CN111879717A - 一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，属于中药分析技术领域，包括以下步骤：1)采用紫外分光光度计法测定对照组样本内在成分的含量；2)对照组样本折光率的测定；3)待测样品质量判断：待测样品与对照组样本折光率比较；4)使用全波长紫外‑可见吸收光谱仪，建立各成分含量与紫外‑可见吸收光谱之间的关系曲线；5)配制与待测样品溶液，测定其紫外‑可见吸收光谱，将得到的光谱信息输入步骤4)所得关系曲线中，计算待测样品中相应成分的含量。本发明可同时对多种成分进行定性和定量分析，与传统的分析方法相比，缩短测定时间80倍以上，操作简单、快速，可在中药配方颗粒制剂生产中推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药分析技术领域，尤其涉及一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法。
背景技术
在中药配方颗粒的生产过程中，其质量控制是十分关键的一个步骤。现有技术中，对中药质量进行分析检测的方法一般有高效液相色谱方法、质谱指纹图谱质量控制方法、液相色谱-质谱联用法、紫外分光光度法等。以上方法分析精度较高，但需要分析人员花费大量时间对其进行分析，分析方法操作复杂、仪器使用时间长、预处理麻烦、对仪器及分析人员的要求高，不适用于生产过程的实时分析与监控。
发明内容
本发明旨在解决上述问题，提供一种操作简单、快速、准确的中药配方颗粒质量分析方法。采用如下技术方案：
本发明提供了一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，包括以下步骤：
1)对照组样本内在成分和含量的测定：取对照组中药配方颗粒，采用紫外可见分光光度计法测定其内在成分的含量；
2)对照组样本折光率的测定：取已知成分和含量的中药配方颗粒，配制成一定质量浓度的溶液，测试其折光率为A；
3)待测样品质量判断：取待测中药配方颗粒，配制成与对照组样本相同质量浓度的溶液，测试其折光率为B；若∣A-B∣/A≤5％，则初步判定待测样品质量合格，进行步骤4)、5)的操作；反之则质量不合格；
4)建立各成分含量与紫外吸收光谱的关系曲线：使用全波长紫外-可见吸收光谱仪，获取对照组样本紫外-可见吸收光谱数据，建立各成分含量与紫外-可见吸收光谱之间的关系曲线；
5)待测样品测试：配制待测样品溶液，测定其紫外-可见吸收光谱，将得到的光谱信息输入步骤4)所得关系曲线中，计算待测样品中相应成分的含量。
本发明先采用紫外分光光度计法，测定中药配方颗粒中所含成分的含量，然后测试中药配方颗粒的折光率，对其质量进行初步的判断，再采用全波长紫外吸收光谱仪测定颗粒的紫外吸收光谱数据，建立各成分含量与紫外-可见吸收光谱之间的关系曲线，将待测中药配方颗粒进行全波长紫外-可见光谱分析，其内在成分及质量可从该关系曲线上得出。本发明可一次对多种颗粒成分进行鉴别和质量分析，操作较简单，仪器使用时间短，可快速得到中药配方颗粒的成分与质量结果，方便快捷。
优选地，所述步骤3)中质量判断条件为：若∣A-B∣/A≤3.5％，则初步判定待测样品质量合格，进行步骤4)、5)的操作；反之则质量不合格。
优选地，所述步骤4)将一定浓度对照组样本稀释液置于紫外-可见光谱仪中进行全波长扫描，以配制稀释液的溶剂为空白参比溶液，每个样品至少进行3次平行扫描，取平均光谱数据作为对照组样本紫外-可见吸收光谱数据，保证测试结果的准确性。
优选地，所述步骤4)中紫外-可见吸收光谱的波长扫描范围为190～800nm。
优选地，所述步骤4)中选取中药配方颗粒中的质量指标物质进行关系曲线建立，缩短数据分析时间，提高分析效率。
优选地，所述步骤4)中建立关系曲线的方法为：采用多变量数据分析法建立各成分含量与紫外吸收光谱之间的关系曲线。
优选地，所述多变量数据分析法为主成分回归法或偏最小二乘法。
优选地，所述步骤4)还包括使用留一法交叉验证关系曲线。
优选地，所述步骤4)的关系曲线的相关系数≥0.95。
优选地，所述折光率使用精密折光仪进行测定。
本发明至少可取得如下有益效果之一：
1、本发明提供的方法，可同时对多种成分进行定性和定量分析，解决了中药配方颗粒中各类成分的含量难以被快速测定的问题。与传统的分析方法相比，缩短测定时间80倍以上，效率高。
2、本发明提供的方法，分析结果准确，可有效保证中药配方颗粒的产品质量，可用于产品的质量控制。
3、本发明提供的方法不需要大量的有机溶剂，符合绿色制造的理念。
4、本发明提供的方法操作简单、快速，可在中药配方颗粒制剂生产中推广应用。
具体实施方式
下面将对本发明的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例以炒槐花颗粒为实验对象。
本发明实施例中使用的化学试剂和实验仪器信息如下：
一、试剂
甲醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，乙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，蒸馏水(自制)，高氯酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，香草醛(分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，冰乙酸(分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，亚硝酸钠(分析纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)，氢氧化钠(分析纯，天津市光复精细化工研究所)，硝酸铝(分析纯，天津市光复精细化工研究所)。
人参皂苷Re标准品(中国药品生物制品检定所)，芦丁对照品(批号：100080-201610，纯度：供HPLC 91.9％；供UV 92.6％，中国食品药品检定研究院)，4.5％香草醛溶液(称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL)，人参皂苷Re标准溶液(精确称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL)。
二、实验仪器
紫外-可见吸收光谱仪(德国BAGGI公司)，精密折光仪(精密型阿贝折光仪-NAR-3T)，紫外可见分光光度计(元析METASH，UV-5200PC)。
实施例1：
研究表明，槐花主要含有黄酮及皂苷、脂肪酸类、氨基酸及微量元素等成分。选取炒槐花颗粒中的黄酮及皂苷为质量指标物质。
一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，包括以下步骤：
1)对照组样本内在成分和含量的测定：取已包装成品的炒槐花颗粒为对照组样本，采用紫外分光光度计法测定其内在成分的含量；
a、以芦丁为对照品，精密称取芦丁10.50mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇适量，置于水浴上微热使其溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得浓度为0.19446mg/mL的对照品溶液，备用。精密量取上述对照品溶液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL与6mL，分别置25mL量瓶中，各加水至6.0mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟。在500nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归曲线：y＝0.013872x-0.011066，R2＝0.999。
精确称取对照组样本0.1g，加入甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取滤液2mL置25mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出对照组样本溶液中含芦丁的浓度，计算，即得总黄酮以芦丁计应为17.2％。
b、取人参皂苷Re标准溶液，分别量取0、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL移入10mL比色管中，用氮气吹干，准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液、0.8mL高氯酸，盖上塞子混匀，于60℃水浴加热15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后于560nm处比色，得到回归曲线A＝135.25m+0.0847，R2＝0.998。
准确称取1.0g待测样品于100mL烧杯中，加入20～40mL85％乙醇，超声振荡30min，定容至50mL，摇匀后静置，吸取上清液1.0mL将乙醇挥发干，剩余残渣用水溶解，进行柱分离：以PT一大孔吸附树脂柱进行层析分离，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85％乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作为显色用。在蒸发皿中准确加入0.2mL5％香草醛冰乙酸溶液，待残渣溶解后加入0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL比色管中盖上塞子，60℃水浴加热15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后于560nm处比色，测得A＝0.114，得到总皂苷含量为2.20％。
2)对照组样本折光率的测定：取对照组样本炒槐花颗粒，配制成质量浓度为2g/mL的甲醇溶液，使用精密折光仪测试其折光率为1.461；
3)待测样品质量判断：取待测炒槐花颗粒，配制成与对照组样本相同质量浓度的溶液，使用精密折光仪测试其折光率为1.402；计算∣1.461-1.402∣/1.461＝4.0％<5％，初步判定待测样品质量合格；
4)对照组样本的紫外吸收光谱测定：
对照组样本进行全波长紫外-可见光谱测试，以甲醇为空白参比溶液，波长扫描范围为190～800nm，每个样品至少进行3次平行扫描，取平均光谱数据作为对照组样本紫外-可见吸收光谱数据；
5)建立标准曲线：使用BWIQTM计算软件(美国B&W Tek Opto-Electronics)处理原始数据，得到炒槐花颗粒的特征光谱信息。利用主成分回归法(PCR法)建立黄酮和皂苷的定量回归曲线：A(黄酮)＝1485.633m(黄酮)+8.4786，R2＝0.998；A(皂苷)＝1267.552m(皂苷)+13.0932，R2＝0.998。采用留一法交叉进行内部验证。
6)待测样品测试：取步骤3)中配制的待测样品溶液，按步骤4)的方法测定其紫外-可见紫外吸收光谱，将得到的光谱信息输入步骤5)所得关系曲线中，计算待测样品中相应成分的含量。
选取3批次的炒槐花颗粒作为待测样品，使用本实施例的方法进行测试，即重复步骤3)和步骤5)的操作。使用液相色谱-质谱联用仪测试待测样品中总黄酮和总皂苷的含量，验证本发明方法的可行性。实验数据见表1。
实施例2：
取另一批次已包装成品的炒槐花颗粒为对照组样本，测得对照组样本的折光率为1.347。
与实施例1的不同之处在于，步骤5)建立标准曲线：利用偏最小二乘法(PLS法)建立黄酮和皂苷的定量回归曲线：A(黄酮)＝1513.276m(黄酮)+7.5645，R2＝0.999；A(皂苷)＝1327.658m(皂苷)+11.3662，R2＝0.998。采用留一法交叉进行内部验证。
选取3批次的炒槐花颗粒作为待测样品，使用本实施例的方法进行测试，即重复步骤3)和步骤5)的操作。使用液相色谱-质谱联用仪测试待测样品中总黄酮和总皂苷的含量，验证本发明方法的可行性。实验数据见表1。
表1
由表1数据可知，批次1～批次5的中药配方颗粒，使用本发明的方法，与液相色谱-质谱联用法的结果相吻合；批次6的产品折光率不合格，用液相色谱-质谱联用法验证了这一结果。本发明的方法具有很高的准确性，使用液相色谱-质谱联用法进行验证发现，本发明方法的误差在±6％以内，即能对炒槐花颗粒的内在成分和质量进行准确的测定。并且，本发明分析测试的时间短，操作简便，只需对对照组样本进行一次含量测定和紫外光谱的定量模型建立，待测样品通过一次紫外-可见吸收光谱的测定便可得出其内在成分与质量，适用于中药配方颗粒规模化生产的质量分析。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)对照组样本内在成分和含量的测定：取对照组中药配方颗粒，采用紫外可见分光光度计法测定其内在成分的含量；
2)对照组样本折光率的测定：取对照组样本，配制成一定质量浓度的溶液，测试其折光率为A；
3)待测样品质量判断：取待测中药配方颗粒，配制成与对照组样本相同质量浓度的溶液，测试其折光率为B；若∣A-B∣/A≤5％，则初步判定待测样品质量合格，进行步骤4)、5)的操作；反之则质量不合格；
4)建立各成分含量与紫外吸收光谱的关系曲线：使用全波长紫外-可见吸收光谱仪，获取对照组样本紫外-可见吸收光谱数据，建立各成分含量与紫外-可见吸收光谱之间的关系曲线；
5)待测样品测试：配制与待测样品溶液，测定其紫外-可见吸收光谱，将得到的光谱信息输入步骤4)所得关系曲线中，计算待测样品中相应成分的含量。
2.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤3)中质量判断条件为：若∣A-B∣/A≤3.5％，则初步判定待测样品质量合格，进行步骤4)、5)的操作；反之则质量不合格。
3.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)将一定浓度对照组样本稀释液置于紫外-可见光谱仪中进行全波长扫描，每个样品至少进行3次平行扫描，取平均光谱数据作为对照组样本紫外-可见吸收光谱数据。
4.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)中紫外-可见吸收光谱的波长扫描范围为190～800nm。
5.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)中选取中药配方颗粒中的质量指标物质进行关系曲线建立。
6.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)中建立关系曲线的方法为：采用多变量数据分析法建立各成分含量与紫外吸收光谱之间的关系曲线。
7.如权利要求6所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述多变量数据分析法为主成分回归法或偏最小二乘法。
8.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)还包括使用留一法交叉验证关系曲线。
9.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述步骤4)的关系曲线的相关系数≥0.95。
10.如权利要求1所述的一种快速评价中药配方颗粒内在成分和质量的方法，其特征在于，所述折光率使用精密折光仪进行测定。
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