CN1568330A - 含有糖基化磷脂酰肌醇的嵌合多肽 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及到含有细胞因子受体结合区和含有使糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚附着的信号序列的区域的多肽。本发明还涉及到该多肽的制备方法，编码该多肽的核酸分子和含有该多肽的药物组合物。

Description

含有糖基化磷脂酰肌醇的嵌合多肽
本发明涉及到含有细胞因子受体结合区和含有使糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚附着的信号序列的区域的多肽、制备所述多肽的方法、编码所述多肽的核酸分子和含有所述多肽的药物组合物。
GPI锚定是对增加了糖基化磷脂酰肌醇的蛋白质的翻译后修饰，其中的糖基化磷脂酰肌醇能使这些蛋白锚定到细胞膜的细胞外表面。一般带有GPI锚的蛋白不含有跨膜或细胞质区域。GPI锚蛋白包括不同家族的蛋白，这些蛋白的例子包括但不限于膜相关酶、涂覆在原生寄生生物如布鲁斯锥虫(Trypanosoma brucei spp)外表面的粘附分子和蛋白。肾中含有许多种由GPI锚定的蛋白的例子，即尿黑素、IV型碳酸酐酶、碱性磷酸酶、Thy-1、BP-3、氨肽酶P和二肽基肽酶。
所有GPI锚蛋白最初是由跨膜锚蛋白合成的，该跨膜锚蛋白在通过内质网转移后被剪切并通过特异性转酰氨基酶连接到预制的GPI锚上。通过增加GPI锚的蛋白修饰使该蛋白具有重要性质，因为增加的脂部分能使蛋白插入到细胞膜中，从而锚定蛋白。
制备合成的GPI锚序列有一些一般性需要。如果发生前体的剪切和锚的附着，则这些需要是在分子(10-20个氨基酸)的C末端有一个不连有一组碱性残基的疏水性区域，在该疏水性区域的前面有一个由7-10个残基组成的“间隔区域”，在该间隔区域的后面是小的氨基酸。在内质网中，该GPI锚被预组装并增加到初生蛋白中，与此步骤同时，GPI锚的上述初始C末端肽被除去，于是其被共价连接到该蛋白的一个新的C末端氨基酸上。
与受体相互作用而引起适当的生化反应的配体作为激动剂是已知的，防止或阻碍生化反应的配体作为拮抗剂也是已知的，例如但不限于，细胞特异性生长因子是可作为激动剂并可与定位在细胞膜上的受体结合的配体。
大量的生长因子(也称为细胞因子)具有许多不同的细胞功能，这些功能的例子包括但不限于免疫系统的调节、能量代谢的调节、生长及发育的调控。细胞因子通过在目标细胞的细胞表面表达的受体介导其效果。
细胞因子受体家族中的受体拥有单一的跨膜区域并且缺乏固有的酶活性(Kishimoto等，1994)，当细胞因子与其关联受体结合时，得到的复合体被内化并通过激活包括Jak/Stat和Mapk途径在内的信号级联发出信号，内化后接着的是再循环步骤从而使受体分子再生以在细胞内进一步使用。上述的举例是关于生长激素(GH)和对与其结合的生长激素受体(GHR)的描述。
已经知道单个分子的生长激素(GH)与两个受体分子发生结合(Cunningham等，1991；de Vos等，1992；Sundstrom等，1996；Clackson等，1998)，这种结合是通过GH上的两个独特的受体结合位点和两个受体的细胞外区域的通用结合袋(binding pocket)实现的。GH分子上的位点1比位点2具有更高的亲和性，依次地一个受体与GH上的位点1结合，另一个受体再补充到位点2从而发生受体的二聚合作用。
GHR的细胞外区域存在两个各大约100个氨基酸(SD-100)的连接区域：与细胞表面最近的C末端SD-100区域和最远的N末端SD-100区域。当激素与形成的三聚体复合物GHR-GH-GHR结合时，上述两区域发生构象改变。
此外，缺乏受体细胞质区域的截短GH受体可作为GH信号发射的主要负抑制剂(Ross等，1997)。由于其缺乏内化所必须的细胞质区域，因此该截短受体在细胞表面以较高水平表达(Maamra等，1999)。在存在GH的情况下，由于其缺乏细胞质区域，因此该截短受体与全长的受体杂二聚合，从而阻碍信号发射。由于该截短受体内化失败，于是其就作为主要的负抑制剂而阻止GH受体复合物的内化。
我们已经合成了含有GPI锚蛋白区域的细胞因子受体的变体，该变体缺乏细胞质区域，因此不能发射信号。提供GPI锚区域意味着该变体能插入到膜中且通过竞争作为GH信号发射的有效抑制剂用以在杂二聚体复合物的细胞表面循环GH和结合GH，其中的杂二聚体复合物由嵌合截短的经GPI锚定的受体、GH和内生受体组成。此外，经截短的GPI锚定的GH受体可产生大量的与GH结合的可溶性GH受体。
多种细胞因子都通过二聚或寡聚作用激活其关联受体，本发明涉及到提供细胞因子受体，该细胞因子受体通过提供多肽区域而被修饰，其中的多肽区域含有通过增加糖基化磷脂酰肌醇而被修饰的序列。
本发明的第一方面提供了一种嵌合的多肽，该多肽含有：
i)细胞因子受体的配体结合区；和
ii)含有使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列的区域。
优选地，所述的嵌合多肽由细胞因子受体的细胞外区和含有使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列的区域组成。
优选地，该多肽通过增加糖基化磷脂酰肌醇而被修饰。
优选地，该修饰的多肽是细胞因子介导的细胞信号发射的调节器。
优选地，使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列选自：
DKLVKCGGIS LLVQNTSWML LLLLSLSLLQ ALDFISL；
PSPTPTETAT PSPTPKPTST PEETEAPSSA TTLISPLSLI VIFISFVLLI；
LVPRGSIEGR GTSITAYNSE GESAEFFFLL ILLLLLVLV；和
TSITAYKSE GESAEFFFLL ILLLLLVLV。
在本发明的优选实施方案中，所述的多肽是拮抗剂。
本发明利用了细胞因子对其受体的高亲和性和亲脂GPI尾重新插入到质膜中的能力。本发明的多肽是“嵌合体”，其包含细胞因子受体的配体结合区和含有GPI锚加入位点的蛋白区域，该嵌合分子由细胞外细胞因子激素结合区和C末端GPI锚组成。
在循环过程中，上述嵌合蛋白预期形成一个由大量的嵌合蛋白与处于中心的GPI锚组成的微团，一旦与细胞膜接触，该GPI就会重新插入到细胞膜中。本发明重要的优点在于细胞因子与嵌合体结合产生受体：激素：嵌合体的复合体。在以GH为例时将是GHR：GH：嵌合体。由于嵌合体是截短的受体，因此该复合体不会发射信号，于是就会阻碍受体信号发射和内化。
在本发明的可选择的优选实施方案中，所述的多肽嵌合体可用作循环拮抗剂。在循环过程中，上述微团分子预期含有位于其中心的GPI锚和向外伸出的受体结合区，因此能结合并对抗激素的作用。
在本发明的可选择的优选实施方案中，所述的多肽嵌合体在通过基因治疗被本地或转基因表达后可用作拮抗剂。转染或基因治疗预期可以用于细胞水平或整个机体，因此在细胞中的本地表达能拮抗细胞因子的作用，或者将DNA注射入机体腔室如发炎的膝盖中能够阻碍炎性细胞因子如TNF的作用。
在本发明的优选实施方案中，细胞因子受体的配体结合区来源于选自如下的受体：生长激素(GH)；瘦素；红细胞生成素；促乳素；TNF；白介素(IL)，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12、IL-13、IL-15的p35亚单位；粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；粒细胞巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)；睫状神经营养因子(CNTF)；心脏营养素-1(cardiotrophin-1)(CT-1)；白血病抑制因子(LIF)；制瘤素M(OSM)；干扰素，IFNα和IFNγ。
优选地，细胞因子受体的配体结合区来源于生长激素受体。
在本发明的一个实施方案中，该多肽是融合蛋白。
在本发明更优选的实施方案中，所述多肽含有图3或图9或图14或图15所示的氨基酸序列。
在本发明更优选的实施方案中，通过增加、缺失或取代至少一个氨基酸残基来修饰本发明的多肽从而提供本发明多肽的一种序列变体。
通常的变体包括经过特定修饰而使与其生理活性无关的多肽特征发生改变的嵌合体，例如可以取代或删除半胱氨酸残基以防止不需要的二硫化物连接。同样地，通过消除表达系统中由蛋白酶引起的蛋白水解可以改变某些氨基酸从而提高嵌合体的表达。
表达不同的嵌合体，并测试其一种或多种活性以检测哪一种突变产生具有目的属性的变体多肽。对于变体可以进行进一步的突变，该突变对于多肽的氨基酸序列来说是沉默的，但提供了在特殊宿主例如酵母和粘液菌如网柄菌(Dictyostelium spp)中翻译的偏好密码子。
普通技术人员能够意识到在上述嵌合的多肽中可以进行保守氨基酸取代以制备上述多肽的功能等同变体，即该变体可保留嵌合体的功能性性能。在本发明中，“保守氨基酸取代”是指不改变发生氨基酸取代的蛋白质的相对电荷或大小特征的氨基酸取代。
变体可以根据本领域的普通技术人员公知的改变多肽序列的方法制备，这些方法在汇编这些方法的参考文献中能找到，如Molecular Cloning：A Laboratory Manual，J.Sambrook等编，Second Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，1989或CurrentProtocols in Molecular Biology，F.M.Ausubel等编，John Wiley & Sons，Inc，New York。氨基酸的保守取代包括在下列氨基酸中进行的取代(a)M、I、L、V；(b)F、Y、W；(c)K、R、H；(d)A、G；(e)S、T；(f) Q、N；和(g)E、D。
嵌合多肽的氨基酸序列中的保守氨基酸取代产生这些多肽的功能等同变体，该取代通常通过改变编码嵌合体的核酸来实现。这种取代可以通过本领域的普通技术人员公知的多种方法进行，例如，可以用PCR指导的突变、或根据Kunkel，Proc.Nat.Acad.Sci.US.A.82：488-492，1985中的方法定点突变来实现氨基酸的取代。
可选择地或优选地，所述的修饰包括在本发明的嵌合多肽的重组或合成形式的产品中使用修饰的氨基酸。
很明显对于本领域的普通技术人员来说，修饰的氨基酸包括例如但不限于4-羟基脯氨酸、5-羟基赖氨酸、N6-乙酰基赖氨酸、N6-甲基赖氨酸、N6，N6-二甲基赖氨酸、N6，N6，N6-三甲基赖氨酸、环己丙氨酸、D-氨基酸、鸟氨酸。
修饰氨基酸的加入可以给本发明的多肽带来有益的属性，如修饰氨基酸的加入可以提高嵌合多肽在体内的稳定性，因此可以减少向病人给药的多肽的有效量。
本发明的另一方面提供了一种核酸分子，其含有编码本发明多肽的核酸序列。
在本发明的优选实施方案中，所述的核酸分子含有如图3或图9所示的核酸序列。
在本发明的优选实施方案中，提供了一种在严格杂交条件下能与图3或图9所示的序列杂交的核酸序列。
本发明的另一方面提供了一种由图3或图9所示的核酸分子编码的多肽。
本发明的又一方面提供了一种含有编码本发明前述的任一方面或实施方案的多肽的DNA分子的载体。
在本发明的优选实施方案中，所述的载体是适于真核基因表达的表达载体。
通常所述的修饰包括提供介导细胞/组织特异性表达的转录调控序列(启动子序列)，这些启动子序列可以是细胞/组织特异性的、可诱导性的或组成性的。
启动子是本领域公知的术语，为了清楚的目的而解释为具有下列特征，这些特征仅仅是举例，并不形成任何限制。增强子元件是顺式作用的核酸序列，经常发现位于基因转录起始位点的5’端(在基因序列的3’端也能发现增强子或者甚至定位在内含子序列中，因此其位置独立)。增强子具有提高与该增强子连接的基因的转录速率的作用。增强子的活性受反式作用的转录因子(多肽)的影响，该转录因子已经表明能特异性地与增强子元件结合。转录因子的结合/活性(请参见Eukaryotic TranscriptionFactors，by David S Latchman，Academic Press Ltd，San Diego)受许多环境因素的影响，这些因素的例子包括但不限于中间代谢物(如葡萄糖、类脂类)、环境效应物(如光、热)。
启动子元件也包括所谓的TATA盒及具有选择转录起始位点功能的RNA聚合酶起始选择(RIS)序列，这些序列也结合多肽，尤其是具有促进RNA聚合酶转录起始选择的功能的多肽。
修饰还包括提供可选择性标记和自主复制序列，二者都有利于所述载体在任一真核细胞中的维持。自主维持的载体被称作游离型载体。
有利于载体编码的基因的表达的修饰包括提供转录终止/多聚腺苷酸化序列，这也包括提供使载体编码的基因最大化表达的内部核糖体进入位点(IRES)，其中的基因设计在双基或多基表达盒中。
这些修饰是本领域公知的，通常地，在表达载体的构建和重组DNA技术方面有大量的公开文献，参见Sambrook等(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbour Laboratory，Cold SpringHarbour，NY和其中的参考文献；Marston，F(1987)DNA CloningTechniques：A Practical Approach Vol III IRL Press，Oxford UK；DNACloning：F M Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley & Sons，Inc(1994)。
很明显对于本领域的普通技术人员来说本发明的载体可以是基因治疗载体，基因治疗载体通常是基于病毒的载体，通常大量的病毒被用作载体以运输外源基因，常用的载体包括经过重组修饰的包膜或无包膜DNA或RNA病毒，优选地选自杆状病毒(baculoviridiae)、细小病毒(parvoviridiae)、picornoviridiae、疱疹病毒(herpesveridiae)、痘病毒(poxviridae)、腺病毒(adenoviridiae)或细小核糖核酸病毒(picornnaviridiae)。还可以使用采用了各母系载体属性的有利部分的嵌合载体(参见，如Feng等(1997)Nature Biotechnology 15：866-870)。这些病毒载体可以是野生型的或者用重组DNA技术修饰使其成为复制缺陷型、条件复制型或者复制型。
优选的载体来源于腺病毒、腺相关病毒和逆转录病毒基因组。在本发明最优选的实施方案中，所述载体来源于人腺病毒基因组，特别优选的载体来源于人腺病毒血清型2或5。可以通过修饰或删除Ela和/或E1b编码区使这些载体的复制能力降低(达到“复制缺陷型”的程度)，对病毒基因组进行的使其产生特别的表达特征或允许重复给药或降低免疫反应的其他修饰是优选的。
可选择地，上述病毒载体可以是条件复制型或复制型。条件复制型病毒载体被用于在特定细胞型中实现选择性表达，而避免不适当大范围的干扰，条件复制型载体的例子在Pennisisi，E.(1996)Science 274：342-343；Russell，and S.J.(1994)Eur.J.of Cancer 30A(8)：1165-1171中有描述。选择性复制载体的其他例子包括在其中复制病毒的必需基因处在启动子的控制之下的那些载体，其中的启动子仅在特定的细胞型或特定的细胞阶段被激活，因此，在缺乏上述基因表达时该病毒就不会复制。这种载体的例子在Henderson等于1997年12月16日公开的美国专利No.5,698,443和Henderson等于1999年2月16日公开的美国专利No.5,871,726中有描述，在此处将其全部启示引为参考。
可选择地，上述病毒基因组可以经过修饰使其含有可诱导型启动子，该启动子仅在某些条件下实现复制或表达。可诱导型启动子的例子在科学文献中是公知的(参见如Yoshida和Hamada(1997)Biochem.Biophys.Res.Comm.230：426-430；Iida等(1996)J.Virol.70(9)：6054-6059；Hwang等(1997)J.Virol 71(9)：7128-7131；Lee等(1997)Mol.Cell.Biol.17(9)：5097-5105；和Dreher等(1997)J.Biol.Chem 272(46)：29364-29371)。
载体也可以是非病毒载体，可以从本领域普通技术人员容易得到的许多商业源得到。例如，该载体可以是质粒，该质粒可以是游离型或整合型。
本发明的另一方面提供了一种制备本发明多肽的方法，该方法包括：
(i)在有利于制备所述多肽的条件下培养用本发明的载体或核酸转染的细胞；和
(ii)从所述细胞或其生长环境中纯化所述多肽。
在本发明的优选方法中，所述的载体编码分泌信号以方便所述多肽的纯化，从而使所述的重组多肽具有分泌信号。
在本发明的另一个实施方案中，提供了经本发明的载体或核酸转染的细胞。
优选地，所述的真核细胞选自：霉菌细胞如酿酒酵母、毕赤氏酵母(Pichia spp)，粘液菌(如网柄菌)，昆虫(如秋粘虫(Spodopterafrugerda))，植物或哺乳动物细胞。
在本发明的另一个优选实施方案中，所述的真核细胞是网柄菌。
本发明的另一方面提供了本发明的多肽作为药物的用途。优选地，所述的多肽用于药物组合物中。
当被给药时，本发明的多肽以药物学上可接受的制剂形式给药。该制剂通常可以含有药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、合适的载体和可选择的其他治疗试剂。
本发明的多肽可以通过任何常规的途径给药，包括注射给药。例如给药可以是口服、静脉内、腹膜内、肌肉内、腔内、皮下或经过皮肤给药。
本发明的药物组合物以有效量给药，“有效量”是指单独或者与另一次用量一起引起目的反应的组合物的量。这可以包括暂时性地减慢疾病的发展，尽管更优选地其能永久地阻止疾病的发展。这可以通过常规方法或根据诊断方法监测。
对患者给予的多肽的剂量可以根据不同的参数进行选择，具体地根据所用的给药方式和患者的状态(如年龄、性别)。当给药时，本发明的药物组合物以药学上可接受的量和药学上可接受的组合物形式使用。该制剂通常可以含有盐、缓冲剂、防腐剂、合适的载体和可选择的其他治疗试剂。当用于药物时，该盐应该是药学上可接受的盐，但是非药学上可接受的盐可以方便地用来制备其药学上可接受的盐，因此不被排除在本发明的范围之外。该药理学上和药学上可接受的盐包括但不限于由下列酸制备的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、马来酸、乙酸、水杨酸、柠檬酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。另外，药物上可接受的盐可以制备成碱金属或碱土金属盐，如钠、钾或钙盐。
如果需要，上述药物组合物可以与药学上可接受的载体结合。术语“药学上可接受的载体”在本申请中意思是指适于向人给药的一种或多种固态或液态填充物、稀释剂或形成胶囊的物质。术语“载体”是指有机或无机成分，该成分是天然或者合成的，活性成分与其结合可使应用方便。该药物组合物的成分还可以与本发明的分子以某种方式彼此共混合，该方式基本上没有使目的药学功效减弱的相互作用。
上述药物组合物可以含有合适的缓冲剂，如盐中的乙酸、盐中的柠檬酸、盐中的硼酸和盐中的磷酸。
上述药物组合物可选择地也可以含有合适的防腐剂，如杀藻铵、氯丁醇、对羟基苯甲酸酯类和水杨酸钠。
上述药物组合物可以方便地制成单位剂量的形式，可以用药学领域公知的任何方法来制备该组合物。所有的制备方法都包括将活性试剂与载体结合的步骤，该载体形成一种或多种辅助成分。通常通过将活性化合物与液态载体、细颗粒固态载体或两者均一且紧密地结合，然后如果需要，使产物成型而制备该组合物。
适于口服给药的组合物可以制成分散的单位，如胶囊、药片、糖淀，每一种含有预定量的活性化合物。其它的组合物包括水性液体或非水性液体的悬浮液如糖浆、酏剂或乳状液。
适于肠胃外给药的组合物通常含有一种无菌水性或非水性制剂，该制剂优选地与受体的血液等渗，根据公知的方法用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂可以制备该制剂。该无菌注射用制剂还可以是溶在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射用溶液或悬浮液，例如溶于1，3-丁二醇的溶液。可用的可接受的溶剂是水、乳酸林格氏(Ringer’s)溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发油类通常可用作溶剂或悬浮介质。为此目的可以使用任何温和的不挥发性油类，如合成的单或二甘油酯。另外，脂肪酸如油酸也可以用于注射用制剂中。适于口服、皮下、静脉内、肌肉内等给药的载体制剂在Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co，Easton，PA中能找到。
本发明的另一方面提供了本发明的多肽在制备用于治疗疾病的药物中的用途，这些疾病选自：肢端肥大症、巨人症、糖尿病、癌症、厌食症、自体免疫性和传染性疾病、炎性疾病如风湿性关节炎。
在本发明的优选实施方案中，所述疾病是肢端肥大症。
在本发明的另一个优选实施方案中，所述疾病是巨人症。
在本发明的又一个优选实施方案中，所述疾病是癌症。
本发明还提供了一种治疗人或动物个体的方法，该方法包括向所述的个体用有效量的多肽药物组合物或药物给药。
本发明还提供了降低分子肾清除率的方法，该方法包括根据本发明的任一实施方案制备试剂。其微团的大小降低肾清除率。
现在通过实施例并参考下面的附图来描述本发明的实施方案。
图1显示了载体pAc6-LP-MCS-GPI的核酸序列，其用于克隆GHR的胞外区以使其在网柄菌中表达。
图2显示了pAc6-LP-MCS-GPI的部分多克隆位点和被克隆进来的GHR胞外区，形成的新载体称为pAc6GHRGPI。GHR的胞外区用大写表示。
图3显示了来自载体pAc6GHRGPI的GHRGPI融合核酸和氨基酸序列，GHR的胞外区核酸序列用大写表示，氨基酸序列用粗体表示。
图4显示了从pAc6GHRGPI转染的网柄菌克隆的细胞裂解物中筛选GHRGPI，用GHR的单克隆抗体Mab5通过Western印迹进行筛选。通道AX2是未转染细胞的阴性对照，通道1-7是不同的被筛选的克隆，通道1、2、3和5显现出了正确大小的阳性带，并挑选通道3用于纯化GHRGPI。
图5显示了对GHRGPI进行的免疫染色，证明了该蛋白在网柄菌的细胞表面表达。上部左边的图板显示了用未转染细胞阴性对照着色的表面，右边的图板是用pAc6GHRGPI转染细胞着色的表面，在细胞表面显现出阳性免疫着色。在下部的图板中，为了研究细胞内着色，细胞被透化处理，同样左边是阴性对照，右边是显示细胞内着色的阳性对照，
图6是单独的碘化GH和含有碘化GH加或减冷GH的GHRGPI(从表达GHRGPI的稳定的网柄菌克隆中纯化，其中的GHRGPI在图5中得到鉴定)的洗脱曲线(Sephadex G100)。GHR-GPI形成含有125I-GH的大约60-65Kda的单一复合体(蓝线)，黄线是单独的碘化GH，粉红色线是存在过量冷GH时的GHR-GPI。结果显示了GH与纯化的GHRGPI的功能性结合。
图7显示了在存在或缺乏纯GHRGPI的情况下对生长激素进行的生物测定。用由生长激素所发信号激活的荧光素酶报道基因转染表达生长激素受体的细胞，然后在存在或缺乏GHRGPI(大约10nM)的情况下用增量的生长激素刺激该细胞。在存在GHRGPI时，生长激素信号在生长激素低剂量时被消除或在高剂量时降低。
图8是pCR-3GPI-Thy-1，一种带有哺乳动物GPI信号的哺乳动物表达载体。
图9是pCR-3GPI-Thy-1中的哺乳动物GHRGPI锚定多肽(其也称作pCR3GHRGPI)的核酸和氨基酸序列，GHR的胞外区与BamHI和EcorI位点连接。在氨基酸序列中，粗体是GHR胞外区，粗斜体下划线是GHR信号，下划线是被切除的GPI信号的起始部分。
图10是对CHO细胞进行的FACS分析，其中的CHO细胞仅被载体(细线)转染和被用GHR特异性单克隆抗体免疫着色的pCR3GHRGPI(粗线)转染。该分析证实了几乎所有的CHO细胞都高水平表达GHRGPI。
图11是表达GH受体(仅GH)的HEK293细胞中和被GHRGPI质粒转染的细胞中的Stat5的GH活性(荧光素酶的诱导倍率)。该图证实了GHRGPI(与GPI连接的细胞外区域GHR)的转基因表达完全抑制GH的信号发射。
图12是对培养基中的来源于未经过不同载体转染的哺乳动物细胞的可溶性GH受体(GHBP)进行的测定。利用GHBP-LIFA(配体免疫功能测定)得到结果，“小于70”意味着低于测定的最低标准。该结果证实了细胞中GHRGPI的表达在培养基中产生非常高水平的可溶性受体。
图13显示了1型TNF受体的氨基酸和核酸序列。在蛋白序列P19438中，信号序列是绿色，跨膜螺旋是红色；在核酸序列X55313 H.sapiensTNF-Rm...[gi：37223]中，256-318是信号序列，319-888是胞外区域。
图14显示了将胞外区TNF受体克隆到载体pCR-3GPI-Thy-1中(图8)后，来源于载体pCR3TNFGPI的I型TNF受体-GPI融合多肽的氨基酸序列。粗体是TNF受体的胞外区。粗斜体下划线是TNF受体信号，下划线是被切除的GPI信号起始部分。
图15显示了将胞外区瘦素受体(ObR)克隆到载体pCR-3GPI-Thy-1中(图8)后，来源于pCR3ObRGPI的瘦素受体-GPI融合多肽的氨基酸序列。斜体是ObR信号，粗体是ObR胞外区，均与GPI连接，下划线是GPI的剪切位点。
图16是细胞因子和保藏登记号列表。
材料和方法
从网柄菌中纯化与GPI融合的细胞因子受体胞外区并证实其拮抗活性
网柄菌菌株的转染和保持
用磷酸钙法或电穿孔法转染网柄菌，在含有G418的培养基中保持以挑选稳定克隆。
嵌合多肽的克隆和表达
将人GHR的胞外区cDNA(98-834位碱基，登记号为X06562)连接到载体(pAc6-LP-MCS-GPI)中，该载体含有网柄菌肌动蛋白6基因启动子、网柄菌信号肽编码区、多克隆位点和GPI锚定的GPI信号(PSPTPTETATPSPTPKPTST PEETEAPSSA TTLISPLSLI VIFISFVLLI)。得到的载体转染到网柄菌细胞。
在网柄菌中进行N和O-糖基化作用，然后利用抗GHR抗体Mab5通过免疫组织化学和Western印迹筛选表达GHR-GPI的克隆，利用GH亲和柱从细胞裂解液中纯化GHR-GPI。经证实纯化的GHR-GPI与GH结合，在对GH的信号发射进行生物测定时，GHR-GPI用作抑制信号发射的拮抗剂。
用BamHI和EcoRI消化载体pAc6-LP-MCS-GPI(图1)，通过PCR扩增5’和3’端分别含有BamHI和EcoRI限制酶切位点的GHR的胞外区碱基98-834(登记号为X06562)，然后将其连接到pAc6-LP-MCS-GPI的MCS，得到下列MCS：cag gat cca ttt...GHR 98-834.....tac cga att cca(图2)。编码的GHR蛋白是从哺乳动物信号肽后的第一个残基到跨膜区域前的最后残基，得到的载体称为pAc6-GHR-GPI。
GHR-GPI的纯化
将pAc6-GHR-GPI的cDNA转染到网柄菌细胞中，用人GHR胞外区的单克隆抗体Mab5通过Western印迹选择并筛选克隆，有5个克隆在期望的糖基化GHR-GPI大小即40kDa处产生明显信号(图4)，一个克隆的免疫着色清楚地鉴定出细胞表面的GHR-GPI(图5)。在0.1％的Triton X100中裂解细胞，然后在PBS/0.1％Triton X 100(磷酸钠0.01M，NaCl 0.15M，0.02％NaNO3，0.1％Triton X-100 pH 7.4)中用GH亲和柱纯化，GHR-GPI的大约浓度为120ug/ml或3μM。通过与碘化GH结合来证实纯的GHRGPI的功能性活性(图6)。
GH的生物测定
用公知的生物测定法来检测拮抗剂活性(Ross等，1997)。用结合激活的Stat5的荧光素酶报道基因瞬时转染持久表达全长GHR的细胞系，24小时后在存在或不存在拮抗剂的情况下用GH刺激该细胞6小时，然后裂解该细胞，检测其荧光素酶活性。该生物测定在存在或缺乏浓度大约为10nM的GHR-GPI的条件下进行(图7)。在低浓度的GH中，GHR-GPI完全中断信号发射，在较高浓度的GH中，大约减少50％的信号发射。这证明了GHR-GPI对GH信号发射具有拮抗作用。
克隆与哺乳动物表达载体融合的GPI细胞因子受体胞外区并证实其在细 胞因子敏感细胞系中表达时的拮抗活性
GHR-GPI能用于转基因治疗
为了证实GHR-GPI能用于转基因治疗，我们从哺乳动物表达载体中克隆了上游是人GPI信号序列的GHR胞外区(图8-9)，然后将该结构转染到CHO细胞中，用人GHR的特异性单克隆抗体进行FACS分析证实其表达(图10)，该单克隆抗体与CHO细胞的结合水平非常高。为了证实细胞表面的GHR-GPI表达是否具有拮抗剂的作用，将GHR-GPI转染成到表达野生型GHR的Hek293细胞中，并用GH刺激，GHR-GPI的这种共表达完全中断GH的信号发射(图11)。另外，检测培养GHR-GPI转染细胞的培养基中的可溶性受体(GHBP)，发现高水平的该可溶性受体(图12)，这证实了另一个机制，根据该机制细胞因子GPI融合体的转基因表达具有拮抗剂的作用。能表达为GPI融合体的细胞因子受体的其他例子如TNF和瘦素受体(图13-16)。
参考文献：
ARGETSINGER，L.S.& CARTER-SU，C.(1996)Growth hormone signallingmechanisms：involvement of the tyrosine kinase JAK2.[Review][19 refs].HormoneResearch，45 Suppl 1，22-24。
CHEN，C.，BRINKWORTH，R.& WATERS，M.J.(1997)The role of receptordimerization domain residues in growth hormone signaling.Journal of BiologicalChemistry，272，5133-5140。
CHEN，W.Y.，CHEN，N.Y，YUN，J.，WAGNER，T.E.& KOPCHICK，J.J.(1994)Invitro and in vivo studies of antagonistic effects of human growth hormone analogs[published erratum appears in J Biol Chem 1994 Aug 12；269(32)：20806].Journal ofBiological Chemistry，269，15892-15897。
CHEN，W.Y.，WHITE，M.E.，WAGNER，T.E.& KOPCHICK，J.J.(1991)Functionalantagonism between endogenous mouse growth hormone(GH)and a GH analog results indwarf transgenic mice.Endocrinology，129，1402-1408。
CHEN，W.Y.，WIGHT，D.C.，MEHTA，B.V.，WAGNER，T.E.& KOPCHICK，J.J.(1991)Glycine 119 of bovine growth hormone is critical for growth-promoting activity.Molecular Endocrinology，5，1845-1852。
CHEN，W.Y.，WIGHT，D.C.，WAGNER，T.E.& KOPCHICK，J.J.(1990)Expressionof a mutated bovine growth hormone gene suppresses growth of transgenic mice.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，87，5061-5065。
CLACKSON，T.，ULTSCH，M.H.，WELLS，J.A.& DE VOS，A.M.(1998)Structuraland functional ahalysis of the 1∶1 growth hormone：receptor complex reveals themolecular basis for receptor affinity.Journal of Molecular Biology，277，1111-1128。
CUNNINGHAM，B.C.，ULTSCH，M.，DE VOS，A.M.，MULKERRIN，M.G，CLAUSER，K.R.& WELLS，J.A.(1991)Dimerization of the extracellular domain of the humangrowth hormone receptor by a single hormone molecule.Science，254，821-825。
DA COSTA，C.R.& JOHNSTONE，A.P.(1998)Production of the thyrotrophin receptorextracellular domain as a glycosylphosphatidylinositol-anchored membrane protein andits interaction with thyrotrophin and autoantibodies.Journal of Biological Chemistry，273，11874-11880。
DE VOS，A.M.，ULTSCH，M.&KOSSIAKOFF，A.A.(1992)Human growth hormoneand extracellular domain of its receptor：crystal structure of the complex.Science，255，306-312。
FUH，G，CUNNINGHAM，B.C.，FUKUNAGA，R.，NAGATA，S.，GOEDDEL，D.V.& WELLS，J.A.(1992)Rational design of potent antagonists to the human growthhormone receptor.Science，256，1677-1680。
KISHIMOTO，T.，TAGA，T.& AKIRA，S.(1994)Cytokine signal transduction.[Review][92 refs].Cell，76，253-262。
MAAMRA，M.，FINIDORI，J.，VON LAUE，S.，SIMON，S.，JUSTICE，S.，WEBSTER，J.，DOWER & ROSS，R.(1999)Studies with a growth hormone antagonist anddual-fluorescent confocal microscopy demonstrate that the full-length human growthhormone receptor，but not the truncated isoform，is very rapidly internalized independentof Jak2-StatS signaling.Journal of Biological Chemistry，274，14791-4798。
MELLADO，M.，RODRIGUEZ-FRADE，J.M.，KREMER，L，VON KOBBE，C.，DE ANA，A.M.，MERIDA，I.& MARTINEZ，A.(1997)Conformational changes requiredin the human growth hormone receptor for growth hormone signaling.Journal ofBiological Chemistry，272，9189-9196。
MULLER-NEWEN，G，KOHNE，C.& HEINRICH，P.C.(1996)Soluble receptors forcytokines and growth factors.[Review][58 refs].International Archives of Allergy &Immunology，111，99-106。
ROSS，R.J.，ESPOSITO，N.，SHEN，X.Y.，VONLAUE，S.，CHEW，S.L.，DOBSON，P.R.，POSTEL-VINAY，M.C.& FINIDORI，J.(1997)A short isoform of the humangrowth hormone receptor functions as a dominant negative inhibitor of the full-lengthreceptor and generates large amounts of binding protein.Molecular Endocrinology，11，265-273。
ROSS，R.J.M.，LEUNG，K.C.，MAAMRA，M.，BENNETT，W.，DOYLE，n.，WATERS，M.J.& HO，k.k.y.(2000)Binding and functional studies with the growthhormone receptor antagonist，B2036-PEG(pegvisomant)，reveal effects of pegylation.Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism，In press。
SUNDSTROM，M.，LUNDQVIST，T.，RODIN，J.，GEBEIF，L.B.，MILLIGAN，D.& NORSTEDT，G(1996)Crystal structure of an antagonist mutant ofhuman growthhormone，G120R，in complex with its receptorat 2.9 A resolution.Journal of BiologicalChemistry，271，32197-32203。
THORNER，M.O.，STRASBURGER，C.J.，WU，Z.，STRUME，M.，BIDLINGMAIER，M.，PEZZOLI，S.，ZIB，K.，SCARLETT，J.C.& BENNETT，W.F.(1999)Growth hormone(GH)receptor blockade with a PEG-modified GH (B2036-PEG)lowers seruminsulin-like growth factor-I but does not acutely stimulate serum GH.Journal of ClinicalEndocrinology & Metabolism，84，2098-2103。

Claims (28)

1、一种嵌合多肽，其包括：
(i)细胞因子受体的胞外细胞因子结合区；和
(ii)含有使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列的区域。
2、如权利要求1所述的多肽，其中所述多肽通过增加糖基化磷脂酰肌醇而被修饰。
3、如权利要求1或2所述的多肽，其中所述的使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列选自：
PSPTPTETAT PSPTPKPTST PEETEAPSSA TTLISPLSLI VIFISFVLLI；
DKLVKCGGISLLVQNTSWML LLLLSLSLLQ ALDFISL；
LVPRGSIEGR GTSITAYNSE GESAEFFFLL ILLLLLVLV；或
TSITAYKSE GESAEFFFLL ILLLLLVLV。
4、如权利要求1-3中任一项所述的多肽，其中所述的细胞因子受体的结合区来源于选自如下的受体：生长激素(GH)；瘦素；红细胞生成素；促乳素；TNF；白介素(IL)，IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、IL-11，IL-12、IL-13、IL-15的p35亚单位；粒细胞集落刺激因子(G-CSF)；粒细胞巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)；睫状神经营养因子(CNTF)；心脏营养素-1(CT-1)；白血病抑制因子(LIF)；制瘤素M(OSM)；干扰素，IFNα和IFNγ。
5、如权利要求4所述的多肽，其中所述的细胞因子受体的配体结合区来源于生长激素受体。
6、如权利要求1-5中任一项所述的多肽，其中所述的多肽是融合蛋白。
7、如权利要求1-6中任一项所述的多肽，所述多肽通过增加、缺失或取代至少一个氨基酸残基进行修饰或通过使用修饰过的氨基酸来制备序列变体。
8、一种核酸分子，其含有编码如权利要求1-7任一项所述的多肽的核酸序列。
9、一种核酸分子，其含有图3或图9或图13所示的核酸序列。
10、一种在严格杂交条件下与图3或图9或图13所示的序列杂交的核酸序列。
11、一种由权利要求9或10的核酸分子编码的多肽。
12、一种载体，其含有如权利要求8-10中任一项所述的DNA分子。
13、如权利要求12所述的载体，其中所述的载体是适于真核基因表达的表达载体。
14、如权利要求12或13所述的载体，其中所述的载体编码分泌信号以方便所述多肽的纯化，因而使所述的重组多肽具有分泌信号。
15、一种制备如权利要求1-7和/或权利要求11任一项所述的多肽的方法，所述方法包括：
(i)在有利于制备所述多肽的条件下培养用权利要求8-10中任一项的核酸或权利要求12-14中任一项的载体转染的细胞；和
(ii)从所述细胞或其生长环境中纯化所述多肽。
16、一种制备并纯化如权利要求1-7和/或权利要求11中任一项所述的多肽的方法，其中所述的纯化多肽不包括GPI锚，所述方法包括如下步骤：
(i)在有利于制备所述多肽的条件下培养用权利要求8-10中任一项的核酸或权利要求12-14中任一项的载体转染的细胞；和
(ii)从所述细胞或其生长环境中纯化所述多肽。
17、用权利要求8-10中任一项的核酸或权利要求12-14中任一项的载体转染的真核细胞。
18、如权利要求17所述的真核细胞，其选自：霉菌、粘液菌、昆虫、植物或哺乳动物细胞。
19、如权利要求18所述的细胞，其中所述的细胞是粘液菌细胞，且是网柄菌。
20、如权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽用作药物。
21、一种药物组合物或药物，其含有权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽和可选择地含有药学上可接受的载体。
22、如权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽用于制备治疗疾病的药物，所述疾病选自：肢端肥大症、巨人症、糖尿病、癌症、厌食症(瘦素嵌合体)、自体免疫性和传染性疾病、包括风湿性关节炎在内的炎性疾病。
23、一种治疗人或动物个体疾病或不适的方法，所述方法包括向个体用有效量的权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽或权利要求22的药物组合物或药物给药。
24、一种治疗人或动物个体疾病或不适的方法，所述方法包括向个体用有效量的权利要求8-10中任一项的核酸和/或权利要求12或13的载体给药。
25、如权利要求23或24所述的方法，其中的疾病或不适选自肢端肥大症、巨人症、糖尿病、癌症、厌食症(瘦素嵌合体)、自体免疫性和传染性疾病、包括风湿性关节炎在内的炎性疾病。
26、一种降低分子肾清除率的方法，所述方法包括制备含有权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽的试剂。
27、一种微团，其含有多种权利要求1-7和/或权利要求11中任一项的多肽。
28、一种嵌合多肽，其包括：
(i)单一跨膜区受体的胞外结合区；和
(ii)含有使糖基化磷脂酰肌醇附着的信号序列的区域。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103694337A (zh) * 2008-02-08 2014-04-02 Ambrx公司 经修饰瘦素多肽和其用途

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006304387A1 (en) 2005-10-14 2007-04-26 Medimmune, Llc Cell display of antibody libraries
NZ616992A (en) * 2005-12-20 2015-07-31 Sbi Biotech Co Ltd Anti-ilt7 antibody
WO2007098547A1 (en) * 2006-03-01 2007-09-07 Apollo Life Sciences Limited A molecule and chimeric molecules thereof
GB0618082D0 (en) * 2006-09-14 2006-10-25 Asterion Ltd Growth factor
US20110076752A1 (en) * 2007-02-09 2011-03-31 Medimmune, Llc Antibody library display by yeast cell plasma membrane
EP3335721A1 (en) * 2013-04-12 2018-06-20 Evox Therapeutics Limited Therapeutic delivery vesicles

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5374548A (en) * 1986-05-02 1994-12-20 Genentech, Inc. Methods and compositions for the attachment of proteins to liposomes using a glycophospholipid anchor
US4857637A (en) * 1986-05-07 1989-08-15 Genentech, Inc. Methods and compositions for immunologically modulating growth hormone receptor activity
US5057417A (en) * 1987-06-12 1991-10-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the synthesis of growth hormone receptor and growth hormone binding protein
US6113917A (en) * 1995-04-25 2000-09-05 Rmf Dictagene S.A. Modified polypeptides for enhanced immunogenicity
TW562807B (en) * 1997-04-01 2003-11-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Novel secretory membrane protein
WO1999000423A1 (en) * 1997-06-26 1999-01-07 Immunex Corporation Protein that binds trail
DE69931776T2 (de) * 1998-05-20 2007-05-16 Chugai Seiyaku K.K. Verfahren zur klonierung von genen
EP1171579A4 (en) * 1999-03-24 2002-07-31 Human Genome Sciences Inc TR9 HUMAN RECEPTOR OF TUMOR NECROSIS FACTORS
JP3815409B2 (ja) * 2002-08-29 2006-08-30 ブラザー工業株式会社 電話端末、通話システムおよび端末制御プログラム

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103694337A (zh) * 2008-02-08 2014-04-02 Ambrx公司 经修饰瘦素多肽和其用途
CN103694337B (zh) * 2008-02-08 2016-03-02 Ambrx公司 经修饰瘦素多肽和其用途

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