CN1646918A - 探测和定位血迹的方法以及为探测血迹设计的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于探测人或动物血迹的组合物。前述组合物含有发光氨试剂、氧化剂和碱，最好被稀释于水性溶液中。所述组合物的特征在于：发光氨试剂在最终组合物中的浓度为1～20mmol/l；氧化剂为过氧化氢，它在最终组合物中的浓度为25～100mmol/l；碱为苏打、NaOH，它在最终组合物中的浓度为25～500mmol/l。本发明还涉及制备所述组合物的用具和方法。此外，本发明涉及探测和定位人或动物血迹的方法。

Description

探测和定位血迹的方法以及为探测血迹设计的组合物
技术领域
本发明涉及一种为探测人或动物血迹设计的组合物，以及制备本组合物的方法与野外用具。本发明还涉及探测和定位人或动物血液痕迹的方法。
发明背景
通过化学发光的方法搜索和定位人和动物血液痕迹的方法已被制定并记录在案。
发光是指电磁紫外线发射现象的总和，或是看得见的或在红外范围内并且不是由热效应引起的现象。
某些分子，发光剂，在被带入激发态后具有一种特性，即在它们返回到基态的过程中能够发射出所谓的“冷光”。这种现象可以由不同的手段引发，这依赖于将分子带入其激发态的能量的性质，可以将不同类型的发光现象加以定义。
化学发光是指由化学反应直接或间接产生的光的发射。通常，化学发光反应是氧化过程的结果。
探测人或动物的血液时，发光氨(5-氨基-3，4-二氢-1，4-酞嗪二酮)[luminol(5-amino-2，3-dihydro-1，4-phthalazinedione)]是最普遍使用的化学发光化合物，尽管许多其它的发光氨试剂同样也被使用。
在水性溶液中，发光氨的化学发光反应需要氧化系统和碱环境的存在(White E.H. & Roswell，D.F.1985.Luminolchemiluminescence.Chemi-and Bioluminescence(Burr，J.G.，ed.)，Marcel Dekker，New York，pp.215-244)。
发光氨的氧化作用导致在激发态形成离子态氨基邻苯二甲酯(aminophthalate)，当它返回到基态时伴有光的发射。
反应产生的量子效率是很微弱的(大约0.01)，并且放射光谱最大值为430nm(蓝色光)(White，E.H. & Roswell，D.F.1985.Luminol chemiluminescence.Chemi-and Bioluminescence(Burr，J.G.，ed.)，Marcel Dekker，New York，pp.215-244)。
这种发光反应中，能作为催化剂的主要化合物是自由态或结合态过渡金属(Cr3+，Mn4+，Fe2+，Fe3+，CO2+，Ni2+，Cu2+，Hg2+)，氯高铁血红素和过氧化物酶(例如从辣根中提取的酶)。
氯高铁血红素具有特殊的生物化学结构，形成了过氧化物酶的主要部分。这一结构同样存在于血红蛋白中，它是血液中氧和部分CO2的载体蛋白。
因此，利用氯高铁血红素催化发光氨产生化学发光的能力，使血液中血红蛋白的存在显得更加明显。
换言之，当发光氨/氧化剂/碱性试剂的混合物与血液接触时将会发光。
60多年前，使用这种化合物检测血液存在的方法作为一种经验手段被提出，在犯罪和法医调查中被用作探测血迹的用具。
因此，在1937年，Specht，W.在文章Specht，W.in TheChemiluminescence of hemin：an aid for finding and recognizingblood stains important for forensic purposes.Angewande Chemie，10，155-157中首次提出并证实了在犯罪现场血液的存在可作为犯罪和法医调查的证据，这需使用一种化合物其中含有0.1份重量的发光氨、3份重量的碱性试剂碳酸钠、以及15份重量的氧化剂30％过氧化氢，稀释于100份重量的蒸馏水中。
在1937年，Specht，W.在文章Specht，W.in TheChemiluminescence of hemin：an aid for finding and recognizingblood stains important for forensic purposes.Angewande Chemie，10，155-157中研究并论证了在干血迹上使用这种反应试剂产生的发冷光反应的灵敏度，干血迹被稀释为1∶2 000体积。
1939年，Proescher、F. & Moody、A.M.在文章Detection ofblood by means of chemiluminescence.Journal of LaboratoryClinical Medicine.，24，1183-1189回忆称，1937年Specht，W.在文章The Chemiluminescence of hemin：an aid for finding andrecognizing blood stains important for forensic purposes.Angewande Chemie，10，155-157中获得了检验暴露于阳光和雨水下的血液的方法，并且证实在这些变化的情况下，化学发光反应是存在的。
经过他们自己的努力，他们检验了Specht，W.文章TheChemiluminescence of hemin：an aid for finding and recognizingblood stains important for forensic purposes.Angewande Chemie，10，155-157中详细说明的化合物对来源于动物和人稀释至1∶1 000000的两种血液的作用，并证实化学发光反应在这两种情况下均会发生。
1951年，Grodsky，M.、Wright、K. & Kirk、P.L.在文章Simplified preliminary blood testing.An improved techniqueand comparative study of methods.Journal of the AmericaInstitute of Criminal Law and Criminology，42，95-104中指出，当过氧化氢被用作氧化剂时，发光氨的灵敏度和反应性是很难控制的，并提议使用过硼酸盐氧化剂。同时他还提议使用一种野外用具，由不同的容器组成，每一个独立地装有上述的发光氨、过硼酸盐氧化剂和碱性试剂碳酸钠。这套用具还有一些附件，如塑料和玻璃喷雾器、滤纸、一瓶蒸馏水、一个手电筒以便于在黑暗中混合各种反应试剂，以及装运血液或其它微量证据的塑料容器。
对于这些方面，1951年，Grodsky，M.，Wright，K. & Kirk，P.L.在文章Simplified preliminary blood testing.An improvedtechnique and comparative study of methods.Journal of theAmerica Institute of Criminal Law and Criminology，42，95-104中阐述在极度稀释的血液即1∶5 000 000体积稀释液中的发光氨产生的化学发光反应时，持有很乐观的态度。
1939年，F. & Moody，A.M.在文章Detection of blood by meansof chemiluminescence.Journal of Laboratory ClinicalMedicine.，24，1183-1189中推荐事先用盐酸定点喷洒，为的是分解血红蛋白并改善检验的灵敏度。这与Grodsky，M.，Wright，K. &Kirk，P.L.于1951年在文章(Simplified preliminary bloodtesting.An improved technique and comparative study ofmethods.Journal of the America Institute of Criminal Law andCriminology，42，95-104)中叙述的一致。
1966年，Weber，K.在文章Die Anweldung derChemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin undToxicologie.I.Der Nachweis von Blutspuren.DeutscheZeitschrift für die gesamte Gerichtliche Medizin，57，410-423中提供的证据说明使用碳酸盐碱性试剂仅仅激发了血红蛋白缓慢的氧化反应，因而当使用这种碳酸盐碱性试剂时发光现象更加微弱。因此，他提倡使用氢氧化钠作为碱性试剂。1966年，Weber，K.在文章Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in derGerichtlichen Medizin und Toxicologie.I.Der Nachweis vonBlutspuren.Deutsche Zeitschrift für die gesamte GerichtlicheMedizin，57，410-423中指出被Specht，W.在文章TheChemiluminescence of hemin：an aid for finding and recognizingblood stains important for forensic purposes.Angewande Chemie，10，155-157中使用的发光氨和过氧化氢试剂的浓度太大并且在与试剂浓度有关的发光氨的反应中引起了浓度抑制，从而使化学发光消失并且血液的迹象明显减少。因此Weber，K.于1966年在文章DieAnweldung der Chemiluminescenz des Luminols in derGerichtlichen Medizin und Toxicologie.I.Der Nachweis vonBlutspuren.Deutsche Zeitschrift für die gesamte GerichtlicheMedizin，57，410-423中提出了一种组合物，其中包括0.4mmol/l发光氨、17.6mmol/l过氧化氢以及45mmol/l氢氧化钠或氢氧化钾，在蒸馏水中稀释，用于探测干或新鲜血液的痕迹，其稀释率达到1∶20 000 000。
1990年，Grispino，R.R.J.在文章The effects of luminol onserological analysis of dried blood stains Crime LaboratoryDigest，17(1)，13-23中提议使用一种组合物，其中含有5.6mmol/l发光氨、472mmol/l碳酸钾或碳酸钠和100mmol/l过氧化氢H2O2，在蒸馏水中稀释，用于探测干了几天的血迹和新鲜的血迹，可将这种血液稀释成1∶10 000～1∶100 000。
以上所述证实，为了探测犯罪现场的血迹，使用含有发光氨的组合物并结合碱性试剂和氧化剂可以回溯过去的场景。
关于本应用，提倡使用过氧化氢作为氧化剂，而非过硼酸钠，因为过硼酸钠不易溶于水并且阻止了组合物的汽化。同样，提倡使用氢氧化钠或氢氧化钾作为碱性试剂，而非碳酸盐，因为发光氨与碳酸盐化合物氧化反应时比与氢氧化物反应时产生的反应慢，意味着与前者反应时发光氨的发光强度较低。
1966年，Weber，K.在文章Die Anweldung derChemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin undToxicologie.I.Der Nachweis von Blutspuren.DeutscheZeitschrift für die gesamte Gerichtliche Medizin，57，410-423中提议使用这种类型的组合物，但所含的发光氨和过氧化氢的含量较低，因为这些化合物的含量过大会抑制发光氨的反应，从而使化学发光消失并且血液的迹象明显减少。
此外，Byrne在专利U.S.5 770 116和5 833 887中提议使用发光氨的化学发光反应，用以探测在光线减弱和能见度降低的情况下，狩猎场中受伤的动物遗留的血迹。
为此，Byrne在专利U.S.5 770 116和5 833 887中提倡使用的组合物除发光氨外还含有过硼酸钠作为氧化剂和碳酸钠作为碱性试剂。
然而，根据上述原因，使用含有过硼酸钠和碳酸钠的组合物是存在困难的。
尤其阻碍了本发明在狩猎场合的应用，特别是当血液探测不是在完全(漆黑)的夜晚而只是在缺乏光线的时候，比如日落，这时由发光氨作用于血液所发出的发光强度的降低是件麻烦的事情，因为此时的冷光强度可能不足以让猎人发现猎物留下的血迹。
此外，过去所有检验均在极度稀释的血液样本中进行。
发明内容
本发明的目的是减少在已有的检验法中组合物使用的不便，介绍在真正实际的条件和环境下所使用的方法的步骤，也就是说不仅是在完全漆黑的条件下而且在暗淡和光线缺乏相当于日落时漫射的光的条件下，这个步骤能够揭露非常微小的洁净血迹，并且具有足够强的发光度使血迹瞬间可见。最终，本发明提出了一种探测人或动物血迹的组合物，其中包含化合物发光氨、一种氧化剂和一种碱，优选稀释于一种水性溶液；更具体地，发光氨试剂在最终组合物中的浓度为1～20mmol/l，氧化剂过氧化氢在最终组合物中的浓度为25～100mmol/l，碱性试剂苏打、NaOH在最终组合物中的浓度为25～500mmol/l。
为了使配方的使用达到最佳效果，发光氨试剂的浓度应在1～10mmol/l范围内，优选5mmol/l。
此外，将苏打、NaOH的量限制在25～150mmol/l时对许多应用都有利。
本组合物的pH值最好保持在11.5以下，这将做进一步的解释。
当然，对于此领域的专家而言这是很好理解的，即每个成分的浓度依其它被使用成分的浓度而定。
同样，在说明书以及在权利要求书中指定的“发光氨试剂(luminol compound)”一词是指发光氨(luminol)和每个前体化合物或由发光氨衍生的化合物，例如，发光氨的取代物，即至少有一个取代成分如烷基(特别是甲基)、胺、羟基等，并且具有产生发光氨式化学发光能力的取代物。这种化合物的例子是二乙基异发光氨(diethyl isoluminol)和氨基丁基乙基异发光氨(aminobutylethylisoluminol)。
发光氨试剂最好是由发光氨组成的。
首选制备方案中，苏打、NaOH在最终组合物中的浓度约为90mmol/l。
次选制备方案中，苏打、NaOH在最终组合物中的浓度为25～50mmol/l。
在所有案例中，水性溶液优选水，为达到最佳效果应是非苏打水。
本发明的另一个目的是本组合物被用于探测人或动物的血迹。
在第一个制备方法中描述的组合物特别适于狩猎时探测动物的血迹。
在第二个制备方法中描述的组合物特别适于探测犯罪现场或事故现场人的血迹。
本发明同样介绍了一套为制备此组合物而设计的野外用具，在第一个优选配方中，应包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量为1～20mmol的发光氨试剂，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢，
—在第三个容器中，含有至少一个单一剂量为25～500mmol的苏打、NaOH。
在第一个变化形式中，本发明用具的第一选择配方适合于依据首选制备方案制备本组合物，它包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量为1～10mmol的发光氨试剂，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢，
—在第三个容器中，含有至少一个单一剂量为25～150mmol的苏打、NaOH。
在第二个变化形式中，本发明用具的第一选择配方适用于依据次选制备方案制备本组合物，尤其适用在犯罪现场，它包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量约为5mmol的发光氨试剂，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量约为50mmol的过氧化氢，
—在第三个容器中，含有至少一个单一剂量为25～50mmol的苏打、NaOH。
在第二个优选配方中，依据本发明的说明书，制备本组合物的用具包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量为1～20mmol的上述发光氨试剂，并与25～500mmol苏打、NaOH混合，或者与25～100mmol过氧化氢混合成相容的固体形式，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢，或25～500mmol的苏打，这依据第一个容器中的预混合物而定。
优选的情况是，依据本发明的说明书，制备本组合物的用具包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量为1～20mmol的发光氨试剂，与25～150mmol的苏打、NaOH混合，或者与25～100mmol过氧化氢混合成相容的固体形式，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量为50mmol的过氧化氢，或25～150mmol的苏打、NaOH，这依据第一个容器中的预混合物而定。
应指出的是，过氧化氢固体形式在市场上可以购到，尤其是SIGMA-ALDRICH公司的，为丸剂或粉末，被制成尿素加合物的形式，称作“尿素加合体”。
作为另一选择，此用具包括：
—在第一个容器中，含有至少一个单一剂量为5mmol发光氨试剂的预混合物，与25～50mmol或90mmol苏打、NaOH混合，或与50mmol过氧化氢混合成相容的固体形式，
—在第二个容器中，含有至少一个单一剂量范围为50mmol的过氧化氢，或25～50mmol或90mmol的苏打、NaOH，依前述预混合物而定。
依据本发明另一个优势，本发明的三个基本成分能够被制成一个预混合物，专家对此十分熟悉，使它们均匀混合但不会太早产生反应以便共同放在一个容器中。众所周知的是某些发展中的技术能够预防太早的反应。因此，本发明同样涉及了一个配方，使本发明三种基本成分混合于一个容器中。
所有案例中，本发明的用具中，每个容器优先选择由塑料材料或玻璃制成的可重复密封的单位容器。
这些容器还可以是袋子，将单一剂量的粉末装入其中。
更优选的情况是，至少一个或每一个容器由腔泡制成，并放置在至少一个透明护罩中。
更优选的情况是，本发明用具至少有一个透明护罩其中至少含有三个腔泡，其中之一装有单一剂量的发光氨试剂，其含量范围是1～20mmol，另一个装有单一剂量为25～500mmol的苏打、NaOH，第三个装有25～100mmol的过氧化氢。
另一选择是，本发明用具至少有一个透明护罩其中至少含有两个腔泡，其中之一装有单一剂量的发光氨混合物，其含量范围是1～20mmol，并与25～500mmol的苏打、NaOH或25～100mmol的过氧化氢形成相容的固体预混合物，另一个装有单一剂量的25～100mmol的过氧化氢或25～500mmol的苏打，这依赖于第一个腔泡us中的预混合物而定。
第三个变化形式中，用具至少有一个透明护罩并至少有一个腔泡us，其中含有单一剂量的由本发明三种基本成分组成的相容固体的预混合配方。
优选的情况是，在本发明用具的所有变化形式中，至少一种单一剂量的形式是丸剂。
更优选的情况是，本发明用具中每个剂量的发光氨、过氧化氢和苏打均为丸剂形式。
在所有被讨论的案例中，作为一个有用的应用，每个单一剂量还应还有赋形剂以便于直接压碎和分解丸剂。
本发明还提出一个本组合物重配步骤，包括用水稀释单一剂量的发光氨试剂、单一剂量的过氧化氢以及单一剂量的苏打，每个这样的单一剂量均来自本发明用具的容器。
本发明还提出一个在能见度降低或完全缺乏光线的情况下搜索和定位受伤或被击倒的动物的步骤，这个步骤的特点在于依据本发明描述的或依据本发明描述的重组步骤获得的组合物的汽化作用，这种汽化作用用于怀疑动物可能经过的区域，本组合物与受伤动物遗留的血迹接触后会产生发冷光反应。
同样，本发明的另一个目的是提出一个在犯罪现场搜索和定位血迹的步骤，这个步骤的特定是依据本发明描述的或依据本发明描述的重组步骤获得的组合物的汽化作用，这种汽化作用被用于犯罪现场，本组合物与人的血迹接触后会产生发冷光反应。
本发明应当更易于了解，它的其它目的、详细资料和优势通过以下解释描述显得更明确。
如在本发明中说明的，人们会惊讶的发现本组合物，其中包括1～20mmol/l发光氨混合物、25～100mmol/l过氧化氢(H2O2)作为氧化剂以及25～500mmol/l苏打(NaOH)作为碱性试剂，优选稀释于水性溶液，能够快速且有效的发现人或动物的、新鲜或干的、清洗或未清洗过的血迹。
在这个组合物中，值得注意的是发光氨试剂的浓度为1～20mmol，优选1～10mmol/l时可以获得最佳光强度，并不需要大剂量的发光氨试剂。
事实上，在最终组合物中使用25～500mmol，优选25～150mmol，更优选约90mmol/l氢氧化钠，NaOH，以及25～100mmol/l的过氧化氢，H2O2时，发冷光强度随发光氨试剂浓度的增加而增强，但实际上发光氨试剂浓度在10～20mmol/l时发冷光强度达到了一个稳定水平。但是，根据本发明的详细说明，未预料到的是使用低浓度，尤其是约5mmol/l的发光氨试剂可以获得的光强度为最大光强度的93％。
选择过氧化氢H2O2作为氧化剂，不仅因为价格便宜，还由于Grispino提出的论点(The effects of luminol on serologicalanalysis of dried blood stains Crime Laboratory Digest，17(1)，13-23)，他指出过硼酸盐不易溶于水或水性溶液，会阻碍溶液的汽化系统，因此并不实用。
而且，很显然，使用过氧化氢时能够获得最高水平的发光度。
具体实施方式
为了使本发明更易于理解，将会描述几个实施方式，所使用的实施例出于纯说明性原因，并不详尽，也不仅限于此。实施方案1至4是本发明的一部分，并属于权利要求书的主要内容。本发明的具有相同效果的其它实施例是：
—含有10～20mmol/l发光氨试剂、约40mmol NaOH以及约50mmol H2O2的组合物。
—含有5mmol/l发光氨试剂、约50mmol/l H2O2以及约120mmol/lNaOH的组合物。
依据本发明说明书的实施例1
依据本发明说明书制备的组合物包含5mmol/l发光氨、50mmol/l NaOH以及50mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
此组合物被喷洒于：
—1∶1 000 000比率稀释的羊血，1∶100 000比率稀释的羊血，
—洁净新鲜的羊血，以及
—洁净干燥的羊血。
测量组合物的pH值。在所述组合物与每个不同的样品反应时依据以下规则测量光强度。
对于稀释的血液，光强度的测量使用了光度计LUMAC，型号为Biocounter M2500，由LUMAC公司制造并销售。这种装置经改良后匹配于光电倍增管HAMAMATSU并连接于可以记录专用单元内的光强度的记录器，在专门测量光度的人员的一般操作下即可。
对洁净新鲜的血液或洁净干燥的血液进行光强度测量时，使用FUJIFILM制造的照相机CCD，型号为LAS-1000，并连接了一台计算机，并安装了自动记录峰值强度和反应时程的软件处理器。
根据以下规则测量每个本发明说明书的组合物与每个血液样品之间的反应时间。
当达到光强度最大峰值时，通过一个连接着照度计的计录器记录的稀释血液的光强度曲线，测量反应的完成情况；或者相反，仪器能够记录计算机给出的洁净血液样品的数值。正如表1所示，本发明实施例1的情况中，在组合物汽化作用发生40秒后，洁净新鲜的血液和洁净干燥的血液达到最大强度峰值。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
依据本发明说明书的实施例2
依据本发明说明书制备的组合物包含5mmol/l发光氨、90mmol/lNaOH以及50mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
依据本发明说明书的实施例3
依据本发明说明书制备的组合物包含5mmol/l发光氨、25mmol/lNaOH以及50mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
依据本发明说明书的实施例4
依据本发明说明书制备的组合物包含5mmol/l发光氨、40mmol/lNaOH以及50mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例1
为了比较，制备一种组合物，它含有5mmol/l发光氨、10mmol/lNaOH以及50mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例2
制备由Grispino，R.R.J.在过去建立并在文章The effects ofluminol on serological analysis of dried blood stains CrimeLaboratory Digest，17(1)，13-23中描述的组合物。这个组合物含有5.6mmol/l发光氨、472mmol/l Na2CO3以及100mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例3
制备的组合物与实施例2具有相同浓度的发光氨、H2O2和碱性试剂，实施例2的组合物是Grispino，R.R.J.在文章The effects ofluminol on serological analysis of dried blood stains CrimeLaboratory Digest，17(1)，13-23中描述的组合物。
然而，在这个组合物中，碱性试剂由K2CO3取代了Na2CO3。
使用与实施例1相同的测量方法，但是用K2CO3作碱性试剂。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例4
按照Grodsky，M.，Wright，K. & Kirk，P.L.在文章Simplifiedpreliminary blood testing.An improved technique andcomparative study of methods.Journal of the America Instituteof Criminal Law and Criminology，42，95-104中以及Byrne在专利U.S.5 770 116及5 833 887中描述的方法制备组合物。这个组合物含有5.6mmol/l发光氨、472mmol/l Na2CO3以及45.5mmol/lNaBO3作为氧化剂。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例5
按照Weber，K.于1966年在文章Die Anweldung derChemiluminescenz des Luminols in der Gerichtlichen Medizin undToxicologie.I.Der Nachweis von Blutspuren.DeutscheZeitschrift für die gesamte Gerichtliche Medizin，57，410-423中描述的方法制备组合物。这个组合物含有0.4mmol/l发光氨、45mmol/l Na2CO3以及17.6mmol/l H2O2，稀释于1升蒸馏水中。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
对比实施例6
组合物含有0.4mmol/l发光氨、45mmol/l KOH以及17.6mmol/lH2O2，稀释于1升蒸馏水中。
依据 对比实施例5，这个组合物相当于Weber，K.于1966年在文章Die Anweldung der Chemiluminescenz des Luminols in derGerichtlichen Medizin und Toxicologie.I.Der Nachweis vonBlutspuren.Deutsche Zeitschrift für die gesamte GerichtlicheMedizin，57，410-423中描述的组合物，但是其中的苏打被氢氧化钾取代。
使用与实施例1相同的测量方法和规则。
对这些测量结果的总结参见下面的表1。
在这些检验中发现，血液反应被激活后，氢氧化物溶液保持清澈，而含有碳酸盐的溶液显示出气体释放的迹象。
由表1可以发现，组合物中使用氢氧化钠或氢氧化钾的作为碱性试剂好于碳酸钠或碳酸钾，因为在发射的光强度方面，前者产生了最好的结果。
同样地，还应注意的是当被喷洒在洁净新鲜的血液或洁净干燥的血液时，这些组合物展示出最强的光强度。
一些发现没有在表1中报告。如使用本发明组合物或使用已有的含有氢氧化钾的组合物时，在血迹稀释时发出一种闪烁光，这导致了放弃使用这种碱性试剂。
在被混合了漂白剂的水清洗、漂净并弄干后的血点上，使用本组合物获得了相同的结果。
通过表1可进一步注意到，就对于新鲜血液、已变干30分钟左右的显露的血液在光的产生方面而言，本发明首选的组合物含有5mmol/l发光氨、90mmol/l NaOH以及50mmol/l H2O2，在水中稀释。
事实上，当NaOH的浓度增加到90mmol/l以上时，新鲜血液和暴露的干燥的血液一样，通过本发明首选组合物获得的溶液激发出非常明亮的光，并达到一个稳定水平。
在此，这种组合物尤其适用于揭示受伤动物遗留的血迹，甚至在缺乏光线的暗淡的情况下，例如，日落或一个满月的夜晚，而不是完全漆黑的夜晚。
但是，这种组合物的pH值高于12，当它被用于探测和定位犯罪或事故现场的血迹时这是很麻烦的，因为在这个pH值下，现场血液的ADN鉴定可能会受到影响。
在鉴定中，在pH值高于或等于12时，用发光氨组合物定位的血液不能够提供可靠的和可重复的ADN分析。
应注意的是当发光氨组合物pH值高于或等于12时，经此组合物“处理”过的血液开始退色。
相反，含有5mmol/l发光氨、50mmol/l H2O2以及25～50mmol NaOH时，本发明组合物的pH值被降低至约11.5，这可以提供可靠的和可重复的ADN分析，这个事实已经得到the Institute of CriminalInvestigations of the National Police(Institut de RechercheCriminelle de la Gendarmerie Nationale(IRCGN))的证实。
当NaOH的浓度低于25mmol/l时，组合物发出的光强度与引述的现有技术组合物获得的光强度近似相同。
因此，在罪犯调查的应用中，本发明首选的组合物含有5mmol/l发光氨、50mmol/l H2O2以及25～50mmol/l NaOH，在水中稀释，pH值最大约为11.5。
换言之，苏打所需要的浓度应保证最终溶液的pH值低于12。事实上，根据制备丸剂使用的容器的类型不同，苏打的浓度是有变化的，将在下面进行描述；并且苏打可以调节溶液的pH值，换言之，溶液需要更多或更少的苏打以确保最终pH值保持在12以下。
本发明组合物的另一个优势是它们能够在任何水环境中稀释，水环境易于不同成分的溶解，而海水和充有碳酸气的水除外，它们对反应有抑制作用。
在这一方面，本发明组合物在湖水、河水、塘水、池水、喷洒水(water spill)、蒸馏水、自来水稀释后进行检验，发现组合物的效力并没有任何减少。
本发明组合物应当以已有组合物的使用方式被使用，也就是说它们的成分应当在水中被稀释，用喷雾用具喷洒在进行血迹搜索的地点。
这表示本组合物以溶液形式使用。
这一溶液可以预先制备好并带到进行血迹搜索的地点。同样，它可以现场制备，但组合物中的每个成分均为固体形式并被分别放入各自的容器中运输到现场。
本发明组合物能够被稀释在任何类型的未充有碳酸气的新鲜水中，足够的这种未充有碳酸气的新鲜水可以被带到调查地点，或者可以确保这种类型的水在当地有直接的来源。
如前所述，本发明的另一个特点是一套用于制备溶液的野外用具，所制备溶液被喷洒在搜索区域以探测和定位人或动物的血迹。这套用具已在前面描述过并会在下面的权利要求书中再提及。
用于狩猎(hunting)目的时，本发明的野外用具优选含有以下成分：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量为5mmol的发光氨或发光氨试剂，
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的过氧化氢，
—在第三个容器中，至少一个单一剂量为90mmol的苏打、NaOH，或
—在一个容器中，至少一个单一剂量约为5mmol的发光氨或发光氨试剂，并与90mmol NaOH或50mmol过氧化氢预混合为相容的固态；在第二个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的H2O2或90mmol的苏打；
—或，最终，将这三种成分的预混合的相容形式置于一个容器中。
相反，用于搜索犯罪或事故现场的血迹时，血液随后需要进行ADN分析，本发明野外用具优选含有以下成分：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量为5mmol的发光氨或发光氨试剂，
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的过氧化氢，
—在第三个容器中，至少一个单一剂量为25～50mmol的NaOH，或
—在一个容器中，至少一个单一剂量为5mmol的发光氨或发光氨试剂，并与25～50mmol NaOH或50mmol过氧化氢预混合为相容的固态，并且
—在另一个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的H2O2或25～50mmol的苏打，这根据第一个容器中的预混合物而定；或，最终，
—将这三种成分的预混合的相容形式置于一个容器中。
正如前面指出的，每个容器是由塑料或玻璃、或陶瓷或其它物质制成的可反复密封的容器。例如，可以是一种袋子，将每个成分的粉末装入其中。
优选的情况是，至少一个或所有的容器是嵌入至少一个透明护罩(blister pack)内的一个腔泡(alveolus/alveoli)。
这样，第一个变化形式中，这种野外用具应含有至少一个透明护罩，其中具有三个腔泡，每个腔泡装有本发明组合物的一个成分。
这样，透明护罩中的一个腔泡装有必需的单一剂量的发光氨或发光氨试剂，另一个装有必需的单一剂量的过氧化氢，第三个装有必需的单一剂量的苏打。
第二个变化形式中，这种野外用具应含有至少一个透明护罩，其中至少具有两个腔泡，其中一个腔泡装有必需的单一剂量的发光氨或发光氨试剂，并与必需的单一剂量的苏打或过氧化氢预混合形成相容的固体形式；另一个腔泡装有必需的单一剂量的过氧化氢或苏打，这根据第一个预混合物而定。
在这两个变化形式中，优选的情况是，单一剂量的发光氨或发光氨试剂、或者它与苏打的混合物、或者过氧化氢和苏打中至少一种应为丸剂形式。
优选的情况是，在这两个变化形式中，每个剂量都应为丸剂形式。
在第三个变化形式中，野外用具具有至少一个透明护罩，其中至少含有一个腔泡，装有单一剂量的由本发明三种基本成分相容固体形成的预混合配方。但在这个变化形式中，这个单一剂量优选为丸剂形式。
例如，当单一剂量为丸剂形式时，它含有赋形剂(乳糖、纤维素、磷酸钙等)便于将丸剂直接压碎，以避免由于NaOH的存在引起的潮湿结块。
它们还可以含有任何已知的赋形剂(交联羧甲基纤维素、羧甲基淀粉醚钠盐(explotab)等)以便于丸剂在水性溶液中崩解。
在重新配制所需溶液时，特别是使用本发明野外用具配制时，单一剂量的发光氨或发光氨试剂、或者单一剂量的后者与苏打、或单一剂量的后者与过氧化氢的固体相容形式的预混合物，稀释于水或水性溶液中；单一剂量的过氧化氢或苏打与第一个预混合物相混。当苏打或过氧化氢的的剂量不同于发光氨或发光氨试剂时，依据发明的描述从野外用具的容器中称取单一剂量的苏打或过氧化氢。
在能见度降低的情况下搜索和定位受伤或被击倒的动物时，在怀疑动物经过的区域喷洒本发明组合物(可能取自本发明野外用具)，通过组合物与猎取动物留下的血迹相互接触可以产生发光反应。
同样的步骤被用于搜索和定位犯罪或事故现场的人的血迹。
本发明决不仅限于描述过的和图解说明过的应用方式，图解说明和非详尽的实施例只是一种说明方式。
因此，即使在前面的实施例中只有发光氨被引用，所有发光氨试剂均能够被使用，它们的含量应足以提供相当于使用发光氨时产生的发光现象的测量的需要，且依据本发明定义的方式。发光氨试剂的例子是二乙基异发光氨和氨基丁基乙基异发光氨。
这表明只要符合本发明的要求，本发明包括所有被描述的方式及其联合方式的技术等价物。
                                                           表1
     组合物   pH   血液稀释至1∶1 000 000   血液稀释至1∶100 000  洁净血液-新鲜     洁净血液-干燥
 说明书的实施例1发光氨5mmoles/LNaOH 50mmoles/LH2O2 50mmoles/L  11.78   I:75u.a.反应时间：4min   I:1106u.a.反应时间：4min  I:66430u.a./mm2反应时间：40sec     I:48405u.a./mm2反应时间：40sec
 说明书的实施例2发光氨5mmoles/LNaOH 90mmoles/LH2O2 50mmoles/L  12.36   I:394u.a.反应时间：2min   I:＝饱和  I:72043u.a./mm2反应时间：40sec     I:73805u.a./mm2反应时间：1min
 说明书的实施例3发光氨5mmoles/LNaOH 25mmoles/LH2O2 50mmoles/L  11.12   I:15u.a.反应时间：4min   I:123u.a.反应时间：4min  I:37445u.a./mm2反应时间：30sec     I:39733u.a./mm2反应时间：30sec
 说明书的实施例4发光氨5mmoles/LNaOH 40mmoles/LH2O2 50mmoles/L  11.5   I:non-tested反应时间：未检验   I:non-tested反应时间：未检验  I:55 165u.a./mm2反应时间：     I:44930u.a./mm2反应时间：
 对比实施例1发光氨5mmoles/LNaOH 10mmoles/LH2O2 50mmoles/L  10.21   I:4u.a.反应时间：4min   I:24u.a.反应时间：4min  I:19480u.a./mm2反应时间：30sec     I:17970u.a./mm2反应时间：20sec
 对比实施例2发光氨5.6mmoles/LNa2CO3472mmoles/LH2O2 100mmoles/L  10.72   I:96u.a.反应时间：＞15min   I:250u.a.反应时间：4min  I:31235u.a./mm2反应时间：50sec     I:30973u.a./mm2反应时间：40sec
 对比实施例3发光氨5.6mmoles/LK2CO3 472mmoles/LH2O2 100mmoles/L  10.95   I:30u.a.反应时间：＞15min   I:173u.a.反应时间：4min  I:33360u.a./mm2反应时间：40sec     I:26405u.a./mm2反应时间：30sec
对比实施例4发光氨5.6mmoles/LNa2CO3472mmoles/LNaBo345.5mmoles/L  10.90     I:155u.a.反应时间：＞15min     I:529u.a.反应时间：4mm     I:31803u.a./mm2反应时间：30sec     I:32175u.a./mm2反应时间：30sec
对比实施例5发光氨0,4mmoles/LNaOH 45mmoles/LH2O2 17.6mmoles/L  12.33     I:245u.a.反应时间：8min     I:1542u.a.反应时间：＞15min     I:31210u.a./mm2反应时间：20sec     I:29853u.a./mm2反应时间：20sec
对比实施例6发光氨0,4mmoles/LKOH 45mmoles/LH2O2 17.6mmoles/L  11.86     I:255u.a.反应时间：4min     I:1402u.a.反应时间：10min     I:29020u.a./mm2反应时间：20sec     I:27645u.a./mm2反应时间：20sec

Claims (26)

1.本发明涉及用于探测人或动物血迹的组合物，其含有发光氨试剂、氧化剂和碱，优选在水性溶液中稀释；所述组合物的特征在于：
a.发光氨试剂在最终组合物中的浓度为1～20mmol/l，
b.氧化剂为过氧化氢，它在最终组合物中的浓度为25～100mmol/l，
c.碱为苏打，NaOH，它在最终组合物中的浓度为25～500mmol/l。
2.依据权利要求1的组合物，其特征在于发光氨试剂从发光氨、二乙基异发光氨，及氨基丁基乙基异发光氨中选择。
3.依据权利要求1或2的组合物，其特征在于苏打、NaOH在最终组合物中的浓度为25～150mmol/l。
4.依据权利要求1或2的组合物，其特征在于苏打、NaOH在最终组合物中的浓度为25～50mmol/l或约90mmol/l。
5.依据上述任一权利要求的组合物，其特征在于水性溶液为水，并且不是苏打水。
6.上述任一权利要求的组合物被用于探测人或动物血迹。
7.权利要求3的组合物被用于探测狩猎场所中动物的血迹。
8.权利要求4的组合物被用于探测犯罪或事故现场中人的血迹。
9.制备权利要求1～5中任一权利要求所述的组合物的野外用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量为1～20mmol的发光氨试剂；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢；
—在第三个容器中，至少一个单一剂量为25～500mmol的苏打、NaOH。
10.依据权利要求9的野外用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量的发光氨试剂，其用量相当于1～10mmol的发光氨；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢；
—在第三个容器中，至少一个单一剂量为25～150mmol的苏打、NaOH；
11.依据权利要求9或10的野外用具，更具体地，它用于犯罪现场的用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量的发光氨试剂，其含量足以提供约5mmol；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量约为50mmol的过氧化氢；
—在第三个容器中，至少一个单一剂量为25～50mmol的苏打、NaOH。
12.用于制备权利要求1～5中任一权利要求所述组合物的野外用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量的上述发光氨试剂，其含量足以提供1～20mmol，并与25～500mmol苏打、NaOH或25～100mmol的过氧化氢预混合并形成相容的固体形式；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为25～100mmol的过氧化氢、或25～500mmol苏打，这依据第一个容器中的预混合物而定。
13.用于制备权利要求3的组合物的野外用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量的发光氨试剂，其含量足以提供约5mmol，并与25～150mmol苏打、NaOH或50mmol的过氧化氢预混合并形成相容的固体形式；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的过氧化氢，或25～150mmol苏打、NaOH，这依据第一个容器中的预混合物而定。
14.用于制备权利要求4的组合物的野外用具，其特征在于它包括：
—在第一个容器中，至少一个单一剂量的发光氨试剂，其含量足以提供约5mmol，并与25～50mmol或90mmol苏打、NaOH，或50mmol的过氧化氢预混合并形成相容的固体形式；
—在第二个容器中，至少一个单一剂量为50mmol的过氧化氢，或25～50mmol或90mmol苏打、NaOH。
15.依据权利要求9～14中任一要求所述的野外用具，其中每个容器均是由塑料材料或玻璃制成且可重复密封的容器。
16.依据权利要求9～14中任一要求所述的野外用具，其特征在于至少一个或所有的容器是嵌入至少一个透明护罩内的腔泡。
17.用于制备权利要求1～5中任一要求所述的组合物的野外用具，其特征在于有至少一个透明护罩，其中至少含有三个腔泡，其中之一装有单一剂量的足以提供1～20mmol的发光氨试剂，另一个装有单一剂量的25～500mmol苏打、NaOH，第三个装有单一剂量的25～100mmol过氧化氢。
18.用于制备权利要求1～5中任一要求所述的组合物的野外用具，其特征在于含有一个透明护罩及至少两个腔泡：其中之一装有单一剂量的足以提供1～20mmol的发光氨试剂，并与25～500mmol苏打、NaOH，或25～100mmol过氧化氢形成预混合物；第二个装有单一剂量的25～100mmol过氧化氢或25～500mmol苏打，这依赖于第一个预混合物而定；或者至少一个透明护罩，其中含有至少一个装有上述三种基本成分的预混合物的腔泡。
19.权利要求9～18中任一要求所述的野外用具，其特征在于至少一个单一剂量形式为丸剂。
20.权利要求8～19中任一要求所述的野外用具，其特征在于每一个单一剂量形式均为丸剂。
21.依据权利要求9～20中任一要求所述的野外用具，其特征在于单一剂量还含有赋形剂便于直接压碎丸剂，以避免由于NaOH的存在引起的潮湿结块；例如乳糖、纤维素、磷酸钙；还含有以便于丸剂崩解的赋形剂，例如交联羟甲基纤维素，羧甲基淀粉醚钠盐。
22.依据权利要求9～21中任一要求所述的野外用具，其特征在于发光氨试剂为发光氨。
23.依据权利要求9～22中任一要求所述的野外用具，其特征在于三种成分发光氨、苏打和过氧化氢形成单一的预混合物，确保其相容混合且不过早产生反应，使它们能够共同封入一个容器中。
24.重新配制依据权利要求1～5中任一要求所述的组合物的方法，其特征在于单一剂量的发光氨试剂、单一剂量苏打在水中稀释，或者单一剂量的发光氨试剂和苏打形成的混合物、单一剂量过氧化氢在水中稀释；所述的物质取自依据权利要求9～23中任一要求所述的本用具的容器。
25.在能见度降低的情况下搜索和定位受伤或被击倒动物的方法，其特征在于使用权利要求1～5中任一要求所述的组合物，或者使用权利要求24所述的方法配制本组合物；将组合物喷洒在怀疑动物经过的区域，使组合物与猎取动物留下的血迹相互接触以产生发光反应。
26.在能见度降低的情况下搜索和定位搜索和定位犯罪或事故现场的方法，其特征在于使用权利要求1～5中任一要求所述的组合物，或者使用权利要求24所述的方法配制本组合物；将组合物喷洒在被提及的现场，使组合物与人留下的血迹相互接触以产生发光反应。
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