CN100391964C - 地黄寡糖及其提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种地黄寡糖及其提取方法。该方法包括以下步骤：1)粉碎地黄；2)将地黄用水浸泡1-10小时；3)去除浸出液中的沉淀物，收集上清液；4)对上清液减压浓缩，回收浓缩液，或在40-60℃下将上清液挥干，得到浸膏；5)将浓缩液与体积百分含量为70-100%的乙醇按体积比为1∶3-7混匀，或将浸膏溶解于70-100%乙醇中；6)对步骤5)得到的混合液进行过滤，收集过滤液；7)对过滤液在20-60℃下真空减压浓缩，回收浓缩液；8)对浓缩液进行超滤，去除分子量大于5000道尔顿的物质，收集超滤液；9)将超滤液用活性炭进行吸附以除色素，得到地黄寡糖提取液。

Description

地黄寡糖及其提取方法

技术领域

本发明涉及化合物及其提取方法，特别是涉及地黄寡糖及其提取方法。

背景技术

脑血管疾病是一种严重危害人民健康的常见病，其发病率、患病率、死亡率和致残率都很高。统计资料表明，中国患心脑血管疾病的老年人在2000年达到1.3亿，占我国人口总数的11％；初步估计，到2050年这类疾病的老年患者将达2.3亿，占我国人口总数的20％。其中，65岁以上老年人脑血管疾病及脑痴呆的发病率在15％以上。脑血管疾病及脑痴呆不仅会引起老年人运动障碍，还会引起老年人语言和精神方面的障碍，从而降低其生活质量，因此，迫切需要增强老年人体质的医疗保健药物及老年人神经系统疾病的治疗药物。

地黄为玄参科多年生草本植物，其新鲜或干燥块根，始载于《神农本草经》，列为上品，性味甘、微温。归肝、肾经，具有补血滋阴，益精填髓功效。

现代药理学证明，地黄中的有效成分地黄寡糖具有抗衰老、益智、增强免疫调节和治疗心脑血管疾病等作用，因此，迫切需要一种简单易行且经济适用的地黄寡糖的提取方法。

发明内容

本发明的目的是一种简单易行且经济适用的地黄寡糖的提取方法。

本发明所提供的地黄寡糖的提取方法，包括以下步骤：

1)粉碎地黄；

2)将地黄用水浸泡1-10小时；

3)去除浸出液中的沉淀物，收集浸出液；

4)对上清液减压浓缩，回收浓缩液，或在40-60℃下将上清液挥干，得到浸膏；

5)将浓缩液与体积百分含量(V/V)为70-100％的乙醇按体积比为1∶3-7混匀，或将浸膏溶解于70-100％乙醇中，以沉淀多糖；

6)对步骤5)得到的混合液进行过滤，收集过滤液；

7)对过滤液在20-60℃下真空减压浓缩，同时除去乙醇，回收浓缩液；

8)对浓缩液进行超滤，去除分子量大于5000道尔顿的物质，收集超滤液；

9)将超滤液用活性炭进行吸附以除色素，得到地黄寡糖提取液。

在上述提取方法中，为获得更好的提取效果，步骤1)中最好将地黄粉碎至粒径小于2mm的颗粒，再进行提取。

步骤2)中用于浸提的水优选为注射用水。

步骤3)中可用离心的方法去除浸出液中的沉淀物。

为提高原料利用率，可将此步骤2)-3)重复1-3次，合并浸出液。

步骤4)中的减压浓缩可在10-60℃下进行，优选为20-50℃。

步骤6)中可用孔径为0.4-0.5mm的滤膜对混合液进行过滤，所述滤膜孔径优选为0.45mm。

步骤8)中可用孔径为10-0.2μm的超滤膜或截留范围为3000-20000道尔顿的超滤器对浓缩液进行超滤。

上述提取方法对鲜地黄和生地黄均适用。

此外，用上述方法获得的地黄寡糖也属于本发明的保护范围。

同时，可以用上述方法获得的地黄寡糖为活性成分制备成心脑血管疾病及其后遗症、糖尿病和便秘等疾病的治疗性药物。

上述药物中原料药地黄寡糖的含量应大于85％。

需要的时候，在本发明所述应用中还可以加入一种或多种药学上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂等，必要时还可加入香味剂、甜味剂及色素等。

本发明所述应用除制成胶囊剂外，还可以制成片剂、粒剂、粉剂、口服剂、注射液等多种药物形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

上述药物的成人口服用量一般为400mg/kg/d，可以一次或多次使用，疗程为10至20天。

本发明提供了一种有效的地黄寡糖的提取方法。该提取方法具有以下优点：1、操作简单，易于进行工业化应用；2、提取成本低廉；3、所用提取溶剂的毒性较小，提取周期短；4、提取液中地黄寡糖含量高，含量可达85％以上，且分子量小于5000道尔顿。同时，可以用本发明方法获得的地黄寡糖为活性成分制备成心脑血管疾病及其后遗症、糖尿病和便秘等疾病的治疗性药物。本发明为地黄寡糖的大规模生产奠定了基础，并将在地黄寡糖的有效利用中发挥巨大作用，在医药领域的应用前景广阔。

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

附图说明

图1为本发明地黄寡糖提取工艺的流程图

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

实施例1、地黄寡糖的提取及其质量鉴定

一、地黄寡糖的提取

选择符合2005年版《中国药典》标准的生地黄药材，用下述方法从中提取地黄寡糖，提取工艺的流程图见图1，包括以下步骤：

1)取药材20公斤，清洗干净，将药材粉碎成小于2mm的颗粒；

2)用注射用水50升将地黄颗粒浸泡5小时；

3)对浸出液进行离心，得到浸出液约45升；

4)在35℃下将上清液减压干燥至20升；

5)将浓缩液与80升体积百分含量为95％的乙醇混匀；

6)对步骤5)得到的混合液用孔径为0.45mm的滤膜进行过滤，得到过滤液约100升；

7)将过滤液在35℃下真空减压浓缩至20升；

8)将浓缩液用分子量为5000道尔顿的超滤器(购自北京旭邦膜设备有限责任公司)超滤，得到超滤液约20升；

9)将超滤液用医用活性炭进行吸附，得到地黄寡糖提取液约20升。

二、地黄寡糖的质量鉴定

对步骤一获得的黄寡糖提取液从下述几方面进行质量鉴定：

1、性状

淡黄色的澄明液体。

2、鉴别

(1)取地黄寡糖提取液1mL，加5％α-奈酚乙醇溶液5滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5mL，在供试液与硫酸交界处可见两液界面有紫红色环，与预期结果相符。

(2)取地黄寡糖提取液2mL，加入茚三酮试液1滴，摇匀，加热煮沸1分钟，放冷后溶液无蓝紫色，与预期结果相符。

3、高效液相色谱法检测高分子量物质含量

采用高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定地黄寡糖提取液中的高分子量物质含量，用TSK-G2000swxl凝胶色谱柱(日本TOSOHAAS公司)，以乙腈-三氟醋酸-水(40∶0.1∶60)为流动相，流速为每分钟0.8mL，检测波长为190nm。理论塔板数按胰岛素峰计算应不低于800。检测方法为：取地黄寡糖提取液，按标示量加水制成每1mL中含40mg地黄寡糖的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，将先于胰岛素峰保留时间的峰视为高分子物质，按面积归一化法计算高分子量物质含量。结果高分子量物质含量小于2％，符合标准。

4、重金属含量检测

依据《中国药典》2005年版二部附录IXE第一法对地黄寡糖提取液中的重金属含量进行检测。结果重金属含量低于百万分之十，符合标准。

5、总糖含量测定

1)称量干重

称取灼烧过的海砂约1.5克，铺平于称量瓶的底部，置五氧化二磷干燥器中，于(53±2)℃下干燥至恒重。精密称取地黄寡糖提取液2mL，置于上述称量瓶中，在相同温度下减压干燥至恒重，精密称定，依据苯酚硫酸法测定总糖含量，并按下述公式计算总糖含量：

总糖含量＝总糖/干重*100％

结果总糖含量大于总干重的85％以上，表明用本发明的方法获得了纯度较高的地黄寡糖提取液，地黄寡糖的含量达86％。

实施例2、地黄寡糖的提取

选择符合2005年版《中国药典》标准的鲜地黄，用下述方法从中提取地黄寡糖，包括以下步骤：

1)取药材20公斤，清洗干净，将药材粉碎成小于2mm的颗粒；

2)用注射用水50升将地黄颗粒浸泡8小时；

3)对浸出液进行离心，得到上清液约45升；

4)在50℃下将上清液挥干，得到浸膏；

5)将浸膏粉碎，与100升体积百分含量为75％的乙醇混匀；

6)对步骤5)得到的混合液用孔径为0.45mm的滤膜进行过滤，得到过滤液约100升；

7)将过滤液在40℃下真空减压浓缩至20升；

8)将浓缩液用分子量为5000道尔顿的超滤器(购自北京旭邦膜设备有限责任公司)超滤，得到超滤液约20升；

9)将超滤液用医用活性炭进行吸附，得到地黄寡糖提取液约20升。

用与实施例1相同的方法对提取的地黄寡糖进行质量鉴定，结果各项指标均符合标准，获得了纯度较高的地黄寡糖提取液，地黄寡糖的含量达90％。

实施例3、地黄寡糖的提取及其质量鉴定

选择符合2005年版《中国药典》标准的生地黄药材，用下述方法从中提取地黄寡糖，包括以下步骤：

1)取药材20公斤，清洗干净，将药材粉碎成小于2mm的颗粒；

2)用注射用水50升将地黄颗粒浸泡1.5小时；

3)对浸出液进行离心，收集上清液；

4)重复步骤2)-步骤3)3次，合并上清液，共得到浸出液约55升；

5)将上清液减压干燥至20升；

6)将浓缩液与80升体积百分含量为95％的乙醇混匀；

7)对步骤5)得到的混合液用孔径为0.45mm的滤膜进行过滤，得到过滤液约100升；

8)将过滤液在30℃下真空减压浓缩至20升；

9)将浓缩液用分子量为5000道尔顿的超滤器(购自北京旭邦膜设备有限责任公司)超滤，得到超滤液约20升；

10)将超滤液用医用活性炭进行吸附，得到地黄寡糖提取液约20升。

用与实施例1相同的方法对提取的地黄寡糖进行质量鉴定，结果各项指标均符合标准，获得了纯度较高的地黄寡糖提取液，地黄寡糖的含量达88％。

实施例4、动物实验

1、血管性痴呆试验

给予昆明小鼠腹腔注射实施例1提取的地黄寡糖5天，每次5mg/10g鼠重，每日一次，对给药小鼠进行血管性痴呆试验。结果表明较给药可以提高小鼠的跳台及水迷宫学习成绩，和假手术组无明显差异；明显减少神经元的死亡数量。

2、小鼠耐缺氧试验

给予昆明小鼠腹腔注射实施例2提取的地黄寡糖5mg/10g鼠重，以未给药小鼠为对照，对两组小鼠进行耐缺氧试验。结果给药后小鼠耐缺氧的能力得到明显提高，且和对照组相比，给药组小鼠海马组织的含水率降低。

3、海马神经细胞的缺氧试验

检测缺氧对海马神经细胞的损伤，一组为给药组：给予实施例2提取的地黄寡糖1％(mg/V)，一组为不给药的对照组。结果表明本发明的地黄寡糖可以降低缺氧对海马神经细胞的损伤，LDH露出量明显比对照组减少。

4、对小鼠肠的影响

给予昆明小鼠灌胃实施例3提取的地黄寡糖5mg/10g鼠重，连续5天，每日一次，以未给药小鼠为对照，观察两组小鼠的肠蠕动频率，并统计肠道有益菌数量。结果与对照组小鼠相比，给药小鼠的肠蠕动频率和肠道有益菌数量得到显著提高。

5、对四氧嘧啶糖尿病模型大鼠影响

对四氧嘧啶糖尿病模型大鼠每日腹腔注射实施例1提取的地黄寡肽5mg/10g，连续7天，以未给药的四氧嘧啶糖尿病模型大鼠为对照，对两组大鼠进行观察。结果与对照组大鼠相比，给药大鼠的血糖值明显降低。

Claims (8)

1.一种地黄寡糖的提取方法，包括以下步骤：

1)粉碎地黄；

2)将地黄用水浸泡1-10小时；

3)去除浸出液中的沉淀物，收集浸出液；

4)对上清液减压浓缩，回收浓缩液，或在40-60℃下将上清液挥干，得到浸膏；

5)将浓缩液与体积百分含量为70-100％的乙醇按体积比为1∶3-7混匀，或将浸膏溶解于70-100％乙醇中；

6)对步骤5)得到的混合液进行过滤，收集过滤液；

7)对过滤液在20-60℃下真空减压浓缩，回收浓缩液；

8)对浓缩液进行超滤，去除分子量大于5000道尔顿的物质，收集超滤液；

9)将超滤液用活性炭进行吸附以除色素，得到地黄寡糖提取液。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤1)中的地黄包括鲜地黄和生地黄；将地黄粉碎至粒径小于2mm的颗粒。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤2)中用于浸提的水为注射用水。

4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤3)中用离心或过滤的方法去除浸出液中的沉淀物。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：将所述步骤2)-步骤3)重复1-3次，合并浸出液。

6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤4)中的减压浓缩在10-60℃下进行。

7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤6)中用孔径为0.4-0.5mm的滤膜对混合液进行过滤。

8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤8)中用孔径为10-0.2μm的超滤膜或截留范围为3000-20000道尔顿的超滤器对浓缩液进行超滤。

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