CN1403809A

CN1403809A - 中药特征指纹谱的建立及其应用

Info

Publication number: CN1403809A
Application number: CN 01126625
Authority: CN
Inventors: 洪筱坤; 王智华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2001-09-04
Filing date: 2001-09-04
Publication date: 2003-03-19

Abstract

本发明涉及中药技术领域。具体涉及一种中药特征指纹谱的建立及其应用。用本发明方法建立的特征指纹谱不仅能用于含有相同有效成分的不同中药间区分和鉴别，并能用于品种的鉴定，还能为中成药所含药味的鉴定提供依据。

Description

中药特征指纹谱的建立及其应用

技术领域

本发明涉及中药分析方法，具体涉及一种中药特征指纹谱的建立及其应用。

发明背景

中药的鉴定是比较复杂的工作，色谱指纹谱的诞生，为中药的鉴定指出了新的研究方向。色谱指纹谱是将波动性较大的色谱图转换成稳定性较好的数据化色谱指纹谱。本发明人曾在《中药质量标准的现代化与色谱指纹谱》世界科学科技技术——中药现代化2000年第二卷第六期第20页，《从中医药中来，回到中医药中去》上海中医药杂志2000年第一期第7页，《中药质量控制的新技术、新趋势——数据化的色谱指纹谱》现代中医药2001年第一期第28页，《柴胡属19种植物挥发油的GC分析》药学学报1988年(11)839，《GC-FPS在檀香木质量研究中的应用》上海中医药大学学报1990(2)54，《HPLC相对保留值指纹谱鉴别大黄》中国中药杂志(11)650，《麝香质量标准初探》中国中药杂志1991(4)230上公开了色谱指纹谱的建立情况。但由于中药及其产品的组分十分复杂，如何根据色谱分析所提供的大量信息对它们进行鉴定和进行质控，建立质标，目前尚无可行、可信的方法，是中药现代化必须解决的问题。色谱峰的分离状况是否完全，每个色谱峰是否只包含一个组分等等，还存在一定的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于利用色谱分析提供的信息，创建一整套原理来解决上述问题，根据中药生物品在色谱指纹谱中所反映的特性和共性，构成中药生物体所特有的指纹，来鉴定中药和鉴别中成药所含药味。

本发明提供了一种中药特征指纹的建立及根据特征指纹进行鉴定时所运用的计算公式和相关术语、定义。

现将特征指纹的选择原则和操作步骤叙述于下。

(1)标准药材的选取，收集业经生药鉴定的该品种药材五个以上的批号。能有更多的批号则更佳。因为考虑到生物样品的个体差异，只有在相当数量的样品中，才能清楚地显现出它的特征。此时还需注意中药样品批号的含义，除样品的产地、采收时间和季节，以及药用部位外，气侯的影响，储运保管条件以及某些人为因素均应顾及。因此样品批号宜多不宜少。

(2)规范化的操作条件和步骤：应从两方面的工作于以规范化。一是样品的预处理，生物样品都需经预处理后方能进行色谱分析。预处理的方法有多种，例如超声萃取，加热萃取，pH萃取等各种萃取技术。二是萃取样品量的大小和样品粉碎程度，以及萃取液是否再经处理等因素，总之所有样品处理过程都必须保持一致以保证样品液的分析具有良好的精密度、正确性、重现性和相互间的可比性。

(3)最佳色谱条件的建立：色谱条件包括色谱柱、流动相、检测器等的选择。要建立良好色谱条件使中药样品中所含之成分尽可能地获得分离，也即分得的色谱峰愈多愈好，可以说是多多益善，使中药的内在特性都显现出来，为鉴定提供足够的信息。色谱柱的选择可根据中药所含的主要成分而定，例如含生物碱类化合物为主的中药，可选用离子交换柱；含多糖类化合物为主的中药可选用凝胶柱，含甾体类化合物为主的中药可选用c-18反相柱；......等。流动相的组成除应考虑化合物的性质外，因为中药所含成分多而杂，采用常规的等梯度洗脱难以使各种性质的成分获得分离，使色谱图中所出现的峰数较少，不能给出足够的鉴定所需的信息。在大多数的情况下以采用梯度洗脱为宜。在合适的梯度条件下，使性质差异较大的各种化合物均被分离，可充分提供鉴定所需的信息。分得的色谱峰越多越有利于鉴定。目前可供选择的检测器，在气相色谱中有氢火焰离子化检测器(FID)、热导检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD)、火焰光度检测器(FPD)等，其中以FID最为常用，凡以碳、氢、氧等元素组成的有机化合物均可被检出，对中药所含之挥发性成分的分析是十分有效的。在高效液相色谱中有可变紫外-可见光(UV-VIS)检测器、荧光检测器、电化学检测器、示差折射检测器(RID)、蒸发光散射光检测器(ELSD)等。其中紫外-可见光检测器用得较多，适宜于化合物中有共轭双键的成分分析，而大量的不含共轭双键的化合物不能被检出。近十年来，ELSD检测器的发展，使中药中甾体类、皂甙类、多糖类等化合物均可采用ELSD作检测。

(4)特征指纹的确立：对上述五个以上批号的标准药材，在优化的提取条件下制备供试液，以及在最佳色谱条件下进行分析，每个样品同品种的中药五个以上的批号，分别进样三次，由此获得五个批号样品的十五张色谱图，并转化为十五张色谱指纹谱。现将这十五张色谱指纹谱中的相对保留值汇集并列成表(见表1)，以便选择特征色谱峰来建立特征指纹。

表1 色谱指纹谱汇集表(面积归一化值)

药材	α
	α													0.084	0.100	0.109	0.128	0.141	0.168	0.198	0.222	0.252	0.284	0.404	0.446	0.496
	1	0.33		0.15	0.36	1.04	0.89	1.30	1.12	0.60	0.74	0.45		0.084	0.100	0.109	0.128	0.141	0.168	0.198	0.222	0.252	0.284	0.404	0.446	0.496	0.96
2	1	0.33		0.15	0.36	1.04	0.89	1.30	1.12	0.60	0.74	0.45		0.45		0.38	0.38	1.06	0.82	1.26	1.08	0.49	0.73	0.40		1.01	0.96
2	3	0.26		0.24	0.45	1.10	0.84	1.31	1.07	0.48	0.75	0.51		0.45		0.38	0.38	1.06	0.82	1.26	1.08	0.49	0.73	0.40		1.01	1.15
4	3	0.26		0.24	0.45	1.10	0.84	1.31	1.07	0.48	0.75	0.51				0.33	0.29	0.89	0.78	0.98	1.01	0.71	0.69	0.49			1.15
4	5	0.15		0.47	0.34	0.92	0.70	0.96	1.05	0.65	0.72	0.52				0.33	0.29	0.89	0.78	0.98	1.01	0.71	0.69	0.49			0.99
6	5	0.15		0.47	0.34	0.92	0.70	0.96	1.05	0.65	0.72	0.52				0.40	0.26	0.90	0.68	0.99	0.99	0.73	0.70	0.51		0.97	0.99
6	7	0.07	0.75	0.32	0.41	1.11	0.92	0.90	0.98	0.57	0.81	0.39	0.93			0.40	0.26	0.90	0.68	0.99	0.99	0.73	0.70	0.51		0.97	0.89
8	7	0.07	0.75	0.32	0.41	1.11	0.92	0.90	0.98	0.57	0.81	0.39	0.93	0.03	0.68	0.28	0.37	1.09	0.88	0.94	0.96	0.64	0.78	0.43	0.88	0.96	0.89
8	9		0.70	0.09	0.34	1.06	0.95	0.94	0.96	0.64	0.76	0.45	0.75	0.03	0.68	0.28	0.37	1.09	0.88	0.94	0.96	0.64	0.78	0.43	0.88	0.96	1.03
10	9		0.70	0.09	0.34	1.06	0.95	0.94	0.96	0.64	0.76	0.45	0.75		0.89	0.21	0.22	0.84	0.76	1.15	1.18	0.70	0.77	0.57		1.08	1.03
10	11	0.17	0.72	0.18	0.27	0.90	0.88	1.18	1.17	0.65	0.71	0.50			0.89	0.21	0.22	0.84	0.76	1.15	1.18	0.70	0.77	0.57		1.08	1.12
12	11	0.17	0.72	0.18	0.27	0.90	0.88	1.18	1.17	0.65	0.71	0.50		0.04	0.77	0.16	0.18	0.92	0.80	1.20	1.17	0.66	0.73	0.52	0.92	0.96	1.12
12	13			0.22	0.29	0.90	0.86	1.24	1.18	0.68	0.75	0.44	0.86	0.04	0.77	0.16	0.18	0.92	0.80	1.20	1.17	0.66	0.73	0.52	0.92	0.96	0.88
14	13			0.22	0.29	0.90	0.86	1.24	1.18	0.68	0.75	0.44	0.86	0.01		0.30	0.48	0.96	0.87	1.24	1.19	0.67	0.79	0.42	0.94	1.00	0.88
14	15			0.36	0.50	0.99	0.82	1.20	1.23	0.65	0.78	0.41		0.01		0.30	0.48	0.96	0.87	1.24	1.19	0.67	0.79	0.42	0.94	1.00	1.05
共有样品数	15			0.36	0.50	0.99	0.82	1.20	1.23	0.65	0.78	0.41		9	6	15	15	15	15	15	15	15	15	15	6	14	1.05

药材	α
	α														0.548	0.576	0.684	0.804	0.895	1.000	1.127	1.289	1.356	1.419	1.506	1.573	1.607	1.790
	1			0.32	0.28		1.000		1.01	0.03		0.30	1.67		0.548	0.576	0.684	0.804	0.895	1.000	1.127	1.289	1.356	1.419	1.506	1.573	1.607	1.790
2	1			0.32	0.28		1.000		1.01	0.03		0.30	1.67				0.54	0.21		1.000		0.93	0.07		0.28	1.54		1.31
2	3			0.40	0.25		1.000		0.90	0.05		0.32	1.60				0.54	0.21		1.000		0.93	0.07		0.28	1.54		1.31	1.28
4	3			0.40	0.25		1.000		0.90	0.05		0.32	1.60			1.94		0.20		1.000		0.88			0.40	1.81	0.02	1.35	1.28
4	5		1.88		0.24		1.000		0.78			0.38	1.76	0.03		1.94		0.20		1.000		0.88			0.40	1.81	0.02	1.35	1.30
6	5		1.88		0.24		1.000		0.78			0.38	1.76	0.03		2.00		0.27		1.000		0.84			0.41	1.70	0.01	1.32	1.30
6	7	0.40	1.56		0.30		1.000		0.94			0.35	1.59			2.00		0.27		1.000		0.84			0.41	1.70	0.01	1.32	1.44
8	7	0.40	1.56		0.30		1.000		0.94			0.35	1.59		0.32	1.66		0.26		1.000		1.04			0.36	1.63		1.41	1.44
8	9	0.38	1.66		0.25		1.000		0.61			0.37	1.67		0.32	1.66		0.26		1.000		1.04			0.36	1.63		1.41	1.29
10	9	0.38	1.66		0.25		1.000		0.61			0.37	1.67						0.77	1.000	0.21	0.67			0.28	1.56		1.48	1.29
10	11				0.23	0.70	1.000	0.18	0.73			0.30	1.65						0.77	1.000	0.21	0.67			0.28	1.56		1.48	1.45
12	11				0.23	0.70	1.000	0.18	0.73			0.30	1.65					0.27	0.75	1.000	0.12	0.86			0.29	1.71		1.47	1.45
12	13				0.26		1.000		0.87		0.31	0.32	1.78					0.27	0.75	1.000	0.12	0.86			0.29	1.71		1.47	1.35
14	13				0.26		1.000		0.87		0.31	0.32	1.78					0.20		1.000		1.01		0.31	0.34	1.76		1.37	1.35
14	15				0.22		1.000		1.04		0.33	0.35	1.74					0.20		1.000		1.01		0.31	0.34	1.76		1.37	1.33
共有样品数	15				0.22		1.000		1.04		0.33	0.35	1.74		3	6	3	14	3	15	3	15	3	3	15	15	3	14	1.33

药材	α
	α														1.820	1.882	2.002	2.056	2.166	2.222	2.300	2.397	2.560	2.670	2.735	2.966	3.021	3.140	3.238
	1		0.66				1.530		1.44	0.11		0.34	0.38		1.820	1.882	2.002	2.056	2.166	2.222	2.300	2.397	2.560	2.670	2.735	2.966	3.021	3.140	3.238	0.24
2	1		0.66				1.530		1.44	0.11		0.34	0.38			0.63		0.54		1.590		1.50		0.10		0.36	0.41	0.02	0.28	0.24
2	3		0.65		0.55		1.530		1.46	0.09		0.38	0.42			0.63		0.54		1.590		1.50		0.10		0.36	0.41	0.02	0.28	0.22
4	3		0.65		0.55		1.530		1.46	0.09		0.38	0.42		0.77	0.74		0.60		1.480		1.25		0.11		0.37	0.45			0.22
4	5	0.75	0.73		0.58				1.41	0.08		0.40	0.43		0.77	0.74		0.60		1.480		1.25		0.11		0.37	0.45
6	5	0.75	0.73		0.58				1.41	0.08		0.40	0.43		0.68	0.76		0.57		1.450		1.42		0.09		0.35	0.41
6	7		0.78		0.63	0.04	1.430		1.48	0.10		0.39	0.39		0.68	0.76		0.57		1.450		1.42		0.09		0.35	0.41
8	7		0.78		0.63	0.04	1.430		1.48	0.10		0.39	0.39			0.80		0.62		1.400		1.49	0.08	0.11		0.33	0.41	0.01
8	9		0.81		0.59		1.550		1.51	0.10		0.34	0.41	0.02		0.80		0.62		1.400		1.49	0.08	0.11		0.33	0.41	0.01
10	9		0.81		0.59		1.550		1.51	0.10		0.34	0.41	0.02		0.63	0.10	0.66		1.570		1.43		0.08		0.38	0.35
10	11		0.65	0.11			1.600		1.45	0.07		0.35	0.38			0.63	0.10	0.66		1.570		1.43		0.08		0.38	0.35
12	11		0.65	0.11			1.600		1.45	0.07		0.35	0.38			0.61	0.15	0.68		1.580		1.46		0.10		0.40	0.39
12	13		0.60		0.68		1.500	1.21	1.51	0.09	0.16	0.33	0.40			0.61	0.15	0.68		1.580		1.46		0.10		0.40	0.39
14	13		0.60		0.68		1.500	1.21	1.51	0.09	0.16	0.33	0.40			63.00		0.67		1.510	1.15	1.53		0.08	0.13	0.37	0.43		0.06
14	15				0.63		1.53	1.20	1.50	0.10	0.15	0.36	0.43			63.00		0.67		1.510	1.15	1.53		0.08	0.13	0.37	0.43		0.06
共有样品数	15				0.63		1.53	1.20	1.50	0.10	0.15	0.36	0.43		3	14	3	13	1	14	3	15	1	15	3	15	15	3	4

药材	α
	α													3.298	3.384	3.460	3.526	3.580	3.742	3.789	3.822	3.902	4.068	4.179	4.436	4.503	4.579
	1	0.67		1.10	0.58				0.50		0.06			3.298	3.384	3.460	3.526	3.580	3.742	3.789	3.822	3.902	4.068	4.179	4.436	4.503	4.579
2	1	0.67		1.10	0.58				0.50		0.06			0.65	0.09	1.14	0.57				0.56		0.04	0.78		0.05	0.03
2	3	0.68	0.11	1.19	0.60				0.53		0.03	0.77		0.65	0.09	1.14	0.57				0.56		0.04	0.78		0.05	0.03
4	3	0.68	0.11	1.19	0.60				0.53		0.03	0.77		0.66			0.61		1.740					0.79
4	5	0.67			0.60		1.700			0.27		0.80	0.93	0.66			0.61		1.740					0.79
6	5	0.67			0.60		1.700			0.27		0.80	0.93	0.69			0.59		1.760					0.76	0.80
6	7	0.66			0.57	0.31			0.44			0.78		0.69			0.59		1.760					0.76	0.80
8	7	0.66			0.57	0.31			0.44			0.78		0.65			0.56	0.29						0.77
8	9	0.67			0.58	0.28			0.47			0.79		0.65			0.56	0.29						0.77
10	9	0.67			0.58	0.28			0.47			0.79					0.60							0.76	0.01
10	11	0.70			0.61			0.03				0.81					0.60							0.76	0.01
12	11	0.70			0.61			0.03				0.81		0.69			0.60			0.01				0.79
12	13	0.67			0.59					0.16		0.78		0.69			0.60			0.01				0.79
14	13	0.67			0.59					0.16		0.78		0.71			0.60					0.18		0.76
14	15	0.69			0.61					0.13		0.77		0.71			0.60					0.18		0.76
共有样品数	15	0.69			0.61					0.13		0.77		14	2	3	15	3	3	2	5	4	3	14	3	1	1

药材	α
	α					4.632	5.175	5.530	5.650	5.764
	1		2.14			4.632	5.175	5.530	5.650	5.764	0.12
2	1		2.14				2.18			0.08	0.12
2	3		2.20				2.18			0.08	0.09
4	3		2.20				2.08	0.66			0.09
4	5		2.10	0.67			2.08	0.66
6	5		2.10	0.67			2.14	0.63
6	7		1.96		0.07		2.14	0.63
8	7		1.96		0.07		1.98		0.04
8	9		2.06		0.10		1.98		0.04
10	9		2.06		0.10	0.04	2.10
10	11	0.03	1.94	0.83		0.04	2.10
12	11	0.03	1.94	0.83		0.01	1.99	0.88
12	13		2.00			0.01	1.99	0.88
14	13		2.00				2.09
14	15		2.07				2.09
共有样品数	15		2.07			3	15	5	3	3

总峰数：61

列表的原则与鉴定原则相同，首先设定一窗口，设定为1％，即各样品中相对保留值的差异在1％的范围内者，可列于同一项中，可认为它们是相同化合物的色谱峰。表中α值为该项中相对保留值的平均值，表格中数字为色谱峰的归一化面积值。

表1清楚地表明了有些色谱峰可在所有样品中均存在，而有些色谱峰则不然，仅在部分样品中出现。那些所有样品中均存在着的色谱峰可以认定是这品种所特有，由于它们并非系一、二个色谱峰，而是有相当数量的一大群色谱峰所构成，对一个个色谱峰称为特征指纹峰，由一大群特征指纹峰构成了特征指纹。由此实现了从多组分的角度来反映中药样品的内在特征。因此，根据中药的色谱指纹谱中的特征指纹来判别和鉴定中药时，使它的结论将具有更客观、更科学和更公正的特点。

特征指纹峰的入选条件，首先应是全部样品所共有，其次是百分之九十以上样品所共有者，在比较分散的情况下，可以考虑百分之八十以上样品所共有者。另外，已被认定是这类药材的有效成分或特殊成分。例如麝香中的麝香酮，牛膝中的齐墩果酸，何首乌中的白藜芦醇甙，细辛中的黄樟醚、黄芪中的黄芪甲甙。这些成分有些是药效成分，有些是能获得其标准品的特征成分。它们的存在对药物的鉴定具有重要的意义。在表1中也看到有些色谱峰仅为个别或少数中药样品所含有，可认为是样品的个体差异或其他特殊情况，对中药的品种鉴定无实质性意义，作模糊处理，可予以忽略。此外，尚需考虑特征指纹峰在总数中所占比例，如所占比例较小，则说明只抓小头放了大头。因此要求特征指纹中色谱峰数目以大于总数的百分之六十为宜。如达不到该指标，说明在取样中存在问题，即所选的这些标准药材间有较大差异，需进一步探究它们的来源，包括品种的基源，产地，采集时间，药用部位，保存方式和时间等诸因素。也需对操作步骤，色谱条件，数据处理等诸方面进行复核。还需指出，由于中药为生物样品，其指纹特征不可能一成不变，随着时日变迁，尽管都是同一品种、统一产地，相同采集、保管方式，但生物体的变异是绝对的。所以，对特征指纹要经常修正。建议，在做鉴定时应随行由中国药品生物制品检定所提供的标准药材同步测试，使统一在国家标准范围内。按上述原则所确立的特征指纹和对各待鉴药材的鉴定情况列于表2。

表2 七个药材的特征指纹谱鉴定表

^*α	0.109	0.128	0.141	0.168	0.198	0.222	0.252	0.284	0.404	0.496	0.804	1.000	1.289	1.506	1.573	1.790	1.882	2.050
^*α	0.109	0.128	0.141	0.168	0.198	0.222	0.252	0.284	0.404	0.496	0.804	1.000	1.289	1.506	1.573	1.790	1.882	2.050	^**Ar	0.272	0.342	0.978	0.830	1.120	1.089	0.632	0.747	0.460	1.003	0.246	1.000	0.874	0.336	1.678	1.368	0.691	0.615
^***特征指纹值	0.15	0.38	1.24	0.89	1.34	1.12	0.59	0.74	0.45	0.96	0.28	1.000	0.21	0.34	1.67	1.35	0.77	0.67	^**Ar	0.272	0.342	0.978	0.830	1.120	1.089	0.632	0.747	0.460	1.003	0.246	1.000	0.874	0.336	1.678	1.368	0.691	0.615
^***特征指纹值	0.15	0.38	1.24	0.89	1.34	1.12	0.59	0.74	0.45	0.96	0.28	1.000	0.21	0.34	1.67	1.35	0.77	0.67	^****特征指纹差异率	0.448	0.111	0.268	0.072	0.196	0.028	0.066	0.009	0.022	0.043	0.138	0	0.760	0.012	0.005	0.013	0.114	0.089
鉴1	0.40	1.20	0.95	1.41	1.22	0.65	0.80	0.51	0.50	0.93	0.34	1.00	0.30	0.46	1.81	1.49	1.83	0.79	^****特征指纹差异率	0.448	0.111	0.268	0.072	0.196	0.028	0.066	0.009	0.022	0.043	0.138	0	0.760	0.012	0.005	0.013	0.114	0.089
鉴1	0.40	1.20	0.95	1.41	1.22	0.65	0.80	0.51	0.50	0.93	0.34	1.00	0.30	0.46	1.81	1.49	1.83	0.79		0.470	2.509	0.028	0.699	0.089	0.403	0.266	0.317	0.087	0.073	0.382	0	0.657	0.369	0.078	0.089	1.648	0.284
鉴2	0.32	0.53	0.99	0.95	1.25	0.98	0.71	0.82	0.39	0	0.30	1.00	0.25	0.38	1.72	1.28	0	0.72		0.470	2.509	0.028	0.699	0.089	0.403	0.266	0.317	0.087	0.073	0.382	0	0.657	0.369	0.078	0.089	1.648	0.284
鉴2	0.32	0.53	0.99	0.95	1.25	0.98	0.71	0.82	0.39	0	0.30	1.00	0.25	0.38	1.72	1.28	0	0.72		0.176	0.550	0.012	1.440	0.116	0.100	0.123	0.098	0.152	1.000	0.219	0	0.714	0.131	0.025	0.640	1.000	0.171
鉴3	0.09	0.33	1.34	0.95	1.40	1.07	0.57	0.81	0.43	0.98	0.30	1.00	0.18	0.29	1.59	1.29	0.83	0.64		0.176	0.550	0.012	1.440	0.116	0.100	0.123	0.098	0.152	1.000	0.219	0	0.714	0.131	0.025	0.640	1.000	0.171
鉴3	0.09	0.33	1.34	0.95	1.40	1.07	0.57	0.81	0.43	0.98	0.30	1.00	0.18	0.29	1.59	1.29	0.83	0.64		0.669	0.035	0.370	0.144	0.250	0.017	0.098	0.084	0.065	0.023	0.219	0	0.794	0.137	0.052	0.057	0.201	0.040
鉴4	0	0.32	1.20	0.81	1.29	1.10	0.68	0	0	0	0	1.00	0	0	0	0	0	0		0.669	0.035	0.370	0.144	0.250	0.017	0.098	0.084	0.065	0.023	0.219	0	0.794	0.137	0.052	0.057	0.201	0.040
鉴4	0	0.32	1.20	0.81	1.29	1.10	0.68	0	0	0	0	1.00	0	0	0	0	0	0		1.000	0.064	0.227	0.024	0.152	0.010	0.076	1.000	1.000	1.000	1.000	0	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000
鉴5	0.13	0	1.22	0.93	1.38	1.08	0.58	0.83	0.40	1.00	0.31	1.00	0.25	0.30	1.56	1.31	1.20	1.50		1.000	0.064	0.227	0.024	0.152	0.010	0.076	1.000	1.000	1.000	1.000	0	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000
鉴5	0.13	0	1.22	0.93	1.38	1.08	0.58	0.83	0.40	1.00	0.31	1.00	0.25	0.30	1.56	1.31	1.20	1.50		0.522	1.000	0.247	0.120	0.232	0.008	0.082	0.111	0.130	0.003	0.260	0	0.714	0.107	0.070	0.042	0.736	1.439
鉴6	0.21	0.40	1.19	0.70	1.27	1.10	0	0.70	0.48	0.90	0.20	1.00	0.23	0.35	1.70	1.31	0.75	0.63		0.522	1.000	0.247	0.120	0.232	0.008	0.082	0.111	0.130	0.003	0.260	0	0.714	0.107	0.070	0.042	0.736	1.439
鉴6	0.21	0.40	1.19	0.70	1.27	1.10	0	0.70	0.48	0.90	0.20	1.00	0.23	0.35	1.70	1.31	0.75	0.63		0.228	0.169	0.001	0.156	0.134	0.010	1.000	0.063	0.043	0.102	0.187	0	0.737	0.041	0.013	0.042	0.085	0.024

2.222	2.397	2.670	2.966	3.021	3.298	3.581	4.179	5.175	合计	特征指纹检出率	总差异率	重叠率
2.222	2.397	2.670	2.966	3.021	3.298	3.581	4.179	5.175	合计	特征指纹检出率	总差异率	重叠率	1.518	1.456	0.094	0.356	0.406	0.676	0.591	0.779	2.068	27
1.53	1.44	0.11	0.34	0.38	0.67	0.60	0.78	2.14	27	100％			1.518	1.456	0.094	0.356	0.406	0.676	0.591	0.779	2.068	27
1.53	1.44	0.11	0.34	0.38	0.67	0.60	0.78	2.14	27	100％			0.008	0.011	0.170	0.045	0.064	0.009	0.015	0.001	0.035	0.102	0.102％	100％
1.59	1.50	0	0.40	0.45	0.71	0.58	0.70	2.18	26	96％			0.008	0.011	0.170	0.045	0.064	0.009	0.015	0.001	0.035	0.102	0.102％	100％
1.59	1.50	0	0.40	0.45	0.71	0.58	0.70	2.18	26	96％			0.047	0.030	1.000	0.123	0.108	0.050	0.018	0.101	0.054	0.370	0.370％	83.3％
1.53	1.40	0.11	0.39	0.43	0.69	0.61	0.75	0	24	89％			0.047	0.030	1.000	0.123	0.108	0.050	0.018	0.101	0.054	0.370	0.370％	83.3％
1.53	1.40	0.11	0.39	0.43	0.69	0.61	0.75	0	24	89％			0.008	0.038	0.170	0.095	0.059	0.021	0.032	0.037	1.000	0.231	0.231％	74.3％
1.48	1.35	0.08	0.29	0.41	0.63	0.55	0.70	1.98	27	100％			0.008	0.038	0.170	0.095	0.059	0.021	0.032	0.037	1.000	0.231	0.231％	74.3％
1.48	1.35	0.08	0.29	0.41	0.63	0.55	0.70	1.98	27	100％			0.250	0.073	0.149	0.185	0.010	0.068	0.069	0.101	0.042	0.135	0.135％	89.5％
0	1.25	0	0.48	0.39	0	0	0	0	10	37％			0.250	0.073	0.149	0.185	0.010	0.068	0.069	0.101	0.042	0.135	0.135％	89.5％
0	1.25	0	0.48	0.39	0	0	0	0	10	37％			1.000	0.141	1.000	0.248	0.039	1.000	1.000	1.000	1.000	0.669	0.669％	54.0％
1.48	1.38	0.08	0.31	0.41	0.70	1.76	0.72	2.15	26	96％			1.000	0.141	1.000	0.248	0.039	1.000	1.000	1.000	1.000	0.669	0.669％	54.0％
1.48	1.38	0.08	0.31	0.41	0.70	1.76	0.72	2.15	26	96％			0.025	0.052	0.149	0.129	0.010	0.035	1.978	0.075	0.039	0.308	0.308％	85.7％
1.60	1.40	0.07	0.30	0.35	0.66	0.58	0.84	1.94	26	96％			0.025	0.052	0.149	0.129	0.010	0.035	1.978	0.075	0.039	0.308	0.308％	85.7％
1.60	1.40	0.07	0.30	0.35	0.66	0.58	0.84	1.94	26	96％			0.054	0.038	0.255	0.157	0.138	0.023	0.018	0.078	0.062	0.143	0.143％	85.3％

^*α-标准药材特征指纹峰的相对保留值。

^**Ar-标准药材特征指纹峰的归一化面积均值。

^***特征指纹值—国家标准药材特征指纹归一化面积值。

^*****特征指纹差异率—国家标准药材与标准药材特征指纹归一化面积值差异率。

表2以某中药为例，列出了经统计处理后标准药材的特征指纹及每个特征指纹峰的面积归一化均值，同时还列出了国家标准药材和6个待检药材的特征指纹与标准药材的差异率和总差异率以及各药材的特征指纹检出率。该表将各项重要的鉴定参数综合在一起，便于分析研究。表2充分显示了国家标准药材在指纹谱鉴定中的良好表现，其总差异率为0.102％，特征指纹检出率为100％，重叠率也为100％；而待鉴药材4，其总差异率为0.669％，特征指纹检出率为37％，重叠率为54％，将被判为不合格品种。为了直观地看到鉴定的情况，还可以特征指纹为基准，绘出他们的差异率折线图，见图一。

本发明又提供了上述一种中药特征指纹谱的相似率和差异率。

以上内容所涉及的共有峰、重叠峰、n强峰、特征指纹和归一化面积值等参数分别从定性鉴别和量化描述两个方面反映了中药样品的内在特性。但在对中药作出明确的鉴定时，尚需有数据作依据。为此需将上述各项参数按其贡献予以综合表达。

相似率和差异率是一个表示待检药材与标准药材间的相似程度的数据，它将定性信息与定量数据综合于一体，作为最终鉴定的重要依据。

相似率，是以特征指纹为基础，对此求出待检药材与标准药材间相似或差异，通过它可显示出两者在特征指纹上的相似性。首先计算每个特征指纹间的相似率，见下式：

某个特征指纹的相似率＝AI鉴/AI标*100％

然后对所有的特征指纹相似率求和得其总相似率，见下式：

总相似率＝∑(AI鉴/AI标)/n...........................................(1)

Ai^鉴：待检药材中某个特征指纹的归一化面积值

Ai^标：标准药材中某个特征指纹的归一化面积值

n：特征指纹的总数

∑：求和符号

按(1)式计算时，可能会遇到下列两种情况，当Ai鉴都小于Ai标时，结果很清楚，其求和后之相似率比小于“1”，其间各值在求和过程中虽有一定的“拉平”作用，但这都是在标准以下的平均。但若出现多个Ai鉴大于Ai标时，且大出好几倍时，该求和过程已不再是拉平作用，而变成“填平”作用，因为它可以将许多小坑，即较小的差异都填平了，这有违于建吕相似率时的原意。此外，按相似率的含义，当相似率等于1时，表示两者完全相同；若小于1时，则表示两者的相似程度；当大于1时，就不易解释清楚了。为能客观地表示待检药材的鉴定结果，在此基础上提出了差异率的概念。差异率的定义是以每个特征指纹峰与其相应的标准特征指纹峰的面积归一化值间的比值来表示两者间的差异程度，总差异率则是将每个特征指纹峰的差异率求和即得总差异率愈大，表示比较双方相差愈大，说明待检药材不可能是欲鉴定的品种，而总差异率愈小，则为欲鉴定品种的可能性愈大。另外，待鉴药材与标准特征指纹相比较，可得到特征指纹检出率，此也是表示差异的重要数据。现对每个特征指纹计算其差异率，计算式如下：

特征指纹差异＝|AI^标-AI^鉴|AI^标........................................(2)

材中无某个相应的特征指纹时，Ai^鉴＝0，则该特征指纹差异率为1；若Ai^标＜Ai^鉴时，则取绝对值。因此，在计算总差异率时是所有差异的求和，避免了填平作用，能客观地反映待鉴药材的差异情况，总差异率可按下式计算：

总差异率＝∑(|AI标-AI鉴|/AI标)/n..................................(3)

本发明所要解决的另一技术问题是提供了上述一种中药特征指纹谱的应用。

共有峰和重叠率是中药鉴定中的重要参数，也是构成色谱指纹谱的基础。共有峰是重叠率的基础，它反映了待鉴药材中有多少成分与标准药材相同，显示了两者间的相似程度。可以说，在所有涉及的参数中，重叠率是最全面、最客观地反映了两个参与比较药材间的相似或差异。由于所有的色谱峰均被计入重叠率计算之中，因此一些反映个体特性的色谱峰也计入，这对品种的鉴定将会造成一定的干扰使重叠率偏低。这情况在前期的应用中已时有遭遇，有些药材在鉴定过程中证明其与标准药材同样含有那些有效成分、主要成分(含量较高的成分)或指标成分、特殊成分，在内在特性的重要内容方面是相符的，但两者的重叠率较低。此时若轻率地作出否定的结论，显然不合适。若能将反映个体差异的色谱群予以模糊处理使品种的特征被显示出来，则将会得到更真实的鉴定结果。

特征指纹，是模糊处理的结果，作为植物种属的代表性特征。使进一步的鉴定工作更客观和合理，必须有一规范化的设计。首先是取材问题，要有几个批号的标准药材，所谓几个批号是指同一产地和不同产地在不同的取样点取多批样品。样本数大小的问题，原则上是愈大愈好，一般说来，应符合统计学的要求，至少5个以上，建议在20左右，使符合中药质量分析要求。因此使特征指纹并非得自某一标准药材，而是十个、二十个样品的统计值，特别是每个α值所对应的面积归一化只是个样品的均值，其次是标准化的色谱操作条件，以增强其可比性。

特征指纹峰检出率，这是在鉴定工作中经常用的，即在待鉴药材与特征指纹作比较时，能在待鉴药材中找到的特征指纹峰数与特征指纹峰总数的比值。

特征指纹检出率＝待鉴药材中的特征指纹峰数/特征指纹峰总数

该检出率是鉴定药材时的重要依据，检出率达100％者，说明该药材在内在品质的主要方面已达到该品种的质量要求，但这还不能作为鉴定的唯一依据，尚需对其所含各特征指纹峰进一步作量的方面考察，以保证药用的安全性。

特征指纹的差异率，特征指纹的检出率，仅指明了特征指纹峰的有或无，“无”为零是显而易见的，“有”则究竟有多少，这也是个重要的问题，在目前，一不知它们为何物，二不具有它们的标准品，怎样进行量化。显然，不可能绝对定量，但相对定量是完全可能的。上节对差异率和总差异率均已有详细说明，具体的运作可见下章所列各例。特别提请读者注意的是，在中药鉴定过程中会遇到各种特殊情况，需谨慎处之。

特征指纹曲线

特征指纹曲线是由特征指纹和各指纹峰相应的面积归一化值所构成，以曲线图的方式说明某中药特征指纹的情况。它是一种直观图，以曲线的形式同时将每个特征指纹峰的质和量显示出来。如在同一坐标系统内将待鉴药材与相应标准的特征指纹峰同时显示出来，则将清楚地看到两者的相似程度。虽然，这是一种直观感觉，进一步的阐明尚有赖于其它参数的应用，但他对鉴定的结果可起到良好的辅助作用。

特征指纹的用途不仅限于含有相同有效成分的不同中药间区分和鉴别，而主要用于品种的鉴定，因为同属不同品种间的区分和鉴定需要更多而细致的信息，特征指纹正好满足这一要求。特征指纹还能为中成药所含药味的鉴定提供依据，解决了长期来一直令人困惑的难题。它不仅可以明确地告知该味中药的存在与否，还能区分掺伪作假或误用同属植物。

附图说明图1 黔岭淫羊藿叶(贵州黔岭山)HPLC图谱图2 黔岭淫羊藿叶(上海市药材公司)HPLC图谱图3 黔岭淫羊藿茎(贵州黔岭山)HPLC图谱图4 巫山淫羊藿叶茎(贵州)HPLC图谱图5 巫山淫羊藿根(陕西安康)HPLC图谱图6 巫山淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱图7 巫山淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱图8 煎叶淫羊藿茎(陕西安康)HPLC图谱图9 煎叶淫羊藿叶(陕西安康)HPLC图谱图10 煎叶淫羊藿叶(安徽)HPLC图谱图11 煎叶淫羊藿茎(安徽)HPLC图谱图12 煎叶淫羊藿叶茎(广西灵山)HPLC图谱图13 宝兴淫羊藿叶(云南)HPLC图谱图14 宝兴淫羊藿茎(云南)HPLC图谱图15 宝兴淫羊藿叶茎(湖南)HPLC图谱图16 柔毛淫羊藿茎(四川灌县)HPLC图谱图17 柔毛淫羊藿叶(四川灌县)HPLC图谱图18 朝鲜淫羊藿叶(河南洛阳)HPLC图谱图19 朝鲜淫羊藿叶茎(辽宁)HPLC图谱图20 朝鲜淫羊藿叶茎(青海药检所)HPLC图谱图21 淫羊藿叶茎(江苏无锡)HPLC图谱图22 淫羊藿叶茎(浙江临安)HPLC图谱图23 淫羊藿叶茎(陕西)HPLC图谱图24 1号样品生半夏的HPLC图谱图25 2号样品生半夏的HPLC图谱图26 3号样品生半夏的HPLC图谱图27 4号样品生半夏的HPLC图谱图28 5号样品制半夏的HPLC图谱图29 6号样品制半夏的HPLC图谱图30 11号样品制半夏的HPLC图谱

具体实施方式实施例1

植物样品1.北柴胡 Bupleurum chinense DC2.多枝柴胡 B.polycloxum Y.LIetS.L.Pan3.线叶柴胡 B.angustissmum[Franch]Ditagawa4.窄竹叶柴胡 B.margInatum Wall.Ex DC var stenophyllum

[Wolff]shan et Li5.泸西柴胡 B.luxiense Y.LI et S.L.Pan6.丽江柴胡 B.rocfkiI Wolff7.韭叶柴胡 B.kunmingense Y.Li et S.L.Pan8.小柴胡 B.hamiltonii Belak9.空心柴胡 B.longicaule Woll.ex DC.var.franchetii de Boiss10.柴首柴胡 B.chaIshoui Shan et Sheh11.红柴胡 B.scorzonerifolIum Willa12.汶川柴胡 B.wenchuanse Shau et Y.Li13.马尔康柴胡 B.malconense Shan et Y.Li14.黑柴胡 B.Smithii Wolff15.大苞柴胡 B.euphorbIoIdes Nakai16.小叶黑柴胡 B.Smithii Wolff var.parvIfoluim Shan et Y.Li17.竹叶柴胡 B.marginatum Wall.ex DC18.大叶柴胡 B.1ongiradiatum Turcz19.青海柴胡 B.qinghaiense Y.Li et Guo sp.nov.

样品制备

分别取上述19种植物样品粗粉各300克，以水蒸汽蒸馏法提取挥发油，然后配成1％乙醚溶液备用。

仪器及色谱条件

仪器 GC-R1A[日本-岛津]

色谱条件色谱柱Chromosorb W AW DMCS 10％PEG-20M；

柱温 170c 进样温度 220c

载气 N2 40ml/min 检测器 FID

灵敏度 1 衰减 2

进样量 0.5微升分析时间 60min

定量方法面积归一化法

气相色谱相对保留值指纹谱的建立

由于植物挥发油的组成十分复杂，色谱峰多而密集，难以插入一个合适的外参照物。为此，本研究采用内参照物，选择一个在19个挥发油样品中均存在的成分作为内参照烽，它的出峰时间接近中心出峰时间，又与邻近组分能较好地分离，且有一定的峰面积。按前面章节所介绍的方法对各样品中之待定内参照峰进行定位，即在19个样品中分别加入相同的标准品，分别进样分析，由所得色谱数据求出各样品中待定位内参照峰与加入标淮品的相对保留值，核对各样品的α值使它们的内参照峰获得正确定位，保证所有的样品色谱指纹谱均建立在统一内标峰的基础上，大大增强了它们间的可比性。在建立色谱指纹谱时，首先将各色谱峰的相对保留值按大小依次排队，并在每个α值项下标出该色谱峰所对应的相对百分含量。随即得到某样品的GC-相对保留值指纹谱，见表3。

表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus

SampleNo.12345678910111213141516171819	Relative retention value
	Relative retention value																					0.046	0.052	0.057	0.062	0.066	0.070	0.081	0.086	0.093	0.098	0.109	0.118	0.130	0.140	0.147	0.155	0.166	0.173	0.184	0.195	0.209
	Content(％)																					0.046	0.052	0.057	0.062	0.066	0.070	0.081	0.086	0.093	0.098	0.109	0.118	0.130	0.140	0.147	0.155	0.166	0.173	0.184	0.195	0.209
	Content(％)																					0.9021.34.156.327.574.90	35.20.521.8721.80.143.1011.7	0.115.406.130.472.301330.31	0.2321.60.600.881.652.177.970.587.870.3917.320.6	18.45.701.700.040.691.71	0.245.600.407.192.362.302.040.221.1718.72.902.956.771.640.236.90	0.380.494.361.693.5112.22.251.30	0.300.090.10	0.300.200.800.120.380.210.530.660.170.070.650.010.91	0.870.901.300.202.050.052.100.640.600.440.27	1.327.800.300.805.020.373.400.300.530.570.130.050.140.08	0.700.400.390.330.200.313.390.754.740.431.520.822.00	1.043.900.702.902.773.500.905.603.662.522.192.500.960.701.520.250.70	0.521.200.502.303.370.950.861.351.561.96	1.100.830.351.160.801.060.911.42	0.810.241.948.37	1.201.760.45	1.621.404.4015.21.711.110.903.611.517.761.615.413.00	7.801.462.105.409.855.066.40	4.120.800.651.682.811343.444.653.3810.16.092.80	1.405.101.101.802.141.212.311.817.490.90
	Peaknumber	6	7	7	12	6	16	8	3	18	11	14	13	17	10	8	4	3	13	7	12	0.9021.34.156.327.574.90	35.20.521.8721.80.143.1011.7	0.115.406.130.472.301330.31	0.2321.60.600.881.652.177.970.587.870.3917.320.6	18.45.701.700.040.691.71		0.380.494.361.693.5112.22.251.30	0.300.090.10	0.300.200.800.120.380.210.530.660.170.070.650.010.91	0.870.901.300.202.050.052.100.640.600.440.27	1.327.800.300.805.020.373.400.300.530.570.130.050.140.08	0.700.400.390.330.200.313.390.754.740.431.520.822.00		0.521.200.502.303.370.950.861.351.561.96	1.100.830.351.160.801.060.911.42	0.810.241.948.37	1.201.760.45	1.621.404.4015.21.711.110.903.611.517.761.615.413.00	7.801.462.105.409.855.066.40	4.120.800.651.682.811343.444.653.3810.16.092.80	1.405.101.101.802.141.212.311.817.490.90	10

表3 GC-FPS of species of Bupleurum genus continued

SampleNo.12345678910111213141516171819	Relative retention value(a)
	Relative retention value(a)																					0.222	0.229	0.252	0.274	0.291	0.310	0.321	0.350	0.370	0.397	0.423	0.459	0.478	0.497	0.535	0.550	0.602	0.660	0.715	0.737	0.788
	Content(％)																					0.222	0.229	0.252	0.274	0.291	0.310	0.321	0.350	0.370	0.397	0.423	0.459	0.478	0.497	0.535	0.550	0.602	0.660	0.715	0.737	0.788
	Content(％)																					8.3013.54.800.9416.5	1.460.804.006.402.664.003.352.3018.31.710.894.920.70	3.361.601.304.201.192.706.110.629.195.297.163.2912.04.30	3.512.401.321.501.501.943.592.493.974.859.6612.5	2.301.703.803.552.050.603.733.401.571.472.583.870.603.47	1.600.880.482.672.954.90	2.290.802.801.660.950.900.831.841.731.97	2.371.902.040.201.060.733.071.118.601.410.991.890.80	1.304.206.700.204.842.301.124.221.8111.0	1.860 800.500.650.500.800.960.650.770.241.530.820.50	0.300.600.301.370.400.220.280.460.060.04	0.110.610.250.770.290.600.400.531.960.440.050.500.060.010.461.70	0.920.030.050.08	0.400.020.312.050.370.382.30	5.720.202.100.701.205.274.910.850.872.581.002.90	2.202.121.800.503.401.212.721.82	0.260.400.050.300.300.300.530.420.260.151.060.03	14.610.90.6022.62.656.204.104.9013.811.29.682.977.222.392.823.2211.74.372.10	5.210.900.701.990.701.701.793.004.472.300.453.332.050.91	0.204.012.130.90	1.811.802.100.800.604.202.929.221.330.731.971.003.774.473.560.50
	Peaknumber	5	13	14	12	14	6	10	13	10	13	10	16	4	7	12	8	12	19	14	4	8.3013.54.800.9416.5	1.460.804.006.402.664.003.352.3018.31.710.894.920.70	3.361.601.304.201.192.706.110.629.195.297.163.2912.04.30	3.512.401.321.501.501.943.592.493.974.859.6612.5	2.301.703.803.552.050.603.733.401.571.472.583.870.603.47	1.600.880.482.672.954.90	2.290.802.801.660.950.900.831.841.731.97	2.371.902.040.201.060.733.071.118.601.410.991.890.80	1.304.206.700.204.842.301.124.221.8111.0	1.860 800.500.650.500.800.960.650.770.241.530.820.50	0.300.600.301.370.400.220.280.460.060.04		0.920.030.050.08	0.400.020.312.050.370.382.30	5.720.202.100.701.205.274.910.850.872.581.002.90	2.202.121.800.503.401.212.721.82	0.260.400.050.300.300.300.530.420.260.151.060.03		5.210.900.701.990.701.701.793.004.472.300.453.332.050.91	0.204.012.130.90		16

表3 GC-FPS of specieS of Bupleurum genus continued

SampleNo.12345678910111213141516171819	Relative retention value																			PeakNumber
	Relative retention value
	Content(％)
	Content(％)																				0.880.102.030.821.211.70	0.20	0.061.500.371.30	21.64.301.759.605.9115.07.2025.020.415.48.561.769.9314.83.295.665.202.242.10	22.9720.2720.2519.9620.3420.6420.0720.1620.2920.4120.1521.4221.8322.4122.4522.2722.3222.4222.02	0.700.261.961.031.631.540.672.290.441.330.20	2.390.034.032.901.602.101.022.550.602.280.270.20	0.3010.12.584.403.510.403.890.580.35	2.721.861.271.702.590.600.370.251.290.480.59	0.560.900.311.690.240.14	5.143.100.301.402.962.104.306.075.202.470.672.521.795.670.232.210.750.70	1.483.704.401.310.320.460.30	0.800.401.014.860.321.248.060.620.4218.33.19	0.84	5.083.002.902.4116.02.004.815.104.614.750.743.191.794.501.872.101.391.20	0.39	2.131.303.104.901.700.901.612.502.613.840.482.060.560.222.541.12	3.300.855.211.101.601.693.103.361.360.717.550.391.090.71	1.721.123.004.563.201.902.003.102.073.331.120.271.881.04	0.330.442.23	32323032323128323432353126373341353330
	Peaknumber	6	1	4	19	11	12	9	11	6	18	7	11	1	18	1	16	14	14	3	0.880.102.030.821.211.70	0.20	0.061.500.371.30			0.700.261.961.031.631.540.672.290.441.330.20	2.390.034.032.901.602.101.022.550.602.280.270.20	0.3010.12.584.403.510.403.890.580.35	2.721.861.271.702.590.600.370.251.290.480.59	0.560.900.311.690.240.14		1.483.704.401.310.320.460.30	0.800.401.014.860.321.248.060.620.4218.33.19	0.84		0.39		3.300.855.211.101.601.693.103.361.360.717.550.391.090.71	1.721.123.004.563.201.902.003.102.073.331.120.271.881.04	0.330.442.23	32323032323128323432353126373341353330

由表3所列数据可看到许多有意义的情况。首先，19个样品所显示的色谱峰是有差异的，其中有的仅为少数样品所共有，甚至仅为某个样品所独有。当然，其中也有为18或19个样品所共有的，显示了柴胡属或某个品种植物的特征。

指纹谱的各项参数

重叠率以北柴胡的指纹谱为基准，将北柴胡出峰数与欲对比样品出峰数之和作为分母，两者相互共有峰数之两倍作分子，以此分别求出18种柴胡属植物挥发油色谱峰的重叠率，见表4。由表列数据可知，一般柴胡属植物的重叠率均低于70％，仅14号，16号，18号，19号四个样品超过70％。因此需格外关注这四个样品的其它指纹谱参数。

表4 柴胡属植物与北柴胡的重叠率样品序号重叠率序号重叠率样品序号重叠率2 56.3 8 59.4 14 78.33 64.5 9 48.5 15 61.34 59.6 10 59.4 16 745 62.5 11 68.6 17 62.76 63.5 12 50.8 18 75.87 66.7 13 58.6 19 74.2

八强峰综合各样品的出峰情况，出峰总数为68，大部分样品的出峰数在32个左右，其中有两个样品的差异较大，小叶黑柴胡出峰多达41个，马尔康柴胡最少，仅26个。因此在决定n强峰时，规定n＝8。现将19个样品的八强峰情况列表于下。

表5 柴胡属19个样品的八强峰产品 1 2 3 4 5 6 7 8序号％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α ％ α1 21.6 1.00 14.6 .660 5.72 .535 5.21 .715 5.14 1.44 5.08 1.80 4.12 .195 3.51 .2742 18.4 .066 10.9 .660 8.30 .222 7.80 .184 5.40 .057 4.30 1.00 3.90 .130 3.10 1.443 35.2 .052 21.6 .062 5.60 .070 4.40 .173 2.40 .274 1.90 .350 1.75 1.00 1.70 .2914 22.6 .660 15.2 .173 9.60 1.00 5.10 .209 4.20 .525 4.20 .366 4.00 .229 3.80 .2915 13.5 .222 7.19 .070 6.13 .057 5.91 1.00 5.70 .066 5.21 2.20 5.02 .109 4.90 2.076 16.0 1.80 15.0 1.00 6.70 .370 6.40 .229 6.20 .660 3.50 .130 3.20 2.35 2.90 1.167 7.20 1.00 4.80 .222 4.10 .660 3.40 .109 2.30 .070 2.10 .098 2.00 1.80 1.90 2.358 25.0 1.00 6.07 1.44 4.90 .660 4.86 .159 4.84 .370 4.81 1.80 4.40 1.54 2.58 1.209 20.4 1.00 13.8 .660 5.60 .130 5.40 .184 5.20 1.44 5.10 1.80 4.40 1.20 4.20 .78810 15.4 1.00 11.2 .660 9.85 .184 6.11 .252 4.61 1.80 4.47 .715 3.66 1.30 3.51 1.2011 9.68 .660 9.22 .788 8.56 1.00 8.06 1.59 4.91 .535 4.75 1.80 4.22 .370 3.84 2.0712 21.3 .046 18.7 .070 16.5 .222 5.06 .184 3.39 .118 2.97 .660 2.19 .130 2.17 .06213 18.3 .229 13.4 .195 11.0 .370 9.93 1.00 7.22 .660 4.36 .081 3.37 .140 3.19 1.8014 14.8 1.00 13.3 .057 9.19 .252 7.97 .062 7.76 .173 4.15 .046 3.87 .291 3.59 .27415 18.3 1.59 8.60 .350 7.55 2.20 5.67 1.44 5.29 .252 4.74 .118 4.65 .195 4.50 1.8016 21.8 .052 7.87 .062 7.16 .252 6.77 .070 6.32 .046 5.66 1.00 5.41 .173 3.97 .27417 12.2 .081 11.7 .660 10.1 .195 7.57 .046 5.20 1.00 4.92 .229 4.85 .274 3.29 .25218 17.3 .062 12.0 .252 9.66 .274 7.49 .209 6.40 .184 6.09 .195 4.90 .046 4.37 .66019 20.6 .062 12.5 .274 11.7 .052 8.37 .155 6.90 .070 4.90 .310 4.30 .252 3.00 .173

结果与讨论

由于北柴胡的样品批号太少，仅一个，无法从统计角度得出其特征指纹，只能直接从各样品与北柴胡的重叠率和八强峰间的比较来判断它们与北柴胡的相似程度。虽然显得较粗糙，但还是能说明一定问题。有四个样品，14，16，18，19等，它们与北柴胡的重叠率均超过70％，说明它们所含的组分与北柴胡很相似，但从八强峰观之，则差异较大。说明主要组分的含量有较大差异，因此，在作品种鉴定时将可据此给出待鉴样品非北柴胡的结沦。以有毒的大叶柴胡[18号]为例，其重叠率高达75.8％，其八强峰中有三个与北柴胡相同，但三者在大叶柴胡的挥发油总量中仅占20.1％，说明该三个组分并非是大叶柴胡挥发油的主成分。八强峰的比较结果明确显示了两者间的差异，为鉴定堤供判断依据。又，当判定青海柴胡为柴胡属植物的新种时，单凭外形鉴定感到困难，色谱指纹谱将为此堤供必要的证明。青海柴胡虽有高达74.2％的重叠率，但在八强峰的比较中仅一个与北柴胡相同，其量仅为12.5％，据此判断青海柴胡为柴胡属植物的一个新种。

表3的指纹谱还提供了各色谱峰在19个样品中的出现情况，其中α值为0.66和1.00两个色谱峰系19种植物挥发油所共有的组分，α值为1.44和1.80两个色谱峰为18个样品所共有，α值为0.13色谱峰为17种样品所共有，α值为0.070，0.788，和2.07三个色谱峰系16种样品所共有。这些色谱峰可以考虑作为柴胡属植物挥发油的特征峰，并可认作柴胡属植物的特征指纹。至於北柴胡的特征指纹必须从多个批号的样品获得[见下节内容]。但此处所得结伦与以下章节内容也是相互呼应的。

柴胡属植物的HPLC相对保留值指纹谱研究

本研究在上海医科大学生药教研室的支持配合下，提供了十九个不同产地的北柴胡和柴胡属二十五个品种共四十五个样品，为研究工作的开展创造了不可多得的机会，在此再次向潘胜利教授表示深深的感谢和由衷的敬意。下列各样品不仅给出了它们的学名，并标出了它们的产地。特别是十九个不同产地的北柴胡样品形成了不同批号的样品，为北柴胡的指纹谱研究提供了极好的机会，使北柴胡样品的色谱指纹谱具有统计意义，并大大增强了特征指纹的适应性，实用性，代表性。其它的柴胡属植物样品，例如窄竹叶柴胡有来自五个产地的样品，银州柴胡有来自四个产地的样品，线叶柴胡有来自三个产地的样品，红柴胡[窄叶柴胡]有来自三个产地的样品，小叶黑柴胡有来自八个产地的样品，多枝柴胡和锥叶柴胡也各有二个产地的样品。这为同品种不同产地的样品间的比较提供了可能，也为今后建立GMP基地提供重要的信息和选择产地的依据。现将各样品按不同品种分列于下：

柴胡属植物样品

1.北柴胡B.chinese D C共十九个样品编号 1 31 32 33 34 35产地石家庄福州泉州西安厦门洛阴编号 36 37 38 39 40 41产地天津沈阳庆安赞皇郑州高安编号 42 43 44 45 46 47产地萍乡承德武汉阜阳太原南宁编号 48产地临安

2.窄竹叶柴胡B.marginatum var.stenophyllum共五个样品编号 14 55 56 57 58产地会泽广州电白南宁柳州

3.银州柴胡B.yinchowense共四个样品编号 4 27 59 60产地吴中合水黑水镇宁

4.线叶柴胡B.angustissimum共三个样品编号 3 28 64产地固阳包头礼县

5.狭叶柴胡[红柴胡]B.scorzonerifolium共三个样品编号 8 62 63产地天津金华承德

6.锥叶柴胡B.bicaule共二个样品编号 5 65产地锡林浩特锥叶

7.多枝柴胡B.polyclomum共二个样品编号 11 61产地会泽多枝

8.小叶黑柴胡B.smithii var.parvifolium编号 6 29 49 50 51 52产地同仁榆中榆中包头同仁银川编号 53 54产地玉山天祝

9.其他不同品种柴胡共十八个样品编号样品品种产地2 大叶柴胡B.longiradiatum 通化7 黑柴胡B.smithii 沈阳9 阿尔泰柴胡乌鲁木齐10 四川柴胡B.sIchuanense 汶川12 韭叶柴胡B.kunmIngense 昆明13 泸西柴胡B.luxiense 建水15 川滇柴胡B.candollei 会泽16 柴首柴胡B.chaishoui 汶川17 空心柴胡B.longicaule var 毕节

franchetii18 汶川柴胡B.wenchuanense 汶川19 丽江柴胡B.rockii 丽江20 细茎有柄柴胡B.petiolulatum 丽江

var.tenerum21 小柴胡B.hamiltonii 昆明22 矮小柴胡昆明23 马尔康柴胡B.malconense 汶川24 黄花鸭跖柴胡B.commelynoideum

var.flavifloum湟中湟中25 三岛柴胡B.falacatum 日本26 韩国柴胡韩国

标品与试剂

标准品柴胡皂甙A，C，D[简写为Ssa，SSc，SSd]购自中国药

品生物制品检定所

试剂甲醇，乙晴[以上均为色谱纯试剂]，呲啶，氨水[以上均

为A.R.级试剂]，重蒸水

标品与样品液的制备

柴胡皂甙单体标准品溶液的制备

准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品各约1mg，用甲醇溶解后分别置于1ml容量并中，定容至刻度。

柴胡皂甙混合标准品溶液的制备

准确称取柴胡皂甙A，C，D标准品5.10mg，5.15mg，5.255mg，用甲醇溶解后置于5ml容量瓶中，定容至刻度。

柴胡样品溶液的制备

分别取各编号已干燥的柴胡样品适量，粉碎，过20目筛。准确称取各样品粗粉0.25mg，置10ml容量瓶中，加5％氨水-甲醇溶液8ml，润湿0.5小时，定容至10ml，密闭，超声提取1小时。离心，取上清液8ml，室温挥干，加适量甲醇溶液，移入2ml容量瓶内，定容至刻度。临用前过0.45微米滤膜，作进样溶液。

仪器与色谱条件

仪器高效液相色谱仪PERKIN ELMER[series 200

LCpump，DAD235C]，超声波器，离心机。

色谱条件色谱柱 LUNA C-18[2] 250mm-4.6mm 5微米

流动相乙睛-水梯度洗脱，梯度变化见下表

时间[min] 0 10 15 30 40 55

乙睛％ 5 25 28 40 60 80

UV检测波长 210nm 柱温室温[25c]

灵敏度 0.2AUFS 流速 1ml/min

进样量 20微升

不同产地北柴胡HPLC相对保留值指纹谱的建立

按上述实验条件对各样品进样分析，得到它们的色谱图和相应的数据，根据前述的指纹谱原理建立各样品的色谱指纹谱。首先要做的工作是对各样品中的内标峰进行定位，接着求取各样品中每个色谱峰的相对保留值，以大小为序排列，然后附上各色谱峰相对应的相对面积值或归一化面积值，即得各样品的相对保留值指纹谱。现将十九个不同产地的北柴胡样品的指纹谱汇集于表6。不同产地北柴胡指纹谱的各项参数

根据前述定义建立不同产地北柴胡指纹谱的各项参数，分述如下：

共有峰在十九个样品中全可检测到的色谱峰，它们的α值分别为0.123，0.821，1.000和1.204等四个，在十八个样品中可检测到的有α值为0.284，0.309，0.350等三个，在十七个样品中可检测到的有α值为0.039，0.050，0.400，0.420，0.475，0.513，0.676和0.859等八个，在十六个样品中可检测到的有α值为1.063，0.708和0.456等三个，在十五个样品中可检测到的有α值为0.088，0.244，0.388，0.572，0.604和0.761等六个，由于十五个样品已占样品数的78.9％，因此以上各α值的色谱峰在大多数样品中具有较高的出现机率，这些色谱峰对北柴胡的品种鉴定具有特别重要的意义，为北柴胡特征指纹的选择和确定提供依据。

重叠率此处的样品均为同品种的北柴胡，只是产地不同，很难判定以何者做基准，暂以柴胡皂甙A，C，D含量较高的48号样品为基准，计算北柴胡不同产地各样品与48号样品间的重叠率。见表6。

表6不同产地北柴胡的HPLC-FPS

样品α相对面积	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	共有峰数
样品α相对面积	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	共有峰数	0.039		1.45	2.20	1.23	3.18		1.07	1.07	1.17	1.75	1.41	2.75	2.47	2.01	0.98	1.68	2.77	1.59	2.22	17
0.055		19.82	3.04	9.97	3.70		4.79	2.56	4.00	7.54	2.26	4.56	3.03	4.16	2.83	8.07	6.49	5.53	2.38	17	0.039		1.45	2.20	1.23	3.18		1.07	1.07	1.17	1.75	1.41	2.75	2.47	2.01	0.98	1.68	2.77	1.59	2.22	17
0.055		19.82	3.04	9.97	3.70		4.79	2.56	4.00	7.54	2.26	4.56	3.03	4.16	2.83	8.07	6.49	5.53	2.38	17	0.070		6.92	6.15			11.28			7.00	7.54			7.38	6.99		8.54	7.30	5.18		10
0.074	16.61			9.03	7.94	7.91	6.38	13.73			8.47	13.46			7.34				11.36	10	0.070		6.92	6.15			11.28			7.00	7.54			7.38	6.99		8.54	7.30	5.18		10
0.074	16.61			9.03	7.94	7.91	6.38	13.73			8.47	13.46			7.34				11.36	10	0.079		0.86	0.58		1.24		0.87	2.86	1.30	1.43		1.88	1.10	1.05		1.19	0.77	0.90	0.50	14
0.084							4.92	10.32			0.42	6.03			1.25					5	0.079		0.86	0.58		1.24		0.87	2.86	1.30	1.43		1.88	1.10	1.05		1.19	0.77	0.90	0.50	14
0.084							4.92	10.32			0.42	6.03			1.25					5	0.088	2.09	5.29	5.63	5.08	6.29	6.16			4.63	5.94	5.21		6.27	0.42	4.79	6.13	5.00	3.17		15
0.108	1.28																0.55			2	0.088	2.09	5.29	5.63	5.08	6.29	6.16			4.63	5.94	5.21		6.27	0.42	4.79	6.13	5.00	3.17		15
0.108	1.28																0.55			2	0.123	1.42	1.60	1.00	2.24	2.30	0.49	1.74	2.48	2.37	1.42	1.03	3.58	1.27	1.47	0.84	2.12	1.24	1.17	1.46	19
0.141	0.87					1.09					1.11								1.04	4	0.123	1.42	1.60	1.00	2.24	2.30	0.49	1.74	2.48	2.37	1.42	1.03	3.58	1.27	1.47	0.84	2.12	1.24	1.17	1.46	19
0.141	0.87					1.09					1.11								1.04	4	0.150		0.86										1.56				0.89				3
0.183				1.68			0.55	2.45				1.92				0.57				5	0.150		0.86										1.56				0.89				3
0.183				1.68			0.55	2.45				1.92				0.57				5	0.192	1.10													0.69						2
0.204							0.76			0.79			0.95					0.78		4	0.192	1.10													0.69						2
0.204							0.76			0.79			0.95					0.78		4	0.219		0.88			1.41		0.49		1.44					2.22		0.99	0.96		0.83	8
0.230			2.30	0.62	1.52	0.86		5.56			1.57				1.63	1.77				8	0.219		0.88			1.41		0.49		1.44					2.22		0.99	0.96		0.83	8
0.230			2.30	0.62	1.52	0.86		5.56			1.57				1.63	1.77				8	0.244				1.13	1.35	0.71	1.61	1.32	1.74	0.99	1.38	1.82	2.01	1.62		1.24	2.39	0.93	1.28	15
0.258		1.79	1.44			1.06				1.06		2.15			1.42		0.96			7	0.244				1.13	1.35	0.71	1.61	1.32	1.74	0.99	1.38	1.82	2.01	1.62		1.24	2.39	0.93	1.28	15
0.258		1.79	1.44			1.06				1.06		2.15			1.42		0.96			7	0.265								2.69								1.45		1.05		3
0.273	3.30			0.82	2.44	0.84	1.09		1.82	0.86	1.73						0.79			9	0.265								2.69								1.45		1.05		3
0.273	3.30			0.82	2.44	0.84	1.09		1.82	0.86	1.73						0.79			9	0.284	1.39	1.98	1.64	2.52		0.65	0.84	3.20	0.82	2.11	1.92	5.28	2.33	1.36	2.31	1.20	1.57	1.70	2.09	18
0.309	1.68	2.70	3.61	1.40	2.45	2.66	2.37	3.14		2.69	2.05	4.11	1.52	1.09	3.26	2.44	1.96	1.26	3.30	18	0.284	1.39	1.98	1.64	2.52		0.65	0.84	3.20	0.82	2.11	1.92	5.28	2.33	1.36	2.31	1.20	1.57	1.70	2.09	18
0.309	1.68	2.70	3.61	1.40	2.45	2.66	2.37	3.14		2.69	2.05	4.11	1.52	1.09	3.26	2.44	1.96	1.26	3.30	18	0.326			0.78	1.51	2.67	1.27		2.04	4.30	1.67	1.79	2.23	1.83	1.58			14.70	1.53	2.02	14
0.335		1.20		2.29	1.82	1.99					1.16				1.21	0.87	0.82	1.14		9	0.326			0.78	1.51	2.67	1.27		2.04	4.30	1.67	1.79	2.23	1.83	1.58			14.70	1.53	2.02	14
0.335		1.20		2.29	1.82	1.99					1.16				1.21	0.87	0.82	1.14		9	0.350	2.44	3.85	4.05		3.24	1.69	2.59	5.46	1.39	1.39	1.35	3.24	2.83	2.77	1.59	4.79	1.37	1.70	1.38	18
0.360							1.52	1.60	1.59											3	0.350	2.44	3.85	4.05		3.24	1.69	2.59	5.46	1.39	1.39	1.35	3.24	2.83	2.77	1.59	4.79	1.37	1.70	1.38	18
0.360							1.52	1.60	1.59											3	0.367		2.53		2.38	2.75	1.01		1.25	0.60	2.11	2.50	2.77		1.36	5.80		3.45	3.46	4.93	14
0.372			.361	1.49		1.12	2.66					4.30	2.59	1.04		2.05				8	0.367		2.53		2.38	2.75	1.01		1.25	0.60	2.11	2.50	2.77		1.36	5.80		3.45	3.46	4.93	14
0.372			.361	1.49		1.12	2.66					4.30	2.59	1.04		2.05				8	0.388	4.37	2.04		1.97	1.74		1.42	3.69	3.53	2.63	3.25	2.78	0.81	2.22		1.34	2.49		0.87	15
0.393				2.28					1.38			2.70								3	0.388	4.37	2.04		1.97	1.74		1.42	3.69	3.53	2.63	3.25	2.78	0.81	2.22		1.34	2.49		0.87	15
0.393				2.28					1.38			2.70								3	0.400	0.90	2.84	3.11	1.22	3.40	1.05		1.76	1.26	2.95	3.11	1.36	2.10		1.15	4.42	2.76	1.30	2.15	17
0.420	1.96	2.52	1.52	2.64	2.76	2.87	1.45	4.26	2.54		2.67	8.53	2.40	1.20		0.79	2.41	1.49	3.07	17	0.400	0.90	2.84	3.11	1.22	3.40	1.05		1.76	1.26	2.95	3.11	1.36	2.10		1.15	4.42	2.76	1.30	2.15	17
0.420	1.96	2.52	1.52	2.64	2.76	2.87	1.45	4.26	2.54		2.67	8.53	2.40	1.20		0.79	2.41	1.49	3.07	17	0.434		1.24	3.28			1.88	2.72	2.97	2.54	4.95				0.72	2.11			1.12		10
0.443	2.27		1.00	1.56	3.09		1.44	4.33	2.17		0.87		4.86	2.36	4.41	3.99	2.06		3.43	14	0.434		1.24	3.28			1.88	2.72	2.97	2.54	4.95				0.72	2.11			1.12		10
0.443	2.27		1.00	1.56	3.09		1.44	4.33	2.17		0.87		4.86	2.36	4.41	3.99	2.06		3.43	14	0.456	1.91	1.76	2.04	2.34	1.93	2.01	2.11	0.91	1.29	1.80	2.42	4.43				1.09	1.11	1.64	3.45	16
0.466		0.77		0.93	3.29			3.02						2.20				0.80		6	0.456	1.91	1.76	2.04	2.34	1.93	2.01	2.11	0.91	1.29	1.80	2.42	4.43				1.09	1.11	1.64	3.45	16
0.466		0.77		0.93	3.29			3.02						2.20				0.80		6	0.475	0.66		3.62	1.16	0.90	3.14	2.31		3.25	2.19	2.25	3.80	2.95	1.23	2.66	1.42	1.52	1.45	1.40	17
0.494	1.51	2.04		2.03			1.74	1.20	2.19		0.96	2.83	1.32			2.32		1.50		11	0.475	0.66		3.62	1.16	0.90	3.14	2.31		3.25	2.19	2.25	3.80	2.95	1.23	2.66	1.42	1.52	1.45	1.40	17
0.494	1.51	2.04		2.03			1.74	1.20	2.19		0.96	2.83	1.32			2.32		1.50		11	0.504	0.81		1.75		2.16	0.76	1.28	0.79		0.67		1.60	1.19	1.29	3.37	1.30			4.55	13

continued

样品α相对面积	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	共有峰数
样品α相对面积	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	共有峰数	0.513	1.97	3.22		3.21	3.42	1.25	0.71	2.18	1.39	1.24	1.41	4.03	0.93	1.42		2.38	2.28	1.51	2.06	17
0.537	2.01	1.75	1.05	0.94	1.32	0.90	0.88	2.18	1.14	0.68	1.00		0.97		3.09			1.17		14	0.513	1.97	3.22		3.21	3.42	1.25	0.71	2.18	1.39	1.24	1.41	4.03	0.93	1.42		2.38	2.28	1.51	2.06	17
0.537	2.01	1.75	1.05	0.94	1.32	0.90	0.88	2.18	1.14	0.68	1.00		0.97		3.09			1.17		14	0.556				1.06		0.91		1.14		0.79	0.93	4.71		1.23	2.12	0.79	2.53	1.89		11
0.572	1.02	1.37	0.74	1.02	0.98	0.85	0.87	1.52		0.77		2.14		0.96	1.78	1.08	0.77		2.63	15	0.556				1.06		0.91		1.14		0.79	0.93	4.71		1.23	2.12	0.79	2.53	1.89		11
0.572	1.02	1.37	0.74	1.02	0.98	0.85	0.87	1.52		0.77		2.14		0.96	1.78	1.08	0.77		2.63	15	0.588	2.03	0.84			1.48				1.27				1.35			1.35				6
0.604	1.46	0.76	1.42	0.65	0.86	1.26	1.48	1.65	1.53		2.26		1.03	0.92			0.61	0.58	3.02	15	0.588	2.03	0.84			1.48				1.27				1.35			1.35				6
0.604	1.46	0.76	1.42	0.65	0.86	1.26	1.48	1.65	1.53		2.26		1.03	0.92			0.61	0.58	3.02	15	0.623		.22	1.14		1.33			1.11	2.08	0.87		2.51		0.92	2.65	1.79	1.50		1.53	12
0.637	1.27					0.72	1.07			1.17	0.97	1.22	1.07					1.31		8	0.623		.22	1.14		1.33			1.11	2.08	0.87		2.51		0.92	2.65	1.79	1.50		1.53	12
0.637	1.27					0.72	1.07			1.17	0.97	1.22	1.07					1.31		8	0.652		1.33	1.69	1.02	1.48	0.55			1.24			2.21	1.01						2.17	9
0.665			1.03				0.98	2.94		0.85				0.85		1.20		1.12		7	0.652		1.33	1.69	1.02	1.48	0.55			1.24			2.21	1.01						2.17	9
0.665			1.03				0.98	2.94		0.85				0.85		1.20		1.12		7	0.676	1.60	1.58	0.85	1.50	2.55	2.46	0.86	1.72	1.07	1.05	2.11		1.03	0.56	2.35		0.89	0.99	1.55	17
0.692		1.36		0.84	1.10		1.67		0.81	0.91		4.24	0.63		0.96	1.01				10	0.676	1.60	1.58	0.85	1.50	2.55	2.46	0.86	1.72	1.07	1.05	2.11		1.03	0.56	2.35		0.89	0.99	1.55	17
0.692		1.36		0.84	1.10		1.67		0.81	0.91		4.24	0.63		0.96	1.01				10	0.708	1.81	0.72		0.89	0.96	0.56		0.72	3.63	1.41		2.77	1.21	1.67	2.14	1.01	1.37	0.56	2.80	16
0.723		1.76	1.41	1.57	0.83	1.13					1.21			0.93						7	0.708	1.81	0.72		0.89	0.96	0.56		0.72	3.63	1.41		2.77	1.21	1.67	2.14	1.01	1.37	0.56	2.80	16
0.723		1.76	1.41	1.57	0.83	1.13					1.21			0.93						7	0.741	1.13		1.22		1.42	1.00	1.24	2.05	0.75		0.92		0.73			1.32	0.63	1.67	1.53	13
0.761	1.74		0.80	1.06	2.01	0.83	0.59	2.05		0.86	0.77		0.52	0.38	0.91	1.34	0.80		1.09	15	0.741	1.13		1.22		1.42	1.00	1.24	2.05	0.75		0.92		0.73			1.32	0.63	1.67	1.53	13
0.761	1.74		0.80	1.06	2.01	0.83	0.59	2.05		0.86	0.77		0.52	0.38	0.91	1.34	0.80		1.09	15	0.773		0.86				0.91	0.80					5.19		0.85	1.00		0.59	1.63	1.38	9
0.782		0.52	1.21				1.06	0.95	0.88	0.70		2.98			1.22	0.93	1.39	0.92	1.97	12	0.773		0.86				0.91	0.80					5.19		0.85	1.00		0.59	1.63	1.38	9
0.782		0.52	1.21				1.06	0.95	0.88	0.70		2.98			1.22	0.93	1.39	0.92	1.97	12	0.804	1.37	0.73	1.71	1.76	1.34	1.06	1.32		0.69	0.71	1.89	1.84	0.79	0.38				1.43		14
0.821 ssc	1.98	1.64	1.18	1.81	0.92	1.38	1.42	0.80	1.39	1.13	1.47	3.51	1.02	0.97	2.97	1.31	0.78	0.76	1.80	19	0.804	1.37	0.73	1.71	1.76	1.34	1.06	1.32		0.69	0.71	1.89	1.84	0.79	0.38				1.43		14
0.821 ssc	1.98	1.64	1.18	1.81	0.92	1.38	1.42	0.80	1.39	1.13	1.47	3.51	1.02	0.97	2.97	1.31	0.78	0.76	1.80	19	0.838					1.39	0.72											0.90			3
0.859	1.08	0.78	0.61	0.54			0.83	1.77	1.54	0.90	0.61	3.54	0.86	0.62	1.34	1.08	1.17	0.55	1.97	17	0.838					1.39	0.72											0.90			3
0.859	1.08	0.78	0.61	0.54			0.83	1.77	1.54	0.90	0.61	3.54	0.86	0.62	1.34	1.08	1.17	0.55	1.97	17	0.879		0.73	0.92		1.39	1.19		0.92			0.69	2.27	0.58	0.49	0.62			0.86	0.98	12
0.895					2.17									0.32		0.87			1.07	4	0.879		0.73	0.92		1.39	1.19		0.92			0.69	2.27	0.58	0.49	0.62			0.86	0.98	12
0.895					2.17									0.32		0.87			1.07	4	0.916				2.07									0.43				0.64			3
0.935	0.23	0.65	0.83	0.95	1.28		0.72		0.89	0.49	0.83	2.77			0.82		0.53	1.17	0.93	14	0.916				2.07									0.43				0.64			3
0.935	0.23	0.65	0.83	0.95	1.28		0.72		0.89	0.49	0.83	2.77			0.82		0.53	1.17	0.93	14	0.973			1.15	0.67	1.12		0.78	0.62	0.68		0.81				2.50				2.09	9
1ssa	3.28	2.91	1.77	3.26	3.87	3.17	2.60	3.67	2.19	3.77	4.73	8.03	2.28	1.91	2.99	1.53	2.15	1.47	5.47	19	0.973			1.15	0.67	1.12		0.78	0.62	0.68		0.81				2.50				2.09	9
1ssa	3.28	2.91	1.77	3.26	3.87	3.17	2.60	3.67	2.19	3.77	4.73	8.03	2.28	1.91	2.99	1.53	2.15	1.47	5.47	19	1.018								2.79								1.01				2
1.038		0.49								0.69	1.73	1.24			0.38	0.51	2.16	0.85	0.48	9	1.018								2.79								1.01				2
1.038		0.49								0.69	1.73	1.24			0.38	0.51	2.16	0.85	0.48	9	1.063		1.51	1.25	0.97	0.76	0.71	0.56	1.24	4.07	0.64			0.74	0.57	0.52	1.72	0.76	2.23	0.29	16
1.095	1.07			0.46		1.27				0.68	0.76	1.40	0.91		0.74		0.90		3.00	10	1.063		1.51	1.25	0.97	0.76	0.71	0.56	1.24	4.07	0.64			0.74	0.57	0.52	1.72	0.76	2.23	0.29	16
1.095	1.07			0.46		1.27				0.68	0.76	1.40	0.91		0.74		0.90		3.00	10	1.127		0.68	0.85	0.70	1.25	0.75	0.89	1.22				0.87	0.35	0.75		0.79	0.88	0.57	0.70	14
1.139	1.44	0.32			0.93	0.57									0.90			0.54	0.42	7	1.127		0.68	0.85	0.70	1.25	0.75	0.89	1.22				0.87	0.35	0.75		0.79	0.88	0.57	0.70	14
1.139	1.44	0.32			0.93	0.57									0.90			0.54	0.42	7	1.161		0.38	0.29	0.60	0.99	0.57	0.57		0.32	0.74		1.19	0.78	0.44		0.54	0.67		0.60	14
0.183								1.23						0.52	1.21					3	1.161		0.38	0.29	0.60	0.99	0.57	0.57		0.32	0.74		1.19	0.78	0.44		0.54	0.67		0.60	14
0.183								1.23						0.52	1.21					3	1.204 ssd	4.72	2.73	2.43	2.97	1.99	3.60	2.69	2.14	2.55	3.67	3.90	8.02	2.27	1.73	3.86	2.11	2.21	1.79	4.75	19
总峰数	36	46	42	47	49	46	46	47	43	43	42	45	42	44	40	46	46	44	45	839	1.204 ssd	4.72	2.73	2.43	2.97	1.99	3.60	2.69	2.14	2.55	3.67	3.90	8.02	2.27	1.73	3.86	2.11	2.21	1.79	4.75	19
总峰数	36	46	42	47	49	46	46	47	43	43	42	45	42	44	40	46	46	44	45	839	重叠率	66.7％	74.7％	73.6％	69.6％	80.9％	70.3％	74.7％	73.9％	72.7％	70.5％	71.3％	75.6％	71.3％	74.2％	70.6％	74.7％	81.3％	71.9％	100％	-

十强峰根据各样品的出峰数在36-49个之间，在选择n强峰时，认为以n＝10为宜。现从各样品的指纹谱中选出含量较高的前十个色谱峰，列于表7。

表7 不同产地北柴胡样品的十强峰

α值相对面积		十强峰										相对总面积
		十强峰											1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
		样品编号	1	0.074/16.61	1.204/4.72	0.388/4.37	0.274/3.30	1/3.28	0.35/2.44	0.443/2.27	0.088/2.09		1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	0.588/2.03	0.539/2.01	43.12
31	0.155/19.82		1	0.074/16.61	1.204/4.72	0.388/4.37	0.274/3.30	1/3.28	0.35/2.44	0.443/2.27	0.088/2.09	0.07/6.92	0.088/5.29	0.35/3.85	0.513/3.22	1/2.91	0.4/2.84	1.204/2.73	0.309/2.70	0.367/2.53	52.81		0.588/2.03	0.539/2.01	43.12
31	0.155/19.82		32	0.07/6.1	0.088/5.63	0.35/4.05	0.475/3.62	0.372/3.61	0.309/3.61	0.434/3.28	0.4/3.11	0.07/6.92	0.088/5.29	0.35/3.85	0.513/3.22	1/2.91	0.4/2.84	1.204/2.73	0.309/2.70	0.367/2.53	52.81	0.055/3.04	1.204/2.43	38.52
33	0.055/9.97		32	0.07/6.1	0.088/5.63	0.35/4.05	0.475/3.62	0.372/3.61	0.309/3.61	0.434/3.28	0.4/3.11	0.074/9.03	0.088/5.08	1/3.26	0.513/3.21	1.204/2.97	0.42/2.64	0.284/2.52	0.367/2.38	0.456/2.34	43.40	0.055/3.04	1.204/2.43	38.52
33	0.055/9.97		34	0.074/7.94	0.88/6.29	1/3.87	0.055/3.70	0.513/3.42	0.4/3.40	0.466/3.29	0.35/3.24	0.074/9.03	0.088/5.08	1/3.26	0.513/3.21	1.204/2.97	0.42/2.64	0.284/2.52	0.367/2.38	0.456/2.34	43.40	0.039/3.18	0.443/3.09	41.42
35	0.07/11.28		34	0.074/7.94	0.88/6.29	1/3.87	0.055/3.70	0.513/3.42	0.4/3.40	0.466/3.29	0.35/3.24	0.074/7.91	0.088/6.16	1.204/3.60	1/3.17	0.475/3.14	0.42/2.87	0.309/2.66	0.676/2.46	0.456/2.01	45.26	0.039/3.18	0.443/3.09	41.42
35	0.07/11.28		36	0.074/6.38	0.084/4.92	0.055/4.97	0.434/2.72	1.204/2.69	0.372/2.66	1/2.60	0.35/2.59	0.074/7.91	0.088/6.16	1.204/3.60	1/3.17	0.475/3.14	0.42/2.87	0.309/2.66	0.676/2.46	0.456/2.01	45.26	0.309/2.37	0.475/2.31	34.02
37	0.074/13.73		36	0.074/6.38	0.084/4.92	0.055/4.97	0.434/2.72	1.204/2.69	0.372/2.66	1/2.60	0.35/2.59	0.084/10.32	0.23/5.56	0.35/5.46	0.443/4.33	0.42/4.26	0.388/3.69	1/3.67	0.284/3.20	0.309/3.14	57.38	0.309/2.37	0.475/2.31	34.02
37	0.074/13.73		38	0.07/7.00	0.088/4.63	0.326/4.30	1.063/4.07	0.055/4.00	0.708/3.63	0.388/3.53	0.475/3.25	0.084/10.32	0.23/5.56	0.35/5.46	0.443/4.33	0.42/4.26	0.388/3.69	1/3.67	0.284/3.20	0.309/3.14	57.38	1.204/2.55	0.434/2.54	39.51
39	0.07/7.54		38	0.07/7.00	0.088/4.63	0.326/4.30	1.063/4.07	0.055/4.00	0.708/3.63	0.388/3.53	0.475/3.25	0.055/7.54	0.088/5.94	0.434/4.95	1/3.77	1.204/3.67	0.4/2.95	0.309/2.69	0.388/2.63	0.475/2.19	43.86	1.204/2.55	0.434/2.54	39.51
39	0.07/7.54		40	0.074∥8.47	0.088/5.21	1/4.73	1.204/3.90	0.388/3.25	0.4/3.11	0.42/2.67	0.367/2.50	0.055/7.54	0.088/5.94	0.434/4.95	1/3.77	1.204/3.67	0.4/2.95	0.309/2.69	0.388/2.63	0.475/2.19	43.86	0.456/2.42	0.055/2.26	38.52
41	0.074/18.46		40	0.074∥8.47	0.088/5.21	1/4.73	1.204/3.90	0.388/3.25	0.4/3.11	0.42/2.67	0.367/2.50	0.42/8.53	1/8.03	1.204/8.02	0.084/6.03	0.284/5.28	0.773/5.19	0.556/4.71	0.055/4.56	0.456/4.43	68.25	0.456/2.42	0.055/2.26	38.52
41	0.074/18.46		42	0.07/7.38	0.088/6.27	0.443/4.86	0.055/3.03	0.475/2.95	0.35/2.83	0.372/2.59	0.039/2.47	0.42/8.53	1/8.03	1.204/8.02	0.084/6.03	0.284/5.28	0.773/5.19	0.556/4.71	0.055/4.56	0.456/4.43	68.25	0.42/2.40	0.284/2.33	37.09
43	0.07/6.99		42	0.07/7.38	0.088/6.27	0.443/4.86	0.055/3.03	0.475/2.95	0.35/2.83	0.372/2.59	0.039/2.47	0.055/4.16	0.35/2.77	0.443/2.36	0.388/2.22	0.219/2.22	0.466/2.20	0.039/2.01	1/1.91	1.204/1.73	28.57	0.42/2.40	0.284/2.33	37.09
43	0.07/6.99		44	0.074/7.34	0.367/5.80	0.088/4.97	0.443/4.41	1.204/3.86	0.504/3.37	0.309/3.26	0.539/3.09	0.055/4.16	0.35/2.77	0.443/2.36	0.388/2.22	0.219/2.22	0.466/2.20	0.039/2.01	1/1.91	1.204/1.73	28.57	1/2.99	0.821/2.97	41.88
45	0.07/8.54		44	0.074/7.34	0.367/5.80	0.088/4.97	0.443/4.41	1.204/3.86	0.504/3.37	0.309/3.26	0.539/3.09	0.055/8.07	0.088/6.13	0.35/4.97	0.4/4.42	0.443/3.99	0.309/2.44	0.513/2.38	0.494/2.32	0.123/2.12	45.22	1/2.99	0.821/2.97	41.88
45	0.07/8.54		46	0.326/14.7	0.07/7.30	0.055/6.49	0.088/5.00	0.367/3.45	0.039/2.77	0.4/2.76	0.556/2.53	0.055/8.07	0.088/6.13	0.35/4.97	0.4/4.42	0.443/3.99	0.309/2.44	0.513/2.38	0.494/2.32	0.123/2.12	45.22	0.388/2.49	0.42/2.41	49.90
47	0.055/5.53		46	0.326/14.7	0.07/7.30	0.055/6.49	0.088/5.00	0.367/3.45	0.039/2.77	0.4/2.76	0.556/2.53	0.07/5.18	0.367/3.46	0.088/3.17	1.063/2.23	0.556/1.89	1.204/1.79	0.284/1.70	0.35/1.70	0.741/1.67	28.32	0.388/2.49	0.42/2.41	49.90
47	0.055/5.53		48	0.074/11.36	1/5.47	0.367/4.93	1.204/4.75	0.504/4.55	0.456/3.45	0.443/3.43	0.309/3.30	0.07/5.18	0.367/3.46	0.088/3.17	1.063/2.23	0.556/1.89	1.204/1.79	0.284/1.70	0.35/1.70	0.741/1.67	28.32	0.42/3.07	0604/3.02	47.33

特征指纹综合共有峰和十强峰所提供的信息，可从中挑选合适的色谱峰作为特征指纹。十九个样品合计共出峰76个。现按下列三个条件进行初选，共有样品数超过十五个者，凡进入十强峰者，具有特殊活性和具有标准品者。按此要求列出特征指纹初选表，见表8。

表8 特征指纹初选表

α 十强峰中出现频次/十强峰中排列名次共有样品数

.039 2/8、1/9、 1/6 17

.070 3/1、、3/2、2/3、2/4、1/5、2/9、1/10 17

.055 3/2、1/7 10

.074 8/1、2/2 10

.084 2/2、1/5 5

.088 5/2、6/3、2/4、1/8 15

.123 1/10 19

.230 1/3 8

.273 1/4 9

.284 1/6、2/8、1/9、1/10 18

.309 1/6、2/7、3/8、2/9、1/10 18

.326 1/1、1/3、 14

.350 2/3、3/4、3/6、1/7、2/8、1/9 18

.367 1/2、2/3、1/5、1/8、1/9、1/10 14

.372 1/5、1/6、1/7 8

.388 1/3、2/5、2/7、2/9 15

.400 2/6、3/7、1/8 17

.420 1/2、1/6、3/7、2/9、1/10 17

.434 2/4、1/7 10

.443 1/3、2/4、1/5、1/6、2/7、1/10 14

.456 1/6、1/9、3/10 16

.466 2/7、 6

.475 1/4、1/5、1/6、1/8、2/10 17

.494 1/9 11

.504 1/6 13

.513 3/5、1/8 17

.537 1/8、1/10 14

.556 1/6、2/8 11

.604 1/10 15

.676 1/9 17

.708 1/6 16

.741 1/10 13

.773 1/7 15

.821 1/10 19

1.000 1/2、3/3、1/4、3/5、1/6、1/8、2/9 19

1.063 1/4、1/5 16

1.204 4/4、2/5、2/6、1/7、1/8、1/9、2/10 19

表8说明有37个色谱峰进入特征指纹的初选行列。对此再作进一步挑选，那些在十强峰中出现频次不高者，或名次靠后者，或共有样品数较低者可作进一步筛除。例如α值为0.070者在十强峰中出现的频次仅为4，样品共有数也仅达10个；α值为0.084者，在十强峰中出现的频次为3，样品共有数为5个；α值为0.230，0.273，0.372，0.434，0.466，0.494，0.504，0.741，0.773等色谱峰均因上述相同原因而被删除。有些色谱峰虽在十强峰中出现频次较低，甚至根本就没列入过十强峰，但它是许多样品所共有，例如α值为0.244，0.572，0.761和0.859者，均因它们的样品共有数达到或超过15而被入选特征指纹。另，三个已知成分，并具有其相应的标准品者，柴胡皂甙A，C，D均被选入特征指纹。现将三十个特征指纹列表于下：

表9北柴胡的特征指纹α 十强峰出现频次样品共有数 α 十强峰出现频次样品共有数.039 4 17 .456 5 16.055 14 17 .475 6 17.074 10 10 .513 4 17.088 14 15 .537 2 14.123 1 19 .556 3 11.244 0 15 .572 0 15.284 5 18 .604 1 15.309 9 18 .676 1 17.326 2 14 .708 1 16.350 12 18 .761 0 15.367 7 14 .821 1 19.388 7 15 .859 0 17.400 6 17 1.000 12 19.420 8 17 1.063 2 16.443 8 14 1.204 13 19

表9是根据十九个不同产地北柴胡的指纹谱综合而得，具有一定的统计意义，是北柴胡在鉴定时可于依赖的特征。北柴胡样品几乎遍及东西南北中，表明全国各地都有北柴胡资源。因而有关北柴胡的质控和质标工作已为燃眉之事。

表10列出了十九个不同产地北柴胡的特征指纹检出情况，在30个特征指纹中，石家庄[1]，福州[31]，天津[36]和高安[41]产的北柴胡可检出23个特征指纹，是各样品中检出最少的。检出数最高的是西安[33]产北柴胡，共检出29个特征指纹，沈阳[37]，太原[46]，二地所产北柴胡均可检出28个特征指纹，厦门[34]，郑州[40]和临安[48]，三地所产的均可检出27个特征指纹，承德[43]和赞皇[39]均可检出26个特征指纹，洛阳[35]，阜阳[45]和南宁[47]三地所产的也均可检出25个特征指纹。它们的特征指纹检出率在76.6％-96.6％的范围内，这些数据为北柴胡品种的鉴定提供了判断的依据。现以上述实验数据为基础，建议凡特征指纹检出率大于75％时，应考虑待鉴药材是北柴胡。另，上表清楚显示，有四个成分在十九个北柴胡样品中均存在，它们的α值分别为0.123，0.821，1.000和1.204，后三个经标准品核对分别是柴胡皂甙C，柴胡皂甙A和柴胡皂甙D，它们是北柴胡品种必定具有的成分，也即是鉴定中必须检出的成分。

表10 不同产地北柴胡样品的特征指纹检出表.\编号 1 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 共有数0.039 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.074 V V V V V V V V V V 100.088 V V V V V V V V V V V V V V V 150.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 190.244 V V V V V V V V V V V V V V V 150.284 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 180.309 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 180.326 V V V V V V V V V V V V V V 150.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 180.367 V V V V V V V V V V V V V V 140.388 V V V V V V V V V V V V V V V 150.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.420 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.443 V V V V V V V V V V V V V V 140.456 V V V V V V V V V V V V V V V V 160.475 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.513 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.537 V V V V V V V V V V V V V V 140.556 V V V V V V V V V V V 110.572 V V V V V V V V V V V V V V V 150.604 V V V V V V V V V V V V V V V 150.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.708 V V V V V V V V V V V V V V V V 160.761 V V V V V V V V V V V V V V V 150.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 190.859 V V V V V V V V V V V V V V V V V 171.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 191.063 V V V V V V V V V V V V V V V V 161.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 19检出数 23 23 23 29 27 25 24 28 25 26 27 24 25 26 23 24 28 25 27

在上述十九个北柴胡样品色谱指纹谱分析的基础上，建立了一系列可供鉴定分析作依据的指纹谱参数，其中特征指纹，特征指纹差异率和总差异率为北柴胡的鉴定创立基础。通过柴胡属其它26个品种植物样品的色谱指纹谱与之比较分析，更进一步证明色谱指纹谱用于中药鉴定是可信的，可行的。

26个柴胡属植物样品的色谱实验条件，样品的制备，数据的处理等均与北柴胡的完全相同。据此建立了26个柴胡属植物的色谱指纹谱和十强峰等参数，分别见表11和表12。

表11 不同品种北柴胡的HPLC-FPS

Continued

表12 不同品种北柴胡样品的十强峰

α值相对面积		十强峰										相对总面积
		十强峰											1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
		样品编号	2	0.074/12.75	0.088/6.96	1.369/6.73	0.36/5.36	0.081/5.23	0.535/3.76	0.378/3.43	0.063/3.40		1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	0.309/3.36	0.284/3.26	54.23
5	0.055/9.89		2	0.074/12.75	0.088/6.96	1.369/6.73	0.36/5.36	0.081/5.23	0.535/3.76	0.378/3.43	0.063/3.40	0.07/9.88	0.088/6.46	0.039/5.91	0.284/4.83	0.434/3.24	0.475/3.19	0.326/2.96	0.388/2.55	0.367/2.51	51.41		0.309/3.36	0.284/3.26	54.23
5	0.055/9.89		7	1.375/50.5	1.458/26.68	1.341/22.43	1.369/16.63	0.07/13.84	0.055/10.70	1.436/9.14	0.488/9.00	0.07/9.88	0.088/6.46	0.039/5.91	0.284/4.83	0.434/3.24	0.475/3.19	0.326/2.96	0.388/2.55	0.367/2.51	51.41	0.326/8.62	0.088/8.39	175.94
9	0.665/11.34		7	1.375/50.5	1.458/26.68	1.341/22.43	1.369/16.63	0.07/13.84	0.055/10.70	1.436/9.14	0.488/9.00	0.07/10.18	0.466/5.80	0.504/4.95	0.088/4.13	0.244/4.09	0.335/3.90	1/3.87	0.367/3.68	0.055/3.54	55.46	0.326/8.62	0.088/8.39	175.94
9	0.665/11.34		10	0.055/11.47	1.204/8.33	0.066/7.86	1/7.11	0.275/4.66	0.388/4.01	0.35/3.60	0.088/3.60	0.07/10.18	0.466/5.80	0.504/4.95	0.088/4.13	0.244/4.09	0.335/3.90	1/3.87	0.367/3.68	0.055/3.54	55.46	0.326/3.07	0.079/1.94	55.66
11	0.063/38.56		10	0.055/11.47	1.204/8.33	0.066/7.86	1/7.11	0.275/4.66	0.388/4.01	0.35/3.60	0.088/3.60	1/23.72	1.204/21.73	0.074/10.56	0.821/4.85	0.434/3.63	0.367/2.77	0.088/2.64	0.36/2.17	0.513/2.06	112.68	0.326/3.07	0.079/1.94	55.66
11	0.063/38.56		12	1.204/15.46	1/13.13	0.07/8.22	0.055/7.36	0.434/4.88	0.088/4.77	0.821/4.47	0.378/4.02	1/23.72	1.204/21.73	0.074/10.56	0.821/4.85	0.434/3.63	0.367/2.77	0.088/2.64	0.36/2.17	0.513/2.06	112.68	0.524/3.27	0.4/2.20	67.79
13	1.341/9.60		12	1.204/15.46	1/13.13	0.07/8.22	0.055/7.36	0.434/4.88	0.088/4.77	0.821/4.47	0.378/4.02	0.055/7.87	0.066/7.72	0.258/6.63	0.504/6.13	0.692/6.11	0.42/5.72	0.088/5.09	1.204/4.96	1/4.54	64.36	0.524/3.27	0.4/2.20	67.79
13	1.341/9.60		15	0.066/7.55	0.275/2.44	0.088/2.35	0.388/2.20	0.434/2.01	0.804/1.97	0.074/1.85	0.466/1.74	0.055/7.87	0.066/7.72	0.258/6.63	0.504/6.13	0.692/6.11	0.42/5.72	0.088/5.09	1.204/4.96	1/4.54	64.36	0.244/1.67	0.723/1.63	25.40
16	0.055/8.09		15	0.066/7.55	0.275/2.44	0.088/2.35	0.388/2.20	0.434/2.01	0.804/1.97	0.074/1.85	0.466/1.74	1/5.60	1.204/5.50	0.07/5.37	0.088/3.08	0.388/2.36	0.434/2.34	0.821/2.17	0.513/1.98	0.504/1.98	38.45	0.244/1.67	0.723/1.63	25.40
16	0.055/8.09		17	0.35/3.15	0.07/2.89	0.456/2.38	0.676/2.29	0.084/2.29	0.782/2.17	0.761/2.00	0.588/1.70	1/5.60	1.204/5.50	0.07/5.37	0.088/3.08	0.388/2.36	0.434/2.34	0.821/2.17	0.513/1.98	0.504/1.98	38.45	0.055/1.60	0.708/1.37	21.85
18	1.204/16.82		17	0.35/3.15	0.07/2.89	0.456/2.38	0.676/2.29	0.084/2.29	0.782/2.17	0.761/2.00	0.588/1.70	0.074/12.51	0.183/9.83	1/9.63	0.063/5.28	0.088/4.98	0.258/4.74	0.821/4.36	0.443/4.17	1.369/3.52	75.83	0.055/1.60	0.708/1.37	21.85
18	1.204/16.82		19	0.443/11.27	1/10.41	0.07/9.37	0.35/8.65	0.101/8.09	1.204/7.28	0.434/5.14	0.088/4.58	0.074/12.51	0.183/9.83	1/9.63	0.063/5.28	0.088/4.98	0.258/4.74	0.821/4.36	0.443/4.17	1.369/3.52	75.83	0.36/4.46	0.335/4.22	73.46
20	1/7.27		19	0.443/11.27	1/10.41	0.07/9.37	0.35/8.65	0.101/8.09	1.204/7.28	0.434/5.14	0.088/4.58	1.204/6.96	0.07/6.76	1.378/6.70	0.367/4.52	0.088/4.04	0.504/3.99	0.434/3.91	0.275/3.75	0.4/3.59	51.47	0.36/4.46	0.335/4.22	73.46
20	1/7.27		21	0.244/4.60	0.084/3.12	0.074/2.60	0.367/2.14	0.434/2.11	0.275/1.99	0.4/1.97	0.36/1.93	1.204/6.96	0.07/6.76	1.378/6.70	0.367/4.52	0.088/4.04	0.504/3.99	0.434/3.91	0.275/3.75	0.4/3.59	51.47	0.335/1.53	0.443/1.45	23.44
22	0.07/5.42		21	0.244/4.60	0.084/3.12	0.074/2.60	0.367/2.14	0.434/2.11	0.275/1.99	0.4/1.97	0.36/1.93	0.275/4.95	0.309/3.70	0.335/3.56	0.084/2.62	0.42/2.45	0.123/2.29	0.388/2.23	0.36/2.16	0.150/2.04	31.41	0.335/1.53	0.443/1.45	23.44
22	0.07/5.42		23	0.055/31.31	0.723/15.44	0.07/6.22	1.204/4.64	0.420/4.17	0.676/4.13	0.079/3.74	1/3.73	0.275/4.95	0.309/3.70	0.335/3.56	0.084/2.62	0.42/2.45	0.123/2.29	0.388/2.23	0.36/2.16	0.150/2.04	31.41	0.088/3.31	0.326/3.13	79.83
24	1.352/20.84		23	0.055/31.31	0.723/15.44	0.07/6.22	1.204/4.64	0.420/4.17	0.676/4.13	0.079/3.74	1/3.73	0.063/9.70	0.434/6.21	0.335/4.93	0.088/4.92	1.375/4.23	0.360/4.12	0.475/4.04	0.055/3.82	0.192/3.70	66.52	0.088/3.31	0.326/3.13	79.83
24	1.352/20.84		25	0.07/15.11	0.079/12.49	0.084/9.95	0.063/7.41	0.326/6.11	0.123/4.22	0.258/2.49	0.219/2.47	0.063/9.70	0.434/6.21	0.335/4.93	0.088/4.92	1.375/4.23	0.360/4.12	0.475/4.04	0.055/3.82	0.192/3.70	66.52	0.192/2.29	0.284/2.26	64.83
26	0.07/9.02		25	0.07/15.11	0.079/12.49	0.084/9.95	0.063/7.41	0.326/6.11	0.123/4.22	0.258/2.49	0.219/2.47	0.088/6.60	0.063/5.80	0.275/4.01	1/3.91	0.079/3.76	0.204/3.36	0.230/2.98	0.326/2.41	0.420/2.38	44.25	0.192/2.29	0.284/2.26	64.83
26	0.07/9.02		28	0.07/11.80	0.055/6.26	0.088/5.05	0.36/4.30	0.326/4.28	0.244/3.12	0.284/2.95	1.204/2.66	0.088/6.60	0.063/5.80	0.275/4.01	1/3.91	0.079/3.76	0.204/3.36	0.230/2.98	0.326/2.41	0.420/2.38	44.25	0.475/2.35	0.275/2.32	45.08
48	0.074/11.36		28	0.07/11.80	0.055/6.26	0.088/5.05	0.36/4.30	0.326/4.28	0.244/3.12	0.284/2.95	1.204/2.66	1/5.47	0.367/4.93	1.204/4.75	0.504/4.55	0.456/3.45	0.443/3.43	0.309/3.30	0.42/3.07	0.604/3.02	47.33	0.475/2.35	0.275/2.32	45.08
48	0.074/11.36		51	1.458/18.36	1.436/16.95	0.079/14.58	0.084/12.73	1.472/5.98	0.434/5.40	1.498/5.29	0.513/5.21	1/5.47	0.367/4.93	1.204/4.75	0.504/4.55	0.456/3.45	0.443/3.43	0.309/3.30	0.42/3.07	0.604/3.02	47.33	0.378/4.93	0.488/4.38	93.82
58	0.074/11.46		51	1.458/18.36	1.436/16.95	0.079/14.58	0.084/12.73	1.472/5.98	0.434/5.40	1.498/5.29	0.513/5.21	1/5.84	0.400/5.78	1.204/5.53	0.055/4.97	0.088/4.28	0.367/3.79	0.271/3.47	0.556/3.19	0.466/3.13	51.45	0.378/4.93	0.488/4.38	93.82
58	0.074/11.46		59	0.074/7.56	0.088/5.20	0.443/4.51	0.475/3.99	0.335/3.63	1/3.26	1.204/3.18	0.367/2.92	1/5.84	0.400/5.78	1.204/5.53	0.055/4.97	0.088/4.28	0.367/3.79	0.271/3.47	0.556/3.19	0.466/3.13	51.45	0.388/2.68	0.4/2.27	39.21
63	0.074/6.37		59	0.074/7.56	0.088/5.20	0.443/4.51	0.475/3.99	0.335/3.63	1/3.26	1.204/3.18	0.367/2.92	0.084/5.42	0.488/4.51	0.309/4.30	0.244/3.30	1.204/3.28	1/3.26	0.271/2.83	0.475/2.70	0.434/2.56	38.53	0.388/2.68	0.4/2.27	39.21

本研究的目的是北柴胡的鉴别和鉴定，因而以不同产地的北柴胡样品作为不同批号的北柴胡样品，建立了北柴胡的特征指纹，其它柴胡属植物以其指纹谱与此作对照，在它们各自的指纹谱中寻找北柴胡的特征指纹，考察特征指纹的检出率，该项数据可为北柴胡的鉴定提供依据。表13列出了26个不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹检出表。

表13 不同品种柴胡属植物的北柴胡特征指纹检出表.\编号 2 5 7 9 10 11 12 13 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 28 48 51 58 59 63 共有数0.039 V V V V V V V V 80.055 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 190.074 V V V V V V V V 40.088 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 210.123 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 250.244 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.248 V V V V V V V V V 190.309 V V V V V V V V V V V V V V 140.326 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 220.350 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 190.367 V V V V V V V V V V V 110.388 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 190.400 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 230.420 V V V V V V V V V V V V V V V 150.443 V V V V V V V V V V V V 120.456 V V V V V V V V V V V V V V 140.475 V V V V V V V V V V V 40.513 V V V V V V V V V V V 110.537 V V V V V V V V V V V V V V 140.556 V V V V V V V V V V V V V V 140.572 V V V V V V V 70.604 V V V V V V V V V V V V V V V V V 170.676 V V V V V V V V V V V V V V V V V V 180.708 V V V V V V V V V V V V 120.761 V V V V V V V V V V V V V V 140.821 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 220.859 V V V V V V V V V V V V V V 141.000 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 241.063 V V V V V 51.204 V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V V 24检出数 18 22 23 21 17 17 19 20 14 21 15 19 18 15 18 12 18 14 12 15 18 26 14 19 24 15检出率％ 60 73 76 70 56 56 63 66 46 70 50 63 60 50 60 46 40 46 40 50 60 86 46 63 80 50

由表13可知，.值为0.123，0.821，1.000和1.204四个色谱峰为绝大多数柴胡属植物所共有，由此提示，该四个色谱峰是柴胡属植物的特征，当然，对北柴胡的鉴定而言，这是必备条件，但并非是完全条件。在与柴胡属植物色谱指纹谱的比较中将可观察到两者的差异，尤其是在特征指纹方面所显示的差异。虽然在19个不同产地的北柴胡样品间也观察到差异，然而这些个体差异所产生的特征指纹差异是较小的，它们的特征指纹检出率均较高，最高的达96.6％[一个样品]，最低的为76.6％，[四个样品]，其余均在80％-93.3％之间[十四个样品]。而对26个不同品种的柴胡属植物样品以北柴胡的特征指纹作检测时，检出率明显降低，与北柴胡的相比有显著性差异。柴胡属植物中检出率最低者仅为36.6％[一个样品]，46.6％-43.3％者有三个样品，50％-56.6％者有七个样品，60％-66.6％者有七个样品，70％-76.6％者有六个样品，80％-86.6％者有一个样品，达90％者有一个样品.若以75％为界，则有23个样品低于此线，仅三个样品高于此界限，其中48号为北柴胡，另二个分别为7号样品黑柴胡和59号样品银州柴胡。说明这二个不同品种的柴胡在其内在特性，化学成分方面，与北柴胡较相似。以上特征指纹的检识只是从各样品所含化学成分的角度进行了比较，至于有关各成分的含量情况则尚需通过其它参数于以说明。

差异率正如前文所述，差异率是一综合性的参数，它将每个特征指纹的检出及其含量状况[归一化面积值]结合起来，并形成一个可供比较的数据，使北柴胡的鉴定能同时兼顾质和量两个方面。现将其具体运作述于下。

首先以19个北柴胡样品的色谱指纹谱为基础，各样品均以柴胡皂甙A的面积值为基准，计算每个特征指纹的面积归一化值，列入各自的指纹谱。其次，对19个样品中个相对应的特征指纹面积归一化值求其均值，得X均值。见表14。

表14 北柴胡样品特征指纹面积归一化值[N值]及其均值

α样品	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	均值
α样品	1	31	32	33	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43	44	45	46	47	48	均值	.039	0	.489	1.24	.377	.822	0	.411	.291	.543	.464	.298	.342	1.08	1.05	.328	1.10	1.29	1.08	.406	.682
.055	0	6.81	1.72	3.06	.956	0	1.84	.697	1.82	2.00	.478	.568	1.33	2.18	.946	5.27	3.02	3.76	.435	2.133	.039	0	.489	1.24	.377	.822	0	.411	.291	.543	.464	.298	.342	1.08	1.05	.328	1.10	1.29	1.08	.406	.682
.055	0	6.81	1.72	3.06	.956	0	1.84	.697	1.82	2.00	.478	.568	1.33	2.18	.946	5.27	3.02	3.76	.435	2.133	.074	5.06	0	0	2.77	2.05	2.49	2.45	3.74	0	0	1.79	1.67	0	0	2.45	0	0	0	2.07	2.656
.088	.637	1.82	3.18	1.56	1.62	1.94	0	0	2.11	1.57	1.10	0	2.75	.220	1.60	4.00	2.32	2.15	0	1.907	.074	5.06	0	0	2.77	2.05	2.49	2.45	3.74	0	0	1.79	1.67	0	0	2.45	0	0	0	2.07	2.656
.088	.637	1.82	3.18	1.56	1.62	1.94	0	0	2.11	1.57	1.10	0	2.75	.220	1.60	4.00	2.32	2.15	0	1.907	.123	.433	.550	.565	.687	.705	.154	.669	.676	1.08	.377	.218	.446	.557	.769	.281	1.38	.577	.796	.267	.589
.244	0	0	0	.347	.414	.224	.619	.359	.794	.262	.292	.226	.881	.848	0	.810	1.11	.632	.234	.537	.123	.433	.550	.565	.687	.705	.154	.669	.676	1.08	.377	.218	.446	.557	.769	.281	1.38	.577	.796	.267	.589
.244	0	0	0	.347	.414	.224	.619	.359	.794	.262	.292	.226	.881	.848	0	.810	1.11	.632	.234	.537	.284	.424	.680	.926	.773	0	.205	.323	.872	.374	.559	.406	.657	1.02	.712	.772	.784	.730	1.15	.382	.652
.309	.512	.928	2.04	.429	.633	.839	.911	.855	0	.713	.433	.512	.666	.570	1.09	1.59	.911	.857	.603	.839	.284	.424	.680	.926	.773	0	.205	.323	.872	.374	.559	.406	.657	1.02	.712	.772	.784	.730	1.15	.382	.652
.309	.512	.928	2.04	.429	.633	.839	.911	.855	0	.713	.433	.512	.666	.570	1.09	1.59	.911	.857	.603	.839	.326	0	0	.440	.463	.670	.400	0	.556	1.96	.443	.378	.278	.802	.827	0	0	6.84	1.04	.369	1.03
.350	.744	1.32	2.29	0	.994	.533	.996	1.49	.635	.369	.285	.403	1.24	1.45	.532	3.13	.637	1.15	.252	1.02	.326	0	0	.440	.463	.670	.400	0	.556	1.96	.443	.378	.278	.802	.827	0	0	6.84	1.04	.369	1.03
.350	.744	1.32	2.29	0	.994	.533	.996	1.49	.635	.369	.285	.403	1.24	1.45	.532	3.13	.637	1.15	.252	1.02	.367	0	.869	0	.730	.710	.318	0	.340	.274	.559	.528	.345	0	.712	1.94	0	1.60	2.35	.901	.870
.388	1.33	.701	0	.604	.449	0	.546	1.00	1.61	.697	.687	.346	.355	1.16	0	.876	1.16	0	.159	.730	.367	0	.869	0	.730	.710	.318	0	.340	.274	.559	.528	.345	0	.712	1.94	0	1.60	2.35	.901	.870
.388	1.33	.701	0	.604	.449	0	.546	1.00	1.61	.697	.687	.346	.355	1.16	0	.876	1.16	0	.159	.730	.400	.274	.976	1.76	.374	.878	.331	0	.479	.575	.782	.657	.169	.921	0	.384	2.89	1.28	.884	.393	.824
.420	.597	.866	.859	.810	.713	.905	.558	1.16	1.16	0	.564	1.06	1.05	.628	0	.516	1.12	1.01	.561	.831	.400	.274	.976	1.76	.374	.878	.331	0	.479	.575	.782	.657	.169	.921	0	.384	2.89	1.28	.884	.393	.824
.420	.597	.866	.859	.810	.713	.905	.558	1.16	1.16	0	.564	1.06	1.05	.628	0	.516	1.12	1.01	.561	.831	.443	.692	0	.565	.478	.798	0	.554	1.18	.991	0	.184	0	2.13	1.23	1.47	2.61	.958	0	.627	1.04
.456	.582	.605	1.15	.718	.499	.634	.811	.248	.589	.477	.512	.551	0	0	0	.712	.516	1.11	.631	.431	.443	.692	0	.565	.478	.798	0	.554	1.18	.991	0	.184	0	2.13	1.23	1.47	2.61	.958	0	.627	1.04
.456	.582	.605	1.15	.718	.499	.634	.811	.248	.589	.477	.512	.551	0	0	0	.712	.516	1.11	.631	.431	.475	.201	0	2.04	.356	.232	.990	.888	0	1.48	.581	.475	.473	1.29	.644	.889	.928	.707	.986	.256	.790
.513	.600	1.10	0	.984	.884	.394	.273	.594	.635	.329	.298	.502	.408	.743	0	1.55	1.06	1.07	.376	.692	.475	.201	0	2.04	.356	.232	.990	.888	0	1.48	.581	.475	.473	1.29	.644	.889	.928	.707	.986	.256	.790
.513	.600	1.10	0	.984	.884	.394	.273	.594	.635	.329	.298	.502	.408	.743	0	1.55	1.06	1.07	.376	.692	.537	.613	.601	.593	.280	.884	.284	.338	.594	.520	.180	.211	0	.425	0	1.03	0	0	.796	0	.490
.556	0	0	0	.325	0	.287	0	.310	0	.209	.196	.586	0	.644	.709	.516	1.18	1.28	0	.621	.537	.613	.601	.593	.280	.884	.284	.338	.594	.520	.180	.211	0	.425	0	1.03	0	0	.796	0	.490
.556	0	0	0	.325	0	.287	0	.310	0	.209	.196	.586	0	.644	.709	.516	1.18	1.28	0	.621	.572	.311	.471	.418	.313	.253	.268	.334	414	0	.204	0	.266	0	.502	.595	.706	.358	0	.481	.432
.604	.445	.261	.802	.199	.222	.397	.569	.449	.698	0	.478	0	.452	.481	0	0	.284	.394	.552	.445	.572	.311	.471	.418	.313	.253	.268	.334	414	0	.204	0	.266	0	.502	.595	.706	.358	0	.481	.432
.604	.445	.261	.802	.199	.222	.397	.569	.449	.698	0	.478	0	.452	.481	0	0	.284	.394	.552	.445	.676	.488	.543	.480	.460	.659	.776	.331	.468	.488	.278	.446	0	.455	.293	.786	0	.414	.673	.283	.489
.708	.552	.247	0	273	.248	.176	0	.196	1.66	.374	0	.345	.531	.874	.716	.660	.637	.381	.512	.523	.676	.488	.543	.480	.460	.659	.776	.331	.468	.488	.278	.446	0	.455	.293	.786	0	.414	.673	.283	.489
.708	.552	.247	0	273	.248	.176	0	.196	1.66	.374	0	.345	.531	.874	.716	.660	.637	.381	.512	.523	.761	.530	0	.452	.325	.519	.186	.227	.558	0	.228	.162	0	.228	.199	.304	.876	.372	0	.199	.357
.821	1.65	.563	.666	.555	.238	.435	.546	.218	.635	.300	.311	.437	.455	.508	.993	.856	.363	.517	.329	.557	.761	.530	0	.452	.325	.519	.186	.227	.558	0	.228	.162	0	.228	.199	.304	.876	.372	0	.199	.357
.821	1.65	.563	.666	.555	.238	.435	.546	.218	.635	.300	.311	.437	.455	.508	.993	.856	.363	.517	.329	.557	.859	.329	.268	.344	.165	0	0	.319	.482	.703	.239	.129	.441	.337	.324	.448	.706	.544	.374	.360	.385
1.000	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	.859	.329	.268	.344	.165	0	0	.319	.482	.703	.239	.129	.441	.337	.324	.448	.706	.544	.374	.360	.385
1.000	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.00	1.063	0	.519	.706	.297	.196	.224	.215	.338	1.86	.170	0	0	.324	.298	.174	1.12	.353	1.52	.053	.523
1.204	1.44	.938	1.37	.911	.514	1.13	1.03	1.58	1.16	.973	.824	1.00	1.00	.905	1.29	1.38	1.03	1.22	.868	1.03	1.063	0	.519	.706	.297	.196	.224	.215	.338	1.86	.170	0	0	.324	.298	.174	1.12	.353	1.52	.053	.523

X均值从统计的角度反映各个特征指纹在样品中存在量的平均状况，由于它在各样品中均以同一成分作基准，所得之比值反映了它们在各自样品中的含量比例，为各样品相互间的比较奠定基础，并可据此求取各样品的差异率，差异率的计算见下式。

X均值-Xi 差异率

差异率＝总差异率＝

X均值 N

X均值每个特征指纹的面积归一化值的平均值[19个北柴胡样

品的均值]

Xi 各样品中相应特征指纹的面积归一化值

N 北柴胡的特征指纹数，现为30

按上述操作，也可得到26个柴胡属植物样品中各个特征指纹的面积归一化值，及其相应的差异率.这些数据显示了各个特征指纹与均值间的差异，是待鉴样品与标准样品间产生差异的根本所在。因而对所有特征指纹的差异进行求和，然后除以特征指纹数即得待鉴样品与标准药材[此处为19个北柴胡样品的均值]间的总差异率。为清楚地说明北柴胡和柴胡属植物间特征指纹的比较情况，将所有45个样品的特征指纹检出率和总差异率列于表15。

表15 北柴胡和柴胡属植物样品的特征指纹检出率％和总差异率％

样品编品	检出率	总差异率	样品编号	捡出率	总差异率	样品编号	检出率	总差异率
样品编品	检出率	总差异率	样品编号	捡出率	总差异率	样品编号	检出率	总差异率		1	76.6	.537	45	80	.865	17	50	1.20
31	76.6	.442	46	93.3	.580	18	63.3	.760		1	76.6	.537	45	80	.865	17	50	1.20
31	76.6	.442	46	93.3	.580	18	63.3	.760		32	76.6	.664	47	83.3	.577	19	60	.728
33	96.	.6.367	48	90	.484	20	50	.741		32	76.6	.664	47	83.3	.577	19	60	.728
33	96.	.6.367	48	90	.484	20	50	.741	3	34	90	.422	2	60	1.42	21	60	1.16
35	83.3	.507	5	73	2.62	22	36.6	＞＞1	3	34	90	.422	2	60	1.42	21	60	1.16
35	83.3	.507	5	73	2.62	22	36.6	＞＞1		36	80	.434	7	76.6	.834	23	60	.746
37	93.3	.396	9	70	.535	24	56.6	1.594		36	80	.434	7	76.6	.834	23	60	.746
37	93.3	.396	9	70	.535	24	56.6	1.594	3	38	83.3	.579	63	50	.668	25	43.3	.890
39	86.6	.478	10	56.6	1.828	26	56.6	.638	3	38	83.3	.579	63	50	.668	25	43.3	.890
39	86.6	.478	10	56.6	1.828	26	56.6	.638		40	90	.503	11	56.6	.888
41	80	.528	12	63.3	.853	28	66.6	.715		40	90	.503	11	56.6	.888
41	80	.528	12	63.3	.853	28	66.6	.715		42	83.3	.390	13	70	.539	51	46.6	1.13
43	86.6	.400	15	46.6	＞＞1	58	70	.645		42	83.3	.390	13	70	.539	51	46.6	1.13
43	86.6	.400	15	46.6	＞＞1	58	70	.645		44	76.6	.571	16	70	.713	59	80	.408

现对上表内容作下列探讨

1.北柴胡与柴胡属植物间，在总差异率方面有明显的不同，北柴胡有19个不同产地的样品，但它们的总差异率在0.367-0.865之间，其中有两个样品[32号和45号]的总差异率大于0.600，占样品总数的10.5％。在柴胡属植物的26个样品中有22个的总差异率超过此值。因此在北柴胡与柴胡属中其它品种的药材间的区分与鉴定时，特征指纹的总差异率作为考察的首要条件，根据以上实验数据，建议暂定为小于0.600。

2.对于北柴胡和柴胡属植物样品中所出现的异常现象作如下检讨。

北柴胡中的32号[泉州产]和45[阜阳产]两个样品的总差异率分别为0.664和0.865均已超过0.600的界线，但两者的特征指纹检出率却分别高达76.6％和80％，是符合北柴胡鉴定所要求的。对此相互矛盾的情况如何解释.对此可仔细分析两者特征指纹的面积归一化值，32号样品有九个特征指纹的面积归一化值超过1，其中有的高达3.18，2.04和2.29。45号样品则有十一个特征指纹的面积归一化值超过1，其中有高达5.27，4.00，3.13，2.89和2.61者，显然这是导致它们总差异率较高的基本原因，同时也反映了这两个北柴胡中所含成分是合格的，但在成分的含量比例方面存在较大差异，建议临床用药遇到这类北柴胡药材时要慎重，尤其对用药剂量的大小要多加小心。柴胡属植物中有四个样品9号[阿尔泰柴胡]，13号[泸西柴胡]，48号[北柴胡]，59号[银州柴胡]，它们的总差异率均低于0.600。其中48号是北柴胡属正常情况。9号和13号两者的特征指纹检出率均为70％，该值低于拟定的特征指纹检出率界线76％，随即可排除在北柴胡品种之外。59号的特征指纹鉴出率为80％，高于上述界线，它的十强峰有九个都被收入特征指纹之列。以上各项参数均说明59号样品与北柴胡极相似，从色谱指纹谱的角度而言，有可能被定为北柴胡，因而被误作药用。但从另方面来看，银州柴胡有可能被纳入药用，扩大柴胡属药用植物的范围。当然，要达到此目的尚需做大量的药理，药效，毒理等实验，以保证用药安全有效。另，值得注意同被药典收载的柴胡属植物窄叶柴胡[红柴胡B.scorzonerifolium]，其特征指纹检出率50％，总差异率0.668，说明它与北柴胡有明显的差别，对此应引起注意。

3.现将上述整个指纹谱鉴定过程归纳为下列几个步骤

首先是建立各样品的色谱指纹谱，对这项工作应特别指出的是作为标准药材的品种，产地，批号等各项内容都应标明，且必须有一定的样本数，以减少生物样品个体差异所致的影响。当然，对于饮片，制剂，成药一类样品，除应保证一定数量的样本外，更要注意最终产品，中间品和原料药材间的一致性。

其次是共有峰，重叠率，n强峰，特征指纹，特征指纹检出率，特征指纹差异率和总差异率等。前三项是产生各项参数的依据，应予特别注意。至于重叠率，在具有明确的标准药材时，或在无法获得具统计意义的样本数时，它还是一个颇具实用价值的参数。因为它比特征指纹所反映的化学成分状况更全面而充份，在中药如此复杂的情况下会有其特定的意义。例如将样品的选择限定在一个极小的范围内时，它的作用将比特征指纹更具实用意义。

当获得上述各项参数后，首先考察待鉴样品的特征指纹检出率和总差异率，针对该两项指标可能出现的情况作出判断，一是两项指标全部符合鉴定要求，二是两项指标均不符合鉴定要求，三是只有一项符合鉴定要求。前二种情况给出的结论是明确的，前者为合格，后者为不合格，对第三种情况则需作进一步探讨。若为特征指纹检出率不合格，表明该样品在化学成分方面存在较大差异，其总差异率之所以合格，可能是在各特征指纹求取总差异率的过程中被平均化了..若为一般的平均化且总差异率相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定..若为既有严重特征指纹检出率差异，其特征指纹总差异率虽相差不大，对此也应给出不合格鉴定。若为总差异率不合格，而特征指纹检出率合格，此时应小心地察看导致总差异率不合格的原因，若为少数几个特征指纹的含量较高所致，则，只要不是特殊的高，且总差异率相差在0.1范围内，可以考虑给出合格鉴定.进一步还可考察其n强峰，其中有几个被纳入特征指纹，若达90％以上，则应考虑给出合格鉴定，若较低，则应给出不合格鉴定。

4.在表3和表11中，可清楚地看到，有四个α值分别为0.123，0.850，1.000和1.204者，几乎是所有样品共有的，它们是柴胡属植物鉴定时必须检出的成分.经标准品对照，后三个成分分别是柴胡皂甙D，柴胡皂甙A，柴胡皂甙C，经药效试验证明，它们都是柴胡中的活性成分，且都已有标准品供应。实施例2

淫羊藿属植物的HPLC指纹谱分析

淫羊藿(Herba Epimedii)是一味常用的补肾壮阳药，并已成为近年来研究开发的热门药材。现代药理学研究证实，它不仅对心脑血管有明显的药理作用，而且在抗衰老、抗肿瘤、抗骨质疏松和免疫调节等方面都有明显的生物活性。

根据资料所载，我国共有23个品种的淫羊藿属植物，另有4个为其变种。本研究收集得8种淫羊藿，其中5种为我国药典收载作药用，包括不同产地和不同部位共23个样品，采用HPLC法作其指纹谱研究，以期能为淫羊藿植物的区分和鉴定提供切实可行的方法，并为建立药用淫羊藿植物的质量标准提供依据。仪器和材料

PE 1022 LCPLDUS色谱工作站，PE 235C DAD DETECTOR紫外检测器，PE SERDIES 200 LC PUMP泵(美国PE公司)，MD100-1型电子天平(上海天平仪器厂)，80-1型离心机(上海手术器械厂)，一次性有机溶剂微孔滤膜过滤(0.45μm，上海中惠公司)。

乙腈(色谱纯，上海星狮生物工程有限公司)，甲醇(分析纯，上海振兴化工一厂)，冰乙酸(分析纯，上海试剂四厂)。

淫羊藿甙标准品(含量测定用，中国药品与生物制品检定所)。

样品由上海医科大学施大文教授鉴定并提供：样品号名称部位来源1 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶贵州黔岭山2 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 叶上海市药材公司3 黔岭淫羊藿(Epimedium leptorrhizum) 茎贵州黔岭山4 巫山淫羊藿(E.Wushanense) 叶茎贵州5 巫山淫羊藿(E.wushanense) 根陕西安康6 巫山淫羊藿(E.wushanense) 茎陕西安康7 巫山淫羊藿(E.wushanense) 叶陕西安康8 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎陕西安康9 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶陕西安康10 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶安徽11 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 茎安徽12 箭叶淫羊藿(E.sagittatum) 叶茎广西灵山13 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶云南14 宝兴淫羊藿(E.davidii) 茎云南15 宝兴淫羊藿(E.davidii) 叶茎湖南16 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 茎四川灌县17 柔毛淫羊藿(E.pubescens) 叶四川灌县18 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶河南洛阳19 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎辽宁20 朝鲜淫羊藿(E.koreanum) 叶茎青海药检所21 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎江苏无锡22 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎浙江临安23 淫羊藿(E.brevicornum) 叶茎陕西实验方法

色谱条件：

色谱柱：PERKIN-ELMER-SH/5 C18(5μm，250mm×4.6mmI.D.)，国产C18预保护柱(10μm，40mm×4.6mm I.D.)，检测波长A为270nm，B为320nm，流动相由A、B两部分以线性梯度在仪器内部的比例阀中混合而成，A为乙腈，B为0.7％乙酸溶液，线形梯度为：

0min 10min 20min 20min

A 18％ 22％ 24％ 50％

B 82％ 78％ 76％ 50％

淫羊藿甙标准品溶液配置：称取1.0mg淫羊藿甙标准品，置入10ml容量瓶中，加甲醇超声使溶解，配成0.10mg/ml标准品溶液。

样品供试液制备：

精密取淫羊藿叶、根或茎粉0.085克，置入10ml容量瓶中，加10ml甲醇超声提取30min，冷却，定容，离心，上清液经0.45μm滤膜滤过，即得。

样品分析：

将23个淫羊藿样品制成的供试液，按以上色谱条件进样分析，得各样品的HPLC图谱，见图1-图23，以及相应的DAD信息。同时用标准品溶液进样，确定淫羊藿甙峰的位置。

指纹谱分析

相对保留值指纹谱的建立

上述获得的23个样品的色谱图及其DAD信息，除了贵州产黔岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶外，在约27分钟处都有一个最大λmax、比吸收值ratio相同的共有峰。根据前述计算21个样品的色谱峰的相对保留值α，以9号箭叶淫羊藿叶的总峰面积为分母，根据相对面积值计算式计算各样品色谱峰与9号样品总色谱峰面积间的相对RA。然后，以9号箭叶淫羊藿叶的各峰的α值为基准，其它样品色谱峰α值按下列各要求与之相比，首先以1％为窗口范围对各α值进行比照归纳，合条件者再结合DAD检测信息进行考核，凡是α值相同或相近(误差≤±1％)，最大吸收波长λmax、比吸收值ratio都相等的峰，即可认定为同一化合物峰。将各个样品每个峰的RA值列在相应的α值项下，某α值项下无相应峰的样品，其RA值记为零。由此得到以下21个样品的相对保留值指纹谱，见表16。

表16 21个淫羊藿样品的相对保留值指纹谱

	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	共有峰
	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23	共有峰	0.072	1.83	0	0	0.83	1.51	0.96	1.61	0	0	0	0.094	0	12.91	0.9	1.01	0	0	0	0	1.94	0.98	11
0.099	0	0	0	0.71	0.56	0	0.55	0	0	0	1.02	0	12.93	0	0.7	0	0.61	0.54	0	0.76	0	9	0.072	1.83	0	0	0.83	1.51	0.96	1.61	0	0	0	0.094	0	12.91	0.9	1.01	0	0	0	0	1.94	0.98	11
0.099	0	0	0	0.71	0.56	0	0.55	0	0	0	1.02	0	12.93	0	0.7	0	0.61	0.54	0	0.76	0	9	0.113	0	0	0	0	0	0	0.74	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1
0.172	1.72	2.91	0.48	0	0	0	1.51	0	0	0	1.03	0	0	0	0.36	0	0	0	0	0.95	0	7	0.113	0	0	0	0	0	0	0.74	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1
0.172	1.72	2.91	0.48	0	0	0	1.51	0	0	0	1.03	0	0	0	0.36	0	0	0	0	0.95	0	7	0.272	0	1.08	0	0	0	0	0.2	0	0	0	0.25	0	0	0.12	0.16	0	0	0	0	0	0	5
0.328	0	0	0	0	0	0	0.58	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1	0.272	0	1.08	0	0	0	0	0.2	0	0	0	0.25	0	0	0.12	0.16	0	0	0	0	0	0	5
0.328	0	0	0	0	0	0	0.58	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1	0.37	0	0	0	0	0	0	0.17	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1
0.418	0	0	0	0	0	0	0.51	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.26	0	0	0	2	0.37	0	0	0	0	0	0	0.17	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	1
0.418	0	0	0	0	0	0	0.51	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.26	0	0	0	2	0.463	0	0	0	0	0	0	0.24	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.66	0	0	0	2
0.496	2.9	0	6.24	0	1.61	0.59	0.98	0	0.94	0	0.68	0	0	0.77	0.69	1.72	0	0.74	0.13	1.4	1.18	14	0.463	0	0	0	0	0	0	0.24	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.66	0	0	0	2
0.496	2.9	0	6.24	0	1.61	0.59	0.98	0	0.94	0	0.68	0	0	0.77	0.69	1.72	0	0.74	0.13	1.4	1.18	14	0.549	2.37	0	8.81	0	0.55	1.4	1.18	0	0	0.27	0.41	0.21	0	3.01	1.29	0	0.61	1.18	0.58	0.52	0.62	15
0.635	0.27	0	0	0	0	0	0.32	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.24	0	0	0	3	0.549	2.37	0	8.81	0	0.55	1.4	1.18	0	0	0.27	0.41	0.21	0	3.01	1.29	0	0.61	1.18	0.58	0.52	0.62	15
0.635	0.27	0	0	0	0	0	0.32	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.24	0	0	0	3	0.756	0	0.4	0	0	0	0	0.15	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.14	0	0	0	3
0.868	0	0	1.72	0	1.08	6.54	7.52	0	0	1.61	1.08	0	0	0	2.15	0.61	0.46	0	0	3.77	0	10	0.756	0	0.4	0	0	0	0	0.15	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.14	0	0	0	3
0.868	0	0	1.72	0	1.08	6.54	7.52	0	0	1.61	1.08	0	0	0	2.15	0.61	0.46	0	0	3.77	0	10	0.939	0	0.78	1.29	0	1.18	1.08	22.63	0	0	0	1.29	0	0	0	0	7.64	0.38	0	1.83	16.14	10.76	11
1	15.12	10.83	41.92	1.61	2.37	3.98	6.03	6.93	6.46	9.58	8.81	0.83	2.37	1.61	14	1.29	1.51	1.08	2.69	5.16	1.94	21	0.939	0	0.78	1.29	0	1.18	1.08	22.63	0	0	0	1.29	0	0	0	0	7.64	0.38	0	1.83	16.14	10.76	11
1	15.12	10.83	41.92	1.61	2.37	3.98	6.03	6.93	6.46	9.58	8.81	0.83	2.37	1.61	14	1.29	1.51	1.08	2.69	5.16	1.94	21	1.12	0.15	0.75	0.28	0	8.5	0.17	21.91	0	0	6.78	3.02	0	0	0	20.9	5.06	4.41	6.24	1.72	9.36	10.3	14
1.23	0	0	0	0	1.04	0	1.61	0	0	0.44	0	0	0	0	0	0	1.05	0.63	6.24	0.23	1.61	8	1.12	0.15	0.75	0.28	0	8.5	0.17	21.91	0	0	6.78	3.02	0	0	0	20.9	5.06	4.41	6.24	1.72	9.36	10.3	14
1.23	0	0	0	0	1.04	0	1.61	0	0	0.44	0	0	0	0	0	0	1.05	0.63	6.24	0.23	1.61	8	1.26	0	0	0	0	0.2	0	1.02	0	0	0	0.93	0	0	0	0	0.34	0	0	0.81	0	0.74	6
1.31	0	0	0	0	0.69	0	0.51	0	0	0	0.36	0	0	0	0	0	2.26	0	0.23	0.57	0	6	1.26	0	0	0	0	0.2	0	1.02	0	0	0	0.93	0	0	0	0	0.34	0	0	0.81	0	0.74	6
1.31	0	0	0	0	0.69	0	0.51	0	0	0	0.36	0	0	0	0	0	2.26	0	0.23	0.57	0	6	1.34	0	0	0	0	0	0	1.29	0	0	0	1.35	0	0	0	1.08	0	0	0	0	0	0	3
1.42	1.26	1.47	0	0	0	0	7.12	0	0	0	0	0	0	0	2.8	0	1.51	1.61	0	2.04	1.29	8	1.34	0	0	0	0	0	0	1.29	0	0	0	1.35	0	0	0	1.08	0	0	0	0	0	0	3
1.42	1.26	1.47	0	0	0	0	7.12	0	0	0	0	0	0	0	2.8	0	1.51	1.61	0	2.04	1.29	8	1.5	3.98	0	538	0	0	1.51	0.87	0	0	1.94	1.29	0	0	0	0.34	0.39	0	0	1.94	0	0	9
1.52	0	1.18	0	0	0	0	0.67	0	0	0.71	0.14	0	0	0.19	0	0	0.48	0.43	0.36	0.96	0.46	10	1.5	3.98	0	538	0	0	1.51	0.87	0	0	1.94	1.29	0	0	0	0.34	0.39	0	0	1.94	0	0	9
1.52	0	1.18	0	0	0	0	0.67	0	0	0.71	0.14	0	0	0.19	0	0	0.48	0.43	0.36	0.96	0.46	10	1.59	1.72	0	1.61	0	0	0	0.99	0	1.08	0	0	0	0	0	1.01	2.15	0	0	0	0	0	6
1.63	0.25	0	0.31	0.42	0	0.42	1.01	0	0	0	0.48	0	0	0	0.95	0.38	1.29	0.44	0.58	0.81	0.56	13	1.59	1.72	0	1.61	0	0	0	0.99	0	1.08	0	0	0	0	0	1.01	2.15	0	0	0	0	0	6
1.63	0.25	0	0.31	0.42	0	0.42	1.01	0	0	0	0.48	0	0	0	0.95	0.38	1.29	0.44	0.58	0.81	0.56	13	1.67	1.02	0	1.72	0	2.26	0	2.37	0	3.34	0	0	0	0	0	0	0.61	0	0	3.01	1.94	0	8
1.72	5.49	0	3.77	0	0	0	4.2	0	0	2.69	0	0	0	0.61	1.51	0	0	3.77	0	0	1.4	8	1.67	1.02	0	1.72	0	2.26	0	2.37	0	3.34	0	0	0	0	0	0	0.61	0	0	3.01	1.94	0	8
1.72	5.49	0	3.77	0	0	0	4.2	0	0	2.69	0	0	0	0.61	1.51	0	0	3.77	0	0	1.4	8	1.74	0	0	0.24	0	0	0	0.71	0	0	0	0.29	0	0	0	3.01	0.61	0.25	0	0	0	0.2	7
1.83	0	0	0	0	0	0	3.01	0	0	1.83	0.62	0	0	0.28	0.12	0	0	3.44	2.04	0	1.18	8	1.74	0	0	0.24	0	0	0	0.71	0	0	0	0.29	0	0	0	3.01	0.61	0.25	0	0	0	0.2	7
1.83	0	0	0	0	0	0	3.01	0	0	1.83	0.62	0	0	0.28	0.12	0	0	3.44	2.04	0	1.18	8	1.88	0.14	0	0.15	0	0.28	1.29	0.5	0.19	0	0.66	0.45	0	0	0.29	4.09	0.15	0.82	0.38	0.28	0.22	0.28	16
1.92	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.48	0.36	0.14	0	0.18	0.22	0.24	0.17	0	0	0.12	0.19	9	1.88	0.14	0	0.15	0	0.28	1.29	0.5	0.19	0	0.66	0.45	0	0	0.29	4.09	0.15	0.82	0.38	0.28	0.22	0.28	16
1.92	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0.48	0.36	0.14	0	0.18	0.22	0.24	0.17	0	0	0.12	0.19	9	总峰数	13	8	14	4	13	10	31	2	4	11	20	3	2	10	19	13	14	16	14	17	16
总峰面积	38.22	19.4	72.14	3.57	21.82	17.94	92.3	7.12	11.82	26.99	24.8	1.18	28.21	7.96	56.38	21.19	14.59	21.78	14.59	46.89	33.69		总峰数	13	8	14	4	13	10	31	2	4	11	20	3	2	10	19	13	14	16	14	17	16

贵州黔岭淫羊藿叶与购自上海市药材公司的黔岭淫羊藿叶的HPLC图谱中无选定计算α值的内参照峰，没有建立其相对保留值指纹谱。

样品之间的相似性

将21个淫羊藿样品按前述重叠率计算式计算两两之间的峰重叠率并列表，组成反映样品间相似性的峰重叠率距阵，只需列出一半即可。见表17。

表17 21淫羊藿样品HPLC峰重叠率3 1004 28.6 1005 74.1 36.4 1006 35.4 16.7 22.2 1007 46.2 28.6 59.2 35.3 1008 60.9 33.3 75 42.8 78.3 1009 59.1 41 62.2 22.8 59.1 48.7 10010 26.7 20 12.5 33.3 26.7 16.7 12.1 10011 53.3 16.7 44.4 25 35.3 28.6 22.8 33.3 10012 41.7 31.6 56 13.3 50 54.5 47.6 30.7 13.3 10013 48.5 42.8 64.7 33.3 66.7 66.7 74.5 18.2 16.7 56.3 10014 25 18.2 23.5 28.6 25 30.8 11.8 40 28.6 28.6 17.4 10015 26.7 20 12.5 85.7 37.5 30.8 17.6 40 28.6 14.3 26.1 13.3 10016 52.2 33.3 41.7 28.6 43.5 50 43.9 33.3 28.6 66.7 60 46.2 30.8 10017 68.8 37 72.7 34.8 50 62.1 72 19 26.1 60 82.1 27.3 27.3 62.1 10018 53.8 28.6 81.5 23.5 61.5 69.6 54.5 26.7 47.1 50 66.7 25 12.5 43.5 62.5 10019 37 45.5 57.1 33.3 66.7 58.3 57.8 25 11.1 64 70.6 35.5 23.5 41.7 60 59.3 10020 55.2 41.7 46.7 30 48.3 46.2 68.1 22.2 20 59.3 50 21 23.5 53.8 51.7 34.5 60 10021 51.9 36.4 64.3 22.2 74.1 66.7 62.2 25 33.3 64 70.6 23.5 11.8 50 48.5 66.7 64.3 60 10022 60 48 64.5 38.1 80 66.7 66.7 21 28.6 57.1 75.7 30 30 51.8 66.7 60 83.9 58.8 7123 55.2 41.7 60 30 62.1 61.5 63.8 22.2 20 66.7 72.2 31.6 21.1 69.2 68.6 46.2 73.3 68.8 73.3

3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

12个样品的HPLC六强峰

自21个样品中挑选出峰数达13或13以上的样品共12个，每个样品均选出其中峰面积最大的6个峰排列成表，得21个样品的六强峰表。见表18。

表18 淫羊藿样品的六强峰

样品	1 2 3 4 5 6	面积和	占总面积％
	1 2 3 4 5 6			α/RA
	3			α/RA	1.0/15.12 1.72/5.49 1.50/3.98 0.496/2.90 0.549/2.37 0.0716/1.83 31.691.0/41.92 0.549/8.81 0.496/6.234 1.50/5.38 1.72/3.77 1.12/1.28 67.41.12/8.50 1.0/2.37 1.67/2.26 0.496/1.61 0.0716/1.51 0.939/1.18 17.430.939/22.68 1.12/21.9 0.868/7.52 1.42/7.12 1.0/6.03 1.72/4.20 69.41.0/8.81 1.12/3.02 1.34/1.35 1.50/1.29 0.939/1.29 0.868/1.08 16.841.12/20.9 1.0/14.0 1.88/4.09 1.72/3.01 1.42/2.80 0.868/2.15 40.950.939/7.64 1.12/5.06 1.59/2.15 0.496/1.72 1.0/1.29 1.72/0.61 18.471.12/4.41 1.31/2.26 1.42/1.51 1.0/1.51 1.67/1.29 1.23/1.05 12.031.12/6.24 1.72/3.77 1.88/3.44 1.42/1.61 0.549/1.18 1.0/1.08 17.321.23/6.24 1.67/3.01 1.0/2.69 1.88/2.04 1.50/1.94 0.939/1.83 17.750.939/16.14 1.12/9.36 1.0/5.16 0.868/3.77 1.42/2.04 0.0716/1.94 38.410.939/10.76 1.12/10.30 1.0/1.94 1.23/1.61 1.72/1.40 1.42/1.29 27.3	83.2
5	3	90				83.2
5	7	90	79.8
9	7	75	79.8
9	13	75	67.9
17	13	83.3	67.9
17	18	83.3	87.2
19	18	82.5	87.2
19	20	82.5	79.5
21	20	79.1	79.5
21	22	79.1	81.9
23	22	81	81.9

特征指纹峰

以上述21个样品的六强峰为主体，并结合它们在21个样品中出现的频率，选出α值为0.0716、0.496、0.549、0.868、0.939、1.000、1.12、1.42、1.51、1.72和1.88等11个色谱峰为本文所研究淫羊藿植物的特征指纹。现将21个样品的特征指纹峰检出情况列于表19中，并列出样品中淫羊藿甙的含量，以观察两者之间的相关性。

表19 21样品的特征指纹检出率及淫羊藿甙的含量

α值检出特检出淫羊藿甙样品号

0.072 0.496 0.549 0.868 0.939 1 1.12 1.42 1.5 1.72 1.88 征峰数率％含量％3 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.003674 √ √ √ √ √ 5 45.4 0.07535 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 54.5 0.05266 √ √ 2 18.2 0.02877 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.4438 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.03589 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 11 100 1.5110 √ √ 2 18.2 0.035511 √ √ 2 18.2 0.0077812 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.33413 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.56214 √ √ 2 18.2 0.039515 √ √ 2 18.2 0.037316 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.052117 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 1.5318 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.71719 √ √ √ √ √ √ √ √ √ 9 81.8 0.37920 √ √ √ √ √ √ √ √ 8 72.7 0.40521 √ √ √ √ √ √ √ 7 63.6 0.35822 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.71423 √ √ √ √ √ √ √ √ √ √ 10 90.9 0.537共有样品数 11 14 15 10 11 21 15 8 9 11 16

表19充分反映了淫羊藿的内在特性，这些特征峰可作为其指纹特征用来区分淫羊藿，以供药用。特征指纹和特征指纹的检出率与淫羊藿甙含量的相关性将构成淫羊藿药材质量标准的重要内容之一。讨论

1.样品指纹谱之间的相似性。

(1)各种茎叶样品之间的相似性

中华人民共和国药典规定，淫羊藿的药用部位为地上部分的茎叶，现选择其中淫羊藿甙含量最高的22号样品为基准，通过与一些茎叶样品的指纹谱重叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量作比较研究(见表20)，发现重叠率、检出率以及淫羊藿甙含量之间呈正相关关系。

表20 茎叶样品之间的相似性样品编号 4 12 15 19 20 21 22 23重叠率％ 48 57 48 83.9 58.8 71 100 72.7特征指纹峰

45.4 63.6 18.2 81.8 72.7 63.6 90.9 90.9检出率％淫羊藿甙

0.0753 0.334 0.037 0.379 0.405 0.358 0.714 0.537含量％

4号虽属被药典收载品种，但从上述三项指标观之，不具备入药的基本条件，而15号样品为非药典收载品种，不作药用是应是理所当然的。而三项指标均高的19号和23号样品(包括22号)均为药典收载品种，据此可判为优质药材。而三项指标表现一般的12号、20和21号三个样品，其中12号系非药典收载品种，除淫羊藿甙含量合格外，另二项均属偏低，还是应列入不能药用的范围，20号和21号均为药典收载品种，但各有一项指标偏低，只能认可其药用，但不能列入优质药材。

(2)各种叶样品的质量分析

以其中淫羊藿甙含量高的9号样品为基准，与其它的叶样品作重叠率、特征指纹峰检出率以及淫羊藿甙含量的比较研究，结果(见表21)表明三者之间也呈正相关关系。

表21 叶样品之间的相似性

样品编号 7 9 10 13 17 18

重叠率％ 59.1 100 12.1 74.5 72 54.5

特征指纹峰

72.7 100 18.2 90.9 90.9 72.7

检出率％

淫羊藿甙

0.443 1.51 0.0355 0.562 1.53 0.717

含量％

其中10号样品最为突出，它是安徽产的箭叶淫羊藿，虽属药典收载品种，但指标均十分低，不仅应判为劣质药材，且不能入药，相同品种但产地不同的9号样品(陕西安康产)，其三项指标均达最高。17号样品，属药典收载品种，三项指标也均较高。因此，9号和17号可判为优质药材，7号也为陕西产，但品种不同，其三项指标一般。上述情况说明品种和产地的重要性，它们都会对药材质量产生显著的影响。18号和7号，情况类似，也只能判为一般药材，13号药材是云南产的宝兴淫羊藿，系非药典收载品种，但它的三项指标均处合格以上，能否可作药用，尚需进一步作特征指纹的差异率和总差异率考察。

(3)各种茎样品的质量分析

纵观各种茎样品中淫羊藿甙的含量，十分低下，从入药角度考虑，茎是不足取的。因此，茎之间比较已无意义，现取9号叶样品与之比较，结果(见表22)，表明茎与叶相比重叠率普遍低下，且重叠率低的特征指纹峰检出率也低；充分揭示了茎和叶之间在化合物组成以及甙含量方面有着明显差异。

表22 茎样品之间的相似性样品编号 3 6 8 9 11 14 16重叠率％ 55.2 22.8 48.7 100 22.8 11.8 43.9特征指纹峰

81.8 18.2 81.8 100 18.2 18.2 63.6检出率％淫羊藿甙

0.00363 0.0287 0.0358 1.51 0.00778 0.0395 0.0521含量％

综合茎叶、叶和茎的淫羊藿甙含量可知，由于茎中甙的含量十分低下，即使叶有较高的含量，茎叶合用的结果必然使茎叶中甙的含量降低乃至不符和药典要求。因此，作者认为，为保证淫羊藿的临床疗效，淫羊藿以叶入药为好。

2.在药典所收载的五个淫羊藿品种中，巫山、箭叶、柔毛、朝鲜和淫羊藿等的叶或茎叶，它们的特征指纹检出率均在72.7％之上，淫羊藿甙的含量也均在0.3％以上。若对品种、产地、药用部位等三方面予以综合考虑，则以陕西安康产的箭叶淫羊藿叶和四川灌县产的柔毛淫羊藿叶为最佳；若以习惯药用部位淫羊藿为地上部分时，则可考虑浙江临安和陕西产的淫羊藿茎叶以及青海朝鲜淫羊藿、江苏无锡淫羊藿、广西灵山箭叶淫羊藿茎叶。但各种茎叶的淫羊藿甙含量均低于0.72％。由于未获得19、20、21、22、23等淫羊藿品种的叶，不然，对单独以叶入药的结论会更有说服力和实验依据。从当前GAP的要求来看，陕西、浙江、四川等省的有关地区应是首选的产地，品种则以箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿和淫羊藿为宜，另两个品种可考虑从药典收载品种中除名。

3.数据化了的色谱指纹谱可产生一系列的参数，包括重叠率、n强峰、特征峰群以及特征指纹检出率等，为鉴定和区分药材的品质提供了科学的、客观的、公正的依据。它可充分利用色谱分离所提供的大量信息，使中药材的内在特性得以较全面地显示。进一步证明色谱指纹谱对中药质量分析鉴定十分有效的。本实验中也存在一些问题，例如样本数太小，即样品批号太少，使结论的代表性和公正性受到影响，同时也因数据太少，没能进行特征指纹的差异率和总差异率计算，这些情况将在以后的实验中加以弥补。实施例3

半夏及其炮制品的色谱指纹谱

半夏因其有毒而在临床上常用其炮制品，能治疗痰多咳喘，痰饮眩悸，胸脘痞闷，呕吐反胃，梅核气，头痛等病症。药理研究充分证明半夏具有镇咳、镇吐、抗癌、利胆，调节肠胃，降低眼内压和抑制心脏等作用。最近发现还具有抗炎、抗早孕的作用。

目前常用炮制品有制半夏、宋半夏、仙半夏、青盐半夏、竹沥半夏等。由于其有毒，需进行炮制，但在半夏炮制时也没有一定的质控指标，仅凭感觉判别，即麻舌程度，无客观的科学依据。由于依赖主观判断所得的结果造成了质控的波动，极大地影响了半夏炮制品的质量。目前尚未见有关半夏及其炮制品的质控研究报道，虽有涉及麻黄碱、总生物碱、氨基酸、β-谷甾醇等化合物的含量测定，但缺乏针对性和系统性的研究，且上述这些成分也是许多中药普遍含有的成分，无突出的鉴别意义。因此用色谱指纹谱技术来分析半夏及其炮制品的质量问题，也许会有所进展。

药品、试剂、仪器

药材编号品名鉴定者产地或来源供应者1 生半夏Pinellia ternata

(Thunb.)Breit 王志伟四川上海养和堂饮片厂

天南星科植物半夏2 生半夏(同上) 王志伟浙江磐安3 生半夏(同上) 王志伟四川梁平4 生半夏(同上) 王志伟信德中药厂5 制半夏王志伟 1号样品的炮制品上海养和堂饮片厂6 制半夏王志伟 3号样品的炮制品上海雷允上饮片厂7 宋半夏王志伟 1号样品的炮制品上海养和堂饮片厂8 仙半夏王志伟 1号样品的炮制品上海养和堂饮片厂9 青盐半夏王志伟 1号样品的炮制品上海养和堂饮片厂10 竹沥半夏王志伟 1号样品的炮制品上海养和堂饮片厂11 制半夏王志伟 4号样品的炮制品信德中药厂

试剂：

甲醇(HPLC级)购于中国医药(集团)上海化学试剂公司，水为重蒸去离子水试剂，乙腈(HPLC级)上海星狮生物有限公司。

色谱条件

色谱仪：PERKIN-ELMER series200 Ic pump

色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6*250 mm 5μm)

检测器：PERKIN-ELMER DAD 235C

检测波长：215nm

流动相：乙腈—水

梯度条件：时间(分钟) 0.2 13 3 14

乙腈(％) 5 15 75 75

流速：1mL/min

进样量：20μl

样品制备：

分别精密称取过10目筛的1-11号样品粉末各5.000克，置于50ml三角烧瓶中，各加甲醇20ml，以超声提取45min，然后过滤，滤液浓缩定容至5ml，得样品1-11号的进样溶液。

HPLC-FPS的建立

将分析所得色谱数据，按前述原则建立十一个样品的指纹谱，见表23。十一个样品的揩纹谱，以1％为窗口范围，所有各样品的相对保留值经归纳后，共计出峰数为六十二个。1号样品出峰数高达四十八个，见色谱图-1，最少的为11号样品，仅出峰三十六个。从整体上看，生品的出峰数较多，炮制品则较少。表24是以1号样品为基准列出了其它十个样品的重叠率。生品的重叠率较高，均在81％以上，而炮制品则在67.4％-73.4％之间。表25是它们的八强峰。

表23 11个样品的HPLC-FPS

相对面积α值	样品
	样品												1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	共有峰
	0.080						0.03						1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	共有峰	1
0.092	0.080						0.03										0.02	0.65						2	1
0.092	0.101										1.98						0.02	0.65						2	1
0.105	0.101										1.98		6.04	9.85	4.24	6.38	5.91	1.61	1.15	5.84	6.15	4.41	5.60	11	1
0.105	0.118		1.08	0.80			0.19	0.31		0.44			6.04	9.85	4.24	6.38	5.91	1.61	1.15	5.84	6.15	4.41	5.60	11	5
0.129	0.118		1.08	0.80			0.19	0.31		0.44			1.92	1.17	1.31	7.44	2.90	1.22	1.57	0.62	0.85	0.88	1.39	11	5
0.129	0.134	4.15	3.76	4.22					2.27	2.04			1.92	1.17	1.31	7.44	2.90	1.22	1.57	0.62	0.85	0.88	1.39	11	5
0.160	0.134	4.15	3.76	4.22					2.27	2.04			1.36				0.52							2	5
0.160	0.185	0.40	0.43	0.53		1.35	0.73	0.36	0.95		0.20	0.63	1.36				0.52							2	9
0.195	0.185	0.40	0.43	0.53		1.35	0.73	0.36	0.95		0.20	0.63	2.10	2.12	1.95	3.02		0.20	0.51	0.62	1.52	0.26		9	9
0.195	0.211	1.60	1.43	1.50	2.05	0.96	0.05		0.21	0.75		0.13	2.10	2.12	1.95	3.02		0.20	0.51	0.62	1.52	0.26		9	9
0.226	0.211	1.60	1.43	1.50	2.05	0.96	0.05		0.21	0.75		0.13				0.46	0.41	0.06	1.19	0.39	0.21	0.27	0.06	8	9
0.226	0.230									0.26						0.46	0.41	0.06	1.19	0.39	0.21	0.27	0.06	8	1
0.244	0.230									0.26			0.56	0.38	0.50	0.43	0.19	0.08		0.37	0.35			8	1
0.244	0.263	0.54	0.65	0.35					0.35			0.13	0.56	0.38	0.50	0.43	0.19	0.08		0.37	0.35			8	5
0.285	0.263	0.54	0.65	0.35					0.35			0.13	0.41	0.46	0.43	1.16	0.75	0.75	1.60	054	0.85	0.50	0.05	11	5
0.285	0.308	2.91	1.92	2.81	2.97	0.36		0.42	0.32	0.58	0.06	0.12	0.41	0.46	0.43	1.16	0.75	0.75	1.60	054	0.85	0.50	0.05	11	10
0.334	0.308	2.91	1.92	2.81	2.97	0.36		0.42	0.32	0.58	0.06	0.12	0.84	0.23	0.63	0.82			0.32	0.87		0.15	0.47	8	10
0.334	0.345	3.27	2.32	3.31	3.58	1.84	0.67			1.91	0.09		0.84	0.23	0.63	0.82			0.32	0.87		0.15	0.47	8	8
0.366	0.345	3.27	2.32	3.31	3.58	1.84	0.67			1.91	0.09		0.31	0.18	0.23	0.32		0.07	0.34	0.20			0.56	8	8
0.366	0.384	0.20			1.17	0.88	0.19		0.41	0.77	0.21	0.49	0.31	0.18	0.23	0.32		0.07	0.34	0.20			0.56	8	8
0.403	0.384	0.20			1.17	0.88	0.19		0.41	0.77	0.21	0.49	0.77	0.58	0.89								0.90	4	8
0.403	0.419		0.29										0.77	0.58	0.89								0.90	4	1
0.436	0.419		0.29										0.93	0.20	0.60	0.96	0.41	0.24	0.19	0.82	1.73	0.11		10	1
0.436	0.467	0.16	0.06	0.19	0.26	0.79		0.11			0.11		0.93	0.20	0.60	0.96	0.41	0.24	0.19	0.82	1.73	0.11		10	7
0.492	0.467	0.16	0.06	0.19	0.26	0.79		0.11			0.11		0.19	0.13		0.36	0.42			0.14	0.13			6	7
0.492	0.513	1.74	1.46	2.34	3.14	0.58	0.89	0.15	0.15	0.34		0.99	0.19	0.13		0.36	0.42			0.14	0.13			6	10
0.546	0.513	1.74	1.46	2.34	3.14	0.58	0.89	0.15	0.15	0.34		0.99	0.18		0.51	0.55	0.60					0.05	0.63	6	10
0.546	0.579	0.46	0.07				1.04	0.44	0.31	0.75	0.17		0.18		0.51	0.55	0.60					0.05	0.63	6	7
0.610	0.579	0.46	0.07				1.04	0.44	0.31	0.75	0.17			0.14		031	0.53		0.59	0.05		0.08	0.92	7	7
0.610	0.630	0.21	0.03	0.42	0.13	0.87	0.06							0.14		031	0.53		0.59	0.05		0.08	0.92	7	6
0.652	0.630	0.21	0.03	0.42	0.13	0.87	0.06						0.14	0.11	0.14	0.52		0.05	0.55	0.28	0.04	0.99		9	6
0.652	0.678		0.15	0.17		0.07		0.96		0.35			0.14	0.11	0.14	0.52		0.05	0.55	0.28	0.04	0.99		9	5
0.692	0.678		0.15	0.17		0.07		0.96		0.35							0.05					0.14		2	5
0.692	0.714	0.15	0.10	0.25		0.33	1.29	0.60	0.41	0.10	0.02	0.36					0.05					0.14		2	10
0.735	0.714	0.15	0.10	0.25		0.33	1.29	0.60	0.41	0.10	0.02	0.36				0.08			0.32		0.32			3	10
0.735	0.750	0.23	0.20		0.04			0.09	0.21	0.04						0.08			0.32		0.32			3	6
0.767	0.750	0.23	0.20		0.04			0.09	0.21	0.04					0.43	1.09		0.65		0.24	0.67	1.53		6	6
0.767	0.775	2.13	2.92	3.43	3.97	1.50	3.04	6.15	4.12	4.78	5.81	3.31			0.43	1.09		0.65		0.24	0.67	1.53		6	11
0.777	0.775	2.13	2.92	3.43	3.97	1.50	3.04	6.15	4.12	4.78	5.81	3.31		1.17			3.97			10.53				3	11
0.777	0.782	3.60	2.75											1.17			3.97			10.53				3	2
0.788	0.782	3.60	2.75										1.61		1.76	1.24	1.73	1.70	1.45	2.05	3.32	1.36	2.35	10	2
0.788	0.796	1.36	2.21	1.11	1.04	1.59	3.39	1.86	3.22	1.84	0.99	1.56	1.61		1.76	1.24	1.73	1.70	1.45	2.05	3.32	1.36	2.35	10	11
0.805	0.796	1.36	2.21	1.11	1.04	1.59	3.39	1.86	3.22	1.84	0.99	1.56	1.41	1.51	1.09	1.08	1.46		12.17	3.32	1.73	10.99	1.46	10	11
0.805	0.819	1.32	1.29	1.51	0.14	2.34	1.21	8.47		1.45		2.58	1.41	1.51	1.09	1.08	1.46		12.17	3.32	1.73	10.99	1.46	10	9
0.824	0.819	1.32	1.29	1.51	0.14	2.34	1.21	8.47		1.45		2.58			4.01			0.74		2.68	0.84	7.34		5	9
0.824	0.835	4.42	4.51		3.74	4.90	5.81	12.34	4.98	5.42	4.37	8.51			4.01			0.74		2.68	0.84	7.34		5	10
0.851	0.835	4.42	4.51		3.74	4.90	5.81	12.34	4.98	5.42	4.37	8.51		0.75			1.30			1.03				3	10
0.851	0.867	33.81	35.75	35.08	31.18	36.11	29.55	21.70	28.97	34.57	29.11	38.56		0.75			1.30			1.03				3	11
0.887	0.867	33.81	35.75	35.08	31.18	36.11	29.55	21.70	28.97	34.57	29.11	38.56					3.04			2.03		1.64	2.87	4	11

0.904	2.32	1.40	2.56	3.09	2.47	1.80	10.12	3.78	7.40	10.91	3.07	11
0.904	2.32	1.40	2.56	3.09	2.47	1.80	10.12	3.78	7.40	10.91	3.07	11	0.919	1.09	4.01	1.23	2.13	2.14	2.46	1.22	2.19	1.07	1.47	1.71	11
0.937	1.56		1.02	1.20	2.87		0.70		1.44	1.14	1.97	8	0.919	1.09	4.01	1.23	2.13	2.14	2.46	1.22	2.19	1.07	1.47	1.71	11
0.937	1.56		1.02	1.20	2.87		0.70		1.44	1.14	1.97	8	0.948			0.72	0.71		23.17	0.62	2.43	0.78	1.04	1.45	8
0.965	2.08	1.79	2.67	2.86	2.00	2.51	1.99	1.47	1.86	2.09	2.55	11	0.948			0.72	0.71		23.17	0.62	2.43	0.78	1.04	1.45	8
0.965	2.08	1.79	2.67	2.86	2.00	2.51	1.99	1.47	1.86	2.09	2.55	11	0.988			1.55							0.48		2
1	6.61	6.71	7.00	6.09	7.20	6.19	4.02	6.08	5.80	4.19	8.12	11	0.988			1.55							0.48		2
1	6.61	6.71	7.00	6.09	7.20	6.19	4.02	6.08	5.80	4.19	8.12	11	1.02	2.10	1.98	2.22	1.73	3.75	3.85	1.14	1.76	2.33	1.79	2.30	11
1.037	0.67	0.60	1.33	0.98			0.42	0.73	1.58		1.76	8	1.02	2.10	1.98	2.22	1.73	3.75	3.85	1.14	1.76	2.33	1.79	2.30	11
1.037	0.67	0.60	1.33	0.98			0.42	0.73	1.58		1.76	8	1.058					0.29		0.76	0.55	1.07			4
1.073	1.19	0.92	0.61	0.55	0.68	1.26		0.41	1.31	1.20	1.34	10	1.058					0.29		0.76	0.55	1.07			4
1.073	1.19	0.92	0.61	0.55	0.68	1.26		0.41	1.31	1.20	1.34	10	1.089						0.54	3.12	0.82				3
1.109	0.41	0.13	2.32	0.54	0.54	0.66		0.09	0.25		0.95	9	1.089						0.54	3.12	0.82				3
1.109	0.41	0.13	2.32	0.54	0.54	0.66		0.09	0.25		0.95	9	1.128	0.19					1.38				1.86		3
1.147	0.22	0.04		0.32	0.21			0.19				5	1.128	0.19					1.38				1.86		3
1.147	0.22	0.04		0.32	0.21			0.19				5	1.170	0.04	0.03		0.16							0.14	3
1.192	0.06	0.05	0.05								0.03	3	1.170	0.04	0.03		0.16							0.14	3
1.192	0.06	0.05	0.05								0.03	3	0.211	0.05											1
总峰数	48	47	43	42	42	38	37	45	42	38	36		0.211	0.05											1

表24 十种样品的重叠率(％)

样品	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
样品	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	重叠率	86.3	81.3	82.2	73.3	67.4	68.2	77.4	73.3	67.4	76.2

表25 样品的八强峰

α值/相对面积
											1	2	3	4	5	6	7	8	相对总面积
		样品	1	0.867/33.81	1.000/6.61	0.105/6.04	0.835/4.42	0.134/4.15	0.782/3.60	0.345/3.27	1	2	3	4	5	6	7	8	相对总面积	0.308/2.91	64.81
2	0.867/35.75		1	0.867/33.81	1.000/6.61	0.105/6.04	0.835/4.42	0.134/4.15	0.782/3.60	0.345/3.27	0.105/9.85	1.000/6.71	0.835/4.51	0.919/4.01	0.134/3.76	0.775/2.91	0.782/2.75	56.78		0.308/2.91	64.81
2	0.867/35.75		3	0.867/35.08	1.000/7.00	0.105/4.24	0.134/4.22	0.824/4.01	0.775/3.43	0.345/3.31	0.105/9.85	1.000/6.71	0.835/4.51	0.919/4.01	0.134/3.76	0.775/2.91	0.782/2.75	56.78	0.308/2.81	64.10
4	0.867/31.18		3	0.867/35.08	1.000/7.00	0.105/4.24	0.134/4.22	0.824/4.01	0.775/3.43	0.345/3.31	0.129/7.44	0.105/6.38	1.000/6.09	0.775/3.97	0.835/3.74	0.345/3.58	0.513/3.14	65.52	0.308/2.81	64.10
4	0.867/31.18		5	0.867/36.11	1.000/7.20	0.105/5.91	0.835/4.90	1.020/3.75	0.777/3.17	0.887/3.04	0.129/7.44	0.105/6.38	1.000/6.09	0.775/3.97	0.835/3.74	0.345/3.58	0.513/3.14	65.52	0.129/2.90	66.97
6	0.867/29.55		5	0.867/36.11	1.000/7.20	0.105/5.91	0.835/4.90	1.020/3.75	0.777/3.17	0.887/3.04	0.948/23.17	1.000/6.19	0.835/5.81	1.020/3.85	0.796/3.39	0.775/3.04	0.965/2.51	77.51	0.129/2.90	66.97
6	0.867/29.55		7	0.867/21.70	0.836/12.34	0.805/12.17	0.904/10.12	0.819/8.47	0.775/4.02	1.000/3.12	0.948/23.17	1.000/6.19	0.835/5.81	1.020/3.85	0.796/3.39	0.775/3.04	0.965/2.51	77.51	1.089/1.99	78.1
8	0.867/28.97		7	0.867/21.70	0.836/12.34	0.805/12.17	0.904/10.12	0.819/8.47	0.775/4.02	1.000/3.12	0.777/10.53	1.000/6.08	0.105/5.84	0.835/4.98	0.775/4.12	0.904/3.78	0.805/3.32	67.71	1.089/1.99	78.1
8	0.867/28.97		9	0.867/34.57	0.904/7.40	0.105/6.15	1.000/5.80	0.835/5.42	0.775/4.78	0.788/3.32	0.777/10.53	1.000/6.08	0.105/5.84	0.835/4.98	0.775/4.12	0.904/3.78	0.805/3.32	67.71	1.020/2.33	69.78
10	0.867//29.11		9	0.867/34.57	0.904/7.40	0.105/6.15	1.000/5.80	0.835/5.42	0.775/4.78	0.788/3.32	0.805/10.99	0.904/10.91	0.824/7.34	0.775/5.81	0.105/4.37	0.835/4.19	1.000/2.09	74.82	1.020/2.33	69.78
10	0.867//29.11		11	0.867/38.56	0.835/8.51	1.000/8.12	0.105/5.60	0.775/3.31	0.904/3.07	0.887/2.87	0.805/10.99	0.904/10.91	0.824/7.34	0.775/5.81	0.105/4.37	0.835/4.19	1.000/2.09	74.82	0.819/2.58	72.61

由于个生半夏样品均为同一品种，仅产地有所不同，现以四个生品作为基准，据建立生半夏的特征指纹。按要求，首先找出它们的共有峰，有二十八个色谱峰为四个生品所共有，十一个为三个生品共有，合计三十九个色谱峰，它们已全部包含了四个生品的八强峰。以此作为生品半夏的特征指纹，见表26。现将各生只和炮制品与其进行比较，并展开讨论。首先可看到四个生半夏的检出率在100-87.2％范围内，可见其检出率较高，七个炮制品的检出率均低于85％，说明半夏经炮制后确已发生了变化。由于各炮制品的生药来源可能有异，因此在讨论炮制品的质量时应以各饮片厂所采用的生品与其炮制品间比较为主。

表26 半夏的特征指纹

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	0.105	6.04	9.85	4.24	6.38	5.91	1.61	1.15	5.84	6.15	4.41	5.60
0.129	1.92	1.17	1.31	7.44	2.90	1.22	1.57	0.62	0.85	0.88	1.39	0.105	6.04	9.85	4.24	6.38	5.91	1.61	1.15	5.84	6.15	4.41	5.60
0.129	1.92	1.17	1.31	7.44	2.90	1.22	1.57	0.62	0.85	0.88	1.39	0.134	4.15	6.76	4.22					2.27	2.04
0.185	0.40	0.43	0.53		1.35	0.73	0.36	0.95		0.2	0.63	0.134	4.15	6.76	4.22					2.27	2.04
0.185	0.40	0.43	0.53		1.35	0.73	0.36	0.95		0.2	0.63	0.195	2.10	2.12	1.95	3.02		0.20	0.51	0.62	1.52	0.26
0.211	1.60	1.43	1.50	2.05	0.96	0.05		0.21	0.75		0.13	0.195	2.10	2.12	1.95	3.02		0.20	0.51	0.62	1.52	0.26
0.211	1.60	1.43	1.50	2.05	0.96	0.05		0.21	0.75		0.13	0.244	0.56	0.38	0.50	0.43	0.19	0.08		0.37	0.35
0.263	0.54	0.65	0.35					0.35				0.244	0.56	0.38	0.50	0.43	0.19	0.08		0.37	0.35
0.263	0.54	0.65	0.35					0.35				0.285	0.41	0.46	0.43	1.16	0.75	0.75	1.60	0.54	0.85	0.50	0.05
0.308	2.91	1.92	2.81	2.97	0.36		0.42	0.32	0.58	0.06	0.12	0.285	0.41	0.46	0.43	1.16	0.75	0.75	1.60	0.54	0.85	0.50	0.05
0.308	2.91	1.92	2.81	2.97	0.36		0.42	0.32	0.58	0.06	0.12	0.334	0.84	0.23	0.63	0.82			0.32	0.87		0.15	0.47
0.345	3.27	2.32	3.31	3.58	1.84	0.67		1.91	0.09			0.334	0.84	0.23	0.63	0.82			0.32	0.87		0.15	0.47
0.345	3.27	2.32	3.31	3.58	1.84	0.67		1.91	0.09			0.366	0.31	0.18	0.23	0.32		0.07	0.34	0.2			0.56
0.403	0.77	0.58	0.89								0.90	0.366	0.31	0.18	0.23	0.32		0.07	0.34	0.2			0.56
0.403	0.77	0.58	0.89								0.90	0.436	0.93	0.20	0.60	0.96	0.41	0.24	0.19	0.82	1.73	0.11
0.467	0.16	0.06	0.19	0.26	0.79		0.11			0.11		0.436	0.93	0.20	0.60	0.96	0.41	0.24	0.19	0.82	1.73	0.11
0.467	0.16	0.06	0.19	0.26	0.79		0.11			0.11		0.492	0.19	0.13		0.36	0.42			0.14	0.13
0.513	1.74	1.46	2.34	3.14	0.58	0.89	0.15	0.15	0.34		0.99	0.492	0.19	0.13		0.36	0.42			0.14	0.13
0.513	1.74	1.46	2.34	3.14	0.58	0.89	0.15	0.15	0.34		0.99	0.546	0.18		0.51	0.55	0.60					0.05	0.63
0.630	0.21	0.03	0.42	0.13	0.87	0.06						0.546	0.18		0.51	0.55	0.60					0.05	0.63
0.630	0.21	0.03	0.42	0.13	0.87	0.06						0.652	0.14	0.11	0.14	0.52		0.05	0.55	0.28	0.04	0.99
0.714	0.15	0.10	0.25		0.33	1.29	0.60	0.41	0.10	0.02	0.36	0.652	0.14	0.11	0.14	0.52		0.05	0.55	0.28	0.04	0.99
0.714	0.15	0.10	0.25		0.33	1.29	0.60	0.41	0.10	0.02	0.36	0.750	0.23	0.20		0.04			0.09	0.21	0.04
0.775	2.13	4.09	3.86	5.06	4.69	3.69	6.15	14.89	5.45	7.34	3.31	0.750	0.23	0.20		0.04			0.09	0.21	0.04
0.775	2.13	4.09	3.86	5.06	4.69	3.69	6.15	14.89	5.45	7.34	3.31	0.788	1.61		1.76	1.24	1.73	1.70	1.45	2.05	3.32	1.36	2.35
0.796	1.36	2.21	1.11	1.04	1.59	3.39	1.86	3.22	1.84	0.99	1.56	0.788	1.61		1.76	1.24	1.73	1.70	1.45	2.05	3.32	1.36	2.35
0.796	1.36	2.21	1.11	1.04	1.59	3.39	1.86	3.22	1.84	0.99	1.56	0.805	1.41	1.51	1.09	1.08	1.46		12.17	3.32	1.73	10.99	1.46
0.819	1.32	1.29	1.51	0.14	2.34	1.21	8.47		1.45		2.58	0.805	1.41	1.51	1.09	1.08	1.46		12.17	3.32	1.73	10.99	1.46
0.819	1.32	1.29	1.51	0.14	2.34	1.21	8.47		1.45		2.58	0.835	4.42	4.51		3.74	4.90	5.81	12.34	4.98	5.42	4.37	8.51
0.867	33.81	35.75	35.08	31.18	36.11	29.55	21.7	28.97	34.57	29.11	38.56	0.835	4.42	4.51		3.74	4.90	5.81	12.34	4.98	5.42	4.37	8.51
0.867	33.81	35.75	35.08	31.18	36.11	29.55	21.7	28.97	34.57	29.11	38.56	0.904	2.32	1.40	2.56	3.09	2.47	1.80	10.12	3.78	7.4	10.91	3.07
0.919	1.09	4.01	1.23	2.13	2.14	2.46	1.22	2.19	1.07	1.47	1.71	0.904	2.32	1.40	2.56	3.09	2.47	1.80	10.12	3.78	7.4	10.91	3.07
0.919	1.09	4.01	1.23	2.13	2.14	2.46	1.22	2.19	1.07	1.47	1.71	0.937	1.56		1.02	1.20	2.87		0.70		1.44	1.14	1.97

0.965	2.08	1.79	2.67	2.86	2	2.51	1.99	1.47	1.86	2.09	2.55
0.965	2.08	1.79	2.67	2.86	2	2.51	1.99	1.47	1.86	2.09	2.55	1	6.61	6.71	7	6.09	7.2	6.19	4.02	6.08	5.80	4.19	8.12
1.02	2.1	1.98	2.22	1.73	3.75	3.85	1.14	1.76	2.33	1.79	2.3	1	6.61	6.71	7	6.09	7.2	6.19	4.02	6.08	5.80	4.19	8.12
1.02	2.1	1.98	2.22	1.73	3.75	3.85	1.14	1.76	2.33	1.79	2.3	1.037	0.67	0.60	1.33	0.98			0.42	0.73	1.58		1.76
1.073	1.19	0.92	0.61	0.55	0.68	1.26		0.41	1.31	1.20	1.34	1.037	0.67	0.60	1.33	0.98			0.42	0.73	1.58		1.76
1.073	1.19	0.92	0.61	0.55	0.68	1.26		0.41	1.31	1.20	1.34	1.109	0.41	0.13	2.32	0.54	0.54	0.66		0.09	0.25		0.95
检出数	39	36	36	34	30	27	28	33	31	25	28	1.109	0.41	0.13	2.32	0.54	0.54	0.66		0.09	0.25		0.95
检出数	39	36	36	34	30	27	28	33	31	25	28	检出率％	100	92.3	92.3	87.2	76.9	69.2	71.8	84.6	79.5	64.1	71.8

生品和炮制品的指纹谱分析

首先，根据共有峰和八强峰提供的信息，有些色谱峰可规定为半夏所必须具有的色谱峰，如α值为0.867，1.000和0.105，这三色谱峰均列入所有样品的八强峰，是中药半夏最为特征的标示。再如α值为0.129，0.285，0.775，0.796，0.904，0.919，0.965和1.020个色谱峰，虽然没有均列入所有样品的八强峰，但却是所有样品共有的，也应作鉴定半夏的必要条件。其它如α值为0.308，0.436，0.513，0.714，0.788，0.805，0.835，1.073等八个色谱峰是十个样品所共有，在半夏鉴定时，对这些色谱峰应有90％以上的检出率。因此，不论是生半夏抑或是各种半夏炮制品均应达到上述要求。上述十九个特征指纹峰在对某些样品作进一步深入研讨时，有助于给出明确的鉴定结伦。

其次可对生品和炮制品作质量判别，先由重叠率观之，生品间的重叠率均在81％以上，它们的特征指纹检出率也高，均在87％以上，说明了生品间较好的相似性，而炮制品中重叠率最高者(8号)为77.4％，特征指纹检出率最高者(8号)为84.6％。与其它各炮制品相比，这两项指标均显得较高，说明8号样品与生品间的亲密关系，虽然同时也说明了它们间的差异。因此，对这批试样而言，在作品种判定时，重叠率可以80％为界，特征指纹检出率可以85％为界。而8号样品则存在炮制不足的问题，值得引起注意。

对制半夏的质量控制，除上述的各项要求外，还应考虑下列各点。从各制半夏与其对应的生品之间的指纹谱比较来看，1号与5号是一组，它们间的重叠率为73.3％，特征指纹检出率由100％降至76.9％；3号与6号是一组，它们间的重叠率为74.1％，特征指纹检出率由92.3％降至69.2％；4号与11号是一组，它们间的重叠率为76.9％，特征指纹检出率由87.2％降至71.8％。这三组数据反映了生品经炮制后所发生的变化，上述两项参数客观地反应了这方面的变化，并可据此作为控制炮制品的依据。由此可进一步认识到重叠率是反映了生品和炮制品之间相关性的重要参数，如若炮制程度不够，两者的重叠率必然很高，反之，若炮制过度，则两者的重叠率必然很低。而检出率则更精细地反映了特征指纹的变化情况，为需作进一步深入探讨时提供依据。此外，在根据炮制经验和临床用药的反响和决定最佳的炮制工艺时，色谱指纹谱将可提供最全面的控制指标。现将色谱指纹谱用于制半夏等炮制品的质量鉴定时所涉及的各项参数简要归纳如下：

1.特征指纹检出率：

高于64％者，再对其十一个必须具有的和八个可部分检出的色谱峰进行核查。

2.八强峰：

α值为0.867者必须进入八强峰，并列首位。其余α值为1.000，0.775，0.835者必须进入八强峰。

3.生品与炮制品的重叠率：

从三组生品与炮制品的重叠而言，它们的重叠率在73.3％-76.9％之间。从检出率的变化情况看，第一和第二两组均降低了23.1％，第三组仅降低了10.3％，说明生品经炮制后特征指纹发生了明显的变化，那些在炮制过程中失去的特征指纹峰应该引起注意，限于本研究的样本数太少，难以得出有规律性的意见。但无沦如何这是两个反映炮制程度的重要参数，在进一步扩大实验批号的基础上，将会得到更客观、公正的数据，为最终获得控制炮制品的数据提供依据。

附：1、2、3、4、5、6、11号样品的色谱图，见图24-图30。

对于有些色谱峰经炮制后，含量升高或降低，或消失，或出现新的成分，例如由养和堂的生品与炮制品可见，α值为0.160、0.630、0.782、1.170、1.192、1.211、0.134、0.950、0.211、0.244、0.263、0.467、0.652、1.000、0.308、0.345和0.513等均是生品比炮制品含量高；其中α值为0.160、0.308、0.345和0.513者的变化更是显著，值得注意研究。而α值为0.805、0.824、1.058、0.775和0.904等均是在炮制品中含量有较明显升高，其中0.805者尤为显著，而0.226、0.610则是炮制品中所独有。当然，由雷允上和信德厂的两组也可得出各自的相应数据。因目前的数据均属个别样品间的比较，若要给出结论还需通过更多批号的样品来证实。但应看到，这些数据反映了炮制前后的变化情况和一些值得注意的变化规律。

Claims

1.一种中药特征指纹谱的建立，其特征在于该指纹谱的建立包括下列步骤：

(1)标准药材的选取，收集业经生药鉴定的该品种药材五个以上的批号，能有更多的批号则更佳，因为考虑到生物样品的个体差异，只有在相当数量的样品中，才能清楚地显现出它的特征，此时还需注意中药样品批号的含义，除样品的产地、采收时间和季节，以及药用部位外，气侯的影响，储运保管条件以及某些人为因素均应顾及，因此样品批号宜多不宜少；

(2)规范化的操作条件和步骤：应从两方面的工作于以规范化，一是样品的预处理，生物样品都需经预处理后方能进行色谱分析，预处理的方法有多种，例如超声萃取，加热萃取，pH萃取等各种萃取技术，二是萃取样品量的大小和样品粉碎程度，以及萃取液是否再经处理等因素，总之所有样品处理过程都必须保持一致以保证样品液的分析具有良好的精密度、正确性、重现性和相互间的可比性；

(3)最佳色谱条件的建立：色谱条件包括色谱柱、流动相、检测器等的选择，要建立良好色谱条件使中药样品中所含之成分尽可能地获得分离，也即分得的色谱峰愈多愈好，可以说是多多益善，使中药的内在特性都显现出来，为鉴定提供足够的信息，色谱柱的选择可根据中药所含的主要成分而定，例如含生物碱类化合物为主的中药，可选用离子交换柱；含多糖类化合物为主的中药可选用凝胶柱，含甾体类化合物为主的中药可选用c-18反相柱；......等，流动相的组成除应考虑化合物的性质外，因为中药所含成分多而杂，采用常规的等梯度洗脱难以使各种性质的成分获得分离，使色谱图中所出现的峰数较少，不能给出足够的鉴定所需的信息，在大多数的情况下以采用梯度洗脱为宜，在合适的梯度条件下，使性质差异较大的各种化合物均被分离，可充分提供鉴定所需的信息，分得的色谱峰越多越有利于鉴定，目前可供选择的检测器，在气相色谱中有氢火焰离子化检测器(FID)、热导检测器(TCD)、电子捕获检测器(ECD)、火焰光度检测器(FPD)等，其中以FID最为常用，凡以碳、氢、氧等元素组成的有机化合物均可被检出，对中药所含之挥发性成分的分析是十分有效的，在高效液相色谱中有可变紫外-可见光(UV-VIS)检测器、荧光检测器、电化学检测器、示差折射检测器(RID)、蒸发光散射光检测器(ELSD)等，其中紫外-可见光检测器用得较多，适宜于化合物中有共轭双键的成分分析，而大量的不含共轭双键的化合物不能被检出，近十年来，ELSD检测器的发展，使中药中甾体类、皂甙类、多糖类等化合物均可采用ELSD作检测；

(4)特征指纹的确立：对上述五个以上批号的标准药材，在优化的提取条件下制备供试液，以及在最佳色谱条件下进行分析，每个样品同品种的中药五个以上的批号，分别进样三次，由此获得五个批号样品的十五张色谱图，并转化为十五张色谱指纹谱，现将这十五张色谱指纹谱中的相对保留值汇集并列成表，以便选择特征色谱峰来建立特征指纹。

表I 色谱指纹谱汇集表(面积归一化值) 药材 α 0.084 0.100 0.109 0.128 0.141 0.168 0.198 0.222 0.252 0.284 0.404 0.446 0.496 1 0.33 0.15 0.36 1.04 0.89 1.30 1.12 0.60 0.74 0.45 0.96 2 0.45 0.38 0.38 1.06 0.82 1.26 1.08 0.49 0.73 0.40 1.01 3 0.26 0.24 0.45 1.10 0.84 1.31 1.07 0.48 0.75 0.51 1.15 4 0.33 0.29 0.89 0.78 0.98 1.01 0.71 0.69 0.49 5 0.15 0.47 0.34 0.92 0.70 0.96 1.05 0.65 0.72 0.52 0.99 6 0.40 0.26 0.90 0.68 0.99 0.99 0.73 0.70 0.51 0.97 7 0.07 0.75 0.32 0.41 1.11 0.92 0.90 0.98 0.57 0.81 0.39 0.93 0.89 8 0.03 0.68 0.28 0.37 1.09 0.88 0.94 0.96 0.64 0.78 0.43 0.88 0.96 9 0.70 0.09 0.34 1.06 0.95 0.94 0.96 0.64 0.76 0.45 0.75 1.03 10 0.89 0.21 0.22 0.84 0.76 1.15 1.18 0.70 0.77 0.57 1.08 11 0.17 0.72 0.18 0.27 0.90 0.88 1.18 1.17 0.65 0.71 0.50 1.12 12 0.04 0.77 0.16 0.18 0.92 0.80 1.20 1.17 0.66 0.73 0.52 0.92 0.96 13 0.22 0.29 0.90 0.86 1.24 1.18 0.68 0.75 0.44 0.86 0.88 14 0.01 0.30 0.48 0.96 0.87 1.24 1.19 0.67 0.79 0.42 0.94 1.00 15 0.36 0.50 0.99 0.82 1.20 1.23 0.65 0.78 0.41 1.05 共有样品数 9 6 15 15 15 15 15 15 15 15 15 6 14

药材 α 0.548 0.576 0.684 0.804 0.895 1.000 1.127 1.289 1.356 1.419 1.506 1.573 1.607 1.790 1 0.32 0.28 1.000 1.01 0.03 0.30 1.67 2 0.54 0.21 1.000 0.93 0.07 0.28 1.54 1.31 3 0.40 0.25 1.000 0.90 0.05 0.32 1.60 1.28 4 1.94 0.20 1.000 0.88 0.40 1.81 0.02 1.35 5 1.88 0.24 1.000 0.78 0.38 1.76 0.03 1.30 6 2.00 0.27 1.000 0.84 0.41 1.70 0.01 1.32 7 0.40 1.56 0.30 1.000 0.94 0.35 1.59 1.44 8 0.32 1.66 0.26 1.000 1.04 0.36 1.63 1.41 9 0.38 1.66 0.25 1.000 0.61 0.37 1.67 1.29

10 0.77 1.000 0.21 0.67 0.28 1.56 1.48 11 0.23 0.70 1.000 0.18 0.73 0.30 1.65 1.45 12 0.27 0.75 1.000 0.12 0.86 0.29 1.71 1.47 13 0.26 1.000 0.87 0.31 0.32 1.78 1.35 14 0.20 1.000 1.01 0.31 0.34 1.76 1.37 15 0.22 1.000 1.04 0.33 0.35 1.74 1.33 共有样品数 3 6 3 14 3 15 3 15 3 3 15 15 3 14

药材 α 1.820 1.882 2.002 2.056 2.166 2.222 2.300 2.397 2.560 2.670 2.735 2.966 3.021 3.140 3.238 1 0.66 1.530 1.44 0.11 0.34 0.38 0.24 2 0.63 0.54 1.590 1.50 0.10 0.36 0.41 0.02 0.28 3 0.65 0.55 1.530 1.46 0.09 0.38 0.42 0.22 4 0.77 0.74 0.60 1.480 1.25 0.11 0.37 0.45 5 0.75 0.73 0.58 1.41 0.08 0.40 0.43 6 0.68 0.76 0.57 1.450 1.42 0.09 0.35 0.41 7 0.78 0.63 0.04 1.430 1.48 0.10 0.39 0.39 8 0.80 0.62 1.400 1.49 0.08 0.11 0.33 0.41 0.01 9 0.81 0.59 1.550 1.51 0.10 0.34 0.41 0.02 10 0.63 0.10 0.66 1.570 1.43 0.08 0.38 0.35 11 0.65 0.11 1.600 1.45 0.07 0.35 0.38 12 0.61 0.15 0.68 1.580 1.46 0.10 0.40 0.39 13 0.60 0.68 1.500 1.21 1.51 0.09 0.16 0.33 0.40 14 63.00 0.67 1.510 1.15 1.53 0.08 0.13 0.37 0.43 0.06 15 0.63 1.53 1.20 1.50 0.10 0.15 0.36 0.43 共有样品数 3 14 3 13 1 14 3 15 1 15 3 15 15 3 4

药材 α 3.298 3.384 3.460 3.526 3.580 3.742 3.789 3.822 3.902 4.068 4.179 4.436 4.503 4.579 1 0.67 1.10 0.58 0.50 0.06 2 0.65 0.09 1.14 0.57 0.56 0.04 0.78 0.05 0.03 3 0.68 0.11 1.19 0.60 0.53 0.03 0.77 4 0.66 0.61 1.740 0.79 5 0.67 0.60 1.700 0.27 0.80 0.93 6 0.69 0.59 1.760 0.76 0.80 7 0.66 0.57 0.31 0.44 0.78 8 0.65 0.56 0.29 0.77 9 0.67 0.58 0.28 0.47 0.79

10 0.60 0.76 0.01 11 0.70 0.61 0.03 0.81 12 0.69 0.60 0.01 0.79 13 0.67 0.59 0.16 0.78 14 0.71 0.60 0.18 0.76 15 0.69 0.61 0.13 0.77 共有样品数 14 2 3 15 3 3 2 5 4 3 14 3 1 1

药材 α 4.632 5.175 5.530 5.650 5.764 1 2.14 0.12 2 2.18 0.08 3 2.20 0.09 4 2.08 0.66 5 2.10 0.67 6 2.14 0.63 7 1.96 0.07 8 1.98 0.04 9 2.06 0.10 10 0.04 2.10 11 0.03 1.94 0.83 12 0.01 1.99 0.88 13 2.00 14 2.09 15 2.07 共有样品数 3 15 5 3 3

总峰数：61

2.一种如权利要求1所述的一种中药特征指纹谱在中药品种鉴定、中药区分和鉴别及中成药所含药味的鉴定中的应用。