CN1651423A - 毛喉鞘蕊花提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明属中药制药领域，涉及中药毛喉鞘蕊花提取物及其制备方法和将毛喉鞘蕊花提取物用于制备防治哮喘及支气管炎药物的用途。本发明将毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用含水乙醇提取，提取液采用大孔树脂提纯后得提取物，其主要活性成分异佛斯可林的含量为8％以上。经动物试验，本发明毛喉鞘蕊花提取物能显著抑制组胺诱导离体豚鼠气管条的收缩，适用于制备防治哮喘和支气管炎的药物。

Description

毛喉鞘蕊花提取物及其制备方法和用途

技术领域：

本发明属中药制药领域，涉及中药毛喉鞘蕊花提取物及其制备方法和将毛喉鞘蕊花提取物用于制备防治哮喘及支气管炎药物的用途。

背景技术：

毛喉鞘蕊花Coleus forskohlii Brig为唇形科鞘蕊花属植物，具有平喘、强心、降压、抗血栓、降低眼内压等作用，并有强大的腺苷酸环化酶激活作用。其有效成分主要为劳丹烷(1abdane)型二萜化合物，包括佛斯可林(forskolin)、异佛斯可林(isoforskolin)及其它类似物。该植物主产于印度和我国云南省等地，据文献报道印度产毛喉鞘蕊花主要含佛斯可林，含量为0.1％，云南产品种异佛斯可林的含量较高，为0.005％～0.014％。近年，云南省开发出以滇产毛喉鞘蕊花配伍前胡、甘草制成的复方冲剂，用于治疗哮喘和支气管炎，疗效较好。文献报道毛喉鞘蕊花提取物具有抑制豚鼠气管条收缩的活性。相关的已有技术有1.公开号CN 1154861A；2.公开号CN 1539493A，其中涉及毛喉鞘蕊花有效部位的提纯工艺，其一，采用硅胶柱除杂并用氯仿或二氯甲烷萃取，不适于工业大生产，另一工艺采用超临界流体萃取法，需要特殊的设备；3.昆明医学院学报，2003，(3)：3～4。

发明内容：

本发明的目的是提供一种含有式(1)的毛喉鞘蕊花提取物及其制备方法，本方法经济、简便且适用于工业化大生产。本发明的另一目的是提供将该提取物用于制备防治哮喘及支气管炎药物的用途。

本发明毛喉鞘蕊花提取物通过下述方法制备：

将毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用含水乙醇提取，提取液浓缩后加入絮凝剂，静置后离心或过滤，或直接离心或过滤，取离心上清液或滤液进行大孔树脂吸附，依次用水及浓度较低的低级醇水溶液淋洗除去杂质，再用浓度较高的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至干或除去低级醇后喷雾干燥，得本发明毛喉鞘蕊花提取物。该提取物可进一步用乙酸乙酯等有机溶剂萃取纯化。

将粉碎的毛喉鞘蕊花全草或根用20～95％乙醇热提，首次溶媒用量约为生药量的4～8倍；或用20～95％乙醇渗漉提取，溶媒用量约为生药量的4～12倍；提取液浓缩后加入絮凝剂(如1％聚凝静)，静置一定时间后离心或过滤，或浓缩液直接离心或过滤，将离心上清液或滤液调节pH值后进行大孔树脂吸附(大孔树脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，如D101、ZTC-1、AB-8、SIP1300、HP20型大孔树脂等)，依次用水及浓度较低的低级醇水溶液淋洗除去杂质，低级醇为甲醇、乙醇或丙醇等C₁～C₅醇类，其浓度为5～50％，再用浓度较高的低级醇洗脱，低级醇的浓度为50～95％，将洗脱液浓缩至干或除去乙醇后喷雾干燥，得本发明的毛喉鞘蕊花提取物，收率为0.1％；将该提取物进一步用乙酸乙酯萃取，分取乙酸乙酯层，浓缩至干，得固形物，收率为0.03％。

上述获得的毛喉鞘蕊花提取物及其乙酸乙酯萃取所得固形物中主要含异佛斯可林，具有下述式(1)的化学结构。

HPLC定量分析结果表明，异佛斯可林在毛喉鞘蕊花提取物及其乙酸乙酯萃取所得固形物中的含量分别为8％以上和20％以上。

本发明所述的大孔树脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，在上大孔树脂前，离心上清液或滤液的pH值范围为5～12；所述的低级醇为C₁～C₅的低级醇，其含水低级醇浓度为5～50％；所述高浓度的含水低级醇浓度为50～95％。

通过动物实验进行生物活性测定，检测本发明毛喉鞘蕊花提取物对组胺引起的离体豚鼠气管收缩的影响。结果表明，加入组胺后，气管标本产生收缩，幅度为1573±570mg，毛喉鞘蕊花提取物使标本产生明显舒张，其最大舒张低于基线，为-1121±566mg，与溶剂有显著差别。毛喉鞘蕊花提取物产生的舒张呈典型的S型，以Bliss法计算，其EC₅₀为4.02ug/ml，95％可信限为5.28～2.97ug/ml，95％可信限率为28.72％。

本发明毛喉鞘蕊花提取物及其进一步纯化所得的固形物可作为原料按常规方法制成硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸、注射剂、口服液、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂及复方制剂，用于防治哮喘及支气管炎药物。

具体实施方式：

下面给出实施例进一步说明本发明但并不对本发明限制。

实施例1

100公斤粉碎后的毛喉鞘蕊花全草，投入提取罐，在90～100℃依次用70％乙醇400升热提3次，每次提取时间为90分钟，合并3次提取液，浓缩至100升，加入1％聚凝静5升，静置1h，过滤，将滤液调节至pH＝8并用蒸馏水稀释至400升，以2BV/h(BV为大孔树脂的柱床体积)的流速通过300升SIP1300型大孔树脂柱，依次用1500升蒸馏水和900升30％乙醇淋洗除去杂质，再用900升85％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得本发明的毛喉鞘蕊花提取物，重100g，按生药量计得率为0.1％。将该提取物进一步以乙酸乙酯萃取2次，每次用量1000ml，合并乙酸乙酯层，浓缩至干，得固形物30g，按生药量计得率为0.03％。

实施例2

100公斤粉碎后的毛喉鞘蕊花根，用80％乙醇300升浸泡24h后渗漉，收集渗漉液600升，浓缩至80升，过滤，滤液调节至pH＝9并用蒸馏水稀释至200升，以2BV/h的流速通过300升AB-8型大孔树脂柱，依次用1500升蒸馏水和900升40％乙醇淋洗除去杂质，再用900升90％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得本发明的毛喉鞘蕊花提取物，重120g，按生药量计得率为0.12％。将该提取物用pH值为8的水溶液1000ml分散，以乙酸乙酯萃取2次，每次用量1000ml，合并乙酸乙酯层，浓缩至干，可得固形物40g，按生药量计得率为0.04％。

实施例3

取豚鼠，雌雄不拘，处死后，切开颈部皮肤及肌肉，取出气管置于营养液。去除气管周围无关组织，将气管剪成宽约3mm的螺旋条。取含3段肌肉的气管螺旋条，置于含Kreb’s液中，一端固定，一端连于张力换能器。加2g张力，37℃，通95％O₂+5％CO₂混合气，稳定1h。加组胺使其终浓度为1ug/ml，记录标本收缩幅度。待其达到收缩峰值后，加入本发明毛喉鞘蕊花提取物，作用3min后记录标本收缩高度，然后加入下一浓度的毛喉鞘蕊花提取物。毛喉鞘蕊花提取物累积终浓度依次为0.5、1、2、4、6、10、16、20μg/ml。另取标本，加入相应体积的PEG做为空白对照。

记录加入组胺后标本收缩的幅度、加毛喉鞘蕊花提取物及PEG后的最大舒张幅度。测量不同药物浓度时标本收缩/舒张幅度，以加组胺后收缩幅度为100％收缩，加毛喉鞘蕊花提取物后标本最大舒张幅度为0％收缩，计算加毛喉鞘蕊花提取物后标本舒张的百分率并按Bliss法计算其抑制组胺引起气管收缩的EC₅₀。

表1是毛喉鞘蕊花提取物对组胺引起的离体豚鼠气管收缩的作用结果。

表1

毛喉鞘蕊花提取物1           标本舒张的百分率(％)          

的浓度(μg/ml)        毛喉鞘蕊花提取物           PEG

0.5                   99.12±6.63                99.37±5.00

1                     94.65±9.17                99.04±0.29

2                     82.62±8.12                97.57±4.24

4                     56.76±9.62                94.35±6.26

6                     30.18±9.44                91.23±6.51

10                    11.91±6.53                84.92±6.90

16                    2.89±1.70                 76.94±5.21

20                    0.00±0.00                 66.21±1.27

其中，*毛喉鞘蕊花提取物以最大舒张为0％收缩，而PEG以给组胺前的幅度为0％收缩，**空白PEG组中PEG的加入量与对应的毛喉鞘蕊花提取物组等体积。

结果表明，加入组胺后，气管标本产生收缩，幅度为1573±570mg，毛喉鞘蕊花提取物使标本产生明显舒张，其最大舒张低于基线，为-1121±566mg，与溶剂有显著差别。毛喉鞘蕊花提取物产生的舒张呈典型的S型，以Bliss法计算，其EC₅₀为4.02ug/ml，95％可信限为5.28～2.97ug/ml，95％可信限率为28.72％。

Claims (8)

1 一种毛喉鞘蕊花提取物，含有式(1)的化合物异佛斯可林，其特征是其中异佛斯可林在毛喉鞘蕊花提取物中的含量为8％以，在其乙酸乙酯萃取所得固形物中的含量为20％以上，所述的提取物通过如下步骤制备：

(1)提取

毛喉鞘蕊花全草或根粉碎后，用含水乙醇提取，提取液浓缩后加入絮凝剂，静置后离心或过滤，或直接离心或过滤，取离心上清液或滤液备用；

(2)吸附洗脱

取上述上清液或滤液调节pH值后进行大孔树脂吸附，依次用水及浓度较低的低级醇水溶液淋洗除去杂质，再用浓度较高的低级醇洗脱，将洗脱液浓缩至干或除去低级醇后喷雾干燥，得提取物；

(3)进一步纯化

采用乙酸乙酯有机溶剂萃取后蒸去有机溶剂，得固形物。

2、根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物，其特征在于其中所述的大孔树脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂。

3 根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物，其特征在于其中所述的上大孔树脂前，离心上清液或滤液的pH值范围为5～12。

4 根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物，其特征在于其中所述的的低级醇为C₁～C₅的低级醇。

5 根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物，其特征在于低浓度的含水低级醇浓度为5～50％。

6 根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物，其特征在于高浓度的含水低级醇浓度为50～95％。

7、根据权利要求1所述的毛喉鞘蕊花提取物，其特征是作为原料按常规方法制成硬胶囊剂、软胶囊剂、片剂、滴丸、注射剂、口服液、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂或复方制剂。

8、根据权利要求1所述毛喉鞘蕊花提取物在制备防治哮喘及支气管炎药物中的用途。