CN1336826A - 用于口服给药的皮肤增白组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了含有蔷薇科火棘属植物的溶剂提取物的用于口服给药的皮肤增白组合物及其用途。

Description

用于口服给药的皮肤增白组合物
发明领域
本发明涉及适于以食品和饮料等形式口服给药的皮肤增白组合物。此外，本发明还涉及含有所述组合物的用于口服给药的皮肤增白剂及其用途。
背景技术
白皙的皮肤通常被认为是美丽的皮肤，以前曾建议使用含有具有酪氨酸酶抑制活性的物质例如氢醌及其衍生物(例如熊果苷)、曲酸及其衍生物、抗坏血酸及其衍生物、硫醇化合物以及各种动物和植物提取物的皮肤增白化妆品来预防或治疗色斑(mospatche)和雀斑以获得白皙的皮肤。
此外，火棘(Pyracantha fortuneana)和窄叶火棘(Pyracanthaangusutifolia)的提取物具有酪氨酸酶抑制活性，已知可将这些提取物用于皮肤增白的化妆品组合物并具有极佳的皮肤增白作用(日本专利号2749218)。
近年来，人们对皮肤增白的意识越来越强，除了使用常规的化妆品外，人们又开始需要易于以食品和饮料等形式口服吸收的皮肤增白剂。
但是，人们还不清楚哪一种常用于皮肤增白化妆品的物质在口服吸收时具有与化妆品相当的作用，已知可以在口服吸收时具有皮肤增白作用的唯一物质是维生素C制剂和硫醇化合物。此外，由于这些物质存在稳定性和吸收性的问题，通常认为它们不能显示充分的作用。
本发明的公开
因此，本发明的发明人准备提供一种在口服给药时有效并且安全的皮肤增白组合物。
通过对那些曾经安全地用于饮食的植物中在口服给药时显示皮肤增白作用的植物进行的认真研究，我们发现蔷薇科火棘属(Rosaceae Pyracantha)的植物是有效的。更具体地讲，我们发现蔷薇科火棘属的火棘和窄叶火棘的果实的水、乙醇或它们的混合物的提取物在口服给药时显示皮肤增白作用，由此完成了本发明。
此外，尽管很清楚由于将具有皮肤增白作用的物质以化妆品等形式直接涂抹在皮肤上和以食品或饮料的形式口服给药的给药形式上的差异会造成效力上的差异，但仍给出如下简要描述来说明该差异。
化妆品直接涂抹在皮肤表面，大部分化妆品成分保留在皮肤表面并显示化妆品固有的功能而不会损害皮肤的生理功能。
相反，当口服给药时，具有皮肤增白作用的物质首先溶解在消化道内的液体中，然后从胃或小肠吸收。从小肠吸收的物质主要从门静脉进入肝脏，然后进入静脉并在通过心脏后通过在体内的循环最后到达身体的各个位点。
因此，并不清楚哪一种在化妆品中有效的物质会在口服给药时显示与化妆品类似的效果。
事实上，尽管熊果苷和抗坏血酸具有酪氨酸酶抑制活性，并在以前用作具有极佳皮肤增白作用的化妆品，但由于它们在口服给药时的皮肤增白作用很低，所以在口服给药和化妆品之间存在着明显的效果差异。
此外，本发明还发现在体外具有很强的酪氨酸酶抑制活性的火棘成分在口服给药时仅有很弱的皮肤增白活性，相反，在体外具有弱的酪氨酸酶抑制活性的成分在口服给药时却显示皮肤增白活性，由此完成了本发明。完成本发明的实施方案
已知本发明所用的Pyracantha fortuneana(其中文名为“火棘(Kakyoku)”)的果实(其中药名为“赤阳子(Sekiyoshi)”)可以健脾并可治疗消化不良。此外，窄叶火棘是与火棘相同的来自中国的灌木，在日本用作花园植物。
虽然在本发明中使用这些植物的溶剂提取物，但优选使用这些植物的果实的溶剂提取物。
尽管对于从植物中萃取活性成分时所用的溶剂没有特别的限制，只要这些溶剂可以有效地提取活性成分即可，但从安全性来讲，优选使用水、甲醇、乙醇或其它低级醇或它们的混合物，更优选使用水、乙醇或它们的混合物。
当用水进行提取时，虽然可以使用常温下的水，但优选使用热水，例如60-100℃的水。此外，当使用有机溶剂如甲醇或乙醇时，可以在常温下进行提取，或在所述有机溶剂的沸点或低于沸点的温度下进行热提取。此外，当使用有机溶剂如甲醇或乙醇和水的混合物时，提取可以在常温下进行，或在低于所述溶剂沸点的温度下进行热提取。
此外，可将提取物在通过例如浓缩、液-液分配或吸附色谱纯化后使用以便将活性成分在高浓度下混合。例如，当对本发明的提取物进行吸附色谱时，可以用合成的吸附剂例如芳香族合成吸附剂如苯乙烯-二乙烯基苯作为吸附剂。芳香族合成吸附剂的具体例子是Diaion HP-20(商标名，Mitsubishi Kasei Kogyo)。另外，也可使用Diaion HP-21(商品名，Mitsubishi Kasei Kogyo)、AmberliteXAD2和XAD4(商品名，Rohm and Hass)等，芳香族合成吸附剂不限于此。
当使用Diaion HP-20时，优选将提取物上到用该吸附剂填充的柱子上，使用已经流过该柱子的液体并通过用水洗涤柱子得到级份。此外，当用有机溶剂洗脱时，可以使用的级份是通过用有机溶剂和水的混合物例如20-80％甲醇或乙醇水溶液洗脱得到的级份。
由此方式得到的本发明的用于口服给药的皮肤增白组合物是一种可以有效预防或治疗mospatches和雀斑等并具有极佳的皮肤增白效果的用于口服给药的组合物。该组合物可以以片剂、胶囊或颗粒的形式摄取或通过混入到食品或饮料如糖果、口香糖或饮料中来摄取，对它的形式没有限制。
此外，尽管本发明所用的提取物的成人每日摄入量随着年龄、健康状况、体重等而改变，但优选摄入0.01-20.0g、更优选0.1-10.0g，以粗品提取物的固体成分的量计。
实施例
虽然以下通过实施例对本发明进行了更详细的解释，但本发明的范围并不仅限于这些实施例。
实施例1火棘果实的热水提取物
将5.00g干的火棘果实浸泡在50m190℃的热水中，煮沸3小时后过滤，然后将得到提取物减压过滤得到粗品提取物(1.33g固体)。
实施例2火棘果实的水/乙醇混合物提取物
将5.00g干的火棘果实在50ml 50％乙醇水溶液中浸泡1周后过滤，然后将得到的提取物减压过滤得到粗品提取物(1.08g固体)。
实施例3窄叶火棘果实的热水提取物
将5.00g干的窄叶火棘果实浸泡在50ml 90℃的热水中，煮沸3小时后过滤，然后将得到提取物减压过滤得到粗品提取物(1.21g固体)。
实施例4火棘果实的热水提取物级份
将按照实施例1的方法得到的火棘果实的粗品提取物(6.09g固体)溶于600ml水，在上到Diaion BP-20柱子(3cm直径×11cm，Vt＝80ml)上后，将柱子用800ml水洗涤。收集流过柱子的液体和洗涤液并减压过滤后，将得到的产物冷冻干燥得到5.13g固体(级份1)。
然后，将柱子用400ml 20％乙醇水溶液洗脱并将洗脱液减压过滤后，将得到的产物冷冻干燥得到0.22g固体(级份2)。
然后，将柱子用400ml 40％乙醇水溶液洗脱并将洗脱液减压过滤后，将得到的产物冷冻干燥得到0.49g固体(级份3)。
然后，将柱子用400ml 80％乙醇水溶液洗脱并将洗脱液减压过滤后，将得到的产物冷冻干燥得到4mg固体(级份4)。
级份1至4的回收率总和为96％。
实施例5酪氨酸酶抑制活性的测量
按照如下描述测量酪氨酸酶抑制活性。
将1.00ml 50mM磷酸钾缓冲液(pH6.8)、0.25ml 0.5mg/ml L-酪氨酸水溶液(Nakarai Tesque)(1)和1.00ml样品水溶液(2)(将实施例1至4的样品和熊果苷制备成各种不同的浓度)充分混合并在30℃放置10分钟后，加入0.25ml 0.1mg/ml来自蘑菇的酪氨酸酶水溶液(Sigma)。于30℃反应约12分钟后(对照的吸光度为大约0.5)，于475nm测定吸光度A。同时测定用水代替样品水溶液(2)时的吸光度B以及用水代替L-酪氨酸水溶液(1)时的吸光度C。用如下方程式从A、B和C的吸光度计算出抑制率。
抑制率(％)＝(B－(A－C))/B×100
用该测量方法测定各样品的酪氨酸酶抑制活性，抑制率为50％时的样品浓度(IC50值)如表1中所示。从表1可以看出，除实施例4的级份1外，所有的样品均显示酪氨酸酶抑制活性。表1提取物和级份的酪氨酸酶抑制活性
          样品 50％抑制时的样品浓度(IC50)(ppm)
    实施例1的提取物     350
    实施例2的提取物     320
    实施例3的提取物     380
    实施例4的级份1     无活性
    实施例4的级份2     120
    实施例4的级份3     70
    实施例4的级份4     125
    熊果苷     75
实施例6用小鼠研究皮肤增白作用(1)
将0.04、0.12、0.40或10mg实施例1得到的粗品提取物溶于水(0.2ml)，将上述水溶液每天一次向小鼠(每组6只)口服给药，然后曝露于180mJ/cm2紫外线(UVB)下。用水代替火棘提取物向对照组的小鼠给药。此外，用0.67mg抗坏血酸作为比较例。持续给药10天后，对小鼠耳廓的一部分进行取样，然后通过用多巴染色表皮制备玻片样品。表2给出了在各样品的5个区域对多巴阳性的黑素细胞计数的结果。
如表2所示，火棘提取物造成了多巴阳性黑素细胞数量的减少(在0.12mg或更高的剂量下与对照有显著差异，P＜0.05)。基于这些结果，口服摄入火棘提取物的确显示出皮肤增白作用。此外，以前常用作皮肤增白化妆品的抗坏血酸尽管也显示出多巴阳性黑素细胞数量的减少，但与对照之间没有显著性差异。表2暴露于UVB(180mJ/cm2)10天后多巴阳性黑素细胞数量的比较(判断：5％的显著性水平)
    平均值   标准偏差     判断
    未暴露于UV     254.2     32.1     --
    抗坏血酸     463.5     54.5 无显著性差异
    火棘，10mg/天     427.2     28.9 显著性差异
    火棘，0.40mg/天     392.1     57.2 显著性差异
    火棘，0.12mg/天     499.5     20.0 显著性差异
    火棘，0.04mg/天     562.5     19.0 无显著性差异
    对照     612.4     44.2      --
实施例7用小鼠研究皮肤增白作用  (2)
将实施例4得到的火棘的级份以它们在粗品提取物中的近似比例(10∶1∶1)、即10mg级份1、1mg级份2和1mg级份3溶于水(0.2m1)，将上述水溶液每天一次向小鼠(每组6只)口服给药，然后曝露于180mJ/cm2紫外线(UVB)。用水代替火棘提取物的各级份向对照组的小鼠给药。此外，用12mg熊果苷作为比较例。持续给药10天后，对小鼠耳廓的一部分进行取样，然后通过用多巴染色表皮制备玻片样品。表3给出了在各样品的5个区域对多巴阳性的黑素细胞计数的结果。
在实施例5中未显示酪氨酸酶抑制活性的火棘提取物的级份1明显减少了多巴阳性黑素细胞的数量(P＜0.05的显著性差异)。另一方面，虽然级份2和3(它们显示很强的酪氨酸酶抑制活性)以及熊果苷有减少多巴阳性黑素细胞数量的倾向，但并未观察到显著性差异。
基于这些结果，可以清楚地证实通过口服给药火棘提取物所引起的皮肤增白作用的主要成分主要包含在级份1中。此外还可以看出，酪氨酸酶抑制活性的程度并不与口服摄取所引起的皮肤增白活性的程度相一致。
此外，由于实施例6中的火棘粗品提取物(10mg/天)和实施例7中的火棘粗品提取物的级份1(10mg/天)显示几乎相同的活性，我们认为除级份1之外的其它级份并不影响口服摄取时的皮肤增白活性。因此，在以下实施例中，我们决定使用实施例1获得的提取物。表3暴露于UVB(180mJ/cm2)10天后多巴阳性黑素细胞数量的比较(判断：5％的显著性水平)
    平均值   标准偏差     判断
级份1，10mg/天     413.9     50.7 显著性差异
级份2，1mg/天     457.5     31.7 无显著性差异
级份3，1mg/天     517.1     29.5 无显著性差异
熊果苷，12mg/天     463.9     59.5 无显著性差异
    对照     563.7     34.6 --
实施例8火棘提取物粉末的形成
将2重量份糊精加入到1重量份按照实施例1的方法过滤所得到的提取物的固体中，然后喷雾干燥得到火棘粉末。然后，将火棘粉末填充到00号硬胶囊中使每粒胶囊含有0.5g。
实施例9片剂的制备
将70重量份实施例8制得的火棘粉末、26重量份结晶纤维素和4重量份蔗糖脂肪酸酯充分混合并用制片机(Hata Seisakusho Ltd.)制成每片含250mg的片剂。
实施例10糖果的制备
将98g糖、90.7g稠麦芽糖浆(75％固体)和75g从火棘制备的浓缩物(40％固体)充分混合然后煮沸至水分含量为2％以制备每粒重2g的糖果(含0.3g火棘提取物固体)。
浓缩物在减压条件下从由实施例1的提取物制备的液体提取物制得。
实施例11用人研究皮肤增白作用
让5名健康的成年男性每天早晨、下午和晚上各服用两粒实施例8制得的胶囊，然后在第8天让他们后背的左下方区域暴露于紫外线。与紫外线的暴露于通过用治疗用紫外线照射系统(Dermaray)以168.6mJ/cm2紫外线(UVB)照射直径为18mm的圆形区域来进行。作为对照，对同一受试者在不服用试验物质时用等剂量的紫外线在该受试者后背的右下方区域进行照射。照射7天后，用皮肤光谱计(Cortex Technology)测定照射部位的黑色素值。用对色素沉着的抑制作用作为指标，将服用火棘期间的黑色素值比对照期间的黑色素值低2或更多的受试者评估为○，将与对照期间的黑色素值没有显著性差异的受试者评估为△。结果如表4所示。
如表4所示，本发明的组合物的确可以在口服给药时有效地改善皮肤的颜色。表4 UVB(168.6mJ/cm2)照射7天后黑色素值的比较
                            黑色素值     判断
  受试者   对照期间 服用火棘期间
    1     34     31     ○
    2     33.5     30     ○
    3     34.5     31     ○
    4     33.5     31.5     ○
    5     28     28     △
本发明的效果
根据本发明，提供了用于口服给药的皮肤增白组合物，该组合物很容易以食品、饮料等形式口服摄取并且可以通过抑制色谱沉着显示极佳的皮肤增白作用，从而可用于预防或治疗mospatches、雀斑等。

Claims (10)

1.用于口服给药的皮肤增白组合物，该组合物含有蔷薇科火棘属植物的溶剂提取物。
2.权利要求1所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，该组合物使用蔷薇科火棘属植物的果实。
3.权利要求1或2所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，其中所述的蔷薇科火棘属植物是火棘或窄叶火棘。
4.权利要求1至3中任意一项所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，其中所述的溶剂是水、甲醇、乙醇或其混合物。
5.权利要求1至3中任意一项所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，所述组合物含有火棘的热水提取物。
6.权利要求1至3中任意一项所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，所述组合物含有将火棘的所述热水提取物上到吸附色谱柱上后通过所述吸附色谱柱的级份以及用水洗涤柱子所得到的级份。
7.权利要求6所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，其中所述吸附色谱柱的吸附剂是合成吸附剂。
8.权利要求7所述的用于口服给药的皮肤增白组合物，其中所述的合成吸附剂是芳香族合成吸附剂。
9.含有权利要求1至8中任意一项所述的组合物的用于口服给药的皮肤增白剂。
10.权利要求1至8中任意一项所述的组合物的用作口服给药的皮肤增白剂的用途。
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