CN1487836A

CN1487836A - 胰高糖素样肽1(7-36)对胃窦幽门十二指肠能动性的影响

Info

Publication number: CN1487836A
Application number: CNA018093507A
Authority: CN
Inventors: B・格克; B·格克; 拉; J·斯基拉
Original assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2000-03-14
Filing date: 2001-03-14
Publication date: 2004-04-07
Also published as: JP2003526671A; US20020098195A1; US20030216292A1; WO2001068112A2; US6579851B2; WO2001068112A3; EP1267912A2; KR20030009389A; AU2001252201A1; MXPA02009031A; CA2402733A1

Abstract

本发明提供一种有效抑制健康受试者及患有各种疾病病人的胃窦幽门十二指肠能动性的方法，该方法没有其它药物组合物所带有的副作用。胰高糖素样肽1(Glucatgon－like peptide－1，简称GLP－1)减缓胃窦幽门十二指肠运动，并可用于治疗或预防肠胃病，如腹泻、手术后倾倒综合征和肠道激惹综合征，以及用于内窥镜操作前用药。

Description

胰高糖素样肽1(7-36)对胃窦幽门十二指肠能动性的影响

技术领域

本发明涉及以胰高糖素样肽1(Glucatgon-like peptide-1，简称GLP-1)抑制胃窦幽门十二指肠能动性以及在内窥镜检查时减轻不适和缓解胃肠道功能障碍的方法。

背景技术

泛用胰高血糖素会引起胃十二指肠运动功能不同程度地减少。胰高血糖素的作用与剂量有关，最小有效剂量为0.5mg。然而，胰高血糖素却不利于结肠镜检测[Norfleet，Gastrointest.Endosc.，24：164-5页，(1978)]，在剂量高达2mg时，胰高血糖素都不会使胃窦收缩减少[Gregerson等人，Scand.J.Gastroenterol.23(supp 152)，42-47页，(1988)]。另外，糖尿病患者被禁忌用胰高血糖素[Paul和Freyschmidt，ROFO Rortschr.Geb.Rontgenstr.Nuklearmed.，125：31-7页，(1996)]，而且胰高血糖素还非常贵，其功效也一直未得到证实。

服用胰高血糖素的副作用包括恶心和呕吐。副作用与剂量有关，剂量为1mg时就有这些副作用[Larsen等人时，Scand.J.Gastroenterol.21：634-640页，(1986)；Gregersen等人，supra，Diamant Handbook Experimental Pharm，Lefevre ed.，Vol.66/2，611-643页，(1986)]。由于要显著降低运动功能所需的剂量往往超过1mg，所以服用胰高血糖素的副作用是很常见的。这些副作用使病人非常不舒服，而且经常导致内窥镜操作不得不中断或中止。

天仙子胺硫酸盐具有解痉作用，用于治疗肠道激惹综合征，但也伴有不良副作用[Lahoti等人，Gastrointest.Endosc.46：139-142页，(1997)]。Otreocide是一种生长抑制素类似物，也已经用于治疗在快速解毒中出现的临床严重腹泻及术后倾倒综合征，并且已被证实有一定效果，但会出现不可承受的心动过缓，由于有这些副作用，故不可长期服用。

由胰高类血糖原衍生的胰高糖素样肽1(7-36)酰胺(GLP-1)是一种胃肠道激素，餐后就会从肠道的L细胞释放出来[G ke等人，Dur.J.Clin.Invest.，21：135-44页，(1991)；Schirra等人，J.Clin.Invest.，97：92-103页，(1996)]。以前以人为对象进行的研究已经表明，合成GLP-1基本上可延缓液体和固体食物的胃排空[Schirra等人，J.Endocrinol，156：177-86页，(1998)；Wettergren等人，Dig.Dis.Sci.，38：665-673页，(1993)；Schirra等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)]。由胃窦幽门十二指肠区能动性调节的幽门脉冲式流动是胃排空的一种主要机制[Malber和Mathis，Gastroentrerol.，107：37-46页，(1994)；Anvari等人，J.Physiol.(伦敦)，488：193-202页，(1995)]。业已发现，胃窦收缩，特别是和胃窦十二指肠协同的胃窦收缩与液体[Schirra等人，J.Clin.Invest.，97：92-103页，(1996)；Camilleri等人，Am.J.Physiol.，249：G580-585页，(1985)；Houghton等人，Gastroenterol.，94：1276-84页，(1988)]和固体[Fraser等人，Am.J.Physiol.，264：G195-201页，(1993)]的胃排空率有关。由幽门产生的局部紧张时的压力增大提供一种重要制动机制，减少胃液外流[Anvari等人，J.Physiol.(伦敦)，488：193-202页，(1995)；Heddle等人，Dig.Dis.Sci.，38：856-692页，(1993)；Heddle等人，Gut，29：1349-57页，(1988)；Tougas等人，Gut，33：466-471页，(1992)]。

发明内容

因此，本发明的一个目的在于提供一种以副作用最小的有效治疗组合物抑制胃窦十二指肠能动性的方法，众所周知，GLP-1不会导致低血糖，在本发明所进行的实验中也没有出现低血糖，而且也没有产生其它副作用。所以，本发明还揭示了一种剂量单位，其包括一GLP-1分子和一适合医药用的赋形剂。

另一方面，本发明也涉及一种内窥镜操作术前用药的方法，其包括内窥镜操作前或期间施加一GLP-1分子。

本发明的另一个实施例是一种治疗或预防胃肠病的方法，这些肠胃病包括但不局限于肠道激惹综合征、非感染性急性和慢性腹泻、手术后倾倒综合征，该方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

本发明还涉及一种通过施加一如上所述的GLP-1分子来治疗或预防与戒毒相关的病征的方法。

本发明的又一个实施例包括一种抑制有需要病人的幽门能动性的方法，其包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子拮抗物。

附图说明

图1所示为十一名健康志愿者在静脉输注盐水、0.4和1.2pmol·kg^-1·min^-1GLP-1(7-36)酰胺的同时十二指肠灌注盐水或脂质(2.5kcal/min)时，GLP-1的血浆免疫反应性。以平均值±标准差(Mean±SEM)表示。表3列出详细的统计分析。

图2A和2B所示为十一名健康志愿者在静脉输注盐水、0.4和1.2pmol·kg^-1·min^-1GLP-1(7-36)酰胺的同时十二指肠灌注盐水(A)或脂质(2.5kcal/min，B)时，胃窦和十二指肠收缩的频率(上部分)和幅度(下部分)。以Mean±SEM表示。表1列出详细的统计分析。

图3A和3B所示为十一名健康志愿者在十二指肠灌注盐水(上部分)或脂质(2.5kcal/min，下部分)过程中静脉输注盐水、0.4和1.2pmol·kg^-1·min^-1GLP-1(7-36)酰胺时，单独的幽门压力波(A)和幽门压(B)。以Mean±SEM表示。*：p＜0.05是用于箭头所指的时间的比较(配对t检验)。表2列出详细的统计分析。

图4所示为十一名健康志愿者在十二指肠灌注盐水(上部分)或脂质(2.5kcal/min，下部分)期间十二指肠类III相的活性出现率。分别在消化间期中低剂量GLP-1输注或在餐后研究中十二指肠脂质灌注，开始后10分钟内十一名受试者中有七人出现前活性。实线框的长度表示收缩突发长度。

图5A和5B所示为压力变化，其显示在十二指肠灌注盐水(A)或脂质(2.5kcal/min，B)期间静脉输注0.4pmol·kg^-1·min^-1GLP-1(7-36)酰胺的影响。在消化间期(A)中，GLP-1立刻抑制胃窦十二指肠能动性，并诱致基础幽门压受到IPPW短时间连续刺激而持续上升。在十二指肠脂质灌注(B)期间，用GLP-1使胃窦和十二指肠收缩停止，而且除了脂质的影响外，由于IPPW的刺激而使基础幽门压进一步上升。

图6A、6B、6C和6D所示为十一名健康志愿者在十二指肠灌注盐水或脂质(2.5kcal/min)期间静脉输注盐水、0.4和1.2pmol·kg^-1·min^-1GLP-1(7-36)酰胺对血糖(A)以及胰高血糖素(B)、胰岛素(C)和胰多肽(D)的免疫反应性的影响。相对基础值的增加值以Mean±SEM表示。表3列出详细的统计分析。

具体实施方式

早期对人进行的研究显示，合成GLP-1基本上可延缓液体和固体食物的胃排空[Schirra等人，J.Endocrinol，156：177-86页，(1998)；Wettergren等人，Dig.Dis.Sci.，38：665-673页，(1993)；Schirra等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)]。降低胃排空率除了促胰岛素和胰高血糖素的作用外，相当大的程度上可包括健康受试者和糖尿病患者中GLP-1的降糖作用[Schirra等人，J.Endocrinol.，156：177-86页，(1998)；Schirra等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)]。由胃窦幽门十二指肠区能动力调节的近端胃幽门动脉动流产生的幽门压(tonic pressure)不受控制，是胃排空的一种主要机制[Malber和Mathis，Gastroentrerol.，107：37-46页，(1994)；Anvari等人，J.Physiol.(伦敦)，488：193-202页，(1995)]。业已发现，胃窦收缩，特别是与胃窦十二指肠协同的胃窦收缩表明与液体[Schirra等人，J.Clin.Invest.，97：92-103页，(1996)；Camilleri等人，Am.J.Physiol.，249：G580-585页，(1985)；Houghton等人，Gastroenterol.，94：1276-84页，(1988)]和固体[Fraser等人，Am.J.Physiol.，264：G195-201页，(1993)]的胃排空率有关。由幽门产生的局部紧张时的压力增大提供一种重要制动机制，减少胃液外流[Anvari等人，J.Physiol.(伦敦)，488：193-202页，(1995)；Heddle等人，Dig.Dis.Sci.，38：856-692页，(1993)；Heddle等人，Gut，29：1349-57页，(1988)；Tougas等人，Gut，33：466-471页，(1992)]。

本发明叙述了在人消化间期和餐后状态中各种剂量合成GPL-1对胃窦幽门十二指肠区能动性的影响，而餐后状态是由十二指肠灌注脂质得出的。采用十二指肠灌注脂质而非通过口腔进餐的形式，可使营养素摄入量保持恒定，而与胃排空无关。选择这种特殊的进餐方式可建立稳定的餐后能动模式以减少血糖和胰岛素偏移。最后，将GLP-1与脂质对幽门能动性的生理刺激素的影响进行了比较。

本发明发现，GLP-1提供一种较合算的治疗组合物，其用于预防或治疗各种肠胃病。另外，GLP-1也可用于内窥镜检查前用药以及治疗戒毒后出现的病征。其它药剂与GLP-1的效用不同，而且往往会有不良副作用。这些副作用包括，但不限于，腹泻和呕吐。但以GLP-1治疗的病人却没有这些副作用。

胃能动性的评估

利用本领域技术人员公知的方法以能动性的记录来直接评估胃窦十二指肠活性的抑制。以计算器和有效软件分析收缩活动[Katschinski等人，Gastroe

terol.，103：383-91页，(1992)]。只有幅度至少为lOmmHg以及持续时间至少为2秒的谱峰才认为真正收缩。十二指肠III相定义为在离口传播的十二指肠中以大于等于10/min且持续至少2分钟的频率下出现的正常收缩。

在一实施例中，分别将从两个胃窦侧孔和三个十二指肠侧孔得到的数值求和(频率，能动性指数)或取平均值(幅度)来独立地分析胃窦和十二指肠在10分钟时间内的数据。把能动性指数看作是收缩面积，以mmHg·min^-1表示。如果最近端十二指肠侧孔中记录的压力波开始是在其中一个胃窦侧孔记录的压力波开始后5秒内发生，而且如果位于其间的所有侧孔都记录该两个压力波，则胃窦收缩被认为是胃窦幽门十二指肠传播波。

在本文中，把抑制胃窦幽门十二指肠能动性定义为能动性指数的减少。也可采用其它方法测定能动性。本领域技术人员应当懂得显著抑制能动性将是有用的，包括完全抑制。将实验开始前基础期的平均幽门压定为基础值，与基础值之差定为幽门压(pyloric tone)。

GLP-1分子

本文所使用的GLP-1分子包括以下含义。哺乳动物的GLP肽和胰高血糖素由同一基因编码。在回肠内，表型被分成为两类主要的GLP肽类激素，即GLP-1和GLP-2。GLP-1(1-37)的序列为His Asp Glu PheGlu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr LeuGlu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly ArgGly(SEQ ID NO：1)。以后转译的方式使GLP-1(1-37)酰胺化得到GLP-1(1-36)NH₂，其序列为His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu GlyThr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala LysGlu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg(NH₂)(SEQ ID NO：2)；或者，经酶处理则得到GLP-1(7-37)，其序列为His Ala Glu Gly ThrPhe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys GluPhe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly(SEQ ID NO：3)。GLP-1(7-37)也可被酰胺化，则得到GLP-1(7-36)酰胺，这是GLP-1分子的天然形式，其序列为His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr LeuGlu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg(NH₂)(SEQ ID NO：4)。同理，GLP-1(1-36)也可被加工而成GLP-1(7-36)酰胺。

肠L细胞以1∶5的比例分别分泌GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：3)和GLP-1(7-36)酰胺(SEQ ID NO：4)。这些平截型GLP-1的原位半衰期，即少于10分钟，并由氨基二肽酶IV失活分别成为Glu Gly Thr Phe ThrSer Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe IleAla Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly(SEQ ID NO：5)；和Glu Gly ThrPhe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys GluPhe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg(NH₂)(SEQ ID NO：6)。据估计，肽Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu GlyGln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly(SEQID NO：5)和Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu GluGlv Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg(NH₂)(SEQ ID NO：6)影响肝的葡萄糖产生，但不刺激胰产生或分泌胰岛素。

本文使用的术语GLP-1分子包括GLP-1(1-37)、GLP-1(1-36)NH₂、GLP-1(7-37)、GLP-1(7-36)NH₂(即GLP-1(7-36)酰胺)(统称为GLP-1肽)。本发明也包括重组人GLP-1肽及自其它物种衍生的，不管是重组还是合成的GLP-1肽的应用。

GLP-1分子还表示有生物活性的GLP-1肽的变异型、类似物和衍生物。在本文中，生物活性指具有GLP-1(7-36)生物活性，但应注意变异型的活性可高于或低于天然GLP-1(7-36)酰胺的效力。GLP-1(7-36)酰胺是GLP-1的一种天然生物活性形式[参看Gòke和Byrne，DiabeticMedicine，13：854-860页，(1996)]。本发明的GLP-1分子包括以GLP-1激动剂表达的聚核苷酸，即GLP-1受体分子的激活剂及其特别在产生胰岛素的β细胞中发现的第二级信使活性。GLP-1类似物也是β细胞的激动剂，包括，例如，特别用于激活GLP-1受体的化合物。

正如本领域技术人员所公知那样，GLP-1分子的生物活性可由体内外动物模型及人类研究确定。GLP-1分子包括任何分子，不管是肽、肽类似物，还是其它与GLP-1受体结合或激活GLP-1受体的分子，如GLP-1(7-36)酰胺受体、及其第二信使级联。GLP-1受体是，例如，在产生胰岛素的胰β细胞上找到的细胞表面蛋白质。在现有技术中已对GLP-1(7-36)受体进行了说明。GLP-1受体不管是化合物或肽结合还是活化物，其方法也已为本领域技术人员所公知，测定方法最好借助组合化学库和高处理量筛选技术。GLP-1分子包括具有胰岛素活性的物种，即，它们是活化物、GLP-1受体及其在产生胰岛素的β细胞上第二信使活性的激动剂。

通常，用标准方法，即用一些受体结合活性筛选方法来测定GLP-1生物活性，这些方法包括提供表达细胞表面上GLP-1受体的合适细胞，例如胰岛素瘤细胞系，如RINmSF细胞和INS-1细胞[参见Mojsov，Int.J.Pept.Protein Res.，40：333-43页，(1992)以及欧洲专利EPO708170A2]。当然，也可用操纵表达GLP-1受体的细胞。除了用放射性免疫测定法测定示踪剂与细胞膜的特异性结合之外，还可以测定cAMP活性或葡萄糖依赖性胰岛素的产生。在其中一种方法中，将一编码本发明受体的聚核苷酸用于转染细胞，以表达GLP-1受体蛋白质。因此，例如，这样一些方法可用于筛选受体激动剂，将这些细胞与待筛选化合物接触，并测定这些化合物是否产生信号，即激活受体。

可用多克隆和单克隆抗体检测纯度和识别本文所述方法中所用的胰高糖素样肽。如ABGA1178等抗体可检测未经处理的原始GLP-1(1-37)或N末端平截的GLP-1(7-37)酰胺。其它抗体在前体分子的C末端的最末上检测出通过减法能够计算生物活性平截肽的数量，即GLP-1(7-37)或(7-37)酰胺的量[Orskov等人，Diabetes，42：658-661页，(1993)；Orskov等人，J.Clin.Invest.，87：415-423页，(1991)]。

其它筛选技术包括将表达GLP-1受体的细胞，例如转染细胞，用于一测定受体激活引起的细胞外pH值或离子的变化的系统中。例如，可使候选激动剂与表达GLP-1蛋白质受体的细胞接触，并测定第二信使的应答，例如信号转导或离子或pH值的变化，从而确定该候选激动剂是否有效。

目前，通过GLP-1(7-36)酰胺受体来抑制活性的胰高糖素样肽激动剂已经公开[参见欧洲专利EP 0708179A2；Hjorth等人，J.Biol.Chem.，269：30121页，(1994)；Siegel等人，Amer.Diabetes Assoc.57^th Scintific Sesion，波士顿，(1997)；Hareter等人，Amer.DiabetesAssoc.57^th Scintific Sesion，波士顿，(1997)；Adelhorst等人，J.Biol.Chem.，269：6275页，(1994)；Deacon等人，16^th InternationalDiabetes Federation Congress Abstracts，DiabetologiaSupplement，(1997)；Irwin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94：7914页，(1997)；Mojosov，J.Peptide Protein Res.，40：333页，(1992)；Góke和Byrne，Diabetic Medicine，13：854页，(1996)]。最近公开的有Black Widow GLP-1和Ser²GLP-1[参见Holz和Hakner，Comp.Biochem.Physiol.，B部121：177页，(1998)和Ritzel等人，J.Endocrinol，159：93页，(1998)]。

GLP-1分子也包括由表达本文所限定的具有生物活性的GLP-1变异型的聚核苷酸编码的肽。另外，本发明中所包括的GLP-1分子还为一些与GLP-1(7-36)酰胺相比，含有一个或多个氨基酸取代、插入或缺失的肽。在一实施例中，取代、缺失或插入的数目等于或少于30个氨基酸、等于或少于25个氨基酸、等于或少于20个氨基酸、等于或少于15个氨基酸、等于或少于10个氨基酸、等于或少于5个氨基酸或这些数字之间的任何一个整数。此外，本发明中的取代包括一个或多个保守性取代。保守性取代表示以另一个生物活性相似的残基代替一氨基酸残基。保守性取代的例子包括以一个疏水残基，如异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或蛋氨酸，取代另一个疏水残基，或以一个极性残基取代另一个极性残基，如精氨酸取代赖氨酸，谷氨酸取代天冬氨酸，或谷酰胺取代天冬酰胺等。下表列出一些保守性氨基酸取代，但不仅限于这些氨基酸取代。

原有残基	典型取代
原有残基	典型取代	ALAARGASNASPCYSGLNGLUGLYHISILELEULYSMETPHESERTHRTRPTYRVALPRO	SER，THRLYSHIS，SERGLU，ASNSERASN，HISASP，GLUALA，SERASN，GLNLEU，VAL，THRILE，VALARG，GLN，GLU，THRLEU，ILE，VALLEU，TYRTHR，ALA，ASNSER，ALAARG，SERPHEILE，LEU，ALAALA

另外要注意，GLP-1肽变异型还包括上述通过化学衍生或替换的肽，例如，这些肽，其具有非天然氨基酸残基(如：牛磺酸残基、β-和γ-氨基酸残基以及D-氨基酸残基)、C末端功能团修饰，如：酰胺、酯，C-末端酮修饰，N末端功能团修饰，如：酰基化胺、席夫碱类，或环化，例如在氨基酸和焦谷氨酸中建立的环化。

本发明还包括一些肽序列，其大于50％，最好大于90％的肽序列与(1)SEQ ID NO：1，2，3，4，以及(2)与它们的平截序列一样。如本发明中所用，序列同一性指用本技术领域公知的标准方法在两个分子之间所作的比较。计算本发明序列同一性的优选方法是Smith-Waterman法，其中SEQ ID NO：1用作参考序列，以确定聚核苷酸同系物相对其长度的同一性百分比。虽然已经发现有些参数值比其它参数值在生物上产生更真确的结果，但选择用于匹配、失配以及插入或缺失的参数值时是随意的。Smith-Waterman法用的一组优选参数值是在最相似片段方法中提出，其中数值1用于一匹配残基，-1/3用于一失配残基(残基可以是单核苷酸或单氨基酸)[Waterman，Bull.Math.Biol.，46：474-500页，(1997)]。插入和缺失(indels)x加权为

x_k＝1+k/3

式中k是预定插入和缺失的残基数。

例如，有一个序列，除了18个氨基酸取代和3个氨基酸插入外，其余与SEQ ID NO：1的42个氨基酸残基序列相同，它的同一性百分比可由下式算出：

[(1×42匹配)-(α×18失配)-(1+3/3插入和缺失)]/42＝81％同一性

本发明的GLP-1分子还包括巨蜥毒液中的6种肽，这些肽与GLP-1同源。在表1，将它们的序列与GLP-1的序列进行了比较。

表1

位置1

a.HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(NH₂)

b.HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(NH₂)

c.DLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(NH₂)

d.HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(NH₂)

e.HSDATFTAEYSKLLAKLALQKYLESILGSSTSPRPPSS

f.HSDATFTAEYSKLLAKLALQKYLESILGSSTSPRPPS

g.HSDAIFTEEYSKLLAKLALQKYLASILGSRTSPPP(NH₂)

h.HSDAIFTQQYSKLLAKLALQKYLASILGSRTSPPP(NH₂)

a＝GLP-1(7-36)酰胺(SEQ ID NO：4)

b＝exendin 3(SEQ ID NO：7)

c＝exendin 4(9-39)酰胺(SEQ ID NO：8)

d＝exendin 4(SEQ ID NO：9)

e＝helospectin I(SEQ ID NO：10)

f＝helospectin II(SEQ ID NO：11)

g＝helodermin(SEQ ID NO：12)

h＝Q⁸，Q⁹ helodermin(SEQ ID NO：13)

其中肽(a，b，d，e，f和g)在1、7、11和18位是同源的。GLP-1和exendins在4、5、6、8、9、15、22、23、25、26和29位也同源。在2位，A、S和G结构相似。在3位，残基D和E(Asp和Glu)结构相似。在22和23位，F(Phe)和I(Ile)分别与Y(Tyr)和L(Leu)结构相似。同样，在26位，L和I结构相当。因此，在GLP-1的30个残基中，exendin 3和exendin 4在15个位置与之相同，在另5个位置上与之相当。基团结构明显改变的位置只有16、17、19、21、24、27、28和30。exendins在羧基末端还多9个残基。

本发明的肽类GLP-1分子可用固相化学肽合成法来制备。这些肽类也可用标准方法，例如Sambrook和Maniatis所述，用常规重组技术来制备。本文中所用重组表示基因衍生自重组(例如微生物或哺乳动物)表达系统，该系统经遗传修改而含有编码本发明GLP-1分子的聚核苷酸。

可用一些方法从重组细胞培养基中回收并纯化胰高糖素样肽1，这些方法包括但不限于：硫酸铵或乙醇沉淀、酸萃取、阴离子或阳离子交换色谱法、磷酸纤维色谱法、疏水作用色谱法、亲和性色谱法、羟基磷灰石色谱法和外源凝集素色谱法。而高效液相色谱法可用于最后的纯化步骤。

本发明的GLP-1分子肽类可以是天然纯产物，或化学合成产物，或靠重组技术由原核或真核宿主(例如培养或体内的细菌、酵母、高等植物、昆虫或哺乳动物细胞)产生。根据重组生产中所用的宿主，本发明的肽类通常是非糖基化的，但也可以是糖基化的。

本发明最好的GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺、GLP-1(7-37)和exendin-4。

市售或供应的合成GLP-1(7-36)酰胺的肽含量为87.1％以及肽纯度＞99％。按本领域已知的方法，肽可溶于I％人血清白蛋白，经0.2μm的硝酸纤维素过滤器过滤后，储存于-70℃[13]。样本测试致热原和细菌生长标准技术。

本发明人不受特定的机构约束，提出下列GLP-1运动效应是降低胃窦幽门十二指肠能动性的主要介体：i)一般情况下抑制胃窦波，(ii)具体地说是减少经幽门传播的胃窦波以及(iii)同时刺激局部时相和紧张幽门收缩。业已证明，狗具有相似的能动模式，其输注合成GLP-1则幽门流量减少并抑制不含热值的液体食物的胃排空[Anvari等人，Dig.Dis.Sci.，43：1133-40页，(1998)]。对人皮下注射剂量依赖性GLP-1会抑制胃窦和协同的胃窦十二指肠收缩，同时使混合液体食物的胃排空迟滞期延长[sCHIRRA等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)]。另外，对人研究得到的初步数据，表明采用与本发明同一剂量静脉输注GLP-1，近端胃会非常放松[Wank等人，Gastroenterol.，114：A1190页，(摘要)(1998)]。因此，外源性GLP-1使驱动力减小，并刺激胃液外流的制动机制，从而影响所有已知的确定胃排空的运动部位。

剂量单位的制备

本发明的另一个实施例提供一种用于抑制病人胃窦十二指肠运动性的剂量单位，其含有GLP-1及一药学上适合的赋形剂。剂量单位优选约在0.4至2.4pmol·kg^-1·min^-1范围之间。而剂量单位最好约在0.8至1.2pmol·kg^-1·min^-1范围之间。在本发明中，术语约定义为±10％。例如，剂量单位约在0.4至2.4pmol·kg^-1·min^-1范围之间，即是在0.196和2.64pmol·kg^-1·min^-1之间。

本发明的组合物可经口服或经肠道外施用作为系统或局部使用。此外，组合物也可以以静脉输注或皮下注射施用。为了便于医生或病人使用，组合物可制成含有一定量GLP-1分子的剂量单位形式，例如，GLP-1(7-36)酰胺可配合另一种抗能动性的药剂一起使用，或单独使用。这使一种或多种剂量有效抑制胃窦幽门十二指肠能动性。如本领域技术人员将了解到的一样，一有效治疗量的药剂涉及许多因素，包括病人的年龄和体重、病人的身体状况及其它因素。GLP-1分子优选以输注形式给药，而且剂量单位优选在0.4至2.4pmo1·kg^-1·min^-1之间。而剂量单位最好是在0.8至1.2pmo1·kg^-1·min^-1之间。

本发明的口服固态组合物包括片剂、制剂、粒剂等。在这样一种固态组合物中，一种或多种有效成分可与至少一惰性稀释剂混合，如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸铝镁等。按照通常情况，组合物可含有添加剂而非惰性稀释剂，例如，润滑剂，如硬脂酸镁；崩解剂，如纤维状葡萄糖酸钙；稳定剂，如环糊精，例如α，β-或γ-环糊精；酯化环糊精，如二甲基-α-、二甲基-β-、三甲基-β-、或羟丙基-β-环糊精；支链环糊精，如葡糖基-麦芽糖基-环糊精；甲酰化环糊精；含有硫、磷脂等的环糊精。当使用上述环糊精时，有时可形成含有环糊精的包络化合物以增加稳定性。此外，有时会用磷脂形成脂质体，也可增加稳定性。

用可溶于胃或肠的薄膜，如糖、明胶、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、邻苯二甲酸盐，涂覆片剂或丸剂。另外，它们也可形成含有可吸收物质的胶囊，如明胶。

口服液体组合物可含有药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆、酏剂以及常用的惰性稀释剂。除了惰性稀释剂外，这些组合物还含有辅助剂，如润滑剂和悬浮剂、甜味剂、香味剂、防腐剂、增溶剂、抗氧化剂等。具体的添加剂可从药物领域的任何一般书籍中选取。这些液体组合物可直接包在软胶囊内。

根据本发明，用于肠道外的溶液，例如栓剂、灌肠剂等，包括无菌水溶液或非水溶液、悬浮液、乳液、去污剂等。水溶液和悬浮液包括，例如，蒸馏水、生理盐水和林格注射液。

非水溶液和悬浮液包括，例如，丙二醇、聚乙二醇、脂肪酸甘油三酯、菜油，如橄榄油，醇，如乙醇，以及多乙氧基醚等。这些组合物可含有辅助剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、抗氧化剂等。

胃窦十二指肠能动性的抑制

本发明提供一种胃窦十二指肠能动性的抑制方法，其包括给病人施加一含有有效治疗量的GLP-1分子的组合物。在一优选实施例中，该GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。如本说明书所讨论那样，GLP-1分子可以以各种方式施用。而且，如本文所述那样，有很多病人用本发明的方法抑制胃窦十二指肠能动性而使病情得到改善。本文术语病人指包括人在内的任何哺乳动物。

术前以GLP-1用药

本发明也包括一种在内窥镜操作前用药的方法，其包括给病人施加一含有有效治疗量的GLP-1分子的组合物。术前用药的目的在于通过减少胃窦幽门十二指肠能动来减轻病人在内窥镜操作等过程中出现的不适。胃肠平滑肌的收缩或痉挛会造成一种往往必须克服的技术障碍，为的是使医务工作者能成功地进行内窥镜操作。术前用药包括在操作要开始之前、或期间施以GLP-1分子。操作要开始之前指操作要开始前或插入内窥镜前约1小时，而期间指在操作进行中的任何时间，包括在盲肠插管时以及取出内窥镜前或期间。要开始前还包括在操作开始前或插入内窥镜前约45、30、20、15、10、5分钟或1分钟施以GLP-1分子。术语内窥镜或镜指结肠镜、胃镜、肠镜、细胞检查镜或其它各种医学内窥镜。

术语内窥镜操作是指那些为了检查和治疗目的，利用导入胃肠道的仪器直接观察胃肠道的诊断过程。这样一些目的包括直接观察、活组织检查、进入胆总管、流体抽吸、清除异物、割去息肉和其它损伤。其中一个典型的内窥镜操作是食道胃-十二指肠镜检查，可检查食管腔、胃和十二指肠。另一个例子是内窥镜逆胆胰造影术(ERCP)，它可观察到胰腺管、胆总管和全部胆管束，包括胆囊。其它内窥镜操作的例子还有结肠镜检查、乙状结肠镜和钡灌肠检查。

胃肠病的治疗和预防

本发明的另一个目的是提供一种治疗和预防有需要病人的非感染性急性和慢性腹泻的方法，其包括给病人施加一含有有效治疗量的GLP-1分子的组合物。急性定义为短期内相对严重的病程，而慢性是指持续一段相当长的时间[Dorland，Medical Dictioary，第27版]。非感染性表示不是由传染病引起的，或不能通过感染而传播的[Dorland，Medical Dictioary，第27版]。

另一方面，本发明还包括提供一种治疗和预防有需要病人的手术后倾倒综合征(dumping syndrome)的方法，其包括给哺乳动物施加一有效治疗量的GLP-1分子。倾倒综合征是做完胃手术后发病的其中一个最常见诱因，在食道手术中迷走神经受损后病人可能会出现倾倒综合征(Vecht等人)。其症状是胃肠和血管都舒缩。胃肠病征包括餐后饱胀、痉挛腹痛、恶心、呕吐和严重腹泻。血管舒缩病征包括出汗、虚弱、头晕、面红、心悸、以及渴睡。具有严重倾倒病征的病人可限制他们的食物摄取量，以使病征减至最小，但结果会引致体重下降和营养不良。对于严重的病例，倾倒综合征的最后治疗手段是采用手术。

治疗严重倾倒综合征的药物包括Octreotide乙酸盐(Sandoz)，这是一种长期起作用的生长抑制素类似物，在治疗上已经取得一些成功。Octreotide在皮下施用，作用是减缓胃排空，抑制胰岛素的释放，并减少肠肽的分泌。然而，Octreotide会伴随多种并发病，包括注射位的疼痛、快速减敏性、医源性糖尿病、营养吸收不良和胆石病。

本发明的另一个实施例包括提供一种治疗和预防有需要病人的肠道激惹综合征(IBS)的方法，其包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

人们认为，肠道激惹综合征是一组不同型的疾病，其特点是慢性下胃肠病征，与可辨认的器官性病因无关。肠道激惹综合征的痉挛型被认为是较常见的，以腹痛和便秘为症状，其与慢性腹泻和餐后尿急有关。然而，如上所述，腹泻主导型也相当常见。

到目前为止，肠道激惹综合征的定义和诊断仍存在一些争议，但近年关于肠道激惹综合征的定义和其它功能或非器官性胃肠病及其诊断的医学标准已达成一些共识[Drossman等人，supra；Hasler等人，supra；Camilleri等人，supra；Drossman等人，supra；Thompson等人，Gastroenterol.Intl.，2：92-95页，(1989)；Manning等人，Br.Med.J.，2：653-654页，(1978)；和Thompson等人，supra]。根据一种称作Rome标准，凡患有不是由器官性病因引起，并且没有严重腹痛的慢性腹泻的病人被列为患上功能性腹泻，而那些患有不是由器官性病因引起，但伴有严重腹痛的慢性腹泻的病人被列为患上腹泻主导肠道激惹综合征[Drossman等人，supra；Hasler等人，supra；Camilleri等人，supra；Drossman等人，supra；Thompson等人，supra，2：92-95页，(1989)；Manning等人，supra]。

另一方面，本发明涉及一种治疗和预防有需要病人的与戒毒相关病征的方法，其包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。吸毒成瘾的人，如海洛因、美沙酮，在其戒毒急性期期间，往往会有临床严重腹泻。而停止吸食类鸦片的急性反应经常伴有稀粪和腹泻。由于病人的肠控制功能已丧失，所以在治疗时给他们服食镇静剂，会使病情变得更加严重。

幽门能动性的评估

本发明也涉及与刺激幽门能动性相关的治疗方法。用于描述幽门能动性的两个参数是：1)单独的幽门压力波(IPPW)，其定义为在相邻胃窦和十二指肠侧孔没有任何幅度相关波(±3秒)的情况下，由在最大一个套侧孔中具有或没有同步收缩的套所记录的收缩；2)幽门压(pyloric tone)。幽门压是通过从套记录的基础压中减去由套最近端的胃窦侧孔记录的基础压而得出的。基础压定义为排除收缩后的平均压力；每分钟测定一基础压，以便计算平均幽门压。

本发明还包括一种抑制有需要病人的幽门能动性的方法，其包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1拮抗物。如实施例所述那样，GLP-1刺激幽门能动性。将GLP-1与脂质对幽门能动性的典型生理刺激素的影响进行了比较。

比较含有十二指肠脂质和不含有十二指肠脂质的GLP-1对幽门的刺激，可对幽门能动调节机制有了新的认识。幽门压随十二指肠脂质和外源性GLP-1稳定地上升，而通过外源性GLP-1可使十二指肠脂质的紧张应答得到进一步的增强。GLP-1刺激幽门压，使其至少与十二指肠脂质一样强，两者的相互作用是相辅相成的。与此不同的是，GLP-1并不能使IPPW受激后达到与十二指肠脂质一样强，甚至超生理水平。因此，对十二指肠脂质的相性幽门应答受GLP-1释放的影响较小，而且GLP-1与脂质对幽门能动性的刺激机制不同。

实施例

以下实施例将说明本发明，然而，不应该认为本发明的范围就仅限于这些实施例。下列缩写用于以下实施例中：

IPPW 单独的幽门压力波

PP 胰多肽

CCK 缩胆囊肽

血浆荷尔蒙水平和GLP-1的测定

用葡萄糖氧化酶法[YSI 1500G；Schlag，Bergisch-Gladbach，Germany]以葡萄糖分析仪测定血糖的浓度，该方法的变异系数小于2％。用Abbott Imx微粒酶免疫试验法(Abbott Imx Microparticle EnzymeImmunoassay)测定血浆胰岛素，该方法的平均测定内变异系数为5％。用市售放射性免疫试验试剂盒[Biermann，Bad Nauheim，Germany andEuradiagnostica，The Netherlands(PP)]分析C肽、胰高血糖素和胰多肽(PP)的血浆免疫反应性。如以上所述[2]，用特异性多克隆抗体GA1178[affinity Research，Nottingham，UK]测定免疫反应的GLP-1。该试验的检测极限是0.25pmol/l。抗血清不会与葡萄糖依赖性胰岛素肽(GIP)、胰高血糖素、肠高血糖素、胃泌酸调节素或GLP-2起交叉反应。测出内和测定间的变异系数分别是3.4％和10.4％。所有结果以平均值±标准差(Mean±SEM)表示。每60分钟独立地分析血浆和能动性参数。幽门压为与基础压的差值。基础压是在实验开始之前基础期的平均幽门压。计算血浆荷尔蒙和胰高血糖素相对基础态的差值作相对基础态积分值(应答曲线下的面积；AUC)。在每次实验开始之前，取两个基础值的平均值定为血浆参数的基础水平。所有试样都先用Kolmogoroff-Smirnoff测试法测试其标准状态。通过采用静脉输注和十二指肠灌注作为变化参数的双向重复测定分析法分析每个参数在不同组实验之间的差异。当分析显示有差异时，就进行Student-Newman-Keuls多重比较试验(Student-Newman-Keulsmulticomparison)。如果P＜0.05，则认为差异显著。

实施例1 从病人身上取得的能动性记录和血样

共有11名身体健康的男性志愿者参加了本研究，年龄从23至28岁，而且都在理想体重的10％以内。他们没有一位正在服药或患有胃肠病征或系统性疾病。

所有研究都在通宵禁食后进行。两个实验之间至少隔一星期，而实验时受试者取半卧位进行。在肘前静脉插入一根留置导管用来静脉输注。在对侧手的背静脉逆行方向插入第二根导管以抽取动脉化的静脉血液[Schirra等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)]。

每次实验都要先进行至少30分钟的基础期，基础期的最后15分钟显示运动活性较低(每10分钟收缩小于5次)。在消化间期研究日，以2.5ml/min的速度向十二指肠下曲区域连续输注0.154M盐水。为了获得生理餐后和超生理血浆水平，在消化间期实验中，静脉输注盐水60分钟后，再分别静脉输注0.4和1.2pmol·kg^-1·min^-1的GLP-1各60分钟。在每次输注的前10分钟内，GLP-1的剂量增加一倍(即GLP-1分别为0.8和2.4pmol·kg^-1·min^-1)，以加快到达稳态的血浆水平。在餐后研究日，进行同样静脉输注的同时以2.5kcal/min的速度十二指肠内脂质灌注(2.5ml/min，Lipofundin MCT 10％，Braun Co.，Melsungen，Germany)。这种脂质制剂由50％中链三酸甘油酯和50％长链三酸甘油酯(LCT，大豆油)组成，在餐后实验中，停止静脉输注GLP-1后，继续灌注脂质以便再多测60分钟。

在实验的整个过程中，静脉输注开始前以及开始后每隔10分钟抽取血样。将血液收集在装有1000抑肽酶(每毫升血液含有的激态释放酶的抑制单位)的冰冻乙二胺四乙酸(DETA)试管内，并立即进行离心。血浆冻存在-20℃直至测试才取出。

实施例2 胃窦幽门十二指肠区的能动性记录

用九管腔十二指肠套/侧孔导管记录灌注压力(Dentsleev，SouthAustralia，Australia)。测压装置包括一4.5cm长的套感应器、两个胃窦侧孔(相距2cm)、以及三个十二指肠侧孔(相距2cm)，分别起于套的近端和远端。在套设置多两个相隔1.5cm的侧孔。在距套感应器12cm处设多一个管腔用于十二指肠灌注。

如以前的研究所述那样[Schirra等人，J.Clin Invest，97：92-103页，(1996)]，每次实验开始前用荧光镜检查具有跨幽门套阵列的十二指肠探针的正确位置，并通过测定远端胃窦口和近端十二指肠口之间的跨粘膜电势差来监控每次研究的整个过程。电势差至少有-15毫伏，才表示导管放在幽门的正确位置。

用柔性低的气动液压泵以0.3ml/min的速度向能动性通道灌注[ArndorferMedical Specialists，Greendale，WI]。通过外换能器测定压力。同时在多道图谱系统的屏幕上记录数据(PC Polygraph，Synectics Medical，Stockholm，Sweden)，并将数据储存在个人计算机的存储器中。在8Hz下采样数据并使其数字化，然后以2倍数字校平。

实施例3 静脉输注GLP-1增加血浆GLP-1的水平

在实验中，静脉输注剂量依赖性GLP-1可增加血浆GLP-1的水平，输注开始后的20分钟内，十二指肠盐水或脂质达到恒定的血浆水平(见图1，表3)。灌注十二指肠盐水时，稳定态血浆水平为6.2±0.6pmol/l(低剂量GLP-1)和13.1±0.9pmol/l(高剂量GLP-1)，而灌注十二指肠脂质时，稳定态血浆水平为7.1±0.6pmol/l(低剂量GLP-1)和14.4±0.9pmol/l(高剂量GLP-1)。与十二指肠盐水灌注(2.4±0.3pmol/l对1.4±0.2pmol/l，P＜0.05)相比，十二指肠脂质慢慢但会显著增加血浆GLP-1的水平。这种差异在输注两种剂量的外源性GLP-1也一样。在连续灌注脂质期间，停止输注GLP-1后，血浆GLP-1立刻下降，并逐渐回到灌注前的数值。

表1 十二指肠内灌注盐水或脂质(2.5kcal/min或2.5ml/min)期间，生理剂量(低剂量，0.4pmol·kg^-1·min^-1)和超生理剂量(高剂量，1.2pmol·kg^-1·min^-1)的GLP-1对血糖和GLP-1、胰岛素、胰高血糖素以及胰多肽的血浆免疫反应性的影响

GLP-1 血糖胰岛素胰高血糖素胰多肽

(pmol/l·60 (mmol/l·60 (mU/l·60 (pg/ml·60分 (pg/ml·60分

分钟) 分钟) 分钟) 钟) 钟)

十二指肠内盐水

盐水iv. -0.8±1.0 0.3±0.1 1.5±1.7 22.4±16.2 10.8±29.7

GLP-1iv.：低剂量 25.2±2.6* -2.3±0.3* 11.3±2.4* -59.0±37.1* -90.5±32.7*

GLP-1iv.：高剂量 67.4±4.0*≠ -2.5±0.4* 11.9±5.1* -68.6±28.9* -128.9±33.2*

十二指肠内脂质

盐水iv. 7.5±1.7 -1.2±0.3 25.5±4.4 145.9±21.6 298.5±66.9

GLP-1iv.：低剂量 33.8±2.9* -4.7±0.5* 24.7±4.8 99.7±25.1* 7.7±55.4*

GLP-1iv.：高剂量 75.2±3.9*≠ -4.5±0.7* 31.4±8.4 48.0±33.8*≠ -104.2±71.1*≠

盐水iv.：恢复 17.1±3.1*≠э -0.8±0.6≠э 18.3±2.7 189.0±44.7≠э 24.4±93.0≠э

每60分钟输注期间ACU相对基础值的平均值±SEM。N＝11。对同一次十二指肠内灌注：*表示与盐水iv.之间的P＜0.05，≠表示与低剂量GLP-1之间的P＜0.05，

表示与高剂量GLP-1之间的P＜0.05。对不同的十二指肠内灌注：表示与同一次静脉输注/十二指肠内盐水之间的P＜0.05。

实施例4 GLP-1抑制胃窦幽门十二指肠能动性

灌注十二指肠盐水和脂质期间，记录时间分别在95.9±1.6％和92.5±2.0％时跨粘膜电势差指示探针处于幽门的正确位置。

在消化间期实验中，十二指肠盐水灌注期间，两种剂量的GLP-1均可显著抑制胃窦和十二指肠收缩的次数、幅度、以及能动性指数(见图2A，表1)。低剂量GLP-1开始后2分钟，即能抑制胃窦十二指肠能动性。在20分钟内，低剂量GLP-1几乎完全抑制胃窦十二指肠能动性。即使完全停止输注低剂量GLP-1，胃窦波仍会经幽门传播到相距分别为4.5cm和6.5cm的十二指肠(见表2)。

表2 十二指肠内灌注盐水或脂质(2.5kcal/min或2.5ml/min)期间，生理剂量(低剂量，0.4pmol·kg^-1·min^-1)和超生理剂量(高剂量，1.2pmol·kg^-1·min^-1)的GLP-1对胃窦和十二指肠能动性的影响

胃窦能动性能动性指数幅度十二指肠能动能动性指数幅度

收缩性收缩

(次数/60分 (mmHg*s/60 (mmHg) (次数/60分 (mmHg*s/60分 (mmHg)

钟) 分钟) 钟) 钟)

十二指肠内盐水

盐水iv. 69.3±9.9 1860 1±5758 63.0±7.5 183.7±25.1 19502±4321 39.5±3.6

GLP-1iv.：低剂量 12.6±2.8* 1478±564* 31.1±3.1* 36.0±14.7* 3447±1624* 25.0±2.5*

GLP-1iv.：高剂量 9.6±2.8*≠ 957±322* 21.1±3.1*≠ 16.6±3.9* 1119±226* 17.5±1.9*≠

十二指肠内脂质

盐水iv. 24.3±4.5# 2749±695 32.5±3.1 85.4±16.4# 9545±2891# 32.9±3.1#

GLP-1iv.：低剂量 12.1±4.1* 880±351* 23.6±3.1* 29.5±5.8* 2776±890* 26.0±3.3*

GLP-1iv.：高剂量 9.2±2.9* 628±249* 23.0±2.7 16.6±5.9*≠ 1174±499*# 19.2±3.1*≠

盐水iv.：恢复 28.7±7.5≠э3147±785≠э 34.7±3.8≠э 69.6±21.2≠э8732±3574≠э36.6±4.5≠э

每60分钟输注期间实际数值的平均值±SEM。收缩和能动性指数的数值分别表示两个胃窦侧孔和三个十二指肠侧孔的总和。N＝1。对同一次十二指肠内灌注：*表示与盐水iv.之间的P＜0.05，≠表示与低剂量GLP-1之间的P＜0.05，表示与高剂量GLP-1之间的P＜0.05。对不同的十二指肠内灌注：表示与盐水iv./十二指肠内盐水之间的P＜0.05，#表示与低剂量GLP-1/十二指肠内盐水之间的P＜0.05。

表3 十二指肠内灌注盐水或脂质(2.5kcal/min或2.5ml/min)期间，生理剂量(低剂量，0.4pmol·kg^-1·min^-1)和超生理剂量(高剂量，1.2pmol·kg^-1·min^-1)的GLP-1对幽门能动性以及胃窦幽门十二指肠传播波的影响

幽门能动性IPPW 幽门压胃窦幽门十二指肠传播收

缩

(次数/10分钟) (mmHg) (次数/60分钟)

十二指肠内盐水

盐水iv. 1.6±0.3 0.2±0.5 9.8±1.3

GLP-1iv.：低剂量 10.1±1.9* 5.3±0.9* 0.0*

GLP-1iv.：高剂量 8.6±1/3* 7.3±1.5*≠ 0.0*

十二指肠内脂质

盐水iv. 14.7±1.5# 3.1±0.4# -

GLP-1iv.：低剂量 15.7±2.5 7.4±1.0*# -

GLP-1iv.：高剂量 15.5±2.1 8.6±1.0* -

盐水iv.：恢复 6.2±1.1*≠э 5.1±0.8*≠э -

每60分钟输注期间实际数值(IPPW)和与基础值之差(压力)的平均值±SEM。N＝11。对同一次十二指肠内灌注：*表示与盐水iv.之间的P＜0.05，≠表示与低剂量GLP-1之间的P＜0.05，表示与高剂量GLP-1之间的P＜0.05。对不同的十二指肠内灌注：表示与盐水iv./十二指肠内盐水之间的P＜0.05，#表示与低剂量GLP-1/十二指肠内盐水之间的P＜0.05。IPPW：单独的幽门压力波。

与十二脂肠盐水相比，十二指肠脂质抑制了胃窦和十二指肠的收缩性。与十二指肠脂质的背景对比，外源性剂量依赖性GLP-l将胃窦和十二指肠收缩的次数、幅度、以及能动性指数减到与消化间期态相当的剩余水平(见图2B，表1)。停止输注GLP-1，胃窦十二指肠能动性立即增加，并恢复到输注前的活性。在所有实验中，输注GLP-1时收缩持续的时间保持不变。

实施例5 GLP-1刺激幽门能动性

在消化间期状态中，幽门压随外源性GLP-1剂量的增加而增大(见图3B，表2)。即使输注低剂量GLP-1，这种影响在GLP-1输注开始后10分钟内已相当明显，而在20分钟内就完全确立了。与十二指肠盐水相比，幽门压随十二指肠脂质稳定地上升，加入GLP-1可使幽门压进一步增强(见图3B，表2)。停止输注GLP-1后，幽门压稳定地下降，直降至血浆水平。在实验的最后30分钟期间，幽门压与未输注GLP-1的前60分钟很不同，这表明能动性已经完全恢复(实验最后30分钟的3.9±0.7mmHg对前60分钟期间的3.1±0.4mmHg，P＝0.29)。

输注GLP-1可使IPPW即时显著增大(见图3A，表2)。然而，与幽门压应答不同，IPPW的增大与剂量无关，而且快速上升后会有明显下降。后一种现象也会出现在仅有脂质和以十二指肠脂质为背景的GLP-1两种情况。十二指肠脂质比仅有GLP-1对IPPW的刺激作用更明显，此外，十二指肠脂质和外源性GLP-1不是以辅助方式起作用。与未输注GLP-I的前60分钟的测量结果相比，停止输注GLP-1，IPPW即大幅下降。

GLP-1很快就能引发处于消化间期态的大部分志愿者出现十二指肠类III相。以前的研究已经证明了应答多种刺激物的十二指肠类III相的活性，如十二指肠输注右旋糖[Heddle等人，Gut，29：19-57页，(1988)]和脂质[Heddle等人，Am.J.Physiol.，254：G671-9页，(1988)]，静脉输注β-内腓肽[Gamilleri等人，Am.J.Physiol.，251：G147-54页，(1986)]，由于寒冷而引起的应激期间[Fone等人，Gastroenterol.，98：1155-61页，(1990)，疼痛[Thompson等人，Gastroenterol.，83：1200-6页，(1982)]，或迷路刺激[Stanghellini等人，Gastroenterol.，85：83-91页，(1983)]，以及急性高血糖征[Fraser等人，Gut，32：475-8页，(1991)]。有趣的是，在本研究中，十二指肠内脂质也刺激十二指肠类III相的出现。但输注GLP-1的同时灌注脂质，在11名受试者中只有两例出现十二指肠III相。所有十二指肠类III相的出现都是由GLP-1或十二指肠脂质刺激幽门所引起的。因此，十二指肠的初始时相和瞬时刺激可能来源于幽门，尽管它的功能性意义还未能得到证实，但它可能表示由于GLP-1或脂质对幽门肌肉的强烈刺激而会产生一个不特定的反应。在消化间期态中输注两种剂量GLP-1，输注GLP-1 10分钟后几乎同时出现十二指肠III相和引发刺激幽门时相和幽门压(见图4)。输注低剂量GLP-1后，11名志愿者中有7人显示十二指肠III相，而输注高剂量GLP-1后，有5人显示十二指肠III相。输注十二指肠内脂质后，11名志愿者中有7人立刻出现幽门刺激和十二指肠III相。图5所示为输注GLP-1时所观察的胃窦幽门十二指肠能动的典型方式。

实施例6 GLP-1降低血糖

在消化间期实验中，基础血糖的水平为4.3±0.1mmol/l，输注两种剂量的GLP-1该水平会显著下降(见图5A，表3)。与十二指肠盐水灌注相比，血糖的水平随十二指肠脂质下降得较小。这种下降在输注两种剂量的GLP-1后更加明显，停止输注GLP-1后，血糖的水平又会显著上升。血糖在输注低剂量和高剂量GLP-120分钟时达到最低水平，分别为3.58±0.12mmol/l和3.64±0.14mmol/l。然而，这些最低值并不表示低血糖。

胰岛素的基础血浆水平在十二指肠盐水或脂质输注前的平均值分别为6.0±0.7mU/l和6.1±0.7mU/l。两种剂量的GLP-1均可导致胰岛素开始时短暂上升，然后又会下降(见图5C)。与十二指肠盐水相比，十二指肠脂质使血浆胰岛素产生较小但上升显著，这种现象在每次研究的整个过程都是这样(见表3)。

在十二指肠盐水或脂质实验中，胰高血糖素的基础水平分别为91.5±8.8pg/ml和88.2±8.6pg/ml(差别不明显)。输注十二指肠盐水或脂质时，GLP-1使血浆胰高血糖素显著减少，而这种减少与剂量有关(见图5B)。在脂质实验中，停止输注GLP-1，血浆胰高血糖素立刻上升。与盐水灌注相比，十二指肠脂质使胰高血糖素上升幅度更大，在接下来的整个实验过程中都维持高水平(见表3)。

实验7 剂量依赖性GLP-1降低胰多肽的水平

胰多肽(PP)是一种内分泌胰腺激素，其抑制受迷走神经胆碱能的强烈控制。经口腔进餐后在皮下和静脉输注GLP-1可抑制人体内的胰多肽[Schirra等人，J.Endocrinol.，156：177-86页，(1998)；Schirra等人，Proc.Assoc.Am.Physicians，109：84-97页，(1997)；Dupre等人，Diabetes，44：626-30页，(1995)]。刺激肠道释放胰多肽要求通过十二指肠输送营养素刺激肠胰胆碱能反射[Schwartz，Gastroenterol.，85：1411-25页，(1983)]，在延缓胃排空期间，十二指肠营养量减少解释了这种胰多肽应答。从发明者整理的结果发现，由脂质灌注引发而直接释放到十二指肠的胰多肽随剂量依赖性GLP-1输注而减少，停止用GLP治疗后又立刻恢复到原来的水平。而且，在消化间期研究中，胰多肽大幅下降至低于基础水平。所以，本发明的发明者发现，GLP-1抑制传出迷走神经胆碱能活性，从而减少胰多肽的释放并通过中央通道至少部分有助抑制胃窦十二指肠能动性。GLP-1的受体在室周器官(circumventricular organs)内，如穹窿下器(subfornical organ)、孤束核(the nucleus of the solitary tract)和最后区(the area postrema)[G ke等人，Eur.J.Neurosci，7：2294-2300页，(1995)]。另外，最近对老鼠的研究显示，由GLP-1诱发抑制胃排空涉及对辣椒素敏感的通道，这表明抑制作用与迷走传入神经相互作用[Imeryuz等人，Am.J.Physiol.，273：G920-7页，(1997)]。看来GLP-1不可能直接作用在胰多肽细胞或通过生长抑制素产生旁分泌影响，这是因为GLP-1引发刺激，而不是抑制单独的人胰岛释放胰多肽[Hehmann等人，Pancreas，11：196-200页，(1995)]。在十二指肠盐水或脂质灌注开始前，胰多肽的基础水平分别为64.3±8.6pg/ml和64.3±8.6pg/ml(P＝0.32)。与盐水灌注相比，在十二指肠脂质灌注期间胰多肽显著上升(见图5D，表3)。不管是否有十二指肠脂质，静脉输注剂量依赖性GLP-1均可减少胰多肽，另外，在实验中灌注十二指肠盐水使胰多肽降至远远低于基础水平。在十二指肠脂质灌注期间，停止输注GLP-1后，在实验中可观察到胰多肽水平立刻上升，这表明胰多肽水平得到完全恢复。

Claims

1.一种抑制有需要病人的胃窦幽门十二指肠能动性的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

2.如权利要求1所述的抑制胃窦幽门十二指肠能动性的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

3.一种用于抑制病人胃窦幽门十二指肠能动性的剂量单位，其特征在于：所述剂量单位包括GLP-1和一药学上适合的赋形剂。

4.如权利要求3所述的剂量单位，其特征在于：所述GLP-1分子的剂量约为0.4～2.4pmol·kg^-1·min^-1。

5.如权利要求4所述的剂量单位，其特征在于：所述GLP-1分子的剂量约为0.8～1.2pmol·kg^-1·min^-1。

6.如权利要求3所述的剂量单位，其特征在于：所述药学上适合的赋形剂可经口服、肠道外或皮下施用。

7.如权利要求3所述的剂量单位，其特征在于：所述药学上适合的赋形剂可经静脉输注。

8.一种在内窥镜操作前用药的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

9.如权利要求8所述的在内窥镜操作前用药的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

10.一种治疗或预防有需要病人的非感染性急性或慢性腹泻的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

11.如权利要求10所述的治疗或预防非感染性急性和慢性腹泻的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

12.一种治疗或预防有需要病人的手术后倾倒综合征的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

13.如权利要求12所述的治疗或预防手术后倾倒综合征的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

14.一种治疗或预防有需要病人的肠道激惹综合征的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

15.如权利要求14所述的治疗或预防肠道激惹综合征的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

16.一种治疗或预防有需要病人的与戒毒相关的病征的方法，其特征在于：所述方法包括给病人施加一有效治疗量的GLP-1分子。

17.如权利要求16所述的治疗或预防与戒毒相关的病征的方法，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

18.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述GLP-1分子可口服或经肠道外施用。

19.一种GLP-1分子用于制备抑制胃窦幽门十二指肠能动性、在内窥镜操作前用药、治疗或预防非感染性急性或慢性腹泻、治疗或预防手术后倾倒综合征、治疗或预防肠道激惹综合征、治疗或预防与戒毒相关的病征的药剂中的用途。

20.如权利要求19所述的用途，其特征在于：所述GLP-1分子是GLP-1(7-36)酰胺。

21.如权利要求19或20所述的用途，其特征在于：所述药剂可口服或经肠道外施用。