或抑制5α-雄甾烷-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素的方法，它包括给予所述患者有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂。
2.权利要求1的方法，它还包括给予5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂。
3.抑制人3型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的方法，它包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂，该抑制剂具有以下分子结构：
其中所述虚线为任选π键；
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)。
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β为羟基酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R16α和R16β独立选自氢、低级烷基和苄基，或R16α和R16β一起构成C5-C6环烯。
4.权利要求3的方法，其中所述人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂具有以下分子结构：
Figure A9981173900031
其中n为1-2的整数；
其中所述虚线为独立的任选π键；
其中X和Y独立选自-H、(C1-C3)烷基和(C2-C3)链烯基。
5.权利要求4的方法，其中R3为羟基。
6.权利要求4的方法，其中X或Y至少有一个为甲基。
7.权利要求4的方法，其中X和Y均为甲基。
8.权利要求4的方法，其中R2为氯或氰基。
9.权利要求3的方法，其中所述人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂具有以下分子结构：
Figure A9981173900032
其中或者：
i)R17β为羟基，R17α为选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，而R16α和R16β为氢；或者
ii)R17β为羟基，R17α为氢，而R16α和R16β为低级烷基、苄基或者它们一起为C5-C6环烷；或者
iii)R17α和R17β一起为羰基氧，而R16α和R16β为低级烷基、苄基或者它们一起为C5-C6环烷。
10.权利要求9的方法，其中R17α为苄基。
11.权利要求10的方法，其中R3为羟基。
12.权利要求10的方法，其中R2为氯或氰基。
13.抑制人3型3α-羟基类固醇脱氢酶活性的方法，它包括对需要这种抑制剂的患者给予有效治疗量的选自以下的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶抑制剂：
Figure A9981173900051
Figure A9981173900061
Figure A9981173900071
14.测定推定的抑制剂抑制4-雄甾烯-3，17-二酮转化为睾丸激素以及5α-雄甾烷-3，17-二酮转化为二氢睾丸激素的效能的方法，它包括测定在存在所述推定抑制剂的情况下3型3α-羟基类固醇脱氢酶的活性，以及确定效能与相对于缺乏所述推定抑制剂的所述脱氢酶活性的所述活性降低的关系。
15.权利要求14的方法，其中所述方法包括以下步骤：
a)为用重组载体转化或转染的重组宿主细胞提供培养基，所述载体含有启动子序列和编码人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的核苷酸序列；
b)在所述培养基中加入所述推定抑制剂和底物，在缺乏所述抑制剂的情况下所述底物被3型3α-羟基类固醇脱氢酶转化；和
c)测定所述转化作用。
16.药用组合物，它含有药学上可接受的稀释剂或载体和有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂，该抑制剂具有以下分子结构：
Figure A9981173900072
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)；
其中所述虚线为任选π键；
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β选自羟基、酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧。
17.权利要求16的药用组合物，其中R17α为苯基或丙基。
18.权利要求16的药用组合物，其中R3为羟基。
19.权利要求16的药用组合物，其中R2为氯或氰基。
20.药用组合物，它含有药学上可接受的稀释剂或载体和治疗上可接受量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂，该抑制剂具有以下分子结构：
其中R100选自氢、羧基、酰氨基、C1-C5烷基、卤基、硝基、羟基和C1-C3烷氧基。
21.药用组合物，它含有药学上可接受的稀释剂或载体和治疗上可接受量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂，该抑制剂选自：
Figure A9981173900091
22.人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂，该抑制剂具有以下分子结构：
Figure A9981173900101
其中R3为选自以下的部分：C1-C20烷氧基、C1-C10酰氧基、C1-C20烷氧基羰氧基、C1-C20烷氧基烷氧基、羟基、(N-烷基或-H)氨基甲酸酯和体内转化为羟基的部分；
其中R2和R4独立选自氢、氰基、氟基、氯基、溴基和硝基(其中R2和R4不能同时为氢)；
其中所述虚线为任选π键；
其中R17α选自氢、选自以下的基团取代的C2-C14碳部分：氢、卤素、羧基、酰氨基、C1-C3烷氧基和C1-C5烷基，或者R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R17β选自羟基、酰氧基、烷氧基、链烯氧基、(N-烷基或H)酰氨基；或R17α和R17β一起构成C5-C7内酯环或为羰基氧；
其中R16α和R17β独立选自氢、低级烷基和苄基，或者R16α和R16β一起构成C5-C6环烯。
23.权利要求22的抑制剂，其中R17α为苯基或丙基。
24.权利要求22的抑制剂，其中R3为羟基。
25.权利要求22的抑制剂，其中R2为氯或氰基。
26.人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂，该抑制剂具有以下分子结构：
Figure A9981173900111
其中R100选自氢、羧基、酰氨基、C1-C5烷基、卤基、硝基、羟基和C1-C3烷氧基。
27.治疗或减小发生前列腺癌风险的方法，它包括对需要这种治疗或减小这种风险的患者给予有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制剂，而不是17内酯衍生化合物。
28.权利要求27的方法，它还包括给予有效治疗量的人5型17β-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂。
29.权利要求27的方法，其中治疗前列腺癌而且还包括给予有效治疗量的LHRH激动剂(或拮抗剂)，以有效减少睾丸分泌类固醇性激素。
30.权利要求28的方法，其中治疗前列腺癌，所述抑制剂还包括给予有效治疗量的LHRH激动剂(或拮抗剂)，以有效减少睾丸分泌类固醇性激素。
31.权利要求29的方法，它还包括给予治疗有效量的抗雄激素物质。
32.权利要求30的方法，它还包括给予治疗有效量的抗雄激素物质。
33.权利要求27的方法，它还包括给予有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
34.权利要求28的方法，它还包括给予有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
35.权利要求29的方法，它还包括给予有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
36.权利要求30的方法，它还包括给予有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
37.权利要求31的方法，它还包括有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
38.权利要求32的方法，它还包括有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
39.权利要求27的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
40.权利要求28的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
41.权利要求29的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
42.权利要求30的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
43.权利要求31的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
44.权利要求32的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
45.权利要求35的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
46.权利要求36的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
47.权利要求37的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
48.权利要求38的方法，它还包括有效治疗量的3型17β-羟基类固醇脱氢酶。
49.权利要求27的方法，它还包括有效治疗量的抗雄激素物质。
50.治疗或减小发生良性前列腺增生风险的方法，它包括对需要这种治疗或减小这种风险的患者给予有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制剂，而不是给予17-内酯衍生化合物。
51.权利要求50的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂。
52.权利要求50的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的选自抗雌激素物质或芳香酶抑制剂的药物。
53.权利要求51的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的选自抗雌激素物质或芳香酶抑制剂的药物。
54.权利要求52的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
55.权利要求53的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
56.权利要求54的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
57.权利要求55的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
58.权利要求52的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
59.权利要求53的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
60.权利要求52的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂和抗雌激素物质或芳香酶抑制剂。
61.权利要求53的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂和抗雌激素物质或芳香酶抑制剂。
62.权利要求52的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂、抗雄激素物质和抗雌激素物质或芳香酶抑制剂。
63.权利要求53的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂、抗雄激素物质和抗雌激素物质或芳香酶抑制剂。
64.治疗或减小发生前列腺炎风险的方法，它包括对需要这种治疗或减小这种风险的患者给予有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制剂。
65.权利要求64的方法，它还包括给予有效治疗量的人5型17β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂。
66.权利要求64的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
67.权利要求65的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
68.权利要求64的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
69.权利要求65的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
70.权利要求66的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
71.权利要求67的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
72.治疗或减小发生痤疮、皮脂溢、多毛症或雄激素性脱发风险的方法，它包括对需要这种治疗或减小这种风险的所述患者给予有效治疗量的人3型3α-羟基类固醇脱氢酶的人5型17β-羟基类固醇脱氢酶活性的抑制剂而不是给予17-内酯衍生化合物。
73.权利要求72的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的人5型17β-羟基类固醇脱氢酶的抑制剂。
74.权利要求72的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
75.权利要求73的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的抗雄激素物质。
76.权利要求72的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
77.权利要求73的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
78.权利要求74的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
79.权利要求75的方法，它还包括给予所述患者有效治疗量的5α-还原酶抑制剂。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101698834B (zh) * 2009-09-08 2012-05-23 北京利德曼生化股份有限公司 3α-羟基类固醇脱氢酶及其核苷酸序列、重组载体、重组宿主细胞和试剂盒
CN101821253B (zh) * 2007-08-31 2013-07-17 安斯泰来制药有限公司 哌啶衍生物
CN104873520A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 天津药物研究院 一种11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂、药用组合物及其用途
CN104873525A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 天津药物研究院 一种11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂及其药用组合物和用途

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5504074A (en) 1993-08-06 1996-04-02 Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-angiogenic agents
US6908910B2 (en) 1993-08-06 2005-06-21 The Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-mitotic agents
EP1321146A3 (en) * 1998-03-11 2004-06-02 Endorecherche Inc. Inhibitors of type 5 and 3 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase and methods for their use
US7087592B1 (en) 1999-08-23 2006-08-08 Entre Med, Inc. Compositions comprising purified 2-methoxyestradiol and methods of producing same
US6891953B1 (en) 2000-06-27 2005-05-10 Microsoft Corporation Method and system for binding enhanced software features to a persona
US7135581B2 (en) 2000-08-18 2006-11-14 Entremed, Inc. Antiangiogenic agents
US6995278B2 (en) 2000-08-18 2006-02-07 Entre Med, Inc. Antiangiogenic agents
JP2004537499A (ja) * 2000-11-27 2004-12-16 エントレメッド インコーポレイテッド 抗血管新生薬
US6710037B2 (en) * 2001-05-01 2004-03-23 Schering Corporation Method of treating androgen-dependent disorders
US20050215528A1 (en) * 2001-08-10 2005-09-29 Shuichi Furuya Gnrh agonist combination drugs
BR0214801A (pt) * 2001-11-29 2005-01-11 Gtx Inc Prevenção e tratamento de osteoporose induzida pela privação de andrógeno
US7524866B2 (en) 2001-11-29 2009-04-28 Gtx, Inc. Prevention and treatment of androgen—deprivation induced osteoporosis
EP1756139A4 (en) 2004-03-12 2009-07-29 Entremed Inc ANTI-ANGIOGENIC AGENTS
US7419972B2 (en) 2004-07-02 2008-09-02 Schering Ag 2-substituted estra-1,3,5(10)-trien-17-ones as inhibitors of 17β-hydroxy steroid dehydrogenase type 1
DE102004032674A1 (de) * 2004-07-02 2006-01-26 Schering Ag Neue 2-substituierte Estra-1,3,5(10)-trien-17-one als Inhibitoren der 17β-Hydroxysteroiddehydrogenase Typ 1
CA2646065C (en) 2006-03-20 2014-01-14 Entremed, Inc. Disease modifying anti-arthritic activity of 2-methoxyestradiol
US9284345B2 (en) * 2007-04-12 2016-03-15 Endorecherche, Inc. 17alpha-substituted steroids as systemic antiandrogens and selective androgen receptor modulators
AU2013289344A1 (en) * 2012-07-10 2015-02-05 Bayer Pharma Aktiengesellschaft 3-substituted estra-1,3,5(10),16-tetraene derivatives, methods for the production thereof, pharmaceutical preparations containing same, and use thereof for the production of medicaments
EP2958928B1 (de) * 2013-02-21 2018-03-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Estra-1,3,5(10),16-tetraen-3-carboxamide zur inhibierung von 17.beta.-hydroxysteroid dehdrogenase (akr1c3)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3562260A (en) * 1965-08-23 1971-02-09 Ormonoterapia Richter Spa 2-carbonyl-estratrienes and method of their preparation
US4340602A (en) * 1978-10-18 1982-07-20 Wayne State University Compositions inhibiting estrogen sulfotransferase activity
GB2135189B (en) * 1983-02-22 1986-07-09 Joachim Georg Liehr Estrogen deficiency conditioned with 2-fluoroestradiols
US4568673A (en) * 1984-03-20 1986-02-04 Wayne State University Compositions inhibiting murine MXT ductal carcinoma
US5504074A (en) * 1993-08-06 1996-04-02 Children's Medical Center Corporation Estrogenic compounds as anti-angiogenic agents
CA2323089A1 (en) * 1998-03-11 1999-09-16 Endorecherche, Inc. Inhibitors of type 5 and type 3 17.beta.-hydroxysteroid dehydrogenase and methods for their use

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101821253B (zh) * 2007-08-31 2013-07-17 安斯泰来制药有限公司 哌啶衍生物
CN101698834B (zh) * 2009-09-08 2012-05-23 北京利德曼生化股份有限公司 3α-羟基类固醇脱氢酶及其核苷酸序列、重组载体、重组宿主细胞和试剂盒
CN104873520A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 天津药物研究院 一种11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂、药用组合物及其用途
CN104873525A (zh) * 2014-02-27 2015-09-02 天津药物研究院 一种11β-羟基类固醇脱氢酶抑制剂及其药用组合物和用途

Also Published As

Publication number Publication date
NO20010651L (no) 2001-04-05
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