CN1517096A - 竹叶黄酮在制药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及竹叶黄酮在制药领域中的新用途。竹叶黄酮具有扩张冠脉流量，改善心肌缺血，降低血小板聚集，对抗心肌梗塞，改善脑缺血等功能，竹叶黄酮可用于制备治疗这些适应症的药物。

Description

竹叶黄酮在制药中的应用

                           技术领域

本发明涉及竹叶黄酮的用途，具体地说是涉及在制药领域中的用途。

                           背景技术

竹叶黄酮是由竹叶经提取后得到的提取产物。所指的竹叶，是指禾本科禾亚科植物淡竹的叶，竹叶以刚竹属竹子的竹叶为佳，如毛金竹、桂竹、毛竹、哺鸡竹、早园竹、高节竹、紫竹、斑竹等。竹子是多年生常绿植物，竹叶一年四季可采，但以秋冬季(9～12月)采收最佳，竹子是一种大众化的药食两用植物，我国竹叶资源非常丰富。

中国专利98104564(2001年5月23日授权)公开了一种《从竹叶中提取黄酮类化合物浸膏或粉剂的生产方法》，在此申请中公开了从竹叶中提取竹叶黄酮的生产方法，并公开了竹叶黄酮具有优良的抗自由基、抗氧化、抗衰老活性。并公开了竹叶黄酮具有很强的清除活性氧自由基和阻断亚硝化反应的能力；能显著诱导老龄小鼠内源性抗氧化酶系的活力；降低和清除过氧化产物；能显著增强小鼠的抗疲劳和抗应激能力；降低大鼠体重的增加。

目前在市场上销售的竹叶黄酮制品主要为竹康宁胶囊，由浙江安吉圣氏生物制品有限公司生产，它用于调节血脂、并证明其对抵制体重增加，降低甘油三脂有效。

                           发明内容

本发明的目的在于提供竹叶黄酮的新用途，即在制药中的新应用。

实际上，本发明涉及竹叶黄酮在制备增加冠脉流量的药物中的应用。

涉及竹叶黄酮在制备改善心肌缺血的药物中的应用。

涉及竹叶黄酮在制备降低血小板聚集的药物中的应用。

涉及竹叶黄酮在制备治疗心肌梗塞的药物中的应用

涉及竹叶黄酮在制备治疗脑缺血的药物中的应用。

为了更好地理解本发明，下面将以竹叶黄酮的药理试验及结果来说明其在制药领域中的新用途。

竹叶经提取后得到的提取物主要成分为竹叶黄酮。竹叶黄酮可以制成片剂，如普通片、含片、舌下片等。包衣也可用糖衣、肠衣和薄膜包衣，但以薄膜包衣为佳。先将竹叶黄酮原料粉碎过100目成细粉，称取500克，加入淀粉1500克，混匀，用50～70％乙醇润湿制粒，过12目，然后在50～70℃干燥，使水份≤5％，过12目整粒，加入羧甲基淀粉1.5％，硬脂酸镁0.3～1.0％，微粉硅胶1.0％，混匀，在压片机上压片，制得近10000片，每片重0.25克，相当于每片含竹叶黄酮50毫克。然后用苯二甲酸醋酸纤维素等包衣材料薄膜包衣，即得。此外还可将竹叶黄酮制成多种剂型，如片剂、口服液、胶囊剂、注射剂等。

据《天然功能性竹叶提取物--竹叶黄酮》(发表于《中国食品添加剂》，2002年第3期)报导，经试验证明竹叶黄酮无毒，无致突变作用。

由沈阳药科大学对竹叶黄酮进行了动物试验，发现竹叶黄酮具有扩张冠脉流量，降低血小板聚集，改善心肌缺血，对抗心肌梗塞和脑缺血等治疗作用，效果比较明显。药理药效试验的结果如下：

1.竹叶黄酮对豚鼠离体心脏冠脉流量的影响

取豚鼠25只，分为5组，每组5只，雌雄兼用，体重300-400g。击头致昏，迅速取心脏，在4摄氏度任洛氏液中清洗，排除积血。将主动脉套入灌流装置的套管上，并结扎固定。用蛙心夹将张力换能器与心尖部连接，再输入MS-302中。以纯氧饱和的任洛氏液(Ringer-Locke’s)恒速灌流，灌注压差50-80cm水柱。灌流10min后，测定连续3min的每分冠脉流量，以其平均值作为药前值。加药后，记录1-3min的每分冠脉流量，取极值，作为药后值，比较前后变化。对照组给注射用水0.5ml，其他各组分别给被试药2.5、5、10mg/ml，阳性对照药给复方丹参注射液0.5g/ml。

实验结果用t检验进行处理，其显示不同剂量的竹叶黄酮均可增加离体豚鼠心脏的冠脉流量，组间及自身t检验均有显著性差异，而且与剂量正相关，结果见表1。中、高剂量的竹叶黄酮均能增加心肌收缩力，组间及自身t检验均有显著性差异，低剂量的竹叶黄酮增加心肌收缩力，组间t检验有显著性差异，结果见表2。

表1  竹叶黄酮对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响( X±SD，n＝5)

             剂量           给药前均值      给药后均值        差值(ml)          变化率(％)

                            (ml/min)        (ml)

溶剂对照      --            4.4±0.66       4.8±0.85         0.4±0.19         9.0±2.24

丹参          0.5g/ml       4.4±1.26       6.9±0.74^##      2.5±0.52         52.2±13.8^***

竹叶黄酮      2.5mg/ml      4.1±1.48       6.5±0.85^#       2.3±0.58         58.5±18.1^**

竹叶黄酮      5mg/ml        4.2±1.54       7.8±1.12^##      3.7±0.65         85.7±8.08^***

竹叶黄酮      10mg/ml       4.5±1.48       10.2±1.78^###    6.7±1.47         126.6±15.1^***

**，***，与溶剂对照比较，p＜0.01，p＜0.001；#，##，###，自身比较，p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001

表2  竹叶黄酮对离体豚鼠心脏心肌收缩力的影响( X±SD，n＝5)

**，***，与溶剂对照比较，p＜0.01，p＜0.001；#，##，自身比较，p＜0.05，p＜0.01，

上述结果说明竹叶黄酮有扩张冠脉流量的作用。

2.竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血的影响

取大鼠50只，雌雄兼用，体重180-220g。随机分成5组：分为注射用水组、竹叶黄酮低、中、高3个剂量组，复方丹参注射液阳性对照组。分别静脉给予注射用水、竹叶黄酮1.5g/kg、4.5mg/kg和1.35mg/kg以及复方丹参注射液0.8g/kg。静脉给药20min后，乌拉坦1g/kg腹腔注射，麻醉30min，固定，记录正常II导联心电图后，舌静脉注射垂体后叶素0.8单位/kg，10sec注完。分别记录0、15、30、60秒、3、8分的II导联心电图，观察各期心电图变化，比较给予垂体后叶素前后T波高度的变化，进行组间t检验。

0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg三个剂量竹叶黄酮经连续给药后均可不同程度的对抗垂体后叶素(pit)所致大鼠心肌缺血损伤(T波变化)，其中竹叶黄酮0.3g/kg可以对抗15sec、30sec时pit所致T波变化(与模型组比较，p＜0.05)；竹叶黄酮0.6g/kg可以对抗15sec、30sec、3min时pit所致T波变化(与模型组比较，p＜0.05)；竹叶黄酮1.2g/kg可以对抗15sec、30sec、60sec、3min时pit所致T波变化(与模型组比较，p＜0.05，p＜0.01或p＜0.001)，作用与模型组比较有明显差异，结果见表3。

3.竹叶黄酮对家兔血小板聚集的影响

体外给药对花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集的功能的影响：取大耳白家兔8只，雌雄各半。耳缘静脉取血3ml，置事先放有枸橼酸钠溶液(抗凝剂，血与抗凝剂比例9∶1)的塑料管中，将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(800rpm)3分钟，吸出上层米黄色悬液为PRP(富血小板血浆)。然后再离心(2000rpm)10分钟，吸出上清液为PPP(贫血小板血浆)备用。竹叶黄酮系列药液用注射用水配制，用等比稀释法配成2.5mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的药液。取PRP200ul加20ul的待测药物(对照用同体积的注射用水)，于37℃预温10分钟，用PPP加20ul的相应的药液或对照液调节器透光度为100％，再在搅拌作用下加入50ul的诱导剂花生四烯酸，测定10分钟内药物对花生四烯酸(2mg/ml)诱导血小板聚集的影响。

体内给药对花生四烯酸诱导的家兔血小板聚集的功能的影响：取大耳白家兔40只，雌雄各半，随机分为5组，每组8只，分别为空白对照组，竹叶黄酮低中高三个剂量组及复方丹参注射液组。分别静脉给药，注射用水，竹叶黄酮0.1g、0.2g、0.4g/kg及复方丹参注射液0.5g/kg。给药20min后耳缘静脉取血3ml，置事先放有枸橼酸钠溶液(抗凝剂，血与抗凝剂比例9∶1)的塑料管中，将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(800rpm)3分钟，吸出上层米黄色悬液为PRP(富血小板血浆)。然后再离心(2000rpm)10分钟，吸出上清液为PPP(贫血小板血浆)。测定药物对花生四烯酸(2mg/ml)诱导血小板聚集的影响。

由表4及5可以看出无论是体内或是体外，竹叶黄酮均具有明显的抗家兔血小板聚集的作用，与阴性对照组比较差异显著，其中在体内抗血小板聚集实验中，中剂量及高剂量组的抗血小板聚集作用强于复方丹参片组。

表3  竹叶黄酮对垂体后叶素所致大鼠心肌缺血损伤的影响(T波变化，X±SD，n＝10)

组别      剂量                                                   给pit后T波变化(ΔT波，mV)

          (g/k   给pit前T波      0sec          15sec           30sec           60sec           3min

          g)

模型组    ---    0.276±0.086    ΔT波(mV)     0.038±0.031    0.104±0.036    0.176±0.115    0.086±0.047    0.128±0.089

                                 变化率(％)    17.72±19.82    41.56      ±         84.35±30.04    39.20±23.44    57.93±16.98

                                                               13.56

丹参组    0.5    0.366±0.123    ΔT波(mV)     0.056±0.028    0.055±0.034    0.043±0.030^*  0.037±0.028    0.037±0.023

                                 变化率(％)    21.83±10.42    18.39±14.66^*  13.67±13.95^*  11.23±7.58     9.28±3.17^**

低剂量    0.3    0.287±0.017    ΔT波(mV)     0.047±0.038    0.057±0.032    0.040±0.052    0.057±0.061    0.07±0.082

                                 变化率(％)    7.06±5.392     17.45±9.68^*   21.45±23.61^*  26.45±31.48    24.59±27.53

中剂量    0.6    0.256±0.045    ΔT波(mV)     0.033±0.049    0.053±0.040    0.073±0.102    0.053±0.061    0.056±0.030

                                 变化率(％)    17.20±22.21    21.15±9.90^*   19.87±22.22^*  25.96±27.57    25.71±15.11*

高剂量    1.2    0.355±0.094    ΔT波(mV)     0.020±0.018    0.012     ±         0.032±0.009^*   0.017±0.009^*  0.037±0.020

                                                               0.009^***

                                 变化率(％)    7.055±5.583    4.17±1.07^***  10.07±1.400^** 5.34±2.98^*    12.70±2.04^**

*，**，***，与模型组比较，p＜0.05，p＜0.01，P＜0.001

表4  竹叶黄酮对家兔体外血小板聚集的影响( X±SD，n＝8)

组别        剂量(mg/kg)  动物数    血小板聚集率(％)    抑制率(％)

对照组      --           8         36.36±6.65         --

低剂量组    2.5          8         21.91±2.05^*       39.74

中剂量组    5            8         17.13±3.25^*       52.88

高剂量组    10           8         10.97±4.70^**      69.82

*，**，与模型组比较，p＜0.05，p＜0.01

表5  竹叶黄酮对家兔半体内血小板聚集的影响( X±SD，n＝8)

组别        剂量(g/kg)    动物数      血小板聚集率(％)      抑制率(％)

对照组      --            8           51.17±4.96           --

低剂量组    0.1           8           38.63±2.65**        24.51

中剂量组    0.2           8           31.66±2.64***       38.13

高剂量组    0.4           8           27.27±4.85***       46.57

复方丹参    0.1           8           35.67±6.67**        30.30

与空白对照比较*P＜0.05；**P＜0.01 ***P＜0.001

4.竹叶黄酮对大鼠急性心肌梗塞的影响

取大鼠50只(360-400g)随机分为伪手术组，缺血对照组，复方丹参对照组，竹叶黄酮低、中、高剂量组。术前24小时及30分钟各静脉注射一次药物(竹叶黄酮50mg/kg、150mg/kg和450mg/kg及复方丹参0.8g/ml)，伪手术组和缺血对照组给予等量的注射用水，按FIEDLER法造成大鼠实验性心肌梗塞模型。大鼠以乌拉坦(0.8g/kg，ip)浅麻醉，在自主呼吸情况下，于左胸前纵行切开皮肤2厘米左右，分离筋膜及肌层，于心尖搏动明显处上方剪断一根肋骨，轻压右侧胸廓挤出心脏，在左心耳根部下方2毫米处结扎冠脉左室支，迅速将心脏送回胸腔，使其恢复自主呼吸。术后给予适量青霉素以防感染。术前及术后24小时记录ECG(II)，监测心肌缺血的情况。结扎24小时后，取心脏洗净血液，剔除心房，沿房室沟切成4片，加入0.05％的N-BT液中染色15分钟，将未着色的梗塞心肌切下，称重，计算梗塞区占心室肌总重量的百分比。

由表6中可以看出，结扎大鼠冠脉左前降支能使ST明显抬高，和伪试组相比有显著差异；而阳性药组的ST抬高值低于缺血对照组(p＜0.05)；竹叶黄酮的中剂量和高剂量组的ST抬高值明显低于缺血对照组(p＜0.05，p＜0.01)。从表7中可以看出竹叶黄酮的中、高剂量能显著对抗大鼠冠脉结扎引起的心肌梗塞，缩小心肌梗塞面积(p＜0.05，p＜0.01)，并呈剂量依赖性。

表6  竹叶黄酮对缺血心肌ECG S-T的影响( X±SD，n＝8)

组别        剂量(mg/kg)    动物数目(只)     S-T段抬高(mv)

伪试组      -----          8                0.060±0.045*

缺血对照组  ------         8                0.335±0.122

复方丹参    250            8                0.143±0.060*

低剂量      50             8                0.255±0.171

中剂量      150            8                0.121±0.042*

高剂量      450            8                0.097±0.015**

与缺血对照组比较  *P＜0.05，**P＜0.01

表7  竹叶黄酮对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响( X±SD，n＝8)

组别         剂量(mg/kg)    动物数(只)    心室肌重(g)    梗塞心肌重(g)    心梗率(％)

伪试组       -----          8             0.86±0.04     0.04±0.01       5.3±2.0*

缺血对照组   ------         8             1.11±0.13     0.48±0.13       42.9±8.1

复方丹参     250            8             0.88±0.02     0.10±0.02       10.3±3.1*

低剂量       50             8             0.91±0.21     0.37±0.10       36.2±9.5

中剂量       150            8             0.82±0.02     0.20±0.04       26.0±4.9*

高剂量       450            8             0.99±0.22     0.26±0.07       26.7±2.8**

与缺血对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01

5.小鼠急性脑缺血实验

取小鼠(20±2g)50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，分为注射用水组、竹叶黄酮低、中、高3个剂量组，尼莫通阳性对照组。分别静脉给予注射用水、竹叶黄酮1.5g/kg、4.5mg/kg和1.35mg/kg以及尼莫通40ug/kg。给药20min后迅速从小鼠双耳后颈部断头，依双盲法观察小鼠喘气时间。

由表8中可以看出不同剂量均能明显延长小白鼠断头脑缺血生存时间，与对照组比较差异显著。

表8  对小白鼠断头脑缺血生存时间的影响( X±SD，n＝10)

组别      剂量(g/kg)    动物数目      喘息时间(s)       延长率(％)

对照组    -             10            20±2.1           -

尼莫通    40ug/kg       10            24.2±1.3**       21％

低剂量    0.15          10            23.4±4.6*        17％

中剂量    0.45          10            25.4±1.6**       27％

高剂量    1.35          10            25.4±2.2***      29.1％

与空白对照比较*P＜0.05；**P＜0.01 ***P＜0.001

从以上结果可以得出本发明的优点在于：

1.本发明对已知化合物竹叶黄酮发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

2.本发明的竹叶黄酮安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景；

3.本发明的物质原料来源丰富，价廉，没有发现有毒副作用，制备工艺简单，并可做成口服剂型，注射剂、片剂等，使用方便。

4.用竹叶黄酮配制成的药物具有显著的扩张冠脉流量、降低血小板聚降低、改善心肌缺血、心肌梗塞脑缺血的作用。

                         具体实施方式

下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此：

实施例1：

竹叶黄酮片剂的制备：先将竹叶黄酮原料粉碎过100目成细粉，称取500克，加入淀粉1500克，混匀，用50～70％乙醇润湿制粒，过12目，然后在50～70℃干燥，使水份≤5％，过12目整粒，加入羧甲基淀粉1.5％，硬脂酸镁0.3～1.0％，微粉硅胶1.0％，混匀，在压片机上压片，制得近10000片，每片重0.25克，相当于每片含竹叶黄酮50毫克。然后用苯二甲酸醋酸纤维素等包衣材料薄膜包衣，即得。

实施例2：

竹叶黄酮口服液的制备：将竹叶黄酮原料粉碎过100目成细粉，称取500克，慢慢加至溶于100升的纯水中，边加热边搅拌，直至全部溶解，加入甜味剂甜蜜素适量，防腐剂山梨酸钾适量，搅匀，加水至溶液中含5.0毫克/毫升左右的竹叶黄酮，用0.2um的微孔滤膜过滤。用易拉玻璃瓶灌装，每支10毫升，压盖密封，杀菌，贴瓶签，装盒，即得。

Claims (5)

1.竹叶黄酮在制备增加冠脉流量的药物中的应用。

2.竹叶黄酮在制备改善心肌缺血的药物中的应用。

3.竹叶黄酮在制备降低血小板聚集的药物中的应用。

4.竹叶黄酮在制备治疗心肌梗塞的药物中的应用

5.竹叶黄酮在制备治疗脑缺血的药物中的应用。