CN1539454A - 板蓝根制剂及其质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供板蓝根制剂，它是由中药板蓝根Radix Isatidis药材或提取物制备而成，其中每制剂单位中腺苷的含量范围为0.075～2mg，板蓝根药材中腺苷的含量≥0.3mg/g，采用腺苷为指标性成分，重现性高，稳定可控，通过药效学试验证明，腺苷虽然不是有效成分，但通过对腺苷含量的控制，可从侧面控制板蓝根制剂的质量与疗效，使制剂更加稳定、可控，为板蓝根药材及其制剂提供了一种新的质量控制方法。

Description

板蓝根制剂及其质量控制方法

                        技术领域

本发明提供了板蓝根制剂及其质量控制方法，属中药领域。

                        背景技术

板蓝根为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，味苦性寒，入心、胃经，具有清热解毒，凉血消肿的功效。主要化学成分有靛苷、靛玉红、谷甾醇、多种氨基酸、腺苷、多糖等。临床上广泛用于治疗流行性感冒、流行性腮腺炎、急慢性咽喉炎、单纯疱疹性角膜炎、流行性乙脑炎等。药理活性有抗内毒素、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等。板蓝根制剂有板蓝根注射液、板蓝根颗粒、板蓝根胶囊、板蓝根口服液、板蓝根糖浆、板蓝根片、复方板蓝根胶囊、复方板蓝根颗粒、复方板蓝根片等。

目前板蓝根制剂多采用水提醇沉法制备，少量采用渗漉法。板蓝根制剂采用氨基酸或靛蓝、靛玉红的含量作为质量指标。氨基酸是一种大众化的成分，作为质量指标不具有特异性，专属性差尤其是在复方制剂中；而采用靛蓝或靛玉红作为质量指标的，由于靛蓝和靛玉红是脂溶性的成分，采用水煮不易溶出，提取率低，在某些制剂中根本检测不出靛玉红(张润珍、张玉文。板草根的研究进展。中草药，2000，31(6)：474-476)，更有文献报道说菘蓝的根本没有靛玉红和靛蓝，在其制剂中检测到的靛玉红和靛蓝的量是在其采收和加工过程中混入的根茎和其附带的叶柄残基中所含的靛玉红和靛蓝的量，且两者不具有抗内毒素活性(张汉明、张戈等。板蓝根和大青叶不同部位的靛蓝、靛玉红含量测定及其部分成分的抗内毒素作用比较差。药学实践杂志，2000，18(5)：347)。

腺苷又名腺嘌呤核苷，是一种已知的天然成分，分子式C₁₀H₁₃N₅O₄，分子量267.24，白色结晶，微有咸苦味，易溶于水，几乎不溶于乙醇和乙醚，融点234-235℃，比旋度-61.7(C＝0.706％，水中)。腺苷除具有抗凝血、扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、镇静中枢神经和抗心率不齐等作用外，又证实能有效地阻止由PAF诱导的白细胞—内皮细胞粘附而参与消炎作用(徐汝明、陆阳等。紫外分光光度法测定贝母中腺苷的含量，中国中药杂志1996，21(6)：556)。

安全、有效、稳定、可控是现代药物制剂的标准，目前板蓝根制剂报道具有抗病毒、抑菌、抗内毒素等方面的功效，且临床证明其具备安全、有效的特点，但是由于板蓝根中所含成份复杂，使板蓝根药材及其制剂稳定性差，不同药材、成品批次不同，质量也有较大的浮动，使板蓝根制剂的可控性差。

                        发明内容

为了解决上述问题，本发明所要解决的技术方案是提供板蓝根制剂及其质量控制方法。

本发明提供板蓝根制剂，它是由中药板蓝根Radix Isatidis药材或提取物制备而成，其中每制剂单位中腺苷的含量范围为0.075～2mg，板蓝根药材中腺苷的含量≥0.3mg/g。

其中所述的制剂单位是指口服液中的每ml、胶囊剂中的每粒、颗粒剂中的每克、片剂中的每片、糖浆剂中的每ml、滴眼液中的每ml。

所述的制剂是滴眼液、原位胶化滴眼液、注射剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、片剂、丸剂、散剂。进一步地，所述的制剂是滴眼液，所述的滴眼液中腺苷的含量范围为0.0998～2mg。

本发明还提供了板蓝根制剂的质量控制方法，它是采用腺苷为指标性成分进行定性与定量控制，每制剂单位中腺苷的含量范围为0.075～2mg。

所述的定性控制的方法是：采用氯仿、醋酸乙酯、异丙醇、水、氨水为展开剂，用硅胶GF₂₅₄薄层板(自制)进行一维展开，对照标准品为腺苷，于紫外灯下，波长为254nm检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应处显相同的暗斑。进一步地，该定性控制方法为：取板蓝根制剂适量，加水稀释为10ml，用水饱合的正丁醇萃取三次，分别为20ml、20ml、10ml，分液，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用70％乙醇溶解，作为供试品溶液；另取腺苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：878-20000)，加70％乙醇制成每ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2000版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于一同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿—醋酸乙酯—异丙醇—水—氨水，体积比为8∶2∶6∶0.5∶0.12，作为展开剂，上行展开，取出，晾干，于紫外灯下，波长为254nm检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应处显相同的暗斑。

所述的定量控制的方法是：

色谱条件：

仪器：HP1000高效液相色谱仪，G1310A IsoPump泵，G1314A VMD紫外检测器；Chemstation数据处理软件；

色谱柱：Alltima C18 5μm，150mm×4.6mm；

流动相：甲醇—水，体积比为5～12∶88～95或磷酸盐缓冲液-甲醇，体积比为15～20∶3～10；流速：1ml/min；

柱温：室温；

检测波长：260nm；

进样量：20μl；

供试品溶液的制备：精密吸取板蓝根制剂，置10ml容量瓶中，用30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的腺苷约10mg，置50ml容量瓶中，加流动相定溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；

取以上溶液注入高效液相色谱分析仪，测定，按外标法计算，即得。

进一步地，所述的流动相：甲醇—水，体积比为8∶92。

本发明板蓝根制剂采用腺苷为指标性成份，通过对腺苷的定性定量测定，可反映板蓝根药材及其制剂的稳定性，达到控制质量的目的，重现性高，稳定可控；通过药效学试验证明，腺苷虽然不是有效成分，但通过对腺苷含量的控制，可从侧面控制板蓝根制剂的疗效，使制剂更加稳定、可控，为板蓝根药材及其制剂提供了一种新的质量控制方法。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

                       附图说明

图1板蓝根滴眼液的定性控制薄层色谱图：点1为腺苷标准品，点2为不含腺苷的阴性对照，点3，4，5为板蓝根滴眼液样品。

                     具体实施方式

实验例1板蓝根原生药材粉末的制备

板蓝根药材低温干燥(60℃以下)，切块，打粉，过2号筛，即得。

实验例2板蓝根滴眼液的制备

取板蓝根500g，加10倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约750ml，冷却，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至350～500ml，冷藏过夜，滤过，滤液用氨试液调节pH值为8.0～8.5，搅匀，冷藏48小时，滤过，加热除去氨，加入1g尼泊金乙酯，加蒸馏水至1000ml，灭菌，用G4垂熔漏斗、0.22um滤膜滤过，灌封，即得。

实验例3板蓝根原位胶化滴眼液的制备

取板蓝根500g，加10倍量水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至约750ml，冷却，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至350～500ml，冷藏过夜，滤过；另取卡波姆3g加适量蒸馏水充分溶胀，羟丙甲基纤维素12g和尼泊金乙酯1g加蒸馏水溶解，合并上述溶液，加氯化钠8.5g调节渗透压，加蒸馏水至1000ml，氢氧化钠调节pH为5.5-6.0，灭菌，用G4垂熔漏斗、0.22um滤膜滤过，灌封，即得。

所谓的原位胶化滴眼液是指：大多数滴眼液的pH值通常与人泪液的pH值相同，偏碱性，pH值在7.3～7.5之间，若pH值不当，可引起对眼部的刺激，增加泪液的分泌，导致药物被冲洗流失，甚至损伤角膜。本发明的pH值为5.5-6.0，偏酸性，是由于本发明采用原位胶化技术制备滴眼液，使该药物剂型在酸性条件下为溶液形式，药液滴入眼中均匀分布后在眼部特有的生理环境作用下受泪液的pH影响，形成凝胶，覆盖于眼球表面，且不影响眼睛的正常视觉，药物缓慢释放，达到长效缓释的作用并可以减少使用中对制剂本身的污染。

实验例4板蓝根片剂制备

取板蓝根药材1000g，加水煎煮2次，第一次1小时，第二次45分钟，滤过，合并滤液，浓缩至1000ml。放置至室温，加入95％乙醇使含醇量达到60％。冷藏，滤过，滤液回收乙醇浓缩至稠膏状，加入淀粉200g及其他辅料适量，制成颗粒，压制成片1000片，包衣，即得。

实验例5板蓝根颗粒制备

取板蓝根药材500g，加水煎煮2次(第一次2小时，第二次1小时)，滤过，合并滤液，适当浓缩。加乙醇使含醇量达到60％，取上清液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.33(80℃)的稠膏，加入辅料(清膏1份，蔗糖2份，糊精1.3份)制粒，即得。

实验例6板蓝根糖浆制备

取板蓝根药材700g，加水煎煮2次(第一次2小时，第二次1小时)，滤过，合并滤液，静置。取上清液适当浓缩，加入矫味剂(蔗糖400g)、防腐剂(苯甲酸钠3g)，溶解后滤过，加水调节至规定体积(1000ml)，即得。

实验例7板蓝根注射液制备

取板蓝根药材500g，加水煎煮2次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至约750ml，冷却，加乙醇使含醇量70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至350～500ml，冷藏，滤过，滤液用氨试液调节pH值为8.0～8.5，搅匀，冷藏48小时，加热除去氨，加注射用水至900ml，冷藏滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液调节pH值为7.0～7.5，冷藏，滤过，滤液加甘露醇10g，并加注射用水调整总量至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。

实验例8板蓝根胶囊制备

取板蓝根药材1000g，加水煎煮2次，第一次1小时，第二次45分钟，滤过，合并滤液，浓缩至1000ml。放置至室温，加入95％乙醇使含醇量达到60％。冷藏，滤过，滤液回收乙醇浓缩至稠膏状，加入淀粉200g及其他辅料适量，制成颗粒，填充于胶囊即得。

实验例9板蓝根制剂中腺苷定性控制

取实验2制得的滴眼液5ml，加水稀释为10ml，用水饱合的正丁醇萃取三次(20ml，20ml，10ml)，分液，合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用70％乙醇溶解，作为供试品溶液。另取腺苷对照品，加70％乙醇制成每ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于一同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿—醋酸乙酯—异丙醇—水—氨水(8∶2∶6∶0.5∶0.12)为展开剂，上行展开，取出，晾干，于紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应处显相同的暗斑。(见图1)

实验例10板蓝根滴眼液中腺苷的含量测定

1.色谱条件：仪器：HP1100高效色谱仪，G1310A IsoPump泵，G1314AVMD紫外检测器。Chemstation数据处理软件。

色谱柱：Alltima C18(5μm，150mm×4.6mm)；流动相：甲醇—水(8∶92)；流速：1ml/min；柱温：室温。检测波长：260nm。

2.供试品溶液的制备：精密吸取实验例2制得的滴眼液作样品2ml，置10ml容量瓶中，用30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3.对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的腺苷约10mg，置50ml容量瓶中，加流动相定溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

4.线性关系的考察：

y＝60659x-8.5766，r＝0.9998

5.稳定性：

样品溶液在8小时内稳定

6.重现性：

3份样品的RSD％小于3％，样品重现性良好。

7.回收率：

样品的回收率在95％～105％之间，试验表明，本法具有良好的回收率。

8.含量测定：

三批样品测定结果：

    样品号                   含量

      1                      0.1124

      2                      0.1157

      3                      0.1045

根据测定结果，结合工业大生产实际，定本品每ml含腺苷不得少于0.0998mg。

实验例11  板蓝根药材中腺苷定量控制

1、取板蓝根药材：本品为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根。购于成都市荷花池中药材市场。本品为药典2000版收载品种，应符合《中国药典》2000年版一部第163页板蓝根项下有关规定。为保障制剂质量的需要，又对其腺苷的含量进行了规定。

2、腺苷的含量测定：取2g药材+20ml30％甲醇，定容到25ml

2.1色谱条件：同实验例10所述的含量测定条件。

2.2提取溶剂的选择：考察了以水、10％甲醇、30％甲醇为提取溶剂的提取率，结果表明，30％甲醇的提取效率最高，故选择30％甲醇作为提取溶剂。

2.3提取方法的选择：考察了回流提取与超声提取，结果表明，两种方法的提取效率几乎一致，但超声提取更简便，易于操作，故选择超声提取。

2.4提取时间的选择：分别考察了超声提取30、45、60分钟，结果表明，提取45分钟药材中腺苷就已基本提取尽，故选择提取45分钟。

2.5药材的含量测定

按拟定的方法，对4批药材进行含量测定，结果见表。

                       药材含量测定结果(n＝2)

样品号         1           2             3          4

含量(mg/g)   0.3252      0.3806        0.3016     0.3142

平均含量(mg/g)                  0.3304

由以上测定结果，结合实际，板蓝根药材中腺苷的含量不得低于0.3mg/g。通过对板蓝根药材中腺苷含量的测定，可反映板蓝根药材的质量。

实验例12  板蓝根药材及板蓝根颗粒中腺苷的稳定性试验

1.取板蓝根药材和板蓝根颗粒各3批置于温度为37-40℃和相对湿度75％的条件下进行加速稳定性试验，每月考察1次，连续3个月。

2.主要考察项目是含量测定，数据见下表。

3.色谱条件同实验例10：

试品溶液的制备：精密称取实验例1药材颗粒1g和实验例5制得的颗粒1g，分别5m30％甲醇提取，滤过，滤液置10ml容量瓶中，用30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的腺苷约10mg，置50ml容量瓶中，加流动相定溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

           表1板蓝根颗粒加速稳定性试验结果(mg/g)

放置时间(月)         0          1         2        3

          01       0.1024    0.1022     0.1024   0.1021

批次      02       0.1020    0.1019     0.1020   0.1018

          03       0.1023    0.1024     0.1023   0.1022

          表2板蓝根药材加速稳定性试验结果(mg/g)

放置时间(月)         0          1         2        3

          01       0.3252    0.3252     0.3251   0.3252

批次      02       0.3806    0.3805     0.3804   0.3804

          03       0.3142    0.3141     0.3140   0.3141

4.结论：

根据加速稳定性试验结果可知，上述检测板蓝根药材及其制剂中腺苷含量的方法稳定可行。

以下通过具体药效学试验进一步证明本发明的有益效果。

实施例1  板蓝根滴眼液的体外抗菌试验

一、实验材料

1、试验药物

(1)、板蓝根滴眼液：红棕色液体，规格：8ml/支(含生药4g/8ml)，批号：030401，由实验例2方法制备，并通过实验例10测定其中腺苷的含量。试验时吸取20ml，加入20ml融化的50℃M-H琼脂(水解酪蛋白琼脂)培养基混匀后，从40ml中吸出20ml含药培养基倾倒平皿，余下的20ml含药培养基中再添加20ml无药琼脂培养基稀释，混匀后再吸出20ml倾倒平皿，依此类推，即以此二倍稀释法制备出含板蓝根滴眼液稀释度为原液的250、125、62.5、31.3、……0.24的系列含药平皿待用。

(2)、板蓝根注射液：红棕色液体，生药含量为500mg生药/ml(每2ml相当于板蓝根1g，批号20030416，由武汉健明药业集团十堰康迪制药有限公司生产。试验时吸取20ml，加入20ml融化的50℃M-H琼脂培养基混匀后，从40ml中吸出20ml含药培养基倾倒平皿，余下的20ml含药培养基中再添加20ml无药琼脂培养基稀释，混匀后再吸出20ml倾倒平皿，依此类推，即以此二倍稀释法制备出生药含量为250、125、62.5、……0.5mg生药/ml的系列含药平皿待用。

2、细菌

(1)临床分离菌株：试验所用菌株均为2001-2003年从四川地区收集的临床分离致病菌，所有菌种在收集分离的单位(成都中医药大学附属医院检验科细菌室)均经鉴定后，再经本室用API系统(API系统是指细菌鉴定系统，是由法国梅里埃公司生产的Vitek全自动细菌鉴定系统)重新鉴定后使用。

金黄色葡萄球菌20株、表皮葡萄球菌5株、大肠埃希菌13株、ESBLs大肠埃希菌6株、肺炎克雷伯菌6株、ESBLs肺炎克雷伯菌6株、施氏假单胞4株、产气杆菌5株、阴沟肠杆菌7株、沙雷菌2株、不动杆菌20株，共94株。

(2)标准质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、ESBLs肺炎克雷伯菌ATCC700603以及标准产酶株SHV-1、SHV-2是成都中医药大学药理室保存菌株。

3、培养基

M-H培养基由北京奥博星生物技术有限责任公司生产。

M-H肉汤培养基：称取25g，加1000ml蒸馏水，混匀分装，调整PH值至7.2-7.4，121℃高压灭菌20分钟，用于革蓝阳性、阴性需氧菌的药敏试验。

M-H固体培养基：称取36.5g，加1000ml蒸馏水，混匀分装，调整PH值至7.2-7.4，121℃高压灭菌20分钟，用于革蓝阳性、阴性需氧菌的药敏试验。

二、试验方法

1、最小抑菌浓度的测定

采用琼脂二倍稀释法(见《微生物学》128页，上海科学技术出版社，1994年5月，)测定板蓝根滴眼液的最低抑菌浓度(MIC)。将细菌接种于含不同药物浓度的琼脂平皿表面，每点含菌量约为10⁵CFU/ml(CFU即为菌落形成单位，是平板计数法的常用单位。)，37℃孵育18-24小时观察结果，以无细菌生长平皿培养基中所含药物的最低浓度为药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC值)。

2、最低杀菌浓度(MBC)的测定

采用液体稀释法(见《微生物学》129页，上海科学技术出版社，1994年5月)测定板蓝根滴眼液的最小杀菌浓度(MBC)。用M-H肉汤将受试药液进行二倍稀释后，分别于2ml含药培养液中接种100ul受试菌液(使终浓度为约10⁵CFU/ml)，置于37℃孵育18-20小时，肉眼观察，以无细菌生长试管中所含药物的最低浓度为药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC值)。

将肉眼观察无细菌生长的试管的0.01ml培养液涂于不含药物的琼脂平皿表面，继续37℃孵育18-20小时后，以琼脂平皿上未见细菌生长的对应试管中的药物最低浓度作为药物对该菌的最低杀菌浓度(MBC)。

三、结果

板蓝根滴眼液对所试革蓝阳性、阴性细菌均仅有一定的体外抗菌作用。板蓝根滴眼液对所试革蓝阳性菌中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有一定的体外抗菌作用，对所试金葡菌菌株的MIC值范围为62.5-＞250mg生药/ml(实验例10测定每ml滴眼液中最低含腺苷0.01875mg/ml～0.075mg)，对所试表葡菌菌株的MIC值均为＞250mg生药/ml，对所试革蓝阴性菌中大肠埃希菌、ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、ESBLs肺炎克雷伯菌、施氏假单胞菌、产气杆菌、阴沟肠杆菌、沙雷菌的MIC值范围均为＞250mg生药/ml，对所试不动杆菌的MIC值范围均为125-＞250mg生药/ml。

板蓝根滴眼液的体外杀菌试验表明板蓝根滴眼液对所试革蓝阳性、阴性细菌无杀菌作用。板蓝根滴眼液对所试大肠杆菌、ESBLs大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌以及不动杆菌的杀菌浓度均大于250mg生药/ml。

表3板蓝根滴眼液的体外杀菌活性

细菌(编号)	MIC值(mg/ml)	MBC值(mg/ml)
			大肠杆菌0216	250	＞250
ESBLs大肠02-3	＞250	＞250
			金葡球菌02222	62.5	＞250
金葡球菌02216	62.5	＞250
			肺克02-9-7	＞250	＞250
不动02511	125	＞250

注：最低抑菌浓度为62.5mg药材/ml(采用实验例10的方法测定每ml滴眼液中最低含腺苷0.01875mg/ml)即具有抑菌作用。体外抗菌试验中提到＞250mg生药/ml说明板蓝根滴眼液无最低杀菌浓度，说明无杀菌作用。但浓度为250mg药材/ml是抑菌效果较强(每ml含腺苷0.075mg)，与抑菌浓度为62.5mg药材/ml相比，P＜0.05具备显著性差异，说明浓度为250mg药材/ml是抑菌效果较强(每ml含腺苷0.075mg)具有较强的抑菌作用。

上述实验说明：板蓝根滴眼液对临床分离的大多数革蓝阳性、阴性细菌仅有一定体外抗菌作用，无杀菌作用。

腺苷虽然不是板蓝根制剂的有效成分，但腺苷的含量可从侧面反应板蓝根制剂的药效，因此控制腺苷含量可达到控制质量的目的。当板蓝根滴眼液中腺苷含量小于0.075mg/ml，可推知其MIC值小于250mg药材/ml，抑菌功效差。说明控制板蓝根制剂中每制剂单位中腺苷的含量范围在0.075～2mg，可从侧面控制板蓝根制剂的药效。

实施例2板蓝根滴眼液体外抗病毒实验研究实验

将板蓝根滴眼液(由实验例2方法制备，由实验10方法测定每ml含腺苷范围为0.0998～2mg)、原剂型板蓝根注射液(药品批准文号：ZZ-5660国药准字Z14021016；规格：2ml/支，含生药0.5g/ml，批号：200303267；山西晋新双鹤药业公司生产，购于成都西部医药集团公司)、基质液(为无色透明液体，自制)及阳性对照药阿昔洛韦滴眼液(阿昔洛韦滴眼液：国药准字H 42020646；8ml/支；规格：8ml：8mg；批号为2003101；由湖北潜江制药股份有限公司生产。购于成都西部医药集团公司)的原液及1∶10-1∶80稀释药液，分别接种Hep-2细胞培养观察。证明板蓝根滴眼液、原剂型板蓝根注射液、基质液及阳性对照药阿昔洛韦滴眼液的原液及1∶10-1∶80稀释药液对Hep-2细胞(Hep-2细胞为基质检测抗核抗体。Hep-2细胞由汕头市永恒辉生物工程公司提供，生长营养液为10％小牛血清Eagles液)无任何毒性反应。

将腺病毒(AdV)3型、4型、7型、8型和单纯疱疹病毒(HSV)1型(由首都儿科研究所提供)。与板蓝根滴眼液、原剂型板蓝根注射液、基质液及阳性对照药阿昔洛韦滴眼液的原液及1∶10-1∶80稀释药液等量混合作用1小时后接种Hep-2细胞培养观察。

结果表明：

板蓝根滴眼液及原剂型板蓝根注射液的原液(1∶1)对AdV8型及HSV1型病毒均有抑制细胞内病变作用；对AdV3、7、4型病毒无抑制细胞内病变作用。阳性对照药，阿昔洛韦滴眼液原液(1∶1)对AdV8及HSV1型病毒均有抑制细胞内病变作用。对AdV3、7、4型病毒均无抑制细胞内病变的作用。基质液及空白对照(Hanks液)对AdV3、7、4、8型及HSV1型病毒均无抑制细胞内病变的作用。上述实验证明，板蓝根滴眼液(由实验例2方法制备，实验例10方法测定每ml含腺苷范围为0.0998～2mg)的范围内，对AdV8型及HSV1型病毒均有抑制细胞内病变作用，充分说明，虽然腺苷不是有效成分，但可从侧面反映板蓝根制剂的疗效，通过控制腺苷达到控制板蓝根制剂的目的。

通过上述的实验证明，本发明板蓝根制剂采用腺苷为指标性成份，对普通技术人员并非显而易见，通过对腺苷的定性定量测定，可反映板蓝根药材及其制剂的稳定性，达到控制质量的目的，采用腺苷为指标性成份，重现性高，稳定可控；通过药效学试验证明，腺苷虽然不是有效成分，但通过对腺苷含量的控制，可从侧面控制板蓝根制剂的疗效，使制剂更加稳定、可控，为板蓝根药材及其制剂提供了一种新的质量控制方法。

Claims (9)

1、板蓝根制剂，它是由中药板蓝根Radix Isatidis药材或提取物制备而成，其特征在于每制剂单位中腺苷的含量范围为0.075～2mg。

2、根据权利要求1所述的板蓝根制剂，其特征在于板蓝根药材中腺苷的含量≥0.3mg/g。

3、根据权利要求1所述的板蓝根制剂，其特征在于所述的制剂是滴眼液、原位胶化滴眼液、注射剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、片剂、丸剂、散剂。

4、根据权利要求3所述的板蓝根制剂，其特征在于所述的制剂是滴眼液。

5、根据权利要求4所述的板蓝根制剂，其特征在于所述的滴眼液中腺苷的含量范围为0.0998～2mg。

6、权利要求1所述的板蓝根制剂的质量控制方法，其特征于：它是采用腺苷为指标性成分进行定性与定量控制，每制剂单位中腺苷的含量范围为0.075～2mg。

7、根据权利要求6所述的板蓝根制剂的质量控制方法，其特征在于，所述的定性控制的方法是：采用氯仿、醋酸乙酯、异丙醇、水、氨水为展开剂，用硅胶GF₂₅₄薄层板进行展开，对照标准品为腺苷，于紫外灯下，波长为254nm检视，供试品色谱中，在与对照色谱相应处显相同的暗斑。

8、根据权利要求6所述的板蓝根制剂的质量控制方法，其特征在于，所述的定量控制的方法是：

色谱条件：

仪器：HP1000高效液相色谱仪，G1310A IsoPump泵，G1314A VMD紫外检测器；Chemstation数据处理软件；

色谱柱：Alltima C18 5μm，150mm×4.6mm；

流动相：甲醇-水，体积比为5～12∶88～95或磷酸盐缓冲液-甲醇，体积比为15～20∶3～10；流速：1ml/min；

柱温：室温；

检测波长：260nm；

进样量：20μl；

供试品溶液的制备：精密吸取板蓝根制剂，置10ml容量瓶中，用30％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的腺苷约10mg，置50ml容量瓶中，加流动相定溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；

取以上溶液注入高效液相色谱分析仪，测定，按外标法计算，即得。

9、根据权利要求8所述的板蓝根制剂的质量控制方法，其特征在于，所述的流动相：甲醇-水，体积比为8∶92。