CN1560630A - 锯叶棕果提取物中β－谷甾醇的定性及其定量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种锯叶棕果提取物中β－谷甾醇的定性及其定量检测方法。本发明用的是薄层扫描法，其特征是通过对锯叶棕果提取物进行称量、溶解、回流、提取、蒸干溶解等工序制得供试品溶液和对照品溶液，以展开剂在预制硅胶板上进行层折开，经晾干和加热后放在紫外光灯下检视进行定性。接着以荧光或可见光方式扫描，可取得其含量值。本发明不但方法简单易行，而且手段先进、分离速度快、准确性高、重现性以及检测费用低，适合中小企业采用。

Description

锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量检测方法

所属技术领域

本发明涉及药品用的植物提取物的定性和定量检测方法，特别是一种锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量检测方法。

背景技术

在现有技术中，锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量检测方法是用毛细管气相色谱仪(CGC)来进行的，该方法所使用的仪器较为昂贵，并且操作复杂繁琐，操作的精度要求高，因此不适合中小型企业采用，影响了中小型企业的生产发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种改进的锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量检测方法，该方法所需设备简单、操作方便、分离速度快、灵敏度高，而且样品的预处理比较简单，适合中小型企业采用。

本发明提供的锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性及其定量检测方法包括下述顺序的步骤：

(1)取锯叶棕果提取物100～300毫克，精密称量，加入甲醇制氢氧化钾溶液20～40毫升，置水浴中回流2～4小时，取出后放冷；

(2)将溶液转移至125毫升的分液漏斗中，用水2040毫升洗涤回流瓶合并洗液，再用乙醚提取2～5次，每次20～40毫升；

(3)将合并提取液用水洗2～4次，每次20～40毫升，再用乙醚提取蒸干，其残渣加醋酸乙酯使之溶解，然后移至5毫升的量瓶中加醋酸乙酯至刻度作为供试品溶液；

(4)另取β-谷甾醇对照品加至醋酸乙酯中制成每毫升含β-谷甾醇对照品0.10～0.20毫克的溶液作对照品溶液；

(5)分别精密吸收供试溶液2微升，对照品溶液1微升和2微升，以点状方式交叉点样于同一以氢氧化钠乙醇溶液浸渍过的硅胶预制板上，以甲醇-甲酸乙酯为展开剂上行展开约8厘米；

(6)取出凉干，并喷以硫酸-乙醇溶液，在60～100℃加热6～10分钟；

(7)取出硅胶预制板放在紫外光灯下检视，供试品的色谱应与对照提取物色谱一致，在与β-谷甾醇对照品相应的位置上：标准比移值(RF)为0.52处显示相同颜色(紫色)的荧光斑点即可定性。

依照本发明上述的定性方法，本发明提供的锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的含量测定方法是：将制备好的含有β-谷甾醇的硅胶预制板取出按照薄层扫描法试验，以荧光方式进行扫描，激发波长为λ_Va＝366纳米，或以可见光方式进行扫描，波长为λ＝545纳米，用外标两点法回归计算，即可取得含量值。

在本发明的定性鉴别方法中所述的甲醇制氢氧化钾溶液为含5～40％氢氧化钾的甲醇溶液。

在本发明的定性鉴别方法中所述的氢氧化钠乙醇溶液为含0.1％氢氧化钠的乙醇溶液。

在本发明的定性鉴别方法中所述用的硅胶预制板为硅胶60F₂₅₄板。

在本发明的定性鉴别方法中所述用的甲醇-甲酸乙酯的配比为3～5∶1(重量比)。

在本发明的定性鉴别方法中所述用的硫酸-乙醇溶液为含8～30％硫酸的乙醇溶液。

由于本发明采用的是薄层扫描法，可以通过选用恰当的展开剂进行折开，既可以使同类总有效成分集中于一点，又能与其他干扰成分分离，从而准确地测定出有效成分的含量。此外，在薄层扫描测定中，即使被测定的斑点有时未能与某干扰成分完全分开，通过双波长扫描测定，也能获得很好的效果。因此本发明与现有技术相比不但具有方法简单易行、手段先进、分离速度快、准确性高、重现性好以及检测费用低等优点。适合中小企业采用。

具体实施方式

通过如下的具体实施例可进一步了解内容。

实施例1

取锯叶棕果提取物300毫克，加入40％甲醇制氢氧化钾溶液40毫升，置水浴中回流3小时，取出后放冷，将溶液转移至125毫升分液漏斗中，用水40毫升洗涤回流瓶，合并洗液；用乙醚提取4次，每次40毫升。将合并提取液，用水洗4次，每次30-40毫升，用乙醚将提取液蒸干，残渣加醋酸乙酯使溶解，然后移至5毫升量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，作为供试品溶液。另取β-谷甾醇对照品适量加醋酸乙酯制成每毫升含0.16毫克β-谷甾醇对照品的溶液5毫升，作为对照品溶液。分别精密吸收供试品溶液2微升，对照品溶液1微升、2微升，以点状方式交叉点样于同一以氢氧化钠乙醇溶液浸渍的硅胶预制板上；以甲醇-甲酸乙酯(5∶1)为展开剂，上行展开约8厘米。取出，晾干，喷以硫酸-乙醇溶液，在80℃温度下加热10分钟。

步骤二：把硅胶板取出放在紫外光灯下检视，供试品色谱应与对照提取物色谱一致，在与β-谷甾醇对照品相应的位置上：标准比移值(Rf)为0.52处显示相同颜色(紫色)的荧光斑点。

含量测定：按照步骤一做好后取出照薄层扫描法试验，以荧光方式进行扫描，激发波长为λ_Va＝366纳米，或以可见光方式进行扫描，波长为λ＝545纳米，用外标两点法回归计算，即可取得含量值。

实施例2

取锯叶棕果提取物100毫克，精密称定，加13％甲醇制氢氧化钾溶液20毫升，置水浴中回流2小时；取出，放冷。溶液转移至125毫升分液漏斗中，用水30毫升洗涤回流瓶，合并洗液；用乙醚提取3次，每次30毫升。合并提取液，用水洗3次，每次30毫升；用乙醚将提取液蒸干，残渣加醋酸乙酯使溶解，然后移至5毫升量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，作为供试品溶液。另取β-谷甾醇对照品适量，加醋酸乙酯制成每毫升含0.1毫克β-谷甾醇对照品的溶液5毫升，作为对照品溶液。分别精密吸收供试品溶液2微升，对照品溶液1微升、2微升，以点状方式交叉点样于同一以氢氧化钠乙醇溶液浸渍的硅胶预制板上；以甲醇-甲酸乙酯(4∶1)为展开剂，上行展开约8厘米。取出，晾干，喷以硫酸-乙醇溶液，在60℃温度下，加热6分钟。

其含量测定方法与实施例1相同。

实施例3：

基本上按照实施例1所述方法进行，但采取如下参数可达到比较好的检测结果：

锯叶棕果提取物称取200毫克；

13％甲醇制氢氧化钾溶液20毫升；

硫酸-乙醇溶液的浓度为10％。

加热方式：在100℃中加热8分钟。

Claims (7)

1.一种锯叶棕果提取物中β-谷甾醇的定性方法，其特征是该方法包括下述顺序的步骤：

(1)取锯叶棕果提取物100～300毫克，精密称量，加入甲醇制氢氧化钾溶液20～40毫升，置水浴中回流2～4小时，取出后放冷；

(2)将溶液转移至125毫升的分液漏斗中，用水20～40毫升洗涤回流瓶合并洗液，再用乙醚提取2～5次，每次20～40毫升；

(3)将合并提取液用水洗2～4次，每次20～40毫升，再用乙醚提取蒸干，其残渣打加醋酸乙酯使之溶解，然后移至5毫升的量瓶中加醋酸乙酯至刻度作为供试品溶液；

(4)另取β-谷甾醇对照品加至醋酸乙酯中制成每毫升含0.01～0.20毫克的溶液作为对照品溶液；

(5)分别精密吸收供试溶液2微升，对照品溶液1微升和2微升，以点状方式交叉点样于同一以氢氧化钠乙醇溶液浸渍过的硅胶预制板上，以甲醇-甲酸乙酯为展开剂上行展开约8厘米；

(6)取出凉干，并喷以硫酸-乙醇溶液，在60～100℃加热6～10分钟；

(7)取出硅胶预制板放在紫外光灯下检视，供试品的色谱应与对照提取物色谱一致，在与β-谷甾醇对照品相应的位置上：标准比移值(RF)为0.52处显示相同颜色(紫色)的荧光斑点即可定性。

2.根据权利要求1所述的定性方法进行的定量检测方法，其特征是：将制备好的含有β-谷甾醇的硅胶预制板取出按照薄层扫描法试验，以荧光方式进行扫描，激发波长为λ_Va＝366纳米，或以可见光方式进行扫描，波长为λ＝545纳米，用外标两点法回归计算，即可取得含量值。

3.根据权利要求1所述的定性方法，其特征是所述的甲醇制氢氧化钾溶液为含5～40％氢氧化钾的甲醇溶液。

4.根据权利要求1所述的定性方法，其特征是所述的氢氧化钠乙醇溶液为含0.1％氢氧化钠的乙醇溶液。

5.根据权利要求1所述的定性方法，其特征是所述的硅胶预制板为硅胶60F₂₅₄板。

6.根据权利要求1所述的定性方法，其特征是所述的甲醇-甲酸乙酯的配比为3～5∶1(重量比)。

7.根据权利要求1所述的定性方法，其特征是所述的硫酸-乙醇溶液为含8～30％硫酸的乙醇溶液。