CN1625599A - 新微生物、其产物及其应用 - Google Patents

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Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本发明提供了能产生具有良好的黑素生成抑制作用的(E)－4－(2－异氰基乙烯基)苯基α－L－鼠李吡喃糖苷的新微生物肠杆菌属(Enterobacter sp.)B20株及由该菌株产生的α－L－鼠李吡喃糖苷化合物。本发明的新微生物是从土壤分离出来的革兰氏阴性杆菌，因极生鞭毛而具有运动性。在需氧条件下，以10～37℃的培养温度、约5～9的培养基pH和一般1～7天左右的时间进行培养而产生的α－L－鼠李吡喃糖苷化合物具有高安全性，可作为稳定的美白剂使用。

Description

新微生物、其产物及其应用
技术领域
本发明涉及具有产生(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷(rhamnopyranoside)的能力的新微生物，上述化合物是基于酪氨酸酶抑制活性而具有黑素产生抑制作用，对晒伤后色素沉着、褐黄斑、雀斑、肝性褐黄斑等的预防及改善有效的新型化合物；并涉及基于该微生物产生的酪氨酸酶抑制活性而具有黑素产生抑制作用、对晒伤后色素沉着、褐黄斑、雀斑、肝性褐黄斑等的预防及改善有效的新型化合物；以及含有上述化合物的外用皮肤药、特别是美白剂。
背景技术
皮肤的色素沉着有褐黄斑、雀斑、肝性褐黄斑等皮肤病引起的色素沉着等多种情况。它们的作用机制通常被认为是晒伤或激素异常等引起存在于表皮细胞中的黑素细胞所生成的黑素扩散、沉着到邻近细胞。为抑制黑素这种色素的生成，重要的是抑制作为该黑素细胞中的黑素生成的第一阶段的酪氨酸酶的生成，或者直接抑制酪氨酸酶。一直使用的曲酸和熊果苷是具有此作用的代表性药物。此外，由酪氨酸酶的作用而生成的多巴和多巴醌通过酶或非酶的氧化作用会生成黑色，抑制这一过程对抑制黑素生成也是有效的。其代表性的药物有抗坏血酸、氢醌等。
然而，实际情况是原来的药物未必能得到充分的效果。作为化妆品或外用皮肤药的原料，目前希望能创制安全性高、具有良好的抑制黑素产生的作用的美白剂。
发明的揭示
本发明者对天然存在的多种微生物产生的物质深入研究后发现，属于肠杆菌属的新的微生物物种能产生具有优异的酪氨酸酶抑制活性和黑素产生抑制作用的物质。然后，从该微生物的培养物成功地分离出新型的(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷(以下简称为化合物(I))。接着，发现该化合物(I)具有优异的预防和改善色素沉着的效果，通过配合使用该化合物而得到能发挥良好的美白效果的安全性高的美白剂，从而完成了本发明。
即，本发明首先涉及具有黑素产生抑制作用、作为美白剂有用的(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷或其盐，其次涉及含有该化合物的外用皮肤药，特别是美白剂，第三涉及具有产生(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷的能力的新微生物肠杆菌属(Enterobacter sp.)B20株。
附图的简单说明
图1表示本发明化合物的红外吸收光谱(νmax(KBr)cm-1)。
图2表示本发明化合物的1H-NMR谱。
图3表示本发明化合物的13C-NMR谱。
实施发明的最佳方式
以下对本发明作详细说明。
本发明的新微生物是自土壤分离的属于肠杆菌(Enterobacter)属的细菌，具有如下的细菌学性状。
1)形态学性质
本菌株为革兰氏阴性杆菌，因极生鞭毛而具有运动性。细胞大小为0.8～1.1×1.0～2.2μm。未发现有孢子形成。
2)培养性质
在肉汤琼脂培养基上形成淡黄茶色的菌落。菌落呈圆形，表面光滑。在肉汤液体培养中，在培养基表面形成皮膜，整个培养基浑浊。在肉汤明胶穿刺培养中，未见明胶液化。用石蕊牛奶培养时，1周培养后未见凝固和胨化。
3)生理学性质
B20株的生理学性质(1)
首先，将本菌株的生理学特性等汇总于表1。
                表1
    硝酸盐的还原     阳性
    脱氮反应     阳性
    MR试验     阳性
    VP试验     阴性
    吲哚的生成     阴性
    硫化氢的生成     阴性
    淀粉的水解     阴性
    柠檬酸的利用     阳性
    硝酸盐的利用     阴性
    铵盐的利用     阳性
    水溶性荧光色素的生成     阴性
    尿素酶     阴性
    氧化酶     阴性
    过氧化氢酶     阳性
    生长温度范围     10～37℃
    最适生长温度     20～32℃
    生长pH范围     pH5～9
    最适生长pH     pH5～8
    厌氧条件下的生长     阳性
    OF试验     发酵型
    精氨酸分解反应     阴性
    加3％NaCl的肉汤培养基中的生长     阳性
B20株的生理学性质(2)
下面将从各种糖产生酸的特性汇总于表2。
             表2
    糖的种类     是否产生酸
    L-阿拉伯糖     阳性
    D-木糖     阳性
    D-葡萄糖     阳性
    D-甘露糖     阳性
    D-果糖     阳性
    蔗糖     阴性
    肌醇     阴性
    D-甘露醇     阳性
    D-半乳糖     阳性
    麦芽糖     阳性
    海藻糖     阳性
    乳糖     阳性
    D-山梨醇     阴性
    水杨苷     阳性
    甘油     阳性
    淀粉     阴性
    纤维二糖     阳性
B20株的生理学性质(3)
表3汇总表示碳源的利用性。
            表3
    碳源的种类     利用性
    L-阿拉伯糖     阳性
    D-木糖     阳性
    D-葡萄糖     阳性
    D-甘露糖     阳性
    D-果糖     阳性
    蔗糖     阴性
    肌醇     阴性
    鼠李糖     阳性
    棉子糖     阴性
    D-甘露醇     阳性
    D-半乳糖     阳性
    麦芽糖     阳性
    海藻糖     阳性
    乳糖     阳性
    D-山梨醇     阳性
    水杨苷     阳性
    蜜二糖     阴性
    甘油     阳性
    淀粉     阳性
    黄嘌呤     阴性
    甲壳质     阴性
归纳上述微生物学性质，本菌株是革兰氏阴性的兼性厌氧杆菌。生长温度范围为10～37℃，硝酸盐的还原、脱氮反应、MR试验、柠檬酸的利用性、过氧化氢酶试验均为阳性。可从L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-果糖、D-甘露醇、D-半乳糖、麦芽糖、海藻糖、乳糖、水杨苷、甘油、纤维二糖产生酸，OF试验的结果为发酵型。另一方面，VP试验、吲哚的生成、硫化氢的生成、尿素酶、氧化酶试验、精氨酸分解反应的结果为阴性。
根据上述性质，对伯捷氏系统细菌学手册(Bergey’s Manual of SystematicBacteriology，1989)及其它文献的检索结果，认为本菌株为属于肠杆菌属的细菌，命名为肠杆菌属(Enterobacter sp.)B20株。
本菌株已于2001年12月25日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所特许生物保藏中心(日本国茨城县筑波市1丁目1番地1，中央第6)，保藏编号为FERM P-18666号，并于2002年12月26日根据布达佩斯条约提出保藏的移交请求，以保藏编号FERM BP-8266号保藏。由于微生物容易发生人工或自然变异，所以本发明所用的肠杆菌属(Enterobacter sp.)B20株，除了天然分离的微生物之外，当然包括用紫外线、X线、化学试剂等使其人工变异的变异株以及天然变异株。
下面，说明培养肠杆菌属B20株产生本发明化合物(I)的方法。
即，本发明化合物(I)或其盐是通过培养属于肠杆菌属的具有产生本发明化合物(I)的能力的微生物，如肠杆菌属B20 FERM P-1866号菌株或其变异株而得到的。培养按照一般微生物的培养方法进行。
培养所用的培养基可以是含有属于肠杆菌属的能产生本发明化合物(I)的微生物，如肠杆菌属B20株可利用的营养源的培养基，可以用合成培养基、半合成培养基或天然培养基。可使用公知的营养物作为添加于培养基中的营养源。培养基的组成中，作为碳源可列举L-阿拉伯糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-果糖、L-鼠李糖、D-甘露醇、甘露糖、乳糖、D-半乳糖、麦芽糖、海藻糖、水杨苷、淀粉、葡萄糖、糊精、甘油、植物油等。作为氮源可用肉汁、蛋白胨、麸质粗粉、棉子饼、大豆粉、花生粉、鱼粉、玉米浆、干酵母、酵母膏、氯化铵、硫酸铵、硝酸铵、尿酸等有机、无机氮源。作为金属盐，可根据需要添加钠、钾、镁、钙、锌、铁、钴等的硫酸盐、硝酸盐、碳酸盐、磷酸盐等。还可根据需要添加甲硫氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、硫代硫酸盐、油酸甲酯、猪油、硅酮油、表面活性剂等生长促进剂或消泡剂。
培养条件一般在有氧条件下培养有利，培养温度在10～37℃(参见上述生理学性质的说明)范围，较好为20～32℃附近。培养基pH调整至约5～9，较好为约5～8的范围，可以得到好结果。培养时间根据培养基组成、温度条件适当确定，通常在1～7日左右，较好在2～5日左右。
从培养物分离作为目标的本发明物质，可适当利用通常用于微生物产生的代谢产物的提取、精制手段。例如在培养液、或经离心分离得到的培养液、或在培养物中加过滤助剂过滤而得的培养液中，加入与水不相混的有机溶剂乙酸乙酯等提取培养物中的该物质。培养液也可与适当的载体接触，使滤液中生成的物质被吸附，然后用适当的溶剂提取该物质。例如，使之与AmberliteXAD-2、Diaion HP-20、Diaion CHP-20或Diaion SP-900等多孔吸附树脂接触，使该物质被吸附。然后，用甲醇、乙醇、丙酮、丁醇、乙腈等有机溶剂与水的混合液洗脱该物质。通过将这时的有机溶剂的混合比率阶段地或连续地从低浓度提高到高浓度，可得到含该物质的部分。用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂提取时，在培养物滤液中加这些溶剂，充分振荡，提取该物质。然后，通过上述各操作法所得的含该物质的部分可通过硅胶、使用ODS等的柱色谱、离心液液分配色谱、使用ODS的高效液相色谱(HPLC)等常规方法进一步分离精制纯品。即，可以黑素生成抑制活性作指标，采用通常用于生理活性物质制造的手段进行分离、精制，这些手段利用的是对适当的溶剂的溶解性和溶解度的差异等。根据需要，这些方法可单用或按任意的顺序组合，反复使用。
本发明化合物(I)和酸形成盐。酸是无机酸或有机酸，具体可列举与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸或磷酸等无机酸，或与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸或乙磺酸等的酸加成盐。而且，本发明包括本发明化合物(I)或其盐的水合物、各种溶剂合物、互变异构体或基于手性碳的立体异构体等所有关联物质。此外，本发明化合物(I)或其盐有时存在多晶形，本发明也包括所有这些晶形。
本发明的外用皮肤药可按常法调制成化妆品、外用药、医药品等所有的形式。其具体例子可列举乳霜、乳液、化妆水、粉底、润肤膏、洗剂、凝胶物、溶液、膏药(stick)等形式。
本发明的外用皮肤药，较好在外用皮肤药总量中含有本发明化合物(I)或其盐0.00001～10重量％，特别好的是含有0.001～1重量％的量。未满0.00001重量％时，缺乏皮肤美白效果，配比超过10重量％效果也不会随之增加。
本发明的外用皮肤药中除了本发明化合物(I)或其盐之外，可适当配合通常的化妆品、外用药、医药品等所用的各种其它成分，例如，油剂、保湿剂、增粘剂、防腐剂、乳化剂、颜料、粉体、pH调节剂、药效成分、紫外线吸收剂、防氧化剂、香料等。
(实施例)
以下通过实施例具体说明本发明化合物(I)的产生，但本发明并不限于这些
实施例。
实施例1
将含葡萄糖10g、马铃薯淀粉20g、多种蛋白胨5g、酵母膏5g、碳酸钙4g、蒸馏水1L的培养基(pH7.0)分别注入容积500ml的三角烧瓶中，每个烧瓶100ml，于120℃灭菌20分钟。刮取在贝奈特氏(Bennett)琼脂培养基上生长良好的肠杆菌属B20株接种，于28℃、220转/分钟的条件下振荡培养3日，作为种子培养液。然后，将含甘油40g、玉米浆30g、硝酸钠4g、碳酸钙2g、硫酸镁7水合物0.2g、蒸馏水1L的培养基(pH5.5)分别注入容积500ml的三角烧瓶中，每个烧瓶100ml，于120℃灭菌20分钟。在200份该培养基中各接种上述种子培养液3ml，于28℃、220转/分钟的条件下振荡培养5日。
用夏普勒斯(Sharples)型离心机将以上所得的培养液20L的菌体与培养上清液进行分离。将上清液的pH调节到7之后用乙酸乙酯10L提取。另外，向菌体添加80％丙酮水溶液20L，搅拌3小时。在其中加硅藻土进行吸滤，将所得的丙酮溶液减压下浓缩，蒸除丙酮。用乙酸乙酯提取该浓缩液，将提取液浓缩至干。然后，将从菌体和上清液所得的乙酸乙酯提取物(8.4g)进行硅胶柱色谱分离(硅胶60，70-230目ASTM，默克)，依次用氯仿-甲醇(100∶1，20∶1，10∶1)洗脱。将含有黑素产生抑制物质的活性部分浓缩至干，得粗品(1.2g)。该粉末装入Oasis HLB固相萃取柱身6g/35cc，用蒸馏水(70ml)及50％甲醇(70ml)洗涤后，以100％甲醇(70ml)洗脱活性物质，浓缩至干，得活性粉末(517mg)。将该粉末装入HPLC(Sensyu Pack Pegasil ODS；20i.d.×250mm)，以乙腈-水(30∶70)洗脱，分出具有活性的峰，将该部分浓缩至干，得以下化1式所示的(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷，白色粉末(110mg)。
即，本发明化合物(I)为(化1)表示的糖苷。
(化1)
上述化1式表示的本发明化合物(I)的物理化学性质如下所示。
颜色及形状：白色粉末
旋光度：[α]D 25-142°(c 0.1，甲醇)
分子式：C15H17O5N
高分辨FAB质谱：
测定值292.1187(M+H)-
计算值292.1185(M+N)+
紫外可见吸收光谱(λmax MeOHnm(ε))：210(15,000)，221(15,000)，281(26,000)
红外吸收光谱(νmax(KBr)cm-1)：如图1所示
1H-NMR谱(400MHz，CD3OD)：如图2所示
13C-NMR谱(100MHz，CD3OD)：如图3所示
实施例2
用以下方法确认本发明化合物(I)对来自蘑菇的酪氨酸酶的抑制活性、对来自B16黑色瘤的酪氨酸酶的抑制活性，以及对B16黑素瘤的产生黑素能力的抑制效果。
对来自蘑菇的酪氨酸酶的抑制活性的测定法
用0.05M磷酸缓冲液(pH6.8)溶解来自蘑菇的酪氨酸酶(Sigma)使其浓度为20U/ml。用0.05M磷酸缓冲液(pH6.8)将L-多巴配制成0.3mg/ml的溶液。将L-多巴溶液30μl和不同浓度的本发明化合物(I)溶液30μl加至96孔板中，迅速与来自蘑菇的酪氨酸酶溶液30μl混合。于25℃保温10分钟后用微量读板器测定450nm处的吸光度。
对来自B16黑素瘤的酪氨酸酶的抑制活性的测定法
使在液氮中冷冻保存的约2.0×105/安瓿的B16黑素瘤细胞株溶于37℃的水浴中，将其立即悬浮于培养基10ml中。以800rpm离心5分钟，弃去上清液，添加新培养基10ml，使细胞悬浮。再以相同条件离心，弃去上清液，悬浮于新培养基。
在75cm2的烧瓶中接种该细胞，每个烧瓶约4.5×105个细胞。每2～3日更换培养基一次，于37℃、5％CO2下连续培养1周。将分会合(subconfluent)状态的细胞的培养基弃去，以PBS(-)洗涤培养细胞表面后，用0.25％胰蛋白酶使细胞剥离。加入含血清的培养基，使胰蛋白酶的反应中止，用吸移法使细胞分离后，将细胞悬浮液移入离心试管。以800rpm离心5分钟后，弃去上清液，将细胞悬浮于新培养基。用血细胞计数器测定细胞数。
将此细胞5×105个接种子175cm2的烧瓶，于37℃、5％CO2下培养5日。在形成会合状态时弃去培养基，用PBS(-)洗涤细胞表面后，以0.25％胰蛋白酶剥离细胞，加入含血清的培养基，使胰蛋白酶的反应中止。用吸移法使细胞分离，将细胞悬浮液收集在50ml的锥形管中，以800rpm离心5分钟。弃去上清液，使细胞悬浮于PBS(-)，再次用PBS(-)洗涤。重新悬浮于0.05M磷酸缓冲液(pH6.8)，用匀化器在冰中将细胞破碎。在1.5ml的样品管中分别注入等量细胞液，于4℃、12000rpm离心15分钟。收集上清液，在冰中保存至使用时(粗酶液)。
用0.05M磷酸缓冲液(pH6.8)将L-多巴配制成0.8mg/ml的溶液。加入L-多巴溶液0.25ml、不同浓度的本发明化合的(I)溶液0.25ml以及粗酶液0.5ml，迅速混合，于25℃保温2小时后，测定475nm处的吸光度。
对B16黑素瘤的产生黑素能力的抑制活性的测定法
使在液氮中冷冻保存的约2.0×105/安瓿的B16黑素瘤细胞株溶解于37℃的水浴中，将其立即悬浮于培养基10ml中。以800rpm离心5分钟，弃去上清液，添加新培养基10ml，使细胞悬浮。再以相同条件离心，弃去上清液，悬浮于新培养基。
在75cm2的烧瓶中接种该细胞，每个烧瓶约4.0×105个细胞。每2～3日更换培养基一次，于37℃、5％CO2下连续培养1周。将分会合状态的细胞的培养基弃去，以PBS(-)洗涤培养细胞表面后，用0.25％胰蛋白酶使细胞剥离。加入含血清的培养基，使胰蛋白酶的反应中止，用吸移法使细胞分离后，将细胞悬浮液移入离心试管。以800rpm离心5分钟后，弃去上清液，将细胞悬浮于新培养基(不含酚红)。用血球计数器测定细胞数。
用培养基(不含酚红)稀释细胞液，使浓度达到2×105个/ml，接种于96孔板，每孔100μl。于37℃、5％CO2下培养1日。用培养基(不含酚红)配制不同浓度的本发明化合物(I)溶液。加至96孔板中，每孔100μl。于37℃、5％CO2下培养5日，用下述方法进行评价。
(评价方法)
1、细胞外黑素量
培养后移至测定平板上，每孔150μl，转移时不让培养基发泡，用微量读板器测定OD450。
2、细胞内黑素量
将加有细胞的板翻转，弃去残留的培养基。添加0.1N的NaOH-0.1％tritonX-100，每孔150μl，用吸移法使其溶解。移至测定平板，每孔100μl，用微量读板器测定OD450。
3、蛋白质量
在测定平板中加蒸馏水，每孔156μl，取在测定细胞内黑素量时溶解的细胞液的残留液添加至上述孔中，每孔4μl。添加Bio-rad protein assay diesolution，每孔40μl，振荡2分钟。放置5分钟后用微量读板器测定OD590。
上述测定结果汇总于表4。本发明化合物(I)具有良好的酪氨酸酶抑制活性以及黑素产生抑制作用。而且，在明显显示其美白作用的浓度时，未见对显微镜下的细胞形态变化、细胞增殖以及细胞的蛋白含量产生影响。
表4 本发明化合物(I)的酪氨酸酶
抑制活性和黑素产生抑制作用
    IC50(ng/ml)
    蘑菇酪氨酸酶     1.9
    B16酪氨酸酶     0.54
    B-16/2D2细胞细胞内黑素的生成细胞外黑素的生成蛋白质合成 7252900
实施例3
本发明化合物(I)的美白效果用以下方法测定。
让20名受试者在夏天午前11时至午后1时晒太阳光2天，共4小时。以被晒的受试者的上腕内侧部皮肤为对象，自晒太阳光之日起5天后，每日早晚各涂敷1次各供试品，共计4周，这些供试品是混合以下的表5及表6所示的处方配制的水相和醇相，使它们溶解而配制出来的。
                 表5
    (醇相)
    成分     重量％
    乙醇     55.0
    聚氧乙烯固化蓖麻油     2.0
    防氧化剂、防腐剂     适量
    香料     适量
    供试药物     0.3～0.1
           表6
  (水相)
  成分     重量％
  甘油     5.0
  六甲基丙烯酸钠     适量
  精制水     余量
4周后，对各受试者判定美白效果。效果的判定根据下列标准进行。
◎：受试者中显示显著有效及有效的比例在80％以上。
○：受试者中显示显著有效及有效的比例为50～80％。
△：受试者中显示显著有效及有效的比例为30～50％。
×：受试者中显示显著有效及有效的比例未满30％。
判定的结果示于以下的表7。
                       表7
    供试药物种类     配比量(重量％)     效果
    对照(无添加)     -     ×
    曲酸     1.0     △
    氢醌     1.0     ○
    本发明化合物(I)     0.3     ○
    本发明化合物(I)     0.1     ○
如表7所示，含有本发明化合物(I)的组合物，与对照使用的药物比较，发现用较少量即具有同等甚至更好的防止黑素色素沉着的作用。而且，涂敷本发明化合物的受试者未见红斑、水肿等皮肤异常情况，也完全未见起因于涂敷本发明化合物而产生的副作用。
实施例4
对于本发明化合物(I)，配制由以下的表8、9及10所示成分组成的3种处方混合而成的乳液。
                表8
    成分A     重量％
    蔗糖脂肪酸酯     1.0
    浓缩甘油     6.0
    防腐剂(对羟基苯甲酸酯)     适量
    羧基乙烯基聚合物     0.06
    氢氧化钾     0.028
    精制水     余量
                  表9
    成分B     重量％
    橄榄油     4.0
霍霍巴油 4.0
    乳酸肉豆蔻酯     2.0
    自乳化型甘油单硬脂酸酯     1.5
    亲油型甘油单硬脂酸脂     1.5
            表10
    成分C     重量％
    本发明化合物(I)     0.2
    香料     0.2
将成分A加热溶解，保持在80℃。另将成分B于80℃加热熔解，加至成分A中，充分混合。于搅拌下冷却，在50℃时加成分C，得乳液。
实施例5
对于本发明的物质，调制以下的表11所示处方的化妆水。
                    表11
    成分     重量％
    浓缩甘油     4.0
    山梨醇溶液(70重量％水溶液)     4.0
    柠檬酸钠     0.3
    聚氧乙烯固化蓖麻油     0.5
    乙醇     15.0
    本发明化合物(I)     0.2
    香料     0.05
    精制水     余量
在室温将所有成分搅拌、混合，形成均匀溶液，调整pH至5.5，得化妆水。
实施例6
对于本发明化合物(I)，调制以下的表12所示处方的乳霜。
                 表12
    成分     重量％
    硬脂酸     2.0
    硬脂醇     7.0
    氢化羊毛脂     2.0
    三十碳烷     5.0
    2-辛基十二碳烷醇     6.0
    聚氧乙烯(25摩尔)鲸蜡醇醚     3.0
    甘油单硬脂酸酯     2.0
    丙二醇     5.0
    本发明化合物(I)     0.2
    亚硫酸氢钠     0.03
    羟苯乙酯     0.3
    香料     适量
    精制水     余量
将丙二醇加至精制水中，加热，保持在70℃(水相)。将其它成分混合，加热溶融，保持在70℃(油相)。将油相加至水相中，进行预乳化，再用高速混合器均匀乳化，得乳霜。
实施例4～6所得的外用皮肤药在美白效果试验中都显现出效果。
产业上利用的可能性
本发明提供了能产生具有良好的黑素产生抑制作用的(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷的新菌株。此菌株(包括变异株)产生的(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷是预期将成为良好的美白剂的化合物，它不仅对晒伤后的色素沉着、褐黄斑、雀斑、肝性褐黄斑等有淡化及美白的优良效果，而且安全性也优良。

Claims (4)

1、(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷或其盐。
2、外用皮肤药，其特征在于，含有(E)-4-(2-异氰基乙烯基)苯基α-L-鼠李吡喃糖苷或其盐。
3、如权利要求2所述的外用皮肤药，其特征还在于，为美白剂。
4、肠杆菌属(Enterobacter sp.)B20株。
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