CN1546991A - 水中痕量微囊藻毒素的检测方法 - Google Patents

水中痕量微囊藻毒素的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1546991A
CN1546991A CNA2003101091052A CN200310109105A CN1546991A CN 1546991 A CN1546991 A CN 1546991A CN A2003101091052 A CNA2003101091052 A CN A2003101091052A CN 200310109105 A CN200310109105 A CN 200310109105A CN 1546991 A CN1546991 A CN 1546991A
Authority
CN
China
Prior art keywords
water
sample
mclr
frustule
microcystin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2003101091052A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100387985C (zh
Inventor
张杭君
张建英
陈英旭
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CNB2003101091052A priority Critical patent/CN100387985C/zh
Publication of CN1546991A publication Critical patent/CN1546991A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100387985C publication Critical patent/CN100387985C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种测定水中痕量微囊藻毒素的简便常规检测方法，它采用微波处理浓缩水样，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，用OasisHLB固相萃取柱纯化样品，用甲醇∶水(体积比)＝80∶20的含2％氨水的溶液作为固相萃取洗脱液，用甲醇∶水(体积比)＝40∶60的含2％醋酸的溶液作为固相萃取淋洗液，用液相色谱紫外检测器测定微囊藻毒素MCLR的含量；该方法线性范围0.1－20mg/L，线性相关系数为0.9999，最小检测量为2ng；方法的回收率82％以上，日内和日间RSD分别小于0.64％和2.4％；本发明重现性好，能够方便灵敏的测定水中和藻细胞中痕量微囊藻毒素MCLR。

Description

水中痕量微囊藻毒素的检测方法
技术领域
本发明涉及一种测定水中痕量微囊藻毒素MCLR的简便常规检测方法。
背景技术
随着水体污染和富营养化程度的加剧，我国的湖泊和水库频频发生大规模的水华，其水华优势种主要是微囊藻和鱼腥藻。水华微囊藻和鱼腥藻能够产生多种藻类毒素，称为微囊藻毒素。目前已经鉴定结构的微囊藻毒素有60多种，其中微囊藻毒素MCLR是已知的微囊藻毒素中毒性最大，分布最广泛的一种。它对蛋白磷酸酶I和IIA有强烈的抑制作用，其毒性主要是诱发肝癌。其结构如图1所示。世界卫生组织和我国最新的地表水水质标准《GB3838-2002》中规定，水中微囊藻毒素MCLR的安全浓度为1μg/L。对水体中特别是作为饮用水源水的湖泊和水库中的微囊藻毒素MCLR检测非常必要。
目前，微囊藻毒素MCLR的检测方法主要有化学检测法和生物化学检测法。化学检测法使用较多的是高效液相色谱、薄层分析、毛细管电泳以及它们的联用技术等。生物化学检测法主要包括酶联免疫吸附分析、蛋白磷酸酶抑制分析和生物传感器法等。化学检测法的优点在于可以准确定性定量，但其前处理比较复杂、时间长；生物化学分析法的优点是灵敏度高，在处理大批样品时分析速度快，但不能很好鉴别毒素，有时会出现假阳性反应。在实际应用中酶联免疫吸附分析等生物化学方法操作复杂，特异性强的抗体不易获得；带质谱检测器的高效液相色谱价格昂贵，不适应于水中微囊藻MCLR的常规水质分析检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定水中痕量微囊藻毒素MCLR的简便常规检测方法。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案。该方案按下列步骤顺序进行：
(1)、水样的预处理：取水样，用离心机获得上清液(A)和藻细胞并分别保存，待用；
(2)、藻细胞的处理：将藻细胞转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，经研麿后用离心机获取上清液(B)待用；
(3)、样品的浓缩：将上清液(A)加热，缩短至10mL左右，获得溶液(C)；将上清液(B)和溶液(C)放入氮吹仪中，用氮气吹脱浓缩至1mL左右。
(4)、样品的纯化：取Water公司Oasis HLB固相萃取柱，加入1mL纯甲醇活化柱子，然后加1mL水调节，再加入样品上清液(B)或溶液(C)1mL，再加入甲醇∶水(体积比)＝80∶20的含2％氨水的溶液1mL作为淋洗液，再加入甲醇∶水(体积比)＝40∶60的含2％醋酸的溶液1mL作为洗脱液，收集洗脱液(D)和(E)待测；
(5)、流动相的配制：将甲醇和水按体积比为甲醇∶水＝50∶50进行混合，其中水溶液和甲醇分别用三氟乙酸(TFA)调节至pH为2.11±0.05，然后脱气，过滤后配制成流动相；
(6)、样品分析：Agilent 1100液相色谱仪，配二极管阵列DAD检测器、色谱数据工作站(A.09.01版)、HT-130型柱温箱和TC-100柱温控制器，DIAMONSIL(TM)ODS C18分析色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)和C18保护预柱，流动相按(5)方法配制，流动相流速1mL/min，等度洗脱，检测波长为238nm，进样量100μL，色谱柱柱温控制在30℃；自动进样器进样(D)和(E)液相色谱检测分析，色谱数据工作站计算结果。
所述的水样的预处理中的水样用离心机在4000转/分钟下，离心20分钟后，获得上清液和藻细胞。
本发明在所述的藻细胞转移至研钵后，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，研麿20分钟，并在离心机4000转/分钟转速下，离心20分钟，获取上清液(B)。
所述的样品浓缩过程中采用微波炉加热方法加热上清液。
本发明的优点为：1.广泛适应性：本检测法可以适用于包括湖泊、水库以及自来水等水样中和藻细胞微囊藻毒素MCLR的检测。
2.仪器化分析的先进性：本发明应用了合理的色谱分离体系，微囊藻毒素MCLR可以与其它组分清晰分离，仪器分析确保了微囊藻毒素MCLAR定量的准确测定。
3.低毒害性：本发明所用流动相为含三氟乙酸的甲醇水溶液，避免了传统的流动相使用乙晴对实验人员的毒害和使用磷酸盐缓冲液对仪器的损害。
4.本测定方法还具有操作简便、快速的特点。微波加热浓缩样品可大大节省前处理的时间。本发明的液相色谱条件检测MCLR的出峰时间为3.587分钟，与传统的10-15分钟出峰相比，更快速，更方便。
5.微囊藻毒素MCLR的标定值一经建立，并输入色谱工作站电脑中，可长期使用此响应值作为定量值；无须再作化学标定。
本发明所述的方法，其线性范围0.1-20mg/L，线性相关系数为0.9999，最小检测量为2ng。方法的回收率82％以上，日内和日间RSD分别小于0.64％和2.4％。本发明重现性好，能够方便灵敏的测定水中和藻细胞中痕量微囊藻毒素MCLR。
附图说明
图1是微囊藻毒素MCLR的结构图
图2是本发明的实际样品的色谱图。
具体实施方式：
实施例1，本发明按下列步骤顺序进行：
1.样品是某池塘水样
2.水样的预处理
取水样500mL用离心机在4000转/分钟下，离心20分钟，获得上清液(A)和藻细胞，并将上清液(A)和藻细胞分别保存，待用。
3.藻细胞的处理
将藻细胞转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，研磨20分钟，在4000转/分钟下，离心20分钟，取上清液(B)待用。
4.样品的浓缩
将上清液(1)用微波加热，缩短至10mL左右，获得溶液(C)。将上清液(B)和溶液(C)放入氮吹仪中，用氮气吹脱浓缩至1mL左右。
5.样品的纯化
取Water公司Oasis HLB固相萃取柱，加入1mL纯甲醇活化柱子，然后加1mL水调节，再加入样品上清液(B)或溶液(C)1mL，再加入甲醇∶水(体积比)＝80∶20的含2％氨水的溶液1mL作为淋洗液，再加入甲醇∶水(体积比)＝40∶60的含2％醋酸的溶液1mL作为洗脱液，收集洗脱液(D)和(E)待测。
6.流动相的配制
将甲醇和水按体积比为甲醇∶水＝50∶50进行混合，其中水溶液和甲醇分别用三氟乙酸(TFA)调节至pH为2.11±0.05，然后脱气，过滤后配制成流动相；
7.样品分析
Agilent 1100液相色谱仪，配二极管阵列DAD检测器、色谱数据工作站(A.09.01版)、HT-130型柱温箱和TC-100柱温控制器，DIAMONSIL(TM)ODS C18分析色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)和C18保护预柱，流动相按(5)方法配制，流动相流速1mL/min，等度洗脱，检测波长为238nm，进样量100μL，色谱柱柱温控制在30℃。自动进样器进样(D)和(E)液相色谱检测分析，色谱数据工作站计算结果。
8.色谱分离结果
色谱分离情况良好：分离图示于图2。所得结果，该池塘水样中微囊藻毒素MCLR的含量为0.45μg/L。
实施例2，本实施例按下列步骤顺序进行：
1.样品是某湖泊水样
2.水样的预处理
取水样350mL用离心机在3200转/分钟下，离心30分钟，获得上清液(A)和藻细胞，并将上清液(A)和藻细胞分别保存，待用；
3.藻细胞的处理
将藻细胞转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，研磨16分钟，在3200转/分钟下，离心30分钟，取上清液(B)待用；
4.样品的浓缩
将上清液(A)用其它加热方式如红外线加热，缩短至10mL左右，获得溶液(C)。将上清液(B)和溶液(C)放入氮吹仪中，用氮气吹脱浓缩至1mL左右。
以下步骤顺序与实施例1相同。
实施例3，本实施例按下列步骤顺序进行：
1.样品是某地自来水水样
2.水样的预处理
取水样650mL用离心机在4600转/分钟下，离心15分钟，获得上清液(A)和藻细胞，并将上清液(A)和藻细胞分别保存，待用；
3.藻细胞的处理
将藻细胞转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，研磨25分钟，在4600转/分钟下，离心15分钟，取上清液(B)待用；
4.样品的浓缩
将上清液(A)用其它加热方式如红外线加热，缩短至10mL左右，获得溶液(C)。将上清液(B)和溶液(C)放入氮吹仪中，用氮气吹脱浓缩至1mL左右。
以下步骤顺序与前两实施例相同。

Claims (6)

1、一种水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于该方法按下列步骤顺序进行：(1)、水样的预处理：取水样，用离心机获得上清液(A)和藻细胞并分别保存，待用；
(2)、藻细胞的处理：将藻细胞转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，经研磨后用离心机获取上清液(B)待用；
(3)、样品的浓缩：将上清液(A)加热，缩短至10mL左右，获得溶液(C)；将上清液(B)和溶液(C)放入氮吹仪中，用氮气吹脱浓缩至1mL左右。
(4)、样品的纯化：取Water公司Oasis HLB固相萃取柱，加入1mL纯甲醇活化柱子，然后加1mL水调节，再加入样品上清液(B)或溶液(C)1mL，再加入甲醇∶水(体积比)＝80∶20的含2％氨水的溶液1mL作为淋洗液，再加入甲醇∶水(体积比)＝40∶60的含2％醋酸的溶液1mL作为洗脱液，收集洗脱液(D)和(E)待测；
(5)、流动相的配制：将甲醇和水按体积比为甲醇∶水＝50∶50进行混合，其中水溶液和甲醇分别用三氟乙酸(TFA)调节至pH为2.11±0.05，然后脱气，过滤后配制成流动相；
(6)、样品分析：Agilent1100液相色谱仪，配二极管阵列DAD检测器、色谱数据工作站(A.09.01版)、HT-130型柱温箱和TC-100柱温控制器，DIAMONSIL(TM)ODS C18分析色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)和C18保护预柱，流动相按(5)方法配制，流动相流速1mL/min，等度洗脱，检测波长为238nm，进样量100uL，色谱柱柱温控制在30℃；自动进样器进样(D)和(E)液相色谱检测分析，色谱数据工作站计算结果。
2、根据权利要求1所述的水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于水样的预处理中的水样用离心机在3200---4600转/分钟下，离心15---30分钟后，获得上清液(A)和藻细胞。
3、根据权利要求2所述的水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于水样是用离心机在4000转/分钟下，离心20分钟后，获得上清液(A)和藻细胞。
4、根据权利要求1或2或3所述的水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于藻细胞在转移至研钵中，用75％的甲醇作为藻细胞中微囊藻毒素MCLR的提取剂，研磨16---25分钟，并在离心机3200---4600转/分钟转速下，离心15---30分钟，获取上清液(B)。
5、根据权利要求4所述的水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于所述的研磨时间为20分钟，并在离心机4000转/分钟转速下，离心20分钟，获取上清液(B)。
6、根据权利要求1所述的水中痕量微囊藻毒素MCLR的检测方法，其特征在于所述的样品浓缩是采用微波炉加热方法加热上清液。
CNB2003101091052A 2003-12-05 2003-12-05 水中痕量微囊藻毒素的检测方法 Expired - Fee Related CN100387985C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2003101091052A CN100387985C (zh) 2003-12-05 2003-12-05 水中痕量微囊藻毒素的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CNB2003101091052A CN100387985C (zh) 2003-12-05 2003-12-05 水中痕量微囊藻毒素的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1546991A true CN1546991A (zh) 2004-11-17
CN100387985C CN100387985C (zh) 2008-05-14

Family

ID=34335038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB2003101091052A Expired - Fee Related CN100387985C (zh) 2003-12-05 2003-12-05 水中痕量微囊藻毒素的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN100387985C (zh)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100358604C (zh) * 2005-11-29 2008-01-02 林黎明 样品残留物基质固相分散微波萃取法及其萃取填料和溶剂
CN102220421A (zh) * 2011-05-05 2011-10-19 山东大学 一种通过dna定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法
CN101382541B (zh) * 2008-06-27 2012-07-11 江南大学 一种微囊藻毒素-lr的免疫荧光猝灭检测方法
CN101750460B (zh) * 2008-12-03 2012-09-19 北京林业大学 一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素mclr的方法
CN102914505A (zh) * 2012-09-27 2013-02-06 国家海洋局第二海洋研究所 利用modis水色遥感数据的海洋赤潮藻种判别方法
CN103048398A (zh) * 2012-12-05 2013-04-17 上海应用技术学院 一种水体中微囊藻毒素mc-lr的测定方法
CN103884537A (zh) * 2014-04-04 2014-06-25 国家海洋局第三海洋研究所 沿岸水体沉积物表层底栖微型藻类的提取方法
CN104017059A (zh) * 2014-06-19 2014-09-03 南京麦思德餐饮管理有限公司 一种微囊藻毒素的提取方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101699288B (zh) * 2009-10-16 2012-09-26 江南大学 一种基于金纳米棒端面自组装检测微囊藻毒素-lr的方法
CN101701960B (zh) * 2009-11-18 2012-12-26 中国科学院化学研究所 一种检测微囊藻毒素的偶联物的制备方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE60029229T2 (de) * 1999-09-06 2007-06-28 The Regents Of The University Of California, Oakland Artverwandte-unabhängiger nachweis von microcystin- und nodularin-artverwandten
KR100431586B1 (ko) * 2002-03-25 2004-05-17 학교법인 한양학원 독소 생산 마이크로시스티스 검출방법
KR100451062B1 (ko) * 2002-05-08 2004-10-02 한국과학기술원 중합효소 연쇄반응을 이용한 마이크로시스틴을 생산하는남조류의 검색 방법
CN1428434A (zh) * 2002-11-14 2003-07-09 中国科学院水生生物研究所 一种检测微囊藻产毒的方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100358604C (zh) * 2005-11-29 2008-01-02 林黎明 样品残留物基质固相分散微波萃取法及其萃取填料和溶剂
CN101382541B (zh) * 2008-06-27 2012-07-11 江南大学 一种微囊藻毒素-lr的免疫荧光猝灭检测方法
CN101750460B (zh) * 2008-12-03 2012-09-19 北京林业大学 一种萃取和常压柱层析法纯化微囊藻毒素mclr的方法
CN102220421A (zh) * 2011-05-05 2011-10-19 山东大学 一种通过dna定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法
CN102220421B (zh) * 2011-05-05 2013-12-25 山东大学 一种通过dna定量测定蓝藻胞内藻毒素含量的方法
CN102914505A (zh) * 2012-09-27 2013-02-06 国家海洋局第二海洋研究所 利用modis水色遥感数据的海洋赤潮藻种判别方法
CN103048398A (zh) * 2012-12-05 2013-04-17 上海应用技术学院 一种水体中微囊藻毒素mc-lr的测定方法
CN103884537A (zh) * 2014-04-04 2014-06-25 国家海洋局第三海洋研究所 沿岸水体沉积物表层底栖微型藻类的提取方法
CN104017059A (zh) * 2014-06-19 2014-09-03 南京麦思德餐饮管理有限公司 一种微囊藻毒素的提取方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN100387985C (zh) 2008-05-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108663471B (zh) 一种测定河口沉积物中多种内分泌干扰物含量的方法
Mei et al. Determination of trace bisphenol A in complex samples using selective molecularly imprinted solid-phase extraction coupled with capillary electrophoresis
Snow Solid-phase micro-extraction of drugs from biological matrices
Saraji et al. Determination of phenols in water samples by single-drop microextraction followed by in-syringe derivatization and gas chromatography–mass spectrometric detection
Wang et al. An ultra-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry method for determination of microcystins occurrence in surface water in Zhejiang Province, China
CN103399113B (zh) 一种水体中氯苯类化合物的固相膜萃取气相色谱检测方法
Lourenço et al. On-fiber derivatization of SPME extracts of phenol, hydroquinone and catechol with GC-MS detection
CN1546991A (zh) 水中痕量微囊藻毒素的检测方法
Jones et al. Aqueous phase high speed liquid chromatographic separation and atomic absorption detection of amino carboxylic acid-copper chelates
CN113267588A (zh) 一种同时检测塑料制品中7种丙烯酸及丙烯酸酯类单体的方法
CN111551659B (zh) 污水处理厂污泥中抗癌药物的快速检测分析方法
Ayyangar et al. Separation of eight alkaloids and meconic acid and quantitation of five principal alkaloids in gum opium by gradient reversed-phase high-performance liquid chromatography
CN1847841B (zh) 中药水提取液中微量马兜铃酸a的含量测定方法
CN111024846B (zh) 一种测定水体中双酚a的方法
Kraleva et al. Determination of PAH in the black sea water by GC/MS following preconcentration with solid-phase extraction
CN114755354A (zh) 一种检测叶酸的试剂盒以及全血样本中叶酸的检测方法
Moliner-Martínez et al. A microanalytical method for ammonium and short-chain primary aliphatic amines using precolumn derivatization and capillary liquid chromatography
Brown et al. Determination of trace levels of oxytocin in pharmaceutical solutions by high-performance liquid chromatography
Hsieh et al. Determination of Dechlorane compounds in aqueous samples using ultrasound-assisted dispersive liquid–liquid microextraction and gas chromatography-electron-capture negative ion-mass spectrometry
Namera et al. Monolithic spin column: a new extraction device for analysis of drugs in urine and serum by GC/MS and HPLC/MS
CN108426971B (zh) 一种快速检测水中微囊藻毒素的方法
CN107976504A (zh) 一种厌氧颗粒污泥中雌二醇含量的检测方法
Dutton et al. Improved high-performance liquid chromatographic separation for the analysis of oxalate in fungal culture media
CN108508099B (zh) 一种化妆品中3-亚苄基樟脑含量的测定方法
CN108387656A (zh) 一种液质联用检测化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee