CN1457365A - L－苏氨酸的生产方法 - Google Patents

L－苏氨酸的生产方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1457365A
CN1457365A CN02800304A CN02800304A CN1457365A CN 1457365 A CN1457365 A CN 1457365A CN 02800304 A CN02800304 A CN 02800304A CN 02800304 A CN02800304 A CN 02800304A CN 1457365 A CN1457365 A CN 1457365A
Authority
CN
China
Prior art keywords
threonine
gene
microorganism
ppc
operon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN02800304A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1252278C (zh
Inventor
鲁甲秀
金永哲
朴宰镛
金大哲
李珍镐
玉承汉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
CJ Corp
Original Assignee
First Sugar Refining Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Sugar Refining Corp filed Critical First Sugar Refining Corp
Publication of CN1457365A publication Critical patent/CN1457365A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1252278C publication Critical patent/CN1252278C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种使用微生物生产L－苏氨酸的方法。在该方法中，微生物固有的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因和苏氨酸操纵子被保留，额外的一个或多个拷贝的每种ppc基因和苏氨酸操纵子被整合到微生物染色体DNA的特殊位点。因此，微生物染色体DNA中包含了两个或两个以上的ppc基因和苏氨酸操纵子，从而提高了ppc基因和某些基因的表达，其中ppc基因编码一种能将磷酸烯醇丙酮酸转化为苏氨酸生物合成前体——草酰乙酸的酶；所述的某些基因能够编码参与从草酰乙酸到苏氨酸生物合成路径的酶，包括thrA(天冬氨酸激酶－高丝氨酸脱氢酶)，thrB(高丝氨酸激酶)，和thrC(苏氨酸合成酶)，因此显著提高了L－苏氨酸的生产能力。

Description

L-苏氨酸的生产方法
发明领域
本发明涉及有微生物参与的L-苏氨酸的生产。更具体而言，本发明涉及一种生产L-苏氨酸的高产方法，在该方法中，将额外的一个或多个拷贝的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因和苏氨酸操纵子插入到微生物染色体DNA的特殊位点，同时保留微生物固有的ppc基因和苏氨酸操纵子，以提高ppc基因和某些基因的表达，其中ppc基因编码能够将磷酸烯醇丙酮酸转化为苏氨酸生物合成的前体——草酰乙酸的酶；所述的某些基因能够编码参与从草酰乙酸到苏氨酸生物合成路径的酶，例如天冬氨酸激酶-高丝氨酸脱氢酶(thrA)，高丝氨酸激酶(thrB)，和苏氨酸合成酶(thrC)。
背景技术
L-苏氨酸作为一种必需氨基酸，被广泛用作动物草料和食物的添加剂，也被广泛用作医药用途的流体和合成材料。L-苏氨酸通过发酵来源于野生型大肠杆菌、棒状杆菌、沙雷氏菌属、Providencia的合成突变体生产。已知这些变异菌株含有氨基酸类似物，抗药突变体，合成的抗药突变体，这些物质导致所述的菌株对二氨基庚二酸、甲硫氨酸、赖氨酸、或异亮氨酸营养缺陷(日本公开专利申请号.hei2-219582，Appl.，Microbiolo Biotechnol.，(应用微生物和生物技术)29，550-553(1988)，和韩国专利公开号No.92-8365)。
增加特定基因表达水平的常用方法是使用能够为微生物提供更多拷贝数的质粒，以便增加微生物中的基因数(Sambrook等.，分子克隆，第二版，1989，1.3-1.5)。将一种目的基因整合入质粒，然后用重组质粒转化宿主微生物，导致宿主微生物体内的基因数随着质粒拷贝数目的增加而增加。在美国专利No.5,538,873中报道了用此类方法提高苏氨酸产率而获得部分成功。然而，使用这类重组质粒过表达一种特定基因的大多数技术对宿主微生物是不理想的，产生质粒不稳定的问题，以致于在重组菌株培养过程中质粒丢失。
为了解决这一问题，报道过在培养基中添加抗生素或使用一种表达调节质粒的方法(Sambrook等.，分子克隆，第二版，1989，1.5-1.6-1.9-1.11)。在使用表达调节质粒来生产特定产物时，细胞培养要在生长期的非表达条件下进行，为的是降低宿主微生物的负荷，在微生物完全生长以后诱导暂时表达。但是，大多数表达调节质粒指向蛋白合成。生产初级代谢产物与微生物的生长联系紧密，除非目标基因在生长期表达，否则增加初级代谢产物的产量非常困难。作为一种初级代谢产物的苏氨酸的生产，就是这样。
为了弥补这一缺点，将一种特定的苏氨酸生物合成基因插入到染色体DNA中来生产苏氨酸(美国专利号5,939,307)。然而，这种方法用一种可诱导的启动子-替代基因来替换染色体基因，很难预料苏氨酸操纵子基因的表达会有显著提高。
因此，与常规替代方法不同，本发明的发明者将一种额外的ppc基因和苏氨酸操纵子插入到微生物染色体DNA的特定位点(lacZ基因)，而保留了宿主微生物的原有染色体基因，结果发现，固有的染色体基因以及插入的ppc基因和操纵子产生了双重效果。大多数目前应用于增加苏氨酸产量的遗传工程技术，都集中于由草酰乙酸开始的生物合成途径。但是，本发明还涉及ppc，它是作用于在先步骤中的草酰乙酸诱导酶，以及苏氨酸生物合成酶，它有目的地引导碳原子从磷酸烯醇丙酮酸流向草酰乙酸合成途径。如果必要，本发明还可以插入2个和更多的基因拷贝。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的一个目的是提供一种高产L-苏氨酸的生产方法，此方法消除了由携带重组质粒的菌株引起的质粒不稳定和微生物生长抑制的问题，同时提高了磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因和苏氨酸操纵子的表达。
本发明的目的是通过下面的方法实现的：使用微生物来生产L-苏氨酸，微生物固有的ppc基因和苏氨酸操纵子被保留，一个或多个拷贝的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因和一个或多个拷贝的苏氨酸操纵子被额外地整合到微生物染色体DNA的特殊位点。
按照本发明，通过在染色体DNA中插入两个或更多拷贝的ppc基因和苏氨酸操纵子，使编码下述酶的基因的表达水平提高，所述酶是：将磷酸烯醇丙酮酸转化为苏氨酸生物合成的前体——草酰乙酸的酶，以及参与从草酰乙酸到苏氨酸生物合成路径的酶例如天冬氨酸激酶-高丝氨酸脱氢酶(thrA)，高丝氨酸激酶(thrB)，和苏氨酸合成酶(thrC)。
按照本发明，可以使用能够生产L-苏氨酸的任何微生物，包括大肠杆菌、棒状杆菌、沙雷氏菌属、和Providencia，但更优选大肠杆菌。
额外插入到微生物中的ppc基因和苏氨酸操纵子，优选来源于对苏氨酸类似物、赖氨酸类似物、异亮氨酸类似物、和甲硫氨酸类似物有抗性的微生物(人工突变体)。
按照本发明，ppc基因和苏氨酸操纵子可以额外地插入到染色体DNA的任何位点，除了原始苏氨酸操纵子，但优选插入到lacZ基因位点。
在本发明的L-苏氨酸生产方法中，优选将从生产L-苏氨酸的大肠杆菌菌株TF4076(KFCC10718)的染色体中通过聚合酶链式反应(PCR)获得的ppc基因，和从相同的染色体中通过克隆获得的苏氨酸操纵子，插入到宿主大肠杆菌菌株TF4076的染色体中。1、苏氨酸操纵子和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因
所使用的苏氨酸操纵子和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因从TF4075(保藏号：KFCC10718，韩国专利申请号90-22965)的染色体中通过克隆得到。该菌株对甲硫氨酸营养缺陷，对苏氨酸类似物(AHV：α-氨基-β-羟基戊酸)，赖氨酸类似物(AEC：S-(2-氨乙基)-L-半胱氨酸)，异亮氨酸类似物(α-氨基丁酸)和甲硫氨酸类似物(乙硫氨酸)具有抗性。2、整合载体
使用pBRINT-TsGm，一种用于染色体整合的质粒载体(Sylvie LeBeatriz等.，1998，pBRINT-Ts：一种有温度敏感复制子的质粒家族，为染色体整合入大肠杆菌的lacZ基因而设计，基因，223，pp213-219)。该载体有温度敏感性；当在37℃培养条件下，该质粒将质粒的克隆基因整合到染色体DNA的lacZ基因位点，而当培养温度升高到44℃时，原生质中的剩余质粒丢失。3、重组载体
将ppc基因和苏氨酸操纵子克隆到pBRINT-TsGm的BamH I和EcoR I位点以构建重组质粒载体pGmTN-PPC，其中ppc基因通过聚合酶链式反应(PCR)从TF4076的染色体中获得，苏氨酸操纵子来源于克隆有苏氨酸操纵子的载体pAT94(韩国专利申请号92-24732)。菌株TF4076用重组质粒载体转化，随后在37℃培养，以诱导克隆的ppc基因和苏氨酸操纵子整合到染色体DNA的lacZ基因位点。而后，继续在44℃培养，以去除宿主菌株中的剩余质粒。4、筛查方法
通过视觉筛查重组菌株，集落的特征如下：对庆大霉素有抗性，对羧苄青霉素敏感，在含有X-gal和IPTG的固体培养基里显白色，不显蓝色。这种筛查方法的原理基于：ppc基因和苏氨酸操纵子整合入染色体DNA的lacZ基因，使lacZ基因失活，从而丢失了分解发色团X-gal的能力。
比较这些挑选的重组菌株与宿主菌株的苏氨酸生产能力。结果，宿主菌株在48小时内产生20克/升的苏氨酸，而pGmTN-PPC(保藏号：KCCM-10236)，一种染色体DNA中整合有ppc基因和苏氨酸操纵子的重组菌株，显示了最高苏氨酸生产能力27.0克/升，产量大约是35％(见实施例4)。通过在5升发酵罐中发酵，pGmTN-PPC菌株生产了102克/升的苏氨酸，比宿主菌株的产量高35.4％(见实施例5)。
附图简述
图1描述了克隆磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因的方法；和
图2描述了克隆有ppc基因和苏氨酸操纵子的重组质粒pGmTN-PPC的构建。
实施本发明的最佳方式
通过以下实施例更详细地描述本发明。以下的实施例是用来举例的目的，并不是为了限制本发明的范围。实施例1：磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因的克隆
克隆磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(ppc)基因的方法描述于图1中。ppc基因是从苏氨酸产生菌株-TF4076中获得的。分离染色体DNA，用限制酶Sal I消化，将其电泳以选择性地分离4-5Kb DNA片段。将分离的DNA片断作为模板，使用引物1(5’-aggaattcttccgcagcatttgacgtcac-3’)和引物2(5’-aggaagcttttagccggtattacgcatacc-3’)，扩增ppc基因。用EcoRI和HindIII消化扩增产物，而后再次将其电泳以最终分离一种2.8Kb的ppc基因片段。用来一种自墨西哥国立大学的7.6Kb的pBRINT-TsGm(一种pBRINT-Ts载体)来克隆(Sylvie Le Beatriz等.，1998，pBRINT-Ts：一种有温度敏感复制子的质粒家族，为染色体整合入大肠杆菌的lacZ基因而设计，基因，223，pp213-219)。用相同的限制酶EcoR I和HindIII双消化pBRINT-TsGm，用T4 DNA连接酶将其与分离的ppc基因片段连接。通过电穿孔，用连接的DNA转化大肠杆菌菌株DH5α，在含有抗生素：50毫克/升羧苄青霉素和5毫克/升庆大霉素的LB固体培养基(酵母抽提物5克/升；细菌用胰蛋白胨10克/升、氯化钠10克/升；细菌培养用琼脂1.7％；pH7.0)上培养。接下来，收集单集落。将单集落在含有相同抗生素的LB培养基上培养以从生长菌株中分离质粒。首先鉴别每个质粒的大小并且用限制酶EcoR I和HindIII双消化，以分离出2.8Kb的DNA片段。鉴别所得到的DNA片段，由此完成含有ppc基因的重组质粒pGmPPC(10.7Kb)的构建。实施例2：含有苏氨酸操纵子和ppc基因的染色体DNA整合载体
用TF4076的染色体DNA克隆构建的重组质粒载体pAT94(韩国专利申请号：92-24732)，被用于苏氨酸操纵子，实施例1中的重组质粒pGmPPC被用于ppc基因。来自墨西哥国立大学的pBRINT-TsGm(一种pBRINT-Ts载体)被用作染色体DNA整合载体(Sylvie Le Beatriz等.，1998，pBRINT-Ts：一种有温度敏感复制子的质粒家族，为染色体整合入大肠杆菌的lacZ基因而设计.，基因.，pp213-219)。图2阐述了重组质粒的构建方法。用限制酶HindIII和BamHI双消化pAT94。用电泳从双消化物中分离出6.4千碱基对的苏氨酸操纵子DNA片段。用HindIII和EcoRI双消化pGmPPC以分离出2.8千碱基对的ppc基因片断。用EcoRI和BamHI消化pBRINT-TsGm质粒载体，用同样方法分离完全消化的DNA片段。将得到的质粒载体消化产物、分离的苏氨酸操纵子DNA片段、和ppc基因片断混和，用T4 DNA连接酶连接。通过电穿孔用连接产物转化大肠杆菌菌株DH5α，在含有抗生素：50毫克/升羧苄青霉素、5毫克/升庆大霉素的LB固体培养基(酵母抽提物5克/升；细菌用胰蛋白胨10克/升、氯化钠10克/升；细菌培养用琼脂1.7％；pH7.0)上培养。接下来，收集单集落。将单集落在含有相同抗生素的LB培养基上培养以从生长菌株中分离质粒。首先鉴别每个质粒的大小并且用限制酶EcoR I和HindIII双消化以分离出9.2和7.9千碱基对的DNA片段。鉴别所得到的DNA片段，由此完成对含有苏氨酸操纵子和ppc基因的重组质粒pGmTN-PPC(17.1千碱基对)的构建。实施例3：整合有染色体重组质粒菌株的筛查
用从大肠杆菌菌株DH5α中分离出来的重组质粒pGmTN-PPC转化TF4076(一种苏氨酸产生株)，在含有5毫克/升庆大霉素的LB固体培养基(酵母抽提物5克/升；细菌用胰蛋白胨10克/升、氯化钠10克/升；细菌培养用琼脂1.7％；pH7.0)上培养，在30摄氏度培养60个小时。将每个单集落接种到0.5毫升的LB中，30摄氏度下培养4小时。将培养物的等分试样转移到10毫升的LB中，30摄氏度下培养6小时，而后37摄氏度下过夜。将培养物的10-3-10-6的稀释物接种到含有5毫克/升庆大霉素的LB固体培养基中。此时，也将12微升的IPTG(0.1M)和60微升的X-gal(2％)接种到LB固体培养基上。44摄氏度下培养24小时，筛查对羧苄青霉素敏感的、呈白色集落状的重组菌株，该集落不能在含有15毫克/升的羧苄青霉素的LB固体培养基上生长。经筛查的重组菌株确证存在预期的质粒，其中ppc基因和苏氨酸操纵子被整合到每个菌株染色体DNA的lacZ基因位点。实施例4：烧瓶培养重组菌株的苏氨酸生产能力比较
通过使用锥形烧瓶中的苏氨酸滴度培养基，筛查了30个重组菌株的单集落来对苏氨酸的生产能力作比较，其中重组菌株的染色体中整合有重组质粒。每种情况所用的苏氨酸滴度培养基组合物列在表1中。集落在32摄氏度的培养箱中，在LB固体培养基上培养过夜。用一铂环量的每种培养物接种20毫升的滴度培养基，在32摄氏度，250转数/分钟的条件下培养48小时。分析结果见表2。重组菌株的所有30个集落都显示出极好的生产能力，包括有8个集落生产出26克/升或更高苏氨酸，与宿主菌株TF3076比较，TF3076只生产出20克/升的苏氨酸。这种重组菌株被命名为“pGmTN-PPC12”，该重组菌株记录了最高苏氨酸生产能力：27.0克/升，比宿主菌株的产量高了35％。pGmTN-PPC12菌株于2001年1月5日保藏在韩国典型培养物保藏中心(KCTC)，保藏号KCCM10236。
                            表1.苏氨酸滴度培养基组合物
   组分   每升数量
   葡萄糖     70克
   (NH4)2SO4     28克
   KH2PO4     1.0克
   MgSO4.7H2O     0.5克
   FeSO4.7H2O     5毫克
   MnSO4.8H2O     5毫克
   碳酸钙     30克
   L-甲硫氨酸     0.15克
   酵母抽提物     2克
              PH7.0
                     表2.重组菌株烧瓶滴度测试的结果
L-苏氨酸浓度 20-22克/升 22-24克/升 24-26克/升 26克/升或更高
集落计数 7 6 9 8
实施例5：使用发酵罐比较苏氨酸生产能力
发酵罐中苏氨酸的生产能力在重组菌株pGmTN-PPC12与宿主菌株TF4076之间作比较，其中的重组菌株选自实施例4中的其最高苏氨酸滴度。使用的初始培养基组合物见表3。还包含有10克/升的葡萄糖和0.1克L-甲硫氨酸的LB培养基用来作种子培养，接种到发酵罐中的初始体积被确定在3-5％目的初始培养的体积。每次加入葡萄糖使终浓度为5％重量，伴随加入的KH2PO4为1％重量，加入次数超过6次。在这里，每一次葡萄糖的添加取决于葡萄糖的缺失。培养的起始体积为1.5升，终末体积为3.0升。通过发酵作用添加的葡萄糖总浓度为250克/升。在发酵过程中，培养基搅动率为700-1000转数/分钟，温度控制在32摄氏度，用25-28％的氨水将PH值调节在7.0。空气流动率调节到0.1vvm。结果见表4。如表4所示，宿主菌株TF4076生产出75.3克/升的苏氨酸，产量相对于葡萄糖消耗量为30.1％。相比较，重组菌株pGmTN-PPC12生产出102克/升的苏氨酸，产量为40.8％，比宿主菌株TF4076高出35.4％。此外，在重组菌株中观察到了与宿主菌株类似的发酵模式，在发酵过程中没有糖耗的降低，由于生长抑制，这种情况常常出现在重组菌株中。
                    表3. 5升发酵罐中的初始培养基组合物
    组分    每公升数量
    葡萄糖       50克
    KH2PO4       4克
    (NH4)2SO4       6克
    酵母抽提物       3克
    MgSO4.7H2O       2克
    L-甲硫氨酸       1克
    FeSO4.7H2O       40毫克
    MnSO4.8H2O       10毫克
    CaCl2.2H2O       40毫克
    CoCl2.6H2O       4毫克
    H3BO3       5毫克
    Na2MoO4.2H2O       2毫克
    ZnSO4.7H2O       2毫克
                 PH7.0
                        表4.重组菌株的苏氨酸发酵生产结果
菌株 苏氨酸(克/升) 发酵时间(小时) 产量(％)
TF4076 75.3 78 30.1
pGmTN -PPC12 102 77 38.0
如上所述，依照本发明，2个或多个ppc基因和苏氨酸操纵子被包含在染色体DNA中，由此提高ppc基因和某些基因的表达，其中，ppc基因编码一种酶，该酶能够将磷酸烯醇丙酮酸转化为苏氨酸生物合成的前体——草酰乙酸；所述的某些基因能够编码酶，这些酶参与从草酰乙酸到苏氨酸的生物合成路径，例如thrA(天冬氨酸激酶-高丝氨酸脱氢酶)，thrB(高丝氨酸激酶)，thrC(苏氨酸合成酶)。本发明可以显著提高L-苏氨酸的生产能力，比宿主菌株高出35％。

Claims (7)

1、一种使用微生物生产L-苏氨酸的方法，其中，微生物固有的ppc基因和苏氨酸操纵子被保留，一个或多个拷贝的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和苏氨酸操纵子被额外地插入到微生物染色体DNA的特定位点。
2、权利要求1的方法，其中的微生物是大肠杆菌。
3、权利要求1的方法，其中被额外整合到微生物中的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和苏氨酸操纵子来源于微生物，该微生物对苏氨酸类似物、赖氨酸类似物、异亮氨酸类似物、和甲硫氨酸类似物有抗性。
4、权利要求1的方法，其中的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和苏氨酸操纵子被额外地整合到染色体DNA的lacZ基因位点。
5、权利要求1的方法，其中的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因和苏氨酸操纵子被整合到宿主菌株大肠杆菌TF4076的染色体中，所述的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因通过聚合酶链式反应(PCR)从苏氨酸生产大肠杆菌菌株，保藏号为KFCC10718的TF4076的染色体中获得，所述的苏氨酸操纵子从所述的大肠杆菌染色体中通过克隆获得。
6、权利要求1的方法，其中的微生物用图2中的重组质粒pGmTN-PPC构建。
7、能够生产L-苏氨酸的、保藏号为KCCM10236的大肠杆菌菌株pGmTN-PPC12。
CNB028003047A 2001-02-13 2002-02-14 L－苏氨酸的生产方法 Expired - Lifetime CN1252278C (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR6976/01 2001-02-13
KR6976/2001 2001-02-13
KR10-2001-0006976A KR100397423B1 (ko) 2001-02-13 2001-02-13 Ｌ-쓰레오닌의 제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1457365A true CN1457365A (zh) 2003-11-19
CN1252278C CN1252278C (zh) 2006-04-19

Family

ID=36143610

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB028003047A Expired - Lifetime CN1252278C (zh) 2001-02-13 2002-02-14 L－苏氨酸的生产方法

Country Status (10)

Country Link
US (1) US7011961B2 (zh)
EP (1) EP1360312B1 (zh)
JP (1) JP3930431B2 (zh)
KR (1) KR100397423B1 (zh)
CN (1) CN1252278C (zh)
AT (1) ATE311468T1 (zh)
DE (1) DE60207685T2 (zh)
DK (1) DK1360312T3 (zh)
ES (1) ES2252422T3 (zh)
WO (1) WO2002064808A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100379851C (zh) * 2004-02-05 2008-04-09 Cj株式会社 生成l-苏氨酸的微生物、生产其的方法、及使用其生产l-苏氨酸的方法
CN111363757A (zh) * 2020-01-19 2020-07-03 江南大学 一种温度开关系统及其在提高氨基酸产量中的应用
WO2023151409A1 (zh) * 2022-02-10 2023-08-17 廊坊梅花生物技术开发有限公司 高产苏氨酸工程菌的构建方法

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100426807B1 (ko) * 2001-06-19 2004-04-13 씨제이 주식회사 엘-쓰레오닌 생산 미생물 및 이를 이용한 엘-쓰레오닌 제조방법
KR100426808B1 (ko) * 2001-06-19 2004-04-13 씨제이 주식회사 엘-쓰레오닌 생산 미생물 및 이를 이용한 엘-쓰레오닌 제조방법
AU2002345081A1 (en) * 2001-07-18 2003-03-03 Degussa Ag Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
US7378267B1 (en) 2002-05-16 2008-05-27 Cheil Jedang Corporation Method for L-threonine production
KR100505797B1 (ko) * 2002-10-11 2005-08-04 씨제이 주식회사 염색체 상의 ｆａｄＲ 유전자가 불활성화된 Ｌ-쓰레오닌 생성 변이 미생물과 이를 이용한 Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
DE10303571A1 (de) 2003-01-30 2004-08-12 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100498971B1 (ko) * 2003-04-04 2005-07-04 씨제이 주식회사 염색체 내 ｔｄｃＢＣ 및 ｐｃｋＡ 유전자가 불활성화된 미생물 및 이를 이용하여 Ｌ-쓰레오닌을 제조하는 방법
DE10316109A1 (de) 2003-04-09 2004-10-21 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100478468B1 (ko) 2003-09-06 2005-03-23 씨제이 주식회사 Ｌ―쓰레오닌의 제조방법
KR100608085B1 (ko) 2004-02-05 2006-08-02 씨제이 주식회사 ｔｙｒＲ 유전자가 불활성화된 Ｌ-쓰레오닌 생성 미생물,그를 제조하는 방법 및 상기 미생물을 이용한Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
DE102004005836A1 (de) 2004-02-06 2005-09-15 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100576344B1 (ko) * 2004-08-21 2006-05-03 씨제이 주식회사 프롤린에 의한 길항조절이 해제된 글루타밀 키나제변이체를 코딩하는 핵산, 그를 포함하는 벡터 및 숙주세포및 상기 숙주세포를 이용한 ｌ－트레오닌의 생산방법
KR100596372B1 (ko) * 2004-12-06 2006-07-04 씨제이 주식회사 염색체 상의 ｌｙｓＲ유전자가 불활성화된 Ｌ-쓰레오닌생성 미생물, 그를 제조하는 방법 및 상기 미생물을이용한 Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
DE102005018835A1 (de) 2005-04-22 2006-11-02 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung verbesserter Stämme der Familie Enterobacteriaceae
DE102007051024A1 (de) 2007-03-05 2008-09-11 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100858913B1 (ko) * 2007-03-09 2008-09-17 한국과학기술원 부위특이적 변이에 의해 제조된 고수율의 ｌ－쓰레오닌생산균주 및 이를 이용한 ｌ－쓰레오닌의 제조방법
EP1975241A1 (de) 2007-03-29 2008-10-01 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102007044134A1 (de) 2007-09-15 2009-03-19 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102007052270A1 (de) 2007-11-02 2009-05-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2060636A1 (de) 2007-11-14 2009-05-20 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2098597A1 (de) 2008-03-04 2009-09-09 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008002309A1 (de) 2008-06-09 2009-12-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008044768A1 (de) 2008-08-28 2010-03-04 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von organisch-chemischen Verbindungen unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2267145A1 (de) 2009-06-24 2010-12-29 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2363489A1 (en) 2010-03-03 2011-09-07 Technische Universität Hamburg-Harburg Enzyme Aspartokinase III having a reduced L-lysine feedback inhibition
EP2374873A1 (en) 2010-04-08 2011-10-12 Technische Universität Hamburg-Harburg Modified aspartate kinase from corynebacterium and its application for amino acid production
EP2495317A1 (en) 2011-03-01 2012-09-05 Technische Universität Hamburg-Harburg Modified phosphoenolpyruvate carboxylase from Corynebacterium glutamicum and uses thereof
EP2860256B1 (en) 2013-10-11 2017-03-08 CJ Cheiljedang Corporation Method of producing l-amino acids
KR101518860B1 (ko) * 2013-10-11 2015-05-12 씨제이제일제당 (주) L-아미노산의 생산 방법
RU2697005C2 (ru) * 2013-10-11 2019-08-08 СиДжей ЧЕИЛДЗЕДАНГ КОРП. Способ получения l-аминокислот
EP3608409A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Evonik Operations GmbH Process for preparing l amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5236831A (en) * 1981-12-29 1993-08-17 Kiowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Amino acid synthesis in corynebacteria using E. coli genes
DE3891417T1 (de) 1988-10-25 1991-01-10 Vnii Genetiki Selektsii Promy Stamm der bakterien escherichia coli bkiim b-3996, produziert von l-threonin
JPH0632626B2 (ja) 1989-02-20 1994-05-02 東レ株式会社 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法
KR920009598B1 (ko) 1990-10-11 1992-10-21 주식회사삼성전자 풀림방지용 체결기구
KR960009321B1 (en) 1992-12-17 1996-07-18 Cheil Foods & Chem Making method of l-threonin by recombinant microorganism
WO1995006114A1 (fr) * 1993-08-24 1995-03-02 Ajinomoto Co., Inc. Allele de phosphenolpyruvate carboxylase, gene de cet allele et procede de production de l'acide amine
US5998178A (en) * 1994-05-30 1999-12-07 Ajinomoto Co., Ltd. L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation
US5939307A (en) * 1996-07-30 1999-08-17 The Archer-Daniels-Midland Company Strains of Escherichia coli, methods of preparing the same and use thereof in fermentation processes for l-threonine production
JP4075087B2 (ja) * 1996-12-05 2008-04-16 味の素株式会社 Ｌ−リジンの製造法
JP2003511067A (ja) 1999-10-13 2003-03-25 ザ ユニバーシティ オブ ジョージア リサーチ ファウンデーション インコーポレイティド 高い収量のタンパク質発現系および方法
JP4265093B2 (ja) * 2000-08-11 2009-05-20 味の素株式会社 スレオニン及びイソロイシンの製造法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN100379851C (zh) * 2004-02-05 2008-04-09 Cj株式会社 生成l-苏氨酸的微生物、生产其的方法、及使用其生产l-苏氨酸的方法
CN111363757A (zh) * 2020-01-19 2020-07-03 江南大学 一种温度开关系统及其在提高氨基酸产量中的应用
CN111363757B (zh) * 2020-01-19 2022-08-09 江南大学 一种温度开关系统及其在提高氨基酸产量中的应用
WO2023151409A1 (zh) * 2022-02-10 2023-08-17 廊坊梅花生物技术开发有限公司 高产苏氨酸工程菌的构建方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP1360312B1 (en) 2005-11-30
ES2252422T3 (es) 2006-05-16
DK1360312T3 (da) 2006-04-10
KR100397423B1 (ko) 2003-09-13
EP1360312A4 (en) 2005-01-05
ATE311468T1 (de) 2005-12-15
DE60207685T2 (de) 2006-07-13
CN1252278C (zh) 2006-04-19
EP1360312A1 (en) 2003-11-12
JP3930431B2 (ja) 2007-06-13
US20030153057A1 (en) 2003-08-14
DE60207685D1 (de) 2006-01-05
US7011961B2 (en) 2006-03-14
WO2002064808A1 (en) 2002-08-22
KR20020066662A (ko) 2002-08-21
JP2004518439A (ja) 2004-06-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1252278C (zh) L－苏氨酸的生产方法
CN100529057C (zh) 通过埃希氏菌属细菌生产l-氨基酸的方法
US7981640B2 (en) L-lysine-producing corynebacteria and process for the preparation of L-lysine
US7323321B2 (en) Metabolic engineering of amino acid production
CN100379851C (zh) 生成l-苏氨酸的微生物、生产其的方法、及使用其生产l-苏氨酸的方法
CN101946002B (zh) 具有提高的l-苏氨酸生产率的大肠杆菌菌株和利用其生产l-苏氨酸的方法
SK10142000A3 (sk) Coryneformné baktérie produkujúce l-lyzín a spôsob prípravy l-lyzínu
US6861246B2 (en) L-lysine-producing corynebacteria and process for the preparation of lysine
CN1194088C (zh) L－苏氨酸生产方法
JP2011147459A (ja) 新規な細菌株、これを調製する方法、およびｌ−リジン産生のための発酵プロセスにおけるそれらの使用
CN101597588B (zh) 通过埃希氏菌属细菌生产l-氨基酸的方法
CN100342006C (zh) 生产l－型苏氨酸的方法
CN101072865A (zh) 具有灭活的lysR基因生成L－苏氨酸的微生物，生产其的方法以及使用所述微生物生产L－苏氨酸的方法
KR100427479B1 (ko) Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
KR100427480B1 (ko) Ｌ-쓰레오닌의 제조방법
US7368266B2 (en) Method for L-threonine production

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: CJ CHEIL JEDANG CORP.

Free format text: FORMER OWNER: CHEIL JEDANG CORP.

Effective date: 20080606

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20080606

Address after: Seoul, South Kerean

Patentee after: CJ Corp.

Address before: Seoul

Patentee before: First sugar refining Corporation

CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20060419

CX01 Expiry of patent term