CN1449792A - 具有协同作用的药物组合物及其制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

一种具有免疫调节、抗应激、抗衰老、解毒作用的组合物，由沙棘油与刺五加提取物为主药，添加或不添加适当辅料，制备各类保健组合物或药用组合物，如软胶囊剂，发明还包括其制备方法。

Description

具有协同作用的药物组合物及其制备方法与用途

技术领域

本发明属于一种中药提取物与植物提取物组成的具有协同作用的组合物及其制备方法，以及在制备保健品或药品中的应用。

背景技术

剌五加又称五加参，是中药五加皮的一种，具有扶正固本、益智安神、补肾健脾等功效。现代化学成分及药理研究证明刺五加中主要活性成分总甙及多糖对中枢神经系统、免疫系统及内分泌代谢等有促进及调节作用。沙棘含有丰富的生物活性物质，对心血管系统、免疫系统、抗炎、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤等方面具有显著的药理效应。

国内对刺五加或沙棘油的药效、药理的研究报道很多，由刺五加与沙棘油各自或者分别与其它成份配伍组方制成的药品或医药保健品也有很多。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研制一种中药提取物与植物提取物组成的具有协同作用的组合物及其制备方法，以及在制备保健品或药品中的应用。具体为以中药提取物与植物提取物为主药，添加或不添加适当辅料，制备各类保健组合物或药用组合物，用于提高免疫、增加人体对有毒物质或不利于人体环境的抵御能力，如解毒能力等。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案。

一种具有免疫调节、抗应激、抗衰老、解毒作用的组合物，其特征在于：基本上由沙棘油与刺五加的乙醇和/或水提取物的浸膏粉组成。沙棘油与刺五加浸膏粉的重量比为1.5～3∶1份。沙棘油与刺五加浸膏粉的较好的重量比为2∶1份。

一种具有免疫调节、抗应激、抗衰老、解毒作用的组合物，是基本上由沙棘油与刺五加浸膏粉以及食品添加剂或药学上可接受的辅料组成的口服制剂。如：基本上由沙棘油与刺五加浸膏粉以及助悬剂与乳化剂组成的常规软胶囊。

所述组合物，其特征在于：软胶囊内含沙棘油、刺五加浸膏粉、助悬剂、乳化剂的重量比为1.5～3∶1∶0.15～0.3∶0.01～0.03份；软胶囊胶皮基本由明胶、增塑剂、水、遮光剂按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份组成。软胶囊内含沙棘油、刺五加浸膏粉、助悬剂、乳化剂的较好的重量比为2～2.5∶1∶0.17～0.25∶0.015～0.02份；软胶囊胶皮基本由明胶、增塑剂、水、遮光剂按较好的重量比1∶0.4～0.5∶1.2～1.4∶0.00025～0.0005份组成。

前述组合物的特征在于：助悬剂是蜂蜡、阿拉伯胶和/或西黄耆胶；乳化剂是司盘类和/或卵磷脂；增塑剂是甘油和/或山梨醇；遮光剂是可食用或药用色素。

所述组合物的制备方法是：按配方量，取沙棘油与助悬剂混合，加热熔融，冷却，加入乳化剂，混匀，加入研细的刺五加浸膏粉，制成混悬药液；取明胶、增塑剂、水、遮光剂配成明胶液；用软胶囊压制机将混悬药液与明胶液制成软胶囊。

较好的制备方法为：按重量比，取沙棘油1.5～3份与蜂蜡0.15～0.3份混合，加热熔融，冷却至60℃～30℃，加入卵磷脂0.01～0.03份，混匀，加入研细的刺五加浸膏粉1份，制成混悬药液；取明胶、甘油、水、遮光剂按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份配成明胶液；用软胶囊压制机将混悬药液与明胶液制成软胶囊。

沙棘系胡颓子科植物沙棘Hippophae rhamnades L.的干燥成熟果实。秋、冬二季果实成熟或冻硬时采收，除去杂质，干燥或蒸后干燥备用。沙棘的主要成分为不饱和醛类，维生素类，五环三萜类，甾醇类等。可取沙棘干燥果实，采用超临界二氧化碳萃取技术，以二氧化碳为工作介质，以较低的加工温度(＜58℃和加工工艺过程全部受二氧化碳气体保护的独立工艺特点，最大限度防止有效生物活性物质的受热分解和氧化破坏作用，提出纯天然沙棘籽油，不含任何有机溶剂及其它化学合成物质。沙棘油亦可市购，生产商有：北京星龙萃取工程有限公司。

刺五加本品系五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms的干燥，根及根茎或茎，春秋二季采收，洗净，干燥备用。刺五加主要成分为刺五加苷、甾醇、三萜皂苷、多糖等。可取刺五加1000g，粉碎成粗粉，加7倍量的75％乙醇连续回流提取12小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩，干燥成浸膏粉50g。刺五加浸膏粉亦可市购(生产商有黑龙江省沙河子农场)。

本发明将沙棘油与刺五加浸膏粉组配，制备的组合物产生协同的药理作用。与单独使用沙棘油或刺五加浸膏粉相比，本发明保健组合物或药物组合物的毒性显著减小，增强免疫功能及抗应激的有效剂量显著减小，且可降低血浆LPO含量，增强老年鼠SOD活性，具有相对广泛的解毒谱，解毒作用增强，解毒范围扩大。具体数据如下：

1.急性毒性试验

本发明组合物的最大给药量为62.0g/kg(其中含沙棘油41.3g/kg，刺五加20.6g/kg)，为临床人日用量的2000倍。

而沙棘油最大给药量为25g/kg，LD₅₀＞45.0g/kg，刺五加流浸膏LD₅₀为14.5g/kg。说明合用后毒性减小。

2.药效试验表明

2.1对免疫功能的影响

沙棘油与刺五加合用0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg(其中每个剂量含刺五加1份，沙棘油2份)剂量，即可增强免疫功能的作用。

而文献报道刺五加醇提取物25g/kg和50g/kg，沙棘油50％混悬液具有增强免疫功能的作用，参见：黑龙江省中国医药研究所《中草药》1980，11(7)313；许维桢等，《中草药》1987，18(10)22；钟飞等，《中国药理学通报》1989，5(5)307；《山西医药》1989，18(1)9。说明本发明组合物对免疫功能具有协同作用，剂量减少。

2.2抗应激试验

沙棘油与刺五加合用0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg具有抗应激作用。而刺五加20g/kg，3g/kg具有抗应激作用，说明本发明组合物对抗应激具有协同作用。

2.3抗衰老作用

沙棘油与刺五加合用0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg能增强老年鼠SOD活力，使血浆LPO含量降低。

据江苏省科技查新咨询中心的查新报告及文献未见刺五加和沙棘油有类似的报导。

2.4解毒作用

沙棘油和刺五加合用可延长二甲苯、甲醛、敌百虫，偏二甲肼致小鼠的存活时间，减少死亡数，具有解毒作用。

而文献报道刺五加多糖可提高机体对磷酸二甲酚酯，士的宁和吉他林的解毒能力，延长存活时间，未见有报道对二甲苯、甲醛、敌百虫的解毒作用。说明本发明组合物解毒作用增强，解毒谱更广。

具体实施方式

沙棘油购于：北京星龙萃取工程有限公司，批号]000316。

刺五加成浸膏粉购于：黑龙江省沙河子农场，批号000503。

实施例1

内容物处方：

刺五加               110g

沙棘油               228g

蜂蜡                 16.5g

卵磷脂               1.1g

制成软胶囊           1000粒

胶皮配方：明胶1000份、甘油300份、水1350份、亮蓝0.45份

1.取蜂蜡1份与沙棘油12.8份加热熔融，冷却至60度以下，加入卵磷脂，研磨使混匀，备用。

2.取刺五加浸膏粉6.1份研细，过180目筛，加入1中，研磨制成混悬液，密闭备用。

3.取明胶1000份、甘油300份、水1350份、亮蓝0.45份适量配制明胶溶液。药液与明胶液用软胶囊压制机制成胶丸。

实施例2

内容物处方：刺五加                110g

            沙棘油                236g

            蜂蜡                  20g

            卵磷脂                2.3g

            制成软胶囊            1000粒

胶皮配方：明胶1000份、甘油500份、水1500份、苹果绿0.50份

制法同上。

实施例3

内容物处方：刺五加            110g

            沙棘油            250g

            蜂蜡              22g

            卵磷脂            1.5g

            制成软胶囊        1000粒

胶皮配方：明胶1000份、甘油250份、山梨醇150份、水1000份、亮蓝0.55份

制法同上。

实施例4

内容物处方：刺五加            110g

            沙棘油            286g

            蜂蜡              24g

            卵磷脂            1.9g

            制成软胶囊        1000粒

胶皮配方：明胶1000份、甘油200份、山梨醇120份、水1200份、亮蓝0.48份

制法同上。

实施例5

前述实施例中制备的本发明组合物的软胶囊制剂经质量检测，质量符合2000版药典规定项目下的各项规定。外观整洁，无破损、渗漏、粘结、变形等现象。含量测定采用高效液相色谱法和分光光度法测定，有效部位含量稳定。稳定性试验表明本发明软胶囊常温下放样3个月后考察，质量符合2000版药典规定项目下的各项规定，性质稳定可靠，无崩解迟缓现象发生。

实施例6

本发明组合物与沙棘籽油和刺五加浸膏的对比实验

一、急性毒性试验比较

1.沙棘籽油最大给药为25g/kg，48h未见死亡及异常，LD₅₀＞45.0g/kg。参见：程娟等，沙棘果油的急性毒性及其对实验性肝损伤的保护作用《中国中药杂志》1990，15(1)45

2.刺五加流浸膏灌胃的LD₅₀为14.5g/kg。参见：黄正良，刺五加的药理研究，《陕西新医药》1982，11(10)52；王本祥主编，《现代中药药理学》天津科学技术出版社，1997，11月，第11版

3.本发明组合物未能测出LD₅₀，最大给药量为62.0g/kg，其中刺五加20.6g/kg，沙棘油41.3g/kg。(既每个剂量含刺五加1份，沙棘油2份)该剂量为临床人日用量2000倍，等效量181倍。

方法：取昆明种小鼠40只，体重18.0-22.0g，按体重分层随机分为2组，(1)本发明组合物组；(2)空白对照组，试验前禁食(不禁水)12h，用1.55g/ml(最大浓度)灌胃给药，灌胃容量0.4ml/10g鼠重，24小时内灌药1次，空白对照组给予等量生理盐水，连续观察1周，记录受试小鼠活动，行为，摄食量，体重，及死亡情况，未死小鼠1周后处死进行尸检。

结果：按62.0g/kg剂量经口服给予本发明组合物的20只小鼠，当日及以后见小鼠活动行为无异常，摄食量、体重等与空白对照组无明显差异，1周内无死亡及其它异常发生，2组同时处死进行尸检，各主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)经肉眼观察无异常改变，与空白对照组无明显差异。

毒性评价：本发明组合物小鼠经口给药未能测出LD50，小鼠经口最大给药量试验结果表明，20只小鼠给药后无明显毒性反应，1周内无死亡，因此本发明组合物经口给药的小鼠最大给药量为62.0g/kg.如按临床1日口服1.86g/60kg计算，则该药的小鼠1日灌胃药量为临床1日口服量的2000倍，即等效剂量的181.8倍。

二、对免疫功能的影响

1、刺五加醇提取物25g/kg和50g/kg，给小鼠灌胃14d，可明显增强小鼠网状内皮系统吞噬碳粒的功能。刺五加醇提取物20g/kg，给小鼠灌胃7d，用SRBC免疫小鼠，可增强免疫功能。

2、沙棘籽油50％混悬液0.4ml/只，连续给药7d，对小鼠血清溶血素，腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均有显著提高。参见：许维桢等，沙棘籽油对但胺氧化酶及免疫功能的影响《中草药》1987，18(10)22：钟飞等，沙棘总黄酮对动物非特异性免疫功能的影响《山西医药》1989，18(1)9。

3、本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg，3.10g/kg(既每个剂量含刺五加1份，沙棘油2份)能促进所致免疫功能低下小鼠溶血素抗体生成，促进网状细胞吞噬功能，促进DTH反应，增加小鼠外周血中T淋巴细胞数量。

方法：对环磷酰胺(Cy)所致免疫功能低下小鼠免疫器官的影响取KM小鼠60只，体重18--20g，雌雄各半，随机分6组(1)空白对照组：等量NS，(2)模型对照组：等量NS，(3)左旋咪唑组：0.1g/kg(4)本发明组合物低剂量组：0.78g/kg(5)本发明组合物中剂量组：1.55g/kg，(6)本发明组合物高剂量组：3.10g/kg，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。除空白对照组外，其余各组于给药第4天和第8天分别iP50mg/kgCy，以造成免疫功能低下动物模型，并与末次给药后2h处死，分离脾脏和胸腺称重，比较各组间差异。

结果：本发明组合物三个剂量组均可增加Cy所致免疫功能低下小鼠脾和胸腺的重量，具有对抗Cy的免疫抑制作用。

对Cy所致免疫功能低下小鼠溶血素抗体(IgM)生成的影响取KM小鼠60只，体重17-21g，随机分6组，雌雄各半，每组10只，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。于给药第四天，每鼠腹腔注射20％SRBC悬液进行免疫，除空白对照组，其余各组于免疫第二天iP 60mg/kgCy，一次造成免疫功能低下动物模型，末次给药后1h，眼球取血，分离血清，取50ul，加至2mlSA液中混匀。取1ml，加10％SRBC，0.5ml，10％豚鼠血清1ml，另取不加血清的对照管，置37℃恒温水浴箱30min后，立即置冰浴中终止反应，2000rpm离心10min，取上清液1ml加入都氏液2ml，摇匀后放置10min，于540nm处测OD值，SRBC半数溶血值为10％SRBC 0.25ml加都氏试剂4ml，于540nm处测定OD值。

结果：本发明组合物三个剂量组均可促进Cy致免疫功能低下小鼠溶血素抗体的生成，具有增强体液免疫的作用。

对Cy致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬功能的影响取KM小鼠60只，体重18--22g，雌雄各半，随机分6组，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。除空白对照组外，其余各组于给药第4天和第8天分别iP60mg/kgCy，并与末次给药后30min处死，尾静脉注入墨汁(0.1ml/10g鼠重)，于注射后2min、12min分别从眼眶后静脉从取血20ul，立即置2ml 0.1％Na₂CO₃溶液中，摇匀后，于680nm处测OD值，并处死小鼠，取肝脾称重，计算廓清指数K和廓清系数a，比较各组间差异。

结果：本发明组合物1.55g/kg和3.10g/kg剂量组可明显增强小鼠碳粒廓清指数K值和廓清系数a值，0.78g/kg剂量组可增强碳粒廓清指数K值，提示：本发明组合物具有促进血液中异物的廓清速度，能对抗Cy的所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬功能减退的作用，并随剂量增加作用增强。

本发明组合物对Cy致免疫功能低下小鼠DNCB致DTH反应取KM小鼠60只，体重18--22g，雌雄各半，随机分6组，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。于给药5天后，用8％Na₂S脱去小鼠腹部皮肤毛，面积约1cm²，并均匀涂布1％DNCB溶液50ul，致敏，次日同法加强一次，并于致敏当日iP50mg/kg Cy，次日加强一次，并于末次给药30min后，于各组小鼠右耳两面均匀涂布1％DNCB溶液20ul，攻击，20h后脱颈椎处死小鼠，用8mm打孔器取下同部位左右两耳片，称重，以两耳称重差异表示DTH反应的强弱。

结果：本发明组合物三个剂量组均可增强DNCB致DTH反应，1.55g/kg 3.10g/kg剂量组可增加胸腺重量，提示：本发明组合物能使Cy诱导小鼠DTH过低模型调节至正常水平，具有调节细胞免疫的作用。

本发明组合物对免疫功能低下小鼠外周血中T淋巴细胞脂酶的作用取KM小鼠60只，体重18--22g，雌雄各半，随机分6组，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。除空白对照组外，其余各组于给药第4天和第8天分别iP60mg/kgCy造成免疫功能低下动物模型，并与末次给药后1h小鼠尾梢取血推片，浸入孵育液37℃，1％孔雀绿染色，油镜检查，计数100个淋巴细胞，计算T淋巴细胞％。(ANAE阳性细胞)。

结果：本发明组合物三个剂量组可明显增强外周血中T淋巴细胞数量，对抗Cy的免疫抑制作用。

三、抗应激试验

1、刺五加醇浸膏按3g/kg灌服，能增强小鼠对高温(45-48℃)和低温(0-10℃)的耐受力，刺五加浸膏20g/kg(生药)，给小鼠灌胃，具有抗疲劳作用。参见：吴秉纯等，刺五加扶正固本药理作用的研究I《黑龙江中医药》1981，(4)37；吴秉纯等，刺五加药理作用研究《中医药学报》1985，(2)29；周楚，李文宁，师海波等，刺五加药理研究进展《中药药理与临床》1992，8(6)36。

2、本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg，3.10g/kg能明显延长小鼠耐常压缺氧时间，延长小鼠游泳时间，延长断头小鼠喘气时间，提高高温和寒冷条件下小鼠的存活率。

方法：对小鼠耐常压缺氧时间的影响取ICR小鼠50只，体重15--17g，雌雄各半，随机分5组(1)空白对照组：等量NS，(2)生脉液组：10ml/kg，(3)本发明组合物低剂量组：0.78g/kg(4)本发明组合物中剂量组：1.55g/kg，(5)本发明组合物高剂量组：3.10g/kg，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。末次给药后45min，将小鼠放入盛有15g钠石灰的的广口瓶内，每次每组各取1只小鼠放入瓶内，用凡士林抹瓶口盖严，立即记录密封瓶口至呼吸停止的时间。

结：本发明组合物三个剂量组均可使小鼠耐常压缺氧时间延长，提示：本发明组合物具有耐缺氧作用。

对小鼠游泳时间的影响取ICR小鼠50只，体重15--18g，雌雄各半，随机分5组，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。末次给药后30min，将小鼠置玻璃缸内(水深20cm，水温20±0.5℃)小鼠负重10％。游泳，记录小鼠自投入水中至头部不浮出水面的时间为游泳时间。

结果：本发明组合物三个剂量组均可明显延长小鼠游泳时间，提示：本发明组合物具有抗疲劳作用，并随剂量增加效应增强。

对小鼠断头后张口喘气时间的影响取ICR小鼠50只，体重15--18g，雌雄各半，随机分5组，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。末次给药后1h，将小鼠逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。

结果：本发明组合物三个剂量组均能明显延长小鼠断头张口喘气时间，提示：本发明组合物具有对脑缺血的保护作用。

对小鼠耐高温试验的影响取ICR小鼠80只，体重15--17g，雌雄各半，随机分5组，每组16只，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。末次给药后1h，各组取8只小鼠，每只小鼠放入单笼后置45±1℃恒温箱内，90min后取出，统计各组小鼠存活数，计算存活百分率。

结果：本发明组合物三个剂量组均可明显提高小鼠在高温条件下的存活数，存活率分别为81.3％，87.5％，87.5％。提示本发明组合物具有改善机体器官生理功能，增强机体耐高温的能力。

对小鼠耐寒试验的影响取ICR小鼠80只，体重15--17g，雌雄各半，随机分5组，每组16只，分组同上，以上各组小鼠均灌胃给药，灌胃容量20ml/kg，1次/天，连续10天。末次给药后1h，各组取8只小鼠，每只小鼠放入单笼后置-15±1℃冰箱内，90min后取出，统计各组小鼠存活数，计算存活百分率。

结果：本发明组合物三个剂量组均可明显提高小鼠在寒冷环境中的存活数，存活率分别为81.3％，87.5％，93.8％，提示：本发明组合物具有增强机体氧化分解产热过程，提高机体对寒冷刺激的反应。

四、抗衰老试验

本发明组合物0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg能显著提高老年大鼠血清SOD活力，使血浆LPO含量降低。

方法：本发明组合物对老年大鼠SOD和LPO的影响取老年SD大鼠，11月龄，雌雄各半，体重250-350g，随机分5组，每组10只。(1)空白对照组，等量NS(2)生脉液组10ml/kg(3)低剂量组0.31g/kg(4)中剂量组0.62g/kg(5)高剂量组1.24g/kg  以上各组大鼠均灌胃给药，灌胃容量10ml/kg，1次/天×90天，给药期间，每隔10天记录各组动物进食量和体重，并观察动物活动及健康情况。末次给药后禁食(不禁水)12小时。次日晨腹腔注入2％戊巴比妥钠0.1ml/100g鼠重，麻醉后，固定分离颈动脉，取血，测RBC值和Hb含量，分离血清，测定SOD活力和LPO含量，比较各组间差异。

结果：本发明组合物的三个剂量组均可显著提高老年大鼠血清SOD活力，使血浆LPO含量显著降低，与生理盐水组比较(P＜0.05，P＜0.01和P＜0.001)。同时能明显升高RBC值和Hb含量，与生理盐水组比较(P＜0.01，p＜0.001)，提示：本发明组合物具有加速清除体内自由基及脂质过氧化产物，减少细胞损伤，抗衰老和促进骨髓造血功能的作用。

五、解毒试验

1、刺五加可减少青蛙因注入洋地黄毒甙引起的死亡率，提高机体对磷酸二甲酚酯，士的宁和吉他林的解毒能力，刺五加高糖对硫代乙酰胺所致小鼠肝中毒有明显改善。刺五加能使每日给予绝对致死量的硝苯硫磷脂酰胺(40mg/kg)的动物平均寿命从对照组的3.6日延长到5.7日。

2、本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg能明显延长二甲苯致小鼠死亡时间，减少死亡率，保护率分别为68.4％，63.2％和63.2％。可使甲醛致小鼠死亡率降低，保护率分别为75％、80％和90％。并可延长存活时间。明显降低敌百虫致小鼠死亡数，保护率分别为63.16％，63.16％和84.21％，并可延长存活时间，可明显降低偏二甲肼致小鼠死亡数，保护率分别为75.0％和81.2％。

方法：本发明组合物对二甲苯致小鼠死亡的保护作用取ICR小鼠76只，♀♂兼用，体重18～22，随机分4组，每组19只。(1)空白对照组：等量NS，(2)生脉液组：10ml/kg，(3)本发明组合物低剂量组：0.78g/kg(4)本发明组合物中剂量组：1.55g/kg，(5)本发明组合物高剂量组：3.10g/kg，以上各组动物均灌胃给药，给药容量20ml/kg，1次/d×15d，末次给药45min后，取各组动物置4×4L的有机玻璃箱内，将二甲苯用超声波雾化器雾化后缓缓喷入，连续15min，观察各组小鼠死亡时间和死亡数，比较各组间差异。

结果：本发明组合物0.78g/kg、1.55g/kg和3.10g/kg剂量组能明显延长二甲苯致小鼠死亡的时间，减少死亡数，存活率分别为68.42％、63.16％和63.16％，与生理盐水组比较具有非常显著性差异，提示：本发明组合物对二甲苯致小鼠死亡具有明显保护作用。

本发明组合物对甲醛致小鼠死亡的保护作用取ICR小鼠80只，♀♂兼用，体重18～22，随机分4组，每组20只。分组同上，以上各组动物均灌胃给药，给药容量20ml/kg，1次/d×15d，末次给药45min后，取各组动物置4×4L的有机玻璃箱内，将甲醛雾化后缓缓喷入，连续10min，观察各组小鼠死亡时间和死亡数，比较各组间差异。

结果：本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可使甲醛致小鼠死亡率降低，保护率分别为75％、80％和90％。并可延长存活时间，与生理盐水组比较具有非常显著性差异，提示：本发明组合物对甲醛致小鼠死亡具有明显的保护作用。

本发明组合物对敌百虫致小鼠死亡的保护作用取ICR小鼠76只，♀♂兼用，体重18～22，随机分4组，每组19只。分组同上，以上各组动物均灌胃给药，给药容量20ml/kg，1次/d×15d，末次给药45min后，取敌百虫适量，配成0.1038g/ml浓度，灌胃给予敌百虫，灌胃容量0.2ml/10g，立即观察动物活动、行为及死亡情况，观察时间为72小时。比较各组间差异。

结果：本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可明显降低敌百虫致小鼠死亡数，保护率分别为63.16％，63.16％和84.21％，并可延长存活时间，与生理盐水组比较具有显著性差异，提示：本发明组合物对敌百虫致小鼠死亡具有明显的保护作用。

本发明组合物对偏二甲肼致小鼠死亡的影响取ICR小鼠64只，♀♂兼用，体重18～22，随机分4组，每组16只。分组同上，以上各组动物均灌胃给药，给药容量20ml/kg，1次/d×15d，末次给药45min后，取偏二甲肼适量，配成10.43×10^-3g/ml浓度，灌胃给予偏二甲肼，灌胃容量0.2ml/10g，立即观察动物活动、行为及死亡情况，观察时间为72小时。给予偏二甲肼后，小鼠行为兴奋，死亡时呈惊厥状态，可见翘尾，奔跑现象。

结果：本发明组合物1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可明显降低偏二甲肼致小鼠死亡数，保护率分别为75.0％和81.2％，与生理盐水组比较具有显著性差异，提示：本发明组合物对偏二甲肼致小鼠死亡具有明显的保护作用。

试验结果表明：

1、对免疫功能的影响试验结果表明：

(1)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能增加环磷酰胺(Cy)所致免疫功能低下小鼠免疫器官脾和胸腺的重量，与模型对照组比较，P＜0.05、P＜0.01较，提示本发明组合物具有对抗Cy的免疫抑制作用。

(2)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能促进Cy所致免疫功能低下小鼠溶血素抗体(IgM)的生成。HC₅₀与模型对照组比较P＜0.01、P＜0.001，提示：本发明组合物具有增强体液免疫的作用。

(3)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能促进Cy所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬功能的作用。廓清指数K值和廓清系数a值与模型对照组比较P＜0.05、P＜0.01。提示：本发明组合物具有对抗Cy所致免疫功能低下小鼠单核细胞吞噬功能减退的作用。并随剂量增加，作用增强。

(4)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能增加Cy所致免疫功能低下小鼠DNCB所致DTH反应具有明显的调节作用，胸腺系数和两耳重量差异与模型对照组比较，P＜0.01和P＜0.05。提示：本发明组合物能将Cy诱导小鼠DTH过低模型调节到正常水平，具有调节细胞免疫的作用。

(5)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能增加Cy所致免疫功能低下小鼠外周血中T淋巴细胞数量，ANAE阳性细胞数分别为29.9±6.39，30.1±6.39，34.0±7.14。提示：本发明组合物具有对抗Cy的免疫抑制作用，增强免疫功能的作用。

2、抗应激试验结果表明：

(1)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能明显延长小鼠耐常压缺氧时间，与生理盐水组比较P＜0.05、P＜0.01。提示：本发明组合物具有明显增强小鼠耐缺氧能力。

(2)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能明显延长小鼠游泳时间，与生理盐水组比较P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001。提示：本发明组合物具有抗疲劳作用。

(3)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组能明显延长小鼠喘气时间，与生理盐水组比较P＜0.01。提示：本发明组合物具有降低脑耗氧的作用。

(4)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组可明显提高小鼠在高温条件下的存活率，与生理盐水组比较P＜0.05、P＜0.01，提示本发明组合物具有改善机体器官生理功能，增强机体耐高温的能力。

(5)本发明组合物0.78g/kg，、1.55g/kg和3.10kg剂量组可明显提高小鼠在寒冷环境中的存活率，与生理盐水组比较P＜0.001，提示本发明组合物具有增强机体氧化分解产热过程，提高机体耐对寒冷刺激的反应。

3.本发明组合物0.31g/kg，0.62g/kg和1.24g/kg剂量组可显著提高老年大鼠血清SOD活力，使血浆LPO含量显著降低，与生理盐水组比较P＜0.05，P＜0.01和P＜.001)，同时能明显升高RBC值和HB含量(P＜0.01和P＜0.001)提示本发明组合物具有加速清除体内自由基及脂质过氧化产物，减少细胞损伤，抗衰老和促进骨髓造血功能的作用。

4、本发明软胶囊抵御有毒物质对哺乳动物侵害

(1)本发明组合物0.78g/kg、1.55g/kg和3.10g/kg剂量组能明显延长二甲苯致小鼠死亡的时间，减少死亡数，存活率分别为68.42％、63.16％和63.16％，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，提示：本发明组合物对二甲苯致小鼠死亡具有明显保护作用。

(2)本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可使甲醛致小鼠死亡率降低，保护率分别为75％、80％和90％。并可延长存活时间，与生理盐水组比较具有非常显著性差异(P＜0.01)，提示：本发明组合物对甲醛致小鼠死亡具有明显的保护作用。

(3)本发明组合物0.78g/kg，1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可明显降低敌百虫致小鼠死亡数，保护率分别为63.16％，63.16％和84.21％，并可延长存活时间，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，提示：本发明组合物对敌百虫致小鼠死亡具有明显的保护作用。

(4)本发明组合物1.55g/kg和3.10g/kg剂量组均可明显降低偏二甲肼致小鼠死亡数，保护率分别为75.0％和81.2％，与生理盐水组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，提示：本发明组合物对偏二甲肼致小鼠死亡具有明显的保护作用。

综上所述：本发明组合物具有免疫调节，抗应激，抗衰老和促进骨髓造血功能的作用，且对受二甲苯、甲醛、敌百虫、偏二甲肼有毒物质影响的哺乳动物具有明显的保护作用

Claims (10)

1、一种具有免疫调节、抗应激、抗衰老、解毒作用的组合物，其特征在于：基本上由沙棘油与刺五加的乙醇和/或水提取物的浸膏粉组成。

2、根据权利要求1所述组合物，其特征在于：沙棘油与刺五加浸膏粉的重量比为1.5～3∶1份。

3、根据权利要求2所述组合物，其特征在于：沙棘油与刺五加浸膏粉的重量比为2∶1份。

4、一种具有免疫调节、抗应激、抗衰老、解毒作用的组合物，其特征在于：基本上由沙棘油与刺五加浸膏粉以及食品添加剂或药学上可接受的辅料组成的口服制剂。

5、根据权利要求4所述的组合物，其特征在于：基本上由沙棘油与刺五加浸膏粉以及助悬剂与乳化剂组成的常规软胶囊。

6、根据权利要求5所述组合物，其特征在于：软胶囊内含沙棘油、刺五加浸膏粉、助悬剂、乳化剂的重量比为1.5～3∶1∶0.15～0.3∶0.01～0.03份；软胶囊胶皮基本由明胶、增塑剂、水、遮光剂按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份组成。

7、根据权利要求6所述组合物，其特征在于：软胶囊内含沙棘油、刺五加浸膏粉、助悬剂、乳化剂的重量比为2～2.5∶1∶0.17～0.25∶0.015～0.02份；软胶囊胶皮基本由明胶、增塑剂、水、遮光剂按重量比1∶0.4～0.5∶1.2～1.4∶0.00025～0.0005份组成。

8、根据权利要求4～8之一所述组合物，其特征在于：助悬剂是蜂蜡、阿拉伯胶和/或西黄耆胶；乳化剂是司盘类和/或卵磷脂；增塑剂是甘油和/或山梨醇；遮光剂是可食用或药用色素。

9、根据权利要求4～8之一所述组合物的制备方法，其特征在于：取沙棘油与助悬剂混合，加热熔融，冷却，加入乳化剂，混匀，加入研细的刺五加浸膏粉，制成混悬药液；取明胶、增塑剂、水、遮光剂配成明胶液；用软胶囊压制机将混悬药液与明胶液制成软胶囊。

10、根据权利要求9所述组合物的制备方法，其特征在于：按重量比，取沙棘油1.5～3份与蜂蜡0.15～0.3份混合，加热熔融，冷却至60℃～30℃，加入卵磷脂0.01～0.03份，混匀，加入研细的刺五加浸膏粉1份，制成混悬药液；取明胶、甘油、水、遮光剂按重量比1∶0.3～0.6∶1～1.5∶0.00045～0.0009份配成明胶液；用软胶囊压制机将混悬药液与明胶液制成软胶囊。